CN101815432A - 涉及编码核苷二磷酸激酶(ndk)多肽及其同源物的基因的用于修改植物根构造的方法 - Google Patents

Abstract

本发明描述了尤其可用于改变植物的根构造的分离的多核苷酸和多肽及重组DNA构建体、包含这些重组DNA构建体的组合物(例如植物或种子)，以及利用这些重组DNA构建体的方法。所述重组DNA构建体包含可操作地连接在植物中有功能的启动子的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码可用于改变植物根构造的多肽。

Description

涉及编码核苷二磷酸激酶(NDK)多肽及其同源物的基因的用于修改植物根构造的方法

本专利申请要求提交于2007年8月29日的美国临时申请60/968754的优先权，其全部内容以引用方式并入本文。

发明领域

本发明领域涉及植物育种和遗传学以及具体地讲涉及用于改变植物根构造的重组DNA构建体。

发明背景

在所有(除了非常少的几个之外)自然生态系统中，水和营养物质的可用性限制了植物生长。它们在大多数农业生态系统中限制产量。植物根部起到重要作用，如水和营养物质摄取、在土壤中固定植物以及在根围建立生物相互作用。因此阐明植物根发育和功能的基因调控是农学和生态学中相当受关注的课题。

根系发源于在胚胎形成期间发育的初生根。初生根产生次生根，次生根继而产生三生根。所有次生、三生、四生以及更进一步分生的根均被称为侧根。包括玉米在内的许多植物也能从连续的地下节位(冠根)或地上节位(支柱根)处产生不定根。有三个主要过程影响根系的总体构造。第一个是在初生根分裂组织中的细胞分裂过程，该过程通过加入新生细胞到根中使得根不定生长。第二个是侧根形成过程，该过程增加根系的探索能力。第三个是根毛形成过程，该过程增加初生根和侧根的总表面(Lopez-Bucio等人，Current Opinion in PlantBiology(2003)6：280-287)。在已经分离出的玉米突变体中仅仅缺少根型的一个亚型。已经鉴定了拟南芥的根形态基因突变体如SHORTROOT和SCARECROW，它显示初生根和侧根的发育缺陷(J.E.Malamy，Plant，Cell and Environment(2005)28：67-77)。

已经鉴定了许多特异性影响根发育的玉米突变体(Hochholdinger等人，2004，Annals of Botany 93：359-368)。隐性突变体rtcs和rt1不形成或形成较少的冠根和支柱根，然而初生根和侧根不受影响。在隐性突变体des21中，缺失侧生种子根和根毛。隐性突变体rth1-3缺失根毛。突变体lrt1和rum1在侧根开始产生之前受影响，而突变体slr1和slr2的侧根伸长能力受到削弱。决定根系构造的内源响应途径包括激素、细胞循环调节子和调节基因。水分胁迫和营养物质可用性属于决定根系构造的环境响应途径。

提交于2005年2月14日的美国专利申请2005-57473(美国专利公开公布2005/223429A1，公布于2005年10月6日)涉及使用拟南芥细胞分裂素氧化酶基因改变植物中的细胞分裂素含量并刺激根生长。

美国专利公开6,344,601(公布于2002年2月5日)涉及在植物细胞中低表达或超表达肌动蛋白抑制蛋白(profilin)以改变植物生长习性例如减少根系或根毛系统会使花期推迟。

WO2004/US16432(提交于2004年5月21日(WO2004/106531，公布于2004年12月9日)涉及使用超表达顺式异戊烯转移酶的方法操纵生长速率和/或产量和/或构造。

提交于2004年9月30日的美国专利申请2004/489500(美国专利公开公布2005/059154A1，公布于2005年3月13日)涉及使用在植物中超表达转录因子E2F的方法改变细胞数量、构造和产量。

可利用激活标记来鉴定能影响性状的基因。已经在模型植物拟南芥中使用该方法(Weigel等人，2000，Plant Physiol.122：1003-1013)。

插入转录增强子元件能够显著激活和/或提高附近内源基因的表达。

发明概述

本发明包括：

在一个实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：25比较时具有至少80％的序列同一性或在与SEQ ID NO：23比较时具有至少85％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：21比较时具有至少90％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：33比较时具有至少95％的序列同一性。

在第二实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：25比较时具有至少85％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：23比较时具有至少90％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：21比较时具有至少95％的序列同一性。

在第三实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：25比较时具有至少90％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：23比较时具有至少95％的序列同一性。

在第四实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：25比较时具有至少95％的序列同一性。

在第五实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列，其中所述多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO：21、23、25或33。

在第六实施方案中，分离的多核苷酸，所述分离的多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列，其中所述核酸序列包含SEQ IDNO：20、22、24或32。

在另一个实施方案中，包含任一前述多核苷酸的载体和重组构建体，以及包含所述重组构建体的细胞。

在另一个实施方案中，用任一前述多核苷酸来转化细胞的方法，以及用于生产和再生包含任一前述多核苷酸的转化植物的方法。

在另一个实施方案中，在基因组中包含重组DNA构建体的植物，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，并且其中所述植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物进行比较时表现出改变的根构造。

在另一个实施方案中，在基因组中包含重组DNA构建体的植物，该重组DNA构建体包含：

(a)可操作地连接至少一个调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或

(b)抑制DNA构建体，所述抑制DNA构建体包含至少一个调控元件，所述调控元件可操作地连接至：(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽，并且其中在与未包含所述重组构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，改变植物根构造的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；以及(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；并且任选地，(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(c)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该转基因植物的根构造；以及任选地，(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及任选地，(e)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(d)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

在另一个实施方案中，确定植物农学特性改变的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(c)确定该转基因植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变；以及任选地，(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及任选地，(e)确定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，确定植物农学特性改变的方法，该方法包括(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；并且(d)确定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，确定植物农学特征改变的方法，该方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(c)确定该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变；

以及(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及任选地，(e)确定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，确定植物农学特征改变的方法，该方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体，并且当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(d)测定所述子代植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

在另一个实施方案中，改变植物根构造的方法，该方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体并且在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；以及

任选地，(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且其中该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的农学特性；

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(c)评价与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时该转基因植物的根构造；

以及(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及任选地，(e)评价与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

在另一个实施方案中，评价植物根构造的方法，该方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(d)评价当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

本发明中还包括上述植物的任何子代、上述植物的任何种子以及来自任一上述植物和子代植物的细胞。

生产可作为产品销售的种子的方法，该种子提供改变的根构造，该方法包括任一前述优选的方法，并且还包括从所述子代植物获得种子，其中所述种子在它们的基因组中包含所述重组DNA构建体。

附图以及序列表的说明

根据以下的详细描述和附图以及序列表，可更全面地理解本发明，以下的详细描述和附图以及序列表形成本申请的一部分。

图1示出pHSbarENDs激活标记构建体(SEQ ID NO：1)的图谱，该构建体用于制备拟南芥种群。

图2示出载体pDONR^TM/Zeo(SEQ ID NO：2)的图谱。attP1位点位于核苷酸570至801；attP2位点位于核苷酸2754至2985(互补链)。

图3示出载体pDONR^TM221(SEQ ID NO：3)的图谱。attP1位点位于核苷酸570至801；attP2位点位于核苷酸2754至2985(互补链)。

图4示出载体pBC-yellow(SEQ ID NO：4)的图谱，该载体是用于构建拟南芥表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸11276至11399(互补链)；attR2位点位于核苷酸9695至9819(互补链)。

图5示出PHP27840(SEQ ID NO：5)的图谱，该载体是用于构建大豆表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸7310至7434；attR2位点位于核苷酸8890至9014。

图6示出PHP23236(SEQ ID NO：6)的图谱，该载体是用于构建Gaspe Bay Flint来源的玉米品系的表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸2006至2130；attR2位点位于核苷酸2899至3023。

图7示出PHP10523(SEQ ID NO：7)的图谱，它是存在于农杆菌菌株LBA4404中的质粒DNA。

图8示出PHP23235(SEQ ID NO：8)的图谱，它是用于构建目的载体PHP23236的载体。

图9示出了入门克隆PHP20234(SEQ ID NO：9)的图谱，它是转运PINII终止子的载体。attR2位点位于核苷酸591至747；attL3位点位于核苷酸1100至1195。

图10示出PHP28529(SEQ ID NO：10)的图谱，该载体是用于构建玉米品系表达载体的目的载体。attR3位点位于核苷酸3613至3737；attR4位点位于核苷酸2035至2159。

图11示出了入门克隆PHP28408(SEQ ID NO：11)的图谱，它是转运组成型玉米GOS2启动子的载体。attL4位点位于核苷酸160至255；attR1位点位于核苷酸2301至2447。

图12示出了入门克隆PHP22020(SEQ ID NO：12)的图谱，它是转运玉米根NAS2启动子的载体。attR1位点位于核苷酸31至187；attL4位点位于核苷酸2578至2673。

图13示出PHP29635(SEQ ID NO：13)的图谱，该载体是用于构建Gaspe Bay Flint来源的玉米品系的表达载体的目的载体。attR1位点位于核苷酸40786至40910；attR2位点位于核苷酸41679至41803。

图14示出PIIOXS2a-FRT87(ni)m(SEQ ID NO：56)的图谱，该载体用于构建目的载体PHP29635。

图15A至15K示出以下全长氨基酸序列的多重比对：SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、和37，以及SEQ IDNO：44、45、46、47、48、49和51。完全匹配共有序列的残基显示为暗色。将共有序列显示于每个比对上部。共有残基通过直接取多数决定。

图16示出图15A至15K中示出的NDK同源物的每对氨基酸序列的序列同一性百分比和趋异值图表。

图17是实施例17中用于半水栽玉米生长的培养基。

图18是列出实施例17中与不同硝酸盐浓度对Gaspe Bay Flint衍生的玉米系生长和发育的影响相关的数据的图表。

序列描述以及所附序列表遵循如37C.F.R.§1.821-1.825所列出的关于专利申请中核苷酸和/或氨基酸序列公开的规定。

序列表包含用于核苷酸序列字符的单字母码和用于氨基酸的三字母码，如遵照IUPAC-IUBMB标准所定义的，该标准在Nucleic Acids Res.13：3021-3030(1985)以及在Biochemical J.219(No.2)：345-373(1984)中描述，这两篇文献以引用的方式并入本文。用于核苷酸和氨基酸序列数据的符号和格式遵循在37C.F.R.§1.822中所列出的规定。

SEQ ID NO：1pHSbarENDs

SEQ ID NO：2pDONR^TM/Zeo

SEQ ID NO：3pDONR^TM221

SEQ ID NO：4pBC-yellow

SEQ ID NO：5PHP27840

SEQ ID NO：6PHP23236

SEQ ID NO：7PHP10523

SEQ ID NO：8PHP23235

SEQ ID NO：9PHP20234

SEQ ID NO：10PHP28529

SEQ ID NO：11PHP28408

SEQ ID NO：12PHP22020

SEQ ID NO：13PHP29635

表1列出了本文所述的多肽、包含编码多肽全部或其主要部分的核酸片段的cDNA克隆的命名、以及在所附序列表中使用的对应标识符(SEQ ID NO：)。

表1

核苷二磷酸激酶(NDK)

蛋白质	克隆命名	SEQ ID NO：(核苷酸)	SEQ ID NO：(氨基酸)
				NDK	cest1s.pk013.p8：fis	14	15
NDK	cfp2n.pk070.b22：fis	16	17
				NDK	cdr1f.pk002.a3.f：fis或以下的重叠群：cfp2n.pk069.c16cfp2n.pk069.c16.f	18	19
NDK	lds1c.pk004.f12：fis	20	21
				NDK	ep2c.pk002.f17.f：fis	22	23
NDK	ort1f.pk020.a13：fis	24	25
				NDK	hss1c.pk019.a16：fis	26	27
NDK	sfl1.pk134.d19：fis	28	29
				NDK	egh1c.pk002.l14：fis	30	31

蛋白质	克隆命名	SEQ ID NO：(核苷酸)	SEQ ID NO：(氨基酸)
				NDK	sfl1.pk133.14：fis	32	33
NDK	my.p0031.ccmbo48	34	35
				NDK	p0095.cwsab57ra	36	37
NDK	sfl1.pk126.p10	38	39
				NDK	rlr24.pk0071.e7	40	41
NDK	cfp2n.pk069.c16	42	43

SEQ ID NO：44对应于NCBI GI NO：115465831(水稻)

SEQ ID NO：45对应于NCBI GI No：6435320(豌豆)

SEQ ID NO：46对应于NCBI GI No：15237018(拟南芥)

SEQ ID NO：47对应于NCBI GI No：147864944(葡萄藤)

SEQ ID NO：48对应于NCBI GI No：62870979(菥蓂)

SEQ ID NO：49对应于NCBI GI No：125595441(水稻)

SEQ ID NO：50是拟南芥核苷二磷酸激酶(NDK)(AT4G23900)的核苷酸序列，其中氨基酸序列的核苷酸51-764(终止)代码示于SEQID NO：51，NCBI General Identifier No.11990430)中。

SEQ ID NO：51对应于NCBI GI NO：11990430(AT4G23900)

SEQ ID NO：52是attB1序列。

SEQ ID NO：53是attB2序列。

SEQ ID NO：54是实施例9中的正向引物VC062。

SEQ ID NO：55是实施例9中的反向引物VC063。

SEQ ID NO：56PIIOXS2a-FRT87(ni)m。

SEQ ID NO：57是玉米NAS2启动子。

SEQ ID NO：58是GOS2启动子。

SEQ ID NO：59是泛素启动子。

SEQ ID NO：60是S2A启动子。

SEQ ID NO：61是PINII终止子。

优选实施方案的具体描述

本文中所列出的每篇参考文献的公开内容的全文以引用的方式并入本文。

如本文所用的并在所附的权利要求书中的单数形式“一个”和“所述”包括复数涵义，除非上下文中清楚地另有指明。因此，例如，“一株植物”的涵义包括多株此类植物。“一个细胞”的涵义包括一个或多个细胞及其本领域的技术人员已知的等同物，等等。

术语“根构造”指构成根的不同部分的布置方式。术语“根构造”、“根结构”、“根系”或“根系构造”在这里可互换使用。

一般来讲，植物由胚发育成的第一种根称为初生根。在大多数双子叶植物中，初生根被称为主根。这种主根向下生长并产生分枝根(侧根)。在单子叶植物中，植物的初生根发生分枝，生成须根系。

术语“改变的根构造”指与参照植株或对照植株比较，在其不同发育阶段构成根系的不同部分的改变状况。应当理解，改变的根构造涵盖了一种或多种可测量参数(包括但不限于一个或多个根系部分的直径、长度、数目、角度或表面)的改变，所述根系部分包括但不限于初生根、侧根或分枝根、不定根和根毛，所有这些均在本发明的范围内。这些改变可导致根所占的区域或空间的整体改变。参照植株或对照植株在其基因组中不含重组DNA构建体或异源构建体。

“农学特性”是可测量的参数，包括但不限于绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、耐旱性、氮胁迫耐受性、氮摄取、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长和收获指数。

“氮胁迫耐受性”是植物的特性，指植物在氮限制条件下存活的能力。

植物“提高的氮胁迫耐受性”相对于参照或对照植物进行测量，并意指植物的氮胁迫耐受性在与参照或对照植物进行比较时提高的任何量或量度。

“氮胁迫耐受性植物”是指表现出氮胁迫耐受性的植物。氮胁迫耐受性植物优选地是在氮限制条件下相对于对照植物在至少一种农学特性上表现出提高的植物。

术语“V”阶段是指玉米植物的叶片生长阶段；例如V4＝四片、V5＝五片具有可见叶颈的叶片。叶颈是浅色领状“带”，位于暴露的叶片底部，靠近叶片接触植物茎部的区域。进行叶片计数，开始时计数最底下的、短的、圆顶真叶，最后计数具有可见叶颈的最上面的叶片。

“ndk”、“at-ndk本文可互换使用，指拟南芥位点AT4G23900(SEQID NO：50)。

NDK指AT4G23900(SEQ ID NO：50)编码的蛋白(SEQ ID NO：51)。

“ndk样”指拟南芥“NDK”位点AT4G23900(SEQ ID NO：50)的来自不同物种的核苷酸同源物，如玉米和大豆，并且不受限制的包括任何以下核苷酸序列：SEQ ID NO：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、和42。

“NDK样”指拟南芥“NDK”(SEQ ID NO：51)的来自不同物种的蛋白同源物，如玉米和大豆，并且不受限制的包括任何以下氨基酸序列：SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、和43。

在公开数据库中将拟南芥序列(AT4G23900)称为NDK4，将来自水稻、拟南芥和阿尔卑斯菥蓂、以及葡萄藤(分别是NCBI Gi No：115465831、15237018、62870979、和1477864944)的蛋白称为NDKIII，将来自豌豆、以及水稻(分别是6435320和125595441)的蛋白称为NDKI。不清楚什么决定NDK家族的不同成员的数目，因此该公开的序列通称为NDK或NDK样。所有所述公开NDK、全长NDK样蛋白同源物(SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、和37以及所述拟南芥NDK(SEQ ID NO：51)包含保守组氨酸，具有序列NXXHGSDXX。

“环境条件”指植物生长的条件，例如水的可用性、营养物质(例如氮)的可用性或者病害的存在。

“转基因”指其基因组因异源核酸(如重组DNA构建体)的存在而发生改变的任何细胞、细胞系、愈伤组织、组织、植物部分或植物，包括那些最初的转基因事件以及从最初的转基因事件通过有性杂交或无性生殖而产生的那些。如本文所用的术语“转基因”不涵盖通过常规植物育种方法或通过诸如随机异花受精、非重组病毒感染、非重组细菌转化、非重组转座或自发突变之类的自然发生事件导致的基因组(染色体基因组或染色体外基因组)改变。

“基因组”在用于植物细胞时不仅涵盖存在于细胞核中的染色体DNA，而且还包括存在于细胞的亚细胞组分(如线粒体、质粒)中的细胞器DNA。

“植物”包括整个植株、植物器官、植物组织、种子和植物细胞以及同一植株的子代。植物细胞包括但不限于得自下列物质的细胞：种子、悬浮培养物、胚、分生区域、愈伤组织、叶、根、芽、配子体、孢子体、花粉和小孢子。

“子代”包括植物的任何后续世代。

“转基因”指其基因组因异源核酸(如重组DNA构建体)的存在而发生改变的任何细胞、细胞系、愈伤组织、组织、植物部分或植物，包括那些最初的转基因事件以及从最初的转基因事件通过有性杂交或无性生殖而产生的那些。如本文所用的术语“转基因”不涵盖通过常规植物育种方法或通过诸如随机异花受精、非重组病毒感染、非重组细菌转化、非重组转座或自发突变之类的自然发生事件导致的基因组(染色体基因组或染色体外基因组)改变。

“转基因植物”包括在其基因组内包含异源多核苷酸的植物。优选的是，异源多核苷酸被稳定地整合进基因组中，使得该多核苷酸传递至连续的世代。异源多核苷酸可单独地或作为重组DNA构建体的部分整合进基因组中。

针对序列而言的“异源”意指来自外来物种的序列，或者如果来自相同物种，则指通过蓄意的人为干预而从其天然形式发生了组成和/或基因座的显著改变的序列。

“多核苷酸”、“核酸序列”、“核苷酸序列”或“核酸片段”可互换使用并且是任选含有合成的、非天然的或改变的核苷酸碱基的单链或双链RNA或DNA聚合物。核苷酸(通常以它们的5′-单磷酸形式存在)通过如下它们的单个字母名称来指代：“A”为腺苷酸或脱氧腺苷酸(分别对应RNA或DNA)，“C”表示胞苷酸或脱氧胞苷酸，“G”表示鸟苷酸或脱氧鸟苷酸，“U”表示尿苷酸，“T”表示脱氧胸苷酸，“R”表示嘌呤(A或G)，“Y”表示嘧啶(C或T)，“K”表示G或T，“H”表示A或C或T，“I”表示肌苷，而“N”表示任意核苷酸。

“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白质”在本文中可互换使用，指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于其中一个或多个氨基酸残基是相应的天然存在的氨基酸的人工化学类似物的氨基酸聚合物，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物。术语“多肽”、“肽”、“氨基酸序列”和“蛋白质”还可包括修饰，包括但不限于糖基化、脂质连接、硫酸盐化、谷氨酸残基的γ羧化、羟化和ADP-核糖基化。

“信使RNA(mRNA)”指无内含子并且可通过细胞翻译成蛋白质的RNA。

“cDNA”指与mRNA模板互补并且利用逆转录酶从mRNA模板合成的DNA。cDNA可以是单链的或者可用DNA聚合成酶I的Klenow片段转化成双链形式。

“成熟”蛋白质指经翻译后加工的多肽；即已经去除了存在于初级翻译产物中的任何前肽或原肽的多肽。

“前体”蛋白质指mRNA的翻译初级产物；即具有仍然存在的前肽和原肽。前肽和原肽可以是并且不限于细胞内定位信号。

“分离的”指物质，例如核酸和/或蛋白质，该物质基本上不含在天然存在的环境中通常伴随该物质或与其反应的组分，或者说是该物质被从所述组分移出。分离的多核苷酸可从它们天然存在于其中的宿主细胞纯化。技术人员已知的常规核酸纯化方法可用于获得分离的多核苷酸。该术语也涵盖重组多核苷酸和化学合成的多核苷酸。

“重组体”指例如通过化学合成或者通过用基因工程技术操纵分离的核酸片段来实现的两个原本分离的序列片段的人工组合。“重组体”也包括指已经通过引入异源核酸而进行了修饰的细胞或载体，或源于经这样修饰的细胞的细胞，但不涵盖由天然发生的事件(如自发突变、自然转化/转导/转座)对细胞或载体的改变，例如没有蓄意人为干扰而发生的那些。

“重组DNA构建体”指在自然界中通常不会一起存在的核酸片段的组合。因此，重组DNA构建体可包含源于不同来源的调控序列和编码序列，或源于相同来源但以不同于通常天然存在的方式排列的调控序列和编码序列。

术语“入门克隆”和“入门载体”本文可互换使用。

“调控序列”指位于编码序列的上游(5′非编码序列)、中间或下游(3′非编码序列)，并且影响相关编码序列的转录、RNA加工或稳定性或者翻译的核苷酸序列。调控序列可包括但不限于启动子、翻译前导序列、内含子和多腺苷酸化识别序列。

“启动子”指能够控制另一核酸片段转录的核酸片段。

“在植物中有功能的启动子”指能够控制植物细胞中的转录的启动子，无论其是否来源于植物细胞。

“组织特异性启动子”和“组织优选启动子”可互换使用，并且指主要但非必须专一地在一种组织或器官中表达，而是也可在一种特定细胞中表达的启动子。

“发育调控启动子”指其活性由发育事件决定的启动子。

术语“可操作地连接”指核酸片段联合成单一片段，使得其中一个核酸片段的功能受到另一个核酸片段的调控。例如，在启动子能够调控核酸片段的转录时，该启动子与该核酸片段进行了可操作地连接。

“表达”指功能产物的产生。因此，核酸片段的表达可指核酸片段的转录(如生成mRNA或功能RNA的转录)和/或RNA翻译成前体或成熟蛋白质。

“表型”意指细胞或生物体的可检测的特征。

有关将核酸片段(例如重组DNA构建体)插入细胞内的“导入”意指“转染”或“转化”或“转导”，并且包括指将核酸片段整合进真核或原核细胞中，在该细胞中核酸片段可整合进细胞的基因组(如染色体、质粒、质体或线粒体DNA)内，转变成自主的复制子或瞬时表达(如转染的mRNA)。

“转化细胞”是将核酸片段(如重组DNA构建体)引入其中的任何细胞。

在此所用的“转化”指稳定转化和瞬时转化两者。

“稳定转化”指将核酸片段引入宿主生物体的基因组中，导致基因稳定遗传。一旦稳定转化，核酸片段稳定地整合进宿主生物体和任何连续世代的基因组中。

“瞬时转化”指将核酸片段引入宿主生物体的核中或包含DNA的细胞器中，引起基因表达而没有基因稳定遗传。

“等位基因”是占据染色体上给定位点的基因的几种供选择形式的其中一种。当二倍体植物中一对同源染色体上给定基因座上存在的等位基因相同时，该植物在该基因座处是纯合的。如果二倍体植物中一对同源染色体上给定基因座上存在的等位基因不同，则该植物在该基因座处是杂合的。如果转基因存在于二倍体植物中一对同源染色体中的其中之一上，则该植物在该基因座处是半合子的。

序列比对和同一性百分比可用设计用于检测同源序列的多种比较方法来确定，这些方法包括但不限于

生物信息计算包(

Inc.，Madison，WI)的

程序。除非另外说明，否则本文提供的序列的多重比对用Clustal V比对方法(Higgins和Sharp，1989，CABIOS.5：151-153)采用默认参数(空位罚分＝10，空位长度罚分＝10)执行。用Clustal V方法进行成对比对和蛋白质序列的同一性百分比计算的默认参数为KTUPLE＝1、缺口罚分＝3、窗口(WINDOW)＝5和DIAGONALS SAVED＝5。而对于核酸，这些参数为KTUPLE＝2，空位罚分＝5，窗口＝4和DIAGONALS SAVED＝4。用Clustal V程序比对序列后，可通过查看同一程序中的“序列距离”表来获得“同一性百分比”和“趋异”值。除非另外说明，本文提供的和申明的同一性百分比和趋异度是以该方式计算的。

本文使用的标准重组DNA和分子克隆技术是本领域所熟知的并且在如下文献中有更全面的描述：Sambrook，J.，Fritsch，E.F.和Maniatis，T.，Molecular Cloning：A Laboratory Manual；Cold Spring HarborLaboratory Press：Cold Spring Harbor，1989(下文称为“Sambrook”)。

现在来看优选的实施方案：

优选的实施方案包括分离的多核苷酸和多肽、重组DNA构建体、包含这些重组DNA构建体的组合物(例如植株或种子)以及利用这些重组DNA构建体的方法。

优选的分离的多核苷酸和多肽

本发明包括如下优选的分离的多核苷酸和多肽：

分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含：(i)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；或(ii)(i)的核酸序列的全长互补序列；任一上述分离的多核苷酸可用于本发明的任何重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)。所述多肽优选地是NDK或NDK样蛋白。

分离的多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性。所述多肽优选地是NDK或NDK样蛋白。

分离的多核苷酸，该多核苷酸包含(i)基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42或50进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的核酸序列，或(ii)(i)核酸序列的全长互补序列。任一上述分离的多核苷酸可用于本发明的任何重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)。该分离的多核苷酸编码NDK或NDK样蛋白。

优选的重组DNA构建体和抑制DNA构建体。

在一个方面，本发明包括重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)。

在一个优选的实施方案中，重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(如，在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中该多核苷酸包含(i)编码氨基酸序列的核酸序列，所述氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(ii)(i)核酸序列的全长互补序列。

在另一个优选的实施方案中，重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(如，在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸包含(i)在与SEQ ID NO：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42或50进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的核酸序列，或(ii)(i)核酸序列的全长互补序列。

图15A至15K显示以下全长氨基酸序列的多重比对：SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、和37，以及SEQ IDNO：44、45、46、47、48、49和51。用

生物信息计算包(Madison，WI)的

程序进行序列多重比对。具体地讲，使用Clustal V比对方法(Higgins和Sharp(1989)CABIOS.5：151-153)，多重比对预设参数为空位罚分＝10，空位长度罚分＝10，成对比对预设参数为KTUPLE＝1，空位罚分＝3，窗口＝5以及DIAGONALS SAVED＝5。

图16示出图15A至15K中示出的NDK同源物的每对氨基酸序列的序列同一性百分比和趋异值。

在另一个优选的实施方案中，重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(如，在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码NDK或NDK样蛋白。

在另一方面，本发明包括抑制DNA构建体。

抑制DNA构建体优选包含至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)，该调控序列可操作地连接至：(a)以下序列的全部或部分：(i)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(ii)(a)(i)核酸序列的全长互补序列；或者(b)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样蛋白；或(c)以下序列的全部或部分：(i)基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42或50进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性的核酸序列，或(c)(i)核酸序列的全长互补序列。该抑制DNA构建体优选包含共抑制构建体、反义构建体、病毒抑制构建体、发夹抑制性构建体、茎环抑制性构建体、产生双链RNA的构建体、RNAi构建体或小RNA构建体(如，siRNA构建体或miRNA构建体)。

应当理解(正如本领域技术人员将会理解的)，本发明不仅仅涵盖这些具体的示例性序列。导致给定位点处产生化学上等价的氨基酸但不影响所编码多肽的功能特性的核酸片段中的改变是本领域众所周知的。因此，氨基酸丙氨酸(一种疏水性氨基酸)的密码子可被编码另一个疏水性较弱的残基(例如甘氨酸)或疏水性较强的残基(例如缬氨酸、亮氨酸或异亮氨酸)的密码子取代。类似地，导致一个带负电荷的残基替换为另一个带负电荷的残基(例如，天冬氨酸替代谷氨酸)或者一个带正电荷的残基替换为另一个带正电荷的残基(例如，赖氨酸替换精氨酸)的改变也可预期产生功能上等价的产物。导致多肽分子的N-末端和C-末端部分改变的核苷酸变化也将预计不会改变多肽的活性。所提出的修饰中的每一种均完全在本领域常规技术内，如测定所编码的产物的生物活性的保留。

“抑制DNA构建体”是在转化或稳定整合进植物基因组时，导致该植物中的靶基因“沉默”的重组DNA构建体。对该植物来说，该靶基因可以是内源性的或是转基因的。如本文针对靶基因所使用的，“沉默”通常指在由靶基因表达的mRNA或蛋白质/酶的水平上的抑制，和/或在酶活性或蛋白质功能性的水平上的抑制。术语“抑制”包括降低、减少、下调、减弱、抑制、消除或阻止。“沉默”或“基因沉默”不确定机理并且包括(并且不限于)反义、共抑制、病毒抑制、发夹抑制、茎环抑制、基于RNAi的方法以及基于小RNAi的方法。

抑制DNA构建体可包含源自所关注的靶基因的区域并且可包含所关注的靶基因的有义链(或反义链)的核酸序列的全部或部分。取决于所要利用的方法，该区域可与所关注基因的有义链(或反义链)的全部或部分100％相同或者有少于100％的同一性(如，有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的同一性)。

抑制DNA构建体是本领域所熟知的，一旦选定所关注的靶基因就很容易构建，并且包括但不限于共抑制构建体、反义构建体、病毒抑制构建体、发夹抑制性构建体、茎环抑制性构建体、产生双链RNA的构建体，以及更通常的是，RNAi(RNA干扰)构建体和小RNA构建体，例如siRNA(短干扰RNA)构建体和miRNA(微RNA)构建体。

“反义抑制”指产生能够抑制靶蛋白表达的反义RNA转录物。

“反义RNA”指与靶初级转录物或mRNA的全部或部分互补，并阻断分离的靶核酸片段表达的RNA转录物(美国专利号：5,107,065)。反义RNA可与特定基因转录物的任何部分，即5′非编码序列、3′非编码序列、内含子或编码序列互补。

“共抑制”指产生能够抑制靶蛋白表达的有义RNA转录物。“有义”RNA指包括mRNA和在细胞内或体外可被翻译成蛋白质的RNA在内的RNA转录物。此前，已通过着眼于以有义方向过表达与内源mRNA具有同源性的核酸序列(其导致与过表达的序列具有同源性的所有RNA减少)设计出了植物中的共抑制构建体(参见Vaucheret等人，1998，Plant J.，16：651-659；以及Gura，2000Nature 404：804-808)。

另一种变型描述了将植物病毒序列用于引导对近端mRNA编码序列的抑制(于1998年8月20日公开的PCT专利公开WO 98/36083)。

此前描述的是“发夹”结构的利用，该结构以互补方向整合mRNA编码序列的全部或部分，导致已表达的RNA形成潜在的“茎环”结构(于1999年10月21日公开的PCT专利公开WO99/53050)。在这种情况下，茎由对应相对于启动子以有义或反义方向插入的相关基因的多核苷酸形成，并且环由一些相关基因的多核苷酸形成，在构建体中该多核苷酸不具有互补序列。这增加了获得的转基因植物中的共抑制或沉默频率。关于发夹抑制的综述，参见Wesley，S.V.等人，2003，Methods inMolecular Biology，Plant Functional Genomics：Methods and Protocols236：273-286。

其中茎由至少30个来自待抑制基因的核苷酸形成而环由任意的核苷酸序列形成的构建体也已经有效地用于抑制(于1999年12月2日公开的PCT专利公开WO 99/61632)。

使用聚-T和聚-A序列产生茎环结构中的茎已经有所描述(于2002年1月3日公开的PCT专利公开WO 02/00894)。

然而另一种变型涉及使用合成的重复序列来促进茎环结构中的茎的形成。用这种重组DNA片段产生的转基因生物体已经显示由形成茎环结构的核苷酸片段编码的蛋白质的水平降低，如于2002年1月3日公开的PCT专利公开WO 02/00904中所述。

RNA干扰是指由短干扰性RNA(siRNA)介导的动物中序列特异性转录后基因沉默的过程(Fire等人，Nature 391：806 1998)。在植物中的对应过程通常称为转录后基因沉默(PTGS)或RNA沉默，并且在真菌中也称为阻抑作用(quelling)。据信转录后基因沉默过程是用于防止外来基因表达的进化保守性细胞防御机制，并且通常由不同植物区系和门所共有(Fire等人，Trends Genet.15：358 1999)。这种防止外来基因表达的保护作用可能是通过特异性破坏病毒基因组RNA的同源单链RNA的细胞反应，响应源自病毒感染或源自转座因子随机整合到宿主基因组内的双链RNA(dsRNA)的生成而进化而来。dsRNA在细胞中的存在通过还没有完全表征的机制引发了RNAi反应。

细胞中长dsRNA的存在刺激了称为dicer的核糖核酸酶III的活性。Dicer涉及使dsRNA加工成称为短干扰RNA(siRNA)的短dsRNA片段(Berstein等人，Nature 409：3632001)。源自dicer活性的短干扰RNA的长度通常是约21至约23个核苷酸，并且包含约19个碱基对的双链体(Elbashir等人，Genes Dev.15：188，2001)。Dicer还涉及从保守结构的前体RNA上切下21个和22个核苷酸的小时序RNA(stRNA)，该小时序RNA参与翻译控制(Hutvagner等人，2001，Science 293：834)。RNAi响应还涉及内切核酸酶复合物，通常称为RNA诱导沉默复合物(RISC)，其介导具有与siRNA双链体的反义链互补的序列的单链RNA的裂解。靶RNA的裂解在与siRNA双链体的反义链互补的区域中间发生(Elbashir等人，Genes Dev.15：188，2001)。此外，RNA干扰还涉及小RNA(如miRNA)介导的基因沉默，可推定是通过调控染色质结构并由此防止靶基因序列转录的细胞机制(参见(例如)Allshire，Science 297：1818-1819 2002；Volpe等人，Science 297：1833-1837 2002；Jenuwein，Science 297：2215-2218 2002；和Hall等人，Science 297：2232-2237 2002)。这样，本发明的miRNA分子可用于通过与RNA转录物相互作用或者作为另一种选择通过与特定基因序列相互作用来介导基因沉默，其中这样的相互作用导致在转录或转录后水平上的基因沉默。

已经在多种系统中研究了RNAi。Fire等人(Nature 391：806，1998)首次在秀丽隐杆线虫(C.elegans)中观察到RNAi。Wianny和Goetz(Nature Cell Biol.2：70，1999)描述了在小鼠胚胎中由dsRNA介导的RNAi。Hammond等人(Nature 404：293，2000)描述了在用dsRNA转染的果蝇(Drosophila)细胞中的RNAi。Elbashir等人(Nature 411：494 2001)描述了通过将合成的21-核苷酸RNA的双链体引入包括人胚肾和HeLa细胞在内的培养的哺乳动物细胞中而诱导的RNAi。

小RNA在控制基因表达中起重要作用。很多发育过程(包括开花)的调控是由小RNA控制的。现在有可能通过使用在植物中产生小RNA的转基因构建体来以工程手段改变植物基因的基因表达。

小RNA似乎是通过与互补RNA或DNA靶序列碱基配对来行使功能的。当与RNA结合时，小RNA或者引发靶序列的RNA裂解或者引发翻译抑制。当与DNA靶序列结合时，据信小RNA可介导靶序列的DNA甲基化。无论具体机制是什么，这些事件的后果是基因表达受到抑制。

据认为，小RNA和它们的RNA靶标之间的序列互补性有助于确定采用了哪种机制(RNA裂解或翻译抑制)。据信，优选与它们的靶标互补的siRNA通过RNA裂解起作用。一些miRNA与它们的靶基因具有完全或几乎完全的互补性，并且对于至少一些这样的miRNA，已经验证了RNA裂解。其他miRNA与它们的靶标具有若干错配，并且在翻译水平上明显抑制了它们的靶标。同样，无需坚持特定的作用机理，出现了这样一种一般规律：完全或几乎完全的互补性引起RNA裂解，而当miRNA/靶标双链体含有许多错配时倾向于翻译抑制。对于此规律的一个明显例外是植物中微RNA 172(miR172)。miR172的其中一个靶标是APETALA2(AP2)，尽管miR172与AP2具有几乎完全的互补性，但其表现出引起AP2的翻译抑制而不是引起RNA裂解。

微RNA(miRNA)是长度为约19至约24个核苷酸(nt)的已经在动物和植物中鉴定出的非编码RNA(Lagos-Quintana等人，Science294：853-858 2001，Lagos-Quintana等人，Curr.Biol.12：735-739 2002；Lau等人，Science 294：858-862，2001；Lee和Ambros，Science 294：862-864，2001；Llave等人，Plant Cell 14：1605-1619，2002；Mourelatos等人，Genes.Dev.16：720-728，2002；Park等人，Curr.Biol.12：1484-1495，2002；Reinhart等人，Genes.偏差(Dev.)16：1616-1626，2002)。它们是由大小为大约70至200nt的较长的前体转录物加工生成的，并且这些前体转录物能够形成稳定的发夹结构。在动物中，涉及加工miRNA前体的酶称为Dicer，这是一种核糖核酸酶III样蛋白(Grishok等人，Cell 106：23-34 2001；Hutvagner等人，Science 293：834-838 2001；Ketting等人，Genes.偏差(Dev.)15：2654-2659，2001)。植物也具有Dicer样酶，即DCL1(以前称为CARPEL FACTORY/SHORTINTEGUMENTS1/SUSPENSOR1)，并且最近有证据表明，其像Dicer一样，也涉及发夹前体的加工以产生成熟miRNA(Park等人，Curr.Biol.12：1484-1495，2002；Reinhart等人，Genes.偏差(Dev.)16：1616-1626，2002)。此外，最近的研究已经清楚地表明，至少某些miRNA发夹前体最初是作为较长的聚腺苷酸化转录物存在，并且在单个转录物中可存在几种不同的miRNA以及相关发夹(Lagos-Quintana等人，Science294：853-858 2001；Lee等人，EMBO J 21：4663-4670 2002)。最近的研究还测定了从dsRNA产物的miRNA链选择，所述dsRNA产物是通过DICER加工发夹而产生的(Schwartz等人，2003，Cell 115：199-208)。看起来，经加工的dsRNA的两端的稳定性(即G∶C与A∶U的含量比，和/或错配)影响链选择，具有低稳定性的末端更容易因解旋酶活性而解旋。低稳定性末端的5′末端链被整合至RISC复合物内，而另一条链被降解。

微RNA看起来通过与位于由这些基因产生的转录物中的互补序列结合来调控靶基因。就lin-4和let-7而言，靶位点位于靶mRNA的3′非翻译区中(Lee等人，Cell 75：843-854，1993；Wightman等人，Cell75：855-862，1993；Reinhart等人，Nature 403：901-906，2000；Slack等人，Mol.Cell 5：659-669 2000)，并且在lin-4和let-7miRNA与其靶位点之间有几个错配。lin-4或let-7miRNA的结合看起来引起了由靶mRNA编码的蛋白质的稳态水平下调，而不影响转录物自身(Olsen和Ambros，Dev.Biol.216：671-680，1999)。另一方面，最近有证据表明，在某些情况下，miRNA可引起靶转录物在靶位点内特异性RNA裂解，并且该裂解步骤看起来需要miRNA与靶转录物之间具有100％的互补性(Hutvagner和Zamore，Science 297：2056-2060 2002；Llave等人，Plant Cell 14：1605-1619 2002)。看起来有可能miRNA可进入至少两条靶基因调控途径：当靶互补性＜100％时，蛋白下调，当靶互补性是100％时，RNA裂解。进入RNA裂解途径的微RNA与在动物中RNA干扰(RNAi)期间以及在植物中转录后基因沉默(PTGS)期间产生的21-25nt短干扰RNA(siRNA)类似(Hamilton和Baulcombe1999；Hammond等人，2000；Zamore等人，2000；Elbashir等人，2001)，并且可能整合进与在RNAi情况中观察到的复合物类似或相同的RNA-诱导的沉默复合物(RISC)内。

用生物信息学鉴定miRNA的靶标在动物中没有成功，这可能是因为动物miRNA与它们的靶标具有低水平的互补性。另一方面，生物信息学方法已经成功地用于预测植物miRNA的靶标(Llave等人，PlantCell 14：1605-1619 2002；Park等人，Curr.Biol.12：1484-1495 2002；Rhoades等人，Cell 110：513-520 2002)，因此，看起来植物miRNA与它们的推定靶标的整体互补性高于动物miRNA。植物miRNA的这些预测靶标中的大部分编码涉及植物发育模式或细胞分化的转录因子家族的成员。

本发明的重组DNA构建体(包括抑制DNA构建体)优选包含至少一种调控序列。

优选的调控序列是启动子。

多种启动子可用于本发明的重组DNA构建体(及抑制DNA构建体)中。可根据所需结果来选择启动子，并且可包括用于在宿主生物体中表达的组成型启动子、组织特异性启动子、细胞特异性启动子、诱导型启动子或其他启动子。

虽然候选基因当通过组成型启动子驱动表达时可预测其效应，但候选基因在35S或UBI启动子控制下的高水平、组成型表达可具有多重效应。

使用组织特异表达和/或胁迫特异表达可消除不需要的效应但保留改变根构造的能力。在拟南芥中已经观察到了该效应(Kasuga等人(1999)Nature Biotechnol.17：287-291)。

适用于植物宿主细胞的组成型启动子包括例如Rsyn7启动子的核心启动子和在WO 99/43838和美国专利6,072,050中公开的其他组成型启动子；CaMV 35S核心启动子(Odell等人，Nature 313：810-812(1985))；水稻肌动蛋白启动子(McElroy等人，Plant Cell 2：163-171(1990))；泛素启动子(UBI)(Christensen等人，Plant Mol.Biol.12：619-632(1989)和Christensen等人，Plant Mol.Biol.18：675-689(1992))；pEMU(Last等人，Theor.Appl.Genet.81：581-588(1991))；MAS(Velten等人，EMBO J.3：2723-2730(1984))；ALS启动子(美国专利公开5,659,026)、玉米GOS2启动子(WO0020571A2，公布于2000年4月1日)等。其他组成型启动子包括例如在美国专利5,608,149、5,608,144、5,604,121、5,569,597、5,466,785、5,399,680、5,268,463、5,608,142和6,177,611中公开的那些启动子。

在选择启动子用于本发明方法时，可能有利的是使用组织特异性启动子或发育调控启动子。

优选的组织特异性启动子或发育调控启动子是这样的DNA序列，该序列调控DNA序列选择性地在对雄穗发育、结籽或两者重要的植物细胞/组织中表达，并限制这种DNA序列只在植物的雄穗发育或种子成熟期间表达。任何引起所需时空表达的可鉴定启动子均可用于本发明的方法中。

种子或胚特异性的并且可用于本发明的启动子包括大豆Kunitz胰蛋白酶抑制剂(Kti3，Jofuku和Goldberg，Plant Cell 1：1079-1093(1989))、马铃薯块茎特异蛋白(patatin)(马铃薯块茎)(Rocha-Sosa，M.等人，1989，EMBO J.8：23-29)、convicilin、豌豆球蛋白和豆球蛋白(豌豆子叶)(Rerie，W.G.等人，1991，Mol.Gen.Genet.259：149-157；Newbigin，E.J.等人，1990，Planta 180：461-470；Higgins，T.J.V.等人，1988，Plant.Mol.Biol.11：683-695)、玉米蛋白(玉米胚乳)(Schemthaner，J.P.等人，1988，EMBO J.7：1249-1255)、菜豆蛋白(菜豆子叶)(Segupta-Gopalan，C.等人，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.82：3320-3324)、植物凝集素(菜豆子叶)(Voelker，T.等人，1987，EMBO J.6：3571-3577)、B-伴球蛋白和大豆球蛋白(大豆子叶)(Chen，Z-L等人，1988，EMBO J.7：297-302)、谷蛋白(水稻胚乳)、大麦醇溶蛋白(大麦胚乳)(Marris，C.等人，1988，Plant Mol.Biol.10：359-366)、麦谷蛋白和麦醇溶蛋白(小麦胚乳)(Colot，V.等人，1987，EMBO J.6：3559-3564)和甘薯贮藏蛋白(sporamin)(甘薯块根)(Hattori，T.等人，1990，Plant Mol.Biol.14：595-604)。可操作地连接至嵌合基因构建体异源编码区的种子特异性基因的启动子在转基因植物中保持它们的时空表达模式。这样的实施例包括在拟南芥属和甘蓝型油菜(Brassica napus)种子中表达脑啡肽的拟南芥2S种子储藏蛋白基因启动子(Vanderkerckhove等人，Bio/Technology 7：L929-932(1989))、表达荧光素酶的菜豆凝集素和β-菜豆蛋白启动子(Riggs等人，Plant Sci.63：47-57(1989))，以及表达氯霉素乙酰转移酶的小麦谷蛋白启动子(Colot等人，EMBO J 6：3559-3564(1987))。

可诱导启动子响应内源性或外源性刺激的存在，例如通过化合物(化学诱导剂)，或响应环境、激素、化学信号和/或发育信号而选择性表达可操作地连接的DNA序列。可诱导的或受调控的启动子包括例如受光、热、胁迫、水涝或干旱、植物激素、创伤或诸如乙醇、茉莉酮酸酯、水杨酸或安全剂之类的化学品调控的启动子。

优选的启动子包括如下启动子：1)胁迫诱导型RD29A启动子(Kasuga等人，1999，Nature Biotechnol.17：287-91)；2)大麦启动子B22E；B22E的表达是发育中的玉米籽粒中的柄所特异性的(“Primary Structure of a Novel Barley Gene Differentially Expressed inImmature Aleurone Layers(在未成熟糊粉层中差异表达的新大麦基因的一级结构)”。Klemsdal，S.S.等人，Mol.Gen.Genet.228(1/2)：9-16(1991))；以及3)玉米启动子Zag2(“Identification and molecularcharacterization of ZAG1，the maize homolog of the Arabidopsis floralhomeotic gene AGAMOUS(ZAG1-拟南芥花同源异形基因AGAMOUS的玉米同系物的鉴定和分子表征)”，Schmidt，R.J.等人，Plant Cell 5(7)：729-737(1993))。“Structural characterization，chromosomallocalization and phylogenetic evaluation of two pairs of AGAMOUS-likeMADS-box genes from maize(两对来自玉米的AGAMOUS样MADS-box基因的结构表征、染色体定位及系统发育评价)”，Theissen等人，Gene 156(2)：155-166(1995)；NCBI GenBank登录号X80206))。Zag2转录物可在授粉前5天至授粉后(DAP)7至8天被检测到，并且引导Ciml在发育中的雌花序心皮中表达，Ciml对发育中的玉米籽粒的籽仁而言是特异性的。Ciml转录物在授粉前4至5天至授粉后6至8天被检测到。其他可用的启动子包括可源自其表达与发育中的雌小花母系相关的基因的任何启动子。

用于在植物中调控本发明的核苷酸序列表达的其他优选启动子是维管元件特异性启动子或茎优选启动子。这种茎优选启动子包括苜蓿S2A启动子(GenBank登录号：EF030816；Abrahams等人，Plant Mol.Biol.27：513-528(1995))和S2B启动子(GenBank登录号：EF030817)等等，这些文献以引用方式并入本文。

启动子可整个源于天然基因，或者由源于天然存在的不同启动子的不同元件构成，或者甚至包含合成的DNA片段。本领域内的技术人员应当理解，不同的启动子可在不同的组织或细胞类型中，或者在不同的发育阶段，或者响应不同的环境条件而引导基因的表达。还应认识到，由于在大多数情况下还不能完全确定调控序列的确切范围，一些变型的DNA片段可能具有相同的启动子活性。在多数情况下引起基因在大多数细胞型中表达的启动子通常称为“组成型启动子”。目前不断在发现可用于植物细胞中的不同类型的新启动子；在Okamuro，J.K.和Goldberg，R.B.，Biochemistry of Plants 15：1-82(1989)的汇编中可找到许多实例。(将其与其他组成型启动子描述放在一起。)

优选的启动子可包括：RIP2、mLIP15、ZmCOR1、Rab17、CaMV35S、RD29A、B22E、Zag2、SAM合成酶启动子、泛素启动子(SEQ IDNO：61)、CaMV 19S、nos、Adh、蔗糖合成酶启动子、R-等位基因启动子、根细胞启动子、维管组织特异性启动子S2A(Genbank登录号EF030816；SEQ ID NO：62)和S2B(Genbank登录号EF030817)及来自6260玉米的组成型启动子GOS2(SEQ ID NO：60)。其他优选的启动子包括根优选的启动子，例如玉米NAS2启动子(SEQ ID NO：59)、玉米Cyclo启动子(US 2006/0156439，公开于2006年7月13日)、玉米ROOTMET2启动子(WO05063998，公开于2005年7月14日)、CR1BIO启动子(WO06055487，公开于2006年5月26日)、CRWAQ81(WO05035770，公开于2005年4月21日)和玉米ZRP2.47启动子(NCBI保藏号：U38790，gi：1063664)。

核苷酸序列的“主要部分”包含的核苷酸序列足以提供其包含的启动子的推定鉴定。核苷酸序列可由本领域技术人员来人工评估，或使用基于计算机的序列比较和鉴定工具进行评估，所述工具使用算法如BLAST(Basic Local Alignment Search Tool；Altschul等人(1993)J.Mol.Biol.215：403-410)。一般来讲，为了推定鉴定启动子核酸序列是否与已知启动子同源，包含三十或更多个邻接核苷酸的序列是必需的。具有如本文报道序列的有益效果，技术人员现在可使用全部公布序列或它们的主要部分用于本领域技术人员已知的目的。因此，本发明包括在附随序列表中报道的完全序列，以及那些上述序列的主要部分。

本发明的重组DNA构建体(及抑制DNA构建体)也可包括其他调控序列，包括但不限于翻译前导序列、内含子和多腺苷酸化识别序列。在本发明的另一个优选的实施方案中，本发明的重组DNA构建体还包括增强子或沉默子。

内含子序列可加入到至部分编码序列的5’非翻译区或编码序列以增加积聚在胞浆中的成熟信息的量。已经显示，在植物和动物两者的表达构建体的转录单位中包含可剪接内含子可使基因表达在mRNA和蛋白质水平上均增强高达1000倍。参见Buchman和Berg，Mol.Cell Biol.8：4395-4405(1988)；Callis等人，Genes Dev.1：1183-1200(1987)。这种内含子对基因表达的增强通常在将其设置接近转录单位的5’端时为最大。玉米内含子Adh1-S内含子1、2和6、Bronze-1内含子的使用是本领域已知的。通常参见The Maize Handbook，第116章，Freeling和Walbot(编辑)，Springer，纽约(1994)。

如果期望进行多肽表达，则通常希望在多核苷酸编码区的3′-端处包含有多腺苷酸化区。该多腺苷酸化区可源自天然基因，源自多种其他植物基因或源自T-DNA。要加入的3′端序列可源自(例如)胭脂碱合成酶或章鱼碱合成酶基因，或作为选择源自另外的植物基因，或较不优选的是源自任何其他真核基因。

“翻译前导序列”指位于基因启动子序列和编码序列之间的DNA序列。翻译前导序列存在于翻译起始序列的经完全加工后的mRNA上游。翻译前导序列可影响mRNA的初级转录过程、mRNA稳定性或翻译效率。翻译前导序列的实例已经有所描述(Turner，R.和Foster，G.Molecular Biotechnology 3：225(1995))。

在本发明的另一个优选的实施方案中，本发明的重组DNA构建体还包括增强子或沉默子。

任何植物均可选择用来鉴定将用于产生本发明重组DNA构建体和抑制DNA构建体的调控序列和基因。适用于分离基因和调控序列的靶植物的实例应该包括但不限于苜蓿、苹果、杏、拟南芥属植物、朝鲜蓟、芝麻菜、芦笋、鳄梨、香蕉、大麦、豆类、甜菜、黑莓、蓝莓、椰菜、抱子甘蓝、卷心菜、低芥酸菜籽、香瓜、胡萝卜、木薯、蓖麻、花椰菜、芹菜、樱桃、菊苣、芫荽、柑桔类、克莱门氏小柑橘类、三叶草、椰子、咖啡、玉米、棉花、酸果蔓、黄瓜、花旗松、茄子、菊苣、茅菜、桉树、茴香、无花果、大蒜、葫芦、葡萄、柚子树、白兰瓜、豆薯、猕猴桃、生菜、韭葱、柠檬、莱檬、火炬松、亚麻子、芒果、甜瓜、蘑菇、油桃、坚果、燕麦、油棕、油菜、秋葵、橄榄树、洋葱、橙、观赏植物、棕榈、番木瓜树、欧芹、欧洲防风草、豌豆、桃树、花生、梨树、胡椒、柿树、松树、菠萝、大蕉、李树、石榴树、白杨、马铃薯、南瓜、温柏、辐射松、红菊苣、萝卜、油菜、树莓、水稻、黑麦、高粱、南方松、大豆、菠菜、南瓜、草莓、甜菜、甘蔗、向日葵、甘薯、枫香树、柑橘、茶、烟草、蕃茄、黑小麦、草皮草、芜菁、葡萄树、西瓜、小麦、薯蓣和西葫芦。用于鉴定调控序列的特别优选的植物是拟南芥属植物、玉米、小麦、大豆和棉花。

优选的组合物

本发明的优选组合物是其基因组中包含本发明的任何重组DNA构建体(包括任何抑制DNA构建体)(例如上面所讨论的那些优选构建体)的植物。优选的组合物也包括任何植物的子代，以及获取自植物或其子代的任何种子，其中所述子代或种子在基因组中包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)。子代包括通过植物的自花授粉或异型杂交而获得的连续世代。子代也包括杂交种和近交系。

优选地，在杂交种子繁殖的农作物中，成熟的转基因植物可自花授粉而产生纯合的近交系植物。该近交系植物产生含有新引入的重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的种子。这些种子可生长而产生将会表现出改变的根(或植物)构造，或者可用于育种程序以产生杂交种子，这些杂交种子可生长而产生将会表现出改变的根(或植物)构造的植物。优选地，种子是玉米。

优选地，植物是单子叶植物或双子叶植物，更优选地，是玉米或大豆植物，甚至更优选的是玉米植物，例如玉米杂交种植物或玉米近交系植物。植物还可以是向日葵、高梁、蓖麻、葡萄、低芥酸菜籽、小麦、苜蓿、棉花、水稻、大麦或小米。

优选地，重组DNA构建体稳定地整合进植物的基因组中。

尤其优选的实施方案包括但不限于如下优选的实施方案：

1.在基因组中包含重组DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物进行比较时表现出改变的根构造。优选地，在与该对照植物比较时，该植物还表现出至少一种农学特性的改变。

2.植物(优选地玉米或大豆植物)，所述植物在其基因组中包含：

重组DNA构建体，所述重组DNA构建体包含：

(a)可操作地连接至少一个调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或

(b)抑制DNA构建体，所述抑制DNA构建体包含至少一个调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽，并且其中在与未包含所述重组构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

3.在基因组中包含重组DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码NDK或NDK样蛋白，并且其中在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时，所述植物表现出改变的根构造。优选地，该植物还表现出至少一种农学特性的改变。

优选地，该NDK或NDK样蛋白来自拟南芥(Arabidopsisthaliana)、玉米(Zea mays)、大豆(Glycine max)、烟豆(Glycinetabacina)、野大豆(Glycine soja)和短绒野大豆(Glycinetomentella)。

4.在基因组中包含抑制DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该抑制DNA构建体包含至少一个可操作地连接至源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域的调控元件，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样蛋白，并且其中在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

5.在基因组中包含抑制DNA构建体的植物(优选玉米或大豆植物)，该抑制DNA构建体包含至少一个可操作地连接至以下序列的全部或部分的调控元件：(a)编码多肽的核酸序列，在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(b)(a)核酸序列的全长互补序列，并且其中在与未包含所述重组构建体的对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的改变。

6.上述优选实施方案1-5中的植物的任何子代、上述优选实施方案1-5中的植物的任何种子、上述优选实施方案1-5中的植物的子代的任何种子以及来自上述优选实施方案1-5中的植物以及它们的子代的细胞。

在上述优选的实施方案1-6或本发明的任何其他实施方案中的任一项中，重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)优选包含至少一个在植物中有功能的启动子作为优选的调控序列。

在上述优选的实施方案1-6或本发明的任何其他实施方案中的任一项中，至少一种农学特性的改变是增加或减少，优选增加。

在任一前述的优选实施方案1至6或本发明的任何其他实施方案中，至少一种农学特性优选选自：绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、抗涝性、氮摄取、氮胁迫耐受性、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长以及收获指数；产量、绿度、生物量和根倒状是尤其优选进行改变的农学特性(优选增加)。

在任一前述的优选实施方案1至6或本发明的任何其他实施方案中，在与对照植物比较时，植物优选表现出至少一种与环境条件例如水和营养物质的可用性无关的农学特性的改变。

本领域的普通技术人员熟悉确定植物根构造改变的规程。例如，可检测分析转基因玉米植物的根构造在幼苗期、花期或成熟期的改变。根构造的改变可以通过统计温室培育的植物顶部第3或第4节的节根数目或根带的宽度来确定。“根带”指成熟期植物在花盆底部的根丛宽度。植物根构造变化的其他量度包括但不限于侧根的数量、节根的平均根直径、侧根的平均根直径、根毛的数量和长度。侧根分枝的程度(如侧根数量、侧根长度)可通过这样确定：从完整的根系进行二次取样，将样本用平面扫描器或数码相机成像并用WinRHIZO^TM软件(Regent Instruments Inc.)分析。

对提取的有关根表型的数据进行统计分析(通常为t检验)，以将转基因根与非转基因姊妹株植株的根进行比较。在多个事件和/或构建体涉及该分析的情况下，还可以使用单因素方差分析。

下面的实施例描述了一些用于检测根构造改变的代表性规程和技术。

也可通过在田间测试中，在相同条件下比较植物与对照或参照植物提高产量的能力，评估植物根构造的改变。

也可通过在田间测试中比较植物在胁迫条件下(例如营养物质过剩或受限、水过剩或受限、存在病害)保持基本产量(优选地至少75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％产量)的能力，与非胁迫条件下的对照或参照植物的产量，评估根构造改变。

根构造的改变可以通过确定转基因植物与参照植物或对照植物比较的抗根倒伏性来测量。

在评估或测量其中利用了对照或参照植物的本发明任何实施方案(如，如本文描述的组合物或方法)中的转基因植物的农学特性或表型时，本领域的普通技术人员将很容易认识到要利用的合适对照或参照植物。例如，通过如下非限制性示例来说明：

1.转化植物的子代，该植物对于重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)来说是半合子的，使得该子代分离成包含或不包含该DNA构建体(或抑制DNA构建体)的植株：包含该重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的子代将通常相对于未包含该重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的子代来进行测量(即，未包含该重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的子代是对照或参照植株)。

2.重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)基因渗入至近交系中，例如在玉米中，或基因渗入进变体中，例如在大豆中：基因渗入品系将通常相对于亲本近交系或变种品系进行测量(即，亲本近交系或变种品系是对照或参照植物)。

3.双杂交系，其中第一杂交系由两个亲本近交系产生，而第二杂交系由相同的两个亲本近交系产生，不同的是其中一个亲本近交系含有重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)：第二杂交系通常将相对于第一杂交系进行测量(即亲本近交系或变种品系为对照植物或参照植物)。

4.包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的植株：该植株可以相对于这样的对照植株进行评估或测量，该对照植株不包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)，但具有与该植株相当的遗传背景(例如，与包含重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)的植株相比较，核遗传物质具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性)。存在许多可用于分析、比较和表征植物遗传背景的基于实验室的技术；其中这些技术是同工酶电泳、限制性片段长度多态性(RFLP)、随机扩增多态性DNA(RAPD)、任意引物聚合成酶链反应(AP-PCR)、DNA扩增指纹(DAF)、序列特异扩增区域(SCAR)、扩增片段长度多态性

和也称为微卫星的简单序列重复(SSR)。

此外，本领域的普通技术人员将容易认识到，评估或测量转基因植物的农学特性或表型时合适的对照或参照植物将不包括先前已经针对所需的农学特性或表型，通过诱变或转化而选择的植物。

优选的方法

优选的方法包括但不限于用于改变植物根构造的方法、用于评价植物根构造改变的方法、用于改变植物农学特性的方法、用于测定植物农学特性改变的方法以及用于产生种子的方法。优选地，植物是单子叶植物或双子叶植物，更优选地，是玉米或大豆植物，甚至更优选地，是玉米植物。植物还可以是向日葵、高梁、蓖麻、低芥酸菜籽、小麦、苜蓿、棉花、水稻、大麦或小米。种子优选的是玉米或大豆种子，更优选的是玉米种子，并且甚至更优选的是玉米杂交种子或玉米近交系种子。

特别优选的方法包括但不限于如下方法：

改变植物根构造的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中该多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；以及(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。所述方法可进一步包括(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

改变植物根构造的方法，该方法包括：(a)将包含至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的抑制DNA构建体导入可再生植物细胞，该调控序列可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。所述方法可进一步包括(c)获得源自该转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体并且在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；

评价植物根构造改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(c)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该转基因植物的根构造；该方法还可包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(e)评价与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

评价植物根构造改变的方法，所述方法包括：(a)将包含至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的抑制DNA构建体导入可再生植物细胞，该调控序列可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或者(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(c)评价该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时改变的根构造。该方法可另外包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(e)评价该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时改变的根构造。

评价植物根构造改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(d)评价该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时改变的根构造。

评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，当与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或者(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(d)评价与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时该子代植物的根构造。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于ClustalV比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及(c)确定该转基因植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。该方法还可包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；以及(e)确定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该抑制DNA构建体包含至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)，所述调控序列可操作地连接以下序列的全部或部分：(i)该核酸序列编码多肽，在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(ii)(i)核酸序列的全长互补序列；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(c)确定该转基因植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。该方法可另外包括：(d)获得源自该转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(e)确定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于ClustalV比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该重组DNA构建体；并且(d)确定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。测定植物中农学特性改变的方法可进一步包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，该方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，该抑制DNA构建体包含至少一个调控序列(优选在植物中有功能的启动子)，所述调控序列可操作地连接以下序列的全部或部分：(i)该核酸序列编码多肽，在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51比较时，基于Clustal V比对方法，该多肽的氨基酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，或(ii)(i)核酸序列的全长互补序列；

(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中该子代植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(d)确定该子代植物在与未包含该重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞，该抑制DNA构建体包括至少一个调控元件，该调控元件可操作地连接至源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；(b)在步骤(a)之后从该可再生植物细胞再生出转基因植物，其中该转基因植物在其基因组中包含该抑制DNA构建体；以及(c)测定所述转基因植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。所述方法可进一步包括：(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(e)确定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞，该抑制DNA构建体包括至少一个调控元件，该调控元件可操作地连接至源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％、51％、52％、53％、54％、55％、56％、57％、58％、59％、60％、56％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样蛋白；(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及(d)确定该子代植物在与未包含该抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

产生种子(优选可作为提供改变的根构造的产品销售的种子)的方法，该方法包括任一上述的优选方法，并且还包括从所述子代植物获得种子，其中所述种子在其基因组中包含所述重组DNA构建体(或抑制DNA构建体)。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，测定转基因植物中农学特性改变的步骤(如果适用的话)可优选地包括测定在改变的环境条件下与不包含重组DNA构建体的对照植物进行比较时该转基因植物是否表现出至少一种农学特性的改变。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，测定子代植物中农学特性改变的步骤(如果适用的话)可优选地包括测定在改变的环境条件下与不包含重组DNA构建体的对照植物进行比较时该子代植物是否表现出至少一种农学特性的改变。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，在所述导入步骤中所述可再生的植物细胞优选地包括愈伤组织细胞(优选胚胎)、配子细胞、分生细胞或未成熟胚芽细胞。可再生的植物细胞优选来自近交系玉米植物。

在任一上述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，所述再生步骤优选包括：(i)在包含促进胚发生的激素的培养基中培育所述转化的植物细胞直至观察到愈伤组织；(ii)将所述步骤(i)的转化的植物细胞转移至包含促进组织机体形成的激素的第一培养基；以及(iii)在第二培养基上传代培养步骤(ii)后的所述转化的植物细胞，以允许嫩芽伸长、根发育或这两者同时发生。

在任一前述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，存在供选择的替代方案用于将包含可操作地连接至少一个调控序列上的多核苷酸的重组DNA构建体导入可再生的植物细胞。例如，可将调控序列(例如一种或多种增强子、优选地作为转位因子的部件)导入可再生的植物细胞中，然后筛选其中将所述调控序列可操作地连接至编码本发明多肽的内源基因的事件。

将本发明的重组DNA构建体引入植物可通过任何合适的技术来进行，这些技术包括但不限于引导DNA摄取、化学处理、电穿孔、显微注射、细胞融合、感染、载体介导的DNA转移、轰击或农杆菌介导转化。

在任一上述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，至少一种农学特性优选选自：绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、抗涝性、氮摄取、氮胁迫耐受性、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长、茎倒伏以及收获指数。产量、绿度、生物量和根倒状是尤其优选进行改变的农学特性(优选增加)。

在任一上述的优选方法或本发明方法的任何其他实施方案中，在与对照植物比较时，所述植物优选表现出至少一种与环境条件无关的农学特性的改变。

将本发明的重组DNA构建体引入植物可通过任何合适的技术来进行，这些技术包括但不限于引导DNA摄取、化学处理、电穿孔、显微注射、细胞融合、感染、载体介导的DNA转移、轰击或农杆菌介导转化。

优选的技术如下文实施例所示，用于转化玉米植物细胞和大豆植物细胞。

用于转化双子叶植物(主要通过利用根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens))以及获得转基因植物的其他优选方法包括公开的用于棉花的那些(美国专利5,004,863、美国专利5,159,135、美国专利5,518,908)；用于大豆的那些(美国专利5,569,834、美国专利5,416,011、McCabe等人，Bio/Technology 6：923(1988)，Christou等人，PlantPhysiol.87：671674(1988))；用于芸苔的那些(美国专利5,463,174)；用于花生的那些(Cheng等人，Plant Cell Rep.15：653 657(1996)，McKently等人，Plant Cell Rep.14：699 703(1995))；用于番木瓜的那些；以及用于豌豆的那些(Grant等人，Plant Cell Rep.15：254 258，(1995))。

用电穿孔、粒子轰击和农杆菌转化单子叶植物也已有报道并且作为优选的方法包括例如在天门冬属(asparagus)中实现的转化和植物再生(Bytebier等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.84：5354，(1987))；在大麦中实现的转化和植物再生(Wan和Lemaux，Plant Physiol.104：37(1994))；在玉米中实现的转化和植物再生(Rhodes等人，Science240：204(1988)；Gordon-Kamm等人，Plant Cell 2：603 618(1990)；Fromm等人，Bio/Technology 8：833(1990)；Koziel等人，Bio/Technology11：194，(1993)；Armstrong等人，Crop Science 35：550-557(1995))；在燕麦中实现的转化和植物再生(Somers等人，Bio/Technology 10：1589(1992))；在鸭茅中实现的转化和植物再生(Horn等人，Plant Cell Rep.7：469(1988))；在水稻中实现的转化和植物再生(Toriyama等人，Theor.Appl.Genet.205：34，(1986)；Part等人，Plant Mol.Biol.32：1135 1148，(1996)；Abedinia等人，Aust.J.Plant Physiol.24：133 141(1997)；Zhang和Wu，Theor.Appl.Genet.76：835(1988)；Zhang等人，Plant Cell Rep.7：379，(1988)；Battraw和Hall，Plant Sci.86：191 202(1992)；Christou等人，Bio/Technology 9：957(1991))；裸麦(De la Pena等人，Nature 325：274(1987))；在甘蔗中实现的转化和植物再生(Bower和Birch，Plant J.2：409(1992))；在高羊茅(tall fescue)中实现的转化和植物再生(Wang等人，Bio/Technology10：691(1992))和在小麦中实现的转化和植物再生(Vasil等人，Bio/Technology 10：667(1992)；美国专利5,631,152)。

存在多种用于从植物组织再生植物的方法。再生的具体方法将取决于起始植物组织以及待再生的具体植物物种。

从单植物原生质体转化体或从多种经转化的外植体再生、发育和培育植物是本领域所熟知的(Weissbach和Weissbach(编辑)，载于：Methods for Plant Molecular Biology，Academic Press，Inc.San Diego，CA，(1988))。该再生和生长方法通常包括如下步骤：选择转化的细胞、培养这些单独化的细胞通过胚发育的通常阶段以及通过生根小植株阶段。转基因胚以及种子以类似的方式再生。随后将所得的转基因的生根小苗种植在诸如土壤之类的合适植物生长培养基中。

含有编码所关注蛋白质的外来的外源性分离核酸片段的植物的发育或再生是本领域所熟知的。优选地，将再生的植物进行自花授粉以产生纯合的转基因植物。或者，将得自再生植物的花粉与农学上重要的品系的产生种子的植株进行杂交。相反，将来自这些重要品系的植物用于给再生植物授粉。利用本领域技术人员所熟知的方法培育含有所需多肽的本发明的转基因植物。

实施例

本发明将在下面的实施例中进一步说明，其中份数和百分比是以重量计并且度数是摄氏度，除非另外说明。应当理解，尽管这些实施例说明了本发明的优选实施方案，但仅是以例证的方式给出的。根据上面的论述和这些实施例，本领域的技术人员可以确定本发明的基本特征，并在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可对本发明做出多种改变和修饰，以使其适用于多种用法和条件。因此，除了那些本文所示和描述的那些之外，根据前文所述，本发明的各种修改形式对本领域的技术人员来说将是显而易见的。这些修改形式也旨在属于所附权利要求书的范围内。

实施例1

制备具有激活标记基因的拟南芥种群

构建18.4kb的T-DNA基二元构建体，pHSbarENDs(图1；SEQ IDNO：1；)包含四个来源于花椰菜花叶病毒35S启动子的四个多聚增强子元件，对应于序列-341至-64，如Odell等人(1985)Nature 313：810-812所述。该构建体也包含允许质粒救援的载体序列(pUC9)、再动员T-DNA的转座子序列(Ds)、以及允许草胺磷选择转基因植物的bar基因。仅将从右边界(RB)至左边界(LB)包含的10.8kb片段转移到寄主植物基因组中。因为增强子元件位于靠近RB处，它们可诱导T-DNA整合后的基因组位点顺式激活。

将pHSbarENDs构建体转化到根癌农杆菌菌株C58中，在25℃下在LB中培养至OD600～1.0。然后离心沉淀细胞，并重悬在相等体积的5％蔗糖/0.05％Silwet L-77(OSI Specialties，Inc)中。在早期抽薹时，生长拟南芥生态型Col-0的土壤使用农杆菌悬浮液进行顶部灌溉。一周后，相同植株再次用在蔗糖/Silwet中的相同农杆菌菌株进行顶部灌溉。然后将该植物的种子设为标准。所得T₁种子在土壤中播种，通过喷洒草胺磷(AgrEvo；Bayer Environmental Science)选择转基因幼苗。从大约35,000个单个草胺磷抗性T₁植株中收集T₂种子。培养T₂植株并收集来自96个分离T₂品系的相同体积的T₃种子。这组成了360个亚群。

农杆菌菌株和整个植株的转化如上所述进行。

选择总计100,000个草胺磷抗性T₁幼苗。分开保存来自每个品系的T₂种子。

实施例2A

筛选以鉴定具有改变根构造的品系(非限制性氮条件)

在与早期发育期间来自如实施例1所述的种群的对照幼苗进行比较时，可分析在不限制氮条件下培养的具有激活标记的拟南芥幼苗的根系构造。

来自每个96,000个分离T1激活标记品系的十个T2种子可用氯气进行灭菌并种植在培养皿上，培养皿包含以下培养基：0.5x N-FreeHoagland’s，60mM KNO₃，0.1％蔗糖，1mM MES和1％Phytagel^TM。通常将10个平板置于架子中。平板在4℃下保存三天以使种子分层，然后在22

光照和20

黑暗垂直保持11天。光周期为16h；8h黑暗，平均光照强度为～180μmol/m²/s。架子(通常每个装有10个平板)在每个搁板中每日旋转。在第14天，评估平板的幼苗状态，拍摄整个平板的数字图像并分析根面积。将平板随机分成10个水平区域。在板上10个水平区域的每个区域中的根面积以总面积百分比表示。仅仅使用区域3至9的面积进行品系根总面积计算。可使用ICORIA开发的Rootbot图像分析工具(专有)评估根面积。根总面积以mm²表示。

期望具有增加的根生长特性的品系位于根分布区域的上端。假定架子有最多两个异常值，可使用滑动窗方法评估给定架子的根区域的变化。包括生长培养基、温度、和湿度在内的多个因素的环境变量可引起根生长的显著改变，尤其是在播种期间更是如此。因此根据播种日期和搁板来将所述品系分组以用于数据分析。然后通过平均根面积来拣选特定播种日期/搁板组中的架子。通过将表示架子r_i的数据与来自下一个最低架子(r_i-1，以及下一个最高平均根面积，r_i+1)的数据进行合并来执行滑动窗根面积分布。然后使用Grubbs型方法(Barnett等人，Outliers in Statistical Data，John Wiley&Sons，第3版(1994)分析组合分布的变量以鉴定ri中的异常值。

将通过上文所述方法测定的具有显著增加的根生长的品系命名为Phase 1 hits。在相同分析条件下进行Phase 1 hits的重复试样再筛选。当任一个或两个Phase 2重复试样显示与平均值的显著差异时，认为该品系是验证过的根构造品系。

在Phase 2的至少一个平板中再次发现是异常值的那些品系经过室内进行的Phase 3筛选以验证Phase 1和Phase 2中获得的结果。使用下文所述的Rootboot图像分析(如上所述)和

验证Phase 3的结果。在第一轮筛选中进行相同方式的确认。T2种子用50％家用漂白剂，0.01％triton X-100溶液灭菌，并以10颗种子/平板的密度置于与第一轮筛选所述的相同平板培养基上。在4℃下保存平板三天以使种子分层，并在与首次实验相同的温度和光周期下培养种子，光照强度为～160μmol/m²/s。将平板垂直放入10平板架的八个中心位置，第一个和最后一个位置放空白平板。每隔一天旋转架子和架子中的平板。每隔平板拍摄两组照片。第一组在14-16天拍摄，此时大多数品系的初生根已经到达平板底部，第二组照片在发育出更多侧根两天后拍摄。通常用后面的一组照片进行数据分析。用软件

(RegentInstruments Inc)分析在垂直平板上生长的这些幼苗的根生长，该软件是特别设计的一种进行根测量的图像分析系统。

利用像素对照来从较暗的背景辨别出根构造。为了在不拍摄背景情况下鉴定的根的最大量，所述像素级别是150-170，并且使用滤光器移除长度/宽度比率小于10.0的物体。进行分析的平板上的面积为从植物叶片边缘至距离平板底部约1cm处。使用完全相同的

设置和分析面积分析一批的所有平板。

给出的一个平板的总根长度得分除以已经萌发并沿平板生长一半的植物数目。每个品系培养三个平板，取它们的得分均值。然后将该平均值与同时培养的包含野生型种子的三个平板的平均值比较。

然后使用通过与野生型相比具有更高根生长数值进行再确认的拟南芥激活标记品系，用于分子鉴定侧接T-DNA插入序列的DNA。

实施例2B

在突变种群中鉴定具有改变的根表型的突变品系(氮限制条件)

可使用两步筛选程序，该程序包括：

(1)用垂直平板检测分析法鉴定改变的根生长表型；

(2)在拯救的突变体品系中确认抗除草剂性和根表型；

初次筛选基于垂直平板，该平板包含无氮的Hoagland盐，0.3％蔗糖和1mM KNO₃。该培养基也包含0.8％至1.0％PhytaGel作胶凝剂。具有1.0％Phytagel的培养基有时难以灌注，因为它凝固迅速，然而低于0.8％时当垂直放置时培养基将滑出平板。来自激活标记种群的突变体，其中100个单个品系的集合可用于总计36000个品系的筛选。在每个平板上，种植12个突变体和2个野生型Columbia种子。平板置于具有26℃恒温的培养室中，培养室为16小时-日循环，平板顶部的平均光照强度为110μE/m²s。这些平板在2.5周期限内拍照3-4次。当观察到清楚的根表型时拯救单个幼苗。拯救的幼苗在生长室(24℃，每日16小时，250至300μE/m²s)中生长至成熟以采集种子。

就次级筛选而言，将来自在初次筛选中鉴定的推定hits的种子播种于包含与上文相同的培养基(加上6mg/L双丙氨磷)的平板上。野生型Columbia种子在相同时间、但无双丙氨磷的相同培养基上播种。每个平板具有10个种子。每个突变体品系有3个平板，而野生型Columbia有2个平板作为重复试样。这些平板置于培养室中，生长条件与上文所述相同。剔除那些认为是假阳性的不具有抗除草剂性或无明显的根表型的品系。保存次级筛选验证的品系用于进一步研究。

实施例3

鉴定激活标记基因

使用下述两个标准程序中的一个或两个鉴定侧接导致根构造改变的T-DNA插入序列的基因：(1)热不对称交错PCR(TAIL)PCR(Liu等人，(1995)，Plant J.8：457-63)；以及(2)SAIFF PCR(Siebert等人，(1995)Nucleic Acids Res.23：1087-1088)。至于复杂的多聚T-DNA插入序列，TAIL PCR和SAIFF PCR可能都不足以鉴定候选基因。在这些情况下，可使用包括反式PCR、质粒拯救和/或基因组文库构建在内的其他程序。

成功的结果是其中单个TAIL或SAIFF PCR片段包含T-DNA边界序列和拟南芥基因组序列。

一旦获取侧接T-DNA插入序列的基因组序列标记，通过与公开可用的拟南芥基因组的序列比对来鉴定候选基因。

具体地讲，最靠近35S增强子元件/T-DNA RB的注释基因是激活的基因的候选基因。

为了验证鉴定的基因真的靠近T-DNA并排除TAIL/SAIFF片段是嵌合伪克隆的可能性，用一个T-DNA中的寡核苷酸和一个候选基因特异性的寡核苷酸进行对基因组DNA的诊断PCR。将提供PCR产品的基因组DNA样本理解为表示T-DNA插入序列。此分析也验证了其中一种以上的插入事件发生在相同品系中的情况，例如，在TAIL和/或SAIFF PCR分析中鉴定是否有多个不同基因组片段。

实施例4

鉴定激活标记ndk基因

通过如实施例2B所述的筛选程序，以及随后经过如实施例2A所述的阶段3(室内)筛选获取ndk基因。如实施例3所述进行激活标记基因的鉴定。

进一步分析显示具有改变的根构造的一个品系(1至6)。提取来自品系的DNA，使用T-DNA左边界内的引物通过连接介导PCR(Siebert等人，(1995)Nucleic Acids Res.23：1087-1088)建立T-DNA插入序列。一旦获取侧接T-DNA插入序列的基因组序列标记，通过与完全拟南芥基因组的序列比对鉴定候选基因。将其中一个鉴定的插入位点鉴定为嵌合插入；左边界的T-DNA序列经测定位于T-DNA插入序列的两端。这仍然是可能的：位于靠近T-DNA右边界的增强子元件足够靠近以对附近的候选基因产生效应。在这种情况下，假定右边界位置位于插入位点，并将侧接插入位点的两个基因选作候选基因。最靠近嵌合插入序列的35S增强子的基因是AT4G23900(SEQ ID NO：50；NCBI GINO：11990430；拟南芥核苷二磷酸激酶4)，它编码NDK4蛋白(SEQ IDNO：51)，本文称为核苷二磷酸激酶或NDK。

实施例5A

验证候选拟南芥基因(AT4G23900)经由转化到拟南芥中增强植 物根构造的能力

可将候选基因转化到拟南芥中并在35S启动子作用下过表达。如果在转基因品系中观察到与亲本激活标记品系相同或相似的表型，则将候选基因认为是拟南芥中验证过的“前导基因”。

可直接测试拟南芥AT4G23900基因促进拟南芥中的根构造的能力。

拟南芥AT4G23900 cDNA用寡核苷酸进行PCR扩增，寡核苷酸导入attB1(SEQ ID NO：51)序列，其上游为ATG起始密码子的共有起始序列(CAACA)和AT4G23900 cDNA(SEQ ID NO：50的核苷酸51-764(终止))蛋白编码区的前23个核苷酸，以及attB2(SEQ ID NO：53)序列和包括所述cDNA终止密码子的蛋白编码区的最后21个核苷酸。使用Invitrogen^TM 技术，用pDONR^TM/Zeo(Invitrogen^TM，图2；SEQ ID NO：2)进行MultiSite

BP重组反应。这种方法将细菌致死ccdB基因以及氯霉素抗性基因(CAM)从pDONRTM/Zeo移除并定向地克隆了该在旁侧具有attB1(SEQ ID NO：52)和attB2(SEQID NO：53)位点的PCR产物而得到入门克隆PHP28731。

用紧接Invitrogen^TM

转化插入序列上游的1.3-kb35S启动子构建称为pBC-yellow(图4，SEQ ID NO：4)的16.8-kb T-DNA基的二元载体，所述插入序列包含侧接attR1和attR2序列的ccdB基因和氯霉素抗性基因(CAM)。该载体也包含在Rd29a启动子控制下的YFP标记用于选择转化过的种子。

使用Invitrogen^TM 技术，对包含定向克隆PCR产物和pBC-yellow的入门克隆进行MultiSite

重组反应。这使得能够迅速地和定向地克隆pBC-yellow中在35S启动子后的AT4G23900基因。

使用如实施例1所述的相同农杆菌介导的转化程序将35S-AT4G23900基因构建体导入野生型拟南芥生态型Col-0中。

通过存在的荧光YFP标记选择转基因T1种子。按照如实施例2A所述的程序对荧光种子进行根构造检测分析。每个构建体使用6个平板对转基因T1种子进行再筛选。包含从荧光种子中分选出的未转化的Columbia种子的两个平板(每个架子)作为对照。

每个构建体有六个平板进行统计学分析，并检测平板上生长的植物数量和它们的平均

得分之间的趋势。

得分进行趋势归一化处理，对应于构建体的根得分除以野生型根得分。

实施例5B

在氮限制条件下筛选候选基因

也可筛选如上文实施例5A所述通过存在的荧光标记YFP选择的转基因T1种子在氮限制条件下生长的抗性。为此目的，32个转基因个体可在一个有0.4mM KNO₃或60mM KNO₃的平板上紧邻着32个野生型个体生长。如果一个品系显示与对照的统计意义上的显著差异，可认为该品系是验证过的氮缺乏抗性品系。在掩蔽该平板图像以移除背景颜色后，每个个体收集两个不同的测量数据：总罗赛塔面积和进入绿色区的颜色百分比。使用色调、饱和度和强度数据(HIS)，绿色区由色调50至66组成。总罗赛塔面积用作植物生物量的量度，而绿色区通过剂量响应研究已经显示指示氮同化作用。

实施例5C

验证候选拟南芥基因(AT4G23900)经由转化进入拟南芥后改善 植物氮利用率的能力

如实施例5B所述筛选能够在氮限制条件下生长的转基因种子。

在第10、11、12和13天评估植物。与野生型相比，表达拟南芥候选基因(AT4G23900)的转基因个体在氮限制条件下得分更佳，然而，当在包含有限浓度的氮(0.4mM KNO₃₎的培养基上生长时，与野生型植物相比，它们不被验证为氮缺乏抗性植物。在不限制氮条件下(60mMKNO₃)未观察到转基因植物和野生型植物之间的差异。

实施例5D

筛选以鉴定具有改善的硝酸盐摄取的品系

就每个过表达品系而言，将十二个T2植株播种在96孔微滴定板上，所述微滴定板包含2mM MgSO₄，0.5mM KH₂PO₄，1mM CaCl₂，2.5mM KCl，0.15mM Sprint 330，0.06mM FeSO₄，1μM MnCl₂·4H₂O，1μMZnSO₄·7H₂O，3μM H₃BO₃，0.1μM NaMoO₄，0.1μM CuSO₄·5H₂O，0.8mM硝酸钾，0.1％蔗糖，1mM MES，200μM溴酚红和0.40％Phytagel^TM(pH测定培养基)。培养基pH使得溴酚呈红色，pH指示染料是黄色的。

将四个品系种植于每个平板中，每个平板上包含12个野生型个体和来自某一已经显示具有改善的硝酸盐摄取(阳性对照)的品系的12个个体，在每个96孔微滴定板上总计有72个个体可使用基于网络的随机序列发生器测定每个平板上的品系顺序。不将种子种植在96孔微滴定板上的Row A或Row H中。每个实验使用四个平板，使得每个品系分析最多48株植物。在暗处、4℃条件下保持平板三天以使种子分层，然后在22℃，光照和黑暗交替条件下水平放置六天。光周期为16小时光照；8小时黑暗，平均光照强度为～200mmol/m²/s。旋转并振动每个架子中的平板。在第八或第九天(生长五天或六天)，通过记录培养基颜色为粉红色、桃色、黄色或无发芽来评估幼苗状态。然后移除每孔上的植物和/或种子。将每个培养基块状物转移到1.2mL微滴定管中，并置于96孔深微滴定板中的相应孔中。将包含2μM荧光素的等体积水加入每个1.2mL微滴定管中。用土壤覆盖平板并用液体循环高压灭菌。将每个管充分混合，从每个管中移除等分试样并分析培养基中保留的硝酸盐的量。如果t检验显示某个品系与野生型对照植物具有显著差异(p＜0.05)，则可认为所述品系是验证过的具有改善的硝酸盐摄取品系。

实施例5E

验证包含候选拟南芥基因(AT4G23900)的转基因品系氮摄取增 加

如实施例5D所述筛选氮摄取增加的转基因种子。

与不过表达拟南芥候选基因的野生型植物相比，过表达拟南芥候选基因(AT4G23900)的转基因个体经验证为具有改善的硝酸盐摄取品系。

实施例6

cDNA文库的组成；

cDNA克隆的分离和测序

制备提供来自Canna edulis(美人蕉)、Momordica charantia(苦瓜)、Brassica(芥辣)、Cyamopsis tetragonoloba(瓜耳)、Zea mays(玉米)、Oryza sativa(水稻)、Glycine max(大豆)、Helianthus annuus(向日葵)和Triticum aestivum(小麦)的不同组织的mRNA的cDNA文库。下面描述了对该文库的特征。

表2

来自美人蕉、苦瓜、芥辣、瓜耳、玉米、水稻、大豆、向日葵和 小麦的cDNA文库

文库	组织	克隆
			cdr1f	玉米(玉米，B73)发育根(全长)	cdr1f.pk002.a3.f：fis
cest1s	玉米，茎杆，伸长区域。	cest1s.pk013.p8：fis
			cfp2n	授粉的和未授粉的玉米穗，集中的，全长富集的，标准化的。	cfpn.pk070.b22；fiscfpn.pk069.c16

文库	组织	克隆
			sfl1	大豆不成熟的花。	sfl1.pk126.p10sfl1.pk134.d19：fissfl1.pk133.14：fis
p0095	穗叶鞘，经筛选的1生长条件：田间；对照组织或未处理组织的生长阶段：花粉脱落后2至3周；允许植物天然授粉	p0095.cwsab57ra
			rlr24	水稻萌发叶片后15天，感染菌株稻瘟病菌4360-R-62(AVR2-YAMO)后24小时；抗性。	rlr24.pk0071.e7
hss1c	菌核菌属感染的向日葵植株。	hss1c.pk019.a16：fis
			lds1c	15DAF时收获的瓜耳(Cyamopsistetragonoloba)种子。	lds1c.pk004.f12
epc2c	Frac，10和11车前籽表皮包含70％水溶性阿拉伯糖基木聚糖，玉米的主要细胞壁组分。	epc2c.pk003.l14：fis
			egh1c	陆地棉(Gossypium hirsutum)发芽的种子。	egh1c.pk002.l14
ort1f	燕麦(Avena strigosa)全长燕麦根尖。	ort1f.pk020.a13：fis

cDNA文库可通过许多可用的方法中的任一种制备。例如，通过首先根据生产商的说明书(Stratagene Cloning Systems，La Jolla，CA)制备Uni-ZAP^TMXR载体中的cDNA文库，可将cDNA引入质粒载体中。根据Stratagene提供的说明书，将Uni-ZAP^TMXR文库转换成质粒文库。转换后，cDNA插入序列将会包含在质粒载体pBluescript中。此外，可用T4DNA连接酶(New England Biolabs)将cDNA直接引入预切的Bluescript II SK(+)载体(Stratagene)中，然后根据生产商的说明书(GIBCO BRL Products)将其转染进DH10B细胞中。一旦cDNA插入序列处于质粒载体中，从随机选取的含重组pBluescript质粒的细菌菌落制备质粒DNA，或者用对插入的cDNA序列旁侧的载体序列特异性的引物，通过聚合酶链式反应扩增插入的cDNA序列。将扩增的DNA插入序列或质粒DNA在引物标记法测序反应(dye-primer sequencingreaction)中进行测序，以产生部分cDNA序列(表达序列标记或“EST”；参见Adams等人，1991，Science 252：1651-1656)。用Perkin Elmer Model377荧光测序仪分析所得的EST。

用改进的转座规程产生全长插入序列(FIS)数据。从归档的甘油原种作为单一菌落回收确定了FIS的克隆，并通过碱性裂解分离质粒DNA。将分离的DNA模板在基于PCR的测序反应中与载体引物M13正向和反向寡核苷酸反应并上样至自动化的测序仪上。通过与对其进行FIS查询的初始EST序列进行序列比对来确认克隆鉴定。

将确认的模板通过基于酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)Ty1转座因子(Devine和Boeke，1994，Nucleic Acids Res.22：3765-3772)的Primer Island转座试剂盒(PE Applied Biosystems，Foster City，CA)进行转座。该体外转座系统在整个一组大DNA分子中随机地放入独特的结合位点。随后将转座的DNA用于通过电穿孔转化DH10B电感受态细胞(Gibco BRL/Life Technologies，Rockville，MD)。转座因子含有另外的可选标记(称为DHFR；Fling和Richards，1983，Nucleic AcidsRes.11：5147-5158)，使得能在琼脂平板上仅双重筛选含有整合的转座子的那些亚克隆。从每次转座反应随机地选择多个亚克隆，通过碱性裂解制备质粒DNA，并用对转座子内的结合位点特异性的独特引物从转座事件位点向外进行测序(ABI Prism dye-terminator ReadyReaction mix)。

收集序列数据(ABI Prism Collections)并用Phred和Phrap(Ewing，等人，1998，Genome Res.8：175-185；Ewing和Green，1998，GenomeRes.8：186-194)进行装配。Phred是一种公用软件程序，该程序再次读取ABI序列数据，再次调出(recall)碱基，赋质量值，并将碱基序列(base call)和质量值写入可编辑的输出文件中。Phrap序列组装程序使用这些质量值来增加组装的序列重叠群的准确度。通过Consed序列编辑器(Gordon等人，1998，Genome Res.8：195-202)检查装配序列。

在一些克隆中，cDNA片段对应基因的3’-端的一部分并且不会涵盖整个开放阅读框。为了获得上游信息，使用两种不同规程中的一者。这两种方法中的第一种方法导致产生含有所需基因序列的部分的DNA片段，而第二种方法导致产生含有整个开放阅读框的片段。这两种方法均使用两轮PCR扩增以从一个或多个文库获得片段。有时基于以前的知识(特定的基因应该存在于某些组织中)选择文库，有时则进行随机地选择。获得相同基因的反应可平行地在若干文库中进行，或者在文库池中进行。文库池通常用3至5个不同的文库制备并且使其归一化而成为一致的稀释度。在第一轮扩增中，两种方法均使用载体特异性的(正向)引物，同时还使用基因特异性的(反向)引物，该正向引物对应位于克隆5’-端处的载体的一部分。第一种方法使用与已知基因序列的一部分互补的序列，而第二种方法使用与3’-非翻译区(也称为UTR)的一部分互补的基因特异性引物。在第二轮扩增中，两种方法均使用套式引物组。按照生产商的说明书，用市售试剂盒将所得DNA片段连接进pBluescript载体中。该试剂盒选自可得自包括Invitrogen^TM(Carlsbad，CA)、Promega Biotech(Madison，WI)和Gibco-BRL(Gaithersburg，MD)在内的一些供应商的许多试剂盒。如上所述，将质粒DNA通过碱性裂解方法分离并进行测序和用Phred/Phrap进行装配。

实施例7

cDNA克隆的鉴定

编码NDK样多肽的cDNA克隆通过这样鉴定：进行BLAST(基本的局部比对搜索工具)；Altschul等人，1993，J.Mol.Biol.215：403-410；还可参见国立卫生研究院国家医学图书馆的国家生物技术信息中心的万维网址上对BLAST算法的解释)，寻找与BLAST“nr”数据库中所包含序列(包括所有非冗余GenBank CDS翻译序列、源自3-维结构Brookhaven蛋白质数据银行(Protein Data Bank)、SWISS-PROT蛋白质序列数据库的最新的主要版本、EMBL和DDBJ数据库的序列)的相似性。采用国家生物技术信息中心(NCBI)提供的BLASTN算法，分析如实施例6中获得的cDNA序列与包含在“nr”数据库中的所有可公开获得的DNA序列的相似性。在所有的阅读框中翻译DNA并用NCBI提供的BLASTX算法(Gish和States，1993，Nat.Genet.3：266-272)比较与“nr”数据库中包含的所有可公开获得的蛋白质序列的相似性。为方便起见，通过BLAST计算仅仅偶然观察到cDNA序列与所搜索的数据库中所包含序列的匹配的P值(概率)在本文报导为“pLog”值，它代表所报导的P值的负对数。因此，pLog值越大，cDNA序列和BLAST的“匹配”代表同源蛋白的可能性就越大。

将受分析的EST与上述Genbank数据库进行比较。通过使用BLASTn算法(Altschul等人，1997，Nucleic Acids Res.25：3389-3402.)对杜邦专利数据库比较具有序列同源共有区域或重叠区域的核苷酸序列，可找到含更5端或3端序列的EST。在两个或更多个核酸片段之间存在共有或重叠序列时，该序列可装配成单一的连续核苷酸序列，从而使最初的片段在5或3初始方向上延伸。一旦确定了最5的EST后，可如实施例6中所述，通过全长插入序列来确定其完整的序列。可用tBLASTn算法，通过将已知基因(来自专有来源或公开数据库的已知基因)的氨基酸序列对EST数据库进行比较，可找到属于不同物种的同源基因。tBLASTn算法对所有6个阅读框都翻译了的核苷酸数据库进行氨基酸查询的搜索。该搜索允许不同物种之间的核苷酸密码子使用的差异，并且允许密码子简并。

实施例8

表征编码NDK样多肽的cDNA克隆

使用表1列出的EST序列进行的BLASTX揭示cDNA编码的多肽与表3所示的来自水稻(GI No.115465831和125595441，分别对应于SEQ ID NO：44和49)、拟南芥a(GI No.15237018，对应于SEQ ID NO：46)、豌豆(GI No.6435320，对应于SEQ ID NO：45)、葡萄藤(GI No.147864944，对应于SEQ ID NO：47)、和菥蓂(GI No.62870979，对应于SEQ ID NO：48)的NDK样多肽的相似性。表3显示的是每个EST(“EST”)、包含指示cDNA克隆(“FIS”)的整个cDNA插入序列、两个或更多个EST装配的重叠群序列、FIS或PCR序列(“重叠群”)或编码来源于FIS或重叠群(“CGS”)的整个和功能蛋白的序列的BLAST结果：

表3

编码NDK样多肽同源物的多肽序列的BLAST结果和同一性百分 比

序列	状况	NCBI GI	BLASTpLog打分	％同一性
					cest1s.pk013.p8：fisSEQ ID NO：14	CGS	115465831(水稻)SEQ ID NO：44	90	73.9
cfp2n.pk070.b22；fisSEQ ID NO：16	CGS	115465831(水稻)SEQ ID NO：44	90	73.9
					cdr1f.pk002.a3.f：fisSEQ ID NO：18	CGS	115465831(水稻)SEQ ID NO：44	90	78.2
lds1c.pk004.f12：fisSEQ ID NO：20	CGS	6435320(豌豆)SEQ ID NO：45	94	83.3
					ep2c.pk002.f17.f：fisSEQ ID NO：22	CGS	15237018(拟南芥)SEQ ID NO：46	89	76.8
ort1f.pk020.a13：fisSEQ ID NO：24	CGS	115465831(水稻)SEQ ID NO：44	100	79.8
					HSS1C.PK019.A16：FISSEQ ID NO：26	CGS	147864944(葡萄藤)SEQ ID NO：47	91	77.9
SFL1.PK134.D19：FISSEQ ID NO：28	CGS	6435320(豌豆)SEQ ID NO：45	89	83.3
					EGH1C.PK002.L14：FISSEQ ID NO：30	CGS	62870979(阿尔卑斯菥蓂)SEQ ID NO：48	93	79.8
sfl1.pk133.14：fisSEQ ID NO：32	CGS	15237018(拟南芥)SEQ ID NO：46	91	77.1

序列	状况	NCBI GI	BLASTpLog打分	％同一性
					p0095.cwsab57raSEQ ID NO：36	CGS	125595441(水稻)SEQ ID NO：49	78	90.8
sfl1.pk126.p10SEQ ID NO：38	EST	15237018(拟南芥)SEQ ID NO：46	47	66.3
					rlr24.pk0071.e7SEQ ID NO：40	EST	115465831(水稻)SEQ ID NO：44	＜10	64.5
cfp2n.pk069.c16SEQ ID NO：42	EST	115465831(水稻)SEQ ID NO：44	46	67.1

图15A至15K显示以下全长氨基酸序列的多重比对：SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、和37，以及SEQ IDNO：44、45、46、47、48、49和51图16显示图15A至15K中显示的每个序列对的序列同一性百分比和趋异值。

用LASERGENE生物信息计算包(DNASTAR Inc.，Madison，WI)的Megalign程序进行序列比对和同一性百分比计算。用带默认参数(空位罚分＝10，空位长度罚分＝10)的Clustal比对方法(Higgins和Sharp，1989，CABIOS.5：151-153)进行序列的多重比对。使用Clustal方法的成对比对的默认参数为KTUPLE 1，空位罚分＝3，窗口＝5，DIAGONALS SAVED＝5。

序列比对和BLAST打分以及概率显示包含本发明cDNA克隆的核酸片段编码NDK样多肽。

表4

编码与NDK和NDK样多肽同源的多肽的序列的BLAST结果

序列	状况	参照序列	BlastpLog打分	％同一性
					cest1s.pk013.p8：fisSEQ ID NO：14	CGS	SEQ ID NO：42932，在EP1033405-A2中	121	99.6
cfp2n.pk070.b22；fisSEQ ID NO：16	CGS	SEQ ID NO：42932，在EP1033405-A2中	121	99.6
					cdr1f.pk002.a3.f：fisSEQ ID NO：18	CGS	SEQ ID NO：43288，在EP1033405-A2中	121	99.2
lds1c.pk004.f12：fisSEQ ID NO：20	CGS	SEQ ID NO：13361，在US2005108791中	95	89.1
					ep2c.pk002.f17.f：fisSEQ ID NO：22	CGS	SEQ ID NO：2692，在WO2004035798中	90	82.6
ort1f.pk020.a13：fisSEQ ID NO：24	CGS	SEQ ID NO：137093，在US2007044171中	105	75.6
					hss1c.pk019.a16：fisSEQ ID NO：26	CGS	SEQ ID NO：64801，在US2007061916中	93	97.4
sfl1.pk134.d19：fisSEQ ID NO：28	CGS	SEQ ID NO：13364，在US2005108791中	101	98.7
					egh1c.pk002.l14：fisSEQ ID NO：30	CGS	SEQ ID NO：64801，在US200700196中	115	100
SFL1.PK133.14：FISSEQ ID NO：32	CGS	SEQ ID NO：13364，在US2005108791中	101	90.7
					MY.P0031.CCMBO48SEQ ID NO：34	CGS	SEQ ID NO：43288，在EP1033405中	122	99.6

序列	状况	参照序列	BlastpLog打分	％同一性
					p0095.cwsab57raSEQ ID NO：36	EST	SEQ ID NO：42932，在EP1033405中	85	99.3
sfl1.pk126.p10SEQ ID NO：38	EST	SEQ ID NO：13364，在US2005108791中	54	80.2
					rlr24.pk0071.e7SEQ ID NO：40	EST	SEQ ID NO：13369，在US2005108791中	24	53.9
cfp2n.pk069.c16SEQ ID NO：42	EST	SEQ ID NO：43288，在EP1033405中	68	94.4

实施例9

制备含有拟南芥前导基因(AT4G23900)的同源物的植物表达载 体

可使用诸如BLAST(基本的局部比对搜索工具(Basic LocalAlignment Search Tool)；Altschul等人，J.Mol.Biol.215：403-410，1993；也参见美国国家卫生研究院(National Institutes of Health)国立医学图书馆(National Library of Medicine)的国家生物技术信息中心(NationalCenter for Biotechnology Information)的万维网网址上对BLAST算法的解释)之类的序列比较算法，鉴定与前导ndk基因同源的序列。同源NDK样序列，如实施例8所述的序列，可通过任一种以下方法进行PCR扩增。

方法1(基于RNA的方法)：如果ndk同源物的蛋白编码区域的5’和3’序列信息是可用的，能如实施例5A所述设计基因特异性引物。可将RT-PCR用于植物RNA来获得含有RUM1蛋白编码区的核酸片段，该ndk蛋白编码区旁侧为attB1(SEQ ID NO：52)和attB2(SEQ ID NO：53)序列。引物可含有起始密码子上游的共有Kozak序列(CAACA)。

方法2(基于DNA的方法)：作为另外一种选择，如果编码NDK多肽同源物的基因的cDNA克隆是可用的，可以PCR扩增完整cDNA插入序列(含有5′和3′非编码区)。可设计正向引物和反向引物，使它们分别或者含有attB1序列和在该cDNA插入序列前面的载体特异性序列或者含有attB2序列和在该cDNA插入序列后面的载体特异性序列。对于克隆进载体pBluescript SK+中的cDNA插入序列，可使用正向引物VC062(SEQ ID NO：54)和反向引物VC063(SEQ ID NO：55)。

方法1和方法2可根据本领域技术人员已知的步骤进行修改。例如，方法1的引物可含有限制性酶切位点而不是attB1和attB2位点，用于后来将PCR产物克隆进含有attB1和attB2位点的载体内。另外，方法2可涉及从cDNA克隆、λ克隆、BAC克隆或基因组DNA扩增。

可利用BP重组反应将通过任一种上述方法获得的PCR产物与

供体载体(例如pDONR^TM/Zeo(Invitrogen^TM，图2；SEQ ID NO：2)或pDONR^TM221(Invitrogen^TM，图3；SEQ ID NO：3)组合。这种方法将细菌致死ccdB基因以及氯霉素抗性基因(CAM)从pDONRTM221移除并定向地克隆了该在旁侧具有attB1和attB2位点的PCR产物而得到入门克隆(entry clone)。使用Invitrogen^TM

Clonase^TM技术，然后能将来自入门克隆的同源NDK样基因转移到合适的目的载体中以获得植物表达载体，所述载体用于拟南芥、玉米和大豆，如pBC-Yellow(图4；SEQ ID NO：4)、PHP27840(图5；SEQ IDNO：5)或PHP23236(图6；SEQ ID NO：6)，以获取植物表达载体，分别用于拟南芥、大豆和玉米。

作为另外一种选择，可进行多个入门克隆和合适的目的载体之间的MultiSite重组反应以产生表达载体。该程序的一个实例在实施例14A中有所描述，该实施例描述了用于转化玉米品系的玉米表达载体的构建。

实施例10

用验证过的拟南芥前导基因及其同源物制备大豆表达载体并转化 大豆

为了检查所得表型，可将大豆植株转化以过表达验证过的拟南芥(Arabidopsis)基因(AT4G23900)和来自不同物种的对应同源物。

可将实施例5A和9中所述的入门克隆用于将每个基因定向克隆进PHP27840载体(图5，SEQ ID NO：5)中，使得该基因的表达处于SCP1启动子的控制下。

然后可用包含编码本多肽的序列的表达载体转化大豆胚。

为了诱导体细胞胚，可将子叶(长度为3-5mm，从大豆品种A2872的表面灭菌的未成熟种子解剖出来)于26℃在光下或黑暗下培养6-10周。然后切取体细胞胚(其产生次生胚)并将其置于合适的液体培养基内。在重复选择增殖为早期球形阶段胚的体细胞胚的簇后，按下面的描述保持该悬浮液。

可将大豆胚发生悬浮培养物在26℃下在摇床(150rpm)上的35mL液体培养基中保持，荧光光照采用16∶8小时(白天/黑夜)的时间表。通过将大约35mg组织移植进35ml液体培养基中，每两周将培养物进行传代培养。

然后可通过基因枪轰击方法(Klein等人，Nature(London)327：70-73，1987；美国专利4,945,050)转化大豆胚发生悬浮培养物。杜邦公司的Biolistic^TMPDS1000/HE仪器(氦气改进型)可用于这些转化。

可用于帮助大豆转化的可选标记基因是由来自花椰菜花叶病毒的35S启动子(Odell等人，Nature 313：810-812，1985)、来自质粒pJR225(来自大肠杆菌；Gritz等人，Gene 25：179-188，1983)的潮霉素磷酸转移酶基因以及胭脂碱合成酶基因的3′区构成的嵌合基因，该胭脂碱合成酶基因来自根癌农杆菌Ti质粒的T-DNA。可用于帮助大豆转化的另一种可选标记基因是来自大豆或拟南芥属的除草剂抗性乙酰乳酸合成酶(ALS)基因。ALS是支链氨基酸缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成中的第一共用酶。已经鉴定出ALS中的突变导致对三类ALS抑制剂中的某些或全部具有抗性(美国专利5,013,659；其全部内容以引用的方式并入本文)。除草剂抗性ALS基因的表达可以处于SAM合成酶启动子(美国专利申请US-2003-0226166-A1；其全部内容以引用的方式并入本文)的控制下。

将如下物质(依次)加入到50μL 60mg/mL的1μm金颗粒悬浮液中：5μL DNA(1μg/μL)、20μL亚精胺(0.1M)和50μL CaCl₂(2.5M)。然后搅拌该颗粒制备物三分钟，在微量离心机(microfuge)中离心10秒并移除上清液。然后将DNA包覆的颗粒在400μL 70％乙醇中洗涤一次并再悬浮于40μL无水乙醇中。可将DNA/颗粒悬浮液用超声波处理三次，每次一秒钟。然后将5μL该DNA-包覆的金颗粒装载至每个宏载体盘上。

将大约300-400mg两周大的悬浮培养物置于60×15mm的空培养皿中并用吸管将残留的液体从组织移除。对于每次转化实验，大约5-10板的组织受到正常轰击。膜破裂压力设定为1100psi并将腔室抽成28英寸汞柱的真空。将组织置于离阻挡网大约3.5英寸的地方并轰击三次。轰击后，可将组织分成两份并放回液体培养基中，如上所述进行培养。

轰击后五至七天，用新鲜培养基更换该液体培养基，并在轰击后七至十二天，用含有50mg/mL潮霉素的新鲜培养基更换。可每周更换这种选择培养基。轰击后七至八周，可观察到绿色的转化组织从未转化的坏死的胚芽发生簇长出来。移出分离的绿色组织并将其移植进单独的烧瓶中以产生新的、无性繁殖的、转化的胚发生悬浮培养物。可将每一新品系当成是独立的转化事件。然后可将这些悬浮培养物作为未成熟胚进行传代培养和维持，或者通过使单独体细胞胚成熟并萌发而再生成整株植株。

能通过在土壤中培养植物并在用

分析总根质量前洗涤根部来测量大豆增大的根构造。

然后可分析用验证过的基因转化大豆植株以研究相对于对照或参照植株的农学特性。例如，在多种环境条件(如氮限制条件、干旱等)下的氮利用效率、产量增强和/或稳定性。

实施例11

使用粒子轰击用验证过的拟南芥前导基因转化玉米

为了检查所得表型，可将大豆植株转化以过表达验证过的拟南芥前导基因或来自不同物种的对应同源物。

可将实施例5A中所述的入门克隆用于将每种基因定向克隆进玉米转化载体中。玉米基因的表达可以处于组成型启动子的控制下，例如玉米泛素启动子(Christensen等人，Plant Mol.Biol.12：619-632，1989，以及Christensen等人，Plant Mol.Biol.18：675-689，1992)。

然后可通过下面的方法将上述重组DNA构建体引入玉米细胞中。可从源于近交玉米系H99和LH132杂交的发育中的颖果切取未成熟的玉米胚。在授粉后10至11天分离胚，这时它们长为1.0至1.5mm。然后将胚以轴线侧朝下放置并与琼脂糖硬化的N6培养基(Chu等人，Sci.Sin.Peking 18：659-668，1975)接触。将胚在27℃下保持在黑暗中。从这些未成熟胚的胚鳞增生出易脆的胚发生愈伤组织，该愈伤组织由未分化的细胞块构成，在胚柄结构上长有体细胞原胚状体和胚状体。可将从该原外植体分离的胚发生愈伤组织在N6培养基上培养，并每两至三周在这种培养基上进行传代培养。

可将质粒p35S/Ac(得自Peter Eckes博士，Hoechst Ag，Frankfurt，Germany)用于转化实验以便提供可选标记。该质粒含有pat基因(见欧洲专利公布0242236)，该基因编码草胺膦乙酰转移酶(PAT)。酶PAT赋予对除草性谷氨酰胺合成酶抑制剂例如草胺膦的抗性。p35S/Ac的pat基因处于来自花椰菜花叶病毒的35S启动子(Odell等人，Nature313：810-812(1985))和胭脂碱合成酶基因的3′区的控制下，该胭脂碱合成酶基因来自根癌农杆菌Ti质粒的T-DNA。

可将粒子轰击法(Klein等人，Nature 327：70-73(1987))用于将基因转移至愈伤组织培养细胞。根据该方法，利用下面的技术用DNA包覆金颗粒(直径1μm)。将10μg质粒DNA加入到50μL金颗粒悬浮液(每mL 60mg)中。将氯化钙(50μL的2.5M溶液)和亚精胺游离碱(20μL的1.0M溶液)加入到该颗粒中。再加入这些溶液过程中涡旋该悬浮液。10分钟后，将试管粗略地离心(以15,000rpm进行5秒钟)并移除上清液。将该颗粒再悬浮于200μL的无水乙醇中，再次离心并移除上清液。再次进行乙醇冲洗并将颗粒再悬浮于终体积为30μL的乙醇中。可将DNA包覆的金颗粒等分试样(5μL)置于Kapton^TM飞行圆盘(Bio-Rad Labs)的中心。然后使用

PDS-1000/He(Bio-Rad Instruments，Hercules CA)，采用1000psi的氦气压、0.5cm的间隙距离以及1.0cm的飞行距离，将颗粒加速射入玉米组织中。

对于轰击，将胚发生组织置于琼脂糖硬化的N6培养基上的滤纸上。组织布置成薄薄一层，并覆盖直径为约5cm的圆形区域。然后可将包含组织的培养皿置于离阻挡网大约8cm的PDS-1000/He的腔室内。然后将该腔室中的空气抽出至28英寸汞柱的真空。利用在击波管中氦气压力达到1000psi时破裂的可破裂膜，宏载体被氦气冲击波加速。

轰击后七天，可将组织转移至N6培养基中，该培养基含有双丙氨磷(每升5mg)并缺少酪蛋白或脯氨酸。组织继续在这种培养基上缓慢生长。另外两周后，可将组织转移至含有bialaphos的新鲜N6培养基上。六周后，在某些装有补充了双丙氨磷的培养基的盘上，可辨别直径约1cm的区域上有活性生长的愈伤组织。当在选择培养基上传代培养时，这些愈伤组织可继续生长。

通过首先将组织簇转移到补充有0.2mg每升的2，4-D的N6培养基中，可从该转基因愈伤组织再生出植物。两周后，可将组织转移至再生培养基中(Fromm等人，Bio/Technology 8：833-839(1990))。

可再生出转基因的T0植株并按照下面的HTP步骤确定它们的表型。可收集T1种子。

可栽培T1植株并分析表型变化。利用图像分析可定量下面的参数：可收集并定量植株面积、体积、生长速率以及颜色分析。与合适的对照植物比较，导致根构造改变或上文列出的任何一种农学特性改变的表达构建体可被认为是拟南芥前导基因在玉米中发挥功能以改变根构造或植物构造的证据。

此外，可通过直接转化或者从单独转化的品系基因渗入而将含有验证的拟南芥基因的重组DNA构建体导入玉米品系内。

可对转基因植株(或者是近交的或者是杂交的)进行更有力的基于田间的实验来研究在多种环境条件下(如营养物质的改变和水的可利用性)的根构造或植物构造、产量提高和/或抗根倒伏性。

也可进行后续的产量分析，以确定含有验证过的拟南芥前导基因的植物与不包含验证过的拟南芥前导基因的对照(或参照)植物相比较时是否具有改善的产量表现。包含验证过的拟南芥前导基因的植物相对于对植物将具有改善的产量，优选地在不利环境条件下产量损失减少50％，或在不同环境条件下相对于对照植物将具有提高的产量。

实施例12

电穿孔根癌农杆菌LBA4404

将电穿孔感受态细胞(40μl)，例如根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)LBA4404(含有PHP10523)在冰上解冻(20至30分钟)。PHP10523含有用于T-DNA转移的VIR基因、农杆菌属的低拷贝数质粒复制起始区、四环素抗性基因以及用于体内DNA生物分子重组的cos位点。同时，将电穿孔管(electroporation cuvette)在冰上冷却。将该电穿孔仪的设置调节至2.1kV。

将DNA等分试样(0.5μL JT(US 7,087,812)亲代DNA，在低盐缓冲液或双蒸H₂O中的浓度为0.2μg至1.0μg)与解冻的农杆菌细胞混合，同时仍然保持在冰上。将该混合物转移至电穿孔管的底部并静止保持在冰上1至2分钟。通过按下“pulse(脉冲)”键两次(理想的是获得4.0毫秒的脉冲)对细胞进行电穿孔(Eppendorf电穿孔仪2510)。随后，将0.5ml 2xYT培养基(或SOCmedium)加入到电穿孔管并转移至15ml Falcon管中。将细胞在28至30℃、200至250rpm下培养3小时。

将250μl的等分试样散布在#30B(YM+50μg/mL奇放线菌素)板上并在28至30℃下培养3天。为了增加转化体的数目，可进行如下两个可选步骤中的其中一个：

选择1：用30μl 15mg/ml的利福平覆盖平板。LBA4404具有针对利福平的染色体抗性基因。这种附加的选择消除了在使用较差的LBA4404感受态细胞制备物时观察到的一些污染克隆。

选择2：进行两次重复的电穿孔以补偿较差的电感受态细胞。

转化体的鉴定：

选取四个独立的克隆并划痕接种在AB基本培养基+50mg/mL奇放线菌素的平板(#12S培养基)上用于分离单个克隆。将平板在28℃下培养2至3天。

对于每个推定的共整合体选取单个克隆并将其接种在4ml具有50mg/l的奇放线菌素的#60A中。将该混合物在28℃下摇动培养24小时。采用Qiagen Miniprep+可选的PB洗涤，从4ml培养物分离出质粒DNA。将DNA在30μl中洗提。如上所述，将2μl的等分试样用于电穿孔20μl DH10b+20μl ddH₂O。

可任选地，可将15μl等分试样用于转化75至100μl的InvitrogenLibrary Efficiency DH5α。将细胞散布在LB培养基+50mg/mL奇放线菌素的平板(#34T培养基)上并将其在37℃下培养过夜。

对于每个推定的共整合体选取3至4个独立的克隆并将其接种在4ml具有50μg/ml奇放线菌素的2xYT(#60A)上。将细胞在37℃下摇晃培养过夜。

使用

Miniprep，用任选PB洗涤液(稀释成50μl)从4mL培养物中分离质粒DNA，并且8μl质粒DNA用SalI(使用JT亲本和PHP10523作对照物)进行消化。

对于4个质粒利用限制性内切酶BamHI、EcoRI和HindIII再进行三次消化(使用亲代DNA和PHP 10523作为对照)，这4个质粒代表2种具有正确SalI消化模式的推定共整合体。推荐电凝胶(Electronic gel)用于比较。

作为另一种选择，对于高通量应用，例如针对Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系(实施例15-17)所描述的，代替通过限制性酶切分析来评价所得的共整合载体，可将三个克隆同时用于如实施例13所述的感染步骤。

实施例13

农杆菌介导的玉米的转化

为了检查所得表型，可转化玉米植株以过表达验证过的拟南芥前导基因或来自不同物种的对应同源物。

农杆菌介导的玉米转化基本上按照Zhao等人，Meth.Mol.Biol.318：315-323(2006)中描述的方法进行(还可参见Zhao等人，Mol.Breed.8：323-333(2001)和1999年11月9日公布的美国专利5,981,840，以引用的方式将该文献并入本文)。该转化过程涉及细菌接种、共培养、静止期、选择以及植株再生。

1.未成熟胚的制备

从颖果切取未成熟胚并置于装有2mL PHI-A培养基的2mL微型管中。

2.胚的农杆菌感染以及共培养

2.1感染步骤

用1mL微量吸移管移出PHI-A培养基并加入1mL农杆菌悬浮液。轻轻倒置该管进行混合。将该混合物在室温下培养5分钟。

2.2共培养步骤

用1mL微量吸移管将农杆菌悬浮液从感染步骤中移出。使用无菌刮刀将胚从管中刮出并转移到100×15mm培养皿中的PHI-B培养基的平板中。确定胚的朝向，使得胚轴在培养基表面上朝下。将具有胚的平板在20℃下于黑暗中培养3天。L-半胱氨酸可用于共培养阶段。采用标准二元载体，补充有100-400mg/L L-半胱氨酸的共培养培养基对于回收稳定的转基因事件是至关重要的。

3.推定的转基因事件的选择

向100×15mm培养皿中的PHI-D培养基的每平板中转移10个胚，保持朝向，并用石蜡膜将培养皿密封。将平板在黑暗中于28℃下培养。预计在6-8周将看见活性生长的推定事件(作为浅黄色胚组织)。不产生事件的胚可能是棕色和坏死的，并且几乎看不见脆性组织生长。取决于生长速率，以2至3周的间隔将推定的转基因胚组织转移到新鲜的PHI-D平板上进行传代培养。记录事件。

4.T0植株的再生

将在PHI-D培养基上增殖的胚组织转移至100×25mm培养皿中的PHI-E培养基(体细胞胚成熟培养基)进行传代培养并在28℃下，在黑暗中培养约10至18天，直至体细胞胚成熟。将具有良好限定的盾片和胚芽鞘的个体成熟体细胞胚芽转移到PHI-F胚芽发芽培养基中，并且在28℃下于光中(约80μE，来自冷光灯或同等荧光灯)培养。在7至10天，将约10cm高的再生植株盆载于园艺混合物中，并使用标准园艺方法使其受冷而变得耐寒。

用于植物转化的培养基

1.PHI-A：4g/L的CHU基础盐、1.0mL/L的1000×Eriksson维生素混合物、0.5mg/L的盐酸硫胺素、1.5mg/L的2，4-D、0.69g/L的L-脯氨酸、68.5g/L的蔗糖、36g/L的葡萄糖，pH为5.2。在使用前加入100μM的乙酰丁香酮，过滤灭菌。

2.PHI-B：无葡萄糖的PHI-A，2，4-D增加至2mg/L，蔗糖减少至30g/L并且补充有0.85mg/L的硝酸银(过滤灭菌)，3.0g/L的固化剂(gelrite)，100μM的乙酰丁香酮(过滤灭菌)，pH为5.8。

3.PHI-C：无固化剂和乙酰丁香酮的PHI-B，2，4-D减少至1.5mg/L并且补充有8.0g/L的琼脂，0.5g/L的Ms-吗啉乙磺酸(MES)缓冲液，100mg/L的羧苄青霉素(过滤灭菌)。

4.PHI-D：补充有3mg/L的双丙氨磷(过滤灭菌)的PHI-C。

5.PHI-E：4.3g/L的Murashige and Skoog(MS)盐(Gibco，BRL11117-074)、0.5mg/L的烟酸、0.1mg/L的盐酸硫胺素、0.5mg/L的盐酸吡哆醇、2.0mg/L的甘氨酸、0.1g/L的肌醇、0.5mg/L的玉米素(Sigma，商品目录号：Z-0164)、1mg/L的吲哚乙酸(IAA)、26.4μg/L的脱落酸(ABA)、60g/L的蔗糖、3mg/L的双丙氨磷(过滤灭菌)、100mg/L的羧苄青霉素(过滤灭菌)、8g/L的琼脂，pH为5.6。

6.PHI-F：不含玉米素、IAA、ABA的PHI-E；蔗糖减少至40g/L；用1.5g/L的固化剂代替琼脂；pH为5.6。

通过首先将组织簇转移到补充有0.2mg每升的2，4-D的N6培养基中，可从该转基因愈伤组织中再生出植物。两周后，可将组织转移至再生培养基(Fromm等人，(1990)Bio/Technology 8：833-839)中。

可进行对转基因T0植株和T1植株的表型分析。

可分析T1植株表型的变化。利用图像分析，可在植株生长过程中在多个时间点，分析T1植株在植株面积、体积、生长速率方面的表型变化并且可进行颜色分析。可如实施例20中所述来分析根构造的改变。

可对农学特性的改变进行后续分析，以确定含有验证过的拟南芥前导基因的植株在与不含有验证过的拟南芥前导基因的对照(或参照)植株比较时是否具有至少一种农学特性的改善。还可在多种环境条件下研究改变。

导致根构造显著改变的表达构建体将被认为是拟南芥基因在玉米中发挥功能以改变根构造的证据。

实施例14A

利用农杆菌介导的转化构建具有拟南芥前导基因(AT4G23900) 的玉米表达载体

用拟南芥ndk基因(AT4G23900)在NAS2(SEQ ID NO：57和GOS2(SEQ ID NO：58)启动子控制下制备玉米表达载体。PINII是终止子(SEQ ID NO：61)

使用Invitrogen^TM 技术，如实施例5A所述制备的、包含拟南芥ndk基因(AT4G23900)的入门克隆PHP 28731被用于独立的反应：

1)组成型玉米GOS2启动子入门克隆(PHP28408，图11，SEQ IDNO：11)和PinII终止子入门克隆(PHP20234，图9，SEQ ID NO：9)形成目的载体PHP28529(图10，SEQ ID NO：10)。将所得载体命名为PHP28911。

2)根玉米NAS2启动子入门克隆(PHP22020，图12，SEQ ID NO：12)和PinII终止子入门克隆(PHP20234，图9，SEQ ID NO：9)形成目的载体PHP28529(图10，SEQ ID NO：10)。将所得载体命名为PHP28912。

目的载体PHP28529被加到每个最终载体(PHP28911和PHP28912)中，也是：

1)RD29A启动子：：黄色荧光蛋白：：PinII终止子盒，用于拟南芥属种子分选。

2)泛素启动子：：moPAT/红色荧光蛋白融合基因：：PinII终止子盒，用于转化选择和玉米种子分选。

实施例14B

制备包含拟南芥ndk基因及其同源物的玉米表达构建体

可使用实施例5A和14A所述的程序将拟南芥ndk基因及其来自玉米和其他物种的对应同源物(表1)转化到玉米品系中。能如实施例5A和14A所述制备具有拟南芥ndk基因及其来自玉米和其他物种的对应同源物(表1)的玉米表达载体。除了GOS2或NAS2启动子，其他启动子，例如但不限于泛素启动子、S2A和S2B启动子、玉米ROOTMET2启动子、玉米Cyclo、CR1BIO、CRWAQ81以及玉米ZRP2.4447，可用于引导ndk和NDK样基因在玉米中的表达。此外，多种终止子，例如但不限于PINII终止子，可用于完成所关注基因在玉米中的表达。

实施例14C

使用农杆菌介导转化，用拟南芥前导基因(AT4G23900)和来自 其他物种的对应同源物转化玉米品系

然后可将最终载体(玉米中表达的载体，实施例14A和B)分别电穿孔进入包含PHP10523的LBA4404农杆菌(图7；SEQ ID NO：7，Komari等人，Plant J 10：165-174(1996)，NCBI GI：59797027)中，以产生用于玉米转化的共整合载体。该共整合载体是通过最终载体(玉米表达载体)与PHP 10523的重组(通过每个载体上含有的COS重组位点)而形成。除了实施例14A-B中所述的表达盒，该共整合载体还含有农杆菌菌株以及农杆菌介导转化所需的基因(TET、TET、TRFA、ORI终止子、CTL、ORI V、VIR C1、VIR C2、VIR G、VIR B)。转化玉米品系可如实施例13所述进行。

实施例15

用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的目的载体PHP23236和 PHP29635的制备

目的载体PHP23236(图6，SEQ ID NO：6)是通过用质粒PHP23235(图8，SEQ ID NO：8)转化包含质粒PHP10523(图7，SEQ ID NO：7)的农杆菌菌株LBA4404并分离所得的共整合产物而获得。目的载体PHP23236可被用于如实施例16所述的与入门克隆的重组反应，以产生用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的玉米表达载体。所关注的基因的表达是处于泛素启动子(SEQ ID NO：59)的控制之下。

PHP29635(图13，SEQ ID NO：13)是通过用质粒PIIOXS2a-FRT87(ni)m(图14，SEQ ID NO：56)转化包含质粒PHP10523的农杆菌菌株LBA4404并分离所得的共整合产物而获得。目的载体PHP29635可被用于如实施例16所述的与入门克隆的重组反应，以产生用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的玉米表达载体。所关注的基因的表达是处于S2A启动子(SEQ ID NO：60)的控制之下。

实施例16

用于转化Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系的质粒的制备

使用Invitrogen^TM

重组技术，可如实施例5A和9所述制备包含拟南芥ndk基因(AT4G23900)或玉米NDK样同源物的入门克隆，该克隆用于定向克隆每个基因进入目的载体PHP23236(实施例15)用于在泛素启动子下表达，或进入目的载体PHP29635(实施例15)用于在S2A启动子下表达。每一种表达载体都是用于农杆菌介导玉米转化的T-DNA二元载体。

Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系可如实施例17中所述用表达构建体转化。

实施例17

用验证过的拟南芥前导基因和来自其他物种的对应同源物转化 Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系

为了检查所得表型，玉米植株可如实施例16所述进行转化以过表达拟南芥AT4G23900基因和来自其他物种的同源物，如表1列出的基因。除了如实施例16所述的启动子之外，其他启动子，例如S2A和S2B启动子、玉米ROOTMET2启动子、玉米Cyclo、CR1BIO、CRWAQ81以及玉米ZRP2.4447，可用于引导ndk和NDK样基因在玉米中的表达。此外，多种终止子，例如但不限于PINII终止子，可用于完成所关注基因在Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系中的表达。

受体植株

受体植株细胞可来自具有短的生活周期(“快速循环”)、大小减少以及转化潜能高的单一玉米品系。对玉米典型的这些植株细胞是来自可公开获得的Gaspe Bay Flint(GBF)品系变种的植株细胞。一种可能的候选植株品系变种是GBF×QTM(Quick Turnaround Maize(快速周转玉米)，选择用于在温室条件下生长的Gaspe Bay Flint的可公开获得形式)的F1杂交种，其在Tomes等人的美国专利申请公开2003/0221212中有所公开。从该品系获得的转基因植株具有如此小的大小使得它们可在4英寸的盆中生长(是正常大小的玉米植株所需空间的1/4)并且它们在少于2.5个月时间内成熟。(传统上，一旦转基因植株适应温室后需要3.5个月来获得转基因T0种子。)另一合适的品系是GS3(高度可转化的品系)×Gaspe Flint的双单倍体品系。还有另一种合适的品系是携带引起较早开花、高度减小或这两者的转基因的可转化的优良近交系。

转化规程

任何合适的方法可用于将转基因引入玉米细胞中，包括但不限于利用基于农杆菌载体的接种类型的步骤，如实施例9所述。转化可在受体(靶标)植株的未成熟胚上进行。

精确的生长和植株跟踪

将由转化的玉米胚产生的转基因(T0)植株的事件群体在受控的温室环境中栽培，该温室使用改良的随机分块(block)设计以降低或消除环境误差。随机分块设计是这样一种植株布局，在该布局中，实验植株被分成组(如，每组30株植株)，称为块，而每株植株随块被随机分配一个位置。

对于一组30株植株，24株转化的实验植株和6株对照植株(具有设定好的表型的植株)(总起来说称为“重复组”)被置于盆中，这些盆在位于温室内的桌子上布置成阵列(也叫做重复组或块)。每株植株(对照植株或实验植株)随块被随机分配一个位置，所述的块映射一个唯一的、温室物理位置以及映射该重复组。在单次实验中多个30株植株的重复组中的每一个可栽培在相同的温室中。应该确定重复组的布局(布置方式)以使对空间的要求最小以及温室内的环境影响最小。这样一种布局可称为压缩的温室布局。

对于加入特定的对照组的一种替代方法是鉴定不表达所关注基因的那些转基因植株。可将诸如RT-PCR之类的多种技术应用于定量评估引入基因的表达水平。可将不表达转基因的T0植株与表达转基因的那些植株进行比较。

在整个评价过程中鉴定和跟踪事件群体中的每株植株，并且从那些植株收集的数据自动与那些植株相关联，使得所搜集的数据可与由该植株携带的转基因关联。例如，每个植株容器具有机器可读的标签(例如通用货单代码(UPC)条形码)，该标签包含了关于植物身份的信息，身份信息继而又与温室位置相关，使得从植物获得的数据可自动与该植物相关联。

作为另外一种选择，可使用任何有效的、机器可读的植物识别系统，例如二维矩阵代码或甚至是射频识别标签(RFID)，其中数据被接收并由射频接收器/处理器进行翻译。参见美国公布的专利申请2004/0122592，将其以引用的方式并入本文。

利用三维成像进行表型分析

对T0事件群体中的每株温室植株(包括任何对照植株)分析所关注的农学特性，并且以这样一种方式记录或存储每株植株的农学数据，该方式使得数据与该植株的辨识数据(见上面)相关联。可利用与上述类似的实验设计，可在T1代中完成对表型(基因效应)的确认。

在植物的整个温室生活周期中，利用定量的非破坏性成像技术在表型水平上来分析T0植株以评估所关注的性状。优选的是，将数字成像分析仪用于整株植物的自动多维分析。成像可在温室内进行。将两个摄像系统(位于顶部和侧面)和用于旋转植物的装置用于从所有侧面观察植物和成像。从每株植物的顶部、前面和侧面采集图像。所有的三个图像一起提供了足够的信息用于评价每株植物的生物量、大小和形态。

由于植物在第一片叶片从土壤显现出来时到植物处于它们发育的末期时大小的改变，最好是从顶部以较高的放大倍率记录植物发育的早期。这可通过利用完全由成像软件控制的自动变焦镜头系统来完成。

在单次成像分析操纵中，进行如下事件：(1)将植株传送至分析仪区域内，旋转360度以便其机器可读标签可被读取，并且让其保持静止直至其叶片停止移动；(2)获取侧面图像并将其输入数据库；(3)将植株旋转90度并再次让其保持静止直至其叶片停止移动；以及(4)将该植株传送出分析仪。

每24小时的周期让植物至少6个小时处于黑暗以便具有正常的白天/黑夜周期。

成像仪器

可使用任何合适的成像仪器，包括但不限于可从LemnaTec GmbH(Wurselen，Germany)商购获得的光谱数字成像仪。获取图像并用具有1/2″IT Progressive Scan IEE CCD成像设备的LemnaTec ScanalyzerHTS LT-0001-2进行分析。该成像照相机可配备有自动变焦、自动调节光圈和自动聚焦。可利用LemnaTec软件设定所有的照相机设置。优选的是，对于主要组成成像分析仪的仪器差异小于约5％，对于次要组成成像分析仪的仪器差异小于约10％。

软件

成像分析系统包括用于颜色和结构分析的LemnaTec HTS Bonit软件程序和用于存储约500,000次分析的数据(包括分析数据)的服务器数据库。原始图像和分析过的图像储存在一起以允许用户根据需要进行再次分析。可将数据库连接至成像硬件用于自动的数据收集和存储。可将多种市售的软件系统(如Matlab等)用于定量判读成像数据，并且这些软件系统中的任一种均可应用于图像数据集。

传送系统

具有植物旋转装置的传送系统可用于将植物传送至成像区域并在成像过程中选择植物。例如，将最多4株植物(每株最高高度为1.5m)装上汽车，该汽车在循环的传送系统上行进并通过成像测量区域。在这种情况下，该单位(成像分析仪和传送环线)的总占有面积为约5m×5m。

可扩大传送系统以同时容纳更多植物。将植物沿传送环线传送至成像区域并对每株植物分析最多50秒。获取植物的三个视图。传送系统以及成像设备应该能够用于温室环境条件。

照明

任何合适的照明模式可用于图像采集。例如，可在暗背景上使用顶部照明。作为另外一种选择，可采用使用白色背景的顶部照明和背部照明的组合。应该将被照亮的区域围起来以确保恒定的照明条件。遮蔽物应该长于测量区域使得能保持恒定的光条件而不需要打开和关闭门。作为另一种选择，可变化照明以引起转基因(如，绿色荧光蛋白(GFP)、红色荧光蛋白(RFP))的激发或者引起内源性(如叶绿素)荧光基团的激发。

基于三维成像的生物量评价

为了更好地评价生物量，应该从至少三个轴(优选顶部视图和两个侧面(侧面1和侧面2)视图)获取植物图像。然后分析这些图像以将植物从背景(盆和花粉控制袋(如果适用的话))分离。可通过如下计算来评价植物的体积：

在上面的等式中，体积和面积的单位是“任意单位”。在该体系中，任意单位完全足以检测基因对植物大小和生长影响，因为所需的是检测与实验平均值或对照平均值的差值(正较大和负较小两者)。大小(如面积)的任意单位可通过将物理参照加入到成像过程而轻易地转化成物理量度。例如，可在顶部成像过程和侧面成像过程两者中均包括已知面积的物理参照。基于这些物理参照的面积，可测定转换因子以允许从像素转换为面积单位，例如平方厘米(cm²)。物理参照可以是或可以不是独立的样本。例如，具有已知直径和高度的盆足可用作物理参照。

颜色分类

成像技术还可用于确定植物颜色以及用于将植物颜色归为各种衍生类型。将图像颜色归属于颜色类型是LemnaTec软件的固有特色。使用其他图像分析软件系统，可通过多种计算方法确定颜色分类。

对于植物大小和生长参数的测定，一种有用的分类方案是定义一种单一颜色方案，包括绿色的两种或三种色调，此外，还有关于缺绿病、坏死和漂白(在这些条件出现时)的颜色类型。还使用了背景颜色类型，其包括图像中的非植物颜色(例如盆和土壤颜色)，并将这些像素特别地从测定大小中排除。在受控的恒定照明下分析植物，使得可定量一株植物内随时间推移的任何改变，或者植物之间或植物不同分枝之间的任何改变(如季节差异)。

除了其在测定植物的大小、生长中的有效性之外，颜色分类还可用于评估其他产量构成性状。对于这些其他产量构成性状，可使用另外的颜色分离方案。例如，称为“保绿度(staygreen)”的性状(已经将其与产量的提高相关联)可通过颜色分类来评估，该颜色分类将绿色色调与黄色和棕色色调(其指示老化的组织)相分离。通过将这种颜色分类应用于在T0或T1植物生命周期末期获取的图像，可鉴定绿色的量相对于黄色和棕色(例如，可表示为绿色/黄色比率)增加的植物。这种绿色/黄色比率具有显著差异的植物可被鉴定为携带影响这种重要农学特性的转基因。

熟练的植物学家将认识到可指示植物健康或应激反应的其他植物颜色(花青素)的出现，并且认识到其他颜色分类方案可提供对基因在与这些响应相关的性状方面的作用的进一步度量。

植物构造分析

改变植物构造参数的转基因也可用本发明鉴定，包括诸如最大高度和宽度、节间距离、叶与茎之间的角度、在节处开始的叶片数以及叶片长度。LemnaTec系统软件可如下用于确定植物构造。在第一成像步骤中将植物简化至其主要的几何构造，并且随后基于该图像可进行不同构造参数的参数化鉴定。或者是单独地或者是组合地修改任何这些构造参数的转基因可通过应用此前所述的统计方法来鉴定。

花粉脱落日期

花粉脱落日期是转基因植物中要分析的一个重要参数，并且可通过活性雄花第一次出现在植物上来确定。为了找到雄花目标，通过用颜色对茎的上端进行分类以检测黄色或紫色花药。然后将这种颜色分类分析用于定义活性花，活性花继而可用于计算花粉脱落日期。

作为另外一种选择，花粉脱落日期和其他易于在视觉上检测到的植物属性(如授粉日期、第一穗丝日期)可由负责进行植物看护的工作人员来记录。为了使数据完整性和过程效率最大化，通过利用相同的由LemnaTec光谱数字分析设备利用的条形码来跟踪该数据。可将具有条形码阅读器的电脑、掌上设备或笔记本电脑用于使记录观察时间、植物标识符的数据捕捉变得容易，并且使捕捉数据的操作者感觉舒适。

植物的取向

以接近商业栽培的密度种植的成熟玉米植物通常具有平面的构造。也就是说，植物具有一可清晰分辨的宽的侧面和窄的侧面。对来自植物宽侧的图像进行测定。对于每株植物，给其赋予一个明确界定的基本取向以获得宽侧图像与窄侧(edgewise)图像之间的最大差别。将顶部图像用于确定植物的主轴，而将额外的旋转装置用于在开始主图像采集前将植物转至合适的取向。

实施例18

在氮限制条件下筛选Gaspe Bay Flint衍生的玉米品系和杂交种

一些转基因植物将含有两个或三个剂量的Gaspe Flint-3与一个剂量的GS3(GS3/(Gaspe-3)2X或GS3/(Gaspe-3)3X)，并且对于显性转基因将会以1∶1分离。其他转基因植物将是常规近交系，并将被用于顶交以生成测试杂交种。将植物在Turface中栽培，每天用1mMKNO₃生长培养基和2mM KNO₃或更高的生长培养基浇洒四次(见图17)。生长于1mM KNO₃培养基中的对照植物将绿度更低，产生更少的生物量并在开花期具有更小的穗。Gaspe衍生的品系将生长到开花阶段，而常规近交系和杂交种将生长到V4至V5阶段。

用统计学确定处理株之间所观察到的差异是否是显著差异。图18示出了一种方法，该方法将字母放在数值后面。同一列中其后具有相同字母(不是字母组)的那些值不具有显著的差异。使用该方法，如果在一列中的值的后面没有字母，则该列中的任意这些值之间不存在显著的差异，换句话讲，该列中的所有这些值是均等的。与无效转基因相比较，转基因的表达将导致植物在1mM KNO₃中具有改善的植物生长。因此生物量和绿度数据(如实施例17所述)将在取样(Gaspe在开花期，而其他的品系在V4-V5阶段)时间采集，并与无效转基因植物比较。此外，将在基本组织中分析植物中的总氮。在开花期的生长、绿度、氮积聚和穗大小的改善将指示氮利用效率提高。

实施例19

具有验证过的拟南芥前导基因(AT4G23900)的玉米品系的产量 分析

可通过直接转化或者从单独转化的品系基因渗入而将含有验证过的拟南芥基因的重组DNA构建体导入玉米品系内。

可将转基因植物(近交系或顶交种)进行更强的基于田间的试验，以研究在不同环境条件(例如改变水和营养物质可利用性)下的产量增加和/或稳定性。标准化的产量试验将通常包括4至6次重复，以及至少4个位置。将收集合并的收获产量数据。

可对产量进行后续分析以确定含有验证过的拟南芥前导基因的植株在与不含有验证过的拟南芥前导基因的对照植株(无效构建体或野生型)比较时，在不同环境条件下是否具有产量的改善。可在氮胁迫或水分胁迫环境下测量产量减少情况。包含验证过的拟南芥前导基因的植物具有相对于对照植物更少的产量损失，优选50％更少的产量损失。

实施例20

测定玉米根构造改变的测定法

测定转基因玉米植物在幼苗期、花期或成熟期的根构造改变。测量玉米植物的根构造改变的测定法包括但不限于下面概述的方法。为了便于手动或自动地测定根构造改变，可让玉米植物在透明的盆中生长。

1)根量(干重)。让植物在Turface中生长。将烘干的根和根组织称重并计算根/苗比率。

2)侧根分枝的水平。侧根分枝的程度(如侧根数量、侧根长度)通过这样确定：从完整的根系进行二次取样，将样本用平面扫描器或数码相机成像并用WinRHIZO^TM软件(RegentInstruments Inc.)分析。

3)根带宽度的测量。根带是植物成熟时在温室栽培盆的底部形成的根带或根量。测量成熟时根带的厚度(以mm为单位)，作为对根量的粗略评价。

4)节生根的计数。从支持培养基(support medium)(如盆栽混合物(potting mix))中分离出根后，可测定上部节位处出现的冠根数。另外，可测量冠根和/或支柱根的角度。对节生根和节生根的分枝量的数值分析形成对上述手动方法的另一种延伸。

对提取的有关根表型的所有数据进行统计分析(通常为t检验)，以将转基因根与非转基因姊妹株植株的根进行比较。在多个事件和/或构建体涉及该分析的情况下，还可使用单因素方差分析。

实施例21

包含拟南芥ndk基因的玉米幼苗的根与来自不包含ndk基因的幼 苗的根的比较分析

如实施例14A所述制备包含GOS2启动子和拟南芥ndk基因的玉米表达载体。如实施例14C所述经由农杆菌介导的转化，通过制备共合体载体(PHP29007)完成玉米转化，并使用如实施例20所述的幼苗检测分析法对根进行检测。在温室实验中检测分析所有10个来自构建体PHP29007(ZM-GOS2::AT-NDK4)的事件，其中每个事件使9个植株在Turface培养基中生长至V4阶段。种子来自T1代(来自从T0植株收集的穗)。实验中的对照是相同杂交玉米品系的15个植株，该植株不包含重组构建体并生长至相同阶段。使用完全随机分组设计种植种子。在种植后19天收获植株，此时它们达到V4阶段。洗涤根部并从苗中分开收集。在用分析天平称量干重之前，所有样本进行烘干。

从表5中可以看到，据发现与对照植物相比较，共4个事件的苗干重发生显著改变，2个事件的根干重发生显著改变。

进行t检验分析以显示每个转基因事件和对照植物之间的显著差异。显示了每种特性的p值：根干重、苗干重、以及根与苗的比率。粗体字指示转基因植物具有比对照植物更高的值。具有小于0.1的p值的那些值用星号(^*)指示。

表5

转基因和对照幼苗的比较

事件	根干重	苗干重	根/苗比率
				1	0.330	0.070	0.305
2	0.405	0411	0.500
				3	0.002*	0.000*	0.008＊
4	0.000*	0.000*	0.016＊
				5	0.225	0.082＊	0.436
6	0.573	0.752	0.809
				7	0.955	0.576	0.181
8	0.261	0.074＊	0.407
				9	0.683	0.463	0.608
10	0.682	0.663	0.368

实施例22

在田间标准氮和低氮条件下生长的转基因杂交种产量测试。

在2007季，在Johnston，Iowa的农场中进行田间实验。实验包括表达由玉米GOS2启动子启动的拟南芥NDK4基因的十个(10)转基因事件和两个对照植物。一个对照植物由批杂交所有10个事件的非无效转基因与无效转基因组成。另一个对照植物由转化中使用的野生型(不包含重组构建体的相同杂交玉米品系)组成。所有植物是由常见近交系受试者生成的杂交玉米品系。

施加两次处理，其中植物在“标准”氮条件下或在氮“耗尽”条件下进行处理。“标准”处理包括以250磅每英亩的比率施加氮肥。氮“耗尽”条件通过在其中土壤含氮量已经在以前多年的缺乏肥料条件下被作物耗尽的土地上种植转基因和非转基因对照玉米品系获得。

氮耗尽与标准氮处理相比引起30％的产量减少，并且需要每英亩100磅的施肥比率。用2排小块土地进行实验，其密度为每英亩32000株植物。在标准氮和氮耗尽处理中分别包括四次(4)和六次(6)重复。在2007年5月21日种植植物，并在2007年9月26日和27日一起收获。以每英亩蒲式耳来测量产量。

实验的产量数据在下表6中综述。总体上，在低氮条件下的一个(1)事件和在标准氮条件下的四个(4)事件显示与批无效转基因对照植物相比，产量显著增加。在低氮条件下一个事件具有与对照植物相比的产量显著减少。大部分测试的事件显示产量比无效转基因增加的正向趋势。

表6：在低氮和标准氮条件下转基因植物相对于对照植物的产量测 试。

事件	产量相对于无效转基因的增加	显著性	处理
				1	6.74％		低氮
2	7.05％		低氮
				3	-1.84％		低氮
4	0.33％		低氮
				5	1.66％		低氮
6	4.34％		低氮
				7	-9.10％	P＝0.1	低氮
8	7.89％	P＝0.1	低氮
				9	4.13％		低氮
10	1.05％		低氮
				1	3.25％		标准氮

事件	产量相对于无效转基因的增加	显著性	处理
				2	2.40％		标准氮
3	-1.71％		标准氮
				4	9.16％	P＝0.1	标准氮
5	2.70％		标准氮
				6	5.26％	P＝0.1	标准氮
7	6.66％	P＝0.1	标准氮
				8	-0.04％		标准氮
9	-2.57％		标准氮
				10	7.27％	P＝0.1	标准氮

序列表

<110>DuPont de Nemours

     Taramino，Graziana

     Tingey，Scott

     Sakai，Hajime

     Allen，Steve

     Tomes，Dwight

     Luck，Stanley

     Niu，Xiaomu

 

<120>涉及编码核苷二磷酸激酶(NDK)多肽及其同源物基因的具有改变根结构的植物、相关

     的构建体以及方法

 

<130>BB1573 USNA

 

<150>60/968754

<151>2007-08-29

 

<160>61

 

<170>PatentIn版本3.3

 

<210>1

<211>18444

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>1

catgaatcaa acaaacatac acagcgactt attcacacga gctcaaatta caacggtata   60

tatcctgccg tcgacaacca tggtctagac aggatccccg ggtaccgagc tcgaatttgc  120

aggtcgactg cgtcatccct tacgtcagtg gagatatcac atcaatccac ttgctttgaa  180

gacgtggttg gaacgtcttc tttttccacg atgctcctcg tgggtggggg tccatctttg  240

ggaccactgt cggcagaggc atcttgaacg atagcctttc ctttatcgca atgatggcat  300

ttgtaggtgc caccttcctt ttctactgtc cttttgatga agtgacagat agctgggcaa  360

tggaatccga ggaggtttcc cgatattacc ctttgttgaa aagtctcaat tgccctttgg  420

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cgatcgccct tcccaacagt tgcgcagcct gaatggcgaa tggcgcctga tgcggtattt    3000

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ctctgatgcc gcatagttaa gccagccccg acacccgcca acacccgctg acgcgccctg    3120

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acgcctattt ttataggtta atgtcatgat aataatggtt tcttagacgt caggtggcac    3300

ttttcgggga aatgtgcgcg gaacccctat ttgtttattt ttctaaatac attcaaatat    3360

gtatccgctc atgagacaat aaccctgata aatgcttcaa taatattgaa aaaggaagag    3420

tatgagtatt caacatttcc gtgtcgccct tattcccttt tttgcggcat tttgccttcc    3480

tgtttttgct cacccagaaa cgctggtgaa agtaaaagat gctgaagatc agttgggtgc    3540

acgagtgggt tacatcgaac tggatctcaa cagcggtaag atccttgaga gttttcgccc    3600

cgaagaacgt tttccaatga tgagcacttt taaagttctg ctatgtggcg cggtattatc    3660

ccgtattgac gccgggcaag agcaactcgg tcgccgcata cactattctc agaatgactt    3720

ggttgagtac tcaccagtca cagaaaagca tcttacggat ggcatgacag taagagaatt    3780

atgcagtgct gccataacca tgagtgataa cactgcggcc aacttacttc tgacaacgat    3840

cggaggaccg aaggagctaa ccgctttttt gcacaacatg ggggatcatg taactcgcct    3900

tgatcgttgg gaaccggagc tgaatgaagc cataccaaac gacgagcgtg acaccacgat    3960

gcctgtagca atggcaacaa cgttgcgcaa actattaact ggcgaactac ttactctagc    4020

ttcccggcaa caattaatag actggatgga ggcggataaa gttgcaggac cacttctgcg    4080

ctcggccctt ccggctggct ggtttattgc tgataaatct ggagccggtg agcgtgggtc    4140

tcgcggtatc attgcagcac tggggccaga tggtaagccc tcccgtatcg tagttatcta    4200

cacgacgggg agtcaggcaa ctatggatga acgaaataga cagatcgctg agataggtgc    4260

ctcactgatt aagcattggt aactgtcaga ccaagtttac tcatatatac tttagattga    4320

tttaaaactt catttttaat ttaaaaggat ctaggtgaag atcctttttg ataatctcat    4380

gaccaaaatc ccttaacgtg agttttcgtt ccactgagcg tcagaccccg tagaaaagat    4440

caaaggatct tcttgagatc ctttttttct gcgcgtaatc tgctgcttgc aaacaaaaaa    4500

accaccgcta ccagcggtgg tttgtttgcc ggatcaagag ctaccaactc tttttccgaa    4560

ggtaactggc ttcagcagag cgcagatacc aaatactgtc cttctagtgt agccgtagtt    4620

aggccaccac ttcaagaact ctgtagcacc gcctacatac ctcgctctgc taatcctgtt    4680

accagtggct gctgccagtg gcgataagtc gtgtcttacc gggttggact caagacgata    4740

gttaccggat aaggcgcagc ggtcgggctg aacggggggt tcgtgcacac agcccagctt    4800

ggagcgaacg acctacaccg aactgagata cctacagcgt gagcattgag aaagcgccac    4860

gcttcccgaa gggagaaagg cggacaggta tccggtaagc ggcagggtcg gaacaggaga    4920

gcgcacgagg gagcttccag ggggaaacgc ctggtatctt tatagtcctg tcgggtttcg    4980

ccacctctga cttgagcgtc gatttttgtg atgctcgtca ggggggcgga gcctatggaa    5040

aaacgccagc aacgcggcct ttttacggtt cctggccttt tgctggcctt ttgctcacat    5100

gttctttcct gcgttatccc ctgattctgt ggataaccgt attaccgcct ttgagtgagc    5160

tgataccgct cgccgcagcc gaacgaccga gcgcagcgag tcagtgagcg aggaagcgga    5220

agagcgccca atacgcaaac cgcctctccc cgcgcgttgg ccgattcatt aatgcagctg    5280

gcacgacagg tttcccgact ggaaagcggg cagtgagcgc aacgcaatta atgtgagtta    5340

gctcactcat taggcacccc aggctttaca ctttatgctt ccggctcgta tgttgtgtgg    5400

aattgtgagc ggataacaat ttcacacagg aaacagctat gaccatgatt acgccaagct    5460

ttctaggggg ggggtaccga tctgagatcg gtaacgaaaa cgaacgggta gggatgaaaa    5520

cggtcggtaa cggtcggtaa aatacctcta ccgttttcat tttcatattt aacttgcggg    5580

acggaaacga aaacgggata taccggtaac gaaaacgaac gggataaata cggtaatcga    5640

aaaccgatac gatccggtcg ggttaaagtc gaaatcggac gggaaccggt atttttgttc    5700

ggtaaaatca cacatgaaaa catatattca aaacttaaaa acaaatataa aaaattgtaa    5760

acacaagtct taattaaaca tagataaaat ccatataaat ctggagcaca catagtttaa    5820

tgtagcacat aagtgataag tcttgggctc ttggctaaca taagaagcca tataagtcta    5880

ctagcacaca tgacacaata taaagtttaa aacacatatt cataatcact tgctcacatc    5940

tggatcactt agcatgctac agctagtgca atattagaca ctttccaata tttctcaaac    6000

ttttcactca ttgcaacggc cattctccta atgacaaatt tttcatgaac acaccattgg    6060

tcaatcaaat cctttatctc acagaaacct ttgtaaaata aatttgcagt ggaatattga    6120

gtaccagata ggagttcagt gagatcaaaa aacttcttca aacacttaaa aagagttaat    6180

gccatcttcc actcctcggc tttaggacaa attgcatcgt acctacaata attgacattt    6240

gattaattga gaatttataa tgatgacatg tacaacaatt gagacaaaca tacctgcgag    6300

gatcacttgt tttaagccgt gttagtgcag gcttataata taaggcatcc ctcaacatca    6360

aataggttga attccatcta gttgagacat catatgagat ccctttagat ttatccaagt    6420

cacattcact agcacacttc attagttctt cccactgcaa aggagaagat tttacagcaa    6480

gaacaatcgc tttgattttc tcaattgttc ctgcaattac agccaagcca tcctttgcaa    6540

ccaagttcag tatgtgacaa gcacacctca catgaaagaa agcaccatca caaactagat    6600

ttgaatcagt gtcctgcaaa tcctcaatta tatcgtgcac agctacttca tttgcactag    6660

cattatccaa agacaaggca aacaattttt tctcaatgtt ccacttaacc atgattgcag    6720

tgaaggtttg tgataacctt tggccagtgt ggcgcccttc aacatgaaaa aagccaacaa    6780

ttcttttttg gagacaccaa tcatcatcaa tccaatggat ggtgacacac atgtatgact    6840

tattttgaca agatgtccac atatccatag ttgtactgaa gcgagactga acatctttta    6900

gttttccata caacttttct ttttcttcca aatacaaatc catgatatat tttctagcag    6960

tgacacggga ctttattgga aagtgagggc gcagagactt aacaaactca acaaagtact    7020

catgttctac aatattgaaa ggatattcat gcatgattat tgccaaatga agcttcttta    7080

ggctaaccac ttcatcgtac ttataaggct caatgagatt tatgtctttg ccatgatcct    7140

tttcactttt tagacacaac tgacctttaa ctaaactatg tgatgttctc aagtgatttc    7200

gaaatccgct tgttccatga tgaccctcag ccctatactt agccttgcaa ttaggaaagt    7260

tgcaatgtcc ccatacctga acgtatttct ttccatcgac ctccacttca atttccttct    7320

tggtgaaatg ctgccataca tccgatgtgc acttctttgc cctcttctgt ggtgcttctt    7380

cttcgggttc aggttgtggc tgtggttgtg gttctggttg tggttgtggt tgtggttgtg    7440

gttcatgaac aatagccata tcatcttgac tcggatctgt agctgtacca tttgcattac    7500

tactgcttac actctgaata aaatgcctct cggcctcagc tgttgatgat gatggtgatg    7560

tgcggccaca tccatgccca cgcgcacgtg cacgtacatt ctgaatccga ctagaagagg    7620

cttcagcttt tcttttcaac cctgttataa acagattttt cgtattattc tacagtcaat    7680

atgatgcttc ccaatctaca accaattagt aatgctaatg ctattgctac tgtttttcta    7740

atatatacct tgagcatatg cagagaatac ggaatttgtt ttgcgagtag aaggcgctct    7800

tgtggtagac atcaacttgg ccaatcttat ggctgagcct gagggaggat tatttccaac    7860

cggaggcgtc atctgaggaa tggagtcgta gccggctagc cgaagtggag agcagagccc    7920

tggacagcag gtgttcagca atcagcttgg tgctgtactg ctgtgacttg tgagcacctg    7980

gacggctgga cagcaatcag caggtgttgc agagcccctg gacagcacac aaatgacaca    8040

acagcttggt gcaatggtgc tgacgtgctg tactgctaag tgctgtgagc ctgtgagcag    8100

ccgtggagac agggagaccg cggatggccg gatgggcgag cgccgagcag tggaggtctg    8160

gaggaccgct gaccgcagat ggcggatggc ggatgggcgg accgcggatg ggcgagcagt    8220

ggagtggagg tctgggcgga tgggcggacc gcggcgcgga tgggcgagtc gcgagcagtg    8280

gagtggaggg cggaccgtgg atggcggcgt ctgcgtccgg cgtgccgcgt cacggccgtc    8340

accgcgtgtg gtgcctggtg cagcccagcg gccggccggc tgggagacag ggagagtcgg    8400

agagagcagg cgagagcgag acgcgtcgcc ggcgtcggcg tgcggctggc ggcgtccgga    8460

ctccggcgtg ggcgcgtggc ggcgtgtgaa tgtgtgatgc tgttactcgt gtggtgcctg    8520

gccgcctggg agagaggcag agcagcgttc gctaggtatt tcttacatgg gctgggcctc    8580

agtggttatg gatgggagtt ggagctggcc atattgcagt catcccgaat tagaaaatac    8640

ggtaacgaaa cgggatcatc ccgattaaaa acgggatccc ggtgaaacgg tcgggaaact    8700

agctctaccg tttccgtttc cgtttaccgt tttgtatatc ccgtttccgt tccgttttcg    8760

ttttttacct cgggttcgaa atcgatcggg ataaaactaa caaaatcggt tatacgataa    8820

cggtcggtac gggattttcc catcctactt tcatccctga gattattgtc gtttctttcg    8880

cagatcggta ccccccccct agagtcgaca tcgatctagt aacatagatg acaccgcgcg    8940

cgataattta tcctagtttg cgcgctatat tttgttttct atcgcgtatt aaatgtataa    9000

ttgcgggact ctaatcataa aaacccatct cataaataac gtcatgcatt acatgttaat    9060

tattacatgc ttaacgtaat tcaacagaaa ttatatgata atcatcgcaa gaccggcaac    9120

aggattcaat cttaagaaac tttattgcca aatgtttgaa cgatctgctt cgacgcactc    9180

cttctttagg tacggactag atctcggtga cgggcaggac cggacggggc ggtaccggca    9240

ggctgaagtc cagctgccag aaacccacgt catgccagtt cccgtgcttg aagccggccg    9300

cccgcagcat gccgcggggg gcatatccga gcgcctcgtg catgcgcacg ctcgggtcgt    9360

tgggcagccc gatgacagcg accacgctct tgaagccctg tgcctccagg gacttcagca    9420

ggtgggtgta gagcgtggag cccagtcccg tccgctggtg gcggggggag acgtacacgg    9480

tcgactcggc cgtccagtcg taggcgttgc gtgccttcca ggggcccgcg taggcgatgc   9540

cggcgacctc gccgtccacc tcggcgacga gccagggata gcgctcccgc agacggacga   9600

ggtcgtccgt ccactcctgc ggttcctgcg gctcggtacg gaagttgacc gtgcttgtct   9660

cgatgtagtg gttgacgatg gtgcagaccg ccggcatgtc cgcctcggtg gcacggcgga   9720

tgtcggccgg gcgtcgttct gggctcatgg atctggattg agagtgaata tgagactcta   9780

attggatacc gaggggaatt tatggaacgt cagtggagca tttttgacaa gaaatatttg   9840

ctagctgata gtgaccttag gcgacttttg aacgcgcaat aatggtttct gacgtatgtg   9900

cttagctcat taaactccag aaacccgcgg ctgagtggct ccttcaatcg ttgcggttct   9960

gtcagttcca aacgtaaaac ggcttgtccc gcgtcatcgg cgggggtcat aacgtgactc  10020

ccttaattct ccgctcatga tccccgggta ccgagctcga attgcggctg agtggctcct  10080

tcaatcgttg cggttctgtc agttccaaac gtaaaacggc ttgtcccgcg tcatcggcgg  10140

gggtcataac gtgactccct taattctccg ctcatgatct tgatcccctg cgccatcaga  10200

tccttggcgg caagaaagcc atccagttta ctttgcaggg cttcccaacc ttaccagagg  10260

gcgccccagc tggcaattcc ggttcgcttg ctgtatcgat atggtggatt tatcacaaat  10320

gggacccgcc gccgacagag gtgtgatgtt aggccaggac tttgaaaatt tgcgcaacta  10380

tcgtatagtg gccgacaaat tgacgccgag ttgacagact gcctagcatt tgagtgaatt  10440

atgtgaggta atgggctaca ctgaattggt agctcaaact gtcagtattt atgtatatga  10500

gtgtatattt tcgcataatc tcagaccaat ctgaagatga aatgggtatc tgggaatggc  10560

gaaatcaagg catcgatcgt gaagtttctc atctaagccc ccatttggac gtgaatgtag  10620

acacgtcgaa ataaagattt ccgaattaga ataatttgtt tattgctttc gcctataaat  10680

acgacggatc gtaatttgtc gttttatcaa aatgtacttt cattttataa taacgctgcg  10740

gacatctaca tttttgaatt gaaaaaaaat tggtaattac tctttctttt tctccatatt  10800

gaccatcata ctcattgctg atccatgtag atttcccgga catgaagcca tttacaattg  10860

aatatatcct gccgccgctg ccgctttgca cccggtggag cttgcatgtt ggtttctacg  10920

cagaactgag ccggttaggc agataatttc cattgagaac tgagccatgt gcaccttccc  10980

cccaacacgg tgagcgacgg ggcaacggag tgatccacat gggactttta aacatcatcc  11040

gtcggatggc gttgcgagag aagcagtcga tccgtgagat cagccgacgc accgggcagg  11100

cgcgcaacac gatcgcaaag tatttgaacg caggtacaat cgagccgacg ttcaccgtca  11160

ccctggatgc tgtaggcata ggcttggtta tgccggtact gccgggcctc ttgcgggata  11220

tcgtccattc cgacagcatc gccagtcact atggcgtgct gctagcgcta tatgcgttga  11280

tgcaatttct atgcgcaccc gttctcggag cactgtccga ccgctttggc cgccgcccag  11340

tcctgctcgc ttcgctactt ggagccacta tcgactacgc gatcatggcg accacacccg  11400

tcctgtggtc caacccctcc gctgctatag tgcagtcggc ttctgacgtt cagtgcagcc  11460

gtcttctgaa aacgacatgt cgcacaagtc ctaagttacg cgacaggctg ccgccctgcc  11520

cttttcctgg cgttttcttg tcgcgtgttt tagtcgcata aagtagaata cttgcgacta  11580

gaaccggaga cattacgcca tgaacaagag cgccgccgct ggcctgctgg gctatgcccg  11640

cgtcagcacc gacgaccagg acttgaccaa ccaacgggcc gaactgcacg cggccggctg  11700

caccaagctg ttttccgaga agatcaccgg caccaggcgc gaccgcccgg agctggccag  11760

gatgcttgac cacctacgcc ctggcgacgt tgtgacagtg accaggctag accgcctggc  11820

ccgcagcacc cgcgacctac tggacattgc cgagcgcatc caggaggccg gcgcgggcct  11880

gcgtagcctg gcagagccgt gggccgacac caccacgccg gccggccgca tggtgttgac  11940

cgtgttcgcc ggcattgccg agttcgagcg ttccctaatc atcgaccgca cccggagcgg  12000

gcgcgaggcc gccaaggccc gaggcgtgaa gtttggcccc cgccctaccc tcaccccggc  12060

acagatcgcg cacgcccgcg agctgatcga ccaggaaggc cgcaccgtga aagaggcggc  12120

tgcactgctt ggcgtgcatc gctcgaccct gtaccgcgca cttgagcgca gcgaggaagt  12180

gacgcccacc gaggccaggc ggcgcggtgc cttccgtgag gacgcattga ccgaggccga  12240

cgccctggcg gccgccgaga atgaacgcca agaggaacaa gcatgaaacc gcaccaggac  12300

ggccaggacg aaccgttttt cattaccgaa gagatcgagg cggagatgat cgcggccggg  12360

tacgtgttcg agccgcccgc gcacgtctca accgtgcggc tgcatgaaat cctggccggt  12420

ttgtctgatg ccaagctggc ggcctggccg gccagcttgg ccgctgaaga aaccgagcgc  12480

cgccgtctaa aaaggtgatg tgtatttgag taaaacagct tgcgtcatgc ggtcgctgcg  12540

tatatgatgc gatgagtaaa taaacaaata cgcaagggaa cgcatgaagt tatcgctgta  12600

cttaaccaga aaggcgggtc aggcaagacg accatcgcaa cccatctagc ccgcgccctg  12660

caactcgccg gggccgatgt tctgttagtc gattccgatc cccagggcag tgcccgcgat  12720

tgggcggccg tgcgggaaga tcaaccgcta accgttgtcg gcatcgaccg cccgacgatt  12780

gaccgcgacg tgaaggccat cggccggcgc gacttcgtag tgatcgacgg agcgccccag  12840

gcggcggact tggctgtgtc cgcgatcaag gcagccgact tcgtgctgat tccggtgcag  12900

ccaagccctt acgacatatg ggccaccgcc gacctggtgg agctggttaa gcagcgcatt  12960

gaggtcacgg atggaaggct acaagcggcc tttgtcgtgt cgcgggcgat caaaggcacg  13020

cgcatcggcg gtgaggttgc cgaggcgctg gccgggtacg agctgcccat tcttgagtcc  13080

cgtatcacgc agcgcgtgag ctacccaggc actgccgccg ccggcacaac cgttcttgaa  13140

tcagaacccg agggcgacgc tgcccgcgag gtccaggcgc tggccgctga aattaaatca  13200

aaactcattt gagttaatga ggtaaagaga aaatgagcaa aagcacaaac acgctaagtg  13260

ccggccgtcc gagcgcacgc agcagcaagg ctgcaacgtt ggccagcctg gcagacacgc  13320

cagccatgaa gcgggtcaac tttcagttgc cggcggagga tcacaccaag ctgaagatgt  13380

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cagagtaaat gagcaaatga ataaatgagt agatgaattt tagcggctaa aggaggcggc  13500

atggaaaatc aagaacaacc aggcaccgac gccgtggaat gccccatgtg tggaggaacg  13560

ggcggttggc caggcgtaag cggctgggtt gtctgccggc cctgcaatgg cactggaacc  13620

cccaagcccg aggaatcggc gtgagcggtc gcaaaccatc cggcccggta caaatcggcg  13680

cggcgctggg tgatgacctg gtggagaagt tgaaggccgc gcaggccgcc cagcggcaac  13740

gcatcgaggc agaagcacgc cccggtgaat cgtggcaagc ggccgctgat cgaatccgca  13800

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gcatcatgga cgtggccgtt ttccgtctgt cgaagcgtga ccgacgagct ggcgaggtga  13980

tccgctacga gcttccagac gggcacgtag aggtttccgc agggccggcc ggcatggcca  14040

gtgtgtggga ttacgacctg gtactgatgg cggtttccca tctaaccgaa tccatgaacc  14100

gataccggga agggaaggga gacaagcccg gccgcgtgtt ccgtccacac gttgcggacg  14160

tactcaagtt ctgccggcga gccgatggcg gaaagcagaa agacgacctg gtagaaacct  14220

gcattcggtt aaacaccacg cacgttgcca tgcagcgtac gaagaaggcc aagaacggcc  14280

gcctggtgac ggtatccgag ggtgaagcct tgattagccg ctacaagatc gtaaagagcg  14340

aaaccgggcg gccggagtac atcgagatcg agctagctga ttggatgtac cgcgagatca  14400

cagaaggcaa gaacccggac gtgctgacgg ttcaccccga ttactttttg atcgatcccg  14460

gcatcggccg ttttctctac cgcctggcac gccgcgccgc aggcaaggca gaagccagat  14520

ggttgttcaa gacgatctac gaacgcagtg gcagcgccgg agagttcaag aagttctgtt  14580

tcaccgtgcg caagctgatc gggtcaaatg acctgccgga gtacgatttg aaggaggagg  14640

cggggcaggc tggcccgatc ctagtcatgc gctaccgcaa cctgatcgag ggcgaagcat  14700

ccgccggttc ctaatgtacg gagcagatgc tagggcaaat tgccctagca ggggaaaaag  14760

gtcgaaaagg tctctttcct gtggatagca cgtacattgg gaacccaaag ccgtacattg  14820

ggaaccggaa cccgtacatt gggaacccaa agccgtacat tgggaaccgg tcacacatgt  14880

aagtgactga tataaaagag aaaaaaggcg atttttccgc ctaaaactct ttaaaactta  14940

ttaaaactct taaaacccgc ctggcctgtg cataactgtc tggccagcgc acagccgaag  15000

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ggcgcggaca agccgcgccg tcgccactcg accgccggcg cccacatcaa ggcaccctgc  15180

ctcgcgcgtt tcggtgatga cggtgaaaac ctctgacaca tgcagctccc ggagacggtc  15240

acagcttgtc tgtaagcgga tgccgggagc agacaagccc gtcagggcgc gtcagcgggt  15300

gttggcgggt gtcggggcgc agccatgacc cagtcacgta gcgatagcgg agtgtatact  15360

ggcttaacta tgcggcatca gagcagattg tactgagagt gcaccatatg cggtgtgaaa  15420

taccgcacag atgcgtaagg agaaaatacc gcatcaggcg ctcttccgct tcctcgctca  15480

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taatacggtt atccacagaa tcaggggata acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc  15600

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<210>2

<211>4291

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<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>2

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ctgttcgttg caacacattg atgagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa  660

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<210>3

<211>4762

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<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

<400>3

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tagccaggaa gagtttgtag aaacgcaaaa aggccatccg tcaggatggc cttctgctta    300

gtttgatgcc tggcagttta tggcgggcgt cctgcccgcc accctccggg ccgttgcttc    360

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ctgttcgttg caacacattg atgagcaatg cttttttata atgccaactt tgtacaaaaa    660

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attctgcatg gttgtgctta ccagaccgga gatattgaca tcatatatgc cttgagcaac   1680

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atttgcccat ggtgaaaacg ggggcgaaga agttgtccat attggccacg tttaaatcaa    2040

aactggtgaa actcacccag ggattggctg agacgaaaaa catattctca ataaaccctt    2100

tagggaaata ggccaggttt tcaccgtaac acgccacatc ttgcgaatat atgtgtagaa    2160

actgccggaa atcgtcgtgg tattcactcc agagcgatga aaacgtttca gtttgctcat    2220

ggaaaacggt gtaacaaggg tgaacactat cccatatcac cagctcaccg tctttcattg    2280

ccatacggaa ttccggatga gcattcatca ggcgggcaag aatgtgaata aaggccggat    2340

aaaacttgtg cttatttttc tttacggtct ttaaaaaggc cgtaatatcc agctgaacgg    2400

tctggttata ggtacattga gcaactgact gaaatgcctc aaaatgttct ttacgatgcc    2460

attgggatat atcaacggtg gtatatccag tgattttttt ctccatttta gcttccttag    2520

ctcctgaaaa tctcgataac tcaaaaaata cgcccggtag tgatcttatt tcattatggt    2580

gaaagttgga acctcttacg tgccgatcaa cgtctcattt tcgccaaaag ttggcccagg    2640

gcttcccggt atcaacaggg acaccaggat ttatttattc tgcgaagtga tcttccgtca    2700

caggtattta ttcggcgcaa agtgcgtcgg gtgatgctgc caacttagtc gactacaggt    2760

cactaatacc atctaagtag ttgattcata gtgactggat atgttgtgtt ttacagtatt    2820

atgtagtctg ttttttatgc aaaatctaat ttaatatatt gatatttata tcattttacg    2880

tttctcgttc agctttcttg tacaaagttg gcattataag aaagcattgc ttatcaattt    2940

gttgcaacga acaggtcact atcagtcaaa ataaaatcat tatttgccat ccagctgata    3000

tcccctatag tgagtcgtat tacatggtca tagctgtttc ctggcagctc tggcccgtgt    3060

ctcaaaatct ctgatgttac attgcacaag ataaaataat atcatcatga acaataaaac    3120

tgtctgctta cataaacagt aatacaaggg gtgttatgag ccatattcaa cgggaaacgt    3180

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gactaaactg gctgacggaa tttatgcctc ttccgaccat caagcatttt atccgtactc    3420

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atggctggcc tgttgaacaa gtctggaaag aaatgcataa acttttgcca ttctcaccgg  3720

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taataggttg tattgatgtt ggacgagtcg gaatcgcaga ccgataccag gatcttgcca  3840

tcctatggaa ctgcctcggt gagttttctc cttcattaca gaaacggctt tttcaaaaat  3900

atggtattga taatcctgat atgaataaat tgcagtttca tttgatgctc gatgagtttt  3960

tctaatcaga attggttaat tggttgtaac actggcagag cattacgctg acttgacggg  4020

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ggttggactc aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt  4440

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agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg  4560

gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt  4620

atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag  4680

gggggcggag cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt  4740

gctggccttt tgctcacatg tt                                           4762

 

<210>4

<211>16843

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>4

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aaacgccgtc gaagccgtgt gcgagacacc gcggccgccg gcgttgtgga tacctcgcgg    120

aaaacttggc cctcactgac agatgagggg cggacgttga cacttgaggg gccgactcac    180

ccggcgcggc gttgacagat gaggggcagg ctcgatttcg gccggcgacg tggagctggc    240

cagcctcgca aatcggcgaa aacgcctgat tttacgcgag tttcccacag atgatgtgga    300

caagcctggg gataagtgcc ctgcggtatt gacacttgag gggcgcgact actgacagat    360

gaggggcgcg atccttgaca cttgaggggc agagtgctga cagatgaggg gcgcacctat    420

tgacatttga ggggctgtcc acaggcagaa aatccagcat ttgcaagggt ttccgcccgt    480

ttttcggcca ccgctaacct gtcttttaac ctgcttttaa accaatattt ataaaccttg    540

tttttaacca gggctgcgcc ctgtgcgcgt gaccgcgcac gccgaagggg ggtgcccccc    600

cttctcgaac cctcccggcc cgctaacgcg ggcctcccat ccccccaggg gctgcgcccc    660

tcggccgcga acggcctcac cccaaaaatg gcagcgctgg cagtccttgc cattgccggg    720

atcggggcag taacgggatg ggcgatcagc ccgagcgcga cgcccggaag cattgacgtg    780

ccgcaggtgc tggcatcgac attcagcgac caggtgccgg gcagtgaggg cggcggcctg    840

ggtggcggcc tgcccttcac ttcggccgtc ggggcattca cggacttcat ggcggggccg    900

gcaattttta ccttgggcat tcttggcata gtggtcgcgg gtgccgtgct cgtgttcggg    960

ggtgcgataa acccagcgaa ccatttgagg tgataggtaa gattataccg aggtatgaaa   1020

acgagaattg gacctttaca gaattactct atgaagcgcc atatttaaaa agctaccaag   1080

acgaagagga tgaagaggat gaggaggcag attgccttga atatattgac aatactgata   1140

agataatata tcttttatat agaagatatc gccgtatgta aggatttcag ggggcaaggc   1200

ataggcagcg cgcttatcaa tatatctata gaatgggcaa agcataaaaa cttgcatgga   1260

ctaatgcttg aaacccagga caataacctt atagcttgta aattctatca taattgggta   1320

atgactccaa cttattgata gtgttttatg ttcagataat gcccgatgac tttgtcatgc   1380

agctccaccg attttgagaa cgacagcgac ttccgtccca gccgtgccag gtgctgcctc   1440

agattcaggt tatgccgctc aattcgctgc gtatatcgct tgctgattac gtgcagcttt   1500

cccttcaggc gggattcata cagcggccag ccatccgtca tccatatcac cacgtcaaag   1560

ggtgacagca ggctcataag acgccccagc gtcgccatag tgcgttcacc gaatacgtgc   1620

gcaacaaccg tcttccggag actgtcatac gcgtaaaaca gccagcgctg gcgcgattta   1680

gccccgacat agccccactg ttcgtccatt tccgcgcaga cgatgacgtc actgcccggc   1740

tgtatgcgcg aggttaccga ctgcggcctg agttttttaa gtgacgtaaa atcgtgttga   1800

ggccaacgcc cataatgcgg gctgttgccc ggcatccaac gccattcatg gccatatcaa   1860

tgattttctg gtgcgtaccg ggttgagaag cggtgtaagt gaactgcagt tgccatgttt    1920

tacggcagtg agagcagaga tagcgctgat gtccggcggt gcttttgccg ttacgcacca    1980

ccccgtcagt agctgaacag gagggacagc tgatagacac agaagccact ggagcacctc    2040

aaaaacacca tcatacacta aatcagtaag ttggcagcat cacccataat tgtggtttca    2100

aaatcggctc cgtcgatact atgttatacg ccaactttga aaacaacttt gaaaaagctg    2160

ttttctggta tttaaggttt tagaatgcaa ggaacagtga attggagttc gtcttgttat    2220

aattagcttc ttggggtatc tttaaatact gtagaaaaga ggaaggaaat aataaatggc    2280

taaaatgaga atatcaccgg aattgaaaaa actgatcgaa aaataccgct gcgtaaaaga    2340

tacggaagga atgtctcctg ctaaggtata taagctggtg ggagaaaatg aaaacctata    2400

tttaaaaatg acggacagcc ggtataaagg gaccacctat gatgtggaac gggaaaagga    2460

catgatgcta tggctggaag gaaagctgcc tgttccaaag gtcctgcact ttgaacggca    2520

tgatggctgg agcaatctgc tcatgagtga ggccgatggc gtcctttgct cggaagagta    2580

tgaagatgaa caaagccctg aaaagattat cgagctgtat gcggagtgca tcaggctctt    2640

tcactccatc gacatatcgg attgtcccta tacgaatagc ttagacagcc gcttagccga    2700

attggattac ttactgaata acgatctggc cgatgtggat tgcgaaaact gggaagaaga    2760

cactccattt aaagatccgc gcgagctgta tgatttttta aagacggaaa agcccgaaga    2820

ggaacttgtc ttttcccacg gcgacctggg agacagcaac atctttgtga aagatggcaa    2880

agtaagtggc tttattgatc ttgggagaag cggcagggcg gacaagtggt atgacattgc    2940

cttctgcgtc cggtcgatca gggaggatat cggggaagaa cagtatgtcg agctattttt    3000

tgacttactg gggatcaagc ctgattggga gaaaataaaa tattatattt tactggatga    3060

attgttttag tacctagatg tggcgcaacg atgccggcga caagcaggag cgcaccgact    3120

tcttccgcat caagtgtttt ggctctcagg ccgaggccca cggcaagtat ttgggcaagg    3180

ggtcgctggt attcgtgcag ggcaagattc ggaataccaa gtacgagaag gacggccaga    3240

cggtctacgg gaccgacttc attgccgata aggtggatta tctggacacc aaggcaccag    3300

gcgggtcaaa tcaggaataa gggcacattg ccccggcgtg agtcggggca atcccgcaag    3360

gagggtgaat gaatcggacg tttgaccgga aggcatacag gcaagaactg atcgacgcgg    3420

ggttttccgc cgaggatgcc gaaaccatcg caagccgcac cgtcatgcgt gcgccccgcg    3480

aaaccttcca gtccgtcggc tcgatggtcc agcaagctac ggccaagatc gagcgcgaca    3540

gcgtgcaact ggctccccct gccctgcccg cgccatcggc cgccgtggag cgttcgcgtc    3600

gtctcgaaca ggaggcggca ggtttggcga agtcgatgac catcgacacg cgaggaacta    3660

tgacgaccaa gaagcgaaaa accgccggcg aggacctggc aaaacaggtc agcgaggcca    3720

agcaggccgc gttgctgaaa cacacgaagc agcagatcaa ggaaatgcag ctttccttgt    3780

tcgatattgc gccgtggccg gacacgatgc gagcgatgcc aaacgacacg gcccgctctg    3840

ccctgttcac cacgcgcaac aagaaaatcc cgcgcgaggc gctgcaaaac aaggtcattt    3900

tccacgtcaa caaggacgtg aagatcacct acaccggcgt cgagctgcgg gccgacgatg    3960

acgaactggt gtggcagcag gtgttggagt acgcgaagcg cacccctatc ggcgagccga    4020

tcaccttcac gttctacgag ctttgccagg acctgggctg gtcgatcaat ggccggtatt    4080

acacgaaggc cgaggaatgc ctgtcgcgcc tacaggcgac ggcgatgggc ttcacgtccg    4140

accgcgttgg gcacctggaa tcggtgtcgc tgctgcaccg cttccgcgtc ctggaccgtg    4200

gcaagaaaac gtcccgttgc caggtcctga tcgacgagga aatcgtcgtg ctgtttgctg    4260

gcgaccacta cacgaaattc atatgggaga agtaccgcaa gctgtcgccg acggcccgac    4320

ggatgttcga ctatttcagc tcgcaccggg agccgtaccc gctcaagctg gaaaccttcc    4380

gcctcatgtg cggatcggat tccacccgcg tgaagaagtg gcgcgagcag gtcggcgaag    4440

cctgcgaaga gttgcgaggc agcggcctgg tggaacacgc ctgggtcaat gatgacctgg    4500

tgcattgcaa acgctagggc cttgtggggt cagttccggc tgggggttca gcagccagcg    4560

ctttactggc atttcaggaa caagcgggca ctgctcgacg cacttgcttc gctcagtatc    4620

gctcgggacg cacggcgcgc tctacgaact gccgataaac agaggattaa aattgacaat    4680

tgtgattaag gctcagattc gacggcttgg agcggccgac gtgcaggatt tccgcgagat    4740

ccgattgtcg gccctgaaga aagctccaga gatgttcggg tccgtttacg agcacgagga    4800

gaaaaagccc atggaggcgt tcgctgaacg gttgcgagat gccgtggcat tcggcgccta    4860

catcgacggc gagatcattg ggctgtcggt cttcaaacag gaggacggcc ccaaggacgc    4920

tcacaaggcg catctgtccg gcgttttcgt ggagcccgaa cagcgaggcc gaggggtcgc    4980

cggtatgctg ctgcgggcgt tgccggcggg tttattgctc gtgatgatcg tccgacagat    5040

tccaacggga atctggtgga tgcgcatctt catcctcggc gcacttaata tttcgctatt    5100

ctggagcttg ttgtttattt cggtctaccg cctgccgggc ggggtcgcgg cgacggtagg    5160

cgctgtgcag ccgctgatgg tcgtgttcat ctctgccgct ctgctaggta gcccgatacg    5220

attgatggcg gtcctggggg ctatttgcgg aactgcgggc gtggcgctgt tggtgttgac    5280

accaaacgca gcgctagatc ctgtcggcgt cgcagcgggc ctggcggggg cggtttccat    5340

ggcgttcgga accgtgctga cccgcaagtg gcaacctccc gtgcctctgc tcacctttac    5400

cgcctggcaa ctggcggccg gaggacttct gctcgttcca gtagctttag tgtttgatcc    5460

gccaatcccg atgcctacag gaaccaatgt tctcggcctg gcgtggctcg gcctgatcgg    5520

agcgggttta acctacttcc tttggttccg ggggatctcg cgactcgaac ctacagttgt    5580

ttccttactg ggctttctca gccccagatc tggggtcgat cagccgggga tgcatcaggc    5640

cgacagtcgg aacttcgggt ccccgacctg taccattcgg tgagcaatgg ataggggagt    5700

tgatatcgtc aacgttcact tctaaagaaa tagcgccact cagcttcctc agcggcttta    5760

tccagcgatt tcctattatg tcggcatagt tctcaagatc gacagcctgt cacggttaag    5820

cgagaaatga ataagaaggc tgataattcg gatctctgcg agggagatga tatttgatca    5880

caggcagcaa cgctctgtca tcgttacaat caacatgcta ccctccgcga gatcatccgt    5940

gtttcaaacc cggcagctta gttgccgttc ttccgaatag catcggtaac atgagcaaag    6000

tctgccgcct tacaacggct ctcccgctga cgccgtcccg gactgatggg ctgcctgtat    6060

cgagtggtga ttttgtgccg agctgccggt cggggagctg ttggctggct ggtggcagga    6120

tatattgtgg tgtaaacaaa ttgacgctta gacaacttaa taacacattg cggacgtttt    6180

taatgtactg gggtggtttt tcttttcacc agtgagacgg gcaacagctg attgcccttc    6240

accgcctggc cctgagagag ttgcagcaag cggtccacgc tggtttgccc cagcaggcga    6300

aaatcctgtt tgatggtggt tccgaaatcg gcaaaatccc ttataaatca aaagaatagc    6360

ccgagatagg gttgagtgtt gttccagttt ggaacaagag tccactatta aagaacgtgg    6420

actccaacgt caaagggcga aaaaccgtct atcagggcga tggcccacta cctgtatggc    6480

cgcattcgca aaacacacct agactagatt tgttttgcta acccaattga tattaattat    6540

atatgattaa tatttatatg tatatggatt tggttaatga aatgcatctg gttcatcaaa    6600

gaattataaa gacacgtgac attcatttag gataagaaat atggatgatc tctttctctt    6660

ttattcagat aactagtaat tacacataac acacaacttt gatgcccaca ttatagtgat    6720

tagcatgtca ctatgtgtgc atccttttat ttcatacatt aattaagttg gccaatccag    6780

aagatggaca agtctaggtt aaccatgtgg tacctacgcg ttcgaatatc catgggccgc    6840

ttcaggccag ggcgctgggg aaggcgatgg cgtgctcggt cagctgccac ttctggttct    6900

tggcgtcgct ccggtcctcc cgcagcagct tgtgctggat gaagtgccac tcgggcatct    6960

tgctgggcac gctcttggcc ttgtacacgg tgtcgaactg gcaccggtac cggccgccgt    7020

ccttcagcag caggtacatg ctcacgtcgc ccttcaggat gccctgctta ggcacgggca    7080

tgatcttctc gcagctggcc tcccagttgg tggtcatctt cttcatcacg gggccgtcgg    7140

cggggaagtt cacgccgttg aagatgctct tgtggtagat gcagttctcc ttcacgctca    7200

cggtgatgtc cacgttacag atgcacacgg cgccgtcctc gaacaggaag ctccggcccc    7260

aggtgtagcc ggcggggcag ctgttcttga agtagtccac gatgtcctgg gggtactcgg    7320

tgaagatccg gtcgccgtac ttgaagccgg cgctcaggat gtcctcgctg aagggcaggg    7380

ggccgccctc gatcacgcac aggttgatgg tctgcttgcc cttgaagggg tagccgatgc    7440

cctcgccggt gatcacgaac ttgtggccgt tcacgcagcc ctccatgtgg tacttcatgg    7500

tcatctcctc cttcaggccg tgcttgctgt gggccatggt ggcgaccggt gaattcgagc    7560

tcggtacccg gggatcctga gtaaaacaga ggagggtctc actaagttta tagagagact    7620

gagagagata aagggacacg tatgaagcgt ctgttttcgt ggtgtgacgt caaagtcatt    7680

ttgctctcta cgcgtgtctg tgtcggcttg atcttttttt ttgctttttg gaactcatgt    7740

cggtagtata tcttttattt attttttctt tttttccctt ttctttcaaa ctgatgtcgg    7800

tatgatattt attccatcct aaaatgtaac ttactattat tagtagtcgg tccatgtcta    7860

ttggcccatc atgtggtcat tttacgttta cgtcgtgtgg ctgtttatta taacaaacgg    7920

cacatccttc tcattcgaat tgtatttctc cttaatcgtt ctaataggta tgatctttta    7980

ttttatacgt aaaattaaaa ttgaatgatg tcaagaacga aaattaattt gtatttacaa    8040

aggagctaaa tattgtttat tcctctactg gtagaagata aaagaagtag atgaaataat    8100

gatcttacta gagaatattc ctcatttaca ctagtcaaat ggaaatcttg taaactttta    8160

caataattta tcctgaaaat atgaaaaaat agaagaaaat gtttacctcc tctctcctct    8220

taattcacct acgatcggtg cgggcctctt cgctattacg ccagctggcg aaagggggat    8280

gtgctgcaag gcgattaagt tgggtaacgc cagggttttc ccagtcacga cgttgtaaaa    8340

cgacggccag tgaattcgag ctcggtaccc ggggatcctc tagagtcgac ctgcaggcat    8400

gcaagcttgt tgaaacatcc ctgaagtgtc tcattttatt ttatttattc tttgctgata    8460

aaaaaataaa ataaaagaag ctaagcacac ggtcaaccat tgctctactg ctaaaagggt    8520

tatgtgtagt gttttactgc ataaattatg cagcaaacaa gacaactcaa attaaaaaat    8580

ttcctttgct tgtttttttg ttgtctctga cttgactttc ttgtggaagt tggttgtata    8640

aggattggga cacaccattg tccttcttaa tttaatttta tttctttgct gataaaaaaa    8700

aaaaatttca tatagtgtta aataataatt tgttaaataa ccaaaaagtc aaatatgttt    8760

actctcgttt aaataattga gagtcgtcca gcaaggctaa acgattgtat agatttatga    8820

caatatttac ttttttatag ataaatgtta tattataata aatttatata catatattat   8880

atgttattta ttatttatta ttattttaaa tccttcaata ttttatcaaa ccaactcata   8940

attttttttt tatctgtaag aagcaataaa attaaataga cccactttaa ggatgatcca   9000

acctttatac agagtaagag agttcaaata gtaccctttc atatacatat caactaaaat   9060

attagaaata tcatggatca aaccttataa agacattaaa taagtggata agtataatat   9120

ataaatgggt agtatataat atataaatgg atacaaactt ctctctttat aattgttatg   9180

tctccttaac atcctaatat aatacataag tgggtaatat ataatatata aatggagaca   9240

aacttcttcc attataattg ttatgtcttc ttaacactta tgtctcgttc acaatgctaa   9300

agttagaatt gtttagaaag tcttatagta cacatttgtt tttgtactat ttgaagcatt   9360

ccataagccg tcacgattca gatgatttat aataataaga ggaaatttat catagaacaa   9420

taaggtgcat agatagagtg ttaatatatc ataacatcct ttgtttattc atagaagaag   9480

tgagatggag ctcagttatt atactgttac atggtcggat acaatattcc atgctctcca   9540

tgagctctta cacctacatg cattttagtt catacttcat gcacgtggcc atcacagcta   9600

gctgcagcta catatttaca ttttacaaca ccaggagaac tgccctgtta gtgcataaca   9660

atcagaagat ggccgtggct actcgagtta tcgaaccact ttgtacaaga aagctgaacg   9720

agaaacgtaa aatgatataa atatcaatat attaaattag attttgcata aaaaacagac   9780

tacataatac tgtaaaacac aacatatcca gtcactatgg tcgacctgca gactggctgt   9840

gtataaggga gcctgacatt tatattcccc agaacatcag gttaatggcg tttttgatgt   9900

cattttcgcg gtggctgaga tcagccactt cttccccgat aacggagacc ggcacactgg   9960

ccatatcggt ggtcatcatg cgccagcttt catccccgat atgcaccacc gggtaaagtt  10020

cacgggagac tttatctgac agcagacgtg cactggccag ggggatcacc atccgtcgcc  10080

cgggcgtgtc aataatatca ctctgtacat ccacaaacag acgataacgg ctctctcttt  10140

tataggtgta aaccttaaac tgcatttcac cagtccctgt tctcgtcagc aaaagagccg  10200

ttcatttcaa taaaccgggc gacctcagcc atcccttcct gattttccgc tttccagcgt  10260

tcggcacgca gacgacgggc ttcattctgc atggttgtgc ttaccagacc ggagatattg  10320

acatcatata tgccttgagc aactgatagc tgtcgctgtc aactgtcact gtaatacgct  10380

gcttcatagc acacctcttt ttgacatact tcgggtatac atatcagtat atattcttat  10440

accgcaaaaa tcagcgcgca aatacgcata ctgttatctg gcttttagta agccggatcc  10500

tctagattac gccccgccct gccactcatc gcagtactgt tgtaattcat taagcattct  10560

gccgacatgg aagccatcac agacggcatg atgaacctga atcgccagcg gcatcagcac  10620

cttgtcgcct tgcgtataat atttgcccat ggtgaaaacg ggggcgaaga agttgtccat  10680

attggccacg tttaaatcaa aactggtgaa actcacccag ggattggctg agacgaaaaa  10740

catattctca ataaaccctt tagggaaata ggccaggttt tcaccgtaac acgccacatc  10800

ttgcgaatat atgtgtagaa actgccggaa atcgtcgtgg tattcactcc agagcgatga  10860

aaacgtttca gtttgctcat ggaaaacggt gtaacaaggg tgaacactat cccatatcac  10920

cagctcaccg tctttcattg ccatacggaa ttccggatga gcattcatca ggcgggcaag  10980

aatgtgaata aaggccggat aaaacttgtg cttatttttc tttacggtct ttaaaaaggc  11040

cgtaatatcc agctgaacgg tctggttata ggtacattga gcaactgact gaaatgcctc  11100

aaaatgttct ttacgatgcc attgggatat atcaacggtg gtatatccag tgattttttt  11160

ctccatttta gcttccttag ctcctgaaaa tctcgccgga tcctaactca aaatccacac  11220

attatacgag ccggaagcat aaagtgtaaa gcctggggtg cctaatgcgg ccgccatagt  11280

gactggatat gttgtgtttt acagtattat gtagtctgtt ttttatgcaa aatctaattt  11340

aatatattga tatttatatc attttacgtt tctcgttcag cttttttgta caaacttgtt  11400

tgataaccgg tactagtgtg cacgtcgagc gtgtcctctc caaatgaaat gaacttcctt  11460

atatagagga agggtcttgc gaaggatagt gggattgtgc gtcatccctt acgtcagtgg  11520

agatgtcaca tcaatccact tgctttgaag acgtggttgg aacgtcttct ttttccacga  11580

tgctcctcgt gggtgggggt ccatctttgg gaccactgtc ggcagaggca tcttgaatga  11640

tagcctttcc tttatcgcaa tgatggcatt tgtaggagcc accttccttt tctactgtcc  11700

tttcgatgaa gtgacagata gctgggcaat ggaatccgag gaggtttccc gaaattatcc  11760

tttgttgaaa agtctcaata gccctttggt cttctgagac tgtatctttg acatttttgg  11820

agtagaccag agtgtcgtgc tccaccatgt tgacgaagat tttcttcttg tcattgagtc  11880

gtaaaagact ctgtatgaac tgttcgccag tcttcacggc gagttctgtt agatcctcga  11940

tttgaatctt agactccatg catggcctta gattcagtag gaactacctt tttagagact  12000

ccaatctcta ttacttgcct tggtttatga agcaagcctt gaatcgtcca tactggaata  12060

gtacttctga tcttgagaaa tatgtctttc tctgtgttct tgatgcaatt agtcctgaat  12120

cttttgactg catctttaac cttcttggga aggtatttga tctcctggag attgttactc  12180

gggtagatcg tcttgatgag acctgctgcg taggcctctc taaccatctg tgggtcagca  12240

ttctttctga aattgaagag gctaaccttc tcattatcag tggtgaacat agtgtcgtca  12300

ccttcacctt cgaacttcct tcctagatcg taaagataga ggaaatcgtc cattgtaatc  12360

tccggggcaa aggagatctc ttttggggct ggatcactgc tgggcctttt ggttcctagc  12420

gtgagccagt gggctttttg ctttggtggg cttgttaggg ccttagcaaa gctcttgggc  12480

ttgagttgag cttctccttt ggggatgaag ttcaacctgt ctgtttgctg acttgttgtg  12540

tacgcgtcag ctgctgctct tgcctctgta atagtggcaa atttcttgtg tgcaactccg  12600

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caataatggt ttctgacgta tgtgcttagc tcattaaact ccagaaaccc gcggctgagt  14220

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tcaccgacga gcaaggcaag accgagcgcc tttgcgacgc tca                   16843

 

<210>5

<211>9142

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>5

ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc atccatattt cttatcctaa atgaatgtca    60

cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga tgcatttcat taaccaaatc catatacata   120

taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt   180

gtgttttgcg aattcgatat caagcttgat gggtaccggc gcgcccgatc atccggatat   240

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tagttattgc tcagcggtgg cagcagccaa ctcagcttcc tttcgggctt tgttagcagc   360

cggatcgatc caagctgtac ctcactattc ctttgccctc ggacgagtgc tggggcgtcg     420

gtttccacta tcggcgagta cttctacaca gccatcggtc cagacggccg cgcttctgcg     480

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acgcaggaaa gaacatgtga gcaaaaggcc agcaaaaggc caggaaccgt aaaaaggccg    1740

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caagtcagag gtggcgaaac ccgacaggac tataaagata ccaggcgttt ccccctggaa    1860

gctccctcgt gcgctctcct gttccgaccc tgccgcttac cggatacctg tccgcctttc    1920

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tcacaatttc cactaaaagt aaataaatgg caagttaaaa aaggaatatg cattttactg    3000

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accctcagtt atcacatcct tgaaggatcc attactggga atcatcggca acacatgctc    3480

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gttcaacaac aatatcttaa ctgggagatt ctccactctt atagtggcca actcctgaac    3780

attcatgatg aaactaccat ccccatcaat gtcaaccaca acagccccag ggttagcaac    3840

agcagcacca atagccgcag gcaatccaaa acccatggct ccaagacccc ctgaggtcaa    3900

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cccagtacta acaatagcat ctccattagt caactcatca agaacctcga tagcatgctg    4020

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taattttata cattttttta aaaaatcttt taatttctta attaatatct taaaaataat    6600

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ctggcgattc aggttcatca tgccgtttgt gatggcttcc atgtcggcag aatgcttaat    8160

gaattacaac agtactgcga tgagtggcag ggcggggcgt aaagatctgg atccggctta    8220

ctaaaagcca gataacagta tgcgtatttg cgcgctgatt tttgcggtat aagaatatat    8280

actgatatgt atacccgaag tatgtcaaaa agaggtatgc tatgaagcag cgtattacag    8340

tgacagttga cagcgacagc tatcagttgc tcaaggcata tatgatgtca atatctccgg    8400

tctggtaagc acaaccatgc agaatgaagc ccgtcgtctg cgtgccgaac gctggaaagc    8460

ggaaaatcag gaagggatgg ctgaggtcgc ccggtttatt gaaatgaacg gctcttttgc    8520

tgacgagaac aggggctggt gaaatgcagt ttaaggttta cacctataaa agagagagcc    8580

gttatcgtct gtttgtggat gtacagagtg atattattga cacgcccggg cgacggatgg    8640

tgatccccct ggccagtgca cgtctgctgt cagataaagt ctcccgtgaa ctttacccgg    8700

tggtgcatat cggggatgaa agctggcgca tgatgaccac cgatatggcc agtgtgccgg    8760

tctccgttat cggggaagaa gtggctgatc tcagccaccg cgaaaatgac atcaaaaacg    8820

ccattaacct gatgttctgg ggaatataaa tgtcaggctc ccttatacac agccagtctg    8880

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tgcaaaatct aatttaatat attgatattt atatcatttt acgtttctcg ttcagctttc    9000

ttgtacaaag tggttgataa cctagacttg tccatcttct ggattggcca acttaattaa    9060

tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg acatgctaat cactataatg tgggcatcaa  9120

agttgtgtgt tatgtgtaat ta                                           9142

 

<210>6

<211>49911

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>6

gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct agagataatg agcattgcat gtctaagtta    60

taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac acttgtttga agtgcagttt atctatcttt   120

atacatatat ttaaacttta ctctacgaat aatataatct atagtactac aataatatca   180

gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt   240

ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg   300

caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat ttagggttta   360

gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct attttagcct   420

ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt agatataaaa   480

tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta   540

aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt   600

ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca   660

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ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag   780

gcggcctcct cctcctctca cggcacggca gctacggggg attcctttcc caccgctcct   840

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tgccatacat attcatagtt acgaattgaa gatgatggat ggaaatatcg atctaggata    1500

ggtatacatg ttgatgcggg ttttactgat gcatatacag agatgctttt tgttcgcttg    1560

gttgtgatga tgtggtgtgg ttgggcggtc gttcattcgt tctagatcgg agtagaatac    1620

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tcatagttac gagtttaaga tggatggaaa tatcgatcta ggataggtat acatgttgat    1740

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cttgagtacc tatctattat aataaacaag tatgttttat aattattttg atcttgatat    1860

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ctttatgctt ccggctcgta taatgtgtgg attttgagtt aggatttaaa tacgcgttga    2220

tccggcttac taaaagccag ataacagtat gcgtatttgc gcgctgattt ttgcggtata    2280

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gtattacagt gacagttgac agcgacagct atcagttgct caaggcatat atgatgtcaa    2400

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tgttttttat gcaaaatcta atttaatata ttgatattta tatcatttta cgtttctcgt    3000

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ttaattaatg tatgaaataa aaggatgcac acatagtgac atgctaatca ctataatgtg    3120

ggcatcaaag ttgtgtgtta tgtgtaatta ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc    3180

atccatattt cttatcctaa atgaatgtca cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga    3240

tgcatttcat taaccaaatc catatacata taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa    3300

ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt gtgttttgcg aattgcggcc gccaccgcgg    3360

tggagctcga attccggtcc gggtcacctt tgtccaccaa gatggaactg cggccgctca    3420

ttaattaagt caggcgcgcc tctagttgaa gacacgttca tgtcttcatc gtaagaagac    3480

actcagtagt cttcggccag aatggccatc tggattcagc aggcctagaa ggccatttaa    3540

atcctgagga tctggtcttc ctaaggaccc gggatatcgg accgattaaa ctttaattcg    3600

gtccgaagct tgcatgcctg cagtgcagcg tgacccggtc gtgcccctct ctagagataa    3660

tgagcattgc atgtctaagt tataaaaaat taccacatat tttttttgtc acacttgttt    3720

gaagtgcagt ttatctatct ttatacatat atttaaactt tactctacga ataatataat    3780

ctatagtact acaataatat cagtgtttta gagaatcata taaatgaaca gttagacatg    3840

gtctaaagga caattgagta ttttgacaac aggactctac agttttatct ttttagtgtg    3900

catgtgttct cctttttttt tgcaaatagc ttcacctata taatacttca tccattttat    3960

tagtacatcc atttagggtt tagggttaat ggtttttata gactaatttt tttagtacat    4020

ctattttatt ctattttagc ctctaaatta agaaaactaa aactctattt tagttttttt    4080

atttaataat ttagatataa aatagaataa aataaagtga ctaaaaatta aacaaatacc    4140

ctttaagaaa ttaaaaaaac taaggaaaca tttttcttgt ttcgagtaga taatgccagc    4200

ctgttaaacg ccgtcgacga gtctaacgga caccaaccag cgaaccagca gcgtcgcgtc    4260

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ccccctccac accctctttc cccaacctcg tgttgttcgg agcgcacaca cacacaacca    4560

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cgttcgtaca cggatgcgac ctgtacgtca gacacgttct gattgctaac ttgccagtgt    4800

ttctctttgg ggaatcctgg gatggctcta gccgttccgc agacgggatc gatttcatga    4860

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gtctggttgg gcggtcgttc tagatcggag tagaattctg tttcaaacta cctggtggat    5040

ttattaattt tggatctgta tgtgtgtgcc atacatattc atagttacga attgaagatg    5100

atggatggaa atatcgatct aggataggta tacatgttga tgcgggtttt actgatgcat    5160

atacagagat gctttttgtt cgcttggttg tgatgatgtg gtgtggttgg gcggtcgttc    5220

attcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtgtattt attaattttg    5280

gaactgtatg tgtgtgtcat acatcttcat agttacgagt ttaagatgga tggaaatatc    5340

gatctaggat aggtatacat gttgatgtgg gttttactga tgcatataca tgatggcata    5400

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ggcatcaaag ttgtgtgtta tgtgtaatta ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc    6360

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cgggacggcg tcagcgggag agccgttgta aggcggcaga ctttgctcat gttaccgatg    6840

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gatcttgaga actatgccga cataatagga aatcgctgga taaagccgct gaggaagctg    7080

agtggcgcta tttctttaga agtgaacgtt gacgatcgtc gaccgtaccc cgatgaatta    7140

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agatcaatgt cgatcgtggc tggctcgaag atacctgcaa gaatgtcatt gcgctgccat    8340

tctccaaatt gcagttcgcg cttagctgga taacgccacg gaatgatgtc gtcgtgcaca    8400

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aaaaggtcgt tgatcaaagc tcgccgcgtt gtttcatcaa gccttacagt caccgtaacc    8520

agcaaatcaa tatcactgtg tggcttcagg ccgccatcca ctgcggagcc gtacaaatgt    8580

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gtcgatactt cggcgatcac cgcttccctc atgatgttta actcctgaat taagccgcgc    8700

cgcgaagcgg tgtcggcttg aatgaattgt taggcgtcat cctgtgctcc cgagaaccag    8760

taccagtaca tcgctgtttc gttcgagact tgaggtctag ttttatacgt gaacaggtca    8820

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tgtgtctcta atcgtatgcc aaggagctgt ctgcttagtg cccacttttt cgcaaattcg    8940

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ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct gacgagcatc acaaaaatcg   10020

acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa agataccagg cgtttccccc  10080

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ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca cgctgtaggt atctcagttc  10200

ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa ccccccgttc agcccgaccg  10260

ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg gtaagacacg acttatcgcc  10320

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acgttaaggg attttggtca tgagattatc aaaaaggatc ttcacctaga tccttttaaa  10680

ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta  10740

ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt  10800

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gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc  10980

tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt  11040

tgttgccatt gctgcagggg gggggggggg gggggacttc cattgttcat tccacggaca  11100

aaaacagaga aaggaaacga cagaggccaa aaagcctcgc tttcagcacc tgtcgtttcc  11160

tttcttttca gagggtattt taaataaaaa cattaagtta tgacgaagaa gaacggaaac  11220

gccttaaacc ggaaaatttt cataaatagc gaaaacccgc gaggtcgccg ccccgtaacc  11280

tacctgtcgg atcaccggaa aggacccgta aagtgataat gattatcatc tacatatcac  11340

aacgtgcgtg gaggccatca aaccacgtca aataatcaat tatgacgcag gtatcgtatt  11400

aattgatctg catcaactta acgtaaaaac aacttcagac aatacaaatc agcgacactg  11460

aatacggggc aacctcatgt cccccccccc cccccccctg caggcatcgt ggtgtcacgc  11520

tcgtcgtttg gtatggcttc attcagctcc ggttcccaac gatcaaggcg agttacatga  11580

tcccccatgt tgtgcaaaaa agcggttagc tccttcggtc ctccgatcgt tgtcagaagt  11640

aagttggccg cagtgttatc actcatggtt atggcagcac tgcataattc tcttactgtc  11700

atgccatccg taagatgctt ttctgtgact ggtgagtact caaccaagtc attctgagaa  11760

tagtgtatgc ggcgaccgag ttgctcttgc ccggcgtcaa cacgggataa taccgcgcca  11820

catagcagaa ctttaaaagt gctcatcatt ggaaaacgtt cttcggggcg aaaactctca  11880

aggatcttac cgctgttgag atccagttcg atgtaaccca ctcgtgcacc caactgatct  11940

tcagcatctt ttactttcac cagcgtttct gggtgagcaa aaacaggaag gcaaaatgcc  12000

gcaaaaaagg gaataagggc gacacggaaa tgttgaatac tcatactctt cctttttcaa  12060

tattattgaa gcatttatca gggttattgt ctcatgagcg gatacatatt tgaatgtatt  12120

tagaaaaata aacaaatagg ggttccgcgc acatttcccc gaaaagtgcc acctgacgtc  12180

taagaaacca ttattatcat gacattaacc tataaaaata ggcgtatcac gaggcccttt  12240

cgtcttcaag aattcggagc ttttgccatt ctcaccggat tcagtcgtca ctcatggtga  12300

tttctcactt gataacctta tttttgacga ggggaaatta ataggttgta ttgatgttgg  12360

acgagtcgga atcgcagacc gataccagga tcttgccatc ctatggaact gcctcggtga  12420

gttttctcct tcattacaga aacggctttt tcaaaaatat ggtattgata atcctgatat  12480

gaataaattg cagtttcatt tgatgctcga tgagtttttc taatcagaat tggttaattg  12540

gttgtaacac tggcagagca ttacgctgac ttgacgggac ggcggctttg ttgaataaat  12600

cgaacttttg ctgagttgaa ggatcagatc acgcatcttc ccgacaacgc agaccgttcc  12660

gtggcaaagc aaaagttcaa aatcaccaac tggtccacct acaacaaagc tctcatcaac  12720

cgtggctccc tcactttctg gctggatgat ggggcgattc aggcctggta tgagtcagca  12780

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cgtgaggctt ggacgctagg gcagggcatg aaaaagcccg tagcgggctg ctacgggcgt  12900

ctgacgcggt ggaaaggggg aggggatgtt gtctacatgg ctctgctgta gtgagtgggt  12960

tgcgctccgg cagcggtcct gatcaatcgt caccctttct cggtccttca acgttcctga  13020

caacgagcct ccttttcgcc aatccatcga caatcaccgc gagtccctgc tcgaacgctg  13080

cgtccggacc ggcttcgtcg aaggcgtcta tcgcggcccg caacagcggc gagagcggag  13140

cctgttcaac ggtgccgccg cgctcgccgg catcgctgtc gccggcctgc tcctcaagca  13200

cggccccaac agtgaagtag ctgattgtca tcagcgcatt gacggcgtcc ccggccgaaa  13260

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cggcctgatt atgccggtgc tgccgggcct cctgcgcgat ctggttcact cgaacgacgt  13860

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cggcgccact gtcgactacg ccatcatggc gacagcgcct ttcctttggg ttctctatat  14040

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ttcgttccgg tgggcccggg gcatgaccgt cgtcgccgcc ctgatggcgg tcttcttcat  14400

catgcaactt gtcggacagg tgccggccgc gctttgggtc attttcggcg aggatcgctt  14460

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cgcccaggca atgatcaccg gccctgtagc cgcccggctc ggcgaaaggc gggcactcat  14580

gctcggaatg attgccgacg gcacaggcta catcctgctt gccttcgcga cacggggatg  14640

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agcaatgttg tccaggcagg tggatgagga acgtcagggg cagctgcaag gctcactggc  14760

ggcgctcacc agcctgacct cgatcgtcgg acccctcctc ttcacggcga tctatgcggc  14820

ttctataaca acgtggaacg ggtgggcatg gattgcaggc gctgccctct acttgctctg  14880

cctgccggcg ctgcgtcgcg ggctttggag cggcgcaggg caacgagccg atcgctgatc  14940

gtggaaacga taggcctatg ccatgcgggt caaggcgact tccggcaagc tatacgcgcc  15000

ctaggagtgc ggttggaacg ttggcccagc cagatactcc cgatcacgag caggacgccg  15060

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cccgggctga gaaagcccag taaggaaaca actgtaggtt cgagtcgcga gatcccccgg  15180

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caaatagccc ccaggaccgc catcaatcgt atcgggctac ctagcagagc ggcagagatg  15540

aacacgacca tcagcggctg cacagcgcct accgtcgccg cgaccccgcc cggcaggcgg  15600

tagaccgaaa taaacaacaa gctccagaat agcgaaatat taagtgcgcc gaggatgaag  15660

atgcgcatcc accagattcc cgttggaatc tgtcggacga tcatcacgag caataaaccc  15720

gccggcaacg cccgcagcag cataccggcg acccctcggc ctcgctgttc gggctccacg  15780

aaaacgccgg acagatgcgc cttgtgagcg tccttggggc cgtcctcctg tttgaagacc  15840

gacagcccaa tgatctcgcc gtcgatgtag gcgccgaatg ccacggcatc tcgcaaccgt  15900

tcagcgaacg cctccatggg ctttttctcc tcgtgctcgt aaacggaccc gaacatctct  15960

ggagctttct tcagggccga caatcggatc tcgcggaaat cctgcacgtc ggccgctcca  16020

agccgtcgaa tctgagcctt aatcacaatt gtcaatttta atcctctgtt tatcggcagt  16080

tcgtagagcg cgccgtgcgt cccgagcgat actgagcgaa gcaagtgcgt cgagcagtgc  16140

ccgcttgttc ctgaaatgcc agtaaagcgc tggctgctga acccccagcc ggaactgacc  16200

ccacaaggcc ctagcgtttg caatgcacca ggtcatcatt gacccaggcg tgttccacca  16260

ggccgctgcc tcgcaactct tcgcaggctt cgccgacctg ctcgcgccac ttcttcacgc  16320

gggtggaatc cgatccgcac atgaggcgga aggtttccag cttgagcggg tacggctccc  16380

ggtgcgagct gaaatagtcg aacatccgtc gggccgtcgg cgacagcttg cggtacttct  16440

cccatatgaa tttcgtgtag tggtcgccag caaacagcac gacgatttcc tcgtcgatca  16500

ggacctggca acgggacgtt ttcttgccac ggtccaggac gcggaagcgg tgcagcagcg  16560

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gcgacaggca ttcctcggcc ttcgtgtaat accggccatt gatcgaccag cccaggtcct  16680

ggcaaagctc gtagaacgtg aaggtgatcg gctcgccgat aggggtgcgc ttcgcgtact  16740

ccaacacctg ctgccacacc agttcgtcat cgtcggcccg cagctcgacg ccggtgtagg  16800

tgatcttcac gtccttgttg acgtggaaaa tgaccttgtt ttgcagcgcc tcgcgcggga  16860

ttttcttgtt gcgcgtggtg aacagggcag agcgggccgt gtcgtttggc atcgctcgca  16920

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tcgtgtgttt cagcaacgcg gcctgcttgg cctcgctgac ctgttttgcc aggtcctcgc  17040

cggcggtttt tcgcttcttg gtcgtcatag ttcctcgcgt gtcgatggtc atcgacttcg  17100

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ggtcaaacgt ccgattcatt caccctcctt gcgggattgc cccgactcac gccggggcaa  17400

tgtgccctta ttcctgattt gacccgcctg gtgccttggt gtccagataa tccaccttat  17460

cggcaatgaa gtcggtcccg tagaccgtct ggccgtcctt ctcgtacttg gtattccgaa  17520

tcttgccctg cacgaatacc agcgacccct tgcccaaata cttgccgtgg gcctcggcct  17580

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tgcgccactc ttcattaacc gctatatcga aaattgcttg cggcttgtta gaattgccat  17700

gacgtacctc ggtgtcacgg gtaagattac cgataaactg gaactgatta tggctcatat  17760

cgaaagtctc cttgagaaag gagactctag tttagctaaa cattggttcc gctgtcaaga  17820

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gtacaaccag atatttttca ccaacatcct tcgtctgctc gatgagcggg gcatgacgaa  17940

acatgagctg tcggagaggg caggggtttc aatttcgttt ttatcagact taaccaacgg  18000

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acctcttctc ctggagtcca ccgaccttga ccgcgaggca ctcgcggaga ttgcgggtca  18120

tcctttcaag agcagcgtgc cgcccggata cgaacgcatc agtgtggttt tgccgtcaca  18180

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ttagctgttt gtcttgcagg ctaaacactt tcggtatatc gtttgcctgt gcgataatgt  18480

tgctaatgat ttgttgcgta ggggttactg aaaagtgagc gggaaagaag agtttcagac  18540

catcaaggag cgggccaagc gcaagctgga acgcgacatg ggtgcggacc tgttggccgc  18600

gctcaacgac ccgaaaaccg ttgaagtcat gctcaacgcg gacggcaagg tgtggcacga  18660

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tatagaaacg gtggccggat tccacggcaa agaggtcacg cggcattcgc ccatcctgga  18780

aggcgagttc cccttggatg gcagccgctt tgccggccaa ttgccgccgg tcgtggccgc  18840

gccaaccttt gcgatccgca agcgcgcggt cgccatcttc acgctggaac agtacgtcga  18900

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caatgaaatg gtcgccttca acccgtctga gcgcgtcgtc atcatcgagg acaccggcga  19080

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caccctgcac gcaaacaacc ccaaagcggg cctgagccgg ctcgccatgc ttatcagcat  19320

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ctaatcatgg ctctgcgcac gatccccatc cgtcgcgcag gcaaccgaga aaacctgttc  19980

atgggtggtg atcgtgaact ggtgatgttc tcgggcctga tggcgtttgc gctgattttc  20040

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ggcttggttt catcagccat ccgcttgccc tcatctgtta cgccggcggt agccggccag  21180

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caccaaggaa agtctacacg aaccctttgg caaaatcctg tatatcgtgc gaaaaaggat  21360

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tgcttccctg ctgttttgtg gaatatctac cgactggaaa caggcaaatg caggaaatta  21480

ctgaactgag gggacaggcg agagacgatg ccaaagagct acaccgacga gctggccgag  21540

tgggttgaat cccgcgcggc caagaagcgc cggcgtgatg aggctgcggt tgcgttcctg  21600

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gatctactgt aatggcgaaa attcacatgg ttttgcaggg caagggcggg gtcggcaagt  21960

cggccatcgc cgcgatcatt gcgcagtaca agatggacaa ggggcagaca cccttgtgca  22020

tcgacaccga cccggtgaac gcgacgttcg agggctacaa ggccctgaac gtccgccggc  22080

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cgcattacct catcagcaac caggtgccgg ctctgctgca agaaatgggg catgagctgg  22260

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ggcctatcga gcatgagggc aagagctttg agcagatgaa ggcgtacacg gccaacaagg  22440

cccgcgtgtc gtccatcatc cagattccgg ccctcaagga agaaacctac ggccgcgatt  22500

tcagcgacat gctgcaagag cggctgacgt tcgaccaggc gctggccgat gaatcgctca  22560

cgatcatgac gcggcaacgc ctcaagatcg tgcggcgcgg cctgtttgaa cagctcgacg  22620

cggcggccgt gctatgagcg accagattga agagctgatc cgggagattg cggccaagca  22680

cggcatcgcc gtcggccgcg acgacccggt gctgatcctg cataccatca acgcccggct  22740

catggccgac agtgcggcca agcaagagga aatccttgcc gcgttcaagg aagagctgga  22800

agggatcgcc catcgttggg gcgaggacgc caaggccaaa gcggagcgga tgctgaacgc  22860

ggccctggcg gccagcaagg acgcaatggc gaaggtaatg aaggacagcg ccgcgcaggc  22920

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cgcggacgcg cggcgcgtgg cgatgatgaa catgatcgcc ggcggcatgg tgttgttcgc  23040

ggccgccctg gtggtgtggg cctcgttatg aatcgcagag gcgcagatga aaaagcccgg  23100

cgttgccggg ctttgttttt gcgttagctg ggcttgtttg acaggcccaa gctctgactg  23160

cgcccgcgct cgcgctcctg ggcctgtttc ttctcctgct cctgcttgcg catcagggcc  23220

tggtgccgtc gggctgcttc acgcatcgaa tcccagtcgc cggccagctc gggatgctcc  23280

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acagtgtcgt ccgaaatcag gcgctcgacc aaattaagcg ccgcttccgc gtcgccctgc  24360

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ccatgcgcct tggttctcgg tctggacaat tctttgccca ttcatgacca ggaggcggtg  24840

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aggttgttcc atctatttta gtgaactgcg ttcgatttat cagttacttt cctcccgctt  25020

tgtgtttcct cccactcgtt tccgcgtcta gccgacccct caacatagcg gcctcttctt  25080

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ccgttgtctg tgcggcgcgg gtggcccgcg ccgctgtctt tggggatcag ccctcgatga  27240

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ccatcgacta agacgccccg cgctatctcg atggtctgct gccccacttc cagcccctgg  29340

atcgcctcct ggaactggct ttcggtaagc cgtttcttca tggataacac ccataatttg  29400

ctccgcgcct tggttgaaca tagcggtgac agccgccagc acatgagaga agtttagcta  29460

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ccaacaggtc gcgcacgcgc ttcactcggt tgcggatcga cactgccagc ccaacaaagc  29640

cggttgccgc cgccgccagg atcgcgccga tgatgccggc cacaccggcc atcgcccacc  29700

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caccataggc tgaccgctcg atggcgtatg ccgcttctcc ccttggcgta aaacccagcg  29820

ccgcaggcgg cattgccatg ctgcccgccg ctttcccgac cacgacgcgc gcaccaggct  29880

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cgcagccctg gttaaaaaca aggtttataa atattggttt aaaagcaggt taaaagacag  30600

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acagcccctc aaatgtcaat aggtgcgccc ctcatctgtc agcactctgc ccctcaagtg  30720

tcaaggatcg cgcccctcat ctgtcagtag tcgcgcccct caagtgtcaa taccgcaggg  30780

cacttatccc caggcttgtc cacatcatct gtgggaaact cgcgtaaaat caggcgtttt  30840

cgccgatttg cgaggctggc cagctccacg tcgccggccg aaatcgagcc tgcccctcat  30900

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aaggacgaga atttccctgc ggtgcccctc aagtgtcaat gaaagtttcc aacgcgagcc  31260

attcgcgaga gccttgagtc cacgctagat gagagctttg ttgtaggtgg accagttggt  31320

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ctgatgttac attgcacaag ataaaaatat atcatcatga acaataaaac tgtctgctta  31500

cataaacagt aatacaaggg gtgttatgag ccatattcaa cgggaaacgt cttgctcgac  31560

tctagagctc gttcctcgag gaacggtacc tgcggggaag cttacaataa tgtgtgttgt  31620

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cgcttttact catcgataat cacaaaaaca tttatacgaa caaaaataca aatgcactcc  32580

ggtttcacag gataggcggg atcagaatat gcaacttttg acgttttgtt ctttcaaagg  32640

gggtgctggc aaaaccaccg cactcatggg cctttgcgct gctttggcaa atgacggtaa  32700

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ggatcgtaag gtattcgata ataagatgcc gcatagcgac atcgtcatcg ataagaagaa  34740

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tgtgcgatct tccaagctag caccttgggc gctacttttg acaagggaaa acagtttctt  35160

gaatccttgg attggattcg cgccgtgtat tgttgaaatc gatcccggat gtcccgagac  35220

gacttcactc agataagccc atgctgcatc gtcgcgcatc tcgccaagca atatccggtc  35280

cggccgcata cgcagacttg cttggagcaa gtgctcggcg ctcacagcac ccagcccagc  35340

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tgttgtcttg ccgcttccgg tagggccaca tagcaacatc gtcagtcggc tgacgacgca  35520

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ccctgccgcg tttgccaaga atgacttgag gcgaactggg attgggatag ttgaagaatt  38340

gctggtaatc ctggcgcact gttggggcac tgaagttcga taccaggtcg taggcgtact  38400

gagcggtgtc ggcatcataa ctctcgcgca ggcgaacgta ctcccacaat gaggcgttaa  38460

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tggagagacg tcgcgccgat ttcgctcgcg cggtttgaaa ggcttctact tccttatagt  38700

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ctccagtaac tgcctccaat gttgccggcg atcgccggca aagcgacaat gagcgcatcc  39060

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gcgagaagca ctttcgtgag aattccaacg gcgtcgtaaa ctccgaaggc agaccagagc  39360

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ccgatttcgg atgcgatttt ctgaaaaacg gcctgggtca cggcgaacat tgtatccaac  39480

tgtgccggaa cagtctgcag aggcaagccg gttacactaa actgctgaac aaagtttggg  39540

accgtctttt cgaagatgga aaccacatag tcttggtagt tagcctgccc aacaattaga  39600

gcaacaacga tggtgaccgt gatcacccga gtgataccgc tacgggtatc gacttcgccg  39660

cgtatgacta aaataccctg aacaataatc caaagagtga cacaggcgat caatggcgca  39720

ctcaccgcct cctggatagt ctcaagcatc gagtccaagc ctgtcgtgaa ggctacatcg  39780

aagatcgtat gaatggccgt aaacggcgcc ggaatcgtga aattcatcga ttggacctga  39840

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atcgttaata ggcttgtcgc ctgtacattt tgaatcattg cgtcatggat ctgcttgaga  40080

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cgagaagatg cgtcatgtcg aagccggtaa tcgacggatc taactttact tcgtcaactt  41220

cgccgtcaaa tgcccagcca agcgcatggc cccggcacca gcgttggagc cgcgctcctg  41280

cgccttcggc gggcccatgc aacaaaaatt cacgtaaccc cgcgattgaa cgcatttgtg  41340

gatcaaacga gagctgacga tggataccac ggaccagacg gcggttctct tccggagaaa  41400

tcccaccccg accatcactc tcgatgagag ccacgatcca ttcgcgcaga aaatcgtgtg  41460

aggctgctgt gttttctagg ccacgcaacg gcgccaaccc gctgggtgtg cctctgtgaa  41520

gtgccaaata tgttcctcct gtggcgcgaa ccagcaattc gccaccccgg tccttgtcaa  41580

agaacacgac cgtacctgca cggtcgacca tgctctgttc gagcatggct agaacaaaca  41640

tcatgagcgt cgtcttaccc ctcccgatag gcccgaatat tgccgtcatg ccaacatcgt  41700

gctcatgcgg gatatagtcg aaaggcgttc cgccattggt acgaaatcgg gcaatcgcgt  41760

tgccccagtg gcctgagctg gcgccctctg gaaagttttc gaaagagaca aaccctgcga  41820

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cggataattt gccgatttga gtcacggctt tatcgccgga actcagcatc tggctcgatt  42120

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caagtggaaa atcgagggat agcagcgcgt tgagcatgcc cggccgtgtt tttgcagggt  42240

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catgaataac cctgccaatg tcagtggcac cccaagaaac aatgcgggcc gtgtggctgc  43260

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aggcgattta gatgtaaacg gtatctctca aagcatcgca tcaatgcgca cctccttagt  43680

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catcccacgt ctcttcggat tttagcgcct cgtgatcgtc ttttggaggc tcgattaacg  43860

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cggtgtaggt cgttcgctcc aagctgggct gtgtgcacga accccccgtt cagcccgacc  47160

gctgcgcctt atccggtaac tatcgtcttg agtccaaccc ggtaagacac gacttatcgc  47220

cactggcagc agccactggt aacaggatta gcagagcgag gtatgtaggc ggtgctacag  47280

agttcttgaa gtggtggcct aactacggct acactagaag gacagtattt ggtatctgcg  47340

ctctgctgaa gccagttacc ttcggaaaaa gagttggtag ctcttgatcc ggcaaacaaa  47400

ccaccgctgg tagcggtggt ttttttgttt gcaagcagca gattacgcgc agaaaaaaag  47460

gatctcaaga agatcctttg atcttttcta cggggtctga cgctcagtgg aacgaaaact  47520

cacgttaagg gattttggtc atgagattat caaaaaggat cttcacctag atccttttaa  47580

attaaaaatg aagttttaaa tcaatctaaa gtatatatga gtaaacttgg tctgacagtt  47640

accaatgctt aatcagtgag gcacctatct cagcgatctg tctatttcgt tcatccatag  47700

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gtgctgcaat gataccgcga gacccacgct caccggctcc agatttatca gcaataaacc  47820

agccagccgg aagggccgag cgcagaagtg gtcctgcaac tttatccgcc tccatccagt  47880

ctattaattg ttgccgggaa gctagagtaa gtagttcgcc agttaatagt ttgcgcaacg  47940

ttgttgccat tgctgcaggg gggggggggg ggggggactt ccattgttca ttccacggac  48000

aaaaacagag aaaggaaacg acagaggcca aaaagcctcg ctttcagcac ctgtcgtttc  48060

ctttcttttc agagggtatt ttaaataaaa acattaagtt atgacgaaga agaacggaaa  48120

cgccttaaac cggaaaattt tcataaatag cgaaaacccg cgaggtcgcc gccccgtagt  48180

cggatcaccg gaaaggaccc gtaaagtgat aatgattatc atctacatat cacaacgtgc  48240

gtggaggcca tcaaaccacg tcaaataatc aattatgacg caggtatcgt attaattgat  48300

ctgcatcaac ttaacgtaaa aacaacttca gacaatacaa atcagcgaca ctgaatacgg  48360

ggcaacctca tgtccccccc cccccccccc ctgcaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt  48420

ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca  48480

tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg  48540

ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat  48600

ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta  48660

tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caacacggga taataccgcg ccacatagca  48720

gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct  48780

taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat  48840

cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa  48900

agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt  48960

gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa  49020

ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtctaagaaa  49080

ccattattat catgacatta acctataaaa ataggcgtat cacgaggccc tttcgtcttc  49140

aagaattggt cgacgatctt gctgcgttcg gatattttcg tggagttccc gccacagacc  49200

cggattgaag gcgagatcca gcaactcgcg ccagatcatc ctgtgacgga actttggcgc  49260

gtgatgactg gccaggacgt cggccgaaag agcgacaagc agatcacgct tttcgacagc  49320

gtcggatttg cgatcgagga tttttcggcg ctgcgctacg tccgcgaccg cgttgaggga  49380

tcaagccaca gcagcccact cgaccttcta gccgacccag acgagccaag ggatcttttt  49440

ggaatgctgc tccgtcgtca ggctttccga cgtttgggtg gttgaacaga agtcattatc  49500

gtacggaatg ccaagcactc ccgaggggaa ccctgtggtt ggcatgcaca tacaaatgga  49560

cgaacggata aaccttttca cgccctttta aatatccgtt attctaataa acgctctttt  49620

ctcttaggtt tacccgccaa tatatcctgt caaacactga tagtttaaac tgaaggcggg  49680

aaacgacaat ctgatcatga gcggagaatt aagggagtca cgttatgacc cccgccgatg  49740

acgcgggaca agccgtttta cgtttggaac tgacagaacc gcaacgttga aggagccact  49800

cagcaagctg gtacgattgt aatacgactc actatagggc gaattgagcg ctgtttaaac  49860

gctcttcaac tggaagagcg gttacccgga ccgaagcttg catgcctgca g           49911

 

<210>7

<211>36909

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>7

tctagagctc gttcctcgag gcctcgaggc ctcgaggaac ggtacctgcg gggaagctta    60

caataatgtg tgttgttaag tcttgttgcc tgtcatcgtc tgactgactt tcgtcataaa   120

tcccggcctc cgtaacccag ctttgggcaa gctcacggat ttgatccggc ggaacgggaa   180

tatcgagatg ccgggctgaa cgctgcagtt ccagctttcc ctttcgggac aggtactcca   240

gctgattgat tatctgctga agggtcttgg ttccacctcc tggcacaatg cgaatgatta   300

cttgagcgcg atcgggcatc caattttctc ccgtcaggtg cgtggtcaag tgctacaagg   360

cacctttcag taacgagcga ccgtcgatcc gtcgccggga tacggacaaa atggagcgca   420

gtagtccatc gagggcggcg aaagcctcgc caaaagcaat acgttcatct cgcacagcct   480

ccagatccga tcgagggtct tcggcgtagg cagatagaag catggataca ttgcttgaga   540

gtattccgat ggactgaagt atggcttcca tcttttctcg tgtgtctgca tctatttcga   600

gaaagccccc gatgcggcgc accgcaacgc gaattgccat actatccgaa agtcccagca   660

ggcgcgcttg ataggaaaag gtttcatact cggccgatcg cagacgggca ctcacgacct   720

tgaacccttc aactttcagg gatcgatgct ggttgatggt agtctcactc gacgtggctc   780

tggtgtgttt tgacatagct tcctccaaag aaagcggaag gtctggatac tccagcacga   840

aatgtgcccg ggtagacgga tggaagtcta gccctgctca atatgaaatc aacagtacat   900

ttacagtcaa tactgaatat acttgctaca tttgcaattg tcttataacg aatgtgaaat   960

aaaaatagtg taacaacgct tttactcatc gataatcaca aaaacattta tacgaacaaa  1020

aatacaaatg cactccggtt tcacaggata ggcgggatca gaatatgcaa cttttgacgt  1080

tttgttcttt caaagggggt gctggcaaaa ccaccgcact catgggcctt tgcgctgctt  1140

tggcaaatga cggtaaacga gtggccctct ttgatgccga cgaaaaccgg cctctgacgc  1200

gatggagaga aaacgcctta caaagcagta ctgggatcct cgctgtgaag tctattccgc  1260

cgacgaaatg ccccttcttg aagcagccta tgaaaatgcc gagctcgaag gatttgatta  1320

tgcgttggcc gatacgcgtg gcggctcgag cgagctcaac aacacaatca tcgctagctc  1380

aaacctgctt ctgatcccca ccatgctaac gccgctcgac atcgatgagg cactatctac  1440

ctaccgctac gtcatcgagc tgctgttgag tgaaaatttg gcaattccta cagctgtttt  1500

gcgccaacgc gtcccggtcg gccgattgac aacatcgcaa cgcaggatgt cagagacgct  1560

agagagcctt ccagttgtac cgtctcccat gcatgaaaga gatgcatttg ccgcgatgaa    1620

agaacgcggc atgttgcatc ttacattact aaacacggga actgatccga cgatgcgcct    1680

catagagagg aatcttcgga ttgcgatgga ggaagtcgtg gtcatttcga aactgatcag    1740

caaaatcttg gaggcttgaa gatggcaatt cgcaagcccg cattgtcggt cggcgaagca    1800

cggcggcttg ctggtgctcg acccgagatc caccatccca acccgacact tgttccccag    1860

aagctggacc tccagcactt gcctgaaaaa gccgacgaga aagaccagca acgtgagcct    1920

ctcgtcgccg atcacattta cagtcccgat cgacaactta agctaactgt ggatgccctt    1980

agtccacctc cgtccccgaa aaagctccag gtttttcttt cagcgcgacc gcccgcgcct    2040

caagtgtcga aaacatatga caacctcgtt cggcaataca gtccctcgaa gtcgctacaa    2100

atgattttaa ggcgcgcgtt ggacgatttc gaaagcatgc tggcagatgg atcatttcgc    2160

gtggccccga aaagttatcc gatcccttca actacagaaa aatccgttct cgttcagacc    2220

tcacgcatgt tcccggttgc gttgctcgag gtcgctcgaa gtcattttga tccgttgggg    2280

ttggagaccg ctcgagcttt cggccacaag ctggctaccg ccgcgctcgc gtcattcttt    2340

gctggagaga agccatcgag caattggtga agagggacct atcggaaccc ctcaccaaat    2400

attgagtgta ggtttgaggc cgctggccgc gtcctcagtc accttttgag ccagataatt    2460

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gcctcaagtt tgcggcgcag ccgcaaaatg agaacatcta tactcctgtc gtaaacctcc    2640

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tctaaaaacg cgaggagaag attgaactca cctgccgtaa gtttcacctc accgccagct    2760

tcggacatca agcgacgttg cctgagatta agtgtccagt cagtaaaaca aaaagaccgt    2820

cggtctttgg agcggacaac gttggggcgc acgcgcaagg caacccgaat gcgtgcaaga    2880

aactctctcg tactaaacgg cttagcgata aaatcacttg ctcctagctc gagtgcaaca    2940

actttatccg tctcctcaag gcggtcgcca ctgataatta tgattggaat atcagacttt    3000

gccgccagat ttcgaacgat ctcaagccca tcttcacgac ctaaatttag atcaacaacc    3060

acgacatcga ccgtcgcgga agagagtact ctagtgaact gggtgctgtc ggctaccgcg    3120

gtcactttga aggcgtggat cgtaaggtat tcgataataa gatgccgcat agcgacatcg    3180

tcatcgataa gaagaacgtg tttcaacggc tcacctttca atctaaaatc tgaacccttg    3240

ttcacagcgc ttgagaaatt ttcacgtgaa ggatgtacaa tcatctccag ctaaatgggc    3300

agttcgtcag aattgcggct gaccgcggat gacgaaaatg cgaaccaagt atttcaattt    3360

tatgacaaaa gttctcaatc gttgttacaa gtgaaacgct tcgaggttac agctactatt    3420

gattaaggag atcgcctatg gtctcgcccc ggcgtcgtgc gtccgccgcg agccagatct    3480

cgcctacttc ataaacgtcc tcataggcac ggaatggaat gatgacatcg atcgccgtag    3540

agagcatgtc aatcagtgtg cgatcttcca agctagcacc ttgggcgcta cttttgacaa    3600

gggaaaacag tttcttgaat ccttggattg gattcgcgcc gtgtattgtt gaaatcgatc    3660

ccggatgtcc cgagacgact tcactcagat aagcccatgc tgcatcgtcg cgcatctcgc    3720

caagcaatat ccggtccggc cgcatacgca gacttgcttg gagcaagtgc tcggcgctca    3780

cagcacccag cccagcaccg ttcttggagt agagtagtct aacatgatta tcgtgtggaa    3840

tgacgagttc gagcgtatct tctatggtga ttagcctttc ctgggggggg atggcgctga    3900

tcaaggtctt gctcattgtt gtcttgccgc ttccggtagg gccacatagc aacatcgtca    3960

gtcggctgac gacgcatgcg tgcagaaacg cttccaaatc cccgttgtca aaatgctgaa    4020

ggatagcttc atcatcctga ttttggcgtt tccttcgtgt ctgccactgg ttccacctcg    4080

aagcatcata acgggaggag acttctttaa gaccagaaac acgcgagctt ggccgtcgaa    4140

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caccaggaag ttcagtggcg cagagggggt tacgtggtcc gacatcctgc tttctcagcg    4260

cgcccgctaa aatagcgata tcttcaagat catcataaga gacgggcaaa ggcatcttgg    4320

taaaaatgcc ggcttggcgc acaaatgcct ctccaggtcg attgatcgca atttcttcag    4380

tcttcgggtc atcgagccat tccaaaatcg gcttcagaag aaagcgtagt tgcggatcca    4440

cttccattta caatgtatcc tatctctaag cggaaatttg aattcattaa gagcggcggt    4500

tcctcccccg cgtggcgccg ccagtcaggc ggagctggta aacaccaaag aaatcgaggt    4560

cccgtgctac gaaaatggaa acggtgtcac cctgattctt cttcagggtt ggcggtatgt    4620

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agctcatccc gccacccgag ctgccggcgt aggtgctagc tgcctggaag gcgccttgaa    4740

caacactcaa gagcatagct ccgctaaaac gctgccagaa gtggctgtcg accgagcccg    4800

gcaatcctga gcgaccgagt tcgtccgcgc ttggcgatgt taacgagatc atcgcatggt    4860

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gctgtatttc gccaacaacg gtggtgccac gatcaagaag cacgatattg ttcgttgttc    4980

cacgaatatc ctgaggcaag acacacttta catagcctgc caaatttgtg tcgattgcgg    5040

tttgcaagat gcacggaatt attgtccctt gcgttaccat aaaatcgggg tgcggcaaga    5100

gcgtggcgct gctgggctgc agctcggtgg gtttcatacg tatcgacaaa tcgttctcgc    5160

cggacacttc gccattcggc aaggagttgt cgtcacgctt gccttcttgt cttcggcccg    5220

tgtcgccctg aatggcgcgt ttgctgaccc cttgatcgcc gctgctatat gcaaaaatcg    5280

gtgtttcttc cggccgtggc tcatgccgct ccggttcgcc cctcggcggt agaggagcag    5340

caggctgaac agcctcttga accgctggag gatccggcgg cacctcaatc ggagctggat    5400

gaaatggctt ggtgtttgtt gcgatcaaag ttgacggcga tgcgttctca ttcaccttct    5460

tttggcgccc acctagccaa atgaggctta atgataacgc gagaacgaca cctccgacga    5520

tcaatttctg agaccccgaa agacgccggc gatgtttgtc ggagaccagg gatccagatg    5580

catcaacctc atgtgccgct tgctgactat cgttattcat cccttcgccc ccttcaggac    5640

gcgtttcaca tcgggcctca ccgtgcccgt ttgcggcctt tggccaacgg gatcgtaagc    5700

ggtgttccag atacatagta ctgtgtggcc atccctcaga cgccaacctc gggaaaccga    5760

agaaatctcg acatcgctcc ctttaactga atagttggca acagcttcct tgccatcagg    5820

attgatggtg tagatggagg gtatgcgtac attgcccgga aagtggaata ccgtcgtaaa    5880

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attactgtcc gccgcaccaa gggctgtgac aggctgatcc aataaattct cagctttccg    6000

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tgataggagg tgacaaccag acctgccggg ttggttagtc tcaatctgcc gggcaagctg    6600

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cccgtcatag cgtccacccg aattgccgag ctgaagatct gacggagtag gctgccatcg    7260

ccccacattc agcgggaaga tcgggccttt gcagctcgct aatgtgtcgt ttgtctggca    7320

gccgctcaaa gcgacaacta ggcacagcag gcaatacttc atagaattct ccattgaggc    7380

gaatttttgc gcgacctagc ctcgctcaac ctgagcgaag cgacggtaca agctgctggc    7440

agattgggtt gcgccgctcc agtaactgcc tccaatgttg ccggcgatcg ccggcaaagc    7500

gacaatgagc gcatcccctg tcagaaaaaa catatcgagt tcgtaaagac caatgatctt    7560

ggccgcggtc gtaccggcga aggtgattac accaagcata agggtgagcg cagtcgcttc    7620

ggttaggatg acgatcgttg ccacgaggtt taagaggaga agcaagagac cgtaggtgat    7680

aagttgcccg atccacttag ctgcgatgtc ccgcgtgcga tcaaaaatat atccgacgag    7740

gatcagaggc ccgatcgcga gaagcacttt cgtgagaatt ccaacggcgt cgtaaactcc    7800

gaaggcagac cagagcgtgc cgtaaaggac ccactgtgcc ccttggaaag caaggatgtc    7860

ctggtcgttc atcggaccga tttcggatgc gattttctga aaaacggcct gggtcacggc    7920

gaacattgta tccaactgtg ccggaacagt ctgcagaggc aagccggtta cactaaactg    7980

ctgaacaaag tttgggaccg tcttttcgaa gatggaaacc acatagtctt ggtagttagc    8040

ctgcccaaca attagagcaa caacgatggt gaccgtgatc acccgagtga taccgctacg    8100

ggtatcgact tcgccgcgta tgactaaaat accctgaaca ataatccaaa gagtgacaca    8160

ggcgatcaat ggcgcactca ccgcctcctg gatagtctca agcatcgagt ccaagcctgt    8220

cgtgaaggct acatcgaaga tcgtatgaat ggccgtaaac ggcgccggaa tcgtgaaatt    8280

catcgattgg acctgaactt gactggtttg tcgcataatg ttggataaaa tgagctcgca    8340

ttcggcgagg atgcgggcgg atgaacaaat cgcccagcct taggggaggg caccaaagat    8400

gacagcggtc ttttgatgct ccttgcgttg agcggccgcc tcttccgcct cgtgaaggcc    8460

ggcctgcgcg gtagtcatcg ttaataggct tgtcgcctgt acattttgaa tcattgcgtc    8520

atggatctgc ttgagaagca aaccattggt cacggttgcc tgcatgatat tgcgagatcg    8580

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ttcagcatca ctacccacga ctgcacgatc tgtatcgctg gtgatcgcac gtgccgtggt    8760

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gctgcaggtc aaaactgttg caataagttg cgtcgtcttc atcgtttcct accttatcaa    9060

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acatattcac gcatatcccg cagatcaaat tcgcagatga cgcttccact ttctcgttta    9240

agaagaaact tacggctgcc gaccgtcatg tcttcacgga tcgcctgaaa ttccttttcg    9300

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gagcagtgcc cgcttgttcc tgaaatgcca gtaaagcgct ggctgctgaa cccccagccg  21540

gaactgaccc cacaaggccc tagcgtttgc aatgcaccag gtcatcattg acccaggcgt  21600

gttccaccag gccgctgcct cgcaactctt cgcaggcttc gccgacctgc tcgcgccact  21660

tcttcacgcg ggtggaatcc gatccgcaca tgaggcggaa ggtttccagc ttgagcgggt  21720

acggctcccg gtgcgagctg aaatagtcga acatccgtcg ggccgtcggc gacagcttgc  21780

ggtacttctc ccatatgaat ttcgtgtagt ggtcgccagc aaacagcacg acgatttcct  21840

cgtcgatcag gacctggcaa cgggacgttt tcttgccacg gtccaggacg cggaagcggt  21900

gcagcagcga caccgattcc aggtgcccaa cgcggtcgga cgtgaagccc atcgccgtcg  21960

cctgtaggcg cgacaggcat tcctcggcct tcgtgtaata ccggccattg atcgaccagc  22020

ccaggtcctg gcaaagctcg tagaacgtga aggtgatcgg ctcgccgata ggggtgcgct  22080

tcgcgtactc caacacctgc tgccacacca gttcgtcatc gtcggcccgc agctcgacgc  22140

cggtgtaggt gatcttcacg tccttgttga cgtggaaaat gaccttgttt tgcagcgcct  22200

cgcgcgggat tttcttgttg cgcgtggtga acagggcaga gcgggccgtg tcgtttggca  22260

tcgctcgcat cgtgtccggc cacggcgcaa tatcgaacaa ggaaagctgc atttccttga  22320

tctgctgctt cgtgtgtttc agcaacgcgg cctgcttggc ctcgctgacc tgttttgcca  22380

ggtcctcgcc ggcggttttt cgcttcttgg tcgtcatagt tcctcgcgtg tcgatggtca  22440

tcgacttcgc caaacctgcc gcctcctgtt cgagacgacg cgaacgctcc acggcggccg  22500

atggcgcggg cagggcaggg ggagccagtt gcacgctgtc gcgctcgatc ttggccgtag  22560

cttgctggac catcgagccg acggactgga aggtttcgcg gggcgcacgc atgacggtgc  22620

ggcttgcgat ggtttcggca tcctcggcgg aaaaccccgc gtcgatcagt tcttgcctgt  22680

atgccttccg gtcaaacgtc cgattcattc accctccttg cgggattgcc ccgactcacg  22740

ccggggcaat gtgcccttat tcctgatttg acccgcctgg tgccttggtg tccagataat  22800

ccaccttatc ggcaatgaag tcggtcccgt agaccgtctg gccgtccttc tcgtacttgg  22860

tattccgaat cttgccctgc acgaatacca gcgacccctt gcccaaatac ttgccgtggg  22920

cctcggcctg agagccaaaa cacttgatgc ggaagaagtc ggtgcgctcc tgcttgtcgc  22980

cggcatcgtt gcgccactct tcattaaccg ctatatcgaa aattgcttgc ggcttgttag  23040

aattgccatg acgtacctcg gtgtcacggg taagattacc gataaactgg aactgattat  23100

ggctcatatc gaaagtctcc ttgagaaagg agactctagt ttagctaaac attggttccg  23160

ctgtcaagaa ctttagcggc taaaattttg cgggccgcga ccaaaggtgc gaggggcggc  23220

ttccgctgtg tacaaccaga tatttttcac caacatcctt cgtctgctcg atgagcgggg  23280

catgacgaaa catgagctgt cggagagggc aggggtttca atttcgtttt tatcagactt  23340

aaccaacggt aaggccaacc cctcgttgaa ggtgatggag gccattgccg acgccctgga  23400

aactccccta cctcttctcc tggagtccac cgaccttgac cgcgaggcac tcgcggagat  23460

tgcgggtcat cctttcaaga gcagcgtgcc gcccggatac gaacgcatca gtgtggtttt  23520

gccgtcacat aaggcgttta tcgtaaagaa atggggcgac gacacccgaa aaaagctgcg  23580

tggaaggctc tgacgccaag ggttagggct tgcacttcct tctttagccg ctaaaacggc  23640

cccttctctg cgggccgtcg gctcgcgcat catatcgaca tcctcaacgg aagccgtgcc  23700

gcgaatggca tcgggcgggt gcgctttgac agttgttttc tatcagaacc cctacgtcgt  23760

gcggttcgat tagctgtttg tcttgcaggc taaacacttt cggtatatcg tttgcctgtg  23820

cgataatgtt gctaatgatt tgttgcgtag gggttactga aaagtgagcg ggaaagaaga  23880

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gttggccgcg ctcaacgacc cgaaaaccgt tgaagtcatg ctcaacgcgg acggcaaggt  24000

gtggcacgaa cgccttggcg agccgatgcg gtacatctgc gacatgcggc ccagccagtc  24060

gcaggcgatt atagaaacgg tggccggatt ccacggcaaa gaggtcacgc ggcattcgcc  24120

catcctggaa ggcgagttcc ccttggatgg cagccgcttt gccggccaat tgccgccggt  24180

cgtggccgcg ccaacctttg cgatccgcaa gcgcgcggtc gccatcttca cgctggaaca  24240

gtacgtcgag gcgggcatca tgacccgcga gcaatacgag gtcattaaaa gcgccgtcgc  24300

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caccggcgaa atccagtgcg ccgcagagaa cgccgtccaa taccacacca gcatcgacgt  24480

ctcgatgacg ctgctgctca agacaacgct gcgtatgcgc cccgaccgca tcctggtcgg  24540

tgaggtacgt ggccccgaag cccttgatct gttgatggcc tggaacaccg ggcatgaagg  24600

aggtgccgcc accctgcacg caaacaaccc caaagcgggc ctgagccggc tcgccatgct  24660

tatcagcatg cacccggatt caccgaaacc cattgagccg ctgattggcg aggcggttca  24720

tgtggtcgtc catatcgcca ggacccctag cggccgtcga gtgcaagaaa ttctcgaagt  24780

tcttggttac gagaacggcc agtacatcac caaaaccctg taaggagtat ttccaatgac  24840

aacggctgtt ccgttccgtc tgaccatgaa tcgcggcatt ttgttctacc ttgccgtgtt  24900

cttcgttctc gctctcgcgt tatccgcgca tccggcgatg gcctcggaag gcaccggcgg  24960

cagcttgcca tatgagagct ggctgacgaa cctgcgcaac tccgtaaccg gcccggtggc  25020

cttcgcgctg tccatcatcg gcatcgtcgt cgccggcggc gtgctgatct tcggcggcga  25080

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cgcgcagaac gtgatgagca ccttcttcgg tcgtggtgcc gaaatcgcgg ccctcggcaa  25200

cggggcgctg caccaggtgc aagtcgcggc ggcggatgcc gtgcgtgcgg tagcggctgg  25260

acggctcgcc taatcatggc tctgcgcacg atccccatcc gtcgcgcagg caaccgagaa  25320

aacctgttca tgggtggtga tcgtgaactg gtgatgttct cgggcctgat ggcgtttgcg  25380

ctgattttca gcgcccaaga gctgcgggcc accgtggtcg gtctgatcct gtggttcggg  25440

gcgctctatg cgttccgaat catggcgaag gccgatccga agatgcggtt cgtgtacctg  25500

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gcgcgcttct gttgttcatc ctctttgccc gcatccgcgc ggtcgatgcc gaactgaaac  25680

tgaaaaagca tcgttccaag gacgccggcc tggccgatct gctcaactac gccgctgtcg  25740

tcgatgacgg cgtaatcgtg ggcaagaacg gcagctttat ggctgcctgg ctgtacaagg  25800

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aggccctcgc gggcctggga agtgggtgga tgatccatgt ggacgccgtg cggcgtcctg  25920

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cgctcttctt gatggagcgc atggggacgt gcttggcaat cacgcgcacc ccccggccgt  26100

tttagcggct aaaaaagtca tggctctgcc ctcgggcgga ccacgcccat catgaccttg  26160

ccaagctcgt cctgcttctc ttcgatcttc gccagcaggg cgaggatcgt ggcatcaccg  26220

aaccgcgccg tgcgcgggtc gtcggtgagc cagagtttca gcaggccgcc caggcggccc  26280

aggtcgccat tgatgcgggc cagctcgcgg acgtgctcat agtccacgac gcccgtgatt  26340

ttgtagccct ggccgacggc cagcaggtag gccgacaggc tcatgccggc cgccgccgcc  26400

ttttcctcaa tcgctcttcg ttcgtctgga aggcagtaca ccttgatagg tgggctgccc  26460

ttcctggttg gcttggtttc atcagccatc cgcttgccct catctgttac gccggcggta  26520

gccggccagc ctcgcagagc aggattcccg ttgagcaccg ccaggtgcga ataagggaca  26580

gtgaagaagg aacacccgct cgcgggtggg cctacttcac ctatcctgcc cggctgacgc  26640

cgttggatac accaaggaaa gtctacacga accctttggc aaaatcctgt atatcgtgcg  26700

aaaaaggatg gatataccga aaaaatcgct ataatgaccc cgaagcaggg ttatgcagcg  26760

gaaaagcgct gcttccctgc tgttttgtgg aatatctacc gactggaaac aggcaaatgc  26820

aggaaattac tgaactgagg ggacaggcga gagacgatgc caaagagcta caccgacgag  26880

ctggccgagt gggttgaatc ccgcgcggcc aagaagcgcc ggcgtgatga ggctgcggtt  26940

gcgttcctgg cggtgagggc ggatgtcgag gcggcgttag cgtccggcta tgcgctcgtc  27000

accatttggg agcacatgcg ggaaacgggg aaggtcaagt tctcctacga gacgttccgc  27060

tcgcacgcca ggcggcacat caaggccaag cccgccgatg tgcccgcacc gcaggccaag  27120

gctgcggaac ccgcgccggc acccaagacg ccggagccac ggcggccgaa gcaggggggc  27180

aaggctgaaa agccggcccc cgctgcggcc ccgaccggct tcaccttcaa cccaacaccg  27240

gacaaaaagg atctactgta atggcgaaaa ttcacatggt tttgcagggc aagggcgggg  27300

tcggcaagtc ggccatcgcc gcgatcattg cgcagtacaa gatggacaag gggcagacac  27360

ccttgtgcat cgacaccgac ccggtgaacg cgacgttcga gggctacaag gccctgaacg  27420

tccgccggct gaacatcatg gccggcgacg aaattaactc gcgcaacttc gacaccctgg  27480

tcgagctgat tgcgccgacc aaggatgacg tggtgatcga caacggtgcc agctcgttcg  27540

tgcctctgtc gcattacctc atcagcaacc aggtgccggc tctgctgcaa gaaatggggc  27600

atgagctggt catccatacc gtcgtcaccg gcggccaggc tctcctggac acggtgagcg  27660

gcttcgccca gctcgccagc cagttcccgg ccgaagcgct tttcgtggtc tggctgaacc  27720

cgtattgggg gcctatcgag catgagggca agagctttga gcagatgaag gcgtacacgg  27780

ccaacaaggc ccgcgtgtcg tccatcatcc agattccggc cctcaaggaa gaaacctacg  27840

gccgcgattt cagcgacatg ctgcaagagc ggctgacgtt cgaccaggcg ctggccgatg  27900

aatcgctcac gatcatgacg cggcaacgcc tcaagatcgt gcggcgcggc ctgtttgaac  27960

agctcgacgc ggcggccgtg ctatgagcga ccagattgaa gagctgatcc gggagattgc  28020

ggccaagcac ggcatcgccg tcggccgcga cgacccggtg ctgatcctgc ataccatcaa  28080

cgcccggctc atggccgaca gtgcggccaa gcaagaggaa atccttgccg cgttcaagga  28140

agagctggaa gggatcgccc atcgttgggg cgaggacgcc aaggccaaag cggagcggat  28200

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gttgttcgcg gccgccctgg tggtgtgggc ctcgttatga atcgcagagg cgcagatgaa  28440

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ctctgactgc gcccgcgctc gcgctcctgg gcctgtttct tctcctgctc ctgcttgcgc  28560

atcagggcct ggtgccgtcg ggctgcttca cgcatcgaat cccagtcgcc ggccagctcg  28620

ggatgctccg cgcgcatctt gcgcgtcgcc agttcctcga tcttgggcgc gtgaatgccc  28680

atgccttcct tgatttcgcg caccatgtcc agccgcgtgt gcagggtctg caagcgggct  28740

tgctgttggg cctgctgctg ctgccaggcg gcctttgtac gcggcaggga cagcaagccg  28800

ggggcattgg actgtagctg ctgcaaacgc gcctgctgac ggtctacgag ctgttctagg  28860

cggtcctcga tgcgctccac ctggtcatgc tttgcctgca cgtagagcgc aagggtctgc  28920

tggtaggtct gctcgatggg cgcggattct aagagggcct gctgttccgt ctcggcctcc  28980

tgggccgcct gtagcaaatc ctcgccgctg ttgccgctgg actgctttac tgccggggac  29040

tgctgttgcc ctgctcgcgc cgtcgtcgca gttcggcttg cccccactcg attgactgct  29100

tcatttcgag ccgcagcgat gcgatctcgg attgcgtcaa cggacggggc agcgcggagg  29160

tgtccggctt ctccttgggt gagtcggtcg atgccatagc caaaggtttc cttccaaaat  29220

gcgtccattg ctggaccgtg tttctcattg atgcccgcaa gcatcttcgg cttgaccgcc  29280

aggtcaagcg cgccttcatg ggcggtcatg acggacgccg ccatgacctt gccgccgttg  29340

ttctcgatgt agccgcgtaa tgaggcaatg gtgccgccca tcgtcagcgt gtcatcgaca  29400

acgatgtact tctggccggg gatcacctcc ccctcgaaag tcgggttgaa cgccaggcga  29460

tgatctgaac cggctccggt tcgggcgacc ttctcccgct gcacaatgtc cgtttcgacc  29520

tcaaggccaa ggcggtcggc cagaacgacc gccatcatgg ccggaatctt gttgttcccc  29580

gccgcctcga cggcgaggac tggaacgatg cggggcttgt cgtcgccgat cagcgtcttg  29640

agctgggcaa cagtgtcgtc cgaaatcagg cgctcgacca aattaagcgc cgcttccgcg  29700

tcgccctgct tcgcagcctg gtattcaggc tcgttggtca aagaaccaag gtcgccgttg  29760

cgaaccacct tcgggaagtc tccccacggt gcgcgctcgg ctctgctgta gctgctcaag  29820

acgcctccct ttttagccgc taaaactcta acgagtgcgc ccgcgactca acttgacgct  29880

ttcggcactt acctgtgcct tgccacttgc gtcataggtg atgcttttcg cactcccgat  29940

ttcaggtact ttatcgaaat ctgaccgggc gtgcattaca aagttcttcc ccacctgttg  30000

gtaaatgctg ccgctatctg cgtggacgat gctgccgtcg tggcgctgcg acttatcggc  30060

cttttgggcc atatagatgt tgtaaatgcc aggtttcagg gccccggctt tatctacctt  30120

ctggttcgtc catgcgcctt ggttctcggt ctggacaatt ctttgcccat tcatgaccag  30180

gaggcggtgt ttcattgggt gactcctgac ggttgcctct ggtgttaaac gtgtcctggt  30240

cgcttgccgg ctaaaaaaaa gccgacctcg gcagttcgag gccggctttc cctagagccg  30300

ggcgcgtcaa ggttgttcca tctattttag tgaactgcgt tcgatttatc agttactttc  30360

ctcccgcttt gtgtttcctc ccactcgttt ccgcgtctag ccgacccctc aacatagcgg  30420

cctcttcttg ggctgccttt gcctcttgcc gcgcttcgtc acgctcggct tgcaccgtcg  30480

taaagcgctc ggcctgcctg gccgcctctt gcgccgccaa cttcctttgc tcctggtggg  30540

cctcggcgtc ggcctgcgcc ttcgctttca ccgctgccaa ctccgtgcgc aaactctccg  30600

cttcgcgcct ggtggcgtcg cgctcgccgc gaagcgcctg catttcctgg ttggccgcgt  30660

ccagggtctt gcggctctct tctttgaatg cgcgggcgtc ctggtgagcg tagtccagct  30720

cggcgcgcag ctcctgcgct cgacgctcca cctcgtcggc ccgctgcgtc gccagcgcgg  30780

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cggccagctc ggccgcctcg gcggcctgct gctctagcaa tgtaacgcgc gcctgggctt  30900

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actcgttgcg ctcacgatcc cagccggctt gcgctgcctg caacgattca ttggcaaggg  31020

cctgggcggc ttgccagagg gcggccacgg cctggttgcc ggcctgctgc accgcgtccg  31080

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cggcgctggc gtcgttcatg ttgacgcggg cggccttacg cactgcatcc acggtcggga  31200

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tctctttgtt cagttccatg ttggctccgg taattggtaa gaataataat actcttacct  31320

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gctgaagggc aggcaaaaaa agccccgcac ggtcggcggg ggcaaagggt cagcgggaag  31440

gggattagcg ggcgtcgggc ttcttcatgc gtcggggccg cgcttcttgg gatggagcac  31500

gacgaagcgc gcacgcgcat cgtcctcggc cctatcggcc cgcgtcgcgg tcaggaactt  31560

gtcgcgcgct aggtcctccc tggtgggcac caggggcatg aactcggcct gctcgatgta  31620

ggtccactcc atgaccgcat cgcagtcgag gccgcgttcc ttcaccgtct cttgcaggtc  31680

gcggtacgcc cgctcgttga gcggctggta acgggccaat tggtcgtaaa tggctgtcgg  31740

ccatgagcgg cctttcctgt tgagccagca gccgacgacg aagccggcaa tgcaggcccc  31800

tggcacaacc aggccgacgc cgggggcagg ggatggcagc agctcgccaa ccaggaaccc  31860

cgccgcgatg atgccgatgc cggtcaacca gcccttgaaa ctatccggcc ccgaaacacc  31920

cctgcgcatt gcctggatgc tgcgccggat agcttgcaac atcaggagcc gtttcttttg  31980

ttcgtcagtc atggtccgcc ctcaccagtt gttcgtatcg gtgtcggacg aactgaaatc  32040

gcaagagctg ccggtatcgg tccagccgct gtccgtgtcg ctgctgccga agcacggcga  32100

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ggtcagcgag ccgccggcca ggtagcccag catggtgctg ttggtcgccc cggccaccag  32220

ggccgacgtg acgaaatcgc cgtcattccc tctggattgt tcgctgctcg gcggggcagt  32280

gcgccgcgcc ggcggcgtcg tggatggctc gggttggctg gcctgcgacg gccggcgaaa  32340

ggtgcgcagc agctcgttat cgaccggctg cggcgtcggg gccgccgcct tgcgctgcgg  32400

tcggtgttcc ttcttcggct cgcgcagctt gaacagcatg atcgcggaaa ccagcagcaa  32460

cgccgcgcct acgcctcccg cgatgtagaa cagcatcgga ttcattcttc ggtcctcctt  32520

gtagcggaac cgttgtctgt gcggcgcggg tggcccgcgc cgctgtcttt ggggatcagc  32580

cctcgatgag cgcgaccagt ttcacgtcgg caaggttcgc ctcgaactcc tggccgtcgt  32640

cctcgtactt caaccaggca tagccttccg ccggcggccg acggttgagg ataaggcggg  32700

cagggcgctc gtcgtgctcg acctggacga tggccttttt cagcttgtcc gggtccggct  32760

ccttcgcgcc cttttccttg gcgtccttac cgtcctggtc gccgtcctcg ccgtcctggc  32820

cgtcgccggc ctccgcgtca cgctcggcat cagtctggcc gttgaaggca tcgacggtgt  32880

tgggatcgcg gcccttctcg tccaggaact cgcgcagcag cttgaccgtg ccgcgcgtga  32940

tttcctgggt gtcgtcgtca agccacgcct cgacttcctc cgggcgcttc ttgaaggccg  33000

tcaccagctc gttcaccacg gtcacgtcgc gcacgcggcc ggtgttgaac gcatcggcga  33060

tcttctccgg caggtccagc agcgtgacgt gctgggtgat gaacgccggc gacttgccga  33120

tttccttggc gatatcgcct ttcttcttgc ccttcgccag ctcgcggcca atgaagtcgg  33180

caatttcgcg cggggtcagc tcgttgcgtt gcaggttctc gataacctgg tcggcttcgt  33240

tgtagtcgtt gtcgatgaac gccgggatgg acttcttgcc ggcccacttc gagccacggt  33300

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aaatgggtga cttcaccccg cgctctttga tcgtggcacc gatttccgcg atgctctccg  33420

gggaaaagcc ggggttgtcg gccgtccgcg gctgatgcgg atcttcgtcg atcaggtcca  33480

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tgttttttct tggcgtccgc ttcccacttc cggacgatgt acgcctgatg ttccggcaga  34500

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caacaaagcc ggttgccgcc gccgccagga tcgcgccgat gatgccggcc acaccggcca  35040

tcgcccacca ggtcgccgcc ttccggttcc attcctgctg gtactgcttc gcaatgctgg  35100

acctcggctc accataggct gaccgctcga tggcgtatgc cgcttctccc cttggcgtaa  35160

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ccgacttggc tccacgcgcc tcgatcagct cttgcactcg cgcgaaatcc ttggcctcca  35340

cggccgccat gaatcgcgca cgcggcgaag gctccgcagg gccggcgtcg tgatcgccgc  35400

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gccaagaatg cccaaggtaa aaattgccgg ccccgccatg aagtccgtga atgccccgac  35580

ggccgaagtg aagggcaggc cgccacccag gccgccgccc tcactgcccg gcacctggtc  35640

gctgaatgtc gatgccagca cctgcggcac gtcaatgctt ccgggcgtcg cgctcgggct  35700

gatcgcccat cccgttactg ccccgatccc ggcaatggca aggactgcca gcgctgccat  35760

ttttggggtg aggccgttcg cggccgaggg gcgcagcccc tggggggatg ggaggcccgc  35820

gttagcgggc cgggagggtt cgagaagggg gggcaccccc cttcggcgtg cgcggtcacg  35880

cgcacagggc gcagccctgg ttaaaaacaa ggtttataaa tattggttta aaagcaggtt  35940

aaaagacagg ttagcggtgg ccgaaaaacg ggcggaaacc cttgcaaatg ctggattttc  36000

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cctcaagtgt caaggatcgc gcccctcatc tgtcagtagt cgcgcccctc aagtgtcaat  36120

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aggcgttttc gccgatttgc gaggctggcc agctccacgt cgccggccga aatcgagcct  36240

gcccctcatc tgtcaacgcc gcgccgggtg agtcggcccc tcaagtgtca acgtccgccc  36300

ctcatctgtc agtgagggcc aagttttccg cgaggtatcc acaacgccgg cggccgcggt  36360

gtctcgcaca cggcttcgac ggcgtttctg gcgcgtttgc agggccatag acggccgcca  36420

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ccagttggtg attttgaact tttgctttgc cacggaacgg tctgcgttgt cgggaagatg  36720

cgtgatctga tccttcaact cagcaaaagt tcgatttatt caacaaagcc acgttgtgtc  36780

tcaaaatctc tgatgttaca ttgcacaaga taaaaatata tcatcatgaa caataaaact  36840

gtctgcttac ataaacagta atacaagggg tgttatgagc catattcaac gggaaacgtc  36900

ttgctcgac                                                          36909

 

<210>8

<211>13019

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>8

gttacccgga ccgaagctta gcccgggcat gcctgcagtg cagcgtgacc cggtcgtgcc     60

cctctctaga gataatgagc attgcatgtc taagttataa aaaattacca catatttttt    120

ttgtcacact tgtttgaagt gcagtttatc tatctttata catatattta aactttactc    180

tacgaataat ataatctata gtactacaat aatatcagtg ttttagagaa tcatataaat    240

gaacagttag acatggtcta aaggacaatt gagtattttg acaacaggac tctacagttt    300

tatcttttta gtgtgcatgt gttctccttt ttttttgcaa atagcttcac ctatataata    360

cttcatccat tttattagta catccattta gggtttaggg ttaatggttt ttatagacta    420

atttttttag tacatctatt ttattctatt ttagcctcta aattaagaaa actaaaactc    480

tattttagtt tttttattta ataatttaga tataaaatag aataaaataa agtgactaaa    540

aattaaacaa atacccttta agaaattaaa aaaactaagg aaacattttt cttgtttcga    600

gtagataatg ccagcctgtt aaacgccgtc gacgagtcta acggacacca accagcgaac    660

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cacggcagct acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc     900

gtaataaata gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttgt tcggagcgca     960

cacacacaca accagatctc ccccaaatcc acccgtcggc acctccgctt caaggtacgc    1020

cgctcgtcct cccccccccc ccctctctac cttctctaga tcggcgttcc ggtccatggt    1080

tagggcccgg tagttctact tctgttcatg tttgtgttag atccgtgttt gtgttagatc    1140

cgtgctgcta gcgttcgtac acggatgcga cctgtacgtc agacacgttc tgattgctaa    1200

cttgccagtg tttctctttg gggaatcctg ggatggctct agccgttccg cagacgggat    1260

cgatttcatg attttttttg tttcgttgca tagggtttgg tttgcccttt tcctttattt    1320

caatatatgc cgtgcacttg tttgtcgggt catcttttca tgcttttttt tgtcttggtt    1380

gtgatgatgt ggtctggttg ggcggtcgtt ctagatcgga gtagaattct gtttcaaact    1440

acctggtgga tttattaatt ttggatctgt atgtgtgtgc catacatatt catagttacg    1500

aattgaagat gatggatgga aatatcgatc taggataggt atacatgttg atgcgggttt    1560

tactgatgca tatacagaga tgctttttgt tcgcttggtt gtgatgatgt ggtgtggttg    1620

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tattaatttt ggaactgtat gtgtgtgtca tacatcttca tagttacgag tttaagatgg    1740

atggaaatat cgatctagga taggtataca tgttgatgtg ggttttactg atgcatatac    1800

atgatggcat atgcagcatc tattcatatg ctctaacctt gagtacctat ctattataat    1860

aaacaagtat gttttataat tattttgatc ttgatatact tggatgatgg catatgcagc    1920

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tgtgtggatt ttgagttagg atttaaatac gcgttgatcc ggcttactaa aagccagata    2280

acagtatgcg tatttgcgcg ctgatttttg cggtataaga atatatactg atatgtatac    2340

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tgactggata tgttgtgttt tacagtatta tgtagtctgt tttttatgca aaatctaatt    3000

taatatattg atatttatat cattttacgt ttctcgttca gctttcttgt acaaagtggt    3060

gttaacctag acttgtccat cttctggatt ggccaactta attaatgtat gaaataaaag    3120

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gtaattacta gttatctgaa taaaagagaa agagatcatc catatttctt atcctaaatg    3240

aatgtcacgt gtctttataa ttctttgatg aaccagatgc atttcattaa ccaaatccat    3300

atacatataa atattaatca tatataatta atatcaattg ggttagcaaa acaaatctag    3360

tctaggtgtg ttttgcgaat tgcggccgcc accgcggtgg agctcgaatt ccggtccggg    3420

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agttgaagac acgttcatgt cttcatcgta agaagacact cagtagtctt cggccagaat    3540

ggccatctgg attcagcagg cctagaaggc catttaaatc ctgaggatct ggtcttccta    3600

aggacccggg atatcggacc gattaaactt taattcggtc cgaagcttgc atgcctgcag    3660

tgcagcgtga cccggtcgtg cccctctcta gagataatga gcattgcatg tctaagttat    3720

aaaaaattac cacatatttt ttttgtcaca cttgtttgaa gtgcagttta tctatcttta    3780

tacatatatt taaactttac tctacgaata atataatcta tagtactaca ataatatcag    3840

tgttttagag aatcatataa atgaacagtt agacatggtc taaaggacaa ttgagtattt    3900

tgacaacagg actctacagt tttatctttt tagtgtgcat gtgttctcct ttttttttgc    3960

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ggttaatggt ttttatagac taattttttt agtacatcta ttttattcta ttttagcctc    4080

taaattaaga aaactaaaac tctattttag tttttttatt taataattta gatataaaat    4140

agaataaaat aaagtgacta aaaattaaac aaataccctt taagaaatta aaaaaactaa    4200

ggaaacattt ttcttgtttc gagtagataa tgccagcctg ttaaacgccg tcgacgagtc    4260

taacggacac caaccagcga accagcagcg tcgcgtcggg ccaagcgaag cagacggcac    4320

ggcatctctg tcgctgcctc tggacccctc tcgagagttc cgctccaccg ttggacttgc    4380

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gatcggcgtt ccggtccatg catggttagg gcccggtagt tctacttctg ttcatgtttg    4740

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gacccatttg cgctatatat aagcctacga tttccgttgc gactattgtc gtaattggat    7620

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gctggataac gccacggaat gatgtcgtcg tgcacaacaa tggtgacttc tacagcgcgg    8460

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cgcgttgttt catcaagcct tacagtcacc gtaaccagca aatcaatatc actgtgtggc    8580

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tggcgctcga tgacgccaac tacctctgat agttgagtcg atacttcggc gatcaccgct    8700

tccctcatga tgtttaactc ctgaattaag ccgcgccgcg aagcggtgtc ggcttgaatg    8760

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gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag tgcaccatat    9780

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agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca   10020

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tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat   10860

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aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc gggaagctag   11040

agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg cagggggggg   11100

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taaaaacatt aagttatgac gaagaagaac ggaaacgcct taaaccggaa aattttcata   11280

aatagcgaaa acccgcgagg tcgccgcccc gtaacctgtc ggatcaccgg aaaggacccg  11340

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caaataatca attatgacgc aggtatcgta ttaattgatc tgcatcaact taacgtaaaa  11460

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ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa aaagcggtta  11640

gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta tcactcatgg  11700

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ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg gcgacacgga  12060

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cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtcttca agaattggtc gacgatcttg  12300

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atatcctgtc aaacactgat agtttaaact gaaggcggga aacgacaatc tgatcatgag  12840

cggagaatta agggagtcac gttatgaccc ccgccgatga cgcgggacaa gccgttttac  12900

gtttggaact gacagaaccg caacgttgaa ggagccactc agcaagctgg tacgattgta  12960

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<210>9

<211>2991

<212>DNA

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<220>

<223>载体

 

<400>9

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gcgcccaata cgcaaaccgc ctctccccgc gcgttggccg attcattaat gcagctggca   180

cgacaggttt cccgactgga aagcgggcag tgagcgcaac gcaattaata cgcgtaccgc   240

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caacagataa aacgaaaggc ccagtcttcc gactgagcct ttcgttttat ttgatgcctg   480

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taataccatc taagtagttg gttcatagtg actgcatatg ttgtgtttta cagtattatg   660

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attggccaac ttaattaatg tatgaaataa aaggatgcac acatagtgac atgctaatca   840

ctataatgtg ggcatcaaag ttgtgtgtta tgtgtaatta ctagttatct gaataaaaga   900

gaaagagatc atccatattt cttatcctaa atgaatgtca cgtgtcttta taattctttg   960

atgaaccaga tgcatttcat taaccaaatc catatacata taaatattaa tcatatataa  1020

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ttatcaattt gttgcaacga acaggtcact atcagtcaaa ataaaatcat tatttggagc  1200

tccatggtag cgttaacgcg gccgcgatat cccctatagt gagtcgtatt acatggtcat  1260

agctgtttcc tggcagctct ggcccgtgtc tcaaaatctc tgatgttaca ttgcacaaga  1320

taaaaatata tcatcatgaa caataaaact gtctgcttac ataaacagta atacaagggg  1380

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tgatttatat gggtataaat gggctcgcga taatgtcggg caatcaggtg cgacaatcta  1500

tcgcttgtat gggaagcccg atgcgccaga gttgtttctg aaacatggca aaggtagcgt  1560

tgccaatgat gttacagatg agatggtcag actaaactgg ctgacggaat ttatgcctct  1620

tccgaccatc aagcatttta tccgtactcc tgatgatgca tggttactca ccactgcgat  1680

ccccggaaaa acagcattcc aggtattaga agaatatcct gattcaggtg aaaatattgt  1740

tgatgcgctg gcagtgttcc tgcgccggtt gcattcgatt cctgtttgta attgtccttt  1800

taacagcgat cgcgtatttc gtctcgctca ggcgcaatca cgaatgaata acggtttggt  1860

tgatgcgagt gattttgatg acgagcgtaa tggctggcct gttgaacaag tctggaaaga  1920

aatgcataaa cttttgccat tctcaccgga ttcagtcgtc actcatggtg atttctcact  1980

tgataacctt atttttgacg aggggaaatt aataggttgt attgatgttg gacgagtcgg  2040

aatcgcagac cgataccagg atcttgccat cctatggaac tgcctcggtg agttttctcc  2100

ttcattacag aaacggcttt ttcaaaaata tggtattgat aatcctgata tgaataaatt  2160

gcagtttcat ttgatgctcg atgagttttt ctaatcagaa ttggttaatt ggttgtaaca  2220

ctggcagagc attacgctga cttgacggga cggcgcaagc tcatgaccaa aatcccttaa  2280

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ctacaccgaa ctgagatacc tacagcgtga gcattgagaa agcgccacgc ttcccgaagg  2760

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gcttccaggg ggaaacgcct ggtatcttta tagtcctgtc gggtttcgcc acctctgact  2880

tgagcgtcga tttttgtgat gctcgtcagg ggggcggagc ctatggaaaa acgccagcaa  2940

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<210>10

<211>13807

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>载体

 

<400>10

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ttcaactgga agagcggtta ccagagctgg tcacctttgt ccaccaagat ggaactgcgg   120

ccgctcatta attaagtcag gcgcgcctct agttgaagac acgttcatgt cttcatcgta   180

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gtaaacattt tcttctattt tttcatattt tcaggataaa ttattgtaaa agtttacaag   300

atttccattt gactagtgta aatgaggaat attctctagt aagatcatta tttcatctac   360

ttcttttatc ttctaccagt agaggaataa acaatattta gctcctttgt aaatacaaat   420

taattttcgt tcttgacatc attcaatttt aattttacgt ataaaataaa agatcatacc   480

tattagaacg attaaggaga aatacaattc gaatgagaag gatgtgccgt ttgttataat   540

aaacagccac acgacgtaaa cgtaaaatga ccacatgatg ggccaataga catggaccga   600

ctactaataa tagtaagtta cattttagga tggaataaat atcataccga catcagtttg   660

aaagaaaagg gaaaaaaaga aaaaataaat aaaagatata ctaccgacat gagttccaaa   720

aagcaaaaaa aaagatcaag ccgacacaga cacgcgtaga gagcaaaatg actttgacgt   780

cacaccacga aaacagacgc ttcatacgtg tccctttatc tctctcagtc tctctataaa   840

cttagtgaga ccctcctctg ttttactcag gatccccggg taccgagctc gaattcaccg   900

gtcgccacca tggcccacag caagcacggc ctgaaggagg agatgaccat gaagtaccac   960

atggagggct gcgtgaacgg ccacaagttc gtgatcaccg gcgagggcat cggctacccc  1020

ttcaagggca agcagaccat caacctgtgc gtgatcgagg gcggccccct gcccttcagc  1080

gaggacatcc tgagcgccgg cttcaagtac ggcgaccgga tcttcaccga gtacccccag  1140

gacatcgtgg actacttcaa gaacagctgc cccgccggct acacctgggg ccggagcttc  1200

ctgttcgagg acggcgccgt gtgcatctgt aacgtggaca tcaccgtgag cgtgaaggag  1260

aactgcatct accacaagag catcttcaac ggcgtgaact tccccgccga cggccccgtg  1320

atgaagaaga tgaccaccaa ctgggaggcc agctgcgaga agatcatgcc cgtgcctaag  1380

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cggtgccagt tcgacaccgt gtacaaggcc aagagcgtgc ccagcaagat gcccgagtgg  1500

cacttcatcc agcacaagct gctgcgggag gaccggagcg acgccaagaa ccagaagtgg  1560

cagctgaccg agcacgccat cgccttcccc agcgccctgg cctgaagcgg cccatggata  1620

ttcgaacgcg taggtaccac atggttaacc tagacttgtc catcttctgg attggccaac    1680

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ggcatcaaag ttgtgtgtta tgtgtaatta ctagttatct gaataaaaga gaaagagatc    1800

atccatattt cttatcctaa atgaatgtca cgtgtcttta taattctttg atgaaccaga    1860

tgcatttcat taaccaaatc catatacata taaatattaa tcatatataa ttaatatcaa    1920

ttgggttagc aaaacaaatc tagtctaggt gtgttttgcg aatgcggcca ttggcctaga    1980

aggccattta aatcctgagg atctggtctt cctaaggacc cgggatatcg ctatcaactt    2040

tgtatagaaa agttgaacga gaaacgtaaa atgatataaa tatcaatata ttaaattaga    2100

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cgacctgcag actggctgtg tataagggag cctgacattt atattcccca gaacatcagg    2220

ttaatggcgt ttttgatgtc attttcgcgg tggctgagat cagccacttc ttccccgata    2280

acggagaccg gcacactggc catatcggtg gtcatcatgc gccagctttc atccccgata    2340

tgcaccaccg ggtaaagttc acgggggact ttatctgaca gcagacgtgc actggccagg    2400

gggatcacca tccgtcgccc gggcgtgtca ataatatcac tctgtacatc cacaaacaga    2460

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aataatatca gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca    4020

attgagtatt ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc    4080

tttttttttg caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat    4140

ttagggttta gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct    4200

attttagcct ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt    4260

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aaaaaaacta aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc    4380

gtcgacgagt ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa    4440

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aatcctggga tggctctagc cgttccgcag acgggatcga tttcatgatt ttttttgttt    5040

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gtcgggtcat cttttcatgc ttttttttgt cttggttgtg atgatgtggt ctggttgggc    5160

ggtcgttcta gatcggagta gaattctgtt tcaaactacc tggtggattt attaattttg    5220

gatctgtatg tgtgtgccat acatattcat agttacgaat tgaagatgat ggatggaaat    5280

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tcggagtaga atactgtttc aaactacctg gtgtatttat taattttgga actgtatgtg    5460

tgtgtcatac atcttcatag ttacgagttt aagatggatg gaaatatcga tctaggatag    5520

gtatacatgt tgatgtgggt tttactgatg catatacatg atggcatatg cagcatctat    5580

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cctgccttca tacgctattt atttgcttgg tactgtttct tttgtcgatg ctcaccctgt    5760

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gccgaggtgg agggcgtggt ggccggcatc gcctacgccg gcccgtggaa ggcccgcaac    6060

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ctcggctcca ccctctacac ccacctcctc aagagcatgg aggcccaggg cttcaagtcc    6180

gtggtggccg tgatcggcct cccgaacgac ccgtccgtgc gcctccacga ggccctcggc    6240

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gccaagaagc ccgtgcagct gcccggctac tactacgtgg actccaagct ggacatcacc    7020

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ctgttcctgt agtcaggatc tgagtcgaaa cctagacttg tccatcttct ggattggcca    7140

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attcggacgt acgttctgaa cacagctgga tacttacttg ggcgattgtc atacatgaca    8100

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accaatgccc cgcagaagct cccatctttg ccgccataga cgccgcgccc cccttttggg    8340

gtgtagaaca tccttttgcc agatgtggaa aagaagttcg ttgtcccatt gttggcaatg    8400

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ttgcgactat tgtcgtaatt ggatgaacta ttatcgtagt tgctctcaga gttgtcgtaa    8520

tttgatggac tattgtcgta attgcttatg gagttgtcgt agttgcttgg agaaatgtcg    8580

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tcagcaagtg cctgccccga tgccatcgca agtacgaggc ttagaaccac cttcaacaga   8700

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tctccaaatt gcagttcgcg cttagctgga taacgccacg gaatgatgtc gtcgtgcaca   9300

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taccagtaca tcgctgtttc gttcgagact tgaggtctag ttttatacgt gaacaggtca   9720

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tgtgtctcta atcgtatgcc aaggagctgt ctgcttagtg cccacttttt cgcaaattcg   9840

atgagactgt gcgcgactcc tttgcctcgg tgcgtgtgcg acacaacaat gtgttcgata   9900

gaggctagat cgttccatgt tgagttgagt tcaatcttcc cgacaagctc ttggtcgatg   9960

aatgcgccat agcaagcaga gtcttcatca gagtcatcat ccgagatgta atccttccgg  10020

taggggctca cacttctggt agatagttca aagccttggt cggataggtg cacatcgaac  10080

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attgctgggg atttcaggaa agtaaacatc accttccggc tcgatgtcta ttgtagatat  10380

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ttaaaaatga agttttaaat caatctaaag tatatatgag taaacttggt ctgacagtta  11640

ccaatgctta atcagtgagg cacctatctc agcgatctgt ctatttcgtt catccatagt  11700

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tgctgcaatg ataccgcgag acccacgctc accggctcca gatttatcag caataaacca  11820

gccagccgga agggccgagc gcagaagtgg tcctgcaact ttatccgcct ccatccagtc  11880

tattaattgt tgccgggaag ctagagtaag tagttcgcca gttaatagtt tgcgcaacgt  11940

tgttgccatt gctgcagggg gggggggggg gggggacttc cattgttcat tccacggaca  12000

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tttcttttca gagggtattt taaataaaaa cattaagtta tgacgaagaa gaacggaaac  12120

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tgtcggatca ccggaaagga cccgtaaagt gataatgatt atcatctaca tatcacaacg  12240

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cggggcaacc tcatgtcccc cccccccccc cccctgcagg catcgtggtg tcacgctcgt  12420

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ccatgttgtg caaaaaagcg gttagctcct tcggtcctcc gatcgttgtc agaagtaagt  12540

tggccgcagt gttatcactc atggttatgg cagcactgca taattctctt actgtcatgc  12600

catccgtaag atgcttttct gtgactggtg agtactcaac caagtcattc tgagaatagt  12660

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tcttaccgct gttgagatcc agttcgatgt aacccactcg tgcacccaac tgatcttcag  12840

catcttttac tttcaccagc gtttctgggt gagcaaaaac aggaaggcaa aatgccgcaa  12900

aaaagggaat aagggcgaca cggaaatgtt gaatactcat actcttcctt tttcaatatt  12960

attgaagcat ttatcagggt tattgtctca tgagcggata catatttgaa tgtatttaga  13020

aaaataaaca aataggggtt ccgcgcacat ttccccgaaa agtgccacct gacgtctaag  13080

aaaccattat tatcatgaca ttaacctata aaaataggcg tatcacgagg ccctttcgtc  13140

ttcaagaatt ggtcgacgat cttgctgcgt tcggatattt tcgtggagtt cccgccacag  13200

acccggattg aaggcgagat ccagcaactc gcgccagatc atcctgtgac ggaactttgg  13260

cgcgtgatga ctggccagga cgtcggccga aagagcgaca agcagatcac gcttttcgac  13320

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ggacgaacgg ataaaccttt tcacgccctt ttaaatatcc gttattctaa taaacgctct  13620

tttctcttag gtttacccgc caatatatcc tgtcaaacac tgatagttta aactgaaggc  13680

gggaaacgac aatctgatca tgagcggaga attaagggag tcacgttatg acccccgccg  13740

atgacgcggg acaagccgtt ttacgtttgg aactgacaga accgcaacgt tgaaggagcc  13800

actcagc                                                            13807

 

<210>11

<211>4678

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>11

gaaaggccca gtcttccgac tgagcctttc gttttatttg atgcctggca gttccctact    60

ctcgcgttaa cgctagcatg gatgttttcc cagtcacgac gttgtaaaac gacggccagt   120

cttaagctcg ggcccgcgtt aacgctacca tggagctcca aataatgatt ttattttgac   180

tgatagtgac ctgttcgttg caacaaattg ataagcaatg cttttttata atgccaactt   240

tgtatagaaa agttgggccg aattcgagct cggtacggcc agaatggccc ggaccgggtt   300

accgaattcg agctcggtac cctgggatcc ctggtaatta ttggctgtag gattctaaac   360

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tgcaactcta aatttttatt ctaaaagtaa tatttcattt ttgtcaacga gattctctac   480

tctattccac aatcttttga agcaatattt accttaaatc tgtactctat accaataatc   540

atatattcta ttatttattt ttatctctct cctaaggagc atccccctat gtctgcatgg   600

cccccgcctc gggtcccaat ctcttgctct gctagtagca cagaagaaaa cactagaaat   660

gacttgcttg acttagagta tcagataaac atcatgttta cttaacttta atttgtatcg   720

gtttctacta tttttataat atttttgtct ctatagatac tacgtgcaac agtataatca   780

acctagttta atccagagcg aaggattttt tactaagtac gtgactccat atgcacagcg   840

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cgaacaaaca gaaattccat cagcgaacaa acaacataca tgcgagatga aaataaataa   960

taaaaaaagc tccgtctcga taggccggca cgaatcgaga gcctccatag ccagtttttt  1020

ccatcggaac ggcggttcgc gcacctaatt atatgcacca cacgcctata aagccaacca  1080

acccgtcgga ggggcgcaag ccagacagaa gacagcccgt cagcccctct cgtttttcat  1140

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gttcatgttt gtgttagatc cgtgtttgtg ttagatccgt gctgctagcg ttcgtacacg  1380

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ggtcgttcta gatcggagta gaattctgtt tcaaactacc tggtggattt attaattttg    1680

gatctgtatg tgtgtgccat acatattcat agttacgaat tgaagatgat ggatggaaat    1740

atcgatctag gataggtata catgttgatg cgggttttac tgatgcatat acagagatgc    1800

tttttgttcg cttggttgtg atgatgtggt gtggttgggc ggtcgttcat tcgttctaga    1860

tcggagtaga atactgtttc aaactacctg gtgtatttat taattttgga actgtatgtg    1920

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cctgccttca tacgctattt atttgcttgg tactgtttct tttgtcgatg ctcaccctgt    2220

tgtttggtgt tacttctgca ggtcgactct agaagcttgg tcacccggtc cgggcctaga    2280

aggccagctt caagtttgta caaaaaagtt gaacgagaaa cgtaaaatga tataaatatc    2340

aatatattaa attagatttt gcataaaaaa cagactacat aatactgtaa aacacaacat    2400

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ttcctggcag ctctggcccg tgtctcaaaa tctctgatgt tacattgcac aagataaaaa    2580

tatatcatca tgaacaataa aactgtctgc ttacataaac agtaatacaa ggggtgttat    2640

gagccatatt caacgggaaa cgtcgaggcc gcgattaaat tccaacatgg atgctgattt    2700

atatgggtat aaatgggctc gcgataatgt cgggcaatca ggtgcgacaa tctatcgctt    2760

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catcaagcat tttatccgta ctcctgatga tgcatggtta ctcaccactg cgatccccgg    2940

aaaaacagca ttccaggtat tagaagaata tcctgattca ggtgaaaata ttgttgatgc    3000

gctggcagtg ttcctgcgcc ggttgcattc gattcctgtt tgtaattgtc cttttaacag    3060

cgatcgcgta tttcgtctcg ctcaggcgca atcacgaatg aataacggtt tggttgatgc    3120

gagtgatttt gatgacgagc gtaatggctg gcctgttgaa caagtctgga aagaaatgca  3180

taaacttttg ccattctcac cggattcagt cgtcactcat ggtgatttct cacttgataa  3240

ccttattttt gacgagggga aattaatagg ttgtattgat gttggacgag tcggaatcgc  3300

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acagaaacgg ctttttcaaa aatatggtat tgataatcct gatatgaata aattgcagtt  3420

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aatgcttccg ggcgtcgcgc tcgggctgat cgcccatccc gttactgccc cgatcccggc  19320

aatggcaagg actgccagcg ctgccatttt tggggtgagg ccgttcgcgg ccgaggggcg  19380

cagcccctgg ggggatggga ggcccgcgtt agcgggccgg gagggttcga gaaggggggg  19440

cacccccctt cggcgtgcgc ggtcacgcgc acagggcgca gccctggtta aaaacaaggt  19500

ttataaatat tggtttaaaa gcaggttaaa agacaggtta gcggtggccg aaaaacgggc  19560

ggaaaccctt gcaaatgctg gattttctgc ctgtggacag cccctcaaat gtcaataggt  19620

gcgcccctca tctgtcagca ctctgcccct caagtgtcaa ggatcgcgcc cctcatctgt  19680

cagtagtcgc gcccctcaag tgtcaatacc gcagggcact tatccccagg cttgtccaca  19740

tcatctgtgg gaaactcgcg taaaatcagg cgttttcgcc gatttgcgag gctggccagc  19800

tccacgtcgc cggccgaaat cgagcctgcc cctcatctgt caacgccgcg ccgggtgagt  19860

cggcccctca agtgtcaacg tccgcccctc atctgtcagt gagggccaag ttttccgcga  19920

ggtatccaca acgccggcgg ccgcggtgtc tcgcacacgg cttcgacggc gtttctggcg  19980

cgtttgcagg gccatagacg gccgccagcc cagcggcgag ggcaaccagc ccggtgagcg  20040

tcggaaaggc gctggaagcc ccgtagcgac gcggagaggg gcgagacaag ccaagggcgc  20100

aggctcgatg cgcagcacga catagccggt tctcgcaagg acgagaattt ccctgcggtg  20160

cccctcaagt gtcaatgaaa gtttccaacg cgagccattc gcgagagcct tgagtccacg  20220

ctagatgaga gctttgttgt aggtggacca gttggtgatt ttgaactttt gctttgccac  20280

ggaacggtct gcgttgtcgg gaagatgcgt gatctgatcc ttcaactcag caaaagttcg  20340

atttattcaa caaagccacg ttgtgtctca aaatctctga tgttacattg cacaagataa  20400

aaatatatca tcatgaacaa taaaactgtc tgcttacata aacagtaata caaggggtgt  20460

tatgagccat attcaacggg aaacgtcttg ctcgactcta gagctcgttc ctcgaggcct  20520

cgaggcctcg aggaacggta cctgcgggga agcttacaat aatgtgtgtt gttaagtctt  20580

gttgcctgtc atcgtctgac tgactttcgt cataaatccc ggcctccgta acccagcttt  20640

gggcaagctc acggatttga tccggcggaa cgggaatatc gagatgccgg gctgaacgct  20700

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tttctcccgt caggtgcgtg gtcaagtgct acaaggcacc tttcagtaac gagcgaccgt  20880

cgatccgtcg ccgggatacg gacaaaatgg agcgcagtag tccatcgagg gcggcgaaag  20940

cctcgccaaa agcaatacgt tcatctcgca cagcctccag atccgatcga gggtcttcgg  21000

cgtaggcaga tagaagcatg gatacattgc ttgagagtat tccgatggac tgaagtatgg  21060

cttccatctt ttctcgtgtg tctgcatcta tttcgagaaa gcccccgatg cggcgcaccg  21120

caacgcgaat tgccatacta tccgaaagtc ccagcaggcg cgcttgatag gaaaaggttt  21180

catactcggc cgatcgcaga cgggcactca cgaccttgaa cccttcaact ttcagggatc  21240

gatgctggtt gatggtagtc tcactcgacg tggctctggt gtgttttgac atagcttcct  21300

ccaaagaaag cggaaggtct ggatactcca gcacgaaatg tgcccgggta gacggatgga  21360

agtctagccc tgctcaatat gaaatcaaca gtacatttac agtcaatact gaatatactt  21420

gctacatttg caattgtctt ataacgaatg tgaaataaaa atagtgtaac aacgctttta  21480

ctcatcgata atcacaaaaa catttatacg aacaaaaata caaatgcact ccggtttcac  21540

aggataggcg ggatcagaat atgcaacttt tgacgttttg ttctttcaaa gggggtgctg  21600

gcaaaaccac cgcactcatg ggcctttgcg ctgctttggc aaatgacggt aaacgagtgg  21660

ccctctttga tgccgacgaa aaccggcctc tgacgcgatg gagagaaaac gccttacaaa  21720

gcagtactgg gatcctcgct gtgaagtcta ttccgccgac gaaatgcccc ttcttgaagc  21780

agcctatgaa aatgccgagc tcgaaggatt tgattatgcg ttggccgata cgcgtggcgg  21840

ctcgagcgag ctcaacaaca caatcatcgc tagctcaaac ctgcttctga tccccaccat  21900

gctaacgccg ctcgacatcg atgaggcact atctacctac cgctacgtca tcgagctgct  21960

gttgagtgaa aatttggcaa ttcctacagc tgttttgcgc caacgcgtcc cggtcggccg  22020

attgacaaca tcgcaacgca ggatgtcaga gacgctagag agccttccag ttgtaccgtc  22080

tcccatgcat gaaagagatg catttgccgc gatgaaagaa cgcggcatgt tgcatcttac  22140

attactaaac acgggaactg atccgacgat gcgcctcata gagaggaatc ttcggattgc  22200

gatggaggaa gtcgtggtca tttcgaaact gatcagcaaa atcttggagg cttgaagatg  22260

gcaattcgca agcccgcatt gtcggtcggc gaagcacggc ggcttgctgg tgctcgaccc  22320

gagatccacc atcccaaccc gacacttgtt ccccagaagc tggacctcca gcacttgcct  22380

gaaaaagccg acgagaaaga ccagcaacgt gagcctctcg tcgccgatca catttacagt  22440

cccgatcgac aacttaagct aactgtggat gcccttagtc cacctccgtc cccgaaaaag  22500

ctccaggttt ttctttcagc gcgaccgccc gcgcctcaag tgtcgaaaac atatgacaac  22560

ctcgttcggc aatacagtcc ctcgaagtcg ctacaaatga ttttaaggcg cgcgttggac  22620

gatttcgaaa gcatgctggc agatggatca tttcgcgtgg ccccgaaaag ttatccgatc  22680

ccttcaacta cagaaaaatc cgttctcgtt cagacctcac gcatgttccc ggttgcgttg  22740

ctcgaggtcg ctcgaagtca ttttgatccg ttggggttgg agaccgctcg agctttcggc  22800

cacaagctgg ctaccgccgc gctcgcgtca ttctttgctg gagagaagcc atcgagcaat  22860

tggtgaagag ggacctatcg gaacccctca ccaaatattg agtgtaggtt tgaggccgct  22920

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cttgctgttt ttatcagttg agggcttgac ggatccgcct caagtttgcg gcgcagccgc  23100

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agaagttgct cgcgcgatag aacgtcgcgg ggtttctcta aaaacgcgag gagaagattg  23220

aactcacctg ccgtaagttt cacctcaccg ccagcttcgg acatcaagcg acgttgcctg  23280

agattaagtg tccagtcagt aaaacaaaaa gaccgtcggt ctttggagcg gacaacgttg  23340

gggcgcacgc gcaaggcaac ccgaatgcgt gcaagaaact ctctcgtact aaacggctta  23400

gcgataaaat cacttgctcc tagctcgagt gcaacaactt tatccgtctc ctcaaggcgg  23460

tcgccactga taattatgat tggaatatca gactttgccg ccagatttcg aacgatctca  23520

agcccatctt cacgacctaa atttagatca acaaccacga catcgaccgt cgcggaagag  23580

agtactctag tgaactgggt gctgtcggct accgcggtca ctttgaaggc gtggatcgta  23640

aggtattcga taataagatg ccgcatagcg acatcgtcat cgataagaag aacgtgtttc  23700

aacggctcac ctttcaatct aaaatctgaa cccttgttca cagcgcttga gaaattttca  23760

cgtgaaggat gtacaatcat ctccagctaa atgggcagtt cgtcagaatt gcggctgacc  23820

gcggatgacg aaaatgcgaa ccaagtattt caattttatg acaaaagttc tcaatcgttg  23880

ttacaagtga aacgcttcga ggttacagct actattgatt aaggagatcg cctatggtct  23940

cgccccggcg tcgtgcgtcc gccgcgagcc agatctcgcc tacttcataa acgtcctcat  24000

aggcacggaa tggaatgatg acatcgatcg ccgtagagag catgtcaatc agtgtgcgat  24060

cttccaagct agcaccttgg gcgctacttt tgacaaggga aaacagtttc ttgaatcctt  24120

ggattggatt cgcgccgtgt attgttgaaa tcgatcccgg atgtcccgag acgacttcac  24180

tcagataagc ccatgctgca tcgtcgcgca tctcgccaag caatatccgg tccggccgca  24240

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tggagtagag tagtctaaca tgattatcgt gtggaatgac gagttcgagc gtatcttcta  24360

tggtgattag cctttcctgg ggggggatgg cgctgatcaa ggtcttgctc attgttgtct  24420

tgccgcttcc ggtagggcca catagcaaca tcgtcagtcg gctgacgacg catgcgtgca  24480

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ggcgtttcct tcgtgtctgc cactggttcc acctcgaagc atcataacgg gaggagactt  24600

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gaacggtcgg cggcagacag atttgtagtc gttcaccacc aggaagttca gtggcgcaga  24720

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caagatcatc ataagagacg ggcaaaggca tcttggtaaa aatgccggct tggcgcacaa  24840

atgcctctcc aggtcgattg atcgcaattt cttcagtctt cgggtcatcg agccattcca  24900

aaatcggctt cagaagaaag cgtagttgcg gatccacttc catttacaat gtatcctatc  24960

tctaagcgga aatttgaatt cattaagagc ggcggttcct cccccgcgtg gcgccgccag  25020

tcaggcggag ctggtaaaca ccaaagaaat cgaggtcccg tgctacgaaa atggaaacgg  25080

tgtcaccctg attcttcttc agggttggcg gtatgttgat ggttgcctta agggctgtct  25140

cagttgtctg ctcaccgtta ttttgaaagc tgttgaagct catcccgcca cccgagctgc  25200

cggcgtaggt gctagctgcc tggaaggcgc cttgaacaac actcaagagc atagctccgc  25260

taaaacgctg ccagaagtgg ctgtcgaccg agcccggcaa tcctgagcga ccgagttcgt  25320

ccgcgcttgg cgatgttaac gagatcatcg catggtcagg tgtctcggcg cgatcccaca  25380

acacaaaaac gcgcccatct ccctgttgca agccacgctg tatttcgcca acaacggtgg  25440

tgccacgatc aagaagcacg atattgttcg ttgttccacg aatatcctga ggcaagacac  25500

actttacata gcctgccaaa tttgtgtcga ttgcggtttg caagatgcac ggaattattg  25560

tcccttgcgt taccataaaa tcggggtgcg gcaagagcgt ggcgctgctg ggctgcagct  25620

cggtgggttt catacgtatc gacaaatcgt tctcgccgga cacttcgcca ttcggcaagg  25680

agttgtcgtc acgcttgcct tcttgtcttc ggcccgtgtc gccctgaatg gcgcgtttgc  25740

tgaccccttg atcgccgctg ctatatgcaa aaatcggtgt ttcttccggc cgtggctcat  25800

gccgctccgg ttcgcccctc ggcggtagag gagcagcagg ctgaacagcc tcttgaaccg  25860

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tcaaagttga cggcgatgcg ttctcattca ccttcttttg gcgcccacct agccaaatga  25980

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gactatcgtt attcatccct tcgccccctt caggacgcgt ttcacatcgg gcctcaccgt  26160

gcccgtttgc ggcctttggc caacgggatc gtaagcggtg ttccagatac atagtactgt  26220

gtggccatcc ctcagacgcc aacctcggga aaccgaagaa atctcgacat cgctcccttt  26280

aactgaatag ttggcaacag cttccttgcc atcaggattg atggtgtaga tggagggtat  26340

gcgtacattg cccggaaagt ggaataccgt cgtaaatcca ttgtcgaaga cttcgagtgg  26400

caacagcgaa cgatcgcctt gggcgacgta gtgccaatta ctgtccgccg caccaagggc  26460

tgtgacaggc tgatccaata aattctcagc tttccgttga tattgtgctt ccgcgtgtag  26520

tctgtccaca acagccttct gttgtgcctc ccttcgccga gccgccgcat cgtcggcggg  26580

gtaggcgaat tggacgctgt aatagagatc gggctgctct ttatcgaggt gggacagagt  26640

cttggaactt atactgaaaa cataacggcg catcccggag tcgcttgcgg ttagcacgat  26700

tactggctga ggcgtgagga cctggcttgc cttgaaaaat agataatttc cccgcggtag  26760

ggctgctaga tctttgctat ttgaaacggc aaccgctgtc accgtttcgt tcgtggcgaa  26820

tgttacgacc aaagtagctc caaccgccgt cgagaggcgc accacttgat cgggattgta  26880

agccaaataa cgcatgcgcg gatctagctt gcccgccatt ggagtgtctt cagcctccgc  26940

accagtcgca gcggcaaata aacatgctaa aatgaaaagt gcttttctga tcatggttcg  27000

ctgtggccta cgtttgaaac ggtatcttcc gatgtctgat aggaggtgac aaccagacct  27060

gccgggttgg ttagtctcaa tctgccgggc aagctggtca ccttttcgta gcgaactgtc  27120

gcggtccacg tactcaccac aggcattttg ccgtcaacga cgagggtcct tttatagcga  27180

atttgctgcg tgcttggagt tacatcattt gaagcgatgt gctcgacctc caccctgccg  27240

cgtttgccaa gaatgacttg aggcgaactg ggattgggat agttgaagaa ttgctggtaa  27300

tcctggcgca ctgttggggc actgaagttc gataccaggt cgtaggcgta ctgagcggtg  27360

tcggcatcat aactctcgcg caggcgaacg tactcccaca atgaggcgtt aacgacggcc  27420

tcctcttgag ttgcaggcaa tcgcgagaca gacacctcgc tgtcaacggt gccgtccggc  27480

cgtatccata gatatacggg cacaagcctg ctcaacggca ccattgtggc tatagcgaac  27540

gcttgagcaa catttcccaa aatcgcgata gctgcgacag ctgcaatgag tttggagaga  27600

cgtcgcgccg atttcgctcg cgcggtttga aaggcttcta cttccttata gtgctcggca  27660

aggctttcgc gcgccactag catggcatat tcaggccccg tcatagcgtc cacccgaatt  27720

gccgagctga agatctgacg gagtaggctg ccatcgcccc acattcagcg ggaagatcgg  27780

gcctttgcag ctcgctaatg tgtcgtttgt ctggcagccg ctcaaagcga caactaggca  27840

cagcaggcaa tacttcatag aattctccat tgaggcgaat ttttgcgcga cctagcctcg  27900

ctcaacctga gcgaagcgac ggtacaagct gctggcagat tgggttgcgc cgctccagta  27960

actgcctcca atgttgccgg cgatcgccgg caaagcgaca atgagcgcat cccctgtcag  28020

aaaaaacata tcgagttcgt aaagaccaat gatcttggcc gcggtcgtac cggcgaaggt  28080

gattacacca agcataaggg tgagcgcagt cgcttcggtt aggatgacga tcgttgccac  28140

gaggtttaag aggagaagca agagaccgta ggtgataagt tgcccgatcc acttagctgc  28200

gatgtcccgc gtgcgatcaa aaatatatcc gacgaggatc agaggcccga tcgcgagaag  28260

cactttcgtg agaattccaa cggcgtcgta aactccgaag gcagaccaga gcgtgccgta  28320

aaggacccac tgtgcccctt ggaaagcaag gatgtcctgg tcgttcatcg gaccgatttc  28380

ggatgcgatt ttctgaaaaa cggcctgggt cacggcgaac attgtatcca actgtgccgg  28440

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atgaatggcc gtaaacggcg ccggaatcgt gaaattcatc gattggacct gaacttgact  28800

ggtttgtcgc ataatgttgg ataaaatgag ctcgcattcg gcgaggatgc gggcggatga  28860

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taggcttgtc gcctgtacat tttgaatcat tgcgtcatgg atctgcttga gaagcaaacc  29040

attggtcacg gttgcctgca tgatattgcg agatcgggaa agctgagcag acgtatcagc  29100

attcgccgtc aagcgtttgt ccatcgtttc cagattgtca gccgcaatgc cagcgctgtt  29160

tgcggaaccg gtgatctgcg atcgcaacag gtccgcttca gcatcactac ccacgactgc  29220

acgatctgta tcgctggtga tcgcacgtgc cgtggtcgac attggcattc gcggcgaaaa  29280

catttcattg tctaggtcct tcgtcgaagg atactgattt ttctggttga gcgaagtcag  29340

tagtccagta acgccgtagg ccgacgtcaa catcgtaacc atcgctatag tctgagtgag  29400

attctccgca gtcgcgagcg cagtcgcgag cgtctcagcc tccgttgccg ggtcgctaac  29460

aacaaactgc gcccgcgcgg gctgaatata tagaaagctg caggtcaaaa ctgttgcaat  29520

aagttgcgtc gtcttcatcg tttcctacct tatcaatctt ctgcctcgtg gtgacgggcc  29580

atgaattcgc tgagccagcc agatgagttg ccttcttgtg cctcgcgtag tcgagttgca  29640

aagcgcaccg tgttggcacg ccccgaaagc acggcgacat attcacgcat atcccgcaga  29700

tcaaattcgc agatgacgct tccactttct cgtttaagaa gaaacttacg gctgccgacc  29760

gtcatgtctt cacggatcgc ctgaaattcc ttttcggtac atttcagtcc atcgacataa  29820

gccgatcgat ctgcggttgg tgatggatag aaaatcttcg tcatacattg cgcaaccaag  29880

ctggctccta gcggcgattc cagaacatgc tctggttgct gcgttgccag tattagcatc  29940

ccgttgtttt ttcgaacggt caggaggaat ttgtcgacga cagtcgaaaa tttagggttt  30000

aacaaatagg cgcgaaactc atcgcagctc atcacaaaac ggcggccgtc gatcatggct  30060

ccaatccgat gcaggagata tgctgcagcg ggagcgcata cttcctcgta ttcgagaaga  30120

tgcgtcatgt cgaagccggt aatcgacgga tctaacttta cttcgtcaac ttcgccgtca  30180

aatgcccagc caagcgcatg gccccggcac cagcgttgga gccgcgctcc tgcgccttcg  30240

gcgggcccat gcaacaaaaa ttcacgtaac cccgcgattg aacgcatttg tggatcaaac  30300

gagagctgac gatggatacc acggaccaga cggcggttct cttccggaga aatcccaccc  30360

cgaccatcac tctcgatgag agccacgatc cattcgcgca gaaaatcgtg tgaggctgct  30420

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tatgttcctc ctgtggcgcg aaccagcaat tcgccacccc ggtccttgtc aaagaacacg  30540

accgtacctg cacggtcgac catgctctgt tcgagcatgg ctagaacaaa catcatgagc  30600

gtcgtcttac ccctcccgat aggcccgaat attgccgtca tgccaacatc gtgctcatgc  30660

gggatatagt cgaaaggcgt tccgccattg gtacgaaatc gggcaatcgc gttgccccag  30720

tggcctgagc tggcgccctc tggaaagttt tcgaaagaga caaaccctgc gaaattgcgt  30780

gaagtgattg cgccagggcg tgtgcgccac ttaaaattcc ccggcaattg ggaccaatag  30840

gccgcttcca taccaatacc ttcttggaca accacggcac ctgcatccgc cattcgtgtc  30900

cgagcccgcg cgcccctgtc cccaagacta ttgagatcgt ctgcatagac gcaaaggctc  30960

aaatgatgtg agcccataac gaattcgttg ctcgcaagtg cgtcctcagc ctcggataat  31020

ttgccgattt gagtcacggc tttatcgccg gaactcagca tctggctcga tttgaggcta  31080

agtttcgcgt gcgcttgcgg gcgagtcagg aacgaaaaac tctgcgtgag aacaagtgga  31140

aaatcgaggg atagcagcgc gttgagcatg cccggccgtg tttttgcagg gtattcgcga  31200

aacgaataga tggatccaac gtaactgtct tttggcgttc tgatctcgag tcctcgcttg  31260

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aaggagacca tcaaggcaag agaaagcgac cccgatctct taagcatacc ttatctcctt  33360

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ccttggccag ggaattgact ggcaagggtg ctttcacatg accgctcttt tggccgcgat  34440

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aggccatcaa accacgtcaa ataatcaatt atgacgcagg tatcgtatta attgatctgc  37260

atcaacttaa cgtaaaaaca acttcagaca atacaaatca gcgacactga atacggggca  37320

acctcatgtc cccccccccc ccccccctgc aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg  37380

tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt  37440

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tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc  37740

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ttcaactgga agagcggtta cccggaccga agcttgaagt tcctattccg aagttcctat  38880

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tccatcttct ggattggcca acttaattaa tgtatgaaat aaaaggatgc acacatagtg  39600

acatgctaat cactataatg tgggcatcaa agttgtgtgt tatgtgtaat tactagttat  39660

ctgaataaaa gagaaagaga tcatccatat ttcttatcct aaatgaatgt cacgtgtctt  39720

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tccttcatca atggatgcca tgtttcataa caataacacc aaatgtttga tgagctacca  39960

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gctgctagcg ttcgtacacg gatgcgacct gtacgtcaga cacgttctga ttgctaactt  43620

gccagtgttt ctctttgggg aatcctggga tggctctagc cgttccgcag acgggatcga  43680

tttcatgatt ttttttgttt cgttgcatag ggtttggttt gcccttttcc tttatttcaa  43740

tatatgccgt gcacttgttt gtcgggtcat cttttcatgc ttttttttgt cttggttgtg  43800

atgatgtggt ctggttgggc ggtcgttcta gatcggagta gaattctgtt tcaaactacc  43860

tggtggattt attaattttg gatctgtatg tgtgtgccat acatattcat agttacgaat  43920

tgaagatgat ggatggaaat atcgatctag gataggtata catgttgatg cgggttttac  43980

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ggtcgttcat tcgttctaga tcggagtaga atactgtttc aaactacctg gtgtatttat  44100

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tctttataat tctttgatga accagatgca tttcattaac caaatccata tacatataaa  45180

tattaatcat atataattaa tatcaattgg gttagcaaaa caaatctagt ctaggtgtgt  45240

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ttgtcgtaat ttgatggact attgtcgtaa ttgcttatgg agttgtcgta gttgcttgga  46380

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cctttcacgt agtgaacaaa ttcttccaac tgatctgcgc gcgaggccaa gcgatcttct  46680

tgtccaagat aagcctgcct agcttcaagt atgacgggct gatactgggc cggcaggcgc  46740

tccattgccc agtcggcagc gacatccttc ggcgcgattt tgccggttac tgcgctgtac  46800

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aagatagcca gatcaatgtc gatcgtggct ggctcgaaga tacctgcaag aatgtcattg  47040

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tcgtgcacaa caatggtgac ttctacagcg cggagaatct cgctctctcc aggggaagcc  47160

gaagtttcca aaaggtcgtt gatcaaagct cgccgcgttg tttcatcaag ccttacagtc  47220

accgtaacca gcaaatcaat atcactgtgt ggcttcaggc cgccatccac tgcggagccg  47280

tacaaatgta cggccagcaa cgtcggttcg agatggcgct cgatgacgcc aactacctct  47340

gatagttgag tcgatacttc ggcgatcacc gcttccctca tgatgtttaa ctcctgaatt  47400

aagccgcgcc gcgaagcggt gtcggcttga atgaattgtt aggcgtcatc ctgtgctccc  47460

gagaaccagt accagtacat cgctgtttcg ttcgagactt gaggtctagt tttatacgtg  47520

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ttgttcgttt gtgtctctaa tcgtatgcca aggagctgtc tgcttagtgc ccactttttc  47640

gcaaattcga tgagactgtg cgcgactcct ttgcctcggt gcgtgtgcga cacaacaatg  47700

tgttcgatag aggctagatc gttccatgtt gagttgagtt caatcttccc gacaagctct  47760

tggtcgatga atgcgccata gcaagcagag tcttcatcag agtcatcatc cgagatgtaa  47820

tccttccggt aggggctcac acttctggta gatagttcaa agccttggtc ggataggtgc  47880

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tcagggatca ccgaaatctt catatgacgc ctaacgcctg gcacagcgga tcgcaaacct  48000

ggcgcggctt ttggcacaaa aggcgtgaca ggtttgcgaa tccgttgctg ccacttgtta  48060

acccttttgc cagatttggt aactataatt tatgttagag gcgaagtctt gggtaaaaac  48120

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tgtagatata tgtagtgtat ctacttgatc gggggatctg ctgcctcgcg cgtttcggtg  48240

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caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca ggactataaa gataccaggc  48780

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cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc agagcgaggt atgtaggcgg  49080

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tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga gttggtagct cttgatccgg  49200

caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag  49260

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ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc  49440

tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc  49500

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aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc  49680

catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt  49740

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<210>14

<211>1100

<212>DNA

<213>玉米

<400>14

catcgcatcg catcgcatcg cgcgctttgc ctgccgcagc ggctaacgaa cgcgtggatc    60

atcccttcta ttattaatta attgggagga gtgggagtga tagctgcagc acccagcgcc   120

catcactgag cccatccgga accctagcct cctcgtcgtt gaatccacca caccatgagc   180

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gtctcttata ccagcaatgc ggagaagtgg gtctatgggg tgaattaacc agcgactaaa   900

tctcttgagg tttgcttttt tcttttcagt tttcacataa ttgccgacag accaaggcag   960

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aaggcacaag gaaaggaagg aatacaccgt gaaatttgtt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  1080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa                                              1100

 

<210>15

<211>237

<212>PRT

<213>玉米

 

<400>15

 

Met Ser Gly Ser Ala Ser Arg Lys Leu Phe Gln Ala Ala Arg Ser Ile

1               5                   10                  15

Val Leu Ser Ala Ser Gln Arg Ser Ser Phe Ser Val Leu Ala Ala Glu

            20                  25                  30

Gly Arg Thr Ala Ala Leu Ala Asn Phe Gly Arg Lys Ile Leu Pro Ser

        35                  40                  45

Ala Cys Ser Tyr His Arg Gln Gly Ser His Ala Ala Ser Gly Trp Gly

    50                  55                  60

Ala Ile Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala Val Tyr Met Leu Gln Asp Gln

65                  70                  75                  80

Glu Ala His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Val Asn Arg Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Lys Gly Tyr Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Ile Val Pro Ser Lys

        115                 120                 125

Gly Phe Ala Glu Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe

    130                 135                 140

Asn Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met Val

145                 150                 155                 160

Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala

                165                 170                 175

Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Gly

            180                 185                 190

Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr

        195                 200                 205

Ala Lys Asp Glu Ile Ala Leu Trp Phe Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser

    210                 215                 220

Tyr Thr Ser Asn Ala Glu Lys Trp Val Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>16

<211>1242

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>16

ggaaaccttt gcgtttttta agcgagccac gccaataacg gagaggcatg caccgacgat    60

cggcatttcc ttccagtggc ggtgagaagg gaaagggagg acagcagagc agaggtcgag    120

catcgcatcg catcgcatcg cgcgctttgc ctgccgcagc ggctaacgaa cgcgtggatc    180

atcccttcta ttattaatta attgggagga gtgggagtga tagctgcagc acccagcgcc    240

catcactgag cccatccgga accctagcct cctcgtcgtt gaatccacca caccatgagc    300

gggagcgcct ccaggaagct cttccaggcc gccaggtcca tcgtcctctc cgcttctcaa    360

cgctcctcct tctccgtcct cgccgccgag ggccgcaccg ccgcgctcgc caactttggc    420

aggaagatcc tccccagcgc ctgctcctac cacaggcagg gatcccacgc cgcgtcggga    480

tggggagcca tcgctgccgc agtccccgcc gcagtttaca tgctccagga ccaggaggct    540

catgctgcag agatggagcg cactttcatc gccatcaagc ccgacggcgt ccaaagaggc    600

ctgatttctg agattgtgaa ccgattcgag agaaaaggct acaagcttgt tgccatcaag    660

ctcattgtcc catccaaagg attcgctgag aagcactacc atgatctcaa ggaaaggcct    720

ttcttcaacg ggttgtgtga cttcctcagc tctggccctg tacttgcaat ggtttgggaa    780

ggagagggtg tcatcaagta tgggagaaaa ctaattggtg ccacagaccc acagaaatct    840

gaaccaggaa ccatcagggg cgatcttggt gttgttgtgg gaagaaacat cattcatgga    900

agtgatggcc cggagacagc aaaggatgag atcgccttgt ggtttgaacc caaggagctg    960

gtctcttata ccagcaatgc ggagaagtgg gtctatgggg tgaattaacc agcgactaaa   1020

tctcttgagg tttgcttttt tcttttcagt tttcacataa ttgccgacag accaaggcag   1080

gatgtaataa agtagctacc gtcacctatt acttttgagt tggattgatt gtggtgcagt   1140

aaggcacaag gaaaggaagg aatacaccgt gaaatttgtt aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa   1200

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aa                      1242

 

<210>17

<211>237

<212>PRT

<213>玉米

 

<400>17

 

Met Ser Gly Ser Ala Ser Arg Lys Leu Phe Gln Ala Ala Arg Ser Ile

1               5                   10                  15

Val Leu Ser Ala Ser Gln Arg Ser Ser Phe Ser Val Leu Ala Ala Glu

            20                  25                  30

Gly Arg Thr Ala Ala Leu Ala Asn Phe Gly Arg Lys Ile Leu Pro Ser

        35                  40                  45

Ala Cys Ser Tyr His Arg Gln Gly Ser His Ala Ala Ser Gly Trp Gly

    50                  55                  60

Ala Ile Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala Val Tyr Met Leu Gln Asp Gln

65                  70                  75                  80

Glu Ala His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Val Asn Arg Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Lys Gly Tyr Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Ile Val Pro Ser Lys

        115                 120                 125

Gly Phe Ala Glu Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe

    130                 135                 140

Asn Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met Val

145                 150                 155                 160

Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala

                165                 170                 175

Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Gly

            180                 185                 190

Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr

        195                 200                 205

Ala Lys Asp Glu Ile Ala Leu Trp Phe Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser

    210                 215                 220

Tyr Thr Ser Asn Ala Glu Lys Trp Val Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>18

<211>1102

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>18

agcgaccgca ccggcacggc gcccatccat ccatcgccat cctctagccc agtccaaagg    60

aaccctagcc atgagcgccg cctccaagaa gctcttccag gccgccaggt ccctcgtcct    120

ctccgcttct caccgctccg tcctcgccgc cgagggccgc accgccgcgc tcgccacgct    180

caccaacttt ggcaggaaga ccctccccac cgcctactta tcctaccaca agcagggatc    240

ccaccatgcc gcgtcggggt ggggagccat cgccgccgca gtcccagctg cagtttacat    300

gctccaggac caggaggctc atgctgcaga gatggagcgc accttcattg ccatcaagcc    360

tgatggcgtc caaagaggcc tgatttctga gattatgagc cgatttgaga gaaaaggcta    420

taagcttgtt gccatcaagc tgattgttcc atccaaagaa tttgctgaga agcactacca    480

tgatctcaag gaaaggcctt tcttcagtgg gttgtgtgat tttctcagct ctggccctgt    540

gcttgcaatg gtttgggaag gagagggtgt catcaagtat gggagaaaac taattggtgc    600

cacagaccca cagaaatctg aaccaggaac catcaggggc gatcttgcca ttgttgttgg    660

aagaaacatt attcatggaa gtgatggccc agagacagcg aaggatgaga tcgctttatg    720

gtttgaaccc aaggagctgg tctcttacac cagcaatgcg gagaagtgga tctatggggt    780

gaattaacga gagagtcaat ctgttttttt tcccttcttt tgatctcggt tttcacataa    840

ttgccgacag acctaggcac aaggatgtaa taaagtcgct accgtcactt cgagttggat    900

tgtgaccttc aggtgtagta aggcacaagg aaggatggaa aggaaaggaa tataccgtga    960

aatatagagc gtgcactgag tagtcgcgat gttcaaatca aactatatat caccgtcact   1020

ggagtcatgt aatccaagat ggcgatgcag atgtttcttt ggatctaaaa aaaaaaaaaa   1080

aaaaaaaaaa aaaacctcgt gc                                            1102

 

<210>19

<211>238

<212>PRT

<213>玉米

 

<400>19

 

Met Ser Ala Ala Ser Lys Lys Leu Phe Gln Ala Ala Arg Ser Leu Val

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser His Arg Ser Val Leu Ala Ala Glu Gly Arg Thr Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Ala Thr Leu Thr Asn Phe Gly Arg Lys Thr Leu Pro Thr Ala

        35                  40                  45

Tyr Leu Ser Tyr His Lys Gln Gly Ser His His Ala Ala Ser Gly Trp

    50                  55                  60

Gly Ala Ile Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala Val Tyr Met Leu Gln Asp

65                  70                  75                  80

Gln Glu Ala His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys

                85                  90                  95

Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Met Ser Arg Phe

            100                 105                 110

Glu Arg Lys Gly Tyr Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Ile Val Pro Ser

        115                 120                 125

Lys Glu Phe Ala Glu Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe

    130                 135                 140

Phe Ser Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met

145                 150                 155                 160

Val Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly

                165                 170                 175

Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu

            180                 185                 190

Ala Ile Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu

        195                 200                 205

Thr Ala Lys Asp Glu Ile Ala Leu Trp Phe Glu Pro Lys Glu Leu Val

    210                 215                 220

Ser Tyr Thr Ser Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>20

<211>1066

<212>DNA

<213>瓜儿豆

 

<400>20

gcttctctgt agacgaagaa gatggcctca caggtttgca aatctgcttc cagagccgcg    60

aggtctcttc tctctgcttc caaggcctct cgtttctact cacaaggaag cgccgctgcg   120

gctgttacat taggccgtaa agtgcctttt tatgcttcca actatggaag gagcggttct   180

agaagtggat ccgccgcatg gattccagga gctctcgctc ttcctgctgc agcttacatg   240

ttccaagatc aggaagtgca cgctgctgag ctggagcgca ctttcattgc cattaagcct   300

gacggagttc agagagggct gattgcagag attctatcac gttttgagcg caaagggtac   360

aagcttgtgg ggattaaagt agtgattcct acaaaggagt ttgcccaaca acattatcat   420

gacctgaaag agagaccctt cttcaacggg ctttgtgaat tccttagctc tggccctgtc   480

attgcaatgg tgtgggaagg acaaggagtt attacttacg gacggaaact aattggagcc   540

acagatccac agaaatcaga gcctggaacc attaggggtg acctggctgt tgttgttgga   600

agaaatatca tccatgggag tgatggtcca gagactgcca aggaggagat taagttgtgg   660

tttaagccag aggagctggt tagtttcact agcaatgcag agaagtggat ttatggcgaa   720

aactgattct ttccctcacc tattcgattt tcagaataaa taaattattt gttagtaaag   780

ggtaatgctg aactctagaa gccacaaata agcgggattg agaatagtac cgtgagcact   840

atctatttag ccttttaggt gttaccgatg agtcaaaaat aggtcaacag tctttcttct   900

tcttcttctt ctttttttta atagccaaaa aggattatgc atctatctat ctattctatt   960

ctctgaagtt agagaacaaa tggttaattt aagtggtaaa tgtttcattt ctcttaaata  1020

aataaagttg tggaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa                 1066

 

<210>21

<211>234

<212>PRT

<213>瓜儿豆

 

<400>21

 

Met Ala Ser Gln Val Cys Lys Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Lys Ala Ser Arg Phe Tyr Ser Gln Gly Ser Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Ala Val Thr Leu Gly Arg Lys Val Pro Phe Tyr Ala Ser Asn Tyr

        35                  40                  45

Gly Arg Ser Gly Ser Arg Ser Gly Ser Ala Ala Trp Ile Pro Gly Ala

    50                  55                  60

Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Phe Gln Asp Gln Glu Val His

65                  70                  75                  80

Ala Ala Glu Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val

                85                  90                  95

Gln Arg Gly Leu Ile Ala Glu Ile Leu Ser Arg Phe Glu Arg Lys Gly

            100                 105                 110

Tyr Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Val Ile Pro Thr Lys Glu Phe Ala

        115                 120                 125

Gln Gln His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asn Gly Leu

    130                 135                 140

Cys Glu Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met Val Trp Glu Gly

145                 150                 155                 160

Gln Gly Val Ile Thr Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp Pro

                165                 170                 175

Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val Val

            180                 185                 190

Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys Glu

        195                 200                 205

Glu Ile Lys Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser Phe Thr Ser

    210                 215                 220

Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Glu Asn

225                 230

 

<210>22

<211>1014

<212>DNA

<213>车前子

 

<400>22

gggggcactt tgtcacaact aacgctctca ctcatcaatc tcagtaaatc tattcttcca    60

aaatgaggtc tcagatttgc agatccgcca ggtctcttct ctctgctgct tccaagcaat   120

cttctcgctc cttctcctcc ggagggcgag cagctgcagc ggctgcagtt tcaggtagag   180

gaagatggtc ttctctagct tcatatgctg catccggaaa tgcaaatagt ggctggatga   240

ctggactcct tgccctaccc acagcagctt tcatgcttca ggaacaagaa gcacatgctg   300

ccgagatgga gagaactttc attgctatca agccagatgg cgtgcaaagg ggattgatct   360

cagaaatcat ctctcgcttt gaacggaaag gattcaagct tgtggggatc aaggtcgtga  420

ttccttccaa ggactttgcc cagaggcatt accatgacct caaggaaaga cctttcttca  480

atgggttgtg caatttcctt agctctggac cagttattgc catggtatgg gaaggcaaag  540

gagtgatcaa gtatggccat aagctcattg gagcaacaga tccccagaaa tcagagcctg  600

gaaccatcag gggagactta gctgttgttg taggaagaaa cattattcat ggtagtgacg  660

gacctgaaac tgccaaggat gaaatcagct tatggtttaa acctgaggaa ttggtcagtt  720

acacaagcaa tactgagaag tggttgtacg gtgacaattg atgacatacc tttttgttat  780

ttattcacac attgccggcg aactttgatc gtgaactaaa gaaagagtag ttatgagctc  840

aatgctcaga ataatatcca cctttcagct ggtggatacg agtaataatt tagttgcgta  900

tcaccaaatg aacttcattg gtacactgat gtattactga aatgtgagtt tgatcaattc  960

ttgcgcatct tttttatgga cttctctttg aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaa       1014

 

<210>23

<211>232

<212>PRT

<213>车前子

 

<400>23

 

Met Arg Ser Gln Ile Cys Arg Ser Ala Arg Ser Leu Leu Ser Ala Ala

1               5                   10                  15

Ser Lys Gln Ser Ser Arg Ser Phe Ser Ser Gly Gly Arg Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Ala Ala Val Ser Gly Arg Gly Arg Trp Ser Ser Leu Ala Ser Tyr

        35                  40                  45

Ala Ala Ser Gly Asn Ala Asn Ser Gly Trp Met Thr Gly Leu Leu Ala

    50                  55                  60

Leu Pro Thr Ala Ala Phe Met Leu Gln Glu Gln Glu Ala His Ala Ala

65                  70                  75                  80

Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg

                85                  90                  95

Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe Glu Arg Lys Gly Phe Lys

            100                 105                 110

Leu Val Gly Ile Lys Val Val Ile Pro Ser Lys Asp Phe Ala Gln Arg

        115                 120                 125

His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asn Gly Leu Cys Asn

    130                 135                 140

Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met Val Trp Glu Gly Lys Gly

145                 150                 155                 160

Val Ile Lys Tyr Gly His Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp Pro Gln Lys

                165                 170                 175

Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val Val Gly Arg

            180                 185                 190

Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys Asp Glu Ile

        195                 200                 205

Ser Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser Tyr Thr Ser Asn Thr

    210                 215                 220

Glu Lys Trp Leu Tyr Gly Asp Asn

225                 230

 

<210>24

<211>1147

<212>DNA

<213>黑燕麦

 

<400>24

ggcacgagtc tactagtact ccatacagac cactcgctga ggcaggctca cggccattcc   60

tcctcctcct cctcctcctc cttgaagaaa ctgaaccaga cccacatctc gccctccctc  120

cacatctcgc cgccggccgc catgagctcc tccaagatgt accagtccgc gtgcaaggcc  180

gccaggtccc tcatcgcatc ctcctccgcc cgctccgccg tcctcgcaga cgggaggaac  240

gccgcgctcg ccacgctcac caacctcggc aggaccagga tccccgccgc ctactcctca  300

taccacacca acgccggcgc cgcccgcgga tacggctgga tcgcaggcat ccccgccgct  360

gcctacatgc tccaggatca ggaggtgcac gccgcagagc tggagcgcac cttcatcgcc  420

atcaagcccg acggcgtcca gagaggcctc atttctgaga tagtttcccg atttgagagg  480

aaaggattca agcttgttgc catcaagctg gtggttccat ccaaggagtt cgcccagaag  540

cactaccatg atctgaagga aagacctttc ttcagtggat tgtgcgactt ccttagctcc  600

gggcctgtcc ttgccatggt ctgggaagga gagggtgtca tcaagtacgg gaggaagatg  660

attggtgcca cggacccagc gaagtctgaa ccaggaacca tcaggggtga ccttgctgtt  720

gttgttggaa gaaacatcat tcacgggagc gacggcccag agacagccaa ggacgagatt  780

gctctctggt ttacgcccaa ggagctggtc tcttacacca gcaacgagga gaagtgggtc  840

tacggcgtga actaaccggc ggatcatctt ctctttgaaa agaaaaaagt caacatcatt  900

ttccataatt gccttgtaga agagcatggc agagtgtaat aacgctgggt gcaataaggc  960

ctgacgaaaa gagaagtgta actagcttgg aatgtagagc gtgcaccgag caattcgtga 1020

tgtttacatc gaactatcgc ggcctccagc cagcttgatc tggatggatg ctctttattt 1080

tgatctattc tccatttttg accaaacatt aattctatgc acttttgcta aaaaaaaaaa 1140

aaaaaaa                                                           1147

 

<210>25

<211>237

<212>PRT

<213>黑燕麦

 

<400>25

 

Met Ser Ser Ser Lys Met Tyr Gln Ser Ala Cys Lys Ala Ala Arg Ser

1               5                   10                  15

Leu Ile Ala Ser Ser Ser Ala Arg Ser Ala Val Leu Ala Asp Gly Arg

            20                  25                  30

Asn Ala Ala Leu Ala Thr Leu Thr Asn Leu Gly Arg Thr Arg Ile Pro

        35                  40                  45

Ala Ala Tyr Ser Ser Tyr His Thr Asn Ala Gly Ala Ala Arg Gly Tyr

    50                  55                  60

Gly Trp Ile Ala Gly Ile Pro Ala Ala Ala Tyr Met Leu Gln Asp Gln

65                  70                  75                  80

Glu Val His Ala Ala Glu Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Val Ser Arg Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Val Val Pro Ser Lys

        115                 120                 125

Glu Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe

    130                 135                 140

Ser Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met Val

145                 150                 155                 160

Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Met Ile Gly Ala

                165                 170                 175

Thr Asp Pro Ala Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala

            180                 185                 190

Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr

        195                 200                 205

Ala Lys Asp Glu Ile Ala Leu Trp Phe Thr Pro Lys Glu Leu Val Ser

    210                 215                 220

Tyr Thr Ser Asn Glu Glu Lys Trp Val Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>26

<211>1035

<212>DNA

<213>向日葵

 

<400>26

cccaaactca ccattttcag taattttttc acaaatttgg agaatgagtt cacagatttt   60

cagatctgct tcacgagccg ctaggtcgat cgtctcatct gcttctaagc agaagcgtct  120

cttctccgaa ggacgatctg ttgctgctgc tacagctgtt tcggtcaaag gagtcttgcc  180

agctctagct tcttttgggc gtgatcattc tggaaactca tccagcacat ggattgccgg  240

agcactcgct ctccctgctg cagcatacat gcttcaagac caagaggcac atgcagcaca  300

gatggagcgc actttcattg ctatcaagcc agatggtgtg caaagaggac tgatttcaga  360

gatcatagct cggtttgaac gtaaaggctt taaactcgta gccattaaac ttgtgacccc  420

tactaagtcc tttgctcaga agcattacca tgatcttaag gaaagaccat tttttgatgg  480

gctgtgtgac ttccttagct ctggtcccgt tcttgccatg gtttgggaag gtgaaggtgt  540

tatcaagtat gggcgtaaac tcattggagc cacagatcca caaaaatcag aaccgggaac  600

tatcaggggt gatttggctg ttgttgtggg aaggaacatc atccatggaa gtgacggtcc  660

agaaaccgcc aaggatgaaa tcaacttatg gttcaaacca gaggagttga cgaattacac   720

aagcaaccaa gaaaagtggg tctatggagt caactaatgg catctgtttt ttgctttgtc   780

gactgcctag gcaaattagt tcttcggctg caagaataaa aaccaaagaa taaaatgtcc   840

tttttttcct tgaaaatgag caaaacagta tcagttttgt aacttaaaag atactcaaag   900

accatcttta tagttgttaa agactagtat ttggttaatg cagggctgtt ttaattttac   960

ttattttgat tttgcacttt atttagttgt tgaaaacaaa attggttagt tttttttaaa  1020

aaaaaaaaaa aaaaa                                                   1035

 

<210>27

<211>237

<212>PRT

<213>向日葵

 

<400>27

 

Met Ser Ser Gln Ile Phe Arg Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Ile

1               5                   10                  15

Val Ser Ser Ala Ser Lys Gln Lys Arg Leu Phe Ser Glu Gly Arg Ser

            20                  25                  30

Val Ala Ala Ala Thr Ala Val Ser Val Lys Gly Val Leu Pro Ala Leu

        35                  40                  45

Ala Ser Phe Gly Arg Asp His Ser Gly Asn Ser Ser Ser Thr Trp Ile

    50                  55                  60

Ala Gly Ala Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Leu Gln Asp Gln

65                  70                  75                  80

Glu Ala His Ala Ala Gln Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ala Arg Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Val Thr Pro Thr Lys

        115                 120                 125

Ser Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe

    130                 135                 140

Asp Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met Val

145                 150                 155                 160

Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala

                165                 170                 175

Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala

            180                 185                 190

Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr

        195                 200                 205

Ala Lys Asp Glu Ile Asn Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Thr Asn

    210                 215                 220

Tyr Thr Ser Asn Gln Glu Lys Trp Val Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>28

<211>901

<212>DNA

<213>大豆

 

<400>28

gcctcacagg tttgcaaatc tgcttccaga gccgcgaggt cccttctatc ctctcgtttt   60

cactctcaag gacgtgcgct tggggctgct gcggctgttt cattgagcag caaagtgcct  120

cttttttacg gaaagaacgg ttctggaaat ggatccgctt cttcatcatc atcatcatca  180

tggatttcag gagctcttgc tcttcctgcc gcagcttaca tgttccaaga tcaggaggtg  240

caggcagctg agctggagcg cactttcatt gccattaagc ctgatggagt gcagagaggc  300

ctgatttctg agattatatc tcgttttgag cggaaagggt acaagcttgt gggaattaaa  360

gtagtgattc ctaaaaagga atttgcccaa aggcactatc acgacctgaa agaaagaccc  420

ttcttcgatg ggctgtgtga ttttctaagc tctggccctg ttattgcaat ggtgtgggaa  480

ggacagggag ttatttccta tggccgaaag ctaattggag ccacagatcc acagaaatca  540

gaacctggaa ccattagggg tgatcttgct gttgttgttg gaagaaacat catccatggg  600

agtgatggtc cagaaactgc caaggatgag attaagttgt ggtttaagcc agaggagttg  660

gttagtttca ctagcaatgc agagaagtgg atttatggtg ccaactgatt ctttccctca  720

tgccttgggt tttctataac aactgctcag tgagtttttg gaataaatta tttgtcagaa  780

tgaactctag aagccataaa taagcgcgat tgagaatttg agattggtac ggttaatata  840

ttttaatagg aattgcattg tttttatctt ttaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa  900

a                                                                  901

 

<210>29

<211>235

<212>PRT

<213>大豆

 

<400>29

 

Ala Ser Gln Val Cys Lys Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu Leu

1               5                   10                  15

Ser Ser Arg Phe His Ser Gln Gly Arg Ala Leu Gly Ala Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Val Ser Leu Ser Ser Lys Val Pro Leu Phe Tyr Gly Lys Asn Gly Ser

        35                  40                  45

Gly Asn Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Ile Ser Gly

    50                  55                  60

Ala Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Phe Gln Asp Gln Glu Val

65                  70                  75                  80

Gln Ala Ala Glu Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly

                85                  90                  95

Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe Glu Arg Lys

            100                 105                 110

Gly Tyr Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Val Ile Pro Lys Lys Glu Phe

        115                 120                 125

Ala Gln Arg His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asp Gly

    130                 135                 140

Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met Val Trp Glu

145                 150                 155                 160

Gly Gln Gly Val Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp

                165                 170                 175

Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val

            180                 185                 190

Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys

        195                 200                 205

Asp Glu Ile Lys Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser Phe Thr

    210                 215                 220

Ser Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Ala Asn

225                 230                 235

 

<210>30

<211>1105

<212>DNA

<213>陆地棉

 

<400>30

gaaaacacat cactgccctt gcactcggct cataccaatc aatcaaaatc cccaaaaaaa   60

tattaaaaaa aatgagctct cagattttca gatctgcttc tagagccgcc aggtctctcc  120

tttcagcatc caaggcttct cgcttttact ctgaagggcg agctgtagct gccgctgcag  180

cagtttcact tggcggtaaa gtgcctcttt tggcttcagc ttatggaagt actgcttctg  240

ccaatgcatc tagagcatgg ctttcaggag tttttgctct tccagtggca gcttacatgc  300

ttcaggagca ggaggttcat gctgcagaga tggagcgcac cttcattgct atcaagccag  360

atggagtgca aagagggctg atttcggaga tcatctctcg ttttgagcgc aaagggttca  420

agcttgtggc tatcaagttg gtagttcctt caaaggagtt tgcccagaaa cattatgatg  480

acttgaagga aagacccttt ttcaatggcc tgtgtgaatt cctcagctct ggccctgttc  540

ttgccatggt ctgggaagga gagggagtga tcaaatacgg ccggaaactc attggagcaa  600

cagatcctca aaaatcagag cctggaacca tcagaggtga tctagccgtg gttgtcggaa  660

ggaatataat tcatgggagt gatggtcctg agactgccaa gcatgaaatc aacttgtggt  720

tcaagccaca agagttggtt aactatacaa gcaacgctga gaaatgggtc tatggaaaca  780

actgatgagg gcatgttttt tcaagttaat cagtagtagt tcaggaaaat ttagtcccat  840

atcaggtgtg ggttagaggc ataatttttt agaataaatg cgttttatgg atgtgaggag  900

cattgagcca aaagctttga tttttgttat agttaaacta gtgctcaaaa aataatatct  960

ttttcttttc ttcagactca aaataataat ccctttcacc tgtttaatat agggtggaaa 1020

taaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1080

aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaa                                       1105

<210>31

<211>237

<212>PRT

<213>陆地棉

 

<400>31

 

Met Ser Ser Gln Ile Phe Arg Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Lys Ala Ser Arg Phe Tyr Ser Glu Gly Arg AlaVal

            20                  25                  30

Ala Ala Ala Ala Ala Val Ser Leu Gly Gly Lys Val Pro Leu Leu Ala

        35                  40                  45

Ser Ala Tyr Gly Ser Thr Ala Ser Ala Asn Ala Ser Arg Ala Trp Leu

    50                  55                  60

Ser Gly Val Phe Ala Leu Pro Val Ala Ala Tyr Met Leu Gln Glu Gln

65                  70                  75                  80

Glu Val His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Val Val Pro Ser Lys

        115                 120                 125

Glu Phe Ala Gln Lys His Tyr Asp Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe

    130                 135                 140

Asn Gly Leu Cys Glu Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met Val

145                 150                 155                 160

Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala

                165                 170                 175

Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala

            180                 185                 190

Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr

        195                 200                 205

Ala Lys His Glu Ile Asn Leu Trp Phe Lys Pro Gln Glu Leu Val Asn

    210                 215                 220

Tyr Thr Ser Asn Ala Glu Lys Trp Val Tyr Gly Asn Asn

225                 230                 235

 

<210>32

<211>1007

<212>DNA

<213>大豆

 

<400>32

tatttctgtg ccaacaaaag aagatggcct cacaggtttg caaagctgct tccagagccg   60

cgaggtccct tctctccgct tccagagcct cccatggacg tgcggttggg gctgctacgg  120

ctgtttcatt gagctgcaaa gtgcctcttt tctacggaaa gaacggttct ggaagtggtt  180

ccgcttcatc atcatcatca tcatggattt caggagcact tgctcttcct gccgcagctt  240

acatgttcca agatcaggag gtgcgcgcag ctgagctgga gcgcactttc attgccatta  300

agcctgatgg agtgcagaga gggctgattt ctgagattat atctcgtttt gagcggaaag  360

ggtacaagct tgtggggatt aaagtagtga ttccttcaaa ggaatttgcc caaaagcact  420

atcacgacct gaaagaaaga cccttcttcg atgggctgtg tgatttcctt agctctggcc  480

ctgttattgc aatggtgtgg gaaggacagg gagttatttc ctatggccga aagctaattg  540

gagccacaga tcctcagaaa tcagaacctg gaaccattag gggtgatctt gctgttgttg  600

ttggaagaaa tatcattcat gggagtgatg gtcctgagac tgccaaggat gagattaagt  660

tgtggtttaa gccagaggag ttggttagtt tcactagcaa tgcagaaaag tgggtttatg  720

gtgtcaactg attctttccc tcatgccttg ggttttctat aacaactgct cagtgagttt  780

ttgaaataaa ttatttgtca gcggcaatac taatgaactc tggaagccac aaataagcgc  840

gattgagaat agtaccaata ggaattgcat tatttttata ttttattagc cgggtgaaga  900

caatgtgtga catttattat gccaatactt caaaatgggt taattggcct tttgaaagga  960

gttgaggatg atttgttcat cctataataa aaaaaaaaaa aaaaaaa               1007

 

<210>33

<211>235

<212>PRT

<213>大豆

 

<400>33

Met Ala Ser Gln Val Cys Lys Ala Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Arg Ala Ser His Gly Arg Ala ValGly Ala Ala Thr

            20                  25                  30

Ala Val Ser Leu Ser Cys Lys Val Pro Leu Phe Tyr Gly Lys Asn Gly

        35                  40                  45

Ser Gly Ser Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Ile Ser Gly

    50                  55                  60

Ala Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Phe Gln Asp Gln Glu Val

65                  70                  75                  80

Arg Ala Ala Glu Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly

                85                  90                  95

Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe Glu Arg Lys

            100                 105                 110

Gly Tyr Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Val Ile Pro Ser Lys Glu Phe

        115                 120                 125

Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asp Gly

    130                 135                 140

Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met Val Trp Glu

145                 150                 155                 160

Gly Gln Gly Val Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp

                165                 170                 175

Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val

            180                 185                 190

Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys

        195                 200                 205

Asp Glu Ile Lys Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser Phe Thr

    210                 215                 220

Ser Asn Ala Glu Lys Trp Val Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

<210>34

<211>1089

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>34

cgagcgaccg caccggcacg gcgcccatcc atccatcgcc atcctctagc ccagtccaaa    60

ggaaccctag ccatgagcgc cgcctccaag aagctcttcc aggccgccag gtccctcgtc   120

ctctccgctt ctaaccgctc cgtcctcgcc gccgagggcc gcaccgccgc gctcgccacg   180

ctcaccaact ttggcaggaa gaccctcccc accgcctact tatcctacca caagcaggga   240

tcccaccatg ccgcgtcggg gtggggagcc atcgccgccg cagtcccagc tgcagtttac   300

atgctccagg accaggaggc tcatgctgca gagatggagc gcaccttcat tgccatcaag   360

cctgatggtg tccaaagagg cctgatttct gagattatga gccgatttga gagaaaaggc   420

tataagcttg ttgccatcaa gctgattgtt ccatccaaag aatttgctga gaagcactac   480

catgatctca aggaaaggcc tttcttcagt gggttgtgtg attttctcag ctctggccct   540

gtgcttgcaa tggtttggga aggagagggt gtcatcaagt atgggagaaa actaattggt   600

gccacagacc cacagaaatc tgaaccagga accatcaggg gtgatcttgc cattgttgtt   660

ggaagaaaca tcattcatgg aagtgatggc ccagagacag cgaaggatga gatcgcttta   720

tggtttgaac ccaaggagct ggtctcttac accagcaatg cggagaagtg gatctatggg   780

gtgaattaac gagagagtca atctgttttt tttccttctt ttgatctcgg ttttcacata   840

attgccgaca gacctaggca caaggatgta ataaagtcgc taccgtcact tctgagttgg   900

attgtgacct tcaggtgtag taaggcacaa ggaaggatgg aaaggaaagg aatataccgt   960

gaaatataga gcgtgcactg agtagtcgcg atgttcaaat caaactatat atcaccgtca  1020

ctggagtcat gtaatccaag atggtgatgc agatgtttct ttggatctat ttctctagat  1080

atccctacc                                                          1089

 

<210>35

<211>238

<212>PRT

<213>玉米

 

<400>35

 

Met Ser Ala Ala Ser Lys Lys Leu Phe Gln Ala Ala Arg Ser Leu Val

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Asn Arg SerVal Leu Ala Ala Glu Gly Arg Thr Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Ala Thr Leu Thr Asn Phe Gly Arg Lys Thr Leu Pro Thr Ala

        35                  40                  45

Tyr Leu Ser Tyr His Lys Gln Gly Ser His His Ala Ala Ser Gly Trp

    50                  55                  60

Gly AlaIle Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala Val Tyr Met Leu Gln Asp

65                  70                  75                  80

Gln Glu Ala His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys

                85                  90                  95

Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Met Ser Arg Phe

            100                 105                 110

Glu Arg Lys Gly Tyr Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Ile Val Pro Ser

        115                 120                 125

Lys Glu Phe Ala Glu Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe

    130                 135                 140

Phe Ser Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met

145                 150                 155                 160

Val Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly

                165                 170                 175

Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu

            180                 185                 190

Ala Ile Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu

        195                 200                 205

Thr Ala Lys Asp Glu Ile Ala Leu Trp Phe Glu Pro Lys Glu Leu Val

    210                 215                 220

Ser Tyr Thr Ser Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>36

<211>480

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>36

ctgcagagat ggagcgcact ttcatcgcca tcaagcccga cggcgtccaa agaggcctga   60

tttctgagat tgtgaaccga ttcgagagaa aaggctacaa gcttgttgcc atcaagctga  120

ttgtcccatc caaaggattc gctgagaagc actaccatga tctcaaggaa aggcctttct  180

tcaacgggtt gtgtgacttc ctcagctctg gccctgtact tgcaatggtt tgggaaggag  240

agggtgtcat caagtatggg agaaaactaa ttggtgccac agacccacag aaatctgaac  300

caggaaccat caggggcgat cttggtgttg ttgtgggaag aaacatcatt catggaagtg  360

atggcccgga gacagcaaag gatgagatcg ccttgtggtt tgaacccaag gagctggtct  420

cttataccag caatgcggag aagtgggtct atggggtgaa ttaaccagcg actaaatctc  480

 

<210>37

<211>151

<212>PRT

<213>玉米

 

<400>37

 

Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly

1               5                   10                  15

Leu Ile Ser Glu Ile Val Asn Arg Phe Glu Arg Lys Gly Tyr Lys Leu

            20                  25                  30

Val Ala Ile Lys Leu Ile Val Pro Ser Lys Gly Phe Ala Glu Lys His

        35                  40                  45

Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asn Gly Leu Cys Asp Phe

    50                  55                  60

Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala Met Val Trp Glu Gly Glu Gly Val

65                  70                  75                  80

Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser

                85                  90                  95

Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Gly Val Val Val Gly Arg Asn

            100                 105                 110

Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys Asp Glu Ile Ala

        115                 120                 125

Leu Trp Phe Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser Tyr Thr Ser Asn Ala Glu

    130                 135                 140

Lys Trp Val Tyr Gly Val Asn

145                 150

 

<210>38

<211>606

<212>DNA

<213>大豆

 

<400>38

atattggagc tccaccgcgg tggcggacgc tctagaacta gtggatcccc cgggctgcag    60

gaattcggca cgagcaacaa aagaagatgg cctcacaggt ttgcaaagct gcttccagag   120

ccgcgaggtc ccttctctcc gcttccagag cctcccatgg acgtgcggtt ggggctgcta   180

cggctgtttc attgagctgc aaagtgcctc ttttctacgg aaagaacggt tctggaagtg   240

gttccgcttc atcatcatca tcatcatgga tttcaggagc acttgctctt cctgccgcag   300

cttacatgtt ccaagatcag gaggtgcgcg cagctgagct ggagcgcact ttcattgcca   360

ttaagcctga tggagtgcag agagggctga tttctgagat tatatctcgt tttgagcgga   420

aagggtacaa gcttgtgggg attaaagtag tgattccttc aaaggaattt gcccaaaagc   480

actatcacga cctgaaagaa agacccttct tcgatgggct gtgtgatttc cttagctctg   540

gccctgttat tgcaatgggt gtgggaagga caagggagtt atttcctatg gccgaaagct   600

aattgg                                                              606

 

<210>39

<211>171

<212>PRT

<213>大豆

 

<400>39

 

Met Ala Ser Gln Val Cys Lys Ala Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Arg Ala Ser His Gly Arg Ala Val Gly Ala Ala Thr

            20                  25                  30

Ala Val Ser Leu Ser Cys Lys Val Pro Leu Phe Tyr Gly Lys Asn Gly

        35                  40                  45

Ser Gly Ser Gly Ser Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Trp Ile Ser Gly

    50                  55                  60

Ala Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Phe Gln Asp Gln Glu Val

65                  70                  75                  80

Arg Ala Ala Glu Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly

                85                  90                  95

Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe Glu Arg Lys

            100                 105                 110

Gly Tyr Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Val Ile Pro Ser Lys Glu Phe

        115                 120                 125

Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asp Gly

    130                 135                 140

Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met Gly Val Gly

145                 150                 155                 160

Arg Thr Arg Glu Leu Phe Pro Met Ala Glu Ser

                165                 170

 

<210>40

<211>552

<212>DNA

<213>水稻

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(436)..(436)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(492)..(492)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(516)..(516)

<223>n为a，c，g，或t

<220>

<221>misc_feature

<222>(551)..(551)

<223>n为a，c，g，或t

 

<400>40

gccactgaga aggagaagag gtcctccgga tcaaagcggc accgacgacg ccggcgaggc     60

cactactacc atatcatagt acatactagt acaagactgg agggctagtg gggtgggggt    120

acaatccaat ccaatccaat caaatcacat cgatcgacgc cgcaacccag cagcagcagc    180

ggaaccctag ccaagccacc atgagcaagc tctgccagtc ggcgtgcaag gccgccaagt    240

ctctcctctc cgccaccgcc gccgcctcct ccccgcgcac ctccctccta gccgagggga    300

ggaacgcggc gctggccacc ctcaccaacc tggggaggaa gacctcccca cagcttacgc    360

ctactcctac caccacaact cctccgccgc cgccgccgga tggctcgctg ccatcccgcc    420

gctgttaatg ctacangatc aggagcgcat gctgcagaga tggagcgcac tttatcgcat    480

caagcctgac gngtcaaagg ggctgattct gaatangtcc gattgaagaa aagatcaagc    540

tgttgcatca nc                                                        552

 

<210>41

<211>75

<212>PRT

<213>水稻

 

<400>41

 

Met Ser Lys Leu Cys Gln Ser Ala Cys Lys Ala Ala Lys Ser Leu Leu

1               5                   10                  15

Ser Ala Thr Ala Ala Ala Ser Ser Pro Arg Thr Ser Leu Leu Ala Glu

            20                  25                  30

Gly Arg Asn Ala Ala Leu Ala Thr Leu Thr Asn Leu Gly Arg Lys Thr

        35                  40                  45

Ser Pro Gln Leu Thr Pro Thr Pro Thr Thr Thr Thr Pro Pro Pro Pro

    50                  55                  60

Pro Pro Asp Gly Ser Leu Pro Ser Arg Arg Cys

65                  70                  75

 

<210>42

<211>719

<212>DNA

<213>玉米

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(1)..(11)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(13)..(19)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(22)..(22)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(24)..(27)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(80)..(80)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(494)..(494)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(578)..(578)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(602)..(602)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(606)..(607)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(609)..(609)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(674)..(676)

<223>n为a，c，g，或t

<220>

<221>misc_feature

<222>(691)..(691)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(703)..(703)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(711)..(712)

<223>n为a，c，g，或t

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(719)..(719)

<223>n为a，c，g，或t

 

<400>42

nnnnnnnnnn ngnnnnnnnt anannnnttt gtacaaaaaa gcaggctggt accggtccgg    60

aattcccggg atcgcagcgn ctaacgcgtg gccacgccat ccctccgcgt gcctaattaa   120

ttggaagcac ccagcgcaca tcatcagtcg aagtgagcgt cagcgagcga ccgcaccggc   180

acggcgccca tccatccatc gccatcctct agcccagtcc aaaggaaccc tagccatgag   240

cgccgcctcc aagaagctct tccaggccgc caggtccctc gtcctctccg cttctcaccg   300

ctccgtcctc gccgccgagg gccgcaccgc cgcgctcgcc acgctcacca actttggcag   360

gaagaccctc cccaccgcct acttatccta ccacaagcag ggatcccacc atgccgcgtc   420

ggggtgggga gccatcgccg ccgcagtccc agctgcagtt tacatgctcc aggaccagga   480

ggctcatgct gcanagatgg agcgcacctt cattgccatc aagcctgatg gcgtccaaag   540

aggcctgatt tctgagatta tgagccgatt tgagaganaa ggctataagc ttgttgccat   600

cnagcnnant gttccatcca aagaatttgc tgagaagcac taccatgatc tcaaggaaag   660

gcctttcttc agtnnnttgt gtgattttct nggctctggc ccngtgcttg nnatggttn    719

 

<210>43

<211>161

<212>PRT

<213>玉米

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(87)..(87)

<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(115)..(115)

<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(123)..(125)

<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(147)..(147)

<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

 

<220>

<221>misc_feature

<222>(159)..(159)

<223>Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

 

<400>43

 

Met Ser Ala Ala Ser Lys Lys Leu Phe Gln Ala Ala Arg Ser Leu Val

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser His Arg Ser Val Leu Ala Ala Glu Gly Arg Thr Ala

            20                  25                  30

Ala Leu Ala Thr Leu Thr Asn Phe Gly Arg Lys Thr Leu Pro Thr Ala

        35                  40                  45

Tyr Leu Ser Tyr His Lys Gln Gly Ser His His Ala Ala Ser Gly Trp

    50                  55                  60

Gly Ala Ile Ala Ala Ala Val Pro Ala Ala Val Tyr Met Leu Gln Asp

65                  70                  75                  80

Gln Glu Ala His Ala Ala Xaa Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys

                85                  90                  95

Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Met Ser Arg Phe

            100                 105                 110

Glu Arg Xaa Gly Tyr Lys Leu Val Ala Ile Xaa Xaa Xaa Val Pro Ser

        115                 120                 125

Lys Glu Phe Ala Glu Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe

    130                 135                 140

Phe Ser Xaa Leu Cys Asp Phe Leu Gly Ser Gly Pro Val Leu Xaa Met

145                 150                 155                 160

Val

 

<210>44

<211>239

<212>PRT

<213>水稻

 

<400>44

 

Met Ser Lys Leu Cys Gln Ser Ala Cys Lys Ala Ala Lys Ser Leu Leu

1               5                   10                  15

Ser Ala Thr Ala Ala Ala Ser Ser Pro Arg Thr Ser Leu Leu Ala Glu

            20                  25                  30

Gly Arg Asn Ala Ala Leu Ala Thr Leu Thr Asn Leu Gly Arg Lys Thr

        35                  40                  45

Leu Pro Thr Ala Tyr Ala Tyr Ser Tyr His His Asn Ser Ser Ala Ala

    50                  55                  60

Ala Ala Gly Trp Leu Ala Ala Ile Pro Ala Ala Val Tyr Met Leu Gln

65                  70                  75                  80

Asp Gln Glu Ala His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile

                85                  90                  95

Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Leu Ser Arg

            100                 105                 110

Phe Glu Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Ala Ile Lys Leu Val Val Pro

        115                 120                 125

Ser Lys Glu Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Asp Arg Pro

    130                 135                 140

Phe Phe Asn Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Leu Ala

145                 150                 155                 160

Met Val Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile

                165                 170                 175

Gly Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp

            180                 185                 190

Leu Ala Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro

        195                 200                 205

Glu Thr Ala Lys Ala Glu Ile Gly Leu Trp Phe Glu Pro Arg Glu Leu

    210                 215                 220

Val Ser Tyr Thr Ser Asn Glu Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>45

<211>233

<212>PRT

<213>豌豆

 

<400>45

 

Met Ala Ser His Leu Cys Lys Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Phe His Ser Gln Gly Arg Ala Val Ala Ala Ala Ala

            20                  25                  30

Ala Val Ala Ser Ile Arg Lys Val Pro Val Phe Ala Pro Asn Tyr Arg

        35                  40                  45

Arg Thr Gly Ser Gly Asn Gly Pro Ser Ser Trp Ile Ala Gly Ala Leu

    50                  55                  60

Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Leu Gln Asp Gln Glu Val His Ala

65                  70                  75                  80

Ala Glu Leu Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln

                85                  90                  95

Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe Glu Arg Lys Gly Phe

            100                 105                 110

Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Leu Ile Pro Thr Lys Gln Phe Ala Gln

        115                 120                 125

Gln His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asn Gly Leu Cys

    130                 135                 140

Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met Val Trp Glu Gly Glu

145                 150                 155                 160

Gly Val Ile Thr Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp Pro Gln

                165                 170                 175

Lys Ser Ala Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val Val Gly

            180                 185                 190

Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys Asp Glu

        195                 200                 205

Ile Lys Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser Phe Thr Ser Asn

    210                 215                 220

Ser Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Asp Asn

225                 230

 

<210>46

<211>238

<212>PRT

<213>拟南芥

 

<400>46

 

Met Ser Ser Gln Ile Cys Arg Ser Ala Ser Lys Ala Ala Lys Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ser Ala Lys Asn Ala Arg Phe Phe Ser Glu Gly Arg Ala Ile

            20                  25                  30

Gly Ala Ala Ala Ala Val Ser Ala Ser Gly Lys Ile Pro Leu Tyr Ala

        35                  40                  45

Ser Asn Phe Ala Arg Ser Ser Gly Ser Gly Val Ala Ser Lys Ser Trp

    50                  55                  60

Ile Thr Gly Leu Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Ile Gln Asp

65                  70                  75                  80

Gln Glu Val Leu Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys

                85                  90                  95

Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Ser Arg Phe

            100                 105                 110

Glu Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Ile Val Pro Ser

        115                 120                 125

Lys Asp Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe

    130                 135                 140

Phe Asn Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met

145                 150                 155                 160

Val Trp Glu Gly Asp Gly Val Ile Arg Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly

                165                 170                 175

Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu

            180                 185                 190

Ala Val Thr Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu

        195                 200                 205

Thr Ala Lys Asp Glu Ile Ser Leu Trp Phe Lys Pro Gln Glu Leu Val

    210                 215                 220

Ser Tyr Thr Ser Asn Ser Glu Lys Trp Leu Tyr Gly Asp Asn

225                 230                 235

 

<210>47

<211>235

<212>PRT

<213>葡萄藤

 

<400>47

 

Met Ser Ser Gln Ile Cys Arg Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ala Ser Lys Ser Ser Asn Leu Leu Ala Glu Gly Arg Ala Val

            20                  25                  30

Ala Ala Val Ala Ala Leu Ser Ser Arg Gly Lys Pro Phe Leu Ser Ser

        35                  40                  45

Phe Gly Asn Ala Gly Ser Gly Asn Ala Tyr Arg Gly Trp Leu Ser Ser

    50                  55                  60

Val Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Tyr Met Met Gln Glu Gln Glu Leu

65                  70                  75                  80

His Ala Thr Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly

                85                  90                  95

Val Gln Arg Gly Leu Ile Ala Glu Ile Leu Ser Arg Phe Glu Arg Lys

            100                 105                 110

Gly Phe Lys Leu Val Ala Ile Lys Ile Val Val Pro Ser Lys Asp Phe

        115                 120                 125

Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe Asn Gly

    130                 135                 140

Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Val Ala Met Val Trp Glu

145                 150                 155                 160

Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp

                165                 170                 175

Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val

            180                 185                 190

Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys

        195                 200                 205

Asp Glu Ile Asn Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Asn Tyr Ser

    210                 215                 220

Ser Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Val Asn

225                 230                 235

 

<210>48

<211>238

<212>PRT

<213>菥蓂

 

<400>48

 

Met Ser Ser Gln Ile Cys Arg Ser Ala Ser Lys Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ser Ala Arg Asn Val Arg Phe Phe Ser Glu Gly Arg Ala Ile

            20                  25                  30

Gly Ala Ala Ala Ala Val Ser Ala Ser Gly Lys Ile Pro Leu Tyr Ala

        35                  40                  45

Ser Asn Phe Ala Arg Ser Ser Gly Ser Gly Ala Ala Ser Lys Asn Trp

    50                  55                  60

Leu Thr Gly Leu Ile Ala Leu Pro Ala Ala Ala Leu Met Leu Gln Asp

65                  70                  75                  80

Gln Glu Val Leu Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys

                85                  90                  95

Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Val Ser Arg Phe

            100                 105                 110

Glu Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Val Val Pro Ser

        115                 120                 125

Lys Asp Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Thr Phe

    130                 135                 140

Phe Asn GlyLeu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Ile Ala Met

145                 150                 155                 160

Val Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Arg Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly

                165                 170                 175

Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu

            180                 185                 190

Ala Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu

        195                 200                 205

Thr Ala Lys Asp Glu Ile Asn Leu Trp Phe Lys Pro Gln Glu Leu Val

    210                 215                 220

Ser Tyr Thr Asn Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Asp Asn

225                 230                 235

 

<210>49

<211>195

<212>PRT

<213>水稻

 

<400>49

Met Ser Lys Leu Cys Gln Ser Ala Cys Lys Ala Ala Lys Ser Leu Leu

1               5                   10                  15

Ser Ala Thr Ala Ala Ala Ser Ser Gln Arg Thr Ser Leu Leu Ala Val

            20                  25                  30

Tyr Met Leu Gln Asp Gln Glu Ala His Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr

        35                  40                  45

Phe Ile Ala Ile Lys Pro Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu

    50                  55                  60

Ile Leu Ser Arg Phe Glu Arg Lys Gly Phe Lys Leu Val Ala Ile Lys

65                  70                  75                  80

Leu Val Val Pro Ser Lys Glu Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu

                85                  90                  95

Lys Asp Arg Pro Phe Phe Asn Gly Leu Cys Asp Phe Leu Ser Ser Gly

            100                 105                 110

Pro Val Leu Ala Met Val Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Lys Tyr Gly

        115                 120                 125

Arg Lys Leu Ile Gly Ala Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr

    130                 135                 140

Ile Arg Gly Asp Leu Ala Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly

145                 150                 155                 160

Ser Asp Gly Pro Glu Thr Ala Lys Ala Glu Ile Gly Leu Trp Phe Glu

                165                 170                 175

Pro Arg Glu Leu Val Ser Tyr Thr Ser Asn Glu Glu Lys Trp Ile Tyr

            180                 185                 190

Gly Val Asn

        195

 

<210>50

<211>972

<212>DNA

<213>拟南芥

<400>50

ccctgtttgc acatcactct tctcagtcct cacgcatcgt atcagagaaa atgagctccc    60

aaatctgcag atctgcttct agagcagcca ggtctcttct ttcttcagcc aagaatgctc   120

gtttcttctc cgaaggccga gccattggtg cagcaagtgt ggtgcatgcg actggaaaag   180

tccctcagta tgcatccaac tttggaaaat cgggttctgg cttcgtctct aatagctgga   240

tcaccggact ccttgctctt cctgctgcag ccttcatgct ccaagatcag gaagcacttg   300

ctgcagagat ggaacgcact ttcatcgcta tcaaacctga tggagtgcag cgaggactga   360

tatcagaaat cattacacgg ttcgaacgca aaggatacaa gcttgttggc attaaagtca   420

tggttccttc aaagggtttc gcgcagaagc attaccatga tctaaaggag agacctttct   480

tcaacggctt gtgtaacttc cttagctcag gccctgttgt tgccatggta tgggaaggtg   540

aaggagtgat tagatacgga cgtaaactga ttggagccac tgatcctcag aaatcagaac   600

ctggaactat ccgaggcgat ctcgctgttg ttgttggaag gaacattata catggaagcg   660

atggaccaga gacagctaaa gacgagatca gcttgtggtt taagcctgaa gaactcgttt   720

cttacactag taacgctgag aagtggatct acggccagaa ctgaactatt ccctctttct   780

cccttatttt caaccgttag atcagacata aataattact tcttttgttt tttcttttac   840

ccaaacactg aaaacgtacc gggaataaca aatttactgc atttgttatc aagtttgttc   900

taatagaccc aatgaaatta ggccacgtgt gcgatcatgt aaccggttta ccgtaatgtg   960

gacttgaaat cc                                                       972

 

<210>51

<211>237

<212>PRT

<213>拟南芥

 

<400>51

Met Ser Ser Gln Ile Cys Arg Ser Ala Ser Arg Ala Ala Arg Ser Leu

1               5                   10                  15

Leu Ser Ser Ala Lys Asn Ala Arg Phe Phe Ser Glu Gly Arg Ala Ile

            20                  25                  30

Gly Ala Ala Ser Val Val His Ala Thr Gly Lys Val Pro Gln Tyr Ala

        35                  40                  45

Ser Asn Phe Gly Lys Ser Gly Ser Gly Phe Val Ser Asn Ser Trp Ile

    50                  55                  60

Thr Gly Leu Leu Ala Leu Pro Ala Ala Ala Phe Met Leu Gln Asp Gln

65                  70                  75                  80

Glu Ala Leu Ala Ala Glu Met Glu Arg Thr Phe Ile Ala Ile Lys Pro

                85                  90                  95

Asp Gly Val Gln Arg Gly Leu Ile Ser Glu Ile Ile Thr Arg Phe Glu

            100                 105                 110

Arg Lys Gly Tyr Lys Leu Val Gly Ile Lys Val Met Val Pro Ser Lys

        115                 120                 125

Gly Phe Ala Gln Lys His Tyr His Asp Leu Lys Glu Arg Pro Phe Phe

    130                 135                 140

Asn Gly Leu Cys Asn Phe Leu Ser Ser Gly Pro Val Val Ala Met Val

145                 150                 155                 160

Trp Glu Gly Glu Gly Val Ile Arg Tyr Gly Arg Lys Leu Ile Gly Ala

                165                 170                 175

Thr Asp Pro Gln Lys Ser Glu Pro Gly Thr Ile Arg Gly Asp Leu Ala

            180                 185                 190

Val Val Val Gly Arg Asn Ile Ile His Gly Ser Asp Gly Pro Glu Thr

        195                 200                 205

Ala Lys Asp Glu Ile Ser Leu Trp Phe Lys Pro Glu Glu Leu Val Ser

    210                 215                 220

Tyr Thr Ser Asn Ala Glu Lys Trp Ile Tyr Gly Gln Asn

225                 230                 235

 

<210>52

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>引物

<400>52

ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggct                                      29

 

<210>53

<211>29

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>引物

 

<400>53

ggggaccact ttgtacaaga aagctgggt                                      29

 

<210>54

<211>54

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>引物

 

<400>54

ttaaacaagt ttgtacaaaa aagcaggctg caattaaccc tcactaaagg gaac          54

 

<210>55

<211>53

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>引物

 

<400>55

ttaaaccact ttgtacaaga aagctgggtg cgtaatacga ctcactatag ggc           53

 

<210>56

<211>12856

<212>DNA

<213>人工序列

 

<220>

<223>载体

 

<400>56

cgccttggcg cgccgatcat ccacaagttt gtacaaaaaa gctgaacgag aaacgtaaaa    60

tgatataaat atcaatatat taaattagat tttgcataaa aaacagacta cataatactg   120

taaaacacaa catatccagt cactatggcg gccgcattag gcaccccagg ctttacactt   180

tatgcttccg gctcgtataa tgtgtggatt ttgagttagg atttaaatac gcgttgatcc   240

ggcttactaa aagccagata acagtatgcg tatttgcgcg ctgatttttg cggtataaga   300

atatatactg atatgtatac ccgaagtatg tcaaaaagag gtatgctatg aagcagcgta   360

ttacagtgac agttgacagc gacagctatc agttgctcaa ggcatatatg atgtcaatat   420

ctccggtctg gtaagcacaa ccatgcagaa tgaagcccgt cgtctgcgtg ccgaacgctg    480

gaaagcggaa aatcaggaag ggatggctga ggtcgcccgg tttattgaaa tgaacggctc    540

ttttgctgac gagaacaggg gctggtgaaa tgcagtttaa ggtttacacc tataaaagag    600

agagccgtta tcgtctgttt gtggatgtac agagtgatat cattgacacg cccggtcgac    660

ggatggtgat ccccctggcc agtgcacgtc tgctgtcaga taaagtctcc cgtgaacttt    720

acccggtggt gcatatcggg gatgaaagct ggcgcatgat gaccaccgat atggccagtg    780

tgccggtctc cgttatcggg gaagaagtgg ctgatctcag ccaccgcgaa aatgacatca    840

aaaacgccat taacctgatg ttctggggaa tataaatgtc aggctccctt atacacagcc    900

agtctgcagg tcgaccatag tgactggata tgttgtgttt tacagtatta tgtagtctgt    960

tttttatgca aaatctaatt taatatattg atatttatat cattttacgt ttctcgttca   1020

gctttcttgt acaaagtggt gttaacctag acttgtccat cttctggatt ggccaactta   1080

attaatgtat gaaataaaag gatgcacaca tagtgacatg ctaatcacta taatgtgggc   1140

atcaaagttg tgtgttatgt gtaattacta gttatctgaa taaaagagaa agagatcatc   1200

catatttctt atcctaaatg aatgtcacgt gtctttataa ttctttgatg aaccagatgc   1260

atttcattaa ccaaatccat atacatataa atattaatca tatataatta atatcaattg   1320

ggttagcaaa acaaatctag tctaggtgtg ttttgcgaat tgcggccgcc accgcggtgg   1380

agctcgaatt ccggtccggg tcacctttgt ccaccaagat ggaactgcgg ccgctcatta   1440

attaagtcag gcgcgcctct agttgaagac acgttcatgt cttcatcgta agaagacact   1500

cagtagtctt cggccagaat ggccatctgg attcagcagg cctagaaggc catttaaatc   1560

ctgaggatct ggtcttccta aggacccggg atatcggacc gattaaactt taattcggtc   1620

cgaagcttga agttcctatt ccgaagttcc tattctccag aaagtatagg aacttcgcat   1680

gcctgcagtg cagcgtgacc cggtcgtgcc cctctctaga gataatgagc attgcatgtc   1740

taagttataa aaaattacca catatttttt ttgtcacact tgtttgaagt gcagtttatc   1800

tatctttata catatattta aactttactc tacgaataat ataatctata gtactacaat   1860

aatatcagtg ttttagagaa tcatataaat gaacagttag acatggtcta aaggacaatt   1920

gagtattttg acaacaggac tctacagttt tatcttttta gtgtgcatgt gttctccttt   1980

ttttttgcaa atagcttcac ctatataata cttcatccat tttattagta catccattta   2040

gggtttaggg ttaatggttt ttatagacta atttttttag tacatctatt ttattctatt   2100

ttagcctcta aattaagaaa actaaaactc tattttagtt tttttattta ataatttaga   2160

tataaaatag aataaaataa agtgactaaa aattaaacaa atacccttta agaaattaaa    2220

aaaactaagg aaacattttt cttgtttcga gtagataatg ccagcctgtt aaacgccgtc    2280

gacgagtcta acggacacca accagcgaac cagcagcgtc gcgtcgggcc aagcgaagca    2340

gacggcacgg catctctgtc gctgcctctg gacccctctc gagagttccg ctccaccgtt    2400

ggacttgctc cgctgtcggc atccagaaat tgcgtggcgg agcggcagac gtgagccggc    2460

acggcaggcg gcctcctcct cctctcacgg caccggcagc tacgggggat tcctttccca    2520

ccgctccttc gctttccctt cctcgcccgc cgtaataaat agacaccccc tccacaccct    2580

ctttccccaa cctcgtgttg ttcggagcgc acacacacac aaccagatct cccccaaatc    2640

cacccgtcgg cacctccgct tcaaggtacg ccgctcgtcc tccccccccc ccctctctac    2700

cttctctaga tcggcgttcc ggtccatgca tggttagggc ccggtagttc tacttctgtt    2760

catgtttgtg ttagatccgt gtttgtgtta gatccgtgct gctagcgttc gtacacggat    2820

gcgacctgta cgtcagacac gttctgattg ctaacttgcc agtgtttctc tttggggaat    2880

cctgggatgg ctctagccgt tccgcagacg ggatcgattt catgattttt tttgtttcgt    2940

tgcatagggt ttggtttgcc cttttccttt atttcaatat atgccgtgca cttgtttgtc    3000

gggtcatctt ttcatgcttt tttttgtctt ggttgtgatg atgtggtctg gttgggcggt    3060

cgttctagat cggagtagaa ttctgtttca aactacctgg tggatttatt aattttggat    3120

ctgtatgtgt gtgccataca tattcatagt tacgaattga agatgatgga tggaaatatc    3180

gatctaggat aggtatacat gttgatgcgg gttttactga tgcatataca gagatgcttt    3240

ttgttcgctt ggttgtgatg atgtggtgtg gttgggcggt cgttcattcg ttctagatcg    3300

gagtagaata ctgtttcaaa ctacctggtg tatttattaa ttttggaact gtatgtgtgt    3360

gtcatacatc ttcatagtta cgagtttaag atggatggaa atatcgatct aggataggta    3420

tacatgttga tgtgggtttt actgatgcat atacatgatg gcatatgcag catctattca    3480

tatgctctaa ccttgagtac ctatctatta taataaacaa gtatgtttta taattatttt    3540

gatcttgata tacttggatg atggcatatg cagcagctat atgtggattt ttttagccct    3600

gccttcatac gctatttatt tgcttggtac tgtttctttt gtcgatgctc accctgttgt    3660

ttggtgttac ttctgcaggt cgactttaac ttagcctagg atccacacga caccatgata    3720

gaggtgaaac cgattaacgc agaggatacc tatgaactaa ggcatagaat actcagacca    3780

aaccagccga tagaagcgtg tatgtttgaa agcgatttac ttcgtggtgc atttcactta    3840

ggcggctatt acgggggcaa actgatttcc atagcttcat tccaccaggc cgagcactca    3900

gaactccaag gccagaaaca gtaccagctc cgaggtatgg ctaccttgga aggttatcgt    3960

gagcagaagg cgggatcgag tctaattaaa cacgctgaag aaattcttcg taagaggggg    4020

gcggacttgc tttggtgtaa tgcgcggaca tccgcctcag gctactacaa aaagttaggc    4080

ttcagcgagc agggagaggt attcgacacg ccgccagtag gacctcacat cctgatgtat    4140

aaaaggatca cataactagc tagtcagtta acctagactt gtccatcttc tggattggcc    4200

aacttaatta atgtatgaaa taaaaggatg cacacatagt gacatgctaa tcactataat    4260

gtgggcatca aagttgtgtg ttatgtgtaa ttactagtta tctgaataaa agagaaagag    4320

atcatccata tttcttatcc taaatgaatg tcacgtgtct ttataattct ttgatgaacc    4380

agatgcattt cattaaccaa atccatatac atataaatat taatcatata taattaatat    4440

caattgggtt agcaaaacaa atctagtcta ggtgtgtttt gcgaattcag agctcgaatt    4500

cattccgatt aatcgtggcc tcttgctctt caggatgaag agctatgttt aaacgtgcaa    4560

gcgctactag acaattcagt acattaaaaa cgtccgcaat gtgttattaa gttgtctaag    4620

cgtcaatttg tttacaccac aatatatcct gccaccagcc agccaacagc tccccgaccg    4680

gcagctcggc acaaaatcac cactcgatac aggcagccca tcagtccggg acggcgtcag    4740

cgggagagcc gttgtaaggc ggcagacttt gctcatgtta ccgatgctat tcggaagaac    4800

ggcaactaag ctgccgggtt tgaaacacgg atgatctcgc ggagggtagc atgttgattg    4860

taacgatgac agagcgttgc tgcctgtgat caaatatcat ctccctcgca gagatccgaa    4920

ttatcagcct tcttattcat ttctcgctta accgtgacag gctgtcgatc ttgagaacta    4980

tgccgacata ataggaaatc gctggataaa gccgctgagg aagctgagtg gcgctatttc    5040

tttagaagtg aacgttgacg atcgtcgacc gtaccccgat gaattaattc ggacgtacgt    5100

tctgaacaca gctggatact tacttgggcg attgtcatac atgacatcaa caatgtaccc    5160

gtttgtgtaa ccgtctcttg gaggttcgta tgacactagt ggttcccctc agcttgcgac    5220

tagatgttga ggcctaacat tttattagag agcaggctag ttgcttagat acatgatctt    5280

caggccgtta tctgtcaggg caagcgaaaa ttggccattt atgacgacca atgccccgca    5340

gaagctccca tctttgccgc catagacgcc gcgcccccct tttggggtgt agaacatcct    5400

tttgccagat gtggaaaaga agttcgttgt cccattgttg gcaatgacgt agtagccggc    5460

gaaagtgcga gacccatttg cgctatatat aagcctacga tttccgttgc gactattgtc    5520

gtaattggat gaactattat cgtagttgct ctcagagttg tcgtaatttg atggactatt    5580

gtcgtaattg cttatggagt tgtcgtagtt gcttggagaa atgtcgtagt tggatgggga    5640

gtagtcatag ggaagacgag cttcatccac taaaacaatt ggcaggtcag caagtgcctg    5700

ccccgatgcc atcgcaagta cgaggcttag aaccaccttc aacagatcgc gcatagtctt    5760

ccccagctct ctaacgcttg agttaagccg cgccgcgaag cggcgtcggc ttgaacgaat    5820

tgttagacat tatttgccga ctaccttggt gatctcgcct ttcacgtagt gaacaaattc    5880

ttccaactga tctgcgcgcg aggccaagcg atcttcttgt ccaagataag cctgcctagc    5940

ttcaagtatg acgggctgat actgggccgg caggcgctcc attgcccagt cggcagcgac    6000

atccttcggc gcgattttgc cggttactgc gctgtaccaa atgcgggaca acgtaagcac    6060

tacatttcgc tcatcgccag cccagtcggg cggcgagttc catagcgtta aggtttcatt    6120

tagcgcctca aatagatcct gttcaggaac cggatcaaag agttcctccg ccgctggacc    6180

taccaaggca acgctatgtt ctcttgcttt tgtcagcaag atagccagat caatgtcgat    6240

cgtggctggc tcgaagatac ctgcaagaat gtcattgcgc tgccattctc caaattgcag    6300

ttcgcgctta gctggataac gccacggaat gatgtcgtcg tgcacaacaa tggtgacttc    6360

tacagcgcgg agaatctcgc tctctccagg ggaagccgaa gtttccaaaa ggtcgttgat    6420

caaagctcgc cgcgttgttt catcaagcct tacagtcacc gtaaccagca aatcaatatc    6480

actgtgtggc ttcaggccgc catccactgc ggagccgtac aaatgtacgg ccagcaacgt    6540

cggttcgaga tggcgctcga tgacgccaac tacctctgat agttgagtcg atacttcggc    6600

gatcaccgct tccctcatga tgtttaactc ctgaattaag ccgcgccgcg aagcggtgtc    6660

ggcttgaatg aattgttagg cgtcatcctg tgctcccgag aaccagtacc agtacatcgc    6720

tgtttcgttc gagacttgag gtctagtttt atacgtgaac aggtcaatgc cgccgagagt    6780

aaagccacat tttgcgtaca aattgcaggc aggtacattg ttcgtttgtg tctctaatcg    6840

tatgccaagg agctgtctgc ttagtgccca ctttttcgca aattcgatga gactgtgcgc    6900

gactcctttg cctcggtgcg tgtgcgacac aacaatgtgt tcgatagagg ctagatcgtt    6960

ccatgttgag ttgagttcaa tcttcccgac aagctcttgg tcgatgaatg cgccatagca    7020

agcagagtct tcatcagagt catcatccga gatgtaatcc ttccggtagg ggctcacact    7080

tctggtagat agttcaaagc cttggtcgga taggtgcaca tcgaacactt cacgaacaat    7140

gaaatggttc tcagcatcca atgtttccgc cacctgctca gggatcaccg aaatcttcat    7200

atgacgccta acgcctggca cagcggatcg caaacctggc gcggcttttg gcacaaaagg    7260

cgtgacaggt ttgcgaatcc gttgctgcca cttgttaacc cttttgccag atttggtaac    7320

tataatttat gttagaggcg aagtcttggg taaaaactgg cctaaaattg ctggggattt    7380

caggaaagta aacatcacct tccggctcga tgtctattgt agatatatgt agtgtatcta    7440

cttgatcggg ggatctgctg cctcgcgcgt ttcggtgatg acggtgaaaa cctctgacac    7500

atgcagctcc cggagacggt cacagcttgt ctgtaagcgg atgccgggag cagacaagcc    7560

cgtcagggcg cgtcagcggg tgttggcggg tgtcggggcg cagccatgac ccagtcacgt    7620

agcgatagcg gagtgtatac tggcttaact atgcggcatc agagcagatt gtactgagag    7680

tgcaccatat gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc    7740

gctcttccgc ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg    7800

tatcagctca ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa    7860

agaacatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg    7920

cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga    7980

ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg    8040

tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg    8100

gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc    8160

gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg    8220

gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca    8280

ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt    8340

ggcctaacta cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag    8400

ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg    8460

gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc    8520

ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt    8580

tggtcatgag attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt    8640

ttaaatcaat ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca    8700

gtgaggcacc tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg    8760

tcgtgtagat aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac    8820

cgcgagaccc acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg    8880

ccgagcgcag aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aattgttgcc    8940

gggaagctag agtaagtagt tcgccagtta atagtttgcg caacgttgtt gccattgctg    9000

cagggggggg gggggggggg gacttccatt gttcattcca cggacaaaaa cagagaaagg    9060

aaacgacaga ggccaaaaag cctcgctttc agcacctgtc gtttcctttc ttttcagagg    9120

gtattttaaa taaaaacatt aagttatgac gaagaagaac ggaaacgcct taaaccggaa   9180

aattttcata aatagcgaaa acccgcgagg tcgccgcccc gtaacctgtc ggatcaccgg   9240

aaaggacccg taaagtgata atgattatca tctacatatc acaacgtgcg tggaggccat   9300

caaaccacgt caaataatca attatgacgc aggtatcgta ttaattgatc tgcatcaact   9360

taacgtaaaa acaacttcag acaatacaaa tcagcgacac tgaatacggg gcaacctcat   9420

gtcccccccc cccccccccc tgcaggcatc gtggtgtcac gctcgtcgtt tggtatggct   9480

tcattcagct ccggttccca acgatcaagg cgagttacat gatcccccat gttgtgcaaa   9540

aaagcggtta gctccttcgg tcctccgatc gttgtcagaa gtaagttggc cgcagtgtta   9600

tcactcatgg ttatggcagc actgcataat tctcttactg tcatgccatc cgtaagatgc   9660

ttttctgtga ctggtgagta ctcaaccaag tcattctgag aatagtgtat gcggcgaccg   9720

agttgctctt gcccggcgtc aacacgggat aataccgcgc cacatagcag aactttaaaa   9780

gtgctcatca ttggaaaacg ttcttcgggg cgaaaactct caaggatctt accgctgttg   9840

agatccagtt cgatgtaacc cactcgtgca cccaactgat cttcagcatc ttttactttc   9900

accagcgttt ctgggtgagc aaaaacagga aggcaaaatg ccgcaaaaaa gggaataagg   9960

gcgacacgga aatgttgaat actcatactc ttcctttttc aatattattg aagcatttat  10020

cagggttatt gtctcatgag cggatacata tttgaatgta tttagaaaaa taaacaaata  10080

ggggttccgc gcacatttcc ccgaaaagtg ccacctgacg tctaagaaac cattattatc  10140

atgacattaa cctataaaaa taggcgtatc acgaggccct ttcgtcttca agaattggtc  10200

gacgatcttg ctgcgttcgg atattttcgt ggagttcccg ccacagaccc ggattgaagg  10260

cgagatccag caactcgcgc cagatcatcc tgtgacggaa ctttggcgcg tgatgactgg  10320

ccaggacgtc ggccgaaaga gcgacaagca gatcacgctt ttcgacagcg tcggatttgc  10380

gatcgaggat ttttcggcgc tgcgctacgt ccgcgaccgc gttgagggat caagccacag  10440

cagcccactc gaccttctag ccgacccaga cgagccaagg gatctttttg gaatgctgct  10500

ccgtcgtcag gctttccgac gtttgggtgg ttgaacagaa gtcattatcg tacggaatgc  10560

caagcactcc cgaggggaac cctgtggttg gcatgcacat acaaatggac gaacggataa  10620

accttttcac gcccttttaa atatccgtta ttctaataaa cgctcttttc tcttaggttt  10680

acccgccaat atatcctgtc aaacactgat agtttaaact gaaggcggga aacgacaatc  10740

tgatcatgag cggagaatta agggagtcac gttatgaccc ccgccgatga cgcgggacaa  10800

gccgttttac gtttggaact gacagaaccg caacgttgaa ggagccactc agcaagctgg  10860

tacgattgta atacgactca ctatagggcg aattgagcgc tgtttaaacg ctcttcaact  10920

ggaagagcgg ttacccggac cgaagcttga agttcctatt ccgaagttcc tattctctag  10980

aaagtatagg aacttcagat ctcgatgctc accctgttgt ttggtgttac ttctgcaggt  11040

cgactctaga ggatccacca tgagcccaga acgacgcccg gccgacatcc gccgtgccac  11100

cgaggcggac atgccggcgg tctgcaccat cgtcaaccac tacatcgaga caagcacggt  11160

caacttccgt accgagccgc aggaaccgca ggactggacg gacgacctcg tccgtctgcg  11220

ggagcgctat ccctggctcg tcgccgaggt ggacggcgag gtcgccggca tcgcctacgc  11280

gggcccctgg aaggcacgca acgcctacga ctggacggcc gagtcgaccg tgtacgtctc  11340

cccccgccac cagcggacgg gactgggctc cacgctctac acccacctgc tgaagtccct  11400

ggaggcacag ggcttcaaga gcgtggtcgc tgtcatcggg ctgcccaacg acccgagcgt  11460

gcgcatgcac gaggcgctcg gatatgcccc ccgcggcatg ctgcgggcgg ccggcttcaa  11520

gcacgggaac tggcatgacg tgggtttctg gcagctggac ttcagcctgc cggtaccgcc  11580

ccgtccggtc ctgcccgtca ccgagatctg atccgtcgac caacctagac ttgtccatct  11640

tctggattgg ccaacttaat taatgtatga aataaaagga tgcacacata gtgacatgct  11700

aatcactata atgtgggcat caaagttgtg tgttatgtgt aattactagt tatctgaata  11760

aaagagaaag agatcatcca tatttcttat cctaaatgaa tgtcacgtgt ctttataatt  11820

ctttgatgaa ccagatgcat ttcattaacc aaatccatat acatataaat attaatcata  11880

tataattaat atcaattggg ttagcaaaac aaatctagtc taggtgtgtt ttgcgaattg  11940

cggccgcgat ctggggaatt cccatggaca ccggtaattc ccatgatctt ctctccttca  12000

tcaatggatg ccatgtttca taacaataac accaaatgtt tgatgagcta ccaacaattg  12060

cgcaaagact atggctaagc tcgagctcgc tcgctacaag ttgttgactt tcaaatacaa  12120

gtttgttttt ggaacaccaa atattctaca tgatctttca ctaagttgcg caccactatc  12180

aaaagattat ctaggccatt attcaagtaa agagtgaaca cgtctaagac ccacaaccac  12240

accaaataga atacgcatac atgcaacata ttgtgcaaga agtatccaac tggactccca  12300

tgtattctaa aactattttc gtagagttaa agttatgaca aacttatcaa ataaaaattt  12360

gaacgctgga ccaaaacttt catctttcaa atccaccatc gtctatcctc ataaattgtt  12420

ttgattataa cacatctacg taaatcattt gttttgaaca atactaattt aattttatta  12480

agtcaaataa cctgcttaga aaataatccc tccacctcat ttaacaattt cttgtcaaac  12540

acacaccaag aaaaaaatta atgaaagaga aaagaaatga aaaggacatg gagttgaata  12600

ctagcaaaat tgattgaagg aagattcaca attgaaattg aaaccattta atttattttc  12660

gggtccataa taataaattg gtaagaataa aaacccgatc aagtccggta cagtacaatt  12720

ccactccacc aactccttac ttaaacccct atttataccc actctcatcc tcactcttcc  12780

ttcacctctc acactctctt ctctctctca aaaccctcac acaaacgctg cgtttagtgt  12840

aagaaattca atccgg                                                  12856

 

<210>57

<211>825

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>57

aaatccttac agaattgctg tagtttcata gtgctagatg tggacagcaa agcgccgctg     60

tatgcttctg cttttctttt ttggtgtgtg tagccacatc ctttgttcct gcccggcgcc    120

atcccacttg gttgtttttt tttatgattg aaagccttca tgcttcctcg gtcaatcacc    180

ggtgcgcact gggagcatcg ccggaaaaaa aattcttcgg ctaagagtaa cttctttctc    240

cttttcttct ctgatctcgc gagcagtgct gataacgtgt tgtaatctac ttagcggtaa    300

cgagattgag agagacaaaa tgacagaact attgtcttta ttgcagagtg tcatgtattt    360

atacagggga tacaaagtct cccaaggggt gtgtcccttg ggagtaactg ccagttgatc    420

acaggacaat attttgtaac aaaacgtaca catcgtcaaa atagcgaggc atgaaactgg    480

ccttggccat ggacgcgtga agcgcgccat gcgttggata tgtggtcaat aagtatatac    540

aatacaatgt ttaacagagc tgatagtact gctttggcac atttttgtcc acgcttcatg    600

agagataaaa cacctgcacg taaattcaca tgctgcactg aaggcccgat cactgaggag    660

cgaactgccg taactccctt ctatatatac ccccagtccc tgtttcagtt ttcgtcaagc    720

tagcagcacc aagttgtcga tcacttgcct gctcttgagc tcgattaagc tatcatcagc    780

tacagcatcc gatcccaaac tgcaactgta gcagcgacaa ctgcc                    825

 

<210>58

<211>860

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>58

ctggtaatta ttggctgtag gattctaaac agagcctaaa tagctggaat agctctagcc     60

ctcaatccaa actaatgata tctatactta tgcaactcta aatttttatt ctaaaagtaa    120

tatttcattt ttgtcaacga gattctctac tctattccac aatcttttga agcaatattt    180

accttaaatc tgtactctat accaataatc atatattcta ttatttattt ttatctctct    240

cctaaggagc atccccctat gtctgcatgg cccccgcctc gggtcccaat ctcttgctct    300

gctagtagca cagaagaaaa cactagaaat gacttgcttg acttagagta tcagataaac    360

atcatgttta cttaacttta atttgtatcg gtttctacta tttttataat atttttgtct    420

ctatagatac tacgtgcaac agtataatca acctagttta atccagagcg aaggattttt    480

tactaagtac gtgactccat atgcacagcg ttccttttat ggttcctcac tgggcacagc    540

ataaacgaac cctgtccaat gttttcagcg cgaacaaaca gaaattccat cagcgaacaa    600

acaacataca tgcgagatga aaataaataa taaaaaaagc tccgtctcga taggccggca    660

cgaatcgaga gcctccatag ccagtttttt ccatcggaac ggcggttcgc gcacctaatt    720

atatgcacca cacgcctata aagccaacca acccgtcgga ggggcgcaag ccagacagaa    780

gacagcccgt cagcccctct cgtttttcat ccgccttcgc ctccaaccgc gtgcgctcca    840

cgcctcctcc aggaaagcga                                                860

 

<210>59

<211>899

<212>DNA

<213>玉米

 

<400>59

gtgcagcgtg acccggtcgt gcccctctct agagataatg agcattgcat gtctaagtta     60

taaaaaatta ccacatattt tttttgtcac acttgtttga agtgcagttt atctatcttt    120

atacatatat ttaaacttta ctctacgaat aatataatct atagtactac aataatatca    180

gtgttttaga gaatcatata aatgaacagt tagacatggt ctaaaggaca attgagtatt    240

ttgacaacag gactctacag ttttatcttt ttagtgtgca tgtgttctcc tttttttttg    300

caaatagctt cacctatata atacttcatc cattttatta gtacatccat ttagggttta    360

gggttaatgg tttttataga ctaatttttt tagtacatct attttattct attttagcct    420

ctaaattaag aaaactaaaa ctctatttta gtttttttat ttaataattt agatataaaa    480

tagaataaaa taaagtgact aaaaattaaa caaataccct ttaagaaatt aaaaaaacta    540

aggaaacatt tttcttgttt cgagtagata atgccagcct gttaaacgcc gtcgacgagt    600

ctaacggaca ccaaccagcg aaccagcagc gtcgcgtcgg gccaagcgaa gcagacggca    660

cggcatctct gtcgctgcct ctggacccct ctcgagagtt ccgctccacc gttggacttg    720

ctccgctgtc ggcatccaga aattgcgtgg cggagcggca gacgtgagcc ggcacggcag    780

gcggcctcct cctcctctca cggcacggca gctacggggg attcctttcc caccgctcct    840

tcgctttccc ttcctcgccc gccgtaataa atagacaccc cctccacacc ctctttccc  899

 

<210>60

<211>879

<212>DNA

<213>紫花苜蓿

 

<400>60

aattcccatg atcttctctc cttcatcaat ggatgccatg tttcataaca ataacaccaa     60

atgtttgatg agctaccaac aattgcgcaa agactatggc taagctcgag ctcgctcgct    120

acaagttgtt gactttcaaa tacaagtttg tttttggaac accaaatatt ctacatgatc    180

tttcactaag ttgcgcacca ctatcaaaag attatctagg ccattattca agtaaagagt    240

gaacacgtct aagacccaca accacaccaa atagaatacg catacatgca acatattgtg    300

caagaagtat ccaactggac tcccatgtat tctaaaacta ttttcgtaga gttaaagtta    360

tgacaaactt atcaaataaa aatttgaacg ctggaccaaa actttcatct ttcaaatcca    420

ccatcgtcta tcctcataaa ttgttttgat tataacacat ctacgtaaat catttgtttt    480

gaacaatact aatttaattt tattaagtca aataacctgc ttagaaaata atccctccac    540

ctcatttaac aatttcttgt caaacacaca ccaagaaaaa aattaatgaa agagaaaaga    600

aatgaaaagg acatggagtt gaatactagc aaaattgatt gaaggaagat tcacaattga    660

aattgaaacc atttaattta ttttcgggtc cataataata aattggtaag aataaaaacc    720

cgatcaagtc cggtacagta caattccact ccaccaactc cttacttaaa cccctattta    780

tacccactct catcctcact cttccttcac ctctcacact ctcttctctc tctcaaaacc    840

ctcacacaaa cgctgcgttt agtgtaagaa attcaatcc                           879

 

<210>61

<211>318

<212>DNA

<213>马铃薯

 

<400>61

agacttgtcc atcttctgga ttggccaact taattaatgt atgaaataaa aggatgcaca     60

catagtgaca tgctaatcac tataatgtgg gcatcaaagt tgtgtgttat gtgtaattac    120

tagttatctg aataaaagag aaagagatca tccatatttc ttatcctaaa tgaatgtcac    180

gtgtctttat aattctttga tgaaccagat gcatttcatt aaccaaatcc atatacatat    240

aaatattaat catatataat taatatcaat tgggttagca aaacaaatct agtctaggtg    300

tgttttgcga attgcggc                                                  318

Claims (45)

1.在基因组中包含重组DNA构建体的植物，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一个调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，并且其中所述植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物进行比较时表现出改变的根构造。

2.权利要求1的植物，其中所述植物是玉米植物或大豆植物。

3.植物，所述植物在其基因组中包含：

重组DNA构建体，所述重组DNA构建体包含：

(a)可操作地连接至少一个调控元件的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或

(b)抑制DNA构建体，所述抑制DNA构建体包含至少一个调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(b)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽，

并且其中所述植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时表现出至少一种农学特性的改变。

4.权利要求3的植物，其中所述植物是玉米植物或大豆植物。

5.权利要求3的植物，其中在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的所述对照植物比较时，所述植物表现出至少一种农学特性的所述改变。

6.权利要求5的植物，其中所述不同的环境条件为选自干旱、氮或病害中的至少一种。

7.权利要求5的植物，其中所述植物是玉米植物或大豆植物。

8.权利要求7的植物，其中所述植物是玉米植物或大豆植物。

9.权利要求3的植物，其中所述至少一种农学特性选自：绿度、产量、生长速率、生物量、成熟时的鲜重、成熟时的干重、果实产量、种子产量、总植物含氮量、果实含氮量、种子含氮量、营养组织含氮量、总植物游离氨基酸含量、果实游离氨基酸含量、种子游离氨基酸含量、营养组织游离氨基酸含量、总植物蛋白质含量、果实蛋白质含量、种子蛋白质含量、营养组织蛋白质含量、耐旱性、氮摄取、氮胁迫耐受性、根倒伏、茎倒伏、植株高度、穗长和收获指数。

10.权利要求9的植物，其中所述植物是玉米植物或大豆植物。

11.权利要求3的植物，其中在与所述对照植物相比较时，所述植物表现出所述至少一种农学特性的增强。

12.权利要求11的植物，其中所述植物是玉米植物或大豆植物。

13.改变植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；以及

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体，并且在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

14.权利要求13的方法，所述方法还包括：

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体，并且在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造。

15.评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(c)评价与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时所述转基因植物的根构造。

16.权利要求15的方法，所述方法还包括：

(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(e)评价与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

17.评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(d)评价与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

18.测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(c)测定所述转基因植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

19.权利要求18的方法，所述方法还包括：

(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(e)测定所述子代植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

20.权利要求19的方法，其中所述测定步骤包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

21.权利要求19的方法，其中所述测定步骤(e)包括：测定所述子代植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

22.测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：

(a)将重组DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述重组DNA构建体包含可操作地连接至少一种调控序列的多核苷酸，其中所述多核苷酸编码多肽，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体；以及

(d)测定所述子代植物在与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

23.权利要求22的方法，其中所述测定步骤包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

24.测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(c)测定所述转基因植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

25.权利要求24的方法，其中所述测定步骤包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

26.权利要求24的方法，所述方法还包括：

(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(e)测定所述子代植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

27.权利要求26的方法，其中所述测定步骤(e)包括：测定所述子代植物在不同的环境条件下与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

28.测定植物农学特性改变的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体，并且当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时表现出改变的根构造；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(d)测定所述子代植物在与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

29.权利要求28的方法，其中所述测定步骤包括：测定所述转基因植物在不同的环境条件下与未包含所述重组DNA构建体的对照植物比较时是否表现出至少一种农学特性的改变。

30.改变植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；以及

(b)在步骤(a)之后，从所述可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体，并且其中当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时，所述转基因植物表现出改变的根构造。

31.权利要求30的方法，所述方法还包括：

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述重组DNA构建体，并且其中当与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时，所述子代植物表现出改变的根构造。

32.评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(c)评价与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时所述转基因植物的根构造。

33.权利要求32的方法，所述方法还包括：

(d)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(e)评价与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

34.评价植物根构造的方法，所述方法包括：

(a)将抑制DNA构建体引入到可再生的植物细胞中，所述抑制DNA构建体包含至少一种调控元件，所述调控元件可操作地连接至：

(i)以下序列的全部或部分：(A)编码多肽的核酸序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ IDNO：15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43或51进行比较时具有至少50％的序列同一性，或(B)所述(a)(i)(A)的核酸序列的全长互补序列；或

(ii)源自所关注的靶基因的有义链或反义链的全部或部分的区域，当与所述区域所来源的有义链或反义链的全部或部分比较时，基于Clustal V比对方法，所述区域的核酸序列具有至少50％的序列同一性，并且其中所述所关注的靶基因编码NDK或NDK样多肽；

(b)在步骤(a)之后，从可再生的植物细胞再生出转基因植物，其中所述转基因植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；

(c)获得源自所述转基因植物的子代植物，其中所述子代植物在其基因组中包含所述抑制DNA构建体；以及

(d)评价与未包含所述抑制DNA构建体的对照植物比较时所述子代植物的根构造。

35.分离的多核苷酸，所述多核苷酸包含编码NDK或NDK样多肽的核酸序列或所述核酸序列的全长互补序列，所述多肽的氨基酸序列基于Clustal V比对方法在与SEQ ID NO：25比较时具有至少80％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：23比较时具有至少85％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：21比较时具有至少90％的序列同一性，或在与SEQ ID NO：33比较时具有至少95％的序列同一性。

36.权利要求35的多核苷酸，其中基于Clustal比对方法，所述多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：25的氨基酸序列具有至少85％的序列同一性，或者与SEQ ID NO：23的氨基酸序列具有至少90％的同一性，或者与SEQ ID NO：21的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

37.权利要求35的多核苷酸，其中基于Clustal比对方法，所述多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：25的氨基酸序列具有至少90％的序列同一性，或者与SEQ ID NO：23的氨基酸序列具有至少95％的同一性。

38.权利要求35的多核苷酸，其中基于Clustal比对方法，所述多肽的氨基酸序列与SEQ ID NO：25的氨基酸序列具有至少95％的序列同一性。

39.权利要求35的多核苷酸，其中所述多肽的氨基酸序列包含SEQ ID NO：21、23、25或33。

40.权利要求35的多核苷酸，其中所述核酸序列包含SEQ IDNO：20、22、24或32。

41.包含权利要求35的多核苷酸的载体。

42.包含权利要求35的多核苷酸的重组DNA构建体，所述多核苷酸与至少一种调控序列可操作地连接。

43.转化细胞的方法，所述方法包括用权利要求35的多核苷酸来转化细胞。

44.包含权利要求42的重组DNA构建体的细胞。

45.用于生产植物的方法，所述方法包括用权利要求35的多核苷酸来转化植物细胞并从所述转化过的植物细胞中再生出植物。在其他实施方案中，载体和重组构建体包含任一前述的多核苷酸并且细胞包含所述重组构建体。

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