CN101822322B - 乳酸菌止痢素的制备方法 - Google Patents
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Abstract
乳酸菌止痢素的制备方法，它涉及防治畜禽疾病的饲料添加剂的制备方法。本发明解决了现有的防治畜禽疾病的方法向畜禽饲料中添加抗生素和化学药品，使畜禽产生抗药性、动物体正常菌群失调、抑制机体免疫机能及在动物体内残留的问题。本产品由嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水制成；方法：一、由嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基制备嗜酸乳酸杆菌发酵剂；二、将乳清粉和脱脂大豆蛋白粉加到热水中，得到嗜酸乳酸杆菌培养液；三、将嗜酸乳酸杆菌发酵剂加入到培养液中，发酵后喷雾干燥，得到乳酸菌止痢素。本产品中不添加抗生素或化学药品，无毒副作用、无耐药性、无残留，是一种绿色、功能性饲料添加剂，可以应用在动物养殖业。
Description
技术领域
本发明涉及防治畜禽疾病的饲料添加剂的制备方法。
背景技术
畜禽饲养行业，现有的防治畜禽疾病的方法是在畜禽饲料中添加抗生素和化学药品，这种方法在促进畜禽饲养业的发展的同时，也产生了严重不良后果。首先，畜禽长期使用抗生素，可使病原菌突变为耐药菌株，产生抗药性，同时还可导致动物体正常菌群失调，抑制机体免疫反应的形成，严重的导致二重感染，甚至引起死亡。其次，抗生素在畜禽体内残留，残留在肉、蛋、奶等食品中的抗生素，经加热处理并不能完全使其灭活，人长期摄入这类含有残留抗生素的食品，将直接影响人类的免疫和健康。
发明内容：
本发明是为了解决现有的防治畜禽疾病的方法向畜禽饲料中添加抗生素和化学药品，使畜禽产生抗药性、动物体正常菌群失调、抑制机体免疫机能及在动物体内残留的问题，而提供乳酸菌止痢素的制备方法。
本发明的乳酸菌止痢素按体积份数比由1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、1～8份乳清粉、1～8份脱脂大豆蛋白粉和30～40份水制成；其中嗜酸乳酸杆菌发酵剂是由嗜酸乳酸杆菌与MRS培养基组成，菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为1亿cfu/mL～100亿cfu/mL。
本发明的乳酸菌止痢素的制备方法按以下步骤进行：一、按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶48～53，称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在35℃～37℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为1亿cfu/mL～100亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂；二、按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、1～8份乳清粉、1～8份脱脂大豆蛋白粉和30～40份水的比例，称取经步骤一得到的嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水；三、将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至65℃～95℃，然后加入经步骤二称取的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉，搅拌，在65℃～85℃的条件下保持25min～60min后，再冷却至40℃～46℃，得到嗜酸乳酸杆菌培养液；四、将经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂加入到经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中，搅拌30min，然后在温度为35℃～37℃的条件下发酵至酸度为280°T～350°T，得到发酵液；五、将经步骤四得到的发酵液搅拌均匀，打入压力喷雾干燥机中，在压力为1MPa～15MPa、排风温度为50℃～66℃的条件下干燥，得到乳酸菌止痢素。
步骤一中所述的MRS培养基为市售商品，其配方组成为10克酪蛋白胨、10克牛肉膏，5克酵母提取物，5克葡萄糖，5克乙酸纳，2克柠檬酸二胺，1克吐温80，2克磷酸氢钾，0.2克七水硫酸镁，0.05克硫酸锰，20克碳酸钙，1升蒸馏水；该MRS培养基的pH值为6.8。
本发明的乳酸菌止痢素是以乳清粉和脱脂大豆蛋白粉做为营养基质，由嗜酸乳酸杆菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抑菌活性的小肽、多肽或多肽前体。本发明的乳酸菌止痢素能够调整或维持肠道内微生态平衡，促进乳酸菌等有益菌增殖，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长，增强机体免疫功能，促进营养物质的吸收和转化；乳清粉和脱脂大豆蛋白粉不仅可以做为嗜酸乳酸杆菌发酵过程中的营养基质，产生活乳酸菌、乳酸菌素、乳酸、细菌酶和代谢营养素等物质，未被嗜酸乳酸杆菌利用的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉被畜禽摄入后，也可以补充蛋白质，增加营养；从而达到防病治病、提高动物饲料转化率和畜禽生产能力的作用，而且乳酸菌止痢素不添加抗生素或化学药品，无毒副作用、无耐药性、无残留，是一种绿色、功能性饲料添加剂，可以应用在动物养殖业。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式的乳酸菌止痢素按体积份数比由1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、1～8份乳清粉、1～8份脱脂大豆蛋白粉和30～40份水制成；其中嗜酸乳酸杆菌发酵剂是由嗜酸乳酸杆菌与MRS培养基组成，菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为1亿cfu/mL～100亿cfu/mL。
本实施方式中MRS培养基MRS培养基为市售商品，其配方组成为10克酪蛋白胨、10克牛肉膏，5克酵母提取物，5克葡萄糖，5克乙酸纳，2克柠檬酸二胺，1克吐温80，2克磷酸氢钾，0.2克七水硫酸镁，0.05克硫酸锰，20克碳酸钙，1升蒸馏水；该MRS培养基的pH值为6.8。
本实施方式的乳酸菌止痢素是以乳清粉和脱脂大豆蛋白粉做为营养基质，由嗜酸乳酸杆菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抑菌活性的小肽、多肽或多肽前体。本实施方式的乳酸菌止痢素能够调整或维持肠道内微生态平衡，促进乳酸菌等有益菌增殖，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长，增强机体免疫功能，促进营养物质的吸收和转化；乳清粉和脱脂大豆蛋白粉不仅可以做为嗜酸乳酸杆菌发酵过程中的营养基质，产生活乳酸菌、乳酸菌素、乳酸、细菌酶和代谢营养素等物质，未被嗜酸乳酸杆菌利用的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉被畜禽摄入后，也可以补充蛋白质，增加营养；从而达到防病治病、提高动物饲料转化率和畜禽生产能力的作用，而且乳酸菌止痢素不添加抗生素或化学药品，无毒副作用、无耐药性、无残留，是一种绿色、功能性饲料添加剂，可以应用在动物养殖业。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一不同的是：乳酸菌止痢素按体积份数比由1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、2～7份乳清粉、2～7份脱脂大豆蛋白粉和32～38份水制成；其中嗜酸乳酸杆菌发酵剂是由嗜酸乳酸杆菌与MRS培养基组成，菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为5亿cfu/mL～80亿cfu/mL。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一不同的是：乳酸菌止痢素按体积份数比由1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、5份乳清粉、5份脱脂大豆蛋白粉和35份水制成；其中嗜酸乳酸杆菌发酵剂是由嗜酸乳酸杆菌与MRS培养基组成，菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为50亿cfu/mL。
具体实施方式四：本实施方式的乳酸菌止痢素的制备方法按以下步骤进行：一、按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶48～53称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在35℃～37℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为1亿cfu/mL～100亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂；二、按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、1～8份乳清粉、1～8份脱脂大豆蛋白粉和30～40份水的比例，称取经步骤一得到的嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水；三、将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至65℃～95℃，然后加入经步骤二称取的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉，搅拌，在65℃～85℃的条件下保持25min～60min后，再冷却至40℃～46℃，得到嗜酸乳酸杆菌培养液；四、将经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂加入到经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中，搅拌30min，然后在温度为35℃～37℃的条件下发酵至酸度为280°T～350°T，得到发酵液；五、将经步骤四得到的发酵液搅拌均匀，打入压力喷雾干燥机中，在压力为1MPa～15MPa、排风温度为50℃～66℃的条件下干燥，得到乳酸菌止痢素。
本实施方式步骤一中所述的MRS培养基为市售商品，其配方组成为10克酪蛋白胨、10克牛肉膏，5克酵母提取物，5克葡萄糖，5克乙酸纳，2克柠檬酸二胺，1克吐温80，2克磷酸氢钾，0.2克七水硫酸镁，0.05克硫酸锰，20克碳酸钙，1升蒸馏水；该MRS培养基的pH值为6.8。
本实施方式制备的乳酸菌止痢素是以乳清粉和脱脂大豆蛋白粉做为营养基质，由嗜酸乳酸杆菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抑菌活性的小肽、多肽或多肽前体。本实施方式制备的乳酸菌止痢素能够调整或维持肠道内微生态平衡，促进乳酸菌等有益菌增殖，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长，增强机体免疫功能，促进营养物质的吸收和转化；乳清粉和脱脂大豆蛋白粉不仅可以做为嗜酸乳酸杆菌发酵过程中的营养基质，产生活乳酸菌、乳酸菌素、乳酸、细菌酶和代谢营养素等物质，未被嗜酸乳酸杆菌利用的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉被畜禽摄入后，也可以补充蛋白质，增加营养；从而达到防病治病、提高动物饲料转化率和畜禽生产能力的作用，而且乳酸菌止痢素不添加抗生素或化学药品，无毒副作用、无耐药性、无残留，是一种绿色、功能性饲料添加剂，可以应用在动物养殖业。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式四不同的是：步骤一中按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶49～52称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在35.5℃～36.5℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为5亿cfu/mL～80亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂。其它与具体实施方式四相同。
具体实施方式六：本实施方式与具体实施方式四或五不同的是：步骤一中按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶50称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在36.0℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为50亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂。其它与具体实施方式四或五相同。
具体实施方式七：本实施方式与具体实施方式四至六之一不同的是：步骤二中按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、2～7份乳清粉、2～7份脱脂大豆蛋白粉和32～38份水的比例称取嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水。其它与具体实施方式四至六之一相同。
具体实施方式八：本实施方式与具体实施方式四至七之一不同的是：步骤二中按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、5份乳清粉、5份脱脂大豆蛋白粉和35份水的比例称取嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水。其它与具体实施方式四至七之一相同。
具体实施方式九：本实施方式与具体实施方式四至八之一不同的是：步骤三中将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至68℃～92℃。其它与具体实施方式四至八之一相同。
具体实施方式十：本实施方式与具体实施方式四至九之一不同的是：步骤三中将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至80℃。其它与具体实施方式四至九之一相同。
具体实施方式十一：本实施方式与具体实施方式四至十之一不同的是：步骤三中将乳清粉和脱脂大豆蛋白粉加入到不锈钢发酵罐中，搅拌，在68℃～82℃的条件下保持30min～55min后，再冷却至42℃～45℃。其它与具体实施方式四至十之一相同。
具体实施方式十二：本实施方式与具体实施方式四至十一之一不同的是：步骤三中将乳清粉和脱脂大豆蛋白粉加入到不锈钢发酵罐中，搅拌，在75℃的条件下保持40min后，再冷却至43℃。其它与具体实施方式四至十一之一相同。
具体实施方式十三：本实施方式与具体实施方式四至十二之一不同的是：步骤四中经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂在经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中的发酵条件是：发酵温度为35.5℃～36.5℃，发酵至酸度为290°T～340°T。其它与具体实施方式四至十二之一相同。
具体实施方式十四：本实施方式与具体实施方式四至十三之一不同的是：步骤四中经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂在经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中的发酵条件是：发酵温度为36℃，发酵至酸度为320°T。其它与具体实施方式四至十三之一相同。
具体实施方式十五：本实施方式与具体实施方式四至十四之一不同的是：步骤五中压力喷雾干燥机的压力为2MPa～13MPa、排风温度为52℃～64℃。其它与具体实施方式四至十四之一相同。
具体实施方式十六：本实施方式与具体实施方式四至十五之一不同的是：步骤五中压力喷雾干燥机的压力为10MPa、排风温度为60℃。其它与具体实施方式四至十五之一相同。
具体实施方式十七：本实施方式的乳酸菌止痢素的制备方法按以下步骤进行：一、按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶51称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在37℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为80亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂；二、按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、6份乳清粉、5份脱脂大豆蛋白粉和36份水的比例，称取经步骤一得到的嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水；三、将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至82℃，然后加入经步骤一称取的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉，搅拌，在80℃的条件下保持40min后，再冷却至40℃，得到嗜酸乳酸杆菌培养液；四、将经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂加入到经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中，搅拌30min，然后在温度为37℃的条件下发酵至酸度为300°T，得到发酵液；五、将经步骤四得到的发酵液搅拌均匀，打入压力喷雾干燥机中，在压力为12MPa、排风温度为66℃的条件下干燥，得到乳酸菌止痢素。
本实施方式步骤一中所述的MRS培养基为市售商品，其配方组成为10克酪蛋白胨、10克牛肉膏，5克酵母提取物，5克葡萄糖，5克乙酸纳，2克柠檬酸二胺，1克吐温80，2克磷酸氢钾，0.2克七水硫酸镁，0.05克硫酸锰，20克碳酸钙，1升蒸馏水；该MRS培养基的pH值为6.8。
本实施方式的步骤一中的嗜酸乳酸杆菌是购自中国科学院微生物研究所，菌种编号为1.1854。
本实施方式制备的乳酸菌止痢素用于对畜禽的食欲不振、消化不良、腹泻、下痢症的治疗效果如表1所示。病情诊断采信正规兽医院出具的检验报告。
表1乳酸菌止痢素用于对畜禽的治疗效果
经2～3天的治疗，治愈14例，占87.5％；有效率为100％。
饲料厂，养殖场按乳酸菌止痢素百分比为0.05％～0.1％(质量)将乳酸菌止痢素添加到配合饲料中，混合均匀后，正常喂食，畜禽体质健壮，发病率比不添加乳酸菌止痢素的对照组降低80％。
本实施方式制备的乳酸菌止痢素是以乳清粉和脱脂大豆蛋白粉做为营养基质，由嗜酸乳酸杆菌在代谢过程中通过核糖体合成机制产生的具有抑菌活性的小肽、多肽或多肽前体。本实施方式制备的乳酸菌止痢素能够调整或维持肠道内微生态平衡，促进乳酸菌等有益菌增殖，抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病菌的生长，增强机体免疫功能，促进营养物质的吸收和转化；乳清粉和脱脂大豆蛋白粉不仅可以做为嗜酸乳酸杆菌发酵过程中的营养基质，产生活乳酸菌、乳酸菌素、乳酸、细菌酶和代谢营养素等物质，未被嗜酸乳酸杆菌利用的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉被畜禽摄入后，也可以补充蛋白质，增加营养；从而达到防病治病、提高动物饲料转化率和畜禽生产能力的作用，而且乳酸菌止痢素不添加抗生素或化学药品，无毒副作用、无耐药性、无残留，是一种绿色、功能性饲料添加剂，可以应用在动物养殖业。
Claims (7)
1.乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于乳酸菌止痢素的制备方法按以下步骤进行：一、按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶48～53，称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在35℃～37℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为1亿cfu/mL～100亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂；二、按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、1～8份乳清粉、1～8份脱脂大豆蛋白粉和30～40份水的比例，称取经步骤一得到的嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水；三、将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至65℃～95℃，然后加入经步骤二称取的乳清粉和脱脂大豆蛋白粉，搅拌，在65℃～85℃的条件下保持25min～60min后，再冷却至40℃～46℃，得到嗜酸乳酸杆菌培养液；四、将经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂加入到经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中，搅拌30min，然后在温度为35℃～37℃的条件下发酵至酸度为280°T～350°T，得到发酵液；五、将经步骤四得到的发酵液搅拌均匀，打入压力喷雾干燥机中，在压力为1MPa～15MPa、排风温度为50℃～66℃的条件下干燥，得到乳酸菌止痢素。
2.根据权利要求1所述的乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于步骤一中按嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基的体积比为1∶49～52称取嗜酸乳酸杆菌菌种与MRS培养基，并将嗜酸乳酸杆菌菌种接种在MRS培养基上，在35.5℃～36.5℃的条件下培养至菌发酵剂中嗜酸乳酸杆菌浓度为5亿cfu/mL～80亿cfu/mL，得到嗜酸乳酸杆菌发酵剂。
3.根据权利要求1或2所述的乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于步骤二中按体积份数比为1份嗜酸乳酸杆菌发酵剂、2～7份乳清粉、2～7份脱脂大豆蛋白粉和32～38份水的比例，称取嗜酸乳酸杆菌发酵剂、乳清粉、脱脂大豆蛋白粉和水。
4.根据权利要求3所述的乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于步骤三中将经步骤二称取的水加入到不锈钢发酵罐中，加热至68℃～92℃。
5.根据权利要求1、2或4所述的乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于步骤三中将乳清粉和脱脂大豆蛋白粉加入到不锈钢发酵罐中，搅拌，在68℃～82℃的条件下保持30min～55min后，再冷却至42℃～45℃。
6.根据权利要求5所述的乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于步骤四中经步骤二称取的嗜酸乳酸杆菌发酵剂在经步骤三得到的嗜酸乳酸杆菌培养液中的发酵条件是：发酵温度为35.5℃～36.5℃，发酵至酸度为290°T～340°T。
7.根据权利要求1、2、4或6所述的乳酸菌止痢素的制备方法，其特征在于步骤五中压力喷雾干燥机的压力为2MPa～13MPa、排风温度为52℃～64℃。
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