CN101787372A - 一种油葵的基因转化方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种油葵的基因转化方法,步骤是:(1)取生长健壮的油葵试管苗组织作为外植体;(2)取农杆菌C58C1的一个单菌落,接种到LB液体培养基中过夜振荡培养,待其OD值为0.2-0.6时,取出并浸染油葵试管苗组织外植体;(3)将上述浸染过的油葵试管苗外植体放在含有2-5mg/L除草剂的分化培养基上,分化培养,每0-14天继代一次,生成转化苗;(4)将上述除草剂筛选的转化苗转入生根培养基,待转化苗苗长到2-5cm高时即可移栽到花盆中。本发明建立一套油葵的基因转化方法,分别对筛选标记(除草剂)浓度、不同转化外植体的选择、采用不同的继代时间进行了明确,并且获得了最高转化效率,为油葵的各种基因转化奠定基础。
Description
技术领域
本发明属于农业和植物育种领域,尤其是一种油葵的基因转化方法。
背景技术
油用向日葵(简称油葵)是近30年来总产量增长最快的世界三大油料作物之一,年增长率7.1%,世界上油葵的主产国是阿根廷、法国、其次是中国。我国的油葵主要集中在东北三省、内蒙古、新疆和正在迅速发展的陕西、山西和河北等省、自治区。油葵的籽实含油率一股在46%左右,高的可达50%以上,出油率在42%以上。油葵油不含芥酸、硫代葡萄糖甙等对人体有害的物质,但含有丰富的对人体非常有益的不饱和脂肪酸,其中亚油酸含量65%左右,油酸25%左在,亚油酸能调节新陈代谢、维持血压平衡、能溶解脱离沉积在肠壁上的多余胆固醇,因而可降低血压、预防动脉硬化。由于含有和亚油酸比例相当的维生素E,可阻止亚油酸的迅速氧化。另外还含有大量的维生素A、类胡罗卜素等人体必需的营养物质,在促进毛细血管增生、改善血液循环、延缓细胞衰老、防止夜盲症等方面具有重要作用。油葵油油质纯正、无异味、芳香可口、易被吸收。作为食用油、油葵在全国仅占8%,而香港占70%。随着我国国民经济的发展和人民生活水平的提高,油葵油的消费将呈上升趋势。
油葵作为重要的油料植物,近些年在我国已大面积应用,有关的育种研究也有报道,但关于利用基因工程技术进行育种的研究还没有。由于油葵多为野生,种质资源不丰富,品种性状单一,所以利用常规育种技术很难得到理想的育种目标。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足之处,提供一种育种速度快、方法简单的油葵的基因转化方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的:
一种油葵的基因转化方法,其转化方法的步骤是:
(1)取油葵试管苗组织作为外植体;
(2)取农杆菌C58C1的一个单菌落,接种到LB液体培养基中过夜振荡培养,待其OD值为0.2-0.6时,取出并浸染油葵试管苗组织外植体;
(3)将上述浸染过的油葵试管苗外植体放在含有2-5mg/L除草剂的分化培养基上进行再生芽的诱导,该分化培养基为MS+KT0.25mg/L+IAA0.5mg/L,外植体长度为2-3cm,接种50-150块,培养条件为20-30℃、20-26h光照、光强1500-2500lx,从接种后每0-14天继代一次,生成转化苗;
(4)将上述除草剂筛选的转化苗转入生根培养基,其生根培养基的构成为1/2MS+IAA0.5mg/L,待转化苗苗长到2-5cm高时即可移栽到花盆中。
而且,所述接种后最佳时间为每7天继代一次。
而且,所述分化培养基上的除草剂浓度最佳为3mg/L。
而且,所述油葵试管苗组织外植体最佳为茎段部分。
而且,所述除草剂包括草丁膦。
本发明的优点和积极效果是:
本发明建立一套油葵的基因转化方法,分别对筛选标记(除草剂)浓度、不同转化外植体的选择、采用不同的继代时间进行了确定,本方法表明在培养基中加入3mg/L的除草剂浓度下,以油葵的茎段为外植体,在每周继代一次的条件下可获得最高的转化效率,为油葵的各种基因转化奠定基础。
具体实施方式
下面结合实施例,对本发明进一步说明,下述实施例是说明性的,不是限定性的,不能以下述实施例来限定本发明的保护范围。
油葵(试管苗)及转化所用带抗盐转录因子HS的质粒(HS/pCB302)和农杆菌C58C1均由天津农学院园艺系园林植物实验室提供。以下实施例中用药品为MS培养基;6-BA试剂;NAA试剂;蔗糖;琼脂粉;肌醇;蒸馏水;NaOH试剂。
一种油葵的基因转化方法,其转化方法是:
(1)取生长健壮的油葵试管苗,将茎段作为外植体;
(2)取农杆菌C58C1的一个单菌落,接种到LB液体培养基中过夜振荡培养,待其OD值为0.4时,取出并浸染油葵试管苗外植体;
(3)将上述浸染过的油葵试管苗外植体放在含有3mg/L除草剂的分化培养基上,分化培养基为MS+KT0.25mg/L+IAA0.5mg/L,进行再生芽的诱导,茎段长度为2-3cm,接种100块,培养条件为28℃,24h光照,光强2000lx,从接种后每7天继代一次;除草剂浓度为3mg/L时应该为理想的筛选压力。当继代时间为7天时,接种外植体的再生率最高,即获得的基因转化率也最高;继代时间为7天时获得的转化效果最好。
(4)将上述除草剂筛选的转化苗转入生根培养基上,该生根培养基的构成为1/2MS+IAA0.5mg/L,待转化苗苗长到3cm高时即可移栽到花盆中。
所述除草剂为:草丁膦,草丁膦是标记基因为bar基因的筛选药剂的一种。
Claims (5)
1.一种油葵的基因转化方法,其特征在于:其转化方法的步骤是:
(1)取油葵试管苗组织作为外植体;
(2)取农杆菌C58C1的一个单菌落,接种到LB液体培养基中过夜振荡培养,待其OD值为0.2-0.6时,取出并浸染油葵试管苗组织外植体;
(3)将上述浸染过的油葵试管苗外植体放在含有2-5mg/L除草剂的分化培养基上进行再生芽的诱导,该分化培养基为MS+KT0.25mg/L+IAA0.5mg/L,外植体长度为2-3cm,接种50-150块,培养条件为20-30℃、20-26h光照、光强1500-2500lx,从接种后每0-14天继代一次,生成转化苗;
(4)将上述除草剂筛选的转化苗转入生根培养基,其生根培养基的构成为1/2MS+IAA0.5mg/L,待转化苗苗长到2-5cm高时即可移栽到花盆中。
2.根据权利要求1所述的一种油葵的基因转化方法,其特征在于:所述接种后最佳时间为每7天继代一次。
3.根据权利要求1所述的一种油葵的基因转化方法,其特征在于:所述分化培养基上的除草剂浓度最佳为3mg/L。
4.根据权利要求1所述的一种油葵的基因转化方法,其特征在于:所述油葵试管苗组织外植体最佳为茎段部分。
5.根据权利要求1所述的一种油葵的基因转化方法,其特征在于:所述除草剂为草丁膦。
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2010
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