CN101786992A - 2-羟甲基-3,5,6-三甲基吡嗪衍生物、其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及抗血栓相关的药物领域，提供了具有式(I)结构的2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物或其药学上可接受的盐，R的定义见说明书。本发明还提供了这些衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法、药物组合物及作为有效成分在制备治疗脑血栓、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死、冠心病、与血栓有关的心律失常药物方面的用途。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，更确切地说，是涉及一类经化学合成得到的2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物或其药学上可接受的盐，这些衍生物或其药学上可接受的盐的制备方法、药物组合物及作为有效成分在制备治疗脑血栓、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死、冠心病、与血栓有关的心律失常等药物方面的用途。
背景技术
随着人口老龄化问题日益严重，心脑血管疾病已成为严重影响人们健康和生命的头号大敌。全球每年脑血栓、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死等与血栓形成有关的疾病夺走上千万人的生命。
天然产物经过自然选择而具有特定的生物学功能。1981～2002年全世界发现的877种药用小分子新化学实体中，来源于天然产物的占61％。天然产物是结构新颖和作用独特的抗血栓化合物的重要来源，而植物源抗血栓药物是其中最主要的一类。
四甲基吡嗪(tetramethylpyrazine)，又名川芎嗪(Ligustrazine)，是我国学者从伞形科藁本属植物川芎(Ligusticumwallichii)中分离提纯出的生物碱单体，是川芎的有效成分之一。亦可从枯草杆菌的代谢产物、黑麦草和波斯树脂中分离得到。
现代药理学研究证明：它具有扩张血管、增加冠脉血流及脑血流、抑制血小板聚集和降低血小板活性、降低血压、改善心肌耐缺氧能力等。临床用于冠心病、心绞痛、脉管炎和急性闭塞性血管疾病，如脑供血不足、脑血栓、脑动脉梗塞、脑动脉硬化等的治疗，疗效肯定。近年来临床应用有所拓展，对心肌梗塞、再灌注心律失常、偏头痛、高血脂、肺心病、心力衰竭、肾功能衰竭等有一定疗效，用药剂量自40mg至2000mg，很少有不良反应发生，说明川芎嗪安全范围极大。但在应用中发现川芎嗪具有代谢快、半衰期短、生物利用度低等缺点，且疗效并不令人满意，长期使用，有引起血清球蛋白减少，血清肌酣、血糖增加等慢性毒性作用的可能。
2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪为川芎嗪的体内代谢产物，该代谢产物亦具有抗凝作用及其它血管活性，为一优良的先导化合物，通过结构修饰合成它的衍生物，期望寻找到更好的抗血栓药物。
发明内容
本发明的一个目的在于，公开了2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物或其药学上可接受的盐。
本发明的另一个目的在于，公开了2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物或其药学上可接受盐的合成方法。
本发明的再一个目的在于，公开了以2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物或其药学上可接受的盐为活性成分的药物组合物。
本发明还有一个目的在于，公开了2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物或其药学上可接受的盐作为抗血栓药物方面的应用，特别是用于制备治疗脑血栓、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死等药物方面的用途。
本发明涉及通式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐：
其中，R为：
(1)NO2；
(2)
(3)
(4)
其中m为2、3，R1为
(5)
具有代表性的化合物为：
(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇硝酸酯(HK-001)
4-((硝酰氧基)甲基)苯甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-002)
3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-003)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(3-硝酰氧甲基)苯酚酯(HK-004)
丁二酸双(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-005)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(8-硝酰氧基-2，6-二氧杂双环[3.3.0]辛烷-4-醇酯(HK-006)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-基)甲醇酯(HK-007)
2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代乙醇硝酸酯(HK-008)
3-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-3-氧代丙醇硝酸酯(HK-009)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇硝酸酯(HK-010)
吡啶-3-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-011)
吡啶-4-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-012)
3-(4-羟基-3-甲氧基-苯基)丙烯酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-013)
2-乙酰氧基苯甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-014)
通式(I)结构的化合物含有吡嗪母核，药学上可接受的盐，是指与有机酸、无机酸反应生成的盐。无机酸有盐酸、磷酸、硝酸、硫酸等，有机酸有枸橼酸、甲磺酸、富马酸、丙二酸等。
本发明式I化合物的制备方法。以2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪为起始原料，经一步或多步反应得到本发明式I化合物。
2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪是川芎嗪的体内代谢产物之一，进一步研究发现，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪能明显延长小鼠心电消失时间和血液凝固时间，明显降低大鼠主动脉血压，但对大鼠心率无明显影响，这说明该化合物有改善心肌耐缺氧能力及降压、抗凝等作用。与川芎嗪相比，两者有相似的药理活性，在降低血液黏度、抑制血小板聚集等方面无显著性差异，但2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪的毒性更低，水溶性更高。
2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪的合成已有文献报道(陈学敏等.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪的合成及其对血液流变性的影响.中国药物化学杂志，1996，6(4)：254-256.)。以川芎嗪为起始反应物，用过氧化氢氧化川芎嗪生成单氧化物，后者在醋酐中回流，发生重排反应，得到2-乙酰氧甲基-3，5，6-三甲基吡嗪，继而在碱性条件下水解合成了2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪。
(1)当R为NO2，制备方法一：
2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在乙酸酐、乙酸存在下与硝酸反应得到产物。其中硝酸有稀硝酸、浓硝酸和发烟硝酸，优选发烟硝酸。用反应式表示如下：
制备方法二：
在过氧化苯甲酰存在下，川芎嗪与溴代琥珀酰亚胺(NBS)在溶剂四氯化碳中反应得到2-溴甲基-3，5，6-三甲基吡嗪，再与硝酸银在四氢呋喃中反应得到产物。如下图所示：
在试验中发现制备方法二的工艺毒性大，成本高；得到的产物纯度也不及制备方法一，故本发明采用制备方法一。
(2)当R为
制备方法：
在三乙胺存在下，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)与对氯甲基苯甲酰氯(B)在二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯等溶剂中反应，生成对氯甲基苯甲酸(2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)酯(C)；氯甲基苯甲酸(2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)酯(C)与硝酸银在四氢呋喃、乙腈中反应得到产物。
对氯甲基苯甲酰氯制备：以4-(羟甲基)苯甲酸为原料，与氯化亚砜/三氯化磷反应制得。
用反应式表示如下：
(3)当R为
制备方法：
在吡啶存在下，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)与呋咱氮氧化合物(D)在二氯甲烷中反应，得到产物。
用反应式表示如下：
呋咱氮氧化合物(D)的合成方法，文献[Di Stilo A，et al，Med.Chem.Res.，3，554-557(1993)；Fruttero R，et al，J.Heterocyclic.Chem.，26，1345-1349(1989)]已有报道，先制得3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲醛，依次与琼斯氧化剂、氯化亚砜反应，可方便的制得标题化合物。这对本技术领域的人员是明了的。合成路线如下图所示：
(4)当R为
在对二甲胺基吡啶存在下，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)与酸酐类化合物E在四氢呋喃中反应，生成中间体F；中间体F与醇类化合物G反应得到产物。酸酐类化合物为丁二酸酐、戊二酸酐、己二酸酐等。中间体F为有取代基的羧酸，在二环己基碳二酰亚胺(DCC)和催化量4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)作用下，与醇类化合物G在二氯甲烷中反应得到产物。
醇类化合物G用R1OH表示，其中R1代表：
其中第一种R1OH为呋咱氮氧化合物，化学名称为：3-羟甲基-4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物，参照文献(许忻，张奕华，等。中国药科大学学报，2005，36(6)：488-495)制备。
其中第二种R1OH，参照文献(王未东，张奕华，等。中国药科大学学报，2003，34(1)：13-16)制备。
其中第三种R1OH为异山梨醇单硝酸酯，不用自制，有商品供应。
其中第四种R1OH为2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪，即化合物A。
用反应式表示如下：
(5)当R为
其中n为2、3，R2为NO2、
制备方法：
a.在对二甲胺基吡啶存在下，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)与内酯化合物H在二氯甲烷中反应，生成中间体J；
b.中间体J与化合物K反应得到产物。
其中，化合物K为有机羧酸类化合物，用R2OH表示，其中R2代表
时，中间体J为有取代基的醇，在二环己基碳二酰亚胺(DCC)和催化量4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)作用下，与羧酸类化合物K在二氯甲烷中反应得到产物。
其中，化合物K用R2OH表示，R2为硝基(NO2)，即硝酸时，中间体J为有取代基的醇，在乙酸酐、乙酸存在下与硝酸反应得到产物。其中硝酸有稀硝酸、浓硝酸和发烟硝酸，优选发烟硝酸。
n为0-3，R2为NO2，制备方法：
a.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在对二甲胺基吡啶存在下与溴代烷基酰溴类化合物L反应，生成中间体M；
b.中间体M与硝酸银反应得到产物。
两种制备方法依次用反应式表示如下：
式一，
式二，
其中，R1、R2、m、n的定义同通式(I)结构的化合物中所述。
此类化合物对于治疗人类血栓性疾病是有效的。尽管本发明的化合物可以不经任何配制直接给药，但所述的各种化合物优选以与药剂学可接受的药用辅料制备药物组合物使用。药剂学可接受的药用辅料包括稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂、稳定剂、溶剂等。
本发明所述稀释剂包括但不限于淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、低分子右旋糖苷等；所述润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、氯化钠、油酸钠、DL-亮氨酸、月桂醇硫酸钠、聚乙二醇4000-6000、泊洛沙母等；所述粘合剂包括但不限于水、乙醇、淀粉浆、糖浆、明胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮等；所述崩解剂包括但不限于淀粉、羧甲基淀粉钠、泡腾混合物即碳酸氢钠和枸橼酸、酒石酸、低取代羟丙基纤维素等；所述稳定剂包括但不限于多糖如金合欢胶、琼脂、藻酸、丙烯酸酸树脂、纤维素醚和羧甲基甲壳酯等；所述溶剂包括但不限于水、磷酸盐缓冲液、平衡的盐溶液等；
所述的组合物根据治疗需要的不同，可以制成各种不同的制剂，包括各种固体口服制剂、液体口服制剂、注射剂等。药剂学可接受的口服剂固体制剂有：普通片剂、分散片、肠溶片、颗粒、胶囊、滴丸、散剂等，口服液体制剂有口服液、乳剂；注射剂有：小水针、输液、冻干粉针等。各制剂可以根据常规的工艺制备而成。
药物组合物以及单元剂型中含有的活性成份(本发明化合物)的量可以根据患者的病情、医生诊断的情况特定的加以应用，所用的化合物的量或浓度在一个较宽的范围内调节，通常，活性化合物的量范围为组合物的1％～90％(重量)。
下面通过实验进一步说明本发明化合物对血栓形成的抑制作用。抗凝血活性测定
本实验通过测定活化部分凝血激酶时间(APTT)、凝血酶(凝固)时间(TT)以及凝血酶原时间(PT)3种指标作为评价标准，初步研究2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物的抗凝血活性。
衍生物溶液的配制：将2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物分别制成2.2×10-5mol/ml的溶液。并用2N盐酸水溶液调pH值4.5-5。
抗凝血活性测定：
APTT的测定：0.1ml血浆加入0.1ml测试样品溶液，预热(37℃)3min后，加入0.1ml部分凝血活酶活化3min，放至测试台加入0.1ml氯化钙溶液(30mmol/L)，即可测出APTT。
TT的测定：0.12ml血浆加入0.12ml测试样品溶液，预热(37℃)3min后，放至测试台加入0.12ml凝血酶，即可测出TT。
PT的测定：0.1ml血浆加入0.1ml测试样品溶液，预热(37℃)3min后，放至测试台加入0.2ml凝血酶原的氯化钠水溶液，即可测出PT。
衍生物对APTT、TT及PT的影响(x±s，n＝4)
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抗血小板聚集实验
以3％戊巴比妥钠静脉麻醉家兔，手术分离颈总动脉插管取血，以3.8％枸橼酸钠(取柠檬酸钠3.8g，加蒸馏水到100mL，溶解后过滤，装瓶，121℃高压灭菌15min)为抗凝剂(V∶V＝1∶9)，1000r/min，5min离心，以制备富血小板血浆(PRP)；3000r/min，15min离心，制备贫血小板血浆(PPP).将PRP移入硅化比色杯中37℃温育5min，测其在600nm处吸光度(A)，用PPP调PRP的A值在0.6～0.7，将1.7mL调好的PRP移入另一硅化比色杯中，加入受试药200μL在600nm处测加入ADP前的A值，随后加入ADP(100μL)(终浓度为4μmol/L)，分别测定加入ADP后2，5min时600nm处A值，按以下公式计算血小板聚集率(AR)：
AR＝[(加入ADP前A值-加入ADP后A值)/加入ADP前A值]×100％同时计算药物对血小板的抑制率(AIR)：
AIR＝[1-(给药管聚集百分率/对照管聚集百率)]×100％.
用直线回归法求出药物的半数抑制浓度(IC50)，抗血小板聚集活性数据见下表。
化合物对血小板聚集的抑制活性
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附图说明
说明书附图
图1为2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物的结构式。
具体实施方式：
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，实施例仅为解释性的，决不意味着它以任何方式限制本发明的范围。发明的化合物经高效液相色谱(HPLC)，或薄层色谱(TLC)，或熔点(m.p.)进行检测，采用质谱(MS)，元素分析确证其结构。
参考实施例1：2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)
参考文献(陈学敏等.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪的合成及其对血液流变性的影响.中国药物化学杂志，1996，6(4)：254-256.)方法，可方便的制得标题化合物。合成路线如下图所示：
产物为白色固体，m.p.71℃-73℃，HPLC：98.86％，ESI-MS：151.1(M-H)
元素分析：
(理论值/实测值C(63.13/63.01)，H(7.95/7.78)，N(18.41/18.26)。
参考实施例2：对氯甲基苯甲酰氯(B)
在反应瓶中加入15克对羟甲基苯甲酸，51克氯化亚砜及1克三氯化磷，回流反应12小时。减压浓缩，至蒸尽氯化亚砜及三氯化磷，得固体，不需纯化，备用。ESI-MS：187.0(M-H)
参考实施例3：3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酰氯(D)
参考文献[Di Stilo A，et al，Med.Chem.Res.，3，554-557(1993)；Fruttero R，et al，J.Heterocyclic.Chem.，26，1345-1349(1989)]报道的方法，先制得3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲醛，依次与琼斯氧化剂、氯化亚砜反应，可方便的制得标题化合物。合成路线如下图所示：
得固体产物，ESI-MS：160.9(M-H)，不需纯化。
参考实施例4：3-羟甲基-4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物
参照文献(许忻，张奕华，等。中国药科大学学报，2005，36(6)：488-495)方法制备。HPLC：99.31％，元素分析：(理论值/实测值)，C(56.25/56.14)，H(4.20/4.15)，N(14.58/14，49)。
参考实施例5：3-硝酰氧甲基苯酚
参照文献(王未东，张奕华，等。中国药科大学学报，2003，34(1)：13-16)方法制备。HPLC：99.31％，元素分析：(理论值/实测值)，C(49.71/49.70)，H(4.17/4.10)，N(8.28/8，19)。
实施例1：(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇硝酸酯(HK-001)
在反应瓶中，加入2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)15.2g，60ml乙酸，10ml乙酸酐，室温搅拌下，滴加7.5g发烟硝酸，于20分钟内滴加完毕，然后保温反应16小时，TLC检测反应完全，停止反应。搅拌下将反应液加入200g碎冰中，加入120ml乙酸乙酯，分出乙酸乙酯层，无水硫酸镁干燥。减压蒸尽乙酸乙酯，残余物经硅胶柱色谱(二氯甲烷/乙酸乙酯，9∶1)纯化，得(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇硝酸酯9.6g。HPLC：99.1％，元素分析：(理论值/实测值)，C(48.73/48.62)，H(5.62/5.55)，N(21.31/21.29)，ESI-MS：196.1(M-H)。
实施例2：4-((硝酰氧基)甲基)苯甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-002)
a.在反应瓶中，加入2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)7.6g，80ml二氯甲烷，8.0g三乙胺，搅拌下于15℃-20℃加入9.5g对氯甲基苯甲酰氯(B)，然后在30℃保温反应3小时。TLC监测，反应结束，停止反应。加入50ml水，搅拌后静置，分出二氯甲烷层，无水硫酸镁干燥。减压蒸尽二氯甲烷，残余物经硅胶柱色谱(正己烷/乙酸乙酯，9∶2)纯化，得9.8g对氯甲基苯甲酸(2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)酯(C)。HPLC：98.11％，ESI-MS：303.1(M-H)。
b.在反应瓶中，加入对氯甲基苯甲酸(2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)酯(C)6.0g，120ml乙腈，搅拌下加热至65℃，再加入5.2g硝酸银(溶于50ml乙腈)，78℃避光保温反应5小时。停止反应，过滤，除去生成的氯化银。减压蒸除乙腈，残余物经硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯，6∶4)纯化，得4-((硝酰氧基)甲基)苯甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-002)3.4g，HPLC：99.31％，ESI-MS：330.1(M-H)。元素分析：(理论值/实测值)，C(58.00/58.02)，H(5.17/5.08)，N(12.68/12.58)。
实施例3：3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-003)
在反应瓶中，加入2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)7.6g，160ml二氯甲烷，6.5g吡啶，搅拌下于20℃加入8.9g3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酰氯(D)，然后在室温保温反应4.5小时。TLC监测，反应结束，停止反应。加入80ml水，搅拌后静置，分出二氯甲烷层，减压蒸尽二氯甲烷，残余物经硅胶柱色谱(正己烷/乙酸乙酯，7∶2)纯化，得固体7.7g，即3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-003)。HPLC：99.16％，ESI-MS：277.1(M-H)。
实施例4：4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(3-硝酰氧甲基)苯酚酯(HK-004)
a.在反应瓶中，加入2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)15.2g，丁二酸酐12.5g，对二甲胺基吡啶14.4g，溶于130ml四氢呋喃(THF)中，加热回流反应16h。减压蒸除溶剂，剩余物中加入氯仿150ml和70ml饱和食盐水，搅拌后静置，分出氯仿层，无水硫酸镁干燥过夜。减压蒸尽氯仿，析出固体，抽滤，滤饼干燥，用无水乙醇重结晶，得白色固体18.9g，即4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸。HPLC：98.86％，ESI-MS：251.1(M-H)。
b.在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸5.0g，3-硝酰氧甲基苯酚3.4g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)4.9g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.5g，溶于230mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比5∶1)纯化，得到蜡状物，即4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(3-硝酰氧甲基)苯酚酯(HK-004)，收率50.7％。HPLC：99.36％，ESI-MS：402.1(M-H)。
成盐：将4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(3-硝酰氧甲基)苯酚酯(HK-004)溶于无水乙醇中，加入适量盐酸乙醇，即得盐酸盐。
实施例5：丁二酸双(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-005)
在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸5.0g，2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)3.1g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)4.6g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.6g，溶于260mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比7∶2)纯化，得到固体物，即丁二酸双(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-005)。收率48.2％。HPLC：99.21％，ESI-MS：385.2(M-H)。
实施例6：4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(8-硝酰氧基-2，6-二氧杂双环[3.3.0]辛烷-4-醇酯(HK-006)
在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸5.0g，异山梨醇单硝酸酸酯3.8g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)5.0g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.4g，溶于200mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比5∶1)纯化，得到蜡状物，即4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(8-硝酰氧基-2，6-二氧杂双环[3.3.0]辛烷-4-醇酯(HK-006)。收率59.3％。HPLC：99.45％，ESI-MS：424.1(M-H)。
成盐：将4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(8-硝酰氧基-2，6-二氧杂双环[3.3.0]辛烷-4-醇酯(HK-006)溶于无水乙醇中，加入适量的磷酸，得到磷酸盐。
实施例7：4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-基)甲醇酯(HK-007)
在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸5.0g，3-羟甲基-4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物3.9g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)4.8g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.56g，溶于250mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比7∶3)纯化，得到固体物，即4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-基)甲醇酯(HK-007)。收率48.4％。HPLC：99.03％，ESI-MS：425.2(M-H)。
实施例8：2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代乙醇硝酸酯(HK-008)
a.在反应瓶中，加入2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)7.6g，60ml二氯甲烷，7.3g对二甲胺基吡啶，搅拌下于约10℃加入10.1g溴乙酰溴，然后保温反应3小时。TLC监测，反应结束，停止反应。加入饱和食盐水50ml，搅拌后静置，分出二氯甲烷层，无水硫酸钠干燥。减压蒸尽二氯甲烷，残余物经硅胶柱色谱(正己烷/乙酸乙酯，9∶1)纯化，得2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代溴乙烷6.4g。HPLC：98.67％，ESI-MS：271.0(M-H)。
b.在反应瓶中，加入2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代溴乙烷5.4g，90ml乙腈，搅拌下加热至60℃，再加入8.6g硝酸银(溶于80ml乙腈)，80℃保温反应7小时。停止反应，过滤，除去生成的溴化银。减压蒸除乙腈，残余物经硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯，7∶2)纯化，得2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代乙醇硝酸酯(HK-008)3.8g，HPLC：99.16％，ESI-MS：254.1(M-H)。
成盐：将2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代乙醇硝酸酯(HK-008)溶于甲醇中，加入等摩尔的甲磺酸，得甲磺酸盐。
实施例9：3-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-3-氧代丙醇硝酸酯(HK-009)
按实施例8提供的制备方法和过程，仅用溴丙酰溴代替实施例8(a)中的溴乙酰溴，反应物的摩尔比不变，即可制得3-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-3-氧代丙醇硝酸酯(HK-009)4.1g。HPLC：99.19％，ESI-MS：268.1(M-H)。
实施例10：4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇硝酸酯(HK-010)
a.在反应瓶中，加入2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)15.2g，r-丁内酯9.6g，对二甲胺基吡啶13.9g，溶于180ml二氯甲烷中，加热回流反应24h。加入80ml饱和食盐水，搅拌后静置，分出二氯甲烷层，无水硫酸镁干燥过夜。减压蒸尽二氯甲烷，析出固体，抽滤，滤饼干燥，用无水甲醇重结晶，得白色固体16.1g，即4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇。HPLC：98.39％，ESI-MS：237.1(M-H)。
b.在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇11.8g，70ml乙酸，8ml乙酸酐，15℃搅拌下，滴加5.3g发烟硝酸，于15分钟内滴加完毕，然后保温反应12小时，TLC检测反应完全，停止反应。搅拌下将反应液加入150g碎冰中，加入150ml乙酸乙酯，分出乙酸乙酯层，无水硫酸镁干燥。减压蒸尽乙酸乙酯，残余物经硅胶柱色谱(二氯甲烷/乙酸乙酯，9∶2)纯化，得4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇硝酸酯(HK-010)8.7g。HPLC：99.24％，ESI-MS：282.1(M-H)。
实施例11：吡啶-3-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-011)
在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇4.8g，吡啶-3-甲酸2.5g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)5.0g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.45g，溶于260mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比5∶2)纯化，得到固体物，即吡啶-3-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-011)。收率54.3％。HPLC：99.15％，ESI-MS：342.2(M-H)。
实施例12：吡啶-4-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-012)
按实施例12提供的制备方法和过程，仅用吡啶-4-甲酸代替吡啶-3-甲酸，得到吡啶-4-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-012)。收率55.8％。HPLC：99.12％，ESI-MS：342.2(M-H)。
实施例13：3-(4-羟基-3-甲氧基-苯基)丙烯酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-013)
在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇4.8g，阿魏酸3.9g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)4.6g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.5g，溶于300mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比5∶3)纯化，得到固体物，即3-(4-羟基-3-甲氧基-苯基)丙烯酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-013)。收率40.3％。HPLC：98.75％，ESI-MS：413.2(M-H)。
实施例14：2-乙酰氧基苯甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-014)
在反应瓶中，加入4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇4.8g，乙酰水杨酸3.6g，二环己基碳二酰亚胺(DCC)4.9g，4-N，N-二甲氨基吡啶(DMAP)0.6g，溶于280mL无水二氯甲烷中，室温反应过夜。过滤除去不溶物，滤液经无水硫酸镁干燥，减压浓缩至干。残渣经柱色谱(石油醚(60～90℃)/乙酸乙酯，体积比5∶2)纯化，得到固体物，即2-乙酰氧基苯甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-014)。收率51.8％。HPLC：99.06％，ESI-MS：399.2(M-H)。
为了更充分的说明本发明的2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪衍生物的药物组合物，提供下列制剂实施例，所述实施例仅用于说明，而不是用于限制本发明的范围。所述制剂可以使用本发明化合物中的任何化合物。
实施例15：
实施例1中制备的化合物(HK-001)20g，加糊精10g，乳糖70g，用60％乙醇制粒、干燥、装胶囊，制得1000粒胶囊剂。
实施例16：
实施例2中制备的化合物(HK-002)50g，加60g(乳糖-微晶纤维5∶1)、硬脂酸1％，用70％乙醇制粒、压片即得1000片片剂。
实施例17：
实施例4中制备的化合物(HK-004)的盐酸盐80g，加1000ml注射用水溶解，补足注射用水至4000ml，加适量活性炭除热源，0.2um微孔滤膜滤过，灌装，制得2000支小水针。
实施例18：
实施例6中制备的化合物(HK-006)的磷酸盐50g，甘露醇50g，加1000ml注射用水溶解，补足注射用水至2000ml，加适量活性炭除热源，0.2um微孔滤膜滤过，灌装，冷冻干燥，制得2000支冻干粉针。供静脉注射用。
Claims (8)
1.具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐。
其中，R为：
(1)NO2；
2.如权利要求1中所述的化合物，具有代表性的化合物为：
(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇硝酸酯(HK-001)
4-((硝酰氧基)甲基)苯甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-002)
3-甲基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-4-甲酸(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-003)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(3-硝酰氧甲基)苯酚酯(HK-004)
丁二酸双(3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲醇酯(HK-005)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(8-硝酰氧基-2，6-二氧杂双环[3.3.0]辛烷-4-醇酯(HK-006)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁酸(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-基)甲醇酯(HK-007)
2-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-2-氧代乙醇硝酸酯(HK-008)
3-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-3-氧代丙醇硝酸酯(HK-009)
4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇硝酸酯(HK-010)
吡啶-3-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-011)
吡啶-4-甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-012)
3-(4-羟基-3-甲氧基-苯基)丙烯酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-013)
2-乙酰氧基苯甲酸4-((3，5，6-三甲基吡嗪-2-基)甲氧基)-4-氧代丁醇酯(HK-014)
3.如权利要求1，2中所述化合物的药学上可接受的盐，是指权利要求1，2中所述的化合物与有机酸、无机酸反应生成的盐。
4.本发明式I化合物的制备方法；
(1)当R为NO2，其特征在于：
2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在乙酸酐存在下与硝酸反应得到产物。用反应式表示如下：
(2)当R为
a.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在三乙胺存在下与对氯甲基苯甲酰氯(B)反应，生成对氯甲基苯甲酸(2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)酯(C)；
b.氯甲基苯甲酸(2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪)酯(C)与硝酸银反应得到产物。
用反应式表示如下：
(3)当R为其特征在于：
2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在吡啶存在下与(E)反应，生成(F)。
用反应式表示如下：
(4)当R为
a.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在对二甲胺基吡啶存在下与化合物E反应，生成中间体D；
b.中间体D与化合物G反应得到产物。
用反应式表示如下：
(5)当R为
其中n为2、3，R2为NO2、
制备方法：
a.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在对二甲胺基吡啶存在下与化合物H反应，生成中间体J；
b.中间体J与化合物K反应得到产物。
n为0-3，R2为NO2，制备方法：
a.2-羟甲基-3，5，6-三甲基吡嗪(A)在对二甲胺基吡啶存在下与溴代烷基酰溴类化合物L反应，生成中间体M；
b.中间体M与硝酸银反应得到产物。
两种制备方法依次用反应式表示如下：
式一，
式二，
其中，R1、R2、m、n的定义同1所述。
5.一种抗血栓药物组合物，它包含治疗有效量的权利要求1-3的式I化合物及一种或多种药用赋形剂。
6.权利要求5所述的药物组合物，包括各种固体口服制剂、液体口服制剂、注射剂。
7.权利要求1-3中式I化合物在用于制备抗血栓药物方面的应用。
8.如权利要求7所述的应用，在用于制备治疗脑血栓、脑梗塞、心绞痛、心肌梗死、冠心病、与血栓有关的心律失常药物方面的用途。
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| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20121107 Termination date: 20180310 |