CN101798596A - 一种辅助鉴定具有优良性状的小麦的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种辅助鉴定具有优良性状的小麦的方法。本发明提供的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对进行PCR扩增，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：1)能扩增出DNA片段的小麦的千粒重在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；2)能扩增出DNA片段的小麦的粒径在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；3)能扩增出DNA片段的小麦的穗粒重在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；4)能扩增出DNA片段的小麦的穗粒数在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；5)能扩增出DNA片段的小麦的旗叶面积在统计学大于不能扩增出DNA片段的小麦；6)能扩增出DNA片段的小麦的旗叶宽度在统计学大于不能扩增出DNA片段的小麦。本发明提供的方法可以应用于小麦的育种，实现早期筛选，节省时间和资源。
Description
技术领域
本发明涉及一种辅助鉴定具有优良性状的小麦的方法。
背景技术
长期以来，小麦产量一直是育种家改良和培育品种中最为重要的目标，但产量总体上受环境影响较大，尤其是水肥条件的影响较大，因此培育广适性品种则成为提高小麦产量的主要运用手段。近些年，随着分子生物学技术的快速发展，与产量性状相关的多个QTL位点也逐渐被发现和定位。Groos等(Groos C，Robert N，Bervas E，Charmet G.Genetic analysis of grain protein-content，grain yield andthousand-kernel weight in bread wheat.Theor.Appl.Genet.2003，106：1032-1040)在小麦的7D染色体上发现了控制小麦产量的QTL，而在染色体7A和7D上则发现了控制籽粒千粒重的QTL。Quarrie等(Quarrie SA，Steed A，Calestani C，et al.A high density genetic map of hexaploid wheat(Triticumaestivum L.)from the cross Chinese Spring x SQ1 and its use to compare QTLsfor grain yield across a range of environments.Theor.Appl.Genet.2005，110：865-880；Quarrie SA，Pekic Quarrie S，Radosevic R，et al.Dissecting a wheatQTL for yield present in a range of environments：from the QTL to candidategenes，J Exp.Botany 2006，57：2627-2637)则在一个DH群体中发现了多个控制产量性状的QTL位点，其中7AL和7BL上的QTL贡献最大，尤其是对小麦穗粒数的贡献率最高，他还在7AL上发现了控制小麦粒重的QTL。
Wilkinson等(Wilkinson M，Wan Y，Tosi P，et al.Identification and geneticmapping of variant forms of puroindoline b expressed in developing wheat grain.J Cereal Sci，2008，48：722-728)在小麦的cDNA中发现了三种与puroindoline b基因相似性达72％的基因，并将其定位在7A染色体的长臂上，进一步分析表明，该基因可能能够调控硬质小麦SKCS硬度5-7左右。Chen等(Chen F，Brian B，Morris CF.Puroindoline b-2 in wheat.Theoretical and applied genetics，2009，DOI10.1007/s00122-009-1195-y)对上述三个基因进行了命名，分别为Pinb-2v1、Pinb-2v2和Pinb-2v3，并发现了一种新的基因类型，命名为Pinb-2v4，利用非整倍体进行物理定位后发现，Pinb-2v1位于7DL染色体上，Pinb-2v2位于7BL染色体上，Pinb-2v3位于7B染色体上，Pinb-2v4则位于7AL染色体上，且Pinb-2v1和Pinb-2v4出现在调查的所有品种中，而Pinb-2v2和Pinb-2v3则分别出现在不同的品种中。
发明内容
本发明的目的是提供一种辅助鉴定具有优良性状的小麦的方法。
本发明提供的辅助鉴定具有不同性状小麦的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对进行PCR扩增，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：
1)能扩增出DNA片段的小麦的千粒重在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
2)能扩增出DNA片段的小麦的粒径在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
3)能扩增出DNA片段的小麦的穗粒重在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
4)能扩增出DNA片段的小麦的穗粒数在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
5)能扩增出DNA片段的小麦的旗叶面积在统计学大于不能扩增出DNA片段的小麦；
6)能扩增出DNA片段的小麦的旗叶宽度在统计学大于不能扩增出DNA片段的小麦。
1)至6)中，所述DNA片段具体可为398bp的DNA片段。
本发明还保护序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。
所述引物对在制备辅助鉴定具有不同性状小麦的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围；所述性状为千粒重、粒径、穗粒数、每穗粒重(穗粒重)、旗叶面积和旗叶宽度中的至少一种。
本发明还保护一种辅助鉴定具有不同性状小麦的试剂盒，包括所述引物对；所述性状为千粒重、粒径、穗粒数、每穗粒重、旗叶面积和旗叶宽度中的至少一种。
本发明提供的另一种辅助鉴定具有不同性状小麦的方法，是检测待测小麦的基因组DNA中是否具有序列表的序列2所示核苷酸，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：
1)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的千粒重在统计学上小于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
2)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的粒径在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
3)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的穗粒重在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
4)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的穗粒数在统计学大大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
5)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的旗叶面积在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
6)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的旗叶宽度在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦。
本发明提供的第三种辅助鉴定具有不同性状小麦的方法，是检测待测小麦的基因组DNA中是否具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：
1)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的千粒重在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
2)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的粒径在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
3)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的穗粒重在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
4)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的穗粒数在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
5)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的旗叶面积在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
6)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的旗叶宽度在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦。
8、权利要求1或2所述方法，权利要求3所述引物对，权利要求5所述试剂盒，权利要求6所述方法或权利要求7所述方法在小麦育种中的应用。
以待测小麦的基因组DNA为模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对进行PCR扩增得到的DNA片段即为序列表的序列2自5’端第42至439位所示DNA。
本发明还保护蛋白质，是如下(a)或(b)：
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与小麦生产性状相关的由序列1衍生的蛋白质。
所述蛋白质的编码基因也属于本发明的保护范围。
所述编码基因具体可为如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：
1)序列表中序列2所示的DNA分子；
2)序列表中序列2自5’端第34至434位核苷酸所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码小麦生产性状相关蛋白的DNA分子；
4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码小麦生产性状相关蛋白的DNA分子。
本发明公开了一个与小麦产量性状相关基因Pinb-2v3的功能及其在小麦产量性状改良中的应用，含有Pinb-2v3基因的小麦品种主要表现为与产量性状密切相关的性状总体表现优良，分别体现在千粒重高、粒径大、穗粒重高、穗粒数多、旗叶较宽和旗叶面积较大等特点。具有Pinb-2v3基因的普通小麦品种千粒重平均值可达44.9克、粒径平均值达2.59毫米、穗粒数平均值达50.3个、每穗粒重平均值达2.18克、旗叶面积平均值高达28.8平方厘米，旗叶宽度达1.85厘米。因此，Pinb-2v3基因功能的发现将对利用基因工程技术改良小麦农艺性状和培育高产小麦品种起到十分重要作用，同时也有助于产量性状的遗传和分子生物学的进一步研究。
本发明提供的方法可以应用于小麦的育种，实现早期筛选，节省时间和资源。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。实施例中所用引物均由上海生物工程公司合成。
小麦材料为来自黄淮麦区的165份有代表性的农家小麦品种和当地大规模种植的普通小麦品种和高代品系，具体如下(ZM编号为国家种质资源库编号)：
1、钱交麦：河南农业大学；参考文献：赵亮，田纪春.山东省不同年代小麦推广品种遗传多样性的AFLP分析.分子植物育种，2007，5：403-411。
2、晋麦50：河南农业大学；参考文献：刘新月，张久刚，卫云宗.优质抗旱小麦新品种晋麦78号的选育.山西农业科学，2007，4：35-37。
3、庆丰1号：ZM010038。
4、江东门：河南农业大学；参考文献：田梦雨，李丹丹，戴廷波，姜东，荆奇，曹卫星.水分胁迫下不同基因型小麦苗期的形态生理差异.应用生态学报，2010，21：41-47。
5、晋麦49：河南农业大学；参考文献：刘志峰，张晓鹏.山西南部高水肥地冬麦丰产技术.山西农业，2003，12：20-21。
6、合作2号：ZM009681。
7、晋麦54：ZM010378。
8、蚰包：ZM009411。
9、陇麦157：河南农业大学；参考文献：任根深.丰产多抗冬小麦新品系陇麦157选育报告.甘肃农业科技，2007，5：3-4。
10、冀麦26：河南农业大学；参考文献：傅满良，马炳义.冀麦26在和田的种植表现及其栽培要点.新疆农业科学，1993，1：8-8。
11、豫麦47：河南农业大学；参考文献：林作辑，雷振生，吴政卿，杨会民，章家长，刘嫒媛.豫麦47号选育与开发中的经验与问题.河南农业科学，2001，6：7-8。
12、鲁麦19：河南农业大学；参考文献：曹学昌.旱地小麦新品种鲁麦19号的选育及配套技术.山东农业科学，1993，4：23-23。
13、西农6028：河南农业大学；参考文献：张小燕，宋哲民，严威凯.陕西小麦品种生态亚型的分类.1994，3：23-26。
14、松花江1号：ZM009687。
15、红蚰子：河南农业大学；参考文献：黄惠主编。河南省及黄淮麦区小麦种质资源目录。黄河水利出版社，2003，1-117。
16、昌乐5号：ZM009419。
17、豫麦13：河南农业大学；参考文献：林作楫，王胜军.豫麦13小麦高产栽培技术.河南农业科学，1992，1：8-12。
18、藁麦9415：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
19、内乡182(豫麦17)：ZM022977。
20、山前麦：ZM016066。
21、洛旱2号：河南农业大学；参考文献：李永春，孟凡荣，王潇，陈雷，任江萍，牛洪斌，李磊，尹钧.水分胁迫条件下“洛旱2号”小麦根系的基因表达谱.作物学报，2008，34：2126-2133。
22、信阳234：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
23、晋麦47：河南农业大学；参考文献：董孟雄，李秀绒，柴永峰，孙来虎.旱地小麦新品种-晋麦47号.麦类作物学报2001，21：98-98。
24、西农881：河南农业大学；参考文献：晓雅.小麦新品种西农881.农村科技开发，2002，7：42-42。
25、百农64：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
26、阜阳936：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
27、晋麦61：河南农业大学；参考文献：潘幸来，谢三刚.晋麦61号中水小麦新品种简介.麦类作物学报.2002，4：106。
28、五一麦：河南农业大学；参考文献：刘登才，郑有良，兰秀锦.小麦中国春遗传背景的育种改良.中国农业科学2003，36：1383-1389。
29、新麦9178(新麦13)：河南农业大学；参考文献：董昀，赵宗武，孔长江，马华平，蒋志凯.新麦13号选育特点及选育体会.小麦研究，2003，24：1-3。
30、矮丰3号：河南农业大学；参考文献：汪夕彬，伊虎英，鱼红斌.辐射小麦丫1植株穗部的嵌合现象.遗传，1980，12：15-18。
31、豫麦58：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
32、优麦2号：河南农业大学；参考文献：田纪春，王延训.节水高产优质小麦山农优麦2号的选育.作物杂志，2001，4：45-45。
33、冀麦29：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
34、辉县红：河南农业大学；参考文献：李爱霞，亓增军，裴自友，庄丽芳，冯祎高，王秀娥.普通小麦辉县红-荆州黑麦异染色体系的选育及其梭条花叶病抗性鉴定.作物学报，2007，33：639-645。
35、豫麦41：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
36、泛麦5号：河南农业大学；参考文献：罗家传，朱高纪，张伟，吴秋艳，孙艳华，崔小东，韦胜利，高启云.小麦新品种泛麦5号播期播量研究.山东农业科学，2008，5：46-49。
37、郑麦004：河南农业大学；参考文献：曹廷杰，王西成，赵虹，陈渝.国审小麦新品种郑麦004综合表现及利用前景分析.中国农学通报，2008，24：209-212。
38、矮孟牛：ZM022837。
39、陕160：河南农业大学；参考文献：王怡，董剑.小麦新品种陕160的选育及体会.麦类作物.1999，19：56-58。
40、周麦19：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
41、陇麦862：河南农业大学；参考文献：王亚翠，赵晖，陈振平.丰产优质抗锈冬小麦新品系陇麦862选育报告.甘肃农业科技，2006，5：7-9。
42、冀麦38：河南农业大学；参考文献：谢令琴，王晓燕，葛淑俊，吴同彦.不同熟期及粒重小麦品种叶重和叶面积与其产量关系的研究。中国农学通报，2002，18：10-12。
43、温麦6号：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
44、阜阳936：河南农业大学；参考文献：邓贺明，胡亚敏，冯家春，杨永华，张桂芳。高产稳产优质中筋小麦新品种——阜麦936。麦类作物学报，2006，26：170-170。
45、鲁麦15：河南农业大学；参考文献：杨青，宋杰，史功伟，王宝山。NaCl胁迫下外源NO供体硝普钠(SNP)对小麦种子萌发的影响。2008，44：857-859。
46、邯4589：河南农业大学；参考文献：吴哲，侯立白，李运朝，崔四平，贾银锁。三个小麦品种的抗旱性比较研究。农业科技通讯，2009，6。
47、周麦17：河南农业大学；参考文献：殷贵鸿，韩玉林，于海飞，郑继周，黄峰，杜同连，杨霞。高产早熟多抗弱筋小麦周麦17号及栽培技术要点。农业科技通讯，2004，11：28-28。
48、周91177：河南农业大学；参考文献：杨松杰，张晓科，何中虎，夏先春，周阳。用STS标记检测矮秆基因Rht-B1b和Rht-D1b在中国小麦中的分布。中国农业科学，2006，39：1680-1688。
49、鲁麦23：河南农业大学；参考文献：孙永年，陈新民。鲁麦23主要特性及其高产栽培技术。作物品种资源，1999，3：56-56。
50、太空6号：河南农业大学；参考文献：雷振生，林作楫，吴政卿，杨会民，赖菁茹，章家长，刘媛媛。航天诱变小麦新品种太空6号的选育。河南农业科学，2004，6：3-5。
51、陕229：河南农业大学；参考文献：耿立新，李金侠，范学东，徐前进。优质强筋麦陕229实用栽培技术。安徽农业通报，2007，2：178。
52、洛旱3号：河南农业大学；参考文献：高海涛，杨洪强，吴少辉，张学品，沈东风，谢惠民。旱地小麦新品种洛旱3号优化栽培技术研究。河南农业科学，2006，6：34-35。
53、豫麦50：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
54、豫麦51：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
55、豫麦59：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
56、花培矮：河南农业大学；参考文献：郑培绩，王姜玲，王玉平，史民芳.小麦矮化育种.小麦研究，1999，20：13-16。
57、冀麦27：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
58、郑麦9023：河南农业大学；参考文献：孙瑞建，袁志春，包立英。优质强筋小麦郑麦9023花粒麦形成原因及防控.中国种业，2008，1：51-52。
59、开麦13：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
60、新麦11：河南农业大学；参考文献：刘现祯，马华平，张长顺，赵宗武，刘庆伟。新麦11定向选育与高产栽培技术。中国种业，2003.6：43。
61、豫农9901：河南农业大学；参考文献：程西永，王志强，吕德彬，詹克慧，许海霞，陈军营，姜鸿勋，张相武。小麦新品种豫农9901子粒灌浆特性分析。河南农业大学学报，2005，39：1-4。
62、豫麦56：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
63、豫麦57：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
64、豫麦60：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
65、石4185：河南农业大学；参考文献：蔡欣.高产抗旱节水型小麦新品种的选育实践及体会。河北农业科学，2004，8：105-106。
66、矮抗58：河南农业大学；参考文献：薛香，韩占江，郜庆炉，吴玉娥，张永潮，曹世刚。小麦品种百农矮抗58干物质积累及籽粒灌浆特点。河南农业科学，2006，8：43-44。
67、西农85：河南农业大学；参考文献：张小村，李斯深，赵新华，李瑞军。15个小麦重组自交系群体抗纹枯病性的遗传分析。麦类作物学报，2004，24：13-16。
68、濮麦9号：河南农业大学；参考文献：赵继文，梁中喜，郭枫林，郭春生，司晓军。超高产、早熟、广适小麦新品种濮麦9号。河南农业科学，2006，9：42-43。
69、豫展2000：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
70、周麦16：河南农业大学；参考文献：国家农作物品种审定委员会办公室编。全国农作物审定品种。中国农业科学技术出版社上册，2002，199-283。
71、陕农7859：ZM017231。
72、豫麦10号：ZM022975。
73、鹤麦026：河南农业大学；参考文献：唐怀君，殷贵鸿，夏先春，冯建军，曲延英，何中虎。1BL/1RS特异性分子标记的筛选及其对不同来源小麦品种1RS易位染色体的鉴定.作物学报，2009，35：2107-2115。
74、兰考矮早八：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
75、豫麦9号：ZM017971。
76、偃展4110：河南农业大学；参考文献：邵玉华.播期、密度、施肥对偃展4110产量形成及产量的影响.安徽农学通报，2008，14：74-75。
77、豫麦14优：ZM022976。
78、周麦18：河南农业大学；参考文献：郑继周，殷贵鸿，韩玉林，于海飞，黄峰，王丽娜，郑天存.国审周麦18号超高产栽培技术，河南农业科学，2007，7：21-22。
79、西农979：河南农业大学；参考文献：李学军，李立群，张瑞轩，伍跃成，刘顺，王辉。高产优质小麦新品种西农979叶面积、叶绿素含量及干物质积累的特点。麦类作物学报，2008，28：1054-1057。
80、豫麦52：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
81、豫麦3号：ZM017967。
82、冀麦30：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
83、豫麦1号：ZM017965。
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85、豫麦21：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
86、繁6：河南农业大学；参考文献：牛永春，吴立人。繁6-绵阳系小麦抗条锈性变异及对策。植物病理学报，1997，27：5-8。
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88、冀5385：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
89、新麦18：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
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91、内江31：ZM016715。
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110、豫农035：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
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114、豫农9901：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
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116、蚂蚱麦：ZM003734。
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118、豫麦8号：ZM016051。
119、旱选3号：ZM009367。
120、丰产3号：河南农业大学；参考文献：淦爱华，蔺瑞明，徐世昌，万安民，马占鸿。中国小麦条锈菌鉴别寄主丰产3号抗条锈性遗传分析。植物保护学报，2006，33：369-373。
121、丰抗13：ZM013111。
122、西风：MY014236。
123、冀麦41：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
124、豫麦55：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
125、赤小麦：河南农业大学；参考文献：许立奎，张宗宸。温麦系列抗赤小麦新品种的选育成就。1997，17：6-8。
126、碧玉麦：ZM017589。
127、晋麦33：ZM010374。
128、碧蚂4号：ZM009594。
129、远丰898：河南农业大学；参考文献：张宏，任志龙。小麦新品系远丰898几个性状之间的初步分析。陕西农业科学，2000，1：3-5。
130、千斤早：河南农业大学；参考文献：李军，赵惠燕，李志刚，韩诗畴，安新城。不同小麦品种对麦长管蚜的抗性。昆虫知识，2007，44：509-512。
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132、金沙江1号：河南农业大学；参考文献：王关林，卜秀玲。旱地小麦(金沙江一号)＊天兰冰草杂种幼胚愈伤组织诱导及植株再生。西北植物学报，1990，10：84-89。
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134、冀6203：河南农业大学；参考文献：路香彩，高增玉。冬小麦新品种简介。河北农业科技，2001，6：20。
135、早穗30：ZM013282。
136、小偃4号：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
137、淮麦20：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
138、鲁农55055：ZM015789。
139、皖麦38：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
140、新麦19：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
141、冀矮1号：河南农业大学；参考文献：张永丽，肖凯，李雁鸣。灌水次数对杂种小麦冀矮1/C6-38旗叶光合特性和产量的影响。作物学报，2006，32：410-414。
142、蒿麦9409：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
143、冀麦31：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
144、济麦20：河南农业大学；参考文献：王东，于振文。施氮量对强筋小麦品种济麦20氮硫积累与再分配及籽粒品质的影响。作物学报，2007，33：1439-1445。
145、豫农949：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
146、冀5265：河南农业大学；参考文献：李志波，王睿辉，张茶，梁虹，马峙英，赵玉欣，王静华。河北省小麦品种基于农艺性状的遗传多样性分析。植物遗传资源学报，2009，10：436-442。
147、莱州953：ZM022727。
148、郑花57：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
149、冀矮9号：河南农业大学；参考文献：张一，倪中福，姚颖垠，孙其信。小麦杂交种与亲本之间穗下节间基因差异表达分析。作物学报，2008，34：770-776。
150、西昌76-4：ZM016739。
151、石84-7111：ZM017674。
152、茶淀红：河南农业大学；参考文献：翁跃进。茶淀红麦耐盐基因的RFLP分子标记。河北农业科学，1999，3：1-5。
153、丹麦1号：河南农业大学；参考文献：淦爱华，蔺瑞明，徐世昌，万安民，马占鸿。中国小麦条锈菌鉴别寄主丰产3号抗条锈性遗传分析。植物保护学报，2006，33：369-373。
154、扬麦12：国审麦2001003。
155、兰考906：河南农业大学；参考文献：朱云集，郭汝礼，郭天财，王之杰，王永华，张庆友。行距配置与密度对兰考906群体质量及产量的影响。麦类作物学报，2001，2：62-66。
156、新麦208：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
157、大姆指矮：河南农业大学；参考文献：万平，刘大钧。小麦大拇指矮的穗发芽抗性研究。安徽农业大学学报，2001，28：15-17。
158、豫农9676：河南农业大学；参考文献：张清海，范濂，崔党群，牛云生。黄淮南片小麦主要审定推广小麦品种及其选育(2008修订版)。中国农业科学出版社，2008，Pp：1-394。
159、冀麦25：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
160、豫麦16：河南农业大学；参考文献：张清海，王志和，张桂兰.黄淮南片小麦申请推广品种及其选育.中国农业科技出版社，2000：1-401。
161、豫麦4号：ZM017968。
162、冀5579：河南农业大学；参考文献：张茶，梁虹，王睿辉，安浩军，王静华，赵金峰，赵玉新，常文锁。河北省主栽小麦品种醇溶蛋白遗传多样性分析。中回农学通报，2008，24：191-196。
163、郑州24：河南农业大学；参考文献：ZM009466。
164、复壮30：河南农业大学；参考文献：王立新.小麦分子与细胞遗传学研讨会论文摘要(2000年4月22-28日)——小麦品种复壮30中与抗白粉病基因连锁的一个RAPD标记。遗传，2001，23：2001，23：60。
165、光头麦：河南农业大学；参考文献：龙玲，刘红梅，冯明义，陆绍炎，莫纯碧，姜府文，岳朝能。不同小麦品种对条锈病的抗性评价。贵州农业科学，2009，37：92-95。
实施例1、不同品种小麦性状的测定
每个品种随机选用10株材料，结果为10株的平均值。
一、产量性状测定
种子收获前，调查如下指标：每株的旗叶长度和旗叶宽度；旗叶面积＝旗叶长度×最大叶宽×0.75。收获后，调查每穗粒数和每穗粒重。测定结果见表1。
二、籽粒千粒重和粒径测定
测定小麦样品千粒重和粒径。测定结果见表1。
实施例2、小麦Pinb-2v3基因与性状的相关性
一、用PCR技术鉴定puroindoline b-2基因类型
1、提取小麦籽粒基因组DNA
提取小麦籽粒基因组DNA，具体方法为：1)用锤子砸碎后放入1.5mL离心管中，加入1mL样品提取液(含288mM NaCl，200mM Tris-HCl，25mM EDTA，0.5％SDS)，摇30分钟，使其充分混匀；2)在4℃、12,000rpm下离心15分钟，移上清至另一2mL离心管中，加入等体积的酚/氯仿(1∶1；体积比)；3)12,000rpm离心15分钟，移上清至另一2mL离心管中，加入0.5倍上清体积的氯仿/异戊醇(24∶1；体积比)，充分摇匀；4)12,000rpm离心10分钟，移上清至另一新的2mL离心管中，加入1/10体积的3M NaAC水溶液(pH＝5.2)和0.6倍上清体积的异丙醇沉淀DNA，轻轻混匀；5)12,000rpm离心15分钟，弃上清，加入0.5mL 70％(体积百分含量)乙醇水溶液，静置5min；6)12,000离心5min，弃上清。真空干燥后加入100μL TE溶解沉淀，沉淀即为小麦籽粒基因组DNA。最后，用紫外分光光度计检测小麦籽粒基因组DNA的浓度，-20℃下保存备用。
2、PCR鉴定
1)Puroindoline基因型鉴定
由于Puroindoline b-2基因与puroindoline基因核苷酸序列相似性高达70％左右，因此为保证该实验不受puroindoline基因影响，本发明对puroindoline基因型进行了鉴定。小麦中发现的puroindoline基因型分为三种，Pina-D1a/Pinb-D1a，Pina-D1a/Pinb-D1b和Pina-D1a/Pinb-D1p。
以小麦籽粒基因组DNA为模板，鉴定Pinb-D1b突变型的特异引物为：
引物1(上游)：5’-ATGAAGACCTTATTCCTCCTA-3’；
引物2(下游)：5’-CTCATGCTCACAGCCGCT-3’。
以小麦籽粒基因组DNA为模板，将其余硬质类型小麦采用Pinb基因全长引物进行扩增，扩增产物测序，共有Pinb-D1p材料12份。Pinb基因全长引物如下：
引物5(上游)：5’-GAGCCTCAACCCATCTATTCATC-3’；
引物6(下游)：5’-CAAGGGTGATTTTATTCATAG-3’。
2)Puroindoline b-2基因型鉴定
鉴定Pinb-2v3所用引物如下：
引物3(上游)：5’-GAGCACAACCTTTGCGCAATG-3’；
引物4(下游)：5’-CATTAGTAGGGACGAACTTGCAGCTA-3’。
以小麦籽粒基因组DNA为模板，用上述引物分别对所有小麦品种进行puroindolineb-2基因型鉴定。
步骤1)和步骤2)中：PCR反应体系的组成均为：1.5mmol/L MgCl2，0.3mmol/L dNTP，上、下游引物各10pmol，模板DNA 200ng，0.5U Taq酶，加1×PCR缓冲液(含10mmol/LTris-HCl，pH9.0，50mmol/L KCl，1.0％Triton X-100)，定容至25μL。PCR反应程序为：先94℃预变性5min；然后94℃变性1min，58℃退火45sec，72℃延伸1min，共35个循环；最后，72℃延伸5min。PCR扩增结束后，取PCR扩增产物10μL，进行1.5％琼脂糖凝胶电泳(采用1×TAE缓冲液；溴化乙锭(EB)染色，160V，1.5小时)，电泳结束后用凝胶成像系统(MultiGenius Gel Documentation and Analysis System)扫描成像并用计算机进行分析。检测结果见表1。
表1不同品种小麦性状的测定结果和基因型检测结果
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 1 | 36.1 | 2 | 39 | 1.38 | 1.06 | 25 | 19.9 | 是 |
| 2 | 34.1 | 2.1 | 33 | 1.1 | 1.28 | 21 | 20.2 | 是 |
| 3 | 35.9 | 2.2 | 43 | 1.59 | 1.33 | 21 | 20.9 | 是 |
| 4 | 27.1 | 1.8 | 43 | 1.08 | 1.37 | 22 | 22.6 | 是 |
| 5 | 49.9 | 2.8 | 39 | 1.9 | 1.42 | 17 | 18.1 | 是 |
| 6 | 29.2 | 1.8 | 40 | 0.96 | 1.43 | 34 | 36.5 | 是 |
| 7 | 50.2 | 3.1 | 45 | 2.04 | 1.44 | 18 | 19.4 | 是 |
| 8 | 36.6 | 2.1 | 42 | 1.22 | 1.45 | 17 | 18.5 | 是 |
| 9 | 31.9 | 2 | 52 | 1.78 | 1.45 | 21 | 22.8 | 是 |
| 10 | 42.9 | 2.5 | 37 | 1.63 | 1.49 | 14 | 15.6 | 是 |
| 11 | 34.2 | 2.2 | 30 | 1.08 | 1.51 | 16 | 18.1 | 是 |
| 12 | 51.9 | 3.1 | 41 | 1.95 | 1.53 | 18 | 20.7 | 是 |
| 13 | 29.5 | 1.7 | 66 | 1.89 | 1.54 | 27 | 31.2 | 是 |
| 14 | 26.7 | 1.8 | 36 | 0.86 | 1.56 | 27 | 31.6 | 是 |
| 15 | 37.4 | 2 | 51 | 1.49 | 1.57 | 20 | 23.6 | 是 |
| 16 | 37.7 | 2.1 | 46 | 1.77 | 1.57 | 24 | 28.3 | 是 |
| 17 | 47.8 | 2.4 | 49 | 2.31 | 1.61 | 17 | 20.5 | 是 |
| 18 | 48.1 | 3.1 | 50 | 1.69 | 1.61 | 18 | 21.7 | 是 |
| 19 | 50.4 | 2.8 | 39 | 1.8 | 1.61 | 22 | 26.6 | 是 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 20 | 45.5 | 2.8 | 46 | 1.85 | 1.62 | 19 | 23.1 | 是 |
| 21 | 45.3 | 2.7 | 46 | 2.02 | 1.64 | 20 | 24.6 | 是 |
| 22 | 47 | 2.7 | 57 | 2.27 | 1.67 | 21 | 26.3 | 是 |
| 23 | 44.6 | 2.6 | 57 | 2.68 | 1.67 | 22 | 27.6 | 是 |
| 24 | 49.3 | 2.8 | 41 | 2.01 | 1.7 | 21 | 26.8 | 是 |
| 25 | 42 | 2.7 | 42 | 1.83 | 1.71 | 17 | 21.8 | 是 |
| 26 | 44.2 | 2.3 | 49 | 2.12 | 1.72 | 17 | 21.9 | 是 |
| 27 | 50.6 | 2.7 | 49 | 2.81 | 1.73 | 17 | 22.1 | 是 |
| 28 | 30.4 | 1.9 | 37 | 1.24 | 1.73 | 27 | 35.0 | 是 |
| 29 | 38.4 | 2.3 | 53 | 2.64 | 1.74 | 20 | 26.1 | 是 |
| 30 | 40.8 | 2.4 | 44 | 1.73 | 1.75 | 15 | 19.7 | 是 |
| 31 | 56.9 | 3 | 50 | 2.61 | 1.75 | 20 | 26.3 | 是 |
| 32 | 42 | 2.3 | 28 | 1.23 | 1.76 | 19 | 25.1 | 是 |
| 33 | 47.6 | 2.6 | 46 | 2.5 | 1.76 | 22 | 29.0 | 是 |
| 34 | 50.6 | 3 | 36 | 1.84 | 1.76 | 23 | 30.4 | 是 |
| 35 | 59.7 | 3.4 | 44 | 2.27 | 1.77 | 17 | 22.6 | 是 |
| 36 | 49.6 | 2.5 | 50 | 2.28 | 1.78 | 15 | 20.0 | 是 |
| 37 | 45.9 | 2.6 | 50 | 2.07 | 1.78 | 16 | 21.4 | 是 |
| 38 | 42.9 | 2.4 | 54 | 2.21 | 1.78 | 18 | 24.0 | 是 |
| 39 | 41.9 | 2.5 | 46 | 1.88 | 1.78 | 18 | 24.0 | 是 |
| 40 | 41.9 | 2.4 | 50 | 2.14 | 1.79 | 19 | 25.5 | 是 |
| 41 | 39 | 2.3 | 51 | 1.63 | 1.79 | 23 | 30.9 | 是 |
| 42 | 50.4 | 3 | 50 | 2.43 | 1.8 | 18 | 24.3 | 是 |
| 43 | 50.6 | 3 | 42 | 2.09 | 1.81 | 18 | 24.4 | 是 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 44 | 49.7 | 2.5 | 52 | 2.36 | 1.81 | 20 | 27.2 | 是 |
| 45 | 40.9 | 2.3 | 44 | 2.13 | 1.82 | 17 | 23.2 | 是 |
| 46 | 45.5 | 2.6 | 45 | 1.84 | 1.83 | 17 | 23.3 | 是 |
| 47 | 49.2 | 2.7 | 55 | 2.35 | 1.84 | 18 | 24.8 | 是 |
| 48 | 42 | 2.5 | 54 | 2.44 | 1.84 | 19 | 26.2 | 是 |
| 49 | 47.6 | 2.7 | 77 | 3.78 | 1.84 | 21 | 29.0 | 是 |
| 50 | 46.6 | 2.6 | 45 | 2.1 | 1.85 | 20 | 27.8 | 是 |
| 51 | 40.2 | 2.2 | 53 | 1.86 | 1.86 | 19 | 26.5 | 是 |
| 52 | 43.7 | 2.5 | 42 | 1.72 | 1.87 | 17 | 23.8 | 是 |
| 53 | 33.7 | 1.9 | 57 | 2.27 | 1.87 | 21 | 29.5 | 是 |
| 54 | 53.1 | 3.1 | 49 | 2.39 | 1.88 | 24 | 33.8 | 是 |
| 55 | 39.1 | 2.1 | 55 | 2.56 | 1.88 | 25 | 35.3 | 是 |
| 56 | 37.9 | 2.1 | 42 | 1.49 | 1.89 | 16 | 22.7 | 是 |
| 57 | 60.8 | 3.4 | 44 | 2.52 | 1.9 | 16 | 22.8 | 是 |
| 58 | 56.9 | 3.1 | 37 | 2.01 | 1.9 | 19 | 27.1 | 是 |
| 59 | 54.1 | 3 | 57 | 2.83 | 1.9 | 20 | 28.5 | 是 |
| 60 | 58.5 | 3.2 | 52 | 3.06 | 1.9 | 20 | 28.5 | 是 |
| 61 | 52.6 | 3.1 | 44 | 2.63 | 1.92 | 24 | 34.6 | 是 |
| 62 | 58.9 | 3.2 | 44 | 2.16 | 1.92 | 25 | 36.0 | 是 |
| 63 | 48.2 | 2.7 | 59 | 2.71 | 1.93 | 19 | 27.5 | 是 |
| 64 | 42.5 | 2.7 | 35 | 1.65 | 1.93 | 21 | 30.4 | 是 |
| 65 | 45.7 | 2.8 | 52 | 2.33 | 1.95 | 18 | 26.3 | 是 |
| 66 | 46.7 | 2.8 | 39 | 2.12 | 1.95 | 21 | 30.7 | 是 |
| 67 | 54.7 | 3.2 | 51 | 2.74 | 1.95 | 24 | 35.1 | 是 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 68 | 46.9 | 2.8 | 68 | 3.14 | 1.96 | 19 | 27.9 | 是 |
| 69 | 49.9 | 2.5 | 52 | 2.85 | 1.97 | 22 | 32.5 | 是 |
| 70 | 48.7 | 2.8 | 64 | 2.4 | 1.98 | 20 | 29.7 | 是 |
| 71 | 48.9 | 2.4 | 39 | 1.85 | 1.98 | 21 | 31.2 | 是 |
| 72 | 53.1 | 3 | 49 | 2.76 | 1.98 | 21 | 31.2 | 是 |
| 73 | 51 | 2.9 | 54 | 3.37 | 1.98 | 22 | 32.7 | 是 |
| 74 | 24.1 | 1.7 | 63 | 1.81 | 1.98 | 22 | 32.7 | 是 |
| 75 | 38.5 | 2 | 64 | 2.66 | 1.99 | 26 | 38.8 | 是 |
| 76 | 57.4 | 3.1 | 45 | 2.59 | 2 | 19 | 28.5 | 是 |
| 77 | 31.7 | 2.1 | 63 | 2.39 | 2 | 19 | 28.5 | 是 |
| 78 | 49.7 | 2.9 | 69 | 2.94 | 2 | 20 | 30.0 | 是 |
| 79 | 51.7 | 2.9 | 56 | 2.54 | 2 | 21 | 31.5 | 是 |
| 80 | 45.2 | 2.7 | 53 | 2.56 | 2.01 | 20 | 30.2 | 是 |
| 81 | 36.9 | 2 | 58 | 2.07 | 2.01 | 24 | 36.2 | 是 |
| 82 | 49.2 | 2.5 | 37 | 2.02 | 2.04 | 23 | 35.2 | 是 |
| 83 | 43.7 | 2.7 | 53 | 2.34 | 2.04 | 28 | 42.8 | 是 |
| 84 | 54.5 | 3.1 | 44 | 2.39 | 2.05 | 17 | 26.1 | 是 |
| 85 | 46.2 | 2.5 | 59 | 2.75 | 2.05 | 21 | 32.3 | 是 |
| 86 | 33.3 | 1.9 | 48 | 1.89 | 2.06 | 21 | 32.4 | 是 |
| 87 | 51 | 2.9 | 56 | 3.27 | 2.09 | 23 | 36.1 | 是 |
| 88 | 49.1 | 2.7 | 46 | 2.39 | 2.1 | 20 | 31.5 | 是 |
| 89 | 39.7 | 2.5 | 44 | 1.87 | 2.1 | 21 | 33.1 | 是 |
| 90 | 41.3 | 2.4 | 58 | 2.48 | 2.1 | 21 | 33.1 | 是 |
| 91 | 37.4 | 2.3 | 59 | 1.56 | 2.13 | 23 | 36.7 | 是 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 92 | 53.5 | 2.9 | 61 | 3.17 | 2.17 | 26 | 42.3 | 是 |
| 93 | 28.7 | 1.9 | 42 | 1.14 | 2.18 | 21 | 34.3 | 是 |
| 94 | 49.8 | 3 | 54 | 2.81 | 2.2 | 20 | 33.0 | 是 |
| 95 | 23.8 | 1.5 | 83 | 2.34 | 2.23 | 27 | 45.2 | 是 |
| 96 | 51.2 | 2.7 | 61 | 2.64 | 2.24 | 21 | 35.3 | 是 |
| 97 | 47.4 | 2.7 | 58 | 3.06 | 2.26 | 24 | 40.7 | 是 |
| 98 | 31.6 | 2.1 | 76 | 2.31 | 2.36 | 24 | 42.5 | 是 |
| 99 | 37.2 | 2 | 100 | 2.81 | 2.79 | 27 | 56.5 | 是 |
| 100 | 49.4 | 2.8 | 50 | 2.07 | 1.78 | 16 | 21.4 | 是 |
| 101 | 48.3 | 2.9 | 56 | 3.37 | 2.09 | 23 | 36.1 | 是 |
| 102 | 54.9 | 3.2 | 53 | 3.09 | 2.1 | 25 | 39.4 | 是 |
| 103 | 49 | 3 | 43 | 1.08 | 1.37 | 22 | 22.6 | 是 |
| 104 | 50.5 | 3.2 | 56 | 3.27 | 2.09 | 23 | 36.1 | 是 |
| 105 | 50.3 | 3 | 49 | 2.31 | 1.61 | 17 | 20.5 | 是 |
| 106 | 44.6 | 2.6 | 51 | 2.61 | 1.75 | 20 | 26.3 | 是 |
| 107 | 53.2 | 2.9 | 45 | 2.04 | 1.44 | 18 | 19.4 | 是 |
| 108 | 41.1 | 2.4 | 47 | 1.88 | 1.62 | 19 | 23.1 | 是 |
| 109 | 48 | 2.8 | 45 | 2.14 | 1.44 | 18 | 19.4 | 是 |
| 110 | 56.4 | 2.9 | 48 | 1.57 | 1.61 | 22 | 26.6 | 是 |
| 111 | 37.6 | 2.2 | 58.6 | 1.43 | 1.26 | 20 | 18.9 | 是 |
| 112 | 56.5 | 3.1 | 59 | 2.65 | 2.19 | 20 | 32.9 | 是 |
| 113 | 45.6 | 2.5 | 42 | 1.95 | 1.53 | 18 | 20.7 | 是 |
| 114 | 61.4 | 3.6 | 52 | 1.78 | 1.45 | 21 | 22.8 | 是 |
| 115 | 40.6 | 2.5 | 28 | 1.03 | 1.25 | 16 | 15.0 | 否 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 116 | 28 | 1.7 | 52 | 1.12 | 1.32 | 22 | 21.8 | 否 |
| 117 | 43.5 | 2.6 | 36 | 1.57 | 1.36 | 17 | 17.3 | 否 |
| 118 | 45.5 | 2.7 | 41 | 1.66 | 1.37 | 15 | 15.4 | 否 |
| 119 | 37.6 | 2.3 | 49 | 2.03 | 1.39 | 20 | 20.9 | 否 |
| 120 | 38.4 | 2.2 | 35 | 1.2 | 1.4 | 19 | 20.0 | 否 |
| 121 | 41.6 | 2.7 | 37 | 1.47 | 1.42 | 15 | 16.0 | 否 |
| 122 | 33.4 | 1.9 | 43 | 1.69 | 1.49 | 21 | 23.5 | 否 |
| 123 | 44.6 | 2.7 | 49 | 1.5 | 1.53 | 23 | 26.4 | 否 |
| 124 | 39.1 | 2.5 | 35 | 1.26 | 1.55 | 19 | 22.1 | 否 |
| 125 | 34.1 | 1.9 | 52 | 1.64 | 1.58 | 20 | 23.7 | 否 |
| 126 | 32.4 | 1.9 | 28 | 1.22 | 1.59 | 21 | 25.0 | 否 |
| 127 | 39.8 | 2 | 51 | 2.16 | 1.59 | 21 | 25.0 | 否 |
| 128 | 31.4 | 2 | 49 | 1.53 | 1.61 | 21 | 25.4 | 否 |
| 129 | 35.7 | 2.1 | 39 | 1.16 | 1.66 | 19 | 23.7 | 否 |
| 130 | 35.2 | 2.2 | 31 | 1.18 | 1.71 | 22 | 28.2 | 否 |
| 131 | 44.8 | 2.5 | 39 | 1.8 | 1.72 | 18 | 23.2 | 否 |
| 132 | 35.6 | 2.1 | 42 | 1.41 | 1.73 | 23 | 29.8 | 否 |
| 133 | 39.2 | 2.4 | 50 | 1.92 | 1.76 | 22 | 29.0 | 否 |
| 134 | 43.2 | 2.4 | 46 | 1.76 | 1.77 | 19 | 25.2 | 否 |
| 135 | 43.8 | 2.4 | 41 | 1.83 | 1.78 | 15 | 20.0 | 否 |
| 136 | 36.6 | 2.1 | 50 | 1.5 | 1.78 | 19 | 25.4 | 否 |
| 137 | 47.1 | 2.8 | 60 | 2.38 | 1.8 | 18 | 24.3 | 否 |
| 138 | 38.5 | 2.3 | 38 | 1.88 | 1.84 | 23 | 31.7 | 否 |
| 139 | 42.8 | 2.7 | 53 | 2.15 | 1.87 | 15 | 21.0 | 否 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 140 | 39.7 | 2.3 | 51 | 1.85 | 1.89 | 20 | 28.4 | 否 |
| 141 | 41 | 2.5 | 52 | 2.48 | 1.92 | 20 | 28.8 | 否 |
| 142 | 37.4 | 2.3 | 63 | 2.58 | 1.93 | 18 | 26.1 | 否 |
| 143 | 43.3 | 2.5 | 59 | 2.8 | 1.93 | 22 | 31.8 | 否 |
| 144 | 53 | 3.1 | 48 | 2.28 | 1.94 | 19 | 27.6 | 否 |
| 145 | 40.5 | 2.3 | 45 | 2.43 | 1.98 | 24 | 35.6 | 否 |
| 146 | 52.9 | 2.8 | 41 | 2.34 | 2.07 | 17 | 26.4 | 否 |
| 147 | 53.2 | 3 | 54 | 2.79 | 2.07 | 21 | 32.6 | 否 |
| 148 | 46.2 | 2.7 | 50 | 2.56 | 2.08 | 22 | 34.3 | 否 |
| 149 | 49.3 | 2.9 | 42 | 2.06 | 2.09 | 19 | 29.8 | 否 |
| 150 | 39 | 2.1 | 59 | 2.63 | 2.14 | 20 | 32.1 | 否 |
| 151 | 42.5 | 2.6 | 40.9 | 1.66 | 1.69 | 18 | 22.8 | 是 |
| 152 | 24.5 | 1.5 | 42.44 | 1.04 | 1.18 | 21 | 18.6 | 是 |
| 153 | 21.3 | 1.4 | 31.75 | 0.94 | 1.76 | 30 | 39.6 | 是 |
| 154 | 49.4 | 2.6 | 47.9 | 2.16 | 1.92 | 20 | 28.8 | 是 |
| 155 | 25.9 | 1.6 | 41.9 | 1.14 | 2.18 | 21 | 34.3 | 是 |
| 156 | 27 | 1.7 | 39.2 | 1.02 | 2.22 | 19 | 31.6 | 是 |
| 157 | 26.7 | 1.8 | - | - | 2.03 | 16 | 24.4 | 否 |
| 158 | 50.9 | 3.1 | 45 | 2.04 | 1.64 | 18 | 22.1 | 是 |
| 159 | 45.5 | 2.5 | 30 | 1.46 | 1.73 | 19 | 24.7 | 是 |
| 160 | 40.2 | 2.3 | 57.1 | 1.97 | 2.15 | 24 | 38.7 | 是 |
| 161 | 37 | 2.2 | 62.9 | 2.22 | 2.05 | 22 | 33.8 | 是 |
| 162 | 57 | 3 | 27.9 | 1.3 | 1.69 | 18 | 22.8 | 是 |
| 163 | 30.9 | 1.9 | 56 | 2.7 | 1.92 | 22 | 31.7 | 否 |
| 编号 | 千粒重(mg) | 粒径(mm) | 穗粒数(个) | 每穗粒重(g) | 旗叶宽(cm) | 旗叶长(cm) | 旗叶面积(cm2) | 是否具有PCR产物 |
| 164 | 25.4 | 1.8 | 58.7 | 1.33 | 1.26 | 19 | 18.0 | 否 |
| 165 | 22.4 | 1.9 | 28 | 1.22 | 1.59 | 21 | 25.0 | 否 |
有125份材料的PCR扩增产物电泳显示具有条带，将所有得到的PCR产物进行测序，发现PCR产物的核苷酸序列均如序列表的序列2自5’端第42至439位核苷酸所示。将PCR产物的核苷酸序列如序列表的序列2自5’端第42至439位核苷酸所示的小麦的基因型命名为Pinb-2v3基因型。
总体上，拥有Pinb-2v3基因的小麦品种千粒重、粒径、穗粒数、旗叶面积和旗叶宽度均显著高于不含Pinb-2v3的品种。为消除puroindoline基因对小麦产量性状的可能影响，进一步增强数据可靠性，分别对属于同一puroindoline基因型的不同puroindoline b-2基因型进行比较，拥有Pinb-2v3的小麦品种千粒重、粒径、穗粒数、旗叶面积和旗叶宽度均显著高于不含Pinb-2v3的品种(见表2)。
表2小麦Pinb-2v3基因型与其它基因型产量性状比较表
注：不同字母差异表明差异达5％显著水平。
序列表
<110>河南农业大学
<120>一种辅助鉴定具有优良性状的小麦的方法
<130>CCGNARY102163
<160>4
<210>1
<211>150
<212>PRT
<213>小麦属小麦(Triticum aestivum L.)
<400>1
Met Lys Thr Leu Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Leu Val Val Ser Thr
1 5 10 15
Thr Phe Ala Gln Cys Lys Glu Val Gly Gly Ser Tyr Glu Asn Gly Gly
20 25 30
Gly Gly Phe Gly Ser Gln Asn Cys Pro Pro Glu Lys Thr Lys Leu Asp
35 40 45
Ser Cys Lys Asp Tyr Val Met Glu Arg Cys Leu Ala Leu Lys Gly Phe
50 55 60
Pro Ile Ser Thr Leu Leu Lys Trp Trp Lys Gly Ala Cys Glu Gln Glu
65 70 75 80
Val Leu Asp Gln Cys Cys Leu Gln Leu Arg Pro Val Ala Lys Lys Cys
85 90 95
Arg Cys Glu Ala Ile Trp Arg Val Val Gln Gly Asn Leu Gly Gly Ile
100 105 110
Phe Gly Phe Gln Gln Gly Lys Ile Thr Lys Gln Ile Gln Arg Ala Met
115 120 125
Met Leu Pro Ser Lys Cys Lys Met Asp Ser Ser Cys Lys Phe Val Pro
130 135 140
Thr Asn Gly Tyr Tyr Tyr
145 150
<210>2
<211>453
<212>DNA
<213>小麦属小麦(Triticum aestivum L.)
<400>2
atgaagacct tattcctcct agctctcctt tctcttgtag tgagcacaac ctttgcgcaa 60
tgcaaagagg ttggtggcag ctatgagaat ggtggtggag ggtttggttc tcaaaactgc 120
ccaccggaga agacgaagct ggactcttgc aaggattacg tgatggagcg atgcttggcg 180
ttgaagggtt ttccgatctc cacgcttttg aaatggtgga agggtgcctg tgagcaagag 240
gtcctagacc agtgttgcct gcaactacgc ccggtagcaa agaagtgccg atgtgaggcc 300
atttggaggg ttgtccaagg caacctgggt ggcatctttg gctttcagca aggtaagata 360
accaaacaaa ttcagagggc catgatgttg ccctccaaat gcaaaatgga ttctagctgc 420
aagttcgtcc ctactaatgg ctattactac tga 453
<210>3
<211>21
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>3
gagcacaacc tttgcgcaat g 21
<210>4
<211>26
<212>DNA
<213>人工序列
<220>
<223>
<400>4
cattagtagg gacgaacttg cagcta 26
Claims (10)
1.一种辅助鉴定具有不同性状小麦的方法，包括如下步骤：以待测小麦的基因组DNA为模板，用序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对进行PCR扩增，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：
1)能扩增出DNA片段的小麦的千粒重在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
2)能扩增出DNA片段的小麦的粒径在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
3)能扩增出DNA片段的小麦的穗粒重在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
4)能扩增出DNA片段的小麦的穗粒数在统计学上大于不能扩增出DNA片段的小麦；
5)能扩增出DNA片段的小麦的旗叶面积在统计学大于不能扩增出DNA片段的小麦；
6)能扩增出DNA片段的小麦的旗叶宽度在统计学大于不能扩增出DNA片段的小麦。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：1)至6)中，所述DNA片段为398bp的DNA片段。
3.序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA组成的引物对。
4.权利要求3所述引物对在制备辅助鉴定具有不同性状小麦的试剂盒中的应用；所述性状为千粒重、粒径、穗粒数、每穗粒重、旗叶面积和旗叶宽度中的至少一种。
5.辅助鉴定具有不同性状小麦的试剂盒，包括权利要求3所述引物对；所述性状为千粒重、粒径、穗粒数、每穗粒重、旗叶面积和旗叶宽度中的至少一种。
6.一种辅助鉴定具有不同性状小麦的方法，是检测待测小麦的基因组DNA中是否具有序列表的序列2所示核苷酸，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：
1)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的千粒重在统计学上小于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
2)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的粒径在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
3)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的穗粒重在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
4)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的穗粒数在统计学大大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
5)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的旗叶面积在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦；
6)基因组DNA中具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦的旗叶宽度在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2所示核苷酸的小麦。
7.一种辅助鉴定具有不同性状小麦的方法，是检测待测小麦的基因组DNA中是否具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸，然后进行如下1)至6)中任一所述的判断：
1)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的千粒重在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
2)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的粒径在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
3)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的穗粒重在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
4)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的穗粒数在统计学上大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
5)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的旗叶面积在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦；
6)基因组DNA中具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦的旗叶宽度在统计学大于基因组DNA中不具有序列表的序列2自5’端第42至439位所示核苷酸的小麦。
8.权利要求1或2所述方法，权利要求3所述引物对，权利要求5所述试剂盒，权利要求6所述方法或权利要求7所述方法在小麦育种中的应用。
9.一种蛋白质，是如下(a)或(b)：
(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；
(b)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与小麦生产性状相关的由序列1衍生的蛋白质。
10.编码权利要求1所述蛋白的基因，优选如下1)或2)或3)或4)的DNA分子：
1)序列表中序列2所示的DNA分子；
2)序列表中序列2自5’端第34至434位核苷酸所示的DNA分子；
3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA序列杂交且编码小麦生产性状相关蛋白的DNA分子；
4)与1)或2)或3)限定的DNA序列具有90％以上同源性且编码小麦生产性状相关蛋白的DNA分子。
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