CN101822815A - 系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,该系列多肽小分子的氨基酸序列为Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-Asn、Met-Gln-Ser-Asn-Cys、Met-Cys-Gln-Asn-Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn、Met-Cys-Asn-Gln-Ser、Met-Cys-Asn-Ser-Gln、Met-Cys-Ser-Gln-Asn、Met-Cys-Ser-Asn-Gln、Met-Asn-Cys-Gln-Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln、Met-Asn-Gln-Cys-Ser、Met-Asn-Gln-Ser-Gln、Met-Asn-Ser-Gln-Cys、Met-Asn-Ser-Cys-Gln、Met-Ser-Cys-Gln-Asn、Met-Ser-Cys-Asn-Gln、Met-Ser-Gln-Cys-Asn、Met-Ser-Gln-Asn-Cys、Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列为Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽。本发明所涉及的系列小分子多肽源于单核细胞移动抑制因子,动物实验表明这些系列小分子多肽具有改善脑缺血作用,对于治疗缺血性脑血管疾病有确切的疗效,具备开发成防治缺血性脑血管疾病药物的前景。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域,具体涉及系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用。
背景技术
缺血性脑血管病(缺血性脑卒中)也称为脑中风,这种病是由于大脑里面的血管突然发生破裂出血或因血管堵塞造成大脑缺血、缺氧而引起。目前是世界上发病率、死亡率、致残率最高的疾病之一,我国平均每12秒就有一人发生卒中,每21秒就有一人死于卒中,脑卒中在我国已成为第一大死亡原因,严重危害我国中老年人的健康和生命。目前全国现有得过脑卒中后存活下来的人超过700万,每年脑卒中的直接医疗费用约400亿元人民币。卒中存活者中约3/4丧失劳动能力,其中重度致残者约占40%;中风后5年间的累积复发率约为25%。而目前国内外应用于治疗缺血性脑血管疾病的有效药物很少,因此深入开展防治缺血性脑血管疾病药物的研究具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用。
本发明提供的制备防治缺血性脑血管疾病的药物的系列小分子多肽的氨基酸序列为Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-Asn、Met-Gln-Ser-Asn-Cys、Met-Cys-Gln-Asn-Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn、Met-Cys-Asn-Gln-Ser、Met-Cys-Asn-Ser-Gln、Met-Cys-Ser-Gln-Asn、Met-Cys-Ser-Asn-Gln、Met-Asn-Cys-Gln-Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln、Met-Asn-Gln-Cys-Ser、Met-Asn-Gln-Ser-Gln、Met-Asn-Ser-Gln-Cys 、Met-Asn-Ser-Cys-Gln、Met-Ser-Cys-Gln-Asn、Met-Ser-Cys-Asn-Gln、Met-Ser-Gln-Cys-Asn、Met-Ser-Gln-Asn-Cys、Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列为Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽。
本发明所述的系列多肽小分子可通过现有的化学方法合成,其成盐形式为内盐、碱基盐或酸根盐,并按常规药剂学制备工艺制备成注射剂、片剂或胶囊剂等剂型。
本发明所述的系列小分子多肽的纯度为90.0%-99.99%,优选98.0%-99.5%。
本发明所述的防治缺血性脑血管疾病药物中,系列小分子多肽的重量百分比为0.1‰-1.0%,辅料的重量百分比为99.99%-99.0%。
本发明所涉及的系列小分子多肽源于单核细胞移动抑制因子,动物实验表明这些系列小分子多肽具有改善脑缺血作用,对于治疗缺血性脑血管疾病有确切的疗效,具备开发成防治缺血性脑血管疾病药物的前景。
具体实施方式
本发明实施例提供的制备防治缺血性脑血管疾病的药物的系列小分子多肽的氨基酸序列为Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-Asn、Met-Gln-Ser-Asn-Cys、Met-Cys-Gln-Asn-Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn、Met-Cys-Asn-Gln-Ser、Met-Cys-Asn-Ser-Gln、Met-Cys-Ser-Gln-Asn、Met-Cys-Ser-Asn-Gln、Met-Asn-Cys-Gln-Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln、Met-Asn-Gln-Cys-Ser、Met-Asn-Gln-Ser-Gln、Met-Asn-Ser-Gln-Cys、Met-Asn-Ser-Cys-Gln、Met-Ser-Cys-Gln-Asn、Met-Ser-Cys-Asn-Gln、Met-Ser-Gln-Cys-Asn、Met-Ser-Gln-Asn-Cys、Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列为Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽,其成盐形式为内盐、碱基盐或酸根盐。本发明提供的防治缺血性脑血管疾病的药物可通过以下实施例所述的方法制备获得。
实施例1
取系列小分子多肽原料10克,溶于10000毫升水中,加入亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、盐酸、枸橼酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亚砜、蔗糖、醋酸铵、桔酸丙酯、维生素C、维生素E、卵磷脂、蛋白质水解物、硫代硫酸钠、异抗坏血酸、抗坏血酸钠、去甲二氢愈创木酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羟丙基β环糊精等辅料中的一种或几种,加入0.05%-0.15%活性炭后,过滤,再精滤后分装于2ml或5ml或10ml或20ml安瓶中熔封,或50ml或100ml输液瓶中压盖,灭菌、即得。
实施例2
取系列小分子多肽原料10克,溶于10000毫升水中,加入亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、盐酸、枸橼酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亚砜、蔗糖、醋酸铵、桔酸丙酯、维生素C、维生素E、卵磷脂、蛋白质水解物、硫代硫酸钠、异抗坏血酸、抗坏血酸钠、去甲二氢愈创木酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羟丙基β环糊精等辅料中的一种或几种,加入0.05%-0.15%活性炭后,过滤,再精滤除菌后分装于1ml、5ml或10ml西林瓶中,冻干即得。
实施例3
取系列小分子多肽原料100mg直接灭菌,然后分装于1ml或2ml或5ml安瓶中熔封,或1ml或2ml或5ml西林瓶中压盖即得。
实施例4
取系列小分子多肽原料100g,粉碎,过筛,加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、水、乙醇、微晶纤维素、饴糖、明胶、阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、PVP、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可压性淀粉、滑石粉和硬脂酸镁等辅料中的一种或几种,制成颗粒、压片、包薄膜衣即得。
实施例5
取小分子多肽原料100g,粉碎,过筛,加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、水、乙醇、微晶纤维素、饴糖、明胶、阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、PVP、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可压性淀粉、滑石粉、和硬脂酸镁等辅料中的一种或几种,制成颗粒、装胶囊即得。
药理实验
下面通过药理实验说明本发明药物的有益效果。
用小鼠线栓法制作脑血管疾病模型。本方法为验证药物具有防治缺血性脑血管疾病作用的常规动物实验方法。用其验证该系列小分子多肽对实验性动物脑缺血的保护作用。
1、实验动物
采用雄性小鼠,体重20-24g,每组10只/笼群养,共分30组。将小鼠进行分组。
2、实验分组
空白组:给予与药物实验组等量的生理盐水进行假手术。
模型组:给予药物实验组等量的生理盐水进行脑血管疾病再灌注手术。
实验一组:给予五肽Met-Gln-Cys-Ser-Asn1.0mg/kg,
实验二组:给予五肽Met-Gln-Asn-Cys-Ser1.0mg/kg,
实验三组:给予五肽Met-Gln-Asn-Ser-Cys1.0mg/kg,
实验四组:给予五肽Met-Gln-Ser-Cys-Asn1.0mg/kg,
实验五组:给予五肽Met-Gln-Ser-Asn-Cys1.0mg/kg,
实验六组:给予五肽Met-Cys-Gln-Asn-Ser1.0mg/kg,
实验七组:给予五肽Met-Cys-Gln-Ser-Asn1.0mg/kg,
实验八组:给予五肽Met-Cys-Asn-Gln-Ser1.0mg/kg,
实验九组:给予五肽Met-Cys-Asn-Ser-Gln1.0mg/kg,
实验十组:给予五肽Met-Cys-Ser-Gln-Asn1.0mg/kg,
实验十一组:给予五肽Met-Cys-Ser-Asn-Gln1.0mg/kg,
实验十二组:给予五肽Met-Asn-Cys-Gln-Ser1.0mg/kg,
实验十三组:给予五肽Met-Asn-Cys-Ser-Gln1.0mg/kg,
实验十四组:给予五肽Met-Asn-Gln-Cys-Ser1.0mg/kg
实验十五组:给予五肽Met-Asn-Gln-Ser-Gln1.0mg/kg,
实验十六组:给予五肽Met-Asn-Ser-Gln-Cys1.0mg/kg,
实验十七组:给予五肽Met-Asn-Ser-Cys-Gln1.0mg/kg,
实验十八组:给予五肽Met-Ser-Cys-Gln-Asn1.0mg/kg,
实验十九组:给予五肽Met-Ser-Cys-Asn-Gln1.0mg/kg,
实验二十组:给予五肽Met-Ser-Gln-Cys-Asn1.0mg/kg,
实验二十一组:给予五肽Met-Ser-Gln-Asn-Cys1.0mg/kg,
实验二十二组:给予五肽Met-Ser-Asn-Gln-Cys1.0mg/kg,
实验二十三组:给予五肽Met-Ser-Asn-Cys-Gln1.0mg/kg,
实验二十四组:给予三肽Cys-Ser-Asn1.0mg/kg,
实验二十五组:给予三肽Asn-Cys-Ser1.0mg/kg,
实验二十六组:给予三肽Asn-Ser-Cys1.0mg/kg,
实验二十七组:给予三肽Ser-Cys-Asn1.0mg/kg,
实验二十八组:给予三肽Ser-Asn-Cys1.0mg/kg。
3、实验方法
将小鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,颈正中切口,分离、结扎右侧颈总动脉近心端、颈外动脉及其分支动脉。分离右侧颈内动脉,沿颈内动脉向下分离翼颚动脉,根部结扎该分支。在颈内动脉近端备线,远端放置动脉夹,颈总动脉分叉处切口,插入4-0尼龙线,栓线进入颈内动脉,入颅至大脑前动脉,阻断大脑中动脉所有血流来源。撤掉动脉夹,扎紧备线,外留1cm长线头,缝合皮肤。缺血1小时后尾静脉给药。继续缺血1小时后再灌注。假手术组除不插线外,其余步骤同上。
(1)实验药物对小鼠缺血性脑血管疾病再灌注模型脑梗塞面积的影响
存活鼠再灌注24小时后,快速断头取鼠大脑。在前连和平面切下厚约2mm冠状脑片,立刻置于2%TTC溶液中,37℃孵育30分钟。梗塞区呈现白色,非梗塞区呈现红色。用求积仪(C63图像分析系统)测出各区面积,并计算梗塞区占整个冠面的百分比。结果表明:
模型组的梗塞面积(%)为19.78±3.54##,实验一组的梗塞面积(%)为9.90±2.65*,实验二组的梗塞面积(%)为7.90±3.65**,实验三组的梗塞面积(%)为8.07±1.98**,实验四组的梗塞面积(%)为7.71±0.25**,实验五组的梗塞面积(%)为11.44±2.89##,实验六组的梗塞面积(%)为10.63±3.15*,实验七组的梗塞面积(%)为12.78±3.03**,实验八组的梗塞面积(%)为13.26±1.89*,实验九组:的梗塞面积(%)为13.51±2.07*,实验十组的梗塞面积(%)为11.70±2.18*,实验十一组的梗塞面积(%)为:11.39±2.34*,实验十二组的梗塞面积(%)为12.54±3.11*,实验十三组的梗塞面积(%)为12.35±2.68*,实验十四组的梗塞面积(%)为12.23±2.37*,实验十五组的梗塞面积(%)为11.46±2.69*,实验十六组的梗塞面积(%)为11.87±2.94*,实验十七组的梗塞面积(%)为10.52±2.85*,实验十八组的梗塞面积(%)为10.38±2.26*,实验十九组的梗塞面积(%)为10.03±2.19*,实验二十组的梗塞面积(%)为9.62±3.28**,实验二十一组的梗塞面积(%)为9.27±2.62**,实验二十二组的梗塞面积(%)为:9.46±2.85*,实验二十三组的梗塞面积(%)为8.84±3.17**,实验二十四组的梗塞面积(%)为12.69±1.57*,实验二十五组的梗塞面积(%)为12.88±3.08*,实验二十六组的梗塞面积(%)为13.17±2.34*,实验二十七组的梗塞面积(%)为12.93±2.59*,实验二十八组的梗塞面积(%)为13.28±3.40*。其中,实验模型组侧脑组织梗塞面积明显小于其他,且与各组相比有显著性差异(P<0.01)。即当给予五肽的剂量为1.0g时,对小鼠脑缺血再灌注损伤引起的脑梗塞有显著保护作用。见表1。
与假手术组比较,##P<0.01;与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01。
Claims (10)
1.系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,该系列多肽小分子的氨基酸序列为Met-Gln-Cys-Ser-Asn、Met-Gln-Asn-Cys-Ser、Met-Gln-Asn-Ser-Cys、Met-Gln-Ser-Cys-Asn、Met-Gln-Ser-Asn-Cys、Met-Cys-Gln-Asn-Ser、Met-Cys-Gln-Ser-Asn、Met-Cys-Asn-Gln-Ser、Met-Cys-Asn-Ser-Gln、Met-Cys-Ser-Gln-Asn、Met-Cys-Ser-Asn-Gln、Met-Asn-Cys-Gln-Ser、Met-Asn-Cys-Ser-Gln、Met-Asn-Gln-Cys-Ser、Met-Asn-Gln-Ser-Gln、Met-Asn-Ser-Gln-Cys、Met-Asn-Ser-Cys-Gln、Met-Ser-Cys-Gln-Asn、Met-Ser-Cys-Asn-Gln、Met-Ser-Gln-Cys-Asn、Met-Ser-Gln-Asn-Cys、Met-Ser-Asn-Gln-Cys或Met-Ser-Asn-Cys-Gln的五肽以及氨基酸序列为Cys-Ser-Asn、Asn-Cys-Ser、Asn-Ser-Cys、Ser-Cys-Asn或Ser-Asn-Cys的三肽。
2.根据权利要求1所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的系列多肽小分子通过现有的化学方法合成,其成盐形式为内盐、碱基盐或酸根盐,并按常规药剂学制备工艺制备成注射剂、片剂或胶囊剂。
3.根据权利要求2所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的系列小分子多肽的纯度为90.0%-99.99%。
4.根据权利要求3所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的系列小分子多肽的纯度为98.0%-99.5%。
5.根据权利要求3或4所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的防治缺血性脑血管疾病药物中,系列小分子多肽的重量百分比为0.1‰-1.0%,辅料的重量百分比为99.99%-99.0%。
6.根据权利要求5所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的防治缺血性脑血管疾病药物的制备方法是:取系列小分子多肽原料10克,溶于10000毫升水中,加入亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、盐酸、枸橼酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亚砜、蔗糖、醋酸铵、桔酸丙酯、维生素C、维生素E、卵磷脂、蛋白质水解物、硫代硫酸钠、异抗坏血酸、抗坏血酸钠、去甲二氢愈创木酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羟丙基β环糊精辅料中的一种或几种,加入0.05%-0.15%活性炭后,过滤,再精滤后分装于2ml或5ml或10ml或20ml安瓶中熔封,或50ml或100ml输液瓶中压盖,灭菌、即得。
7.根据权利要求5所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的防治缺血性脑血管疾病药物的制备方法是:取系列小分子多肽原料10克,溶于10000毫升水中,加入亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、盐酸、枸橼酸、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠、葡萄糖、甘露醇、葡聚糖、乳糖、肌酸醇、PVP、甘油、二甲亚砜、蔗糖、醋酸铵、桔酸丙酯、维生素C、维生素E、卵磷脂、蛋白质水解物、硫代硫酸钠、异抗坏血酸、抗坏血酸钠、去甲二氢愈创木酸、丁基羟基茴香醚、丁基羟基甲苯、酒石酸、山梨醇、EDTA和羟丙基β环糊精辅料中的一种或几种,加入0.05%-0.15%活性炭后,过滤,再精滤除菌后分装于1ml、5ml或10ml西林瓶中,冻干即得。
8.根据权利要求5所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的防治缺血性脑血管疾病药物的制备方法是:取系列小分子多肽原料100mg直接灭菌,然后分装于1ml或2ml或5ml安瓶中熔封,或1ml或2ml或5ml西林瓶中压盖即得。
9.根据权利要求5所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的防治缺血性脑血管疾病药物的制备方法是:取系列小分子多肽原料100g,粉碎,过筛,加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、水、乙醇、微晶纤维素、饴糖、明胶、阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、PVP、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可压性淀粉、滑石粉和硬脂酸镁辅料中的一种或几种,制成颗粒、压片、包薄膜衣即得。
10.根据权利要求5所述的系列多肽小分子在制备防治缺血性脑血管疾病药物中的应用,其特征在于,所述的防治缺血性脑血管疾病药物的制备方法是:取小分子多肽原料100g,粉碎,过筛,加入淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、硫酸钙、碳酸钙、碳酸氢钙、水、乙醇、微晶纤维素、饴糖、明胶、阿拉伯胶、羧甲基纤维素钠、PVP、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、羧甲基淀粉、可压性淀粉、滑石粉、和硬脂酸镁辅料中的一种或几种,制成颗粒、装胶囊即得。
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