CN101780083B - 一种亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法，其中，该组合物中亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比为1∶0.01～0.8。本发明还提供了该组合物冻干粉针制剂的制备方法，以及该组合物在制备用于治疗贫血和解毒药物中的用途。

Description

一种亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法

1、技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法，以及在制备用于治疗贫血和解毒药物中的用途。

2、背景技术

叶酸是核酸蛋白合成及红细胞生成过程中不可缺少的成份，对某些巨红细胞贫血患者，它可以刺激其红细胞及血小板的生成，但叶酸在体内必须先在肝脏和骨髓中转化成有效形态的甲酰四氢叶酸，然后作为辅酶参与核酸的合成。亚叶酸钙(Calcium Folinate，CF)是叶酸还原型的甲酰化衍生物，系叶酸在体内的活化形式，进入体内不需转化即为有效形态，因此亚叶酸钙的作用大大优于叶酸。

下图是亚叶酸钙的结构式：

亚叶酸钙对甲氨蝶呤(MTX)具有解毒作用。MTX为叶酸拮抗剂，MTX的抗肿瘤作用机理在于其结构类似于叶酸，可抑制二氢叶酸还原酶的活性，造成细胞四氢叶酸(FH₄)缺乏，从而影响嘌呤及嘧啶类核苷酸合成，抑制肿瘤细胞生长。MTX抑制肿瘤细胞生长的同时亦使得正常细胞尤其是生长较快的细胞内FH₄缺乏，而产生较大的毒性作用。因此MTX的抗肿瘤作用不仅取决于其对肿瘤细胞的抑制，机体对MTX的耐受性亦影响其最终结果。CF是叶酸还原型的甲酰化衍生物，系叶酸在体内的活化形式，可为细胞直接提供FH₄，而不需要二氢叶酸还原酶的作用，从而CF可以明显拮抗MTX的毒性作用。

亚叶酸钙能增强5-氟尿嘧啶(5-FU)的抗肿瘤活性。5-FU能在体内转变为氟脱氧核苷酸(FdUMP)，抑制胸苷酸合成酶(TS)，进而抑制DNA的合成。FdUMP与TS的结合需甲酰四氢叶酸(CH₂FH₄)的参与，在细胞内形成TS-CH₂FH₄-FdUMP三元复合物。但生理浓度的CH₂FH₄形成的三元复合物容易分离。提供大剂量的CF后可使细胞内CH₂FH₄达到高浓度，使TS-CH₂FH₄-FdUMP三元复合物结合紧密、稳定，从而增强了5-FU的抗肿瘤活性。

近年，亚叶酸钙因参与抗肿瘤药物的生化调节而备受重视，其临床应用亦更趋广泛。近年来CF/5-FU联用在治疗鼻咽癌、胃癌、胃肠道癌、结直肠癌、大肠癌、头颈癌、食管癌、乳腺癌中取得较好的疗效。它不仅增强了5-FU的抗癌活性，还降低了毒性作用，因此在临床中广泛应用。

左亚叶酸为5-甲酰四氢叶酸(即亚叶酸)的同分异构体。左亚叶酸钙由美国惠氏药品公司首先研制成功，于1994年首先在英国上市，现已在包括意大利、加拿大、日本、南非、芬兰、冰岛等10几个国家上市，其制剂有片剂、水针剂及冻干针剂，并已被《欧洲药典》所收载，国外临床应用已充分证实了该药的安全有效性。

目前市售的亚叶酸钙水针不稳定，遇光易降解，储存期稳定性差。此外，亚叶酸钙在水中的溶解度不太理想，对温度、PH值、氧气等因素敏感，使其制剂应用和临床应用都受到一定限制，且增加了制剂成本。虽然亚叶酸钙降低了抗肿瘤药物MTX的毒性作用，但是它的毒性仍不容忽视。

L-苯丙氨酸是人体八种必需的氨基酸之一，研究表明，以氨基酸为载体把抗癌药物的分子或基因导入癌瘤区，就能达到既抑制癌瘤生长，又能降低原肿瘤药物的毒副作用，而这些氨基酸载体中以L-苯丙氨酸为最理想，其效果是其他氨基酸的3-5倍。

3、发明内容

为了克服亚叶酸钙水溶性差、稳定性不好及毒性作用的问题，使患者使用更安全，成本更低，本发明人提供了一种亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法。

本发明通过大量实验惊奇的发现，亚叶酸钙与苯丙氨酸以一定比例组合后，完全解决了其水溶性和稳定性问题，方便临床用药，并且加入L-苯丙氨酸可起到协同增效作用，比单用亚叶酸钙更能增强5-氟尿嘧啶的抗肿瘤活性及降低甲氨喋呤毒副作用。

本发明的目的是提供含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，该组合物增强对抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶的活性及降低甲氨喋呤毒副作用。

本发明的另一目的是提供含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针，该冻干粉针的水溶性及稳定性好，可以较长时间贮存。

本发明的再一目的是提供含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针的制备方法，该方法制得的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针质地疏松，加水后能迅速溶解而恢复药液的原有特性，且制备成本低，质量可控。

本发明的还一目的是提供含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物在制备用于治疗贫血和解毒药物中的应用。

本发明提供了含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法，技术方案如下：

本发明提供的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，所述的亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比为1∶0.01～0.8。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比优选为1∶0.05～0.5。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比进一步优选为1∶0.1～0.3。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比再一步优选为1∶0.2。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，为冻干粉针制剂。

在制备冻干制剂时，为了获得饱满外观及调节复配后溶液的渗透压，常加入赋形剂，本发明的冻干产品中加入甘露醇、山梨醇、右旋糖酐40、葡萄糖、木糖醇、乳糖、果糖、麦芽糖或氯化钠，进一步优选为右旋糖酐40。

从处方中辅料的选择来分析，本发明人遵循的原则是，在不影响药物稳定性、满足临床需要的产品的前提下，辅料的成分越简单，用量越少越好。辅料的成分越简单，制剂在生产工艺中可大大简化配料步骤，同时，可避免辅料成分复杂带来的难以预料的副作用；辅料用量越少，生产工艺中越容易进行，成本相对较低。因此，本发明仅仅选用苯丙氨酸和右旋糖酐40作为辅料。

本发明加入的苯丙氨酸对亚叶酸钙有良好的助溶作用，解决了其水溶性差的问题，避免引入过多的杂质，某些无机盐助溶剂的加入会使冻干粉针出现体积缩小、硬壳和脆散等现象；同时苯丙氨酸也有很好的膨松骨架作用，通过添加苯丙氨酸使得所制备的亚叶酸钙冻干粉针基本保持原来的体积，色泽均匀，易于溶解形成澄明的溶液。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针，其特征在于：所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物的冻干粉针的制备方法为：

(1)依处方量称取赋形剂与苯丙氨酸，溶于注射用水中，加入1％(w/v)针用活性炭，搅拌，趁热过滤除炭。

(2)依处方量称取亚叶酸钙，溶于注射用水中，加入针用活性炭，搅拌，趁热过滤除炭。

(3)将步骤(1)、步骤(2)得到的两滤液合并，补充注射用水至足量，同时调节溶液pH值。

(4)将步骤(3)得到的合格药液过滤，无菌条件下分装，冷冻干燥后压盖、铝封，即得。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物的冻干粉针，其特征在于，所述的步骤(2)中活性炭的用量为溶液体积的0.5％。

本发明还要求保护所述的制备方法中针用活性炭的用量。活性炭的用量影响产品，如果活性炭用量太多，会导致吸附溶液中的活性成分，使其产品的产率降低，如果活性炭用量太少，不能完全将溶液脱色、去热源、除杂质，进而影响产品的质量、纯度等性能。所以对活性炭的用量的选择应该综合考虑。

本发明人发现，在亚叶酸钙和苯丙氨酸组合物的溶液中，加入0.5％(g/mL)的活性炭，此时活性炭对主药亚叶酸钙几乎不存在吸附作用，过滤之后为浅黄色澄清溶液，经活性炭吸附后的亚叶酸钙进行有关物质的检测，其总杂质在0.6％以下，最大杂质在0.2％以下，细菌内毒素符合规定。详见实验例1。

所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，其特征在于在制备用于治疗贫血和解毒药物中的应用。

本发明的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物及其制备方法与最接近的现有相近技术相比，具有以下优点：

本发明通过加入苯丙氨酸，降低甲氨喋呤毒副作用，同时，还增加了氟尿嘧啶的抗肿瘤活性；提高了亚叶酸钙冻干粉针的水溶性，较易制成高浓度的制剂，方便临床用药；辅料用量少，可以最大可能的避免辅料之间的相互作用或者辅料对药物、人体的负面影响；本发明通过对亚叶酸钙处方和冻干工艺的改进，使所制得的亚叶酸钙冻干粉的质地疏松，加水后能迅速溶解而恢复药液的原有特性，并且亚叶酸钙的稳定性提高。同时，使得所得产品起效快，生物利用度高；剂量可控，外观优良；制作工艺简单，使用可靠、方便，安全实用，能降低生产成本，适用于实现工业化生产。

以下通过实验例进一步阐述本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的有益效果，但不应将此理解为本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物仅具有下列有益效果。

实验例1活性炭浓度的筛选实验

分别选用不同浓度的注射用活性炭进行吸附，以亚叶酸钙的含量为考察指标，筛选活性炭的用量。具体实验方法和结果如下：

1、实验方法：

取亚叶酸钙原料87.5g，溶于300ml 50-60℃的注射用水中，取溶液75ml四份，分别不加和加入1％、0.5％、0.3％(w/v)针用活性炭，于50-60℃温度下吸附15分钟后，趁热过滤除炭，滤液加水定容至250ml，分别取样检测各溶液中亚叶酸钙的含量。

2、实验结果：

表1亚叶酸钙用炭量筛选实验结果

根据实验结果，加炭量为0.3％和0.5％时对亚叶酸钙含量的影响都比较小。为了能完全将溶液脱色、去热源、除杂质，有效保证产品的质量、纯度等性能，所以综合考虑后，确定以0.5％(w/v)量活性炭，于50-60℃条件下吸附15分钟。

实验例2稳定性实验

本实验例是利用本发明所制备的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针与专利CN1456162A左亚叶酸钙冻干粉针产品进行稳定性实验(包括加速实验、室温留样实验和影响因素实验)来比较两者的稳定性。

本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针采用实施例4的方法制备，专利CN1456162A的左亚叶酸钙冻干粉针采用专利中优选处方(左亚叶酸钙100mg，右旋糖酐20mg，注射用水20ml)、依专利中提及的冻干制品的方法制备。具体实验及结果如下：

1、实验方法及结果

(1)加速实验

将本发明的组合物和专利CN1456162A的样品模拟上市包装，于温度40℃±2℃条件下，进行加速实验，分别于第1、2、3、6月，取样考察性状、酸碱度、澄明度、有关物质和含量，测定结果与0月数后比较，结果见表2。

表2加速实验结果

由加速实验结果可见，本发明组合物于温度40℃±2℃条件下放置6个月后，性状、酸碱度均无明显改变，澄明度符合规定，有关物质和含量变化也很小，与专利CN1456162A样品比较，稳定性更好。

(2)室温留样实验

将本发明的组合物和专利CN1456162A的样品模拟上市包装，分别于3、6、9月取样，考察性状、酸碱度、澄明度、有关物质和含量，测定结果与0月数值比较，结果见表3。

表3长期实验考察结果

由长期实验考察结果可见，本发明组合物放置9个月后，性状、酸碱度均无明显改变，澄明度符合规定，有关物质和含量变化也很小；而专利CN1456162A样品的有关物质和含量变化较为明显。说明本发明组合物的稳定性更好。

(3)影响因素实验

将本发明的组合物和专利CN1456162A的样品分别置于光照(照度4000±500Lx)、高温(温度60℃)、高湿(相对湿度92.5％)的条件下，于5、10天分别取样，考察性状、酸度、有关物质和含量，测定结果与0月数值比较，结果见表4。

表4影响因素实验结果

由影响因素实验结果可见，本发明组合物在不同影响条件下放置10天后，性状、酸碱度均无明显改变，有关物质和含量变化微小，与专利CN1456162A样品比较，稳定性更好。

2、结论

稳定性实验(包括加速实验、室温留样实验和影响因素实验)结果显示：本发明的亚叶酸钙和苯丙氨酸组合物的稳定性好，相对于专利CN1456162A的制剂更加稳定，更适合长期储存，更适用于工业大生产。

实验例3冻干粉针性能检测

本实验例对五批本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物的冻干粉针性能检测，具体检测方法均按照《中国药典》2005年版二部，结果见下表：

表5本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物冻干粉针的性能检测

可以得知，本发明所得亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物的冻干粉针的各项性能均合格，并且有关物质的含量、水分含量均比现有技术提高。

实验例4溶解速度实验

本实验例是利用本发明所制备的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针与专利CN1456162A左亚叶酸钙冻干粉针产品进行溶解速度对比研究。

本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针采用实施例4的方法制备，专利CN1456162A的左亚叶酸钙冻干粉针采用专利中优选处方(左亚叶酸钙100mg，右旋糖酐20mg，注射用水20ml)、依专利中提及的冻干制品的方法制备。

按中国药典中亚叶酸钙的pH测定方法，分别测定本发明与专利CN1456162A处方的pH值。分别取1g，加100mL水，轻轻振摇测定其溶解速度。对比测定结果如下表：

表6本发明和专利CN101224196盐酸氨溴索的溶解速度

结果显示：本发明制得冻干粉针的溶解速度远远快于专利CN1456162A制得冻干粉针的溶解速度。

实验例5对氟脲嘧啶增效作用的体外比较实验

1、材料与药品：

取30例胃癌患者术后新鲜活体组织标本置于RPMI-1640培养液中，4h内制备成单细胞悬液。

实验采用的化疗药物均为临床常用注射液：5-Fu、顺铂(cisplatin，DDP)、丝裂霉素(mitomycin，MMC)(山东齐鲁制药厂)，吡喃阿霉素(pirarubicin，THP-ADM)(深圳万乐制药有限公司)、羟基喜树碱(hydroxycamptothecin，HCPT)(湖北黄石制药集团)、足叶乙甙(etoposide，VP-16)(江苏连云港恒瑞制药集团)、亚叶酸钙(浙江万马药业有限公司)、本发明组合物(以实施例4处方及工艺自制)。

2、方法

2.1、抗癌药物剂量：

根据临床化疗药物成人静脉常用剂量，按Limberg公式计算。

2.2、单细胞悬液制备：

上述标本用PBS洗净后剪成1mm×1mlT1×1mm碎块，置于100目不锈钢网上轻碾，边以PBS冲洗，边收集冲下的悬液，然后用200目尼龙膜过滤，1500r/min离心5min.PBS洗2次，去上清，沉淀细胞加RPMI-1640培养液，待用。

2.3、MTT法检测

根据Mosmann建立的方法，先在96孔板上每孔加入细胞悬液80μL，实验组和对照组再分别加入药液和PBS，使终体积为100μL；每块板设不加药的肿瘤细胞对照组和无细胞的空白对照组。培养板放在37℃、5％CO₂的培养箱中孵育48h后，每孔加入MTT液10μL，孵育4h。吸取培养液，加入二甲基亚砜100μL。将培养板震荡10min后，在自动酶标仪吸收波长570nm条件下测定吸光度(OD值)。

2.4、评价指标：

评价指标为细胞抑制率(cells inhibitory，CI)。先计算各孔平均OD值，再根据[(1-实验组OD值/对照组OD值)×100]计算各组CI值。

2.5、统计学方法

采用SPSS 10.0软件包进行处理.数据以(mean±s)表示，经方差齐性检验，各组间行配对t检验。

3、结果与结论

3.1、不同化疗方案的OD值：见表7。

LFAM方案：X，5-Fu，THP-ADM，MMC；

HLFP方案：X，HCPT，5-Fu，DDP；

LFAP方案：X，5-Fu，THP-ADM，DDP；

ELF方案：X，VP-16，5-Fu。

其中X为亚叶酸钙或本发明组合物。

表7  4种化疗方案中OD值比较

                                        n＝30，mean±s

^*P＜0.05，t检验，20mg·m^-2

从表中数据可见，X为本发明组合物的方案的OD值低于X为亚叶酸钙的方案的OD值.且有显著性差异(P＜0.05)。

3.2、不同化疗方案的CI值：见表8。

表8  4种化疗方案中CI值比较

                                        n＝30，mean±s，％

^*P＜0.05，t检验，20mg·m^-2

上述4种方案中，X为本发明组合物的方案的OD值高于X为亚叶酸钙的方案的OD值，且有显著性差异(P＜0.05)。

结论：从OD值和CI值的比较结果可以看出，本发明组合物体外增强5-Fu的治疗效果高于单独的亚叶酸钙，且有显著性差异(P＜0.05)。

实验例6对大剂量甲氨喋呤的解毒作用

1、材料

动物：昆明种小鼠，雌雄兼用，体重18～22g。

药品：亚叶酸钙(原料)为浙江万马药业有限公司产品；

甲氨喋呤(MTX)，连云港恒瑞制药有限公司生产；

本发明组合物(以实施例4处方及工艺自制)。

2、方法

2.1、亚叶酸钙(CF)对大剂量MTX毒性的影响

取100只昆明种小鼠，雌雄各半，称重后随机分成4组，每组25只动物，即正常对照组(等容积生理盐水)、模型组、CF组及本发明组合物组。给小鼠皮下注射MTX(800mg·kg^-1)，20小时后CF或本发明组合物灌胃，每天2次，连续3天，观察小鼠的死亡情况。

2.2、统计方法

计量资料结果以mean±s表示，组间比较采用t检验；死亡率比较采用X检验。

3、结果与结论

按表9分组与给药。

表9亚叶酸钙对大剂量甲氨喋呤的解毒作用

                                         (mean±s，n＝25)

注：与模型组比较^*P＜0.05，观察时间为7天。

结论：本发明组合物与MTX恰当的联合应用，和CF与MTX联合应用比较，小鼠生存率及存活时间均显著提高，更能提高机体对MTX的耐受性，即减弱MTX的毒性作用能力增强，即使在相同毒性反应下，可用较大剂量的MTX，提高MTX的抗肿瘤作用，延长患者的生存时间。

4、具体实施方式

以下通过实施例和实验例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

实施例  本发明的亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物冻干粉针制剂的制备

1、处方

处方1：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        5g

            右旋糖酐40      55g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方2：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        10g

            右旋糖酐40      50g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方3：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        15g

            右旋糖酐40      45g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方4：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        20g

            右旋糖酐40      40g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方5：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        25g

            右旋糖酐40      35g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方6：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        30g

            右旋糖酐40      30g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方7：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        40g

            右旋糖酐40      20g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方8：

            亚叶酸钙        100g

            苯丙氨酸        50g

            右旋糖酐40      10g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方9：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        10g

            右旋糖酐40      50g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方10：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        20g

            右旋糖酐40      40g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方11：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        30g

            右旋糖酐40      30g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方12：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        35g

            甘露醇          25g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方13：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        40g

            右旋糖酐40      20g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

处方14：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        45g

            右旋糖酐40      15g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

            处方15：

            亚叶酸钙        200g

            苯丙氨酸        50g

            右旋糖酐40      10g

            注射用水加至    1200mL

            共制成          1000瓶

2、制备方法

(1)依处方量称取右旋糖酐40和苯丙氨酸，溶于总液量60％的90-100℃注射用水中，加入1％(w/v)针用活性炭，保持温度搅拌吸附15分钟，趁热过滤除炭，备用。

(2)依处方量称取亚叶酸钙，溶于总液量30％的50-60℃注射用水中，加入0.5％(w/v)针用活性炭，保持温度搅拌吸附15分钟，趁热过滤除炭，备用。

(3)将上述两滤液合并，补充注射用水至足量，同时调节溶液pH值为7.0-8.0，取样做中间体检测。

(4)合格药液以0.45μm微孔滤膜粗滤后，再以0.22μm微孔滤膜做除菌过滤。

(5)百级层流条件下无菌分装于处理好的抗生素瓶中，以处理好的硅化丁基塞半压塞，放入冷冻干燥机内。

(6)于-40℃条件下预冻10小时，抽真空升华16-18小时，升温干燥2-3小时，压胶塞，从冷冻干燥机内取出。

(7)以处理好的铝塑盖锁口，取样进行半成品检测。

(8)合格品贴标签，装盒及大箱。

Claims (9)

1.一种含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，其特征在于：所述的亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比为1∶0.05～0.5。

2.如权利要求1所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，其特征在于：所述的亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比为1∶0.1～0.3。

3.如权利要求2所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，其特征在于：所述的亚叶酸钙与苯丙氨酸的重量比为1∶0.2。

4.如权利要求1～3任一项权利要求所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，其特征在于：所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物为冻干粉针制剂。

5.如权利要求4所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针，其特征在于：其冻干粉针加入赋形剂，所述的赋形剂选自甘露醇或右旋糖酐40。

6.如权利要求5所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针，其特征在于：所述的赋形剂选自右旋糖酐40。

7.如权利要求5～6任一项权利要求所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物的冻干粉针，其特征在于：所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物的冻干粉针的制备方法为：

(1)依处方量称取赋形剂与苯丙氨酸，溶于注射用水中，加入1％(w/v)针用活性炭，搅拌，趁热过滤除炭。

(2)依处方量称取亚叶酸钙，溶于注射用水中，加入针用活性炭，搅拌，趁热过滤除炭。

(3)将步骤(1)、步骤(2)得到的两滤液合并，补充注射用水至足量，同时调节溶液pH值。

(4)将步骤(3)得到的合格药液过滤，无菌条件下分装，冷冻干燥后压盖、铝封，即得。

8.如权利要求7所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸组合物的冻干粉针，其特征在于：所述的步骤(2)中活性炭的用量为溶液体积的0.5％。

9.如权利要求1～3任一项权利要求所述的含有亚叶酸钙与苯丙氨酸的组合物，其特征在于在制备用于治疗贫血和解毒药物中的应用。