CN110179789B

CN110179789B - 小白菊内酯在制备抗弓形虫药物中的应用

Info

Publication number: CN110179789B
Application number: CN201910425754.4A
Authority: CN
Inventors: 韦淑亚
Original assignee: Wuhan Polytechnic University
Current assignee: Wuhan Polytechnic University
Priority date: 2019-05-21
Filing date: 2019-05-21
Publication date: 2021-08-31
Anticipated expiration: 2039-05-21
Also published as: CN110179789A

Abstract

本发明公开了小白菊内酯在制备抗弓形虫药物中的应用；本发明人经过大量的实验证明小白菊内酯具有显著的抗弓形虫效果，有望成为新一代治疗弓形虫病的药物。小白菊内酯具有显著的抗弓形虫效果：(1)以细胞实验结果表明，相对空白对照组，80mM的小白菊内酯可降低细胞群体感染率至22％；对于单个细胞内虫体的增殖率可降至15％；(2)凋亡实验表明小白菊内酯可促进弓形虫细胞凋亡率；且小白菊内酯作为抗弓形虫药物具有低毒的优点：小白菊内酯对弓形虫感染的大鼠的治疗实验表明，大鼠死亡率极低，小白菊内酯100毫克/Kg时保护率为100％；解剖采取组织，大鼠各组织形态大小正常，进行病理切片检查，未见病理改变。

Description

小白菊内酯在制备抗弓形虫药物中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别涉及小白菊内酯在制备抗弓形虫药物中的应用。

背景技术

弓形虫是一种非常重要的机会性致病寄生虫，能引起孕妇和孕畜流产、死产，对免疫功能缺陷及低下人群影响最严重甚至有致命的威胁。弓形虫感染呈世界性分布，特别集中于温暖、潮湿和低海拔地区，据流行病学研究表明，全球弓形虫人群阳性率平均约为30％，英国20％～40％，美国50％～60％，法国80％～90％。我国人体弓形虫血清阳性率平均为7.88％，感染率与年龄、职业、文化程度、身体状况等因素有关，男女间感染机会均等。至于动物感染率，据文献报道，弓形虫在家禽家畜感染率根据动物品种不同，大致为25.17％～66.39％。

弓形虫的宿主种类十分广泛，几乎所有哺乳动物、鸟类、鱼类都可作为中间宿主，猫及其它猫科动物是其终宿主兼中间宿主。弓形虫对寄生组织的选择也无特异亲嗜性，除红细胞外的所有有核细胞均可寄生.其感染途径为饮食不洁、污染的水源、接触感染禽畜、胎盘、输血等途径传播，并有家庭聚集现象，弓形虫病与艾滋病的关系十分密切，约有5％～10％的艾滋病患者兼有弓形虫感染。

目前，临床治疗弓形虫感染仍依赖化学药物，主要为磺胺嘧啶钠和乙胺嘧啶复配。阿奇霉素、青蒿素及衍生物、螺旋霉素、大蒜素等,据报道也有一定疗效。但上述药物存在治疗时间长、不能彻底杀死虫体，易复发，副作用较大等缺点。因此，急需寻找一种低毒、高效的抗弓形虫药物。

发明内容

本发明的目的在于提供小白菊内酯在制备抗弓形虫药物中的应用。本发明人经过大量的实验证明小白菊内酯具有显著的抗弓形虫效果，有望成为新一代治疗弓形虫病的药物。且该抗弓形虫药物具有低毒、高效的优点。

本发明人经过大量的实验证明小白菊内酯具有抗弓形虫的新用途；且优选地，所述小白菊内酯的浓度为40mM～100mM。最为优选地，所述的小白菊内酯的浓度为80mM。

本发明的有益效果如下：

1、小白菊内酯具有显著的抗弓形虫效果，作为抗弓形虫药物具有高效的优点，具体地：

(1)以感染弓形虫的Vero细胞为实验模型的细胞实验结果表明，相对空白对照组，80mM的小白菊内酯可降低细胞群体感染率至22％(图1A)；对于单个细胞内虫体的增殖率可降至15％(图1B)；

(2)凋亡实验表明，小白菊内酯可以大大促进弓形虫细胞凋亡率(图2)；

2、小白菊内酯作为抗弓形虫药物具有低毒的优点，具体地：

(1)小白菊内酯对弓形虫感染的大鼠的治疗实验表明，大鼠死亡率极低，小白菊内酯100毫克/Kg时保护率为100％；

(2)小白菊内酯对实验动物组织器官的影响实验表明，300100毫克/Kg药物饲喂大鼠，大鼠各组织形态大小正常，进行病理切片检查，未见病理改变，表明小白菊内酯毒性较低。

3、小白菊内酯作为抗弓形虫药物可促进机体的免疫应答，具体地：

小白菊内酯对大鼠体液免疫水平的影响实验表明，小白菊内酯可以显著促进大鼠IFN-Y、TNF、IL-8等细胞因子的产生，促进免疫应答。

附图说明

图1为小白菊内酯对入侵机体细胞的虫体和已在细胞内增殖率虫体抑制效果图，其中(A)为细胞群体感染率结果，(B)为单个细胞群体增殖率结果；

图2为小白菊内酯对弓形虫细胞凋亡影响的结果；

图3为小白菊内酯对实验动物组织器官的影响的结果；其中A为对照组B为小白菊内酯灌胃给药组(300毫克/Kg)；

图4为小白菊内酯对大鼠体液免疫水平的影响结果。

具体实施方式

实施例1小白菊内酯对入侵机体细胞的虫体和已在细胞内增殖率虫体抑制效果

以感染弓形虫的Vero细胞为实验模型，设置不同浓度(10mM、20mM、40mM、80mM、100mM)小白菊内酯药物处理组,未经药物处理的空白对照组,以及乙胺嘧啶阳性对照组，72小时后进行观察，计算细胞的群体感染率(％)和单个细胞内虫体的增殖率(％)。实验结果表明，相对空白对照组，80mM的小白菊内酯可降低细胞群体感染率至22％(图1A)；对于单个细胞内虫体的增殖率可降至15％(图1B)。

实施例2小白菊内酯对弓形虫细胞凋亡影响

配制0.25％胰酶生理盐水将复苏的RH弓形虫虫体(1×10⁷个/m L)，37℃水浴20min，3000rpm离心10min，弃上清，加入0.84％氯化铵静置5min除去红细胞，3000rpm离心10min弃上清PBS洗两遍备用。将纯化的虫体等分为2份，分别经PBS(pH7.0)和小白菊内酯(80mM)37℃，体外孵育4h，利用Annexin V-PE细胞凋亡检测试剂盒，流式细胞仪检测结果表明，小白菊内酯可以大大促进弓形虫细胞凋亡率(图2)。

实施例3小白菊内酯对弓形虫感染的大鼠的治疗实验

试验共分4组，每组10只大鼠，每只大鼠分别接种4×10⁷个RH株弓形虫，接种6小时后开始灌胃给药，按体重计算药物，连续灌胃6天，统计大鼠的死忙情况(表1)。

表1小白菊内酯对弓形虫感染的大鼠的治疗实验

由表1可知，小白菊内酯对弓形虫感染的大鼠的治疗实验表明，大鼠死亡率极低，小白菊内酯100-300毫克/Kg时，实验动物无死亡，表明小白菊内酯作为抗弓形虫药物具有低毒的优点；小白菊内酯100-300毫克/Kg时，对动物保护率达到了100％，表明小白菊内酯作为抗弓形虫药物具有高效的优点。

实施例4小白菊内酯对实验动物组织器官的影响

购买SPF级小鼠，共20只，分成2组，实验对照组，小白菊内酯灌胃给药组(300毫克/Kg)，每只小鼠分别接种4×107个RH株弓形虫，接种6小时后开始灌胃给药，按体重计算药物，连续灌胃6天，处死小鼠。实验期间，观察各组小鼠外表、运动及采食情况，未发现动物行为异常，外表及采食情况正常。解剖采取组织，小鼠各组织形态大小正常，进行病理切片检查，未见病理改变(图3)。

实施例5小白菊内酯对大鼠体液免疫水平的影响

购买SPF级大鼠，共20只，分成2组，实验对照组，小白菊内酯灌胃给药组(50毫克/Kg)，每只大鼠分别接种4×10⁷个RH株弓形虫，接种6小时后开始灌胃给药，按体重计算药物，连续灌胃6天，处死大鼠，无菌采摘大鼠脾脏，利用200目铜网制备脾脏单细胞悬液，按照流式细胞检测要求，将去除红细胞后的单细胞悬液，调整浓度为4×10⁶个细胞/ml，进行细胞因子检测。结果表明，小白菊内酯可以显著促进大鼠IFN-Y、TNF、IL-8等细胞因子的产生(图4)，从而促进免疫应答反应。

所述的小白菊内酯作为抗弓形虫药物可制备成片剂、胶囊、口服液体制剂、喷雾剂、注射液中的任意一种或两种以上的组合物。其中所述片剂、胶囊、口服液体制剂、喷雾剂、注射液可按常规方法制备得到。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims

1.小白菊内酯在制备抗弓形虫药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述小白菊内酯的浓度为40mM～100mM。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的小白菊内酯的浓度为80mM。

4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗弓形虫药物包含小白菊内酯或其药学上可接受的盐，水合物或其组合及辅料。

5.权利要求1或4所述的应用，其特征在于：所述抗弓形虫药物制备成片剂、胶囊、口服液体制剂、喷雾剂、注射液中的任意一种或两种以上的组合物。