CN101838324A - 一种转移因子制备的新工艺 - Google Patents

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CN101838324A CN200910019933A CN200910019933A CN101838324A CN 101838324 A CN101838324 A CN 101838324A CN 200910019933 A CN200910019933 A CN 200910019933A CN 200910019933 A CN200910019933 A CN 200910019933A CN 101838324 A CN101838324 A CN 101838324A
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Inventor
张凤
王云军
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Abstract

本发明涉及一种制备兽药转移因子的工艺，其特征是转移因子制备新工艺采用超声波裂解和超滤等方法，对传统的转移因子制备工艺进行改良。结果改良工艺后平均活性因子总量明显高于传统工艺平均活性因子总量。新工艺不仅大大地节省原料、降低成本、提高效率、而且显著地提高了活性因子总量，具有很好的推广和应用价值。

Description

一种转移因子制备的新工艺
技术领域
本发明涉及一种制备兽药转移因子的工艺
背景技术
转移因子(Transfer factor)，是机体内白细胞中有免疫活性的淋巴细胞所释放的一种能够转移免疫致敏信息的因子，它能够特异地将供体某一细胞免疫的功能转移给受体，非特异性地增强受体免疫功能，是一种新型免疫激发剂，近年来在动物的研究与应用引起了人们的重视。
传统转移因子的制备方法是取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重，用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。采用反复冻融(3次)的方法进行裂解(融化温度不超过37℃)，离心取上清液。将上清液装入截留12000～14000分子量的透析袋中，对体积比为1∶1的灭菌生理盐水透析48～72小时，收集透析外液为原液。除菌，分装。
传统工艺具有加工繁琐、产率低、生产周期长等缺点，为此对转移因子的制备进行了新工艺改革。
本发明的目的就是提供一种新颖的制造转移因子的方法，它应克服现有的技术缺点，具有优异的经济效益和社会效益。
发明内容
经过深入、广泛的研究，本发明人研究出一种新颖的超声波裂解和超滤法制备转移因子。新工艺的采用，将克服传统的转移因子制备工艺的技术缺点。
新工艺为取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。取出经匀浆后的脾脏，解冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15℃。经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
具体实施方式
实施案例一
取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。取出经匀浆后的脾脏，解冻后，用超声波裂解90秒，反复30次，在此操作中温度为15℃。经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
实施案例二
取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。取出经匀浆后的脾脏，解冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过10℃。经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
实施案例三
取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。取出经匀浆后的脾脏，解冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15℃。经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
上述所得的转移因子与传统工艺制备的转移因子进行工艺效果、活性因子测定、紫外分光光度计扫描、氨基酸测定等试验。
1.传统工艺制备的转移因子与改良后的新工艺制备的转移因子进行对照，在工艺效果无任何变化(见表1)
表1：不同生产工艺效果对照
Figure B2009100199334D0000031
2.将传统工艺制备的转移因子与改良后的新工艺制备出的转移因子进行活性对照，结果表明改良后的新的工艺比传统工艺的活性因子总量提高了5mg/ml。(见表2)
表2：不同生产工艺活性因子对照
Figure B2009100199334D0000032
3.将改良后的新工艺制备出的转移因子与传统方法制备的转移因子经紫外分光光度仪扫描，图谱一样，证明成份基本相同。(见图1、图2)
4.将改良工艺制备的转移因子与传统工艺制备的转移因子中氨基酸总量相比较，总数有所增加，各种氨基酸量成正相关增加。(见表3、表4)
表3：改良后新工艺制备的TF氨基酸分析结果
Figure B2009100199334D0000033
Figure B2009100199334D0000041
表4：传统工艺制备的TF氨基酸分析结果
Figure B2009100199334D0000042
17种氨基酸中谷氨酸、天门冬氨酸、甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、赖氨酸、六种含量较高。改良的生产工艺不仅大大地节省原料、降低成本、提高效率、而且显著地提高了活性因子总量。
上述实施例，包括超声波裂解的时间、温度、重复次数及滤柱中空纤维柱的选用，对本发明进行了描述，这些描述是说明性的而非限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
附图说明
图1改良后新工艺制备的转移因子紫外分光光度计扫描的图谱
图2传统工艺制备的转移因子紫外分光光度计扫描的图谱

Claims (5)

1.制备转移因子的新工艺为取正常脾解冻，用自来水清洗血迹和污渍后，以灭菌生理盐水清洗3次，去出系膜、脂肪称重。用绞肉机绞碎后，组织重量(g)按w/v加等量的灭菌生理盐水混匀，用胶体磨破碎120秒，倒入经处理过的不锈钢容器内，置-20℃以下冻存。取出经匀浆后的脾脏，解冻后，用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15℃。经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液。灭菌，分装。
2.根据权利要求1，所述用超声波裂解120秒，反复20次，在此操作中温度不超过15℃。
3.根据权利要求1，裂解后的脾脏匀浆经4摄氏度，6000rpm离心15分钟，收集上清夜。
4.根据权利要求1，将上清液经5um滤柱预滤后，再通过30KD的中空纤维柱进行超滤。再经过6000分子量的中空纤维柱超滤即为原液，灭菌，分装。
5.根据权利要求1～5，一种转移因子制备的新工艺，其特征是用超声波裂解和超滤法制备转移因子。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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PB01 Publication
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