CN101849952A

CN101849952A - 一种用于抗hbv病毒的药用组合物

Info

Publication number: CN101849952A
Application number: CN200910081232A
Authority: CN
Inventors: 李宝齐; 王晓丹
Original assignee: BEIJING LILESHENG PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: BEIJING LILESHENG PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2009-03-30
Filing date: 2009-03-30
Publication date: 2010-10-06

Abstract

本发明为一种用于抗HBV病毒的药用组合物，它是由泰立福韦和另外一种或多种类核苷(酸)抗病毒药物形成的活性成分，与药学上可接受的辅料组合而成。其中类核苷(酸)抗病毒药物包括拉米夫定、泰立福韦、恩替卡韦、替比夫定、恩曲他滨等。此种组合物可制成口服制剂用于乙型病毒肝炎的治疗，包括片剂、胶囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、软胶囊剂等。

Description

一种用于抗HBV病毒的药用组合物

技术领域

本发明为一种用于抗HIV病毒的药用组合物，属于医药技术领域。

背景技术

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)感染引起的死亡率较高的一种传染性疾病。全球大约有20亿人感染过或者正在感染HBV，慢性乙型肝炎患者约有3.5亿人。据估计，我国的慢性无症状HBV携带者可能超过1.2亿人。世界医学工作者为乙肝的发病及防治进行了大量的研究。目前，抗HBV的药物主要为干扰素一a及核苷类似物，这些药物对部分乙肝患者有显著效果，如果治疗有的放矢，病例选择得当，药物将发挥最大治疗作用。由于每种抗病毒药物均有其副作用，因此，抗病毒药物联合应用是治疗慢性乙型肝炎的重要方向，可以是一种免疫调节剂和一种核苷类似物的联合，也可以是2～3种核苷类似物的联合。但迄今还无公认的联合疗效较好的治疗方案，需进一步加强研究。

近年来，核苷类似物(NA)是发展最快，品种不断增加的抗乙型肝炎病毒(HBV)的药物。实验研究和临床实践均表明慢性乙型肝炎患者采用NA治疗口服方便，能有效抑制HBV复制，使肝功能恢复，肝组织学改善，防止或延缓慢性乙型肝炎进展为肝硬化、肝功能失代偿、肝细胞癌。但长期应用核苷类似物存在病毒变异和耐药的问题，后者可能引发一系列严重后果。所以预防耐药的关键就是要合理应用核苷类似物。

泰立福韦是一种新型的无环核苷膦酸类化合物，口服后水解为泰诺福韦，泰诺福韦被细胞激酶磷酸化，生成具有药理活性的代谢产物泰诺福韦二磷酸，后者与5L三磷酸脱氧腺苷酸竞争，参与HIV病毒和HBV病毒DNA的合成，进入病毒DNA后由于缺乏3-羟基而导致DNA延长受阻。泰立福韦具有较强的抗HIV和抗HBV活性，而且细胞毒性较低，比泰诺福韦具有更高的生物利用度高。经过药理学研究，我们发现：当泰立福韦与其它另外一种或多种类核苷(酸)抗病毒药物合用时，能明显的提高抗病毒的活性，且能显著预防其耐药性的形成。

发明内容

本发明为一种用于抗HBV病毒的药用组合物。它是由泰立福韦和另外一种或多种类核苷(酸)抗病毒药物形成的活性成分，与药学上可接受的辅料组合而成。所述的类核苷(酸)抗病毒药物包括拉米夫定、泰立福韦、恩替卡韦、替比夫定、恩曲他滨等。其中泰立福韦的单位用量为30-1500mg，优选300mg。拉米夫定的单位用量为10-500mg，优选100mg。阿德福韦酯的单位用量为1-100mg，优选10mg。恩替卡韦的单位用量为50-2500mg，优选500mg。替比夫定的单位用量为60-3000mg，优选600mg。恩曲他滨的单位用量为20-1000mg，优选200mg。所述的药用组合物，可制成口服制剂，包括片剂、胶囊、分散片、咀嚼片、口腔崩解片、口含片、滴丸、软胶囊剂等，用于乙型病毒肝炎的治疗。

本发明通过以下实验进一步说明本复方在用于抗乙肝病毒，尤其是对耐药菌株的作用：新组方的药效学试验：细胞株及实验设计所用细胞为YMDD变异HBV DNA转染的HepG22.2.15细胞株。该细胞含有整合的YMDD变异HBV DNA，在培养过程中，能持续、稳定地向培养液中分泌HBsAg及HBV DNA。Hep G₂2.2.15细胞在含10％的胎牛血清培养液中生长到70％培养瓶面积(约3×10⁶细胞，25crn²培养瓶)时，改用含2％的胎牛血清培养液，并开始给予新组方治疗(治疗组1(泰立福韦24ugml^-1+拉米夫定8ugml^-1)、治疗组2(泰立福韦24ugml^-1+替比夫定48ugml^-1)、治疗组3(泰立福韦24ugml^-1+阿德福韦0.8ugml^-1)、治疗组4(泰立福韦24ugml^-1+恩替卡韦40ugml^-1)，治疗组5(泰立福韦24ugml^-1+恩曲他滨16ugml^-1)，治疗组6(泰立福韦24ugml^-1+恩曲他滨16ugml^-1+替比夫定48ugml^-1)，治疗组7(泰立福韦24ugml^-1+恩替卡韦40ugml^-1+拉米夫定8ugml^-1)，治疗组8(泰立福韦24ugml^-1+恩替卡韦40ugml^-1+阿德福韦0.8ugml^-1)，总培养液量5ml/25cm²)，并应用相同的细胞不含药物同期培养作对照(对照组)，每2d换培养液一次。治疗组补充新的相同浓度的新组方，并治疗10d。细胞上清液收集后，进行HBV病毒学指标的检测。

HBsAg的ELISA定量监测应用美国Abbott公司提供的试剂盒定量检测细胞培养液中HBsAg的量。

HBVDNA定量检测应用美国Chiron公司提供的试剂盒，应用分支链DNA法(bDNA)，定量检测细胞培养液中HBV DNA含量。

细胞生长及毒性监测在治疗期间及治疗结束时，每日观察细胞形态。在收集细胞时.先用胰蛋白酶处理，并用Trypan蓝染色计数。细胞毒性应用荧光分光光度法测定总细胞DNA量来反映。

统计学处理定量检测的HBsAg、HBV DNA结果，在对照组及治疗组应用t检验进行统计学处理。

结果发现：新组方对细胞培养液中HBsAg的抑制作用结果见表1。表1表明，在各治疗组，细胞培养液中的HBsAg，在治疗的第2天起，开始下降，至治疗结束时(第10天)，HBsAg明显降低。而在对照组，Hep G₂2.2.15细胞培养液中的HBsAg随着培养时间的进展，稳定、持续地分泌，经统计学处理，治疗组与对照组从第六天开始，差异有显著性(P＜005.n＝6)。

表1对HBsAg抗原的抑制作用(ugml^-1)

新组方对细胞外HBVDNA的抑制作用结果见表2。表2表明，在新组方治疗第2天起，细胞外HBVDNA即开始下降，在治疗过程中及治疗结束时，细胞外HBV DNA明显下降。而在对照组，细胞外HBV DNA，随着培养时间的进展，持续、稳定地分泌表达。经统计学处理，从治疗第4天起，差异有显著性.而在治疗结束时(第10天)，差异有高度显著性(P＜0.01，n＝6)。

表2对HBV-DNA的抑制作用(Pgml^-1)

2)新组方的细胞毒性评价。

在治疗过程中，对照组及治疗的细胞形态，每日用相差显微镜观察，未发现明显的变化。治疗完成时，应用Trypan蓝染色计数，两组的细胞总数，二者之间差异无显著性(P＞005，n＝6)应用荧光分光光度法，测定细胞总DNA。在对照组及治疗组之间，细胞总DNA量，差异无显著性(P＞0.05，n＝6)。结果表明：在新组方治疗过程及治疗完成时，与对照组相比，新组方对Hep G₂2.2.15细胞的形态、分裂与生长及细胞DNA的合成无明显的影响，在该实验药物浓度下，新组方细胞毒性作用不明显。

具体实施方式

实施例1复方泰立福韦拉米夫定片

处方：

制备方法：

将泰立福韦、拉米夫定分别过80目筛，采用等量递增法混合均匀，备用；将微晶纤维素、CMS-Na、硬脂酸镁其中，充分混合均匀，粉末直接压片，即得。

实施例2：复方泰立福韦拉米夫定胶囊剂

处方：

制备方法：

将泰立福韦、拉米夫定、预胶化淀粉分别过80目筛，采用等量递增法混合均匀，加入滑石粉，分装，即得。

实施例3：复方泰立福韦替比夫定咀嚼片剂

处方：

制备方法：

将泰立福韦等原辅料分别过80目筛，采用等量递增法混合均匀，备用；加入2％PVP-k 30乙醇溶液，制软材，16目筛制粒，干燥，20目筛整粒，加入其他的矫味剂、甜味剂、助流剂混合均匀，压片，即得。

实施例4：复方泰立福韦阿德福韦酯分散片剂

处方：

制备方法：

将泰立福韦、阿德福韦酯等原辅料分别过80目筛，采用等量递增法混合均匀，备用；加入75％乙醇溶液，制软材，16目筛制粒，干燥，20目筛整粒，加入其他的矫味剂、甜味剂、助流剂、崩解剂等混合均匀，压片，即得。

实施例5：复方泰立福韦恩替卡韦口腔崩解片

处方：

制备方法：

取以上各原辅料，均过100目筛，备用。取恩替卡韦，按照等量递加法与微粉硅胶、部分预胶化淀粉、泰立福韦混合均匀后，再加入等量其他辅料混合均匀，采用粉末直接压片法进行压片，即得。

实施例6：复方泰立福韦恩曲他滨片

处方：

制备方法：

将泰立福韦、恩曲他滨分别过80目筛，采用等量递增法混合均匀，备用；将微晶纤维素、CMS-Na、硬脂酸镁其中，充分混合均匀，粉末直接压片，即得。

实施例7：复方泰立福韦胶囊剂

处方：

制备方法：

将泰立福韦、恩替卡韦、拉米夫定分别过80目筛，采用等量递增法混合均匀，备用；将微晶纤维素、CMS-Na、硬脂酸镁其中，充分混合均匀，粉末直接压片，即得。