CN101775052A

CN101775052A - A1腺苷受体的部分和完全激动剂的制备方法

Info

Publication number: CN101775052A
Application number: CN200910215842A
Authority: CN
Inventors: 杰夫·扎布沃茨基; 埃尔法蒂赫·埃尔扎因; 迈克尔·G·奥根; 雅罗斯拉夫·比洛金; 斯坦尼斯拉斯·马耶尔; 安东尼·迪桑蒂; 斯科特·A·米勒; 彼得·A·克尔纳斯特
Original assignee: CV Therapeutics Inc
Current assignee: Gilead Palo Alto Inc
Priority date: 2004-08-30
Filing date: 2005-08-30
Publication date: 2010-07-14
Also published as: WO2006026651A1; CA2578743A1; KR20070046907A; EP1789431A1; JP2008511661A; US20060052330A1; US7300923B2; TW200621793A

Abstract

本发明披露了适合于大规模制造新型化合物的合成方法，这些化合物是部分和完全A₁腺苷受体激动剂，可用于治疗各种疾病，尤其是心动过速和心房扑动、心绞痛、以及心肌梗死。

Description

A1腺苷受体的部分和完全激动剂的制备方法

本申请是于2005年8月30日提交的申请号为200580028768.9、发明名称为“A₁腺苷受体的部分和完全激动剂”的发明申请的分案申请，本申请要求于2004年8月30日提交的美国临时专利申请序列号为60/606,083以及于2004年10月26日提交的美国临时专利申请序列号为60/622,076的优先权，将其披露的全部内容以引用方式结合于本文作为参考。

技术领域

本发明涉及制备作为部分或完全A₁腺苷受体激动剂的化合物。这些化合物可用于治疗哺乳动物的糖尿病，肥胖症，改善脂肪细胞功能，CNS病症(障碍)，以及改善心脏活性，尤其是治疗心律失常。这些化合物在哺乳动物体内还具有抗脂解效应。

背景技术

腺苷是一种天然存在的核苷，其通过与称作A₁、A_2A、A_2B、以及A₃的腺苷受体的家族进行相互作用来施加其生物效应，所有这些腺苷受体都调节重要的生理过程。例如，A_2A腺苷受体调节冠状血管扩张，A_2B受体则与肥大细胞活化、哮喘、血管扩张、细胞生长的调节、肠功能、以及神经分泌的调节(参见Adenosine A_2BReceptors as Therapeutic Targets，Drug Dev Res 45：198；Feoktistov etal.，Trends Pharmacol Sci 19：148-153)，以及A₃腺苷受体调节细胞增殖过程有关。

A₁腺苷受体介导两种不同的生理反应。儿茶酚胺的心脏刺激效应的抑制是借助于腺苷酸环化酶的抑制来介导的，而减慢心率(HR)以及延长通过AV结的神经冲动传播的直接效应在很大程度上起因于IKAdo的活化(B.Lerman和L.Belardinelli Circulation，Vol.83(1991)，P1499-1509以及J.C.Shryock和L.Belardinelli，The Am.J.Cardiology，Vol.79(1997)P 2-10)。A₁腺苷受体的刺激可缩短AV结细胞的动作电势的持续时间并减小其范围，因而延长AV结细胞的不应期。因此，A₁受体的刺激可提供治疗室上性心动过速的方法，包括终止结性折返性心动过速，以及在心房纤颤和扑动期间控制心室率。

因此，A₁腺苷激动剂可用于治疗心律的急性和慢性病症，尤其是那些以快速心率为特征的疾病，其中快速心率是由窦房、心房、以及AV结组织中的异常所驱动(激活)。这样的病症包括但不限于：心房纤颤、室上性心动过速以及心房扑动。暴露于A₁激动剂会引起心率降低以及异常节律的调整，从而改善心血管功能。

通过其抑制儿茶酚胺效应的能力，A₁激动剂可降低细胞的cAMP，因此在衰竭的心脏中具有有益的效应，其中增加的交感紧张性会增加细胞的cAMP水平。研究已经表明，在后的病症伴随增加的室性心律失常和猝死的可能性。参见，例如，B.Lerman和L.Belardinelli Circulation，Vol.83(1991)，P1499-1509以及J.C.Shryock和L.Belardinelli，Am.J.Cardiology，Vol.79(1997)P 2-10。

由于其对环AMP生成的抑制作用的结果，A₁激动剂在脂肪细胞中具有抗脂解效应，其导致降低非酯化脂肪酸(NEFA)的释放(E.A.van Schaick et al.，J.Pharmacokinetics and Biopharmaceutics，Vol.25(1997)p 673-694以及P. Strong Clinical Science Vol.84(1993)p.663-669)。非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)的特征在于胰岛素抗性，其导致高血糖。促使所观察到的高血糖的因素是缺少正常葡萄糖摄取以及骨骼肌糖原合成酶(GS)的活化。研究表明，提高水平的NEFA可抑制胰岛素刺激的葡萄糖摄取以及糖原合成(D.Thiebaud et al Metab.Clin.Exp.Vol.31(1982)p1128-1136以及G.Boden et al J.Clin.Invest.Vol.93(1994)p 2438-2446)。早在1963年P.J.Randle就提出了葡萄糖脂肪酸循环假说(P.J.Randle et al Lancet(1963)p.785-789)。这种假说的原则是限制将脂肪酸供给周围组织会促进碳水化合物利用(P.Strong et al Clinical Science Vol.84(1993)p.663-669)。

已经综述了A₁激动剂对于中枢神经病症(障碍)的益处(L.J.S.Knutsen和T.F.Murray在Purinergic Approaches in ExperimentalTherapeutics，Eds.K.A.Jacobson and M.F.Jarvis(1997)Wiley-Liss，N.Y.，P 423-470)。简单地说，基于癫痫的实验模型，研究表明，混合的A_2A∶A₁激动剂(腺苷地尔)对于由反向苯并二氮杂

类激动剂6，7-二甲氧基-4-乙基-β-咔啉-3-羧酸甲酯所诱导的癫痫发作是强效抗惊厥药(DMCM，H.Klitgaard Eur.J.Pharmacol.(1993)Vol.224p.221-228)。在其它利用CGS 21680(一种A_2A激动剂)进行的研究中，得出下述结论：抗惊厥活性起因于A₁受体的活化(G.Zhanget al.Eur.J.Pharmacol.Vol.255(1994)p.239-243)。此外，研究表明，A₁腺苷选择性激动剂在DMCM模型中具有抗惊厥活性(L.J.S.Knutsen In Adenosine and Adenne Nucleotides：From MolecularBiology to Integrative Physiology；eds.L.Belardinelli and A.Pelleg，Kluwer：Boston，1995，pp 479-487)。其中A₁腺苷激动剂具有益处的第二个领域是在前脑缺血的动物模型中，如由Knutsen等人所证明的(J.Med.Chem.Vol.42(1999)p.3463-3477)。在神经保护中的益处被认为是部分起因于对释放兴奋性氨基酸的抑制(出处同上)。

已经证明，腺苷本身可有效治疗与A₁腺苷受体有关的病症，例如终止阵发性室上性心动过速。然而，由于腺苷的半衰期小于10秒，所以这些效应是短暂的。另外，因为腺苷无差别地作用于A_2A、A_2B、以及A₃腺苷受体亚型，因此它还对交感紧张性、冠状血管扩张、全身血管扩张以及肥大细胞去粒施加直接影响。

已经报道了一类作为有效A₁腺苷受体激动剂(完全和/或部分)的化合物(参见于2002年7月17日提交的美国专利申请序列第10/194.335号，将其全部披露的内容以引用方式结合于本文作为参考)。研究表明，在此专利申请中披露的一种化合物，其被确定为(4S，5S，2R，3R)-5-[(2-氟苯硫)甲基]-2-{6-[(2-羟基-环戊基)氨基]-嘌呤-9-基}草脲胺-3，4-二醇，是高度选择性的部分A₁腺苷受体激动剂。

鉴于对这种和类似化合物的高度关注，尤其是(4S，5S，2R，3R)-5-[(2-氟苯硫)甲基]-2-{6-[(2-羟基-环戊基)氨基]-嘌呤-9-基}草脲胺-3，4-二醇的非对映异构体，所以希望寻求一种新的合成方法，该合成方法可以提供方便的方法来制备大量的好的产率和高纯度的上述化合物并避免使用层析法以及其它费力的分离步骤。

发明内容

因此，本发明的一个目的是提供一种方便的合成方法来大规模制备(4S，5S，2R，3R)-5-[(2-氟苯硫)甲基]-2-{6-[(2-羟基-环戊基)氨基]-嘌呤-9-基}草脲胺-3，4-二醇和相关化合物、以及其非对映异构体，尤其是2-{6-[((1S，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯硫)甲基]草脲胺-3，4-二醇以及2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯硫)甲基]草脲胺-3，4-二醇。因此，在第一个方面，本发明涉及制备化学式I的化合物：

其中R是可选取代的苯基：

包括在碱存在的情况下用化学式RSH的化合物与化学式(5)的化合物接触：

在一种优选的具体实施方式中，R是2-氟苯基而6-取代基是(1R，2R)-2-(羟基环戊基)氨基。适合的碱的实例是氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、三乙胺，优选为碳酸钾，并且反应通常在极性溶剂中进行，例如N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺。

在第二个方面，本发明涉及制备化学式(5)的化合物，包括在碱存在的情况下用2-羟基环戊基胺与化学式(13)的化合物接触：

以提供化学式(5)的化合物。

反应通常在质子溶剂中进行，例如乙醇或异丙醇，或可替换地二氯甲烷。适宜的碱的实例是氢氧化钠、碳酸钾、以及三乙胺，优选为三乙胺。在一种优选的具体实施方式中，2-羟基环戊基胺是作为单一异构体即(1R，2R)-2-羟基环戊基胺存在的。

在第三个方面，本发明涉及制备化学式(13)的化合物，包括用碱接触化学式(12)的化合物；

优选的碱是氨水，并且反应通常在惰性溶剂中进行，例如甲醇或二氯甲烷。

在第四个方面，本发明涉及制备化学式(12)的化合物，包括在碱存在的情况下用亚硫酰氯与6-氯嘌呤核苷，即化学式(1)的化合物接触：

在一种优选的具体实施方式中，反应是在惰性溶剂存在的情况下进行的，例如乙腈或二氯甲烷。碱通常是吡啶。

在第五个方面，本发明涉及制备化学式I的化合物：

其中R是可选取代的苯基：

包括以下步骤：

(a)在碱存在的情况下用亚硫酰氯与化学式(1)的化合物接触：

(b)用碱接触步骤(a)的产物以形成化学式(13)的化合物：

(c)在碱存在的情况下用2-羟基环戊基胺与步骤(b)的产物接触以提供化学式(5)的化合物：

以及

(d)在碱存在的情况下用化学式RSH的化合物与步骤(c)的产物接触，其中R如上所定义。

具体实施方式

优选的具体实施方式

在步骤(a)中，反应通常在惰性溶剂存在的情况下进行，例如乙腈或二氯甲烷。碱通常是吡啶。

在步骤(b)中，碱通常是氨水。反应优选在惰性溶剂存在的情况下进行。

在步骤(c)中，反应在惰性溶剂中进行，优选的碱是三乙胺，并且2-羟基环戊基胺优选作为单一异构体即(1R，2R)-2-羟基环戊基胺而存在。

在步骤(d)中，优选的溶剂是N，N-二甲基甲酰胺或N，N-二甲基乙酰胺，更优选为N，N-二甲基乙酰胺，并且优选的碱是碳酸钾。

优选的是，步骤(a)和步骤(b)中的化学式的产物，化学式(12)和化学式(13)的化合物是未经分离的，而是在其后的反应步骤中用作粗产物。以这种方式，该方法去除了昂贵和费时的纯化步骤，其在进行大规模制备时是重要的及需要考虑的问题。

定义和一般参数

如在本说明书中所使用的，以下单词和词组除在其中所使用的上下文中另有说明外，通常具有如以下所描述的含义。

术语“烷基”是指单价支链或无支链饱和烃链，其具有1至20个碳原子。此术语是通过基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基、正癸基、十四烷基等来加以举例说明的。

术语“取代的烷基”是指：

1)如上所定义的烷基基团，其具有1至5个取代基，优选1至3个取代基，这些取代基选自由链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2；或

2)如上所定义的烷基基团，其被独立选自氧、硫以-NR_a-的1至5个原子或基团所中断，其中R_a是选自氢、烷基、环烷基、链烯基、环烯基、炔基、芳基、杂芳基以及杂环基。所有取代基可以可选地进一步被烷基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)_nR取代，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2；或

3)如上所定义的烷基基团，其具有如上所定义的1至5个取代基并且被如上所定义的1至5个原子或基团所中断。

术语“低级烷基”是指单价支链或无支链饱和烃链，其具有1至6个碳原子。此术语是通过基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等来加以举例说明的。

术语“取代的低级烷基”是指：如上所定义的低级烷基，其具有如针对取代的烷基所定义的1至5个取代基，优选1至3个取代基；或如上所定义的低级烷基基团，其被如针对取代的烷基所定义的1至5个原子所中断；或如上所定义的低级烷基基团，其具有如上所定义的1至5个取代基并且被如上所定义的1至5个原子所中断。

术语“亚烷基”是指支链或无支链饱和烃链的双基，优选地其具有1至20个碳原子，优选1至10个碳原子，更优选1至6个碳原子。此术语是通过基团如亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚丙基异构体(例如，-CH₂CH₂CH₂-和-CH(CH₃)CH₂-)等来加以举例说明的。

术语“低级亚烷基”是指支链或无支链饱和烃链的双基，其具有1至6个碳原子。

术语“取代的亚烷基”是指：

(1)如上所定义的亚烷基基团，其具有1至5个取代基，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2；或

(2)如上所定义的亚烷基基团，其被独立选自氧、硫以及NR_a-的1至5个原子或基团所中断，其中R_a是选自氢、可选取代的烷基、环烷基、环烯基、芳基、杂芳基以及杂环基，或选自羰基、羧基酯、羧酰胺以及磺酰基的基团；或

(3)如上所定义的亚烷基基团，其具有如上所定义的1至5个取代基并且被如上所定义的1至20个原子所中断。取代的亚烷基的实例有氯亚甲基(-CH(Cl)-)、氨基亚乙基(-CH(NH₂)CH₂-)、甲氨基亚乙基(-CH(NHMe)CH₂-)、2-羧基亚丙基异构体(-CH₂CH(CO₂H)CH₂-)、乙氧基乙基(-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-)、乙基甲氨基乙基(-CH₂CH₂N(CH₃)CH₂CH₂-)、1-乙氧基-2-(2-乙氧基-乙氧基)乙烷(-CH₂CH₂O-CH₂CH₂-OCH₂CH₂-OCH₂CH₂-)等等。

术语“芳烷基”是指共价连接于亚烷基基团的芳基基团，其中芳基和亚芳基在本文中加以定义。“可选取代的芳烷基”是指共价连接于可选取代的亚烷基基团的可选取代的芳基基团。这样的芳烷基基团是通过苄基、3-(4-甲氧基苯基)丙基等加以举例说明的。

术语“烷氧基”是指基团R-O-，其中R是可选取代的烷基或可选取代的环烷基，或R是基团-Y-Z，其中Y是可选取代的亚烷基而Z是可选取代的链烯基、可选取代的炔基；或可选取代的环烯基，其中烷基、链烯基、炔基、环烷基以及环烯基如在本文中所定义。优选的烷氧基基团是烷基-O-，并且包括，例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基、正己氧基、1，2-二甲基丁氧基等等。

术语“烷硫基”是指基团R-S-，其中R如针对烷氧基所定义。

术语“链烯基”是指支链或无支链的不饱和烃基团的单价基团，优选具有2至20个碳原子，更优选2至10个碳原子以及甚至更优选2至6个碳原子，并且具有1至6个，优选1个双键(乙烯基)。优选的链烯基基团包括乙烯基(-CH＝CH₂)、1-亚丙基或烯丙基(-CH₂CH＝CH₂)、异亚丙基(-C(CH₃)＝CH₂)、双环[2.2.1]庚烯等等。在链烯基和氮相连的情况下，双键不能在氮的α位。

术语“低级链烯基”是指如上所定义的链烯基，其具有2至6个碳原子。

术语“取代的链烯基”是指如上所定义的链烯基基团，其具有1至5个取代基，优选1至3个取代基，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“炔基”是指不饱和烃的单价基团，优选具有2至20个碳原子，更优选2至10个碳原子，甚至更优选2至6个碳原子，并且具有至少1个而优选1至6个乙炔(三键)不饱和部位。优选的炔基基团包括乙炔基(-C≡CH)、炔丙基(或丙炔基，-C≡CCH₃)等等。在炔基和氮相连的情况下，三键不能在氮的α位。

术语“取代的炔基”是指如上所定义的炔基基团，其具有1至5个取代基，优选1至3个取代基，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“氨基羰基”是指基团-C(O)NRR，其中每个R独立地是氢、烷基、芳基、杂芳基、杂环基，或其中两个R基团相连以形成杂环基团(例如，吗啉代)。所有取代基可以可选地进一步被下述基团所取代：烷基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“酰氨基”是指基团-NRC(O)R，其中每个R独立地是氢、烷基、芳基、杂芳基、或杂环基。所有取代基可以可选地进一步被下述基团所取代：烷基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“酰氧基”是指基团-O(O)C-烷基、-O(O)C-环烷基、-O(O)C-芳基、-O(O)C-杂芳基、以及-O(O)C-杂环基。所有取代基可以可选地进一步被下述基团所取代：烷基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“芳基”是指6至20个碳原子的芳香族碳环基团，其具有单环(例如，苯基)或多环(例如，联苯基)，或多个稠环(例如，萘基或蒽基)。优选的芳基包括苯基、萘基等等。

除非针对芳基取代基的定义另有限定，上述芳基基团可以可选地被1至5个取代基、优选1至3个取代基所取代，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“芳氧基”是指基团芳基-O-，其中芳基基团如上所定义，并且包括同样如上所定义的可选取代的芳基基团。术语“芳硫基”是指基团R-S-，其中R是如针对芳基所定义。

术语“氨基”是指基团-NH₂。

术语“取代的氨基”是指基团-NRR，其中每个R独立地选自由氢、烷基、环烷基、羧基烷基(例如，苄氧基羰基)、芳基、杂芳基以及杂环基组成的组，条件是两个R基团不都是氢，或基团-Y-Z，其中Y是可选取代的亚烷基而Z是链烯基、环烯基、或炔基。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“羧基烷基”是指基团-C(O)O-烷基、-C(O)O-环烷基，其中烷基和环烷基是如在本文中所定义的，并且可以可选地进一步被下述基团取代：烷基、链烯基、炔基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、或-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“环烷基”是指3至20个碳原子的环烷基基团，其具有单环或多个稠环。这样的环烷基基团包括，例如，单环结构如环丙基、环丁基、环戊基、环辛基等，或多环结构如金刚烷基、以及双环[2.2.1]庚烷，或稠合有芳基基团的环烷基基团，例如茚满，以及类似基团。

术语“取代的环烷基”是指环烷基基团，其具有1至5个取代基，优选1至3个取代基，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。

术语“卤素”或“卤代”是指氟代、溴代、氯代、以及碘代。

术语“酰基”表示基团-C(O)R，其中R是氢、可选取代的烷基、可选取代的环烷基、可选取代的杂环基、可选取代的芳基、以及可选取代的杂芳基。

术语“杂芳基”是指芳香族基团(即不饱和的)，其包括1至15个碳原子以及在至少一个环内的1至4个选自氧、氮以及硫的杂原子。

除非针对杂芳基取代基的定义另有限定，上述杂芳基基团可以可选地被1至5个取代基、优选1至3个取代基所取代，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基所取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。这样的杂芳基基团可以具有单环(例如，吡啶基或呋喃基)或多个稠环(例如，中氮茚基、苯并噻唑基、或苯并噻吩基)。氮杂环和杂芳基的实例包括但不限于：吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、中氮茚、异吲哚、吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、2，3-二氮杂萘(酞嗪)、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉(肉啉)、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、吖啶、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、类似基团以及含N-烷氧基-氮的杂芳基化合物。

术语“杂芳氧基”是指基团杂芳基-O-。

术语“杂环基”是指具有单环或多个稠环的单价饱和或部分不饱和基团，其具有1至40个碳原子以及在环内的1至10个选自氮、硫、磷、和/或氧的杂原子，优选为1至4个杂原子。

化学式I的化合物包括下述定义：“当与和它们相连的氮原子一起考虑时，R和YR¹表示可选取代的杂环基”。这样的定义包括在环内仅含有氮的杂环，例如，吡咯烷类和哌啶类，并且还包括在环内具有一个以上杂原子的杂环，例如哌嗪类、吗啉类等。

除非针对杂环取代基的定义另有限定，上述杂环基团可以可选地被1至5个取代基、优选1至3个取代基所取代，这些取代基选自由烷基、链烯基、炔基、烷氧基、环烷基、环烯基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、氨基羰基、烷氧基羰基氨基、叠氮基、氰基、卤素、羟基、酮基、硫代羰基、羧基、羧基烷基、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基、硫羟基、烷硫基、芳基、芳氧基、杂芳基、氨基磺酰基、氨基羰基氨基、杂芳氧基、杂环基、杂环氧基、羟氨基、烷氧基氨基、硝基、-SO-烷基、-SO-芳基、-SO-杂芳基、-SO₂-烷基、-SO₂-芳基以及-SO₂-杂芳基组成的组。除非通过定义另有限定，所有取代基可以可选地进一步被1至3个取代基取代，这些取代基选自烷基、羧基、羧基烷基、氨基羰基、羟基、烷氧基、卤素、CF₃、氨基、取代的氨基、氰基、以及-S(O)_nR，其中R是烷基、芳基、或杂芳基而n是0、1或2。杂环基团可以具有单环或多个稠环。优选的杂环包括四氢呋喃基、吗啉代、哌啶基等。

术语“硫羟基”是指基团-SH。

术语“取代的烷硫基”是指基团-S-取代的烷基。

术语“杂芳硫(羟)基”是指基团-S-杂芳基，其中杂芳基基团如上所定义，其包括同样如上所定义的可选取代的杂芳基基团。

术语“亚砜”是指基团-S(O)R，其中R是烷基、芳基、或杂芳基。“取代的亚砜”是指基团-S(O)R，其中R是如在本文中所定义的取代的烷基、取代的芳基、或取代的杂芳基。

术语“砜”是指基团-S(O)₂R，其中R是烷基、芳基、或杂芳基。“取代的砜”是指基团-S(O)₂R，其中R是如在本文中所定义的取代的烷基、取代的芳基、或取代的杂芳基。

术语“酮基”是指基团-C(O)-。术语“硫代羰基”是指基团-C(S)-。术语“羧基”是指基团-C(O)-OH。

术语“质子溶剂”一般是指包含羟基基团的溶剂。质子溶剂的实例是甲醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丁醇等等。

“可选的”或“可选地”是指其后描述的事件或情况可以发生或者可以不发生，以及该描述包括所述事件或情况发生的情形以及所述事件或情况不发生的情形。

术语“化学式I的化合物”是用来包括如所披露的本发明的化合物，以及这样的化合物的药用盐、药用酯、以及药物前体。

术语“有效治疗量”是指当向需要这样的治疗的哺乳动物给药时，化学式I的化合物的量足以实现如下文所定义的有效治疗。有效治疗量将随以下因素而变化：待治疗的受治疗者和病情、受治疗者的体重和年龄、病情的严重程度、给药方式等，这些可以由本领域普通技术人员很容易确定。

术语“治疗”或“处理”是指对哺乳动物疾病的任何治疗，包括：

(i)预防疾病，即，使疾病的临床症状不发展；

(ii)抑制疾病，即，阻止临床症状的发展；和/或

(iii)缓解疾病，即，使临床症状消退。

在许多情况下，本发明的化合物借助氨基和/或羧基基团或与其类似基团的存在而能够形成酸式盐和/或碱式盐。术语“药用盐”是指这样的盐，其保留化学式I的化合物的生物有效性和性能，并且在生物上或在其它方面是合乎需要的。药用碱加成盐可以由无机碱和有机碱制备。衍生自无机碱的盐(仅举例说明)包括钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐以及镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于：伯胺、仲胺以及叔胺的盐，如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺、三(取代的烷基)胺、链烯基胺、二链烯基胺、三链烯基胺、取代的链烯基胺、二(取代的链烯基)胺、三(取代的链烯基)胺、环烷基胺、二(环烷基)胺、三(环烷基)胺、取代的环烷基胺、二取代的环烷基胺、三取代的环烷基胺、环烯基胺、二(环烯基)胺、三(环烯基)胺、取代的环烯基胺、二取代的环烯基胺、三取代的环烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、杂芳基胺、二杂芳基胺、三杂芳基胺、杂环基胺、二杂环基胺、三杂环基胺、混合的二胺和三胺，其中在胺上的至少两个取代基是不同的并且选自由烷基、取代的烷基、链烯基、取代的链烯基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、杂芳基、杂环、以及类似基团组成的组。还包括这样的胺，其中两个或三个取代基和氨基氮一起形成杂环基或杂芳基基团。

仅为举例说明，适宜的胺的特定实例包括：异丙胺、三甲胺、二乙胺、三异丙胺、三正丙胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨丁三醇、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、海巴明、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、N-烷基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、吗啉、N-乙基哌啶等等。

药用的酸加成盐可以由无机酸和有机酸制备。由其可以衍生盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由其可以衍生盐的有机酸包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、丁二酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸等。

如本文所使用的，“药用载体”包括所有溶剂、分散介质、涂层、抗菌药以及抗真菌药、等渗剂以及吸收延迟剂等等。这样的介-质和药剂用于药物活性物质在本领域是众所周知的。可以设想将其用于治疗组合物中，除非任何常规的介质或药剂与活性组分不相容。也可以将辅助的活性组分加入组合物中。

作为具有高度内在(固有)功效的激动剂的化合物可引起生物系统能够引起的最大效应。这些化合物称作“完全激动剂”。如果结合于效应物过程(effector process)的效率较高的话，它们能够诱发最大可能的效应而没有占据所有受体。相反，“部分激动剂”可诱发反应(应答)，但不能诱发生物系统能够引起的最大反应(应答)。它们可以具有合理的亲合力，但具有较低的内在功效。部分A₁腺苷激动剂对于慢性治疗可以具有附加的益处，因为它们较小可能诱导A₁受体的脱敏作用(R.B.Clark，B.J.Knoll，R.Barber TiPS，Vol.20(1999)p.279-286)，并且较小可能引起副作用。

命名

本发明的化合物的命名和编号是用化学式I的典型化合物来说明的，其中R是2-氟苯基：

其被命名为：

(4S，5S，2R，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-2-{6-[(2-羟基环戊基)氨基]-嘌呤-9-基}草脲胺-3，4-二醇，或：

2-{6-[((1RS，2RS)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]草脲胺-3，4-二醇。

其中6-氨基取代基衍生自(1S，2S)-2-氨基环戊基-1-醇的相关化合物被命名为2-{6-[((1S，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]草脲胺-3，4-二醇。其中6-氨基取代基衍生自(1R，2R)-2-氨基环戊基-1-醇的相关化合物被命名为2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇。其中6-氨基取代基衍生自(1R，2S)-2-氨基环戊基-1-醇的相关化合物被命名为2-{6-[((1R，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇。其中6-氨基取代基衍生自(1S，2R)-2-氨基环戊基-1-醇的相关化合物被命名为2-{6-[((1S，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇。

合成反应参数

术语“溶剂”、“惰性有机溶剂”或“惰性溶剂”是指在与其一起描述的反应条件下为惰性的溶剂，[包括，例如，苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、吡啶等]。除非有相反的规定，在本发明的反应中所使用的溶剂是惰性有机溶剂。

术语“足量”是指加入足以达到所述功能的量，例如使溶液达到所希望的体积(即，100％)。

化学式I的化合物的合成

在反应图解I中示出了由6-氯嘌呤核苷开始来制备化学式I的化合物的过程。

反应图解I

其中Ph是苯基。

步骤1-化学式(2)的制备

化学式(2)的化合物是在质子溶剂(优选乙醇)中、在碱(优选三乙胺)存在的情况下、并在约回流的温度下通过化学式(1)的化合物与2-(苄氧基)环戊基胺反应约24小时而制得的。当反应基本完成时，通过常规方法来分离化学式(2)的产物，例如，减压下除去溶剂，在乙酸乙酯和水之间分配残留物，从有机层中除去溶剂，以及通过例如由乙酸乙酯/己烷的结晶作用或沉淀作用来纯化残留物。

步骤2-化学式(3)的制备

然后将化学式(2)的化合物转化成化学式(3)的化合物。在碱(优选吡啶)存在的情况下，将亚硫酰氯加入到化学式(2)的化合物在惰性溶剂(优选乙腈)中的悬浮液中。优选在约0℃下反应约4小时，然后使升温至室温并过夜。当反应基本完成时，在减压下浓缩获得的悬浮液以提供化学式(3)的化合物，其用于下一步骤而无需纯化。

步骤3-化学式(4)的制备

化学式(4)的化合物是通过将化学式(3)的化合物溶解于碱(优选氢氧化铵)和质子溶剂(优选甲醇)的混合物中而制得的。在约室温下反应约30分钟。当反应基本完成时，通过常规方法来分离化学式(4)的产物，例如，减压下除去溶剂，在乙酸乙酯和水之间分配残留物，并在减压下除去乙酸乙酯。残留物用于下一步骤而无需进一步提纯。

步骤4-化学式(5)的制备

然后在催化剂(优选氢氧化钯)存在的情况下，通过用部分不饱和环烷基化合物(优选环己烯)进行处理来对化学式(4)的化合物进行去保护。可替换地，甲酸铵可以用来代替环己烯。在质子溶剂(优选乙醇)中并优选在约回流温度下反应约18小时。当反应基本完成时，通过常规方法来分离化学式(5)的产物，例如通过在减压下除去溶剂，接着研磨残留物。

步骤5-化学式I的制备

然后使化学式(5)的化合物与化学式RSH的化合物(优选2-氟苯硫酚)进行反应。在质子溶剂(优选N，N-二甲基甲酰胺)中、在碱(例如氢氧化钠)存在的情况下、并在约100℃的温度下反应约3至5小时。可替换地，在质子溶剂(优选N，N-二甲基甲酰胺)中、在叔碱(优选三乙胺)存在的情况下、并在约室温下反应约1至5天，优选约3天。当反应基本完成时，通过常规方法来分离化学式I的产物，例如通过在减压下除去溶剂，接着用乙醚研磨残留物。

起始原料的制备

在步骤1中，将1，2-(苄氧基)-环戊基胺用作起始原料。这种化合物(作为外消旋混合物或作为单独的异构体)可商业获得或可以通过本领域技术人员熟知的方法加以制备。例如，一种制备(1R，2R)-2-(苄氧基)-环戊基胺的方法图示在以下的反应图解II中。

反应图解II

在第一步骤中，通过常规方法，例如通过在惰性溶剂中并在4-二甲氨基吡啶存在的情况下进行反应，用(BOC)₂O(二碳酸二叔丁酯)对化学式(a)的化合物((1R，2R)-2-氨基环戊-1-醇)进行N保护。然后在碱(优选氢化钠)存在的情况下，使受保护的环戊醇(b)衍生物与苄基溴反应，用以形成(c)，接着以常规方法例如用在二氧杂环己烷中的盐酸对其进行去保护。

从(1S，2S)-2-氨基环戊-1-醇开始可提供具有与化学式(d)相反的立体化学特性的化合物，而从(1RS，2RS)-2-氨基环戊-1-醇开始可提供化学式(d)的化合物的外消旋类似物。

在反应图解III中示出了一种用于制备化学式I的化合物的可替换过程。

反应图解III

起始的受保护的环戊基衍生物可以衍生自(1R，2R)-2-氨基环戊-1-醇、(1S，2S)-2-氨基环戊-1-醇、或(1RS，2RS)-2-氨基环戊-1-醇。通过本领域熟知的方法，羟基基团被保护成为叔丁基二甲基甲硅烷基基团。

如反应图解IV所示，可替换地，可以常规合成化学式I的化合物而无需使用任何保护基团。

反应图解IV

在反应图解V中示出了一种优选的制备化学式I的化合物的方法，该方法没有必要利用任何保护基团、或分离和/或纯化中间体。

反应图解V

步骤1-化学式(12)的制备

通过与亚硫酰氯的反应将化学式(1)的化合物转化成化学式(12)的化合物。通常，在约2～2.5摩尔当量的碱(优选吡啶)存在的情况下，将化学式(1)的化合物悬浮在惰性溶剂(优选乙腈)中，并在约1小时内缓慢加入约5～5.5摩尔当量的亚硫酰氯。优选在约0℃下反应约3小时，然后使升温至室温并过夜。当反应基本完成时，在减压下浓缩获得的悬浮液以提供化学式(12)的化合物，其优选用于下一步骤而无需提纯。

步骤3-化学式(13)的制备

通过将步骤1的粗产物溶解在质子溶剂(优选含水甲醇)和碱(优选氨水)的混合物中，由化学式(12)的化合物来制备化学式(13)的化合物。在约0℃下反应约1小时，接着在室温下反应约3小时。当反应基本完成时，通过常规方法分离化学式(13)的产物，并用于下一步骤而无需进一步提纯。

步骤4-化学式(5)的制备

在质子溶剂(优选异丙醇)中，在约3摩尔当量碱(优选三乙胺)存在的情况下，并在约回流的温度下通过与约1～1.1摩尔当量的2-羟基环戊基胺反应约24小时，由步骤3的粗产物(化学式(13)的化合物)而制备化学式(5)的化合物。当反应基本完成时，通过常规方法来分离化学式(5)的产物，例如通过减压下除去溶剂并用水搅拌残留物。

步骤5-化学式I的制备

然后使步骤4的产物(化学式(14)的化合物)与约3～5摩尔当量的化学式RSH的化合物，例如2-氟苯硫酚反应。在质子溶剂(通常为N，N-二甲基甲酰胺)中，在约5～6摩尔当量的碱(例如氢化钠、氢氧化钠、或三乙胺，优选三乙胺)存在的情况下，在约室温下反应约1～5天，优选约3天。当反应基本完成时，通过常规方法分离化学式I的产物。可以通过由各种溶剂，例如甲醇、乙醇、异丙醇或甲醇和乙醇的混合物的再结晶作用来另外纯化产物。可替换地，可以通过由乙酸乙酯的再结晶作用或用乙酸乙酯制成浆料来纯化产物。

应用、试验以及给药

一般应用

化学式I的化合物可有效治疗已知对给予A₁腺苷受体的部分或完全激动剂有反应(应答)的病症。这样的病症包括但不限于：心律的急性和慢性病症，尤其是那些以快速心率为特征的疾病，其中(快速)心率是由窦房、心房、以及AV结组织中的异常所驱动(激活)。这样的病症包括但不限于：心房纤颤、室上性心动过速以及心房扑动、充血性心力衰竭、非胰岛素依赖性糖尿病、高血糖、癫痫(抗惊厥活性)、以及神经保护。A₁激动剂在脂肪细胞中还具有抗脂解效应，其导致降低非酯化脂肪酸的释放。

试验

如在以上引用的那些专利和文献、以及以下的实施例中所描述的，并通过对本领域技术人员来说显而易见的方法进行活性试验。

以下实施例是用来说明本发明的优选具体实施方式。本领域技术人员应当明了，在以下实施例中披露的技术代表由本发明人发现的并在本发明的实施中很好起作用的技术，因此可以被认为构成了其实施的优选方式。然而，根据本发明披露的内容，本领域技术人员应当明了，在不偏离本发明的精神和范围的情况下，可以对所披露的特定的具体实施方式进行多种变化并仍然获得相同或类似的结果。

实施例1

化学式(2)的化合物的制备

向6-氯嘌呤核苷(10.0g，35mmol)的乙醇(350mL)溶液中加入三乙胺(10.0mL，100mmol)和(1R，2R)-2-(苄氧基)环戊基胺(5.2g，52mmol)。回流混合物24小时，在此期间反应从悬浮液变成透明溶液。在减压下除去乙醇，然后在乙酸乙酯和水(100mL∶200mL)之间分配残留物。分离有机层，然后用乙酸乙酯(2×75mL)洗涤水层。(硫酸钠)干燥合并的有机层，然后在减压下除去溶剂。将残留物溶解在乙酸乙酯(150mL)中，然后通过加入己烷来沉淀产物，以获得作为白色固体的2-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇(12.0g，77％)。

¹H NMR(CD₃OD)δ1.62-2.16(m，6H)，3.26-3.29(m，1H，NHCH)，3.68-3.85(m，2H，CH₂-5’)，4.03-4.10(m，1H，CH-4’)，4.12-4.16(m，1H，CHOBn)，4.16-4.19(m，1H，3’CH)，4.71(s，2H，OCH₂Ph)，4.83-4.92(m，1H，2’CH)，5.98(d，J＝6Hz，1H，H-1’)，7.23-7.35(m，5H，PhH)，8.15(S，1H，C-2H)。

B.化学式(2)的化合物的制备

类似地，按照以上1A的步骤，但用2-(苄氧基)环戊基胺的其它异构体代替(1R，2R)-2-(苄氧基)环戊基胺，制得以下化合物：

2-(6-{[(1S，2S)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇；

2-(6-{[(1R，2S)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇；

2-(6-{[(1S，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇；以及

2-(6-{[(1RS，2RS)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇。

实施例2

化学式(3)的化合物的制备

在0℃下，向在乙腈(15mL)中的2-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇(2.0g，4.5mmol)和吡啶(0.728mL，9mmol)经搅拌的悬浮液中滴加亚硫酰氯(1.7mL，22.5mmol)。在0℃下搅拌4小时以后，使反应升温至室温，然后搅拌过夜。在减压下从产生的悬浮液除去溶剂，以提供4-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷(dioxathiolan)-2-酮，其用于下一步骤而无需进一步提纯。

B.化学式(3)的化合物的制备

类似地，按照以上2A的步骤，但用2-(6-{[2-(苯基甲氧基)环戊基]-氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇的其它异构体代替2-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]-氨基}嘌呤-9-基)(4S，3R，5R)-5-(羟甲基)草脲胺-3，4-二醇，制得以下化合物：

4-(6-{[(1S，2S)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮；

4-(6-{[(1R，2S)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮；

4-(6-{[(1S，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮；以及

4-(6-{[(1RS，2RS)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮。

实施例3

化学式(4)的化合物的制备

将来自实施例2的4-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮溶解在甲醇和水(40mL/2mL)的混合物中，然后向此溶液中滴加浓氢氧化铵(2.2mL，28％)。在23℃下搅拌30分钟以后，在减压下除去溶剂，然后用水(15mL)稀释残留物。用乙酸乙酯(3×75mL)萃取含水混合物，用MgSO4干燥，然后在减压下除去溶剂，以提供2-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇，其用于下一步骤而无需进一步提纯。

B.化学式(4)的化合物的制备

类似地，按照以上3A的步骤，但用4-(6-{[2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮的其它异构体代替4-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(6S，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮，制得以下化合物：

2-(6-{[(1S，2S)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇；

2-(6-{[(1R，2S)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇；

2-(6-{[(1S，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇；以及

2-(6-{[(1RS，2RS)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇。

实施例4

化学式(5)的化合物的制备

将在实施例3中获得的2-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇(22g)溶解在乙醇(450mL)和环己烷(200mL)中。向此溶液中加入氢氧化钯(20摩尔％，最初加入1克，6小时后加入1克，以及14小时后加入1克)，并使反应混合物回流18小时。将反应混合物在仍然较热的同时通过硅藻土(或寅氏盐)过滤，然后在减压下从滤液中除去溶剂。用乙醇(20mL)研磨产物，过滤，然后用乙醇洗涤，以提供作为白色粉末的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇(7.3克)。

另外，通过将可回收的氢氧化钯悬浮在甲醇(200mL)中，并在90℃下加热混合物1小时来回收材料。通过硅藻土过滤热混合物，然后用热甲醇进一步洗涤硅藻土。在减压下浓缩滤液，然后用乙醇(20mL)研磨残留物，以提供另外8.6克的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇。

¹H NMR(DMSO-d6)δ1.64-2.18(m，6H)，3.26-3.29(m，1H，NHCH)，3.83-3.97(m，2H，CH₂Cl 5’)，4.03-4.09(m，1H，CH-4’)，4.12-4.17(m，1H，CHOH)，4.16-4.19(m，1H，3’CH)，4.84-4.92(m，1H，2’CH)，5.96(d，J＝6Hz，1H，H-1’)，7.23-7.35(m，5H，PhH)，8.15(S，1H，C-2H)，8.39(s，1H，C-8H)。

B.化学式(5)的化合物的制备

类似地，按照以上4A的步骤，但用2-(6-{[2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇的其它异构体代替2-(6-{[(1R，2R)-2-(苯基甲氧基)环戊基]氨基}嘌呤-9-基)(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇，制得以下化合物：

实施例5

化学式I的化合物的制备，其中R是2-氟苯基

向2-氟苯硫酚(38mL，406mmol)的2N氢氧化钠(100mL)溶液中加入在N，N-二甲基甲酰胺(120mL)中的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇(15.0g，40.6mmol)。将混合物升温至100℃持续4小时，通过TLC跟踪反应进程。在减压下除去N，N-二甲基甲酰胺，接着用水(200mL)稀释剩余的混合物，用乙酸中和，用乙酸乙酯(3×125mL)萃取，然后用MgSO₄干燥合并的有机层。在减压下除去溶剂以后，用乙醚研磨残留物并过滤，以提供16克作为白色粉末的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]草脲胺-3，4-二醇(产率为85％)。

¹H NMR(DMSO-d6)δ1.66-2.27(m，6H)，3.42-3.59(m，1H，NHCH)，4.05-4.14(m，2H)，4.03-4.09(m，1H，CH-4’)，4.14-4.19(m，1H)，4.16-4.19(m，1H，3’CH)，4.84-4.92(m，1H，2’CH)，5.97(d，J＝6Hz，1H，H-1’)，7.05-7.55(m，4H，PhH)，8.10(S，1H，C-2H)，8.15(s，1H，C-8H)。

B.化学式I的化合物的制备，其中R是2-氟苯基

类似地，按照以上5A的步骤，但用2-{6-[(2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇的其它异构体代替2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇，制得以下化合物：

2-{6-[((1S，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]草脲胺-3，4-二醇；

2-{6-[((1R，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]草脲胺-3，4-二醇；

2-{6-[((1S，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]草脲胺-3，4-二醇；以及

C.化学式I的化合物的制备，其中改变R

类似地，按照以上5A的步骤，但用化学式RSH的其它苯硫酚代替2-氟苯硫酚，制得化学式I的其它化合物。

实施例6

化学式(12)的化合物的制备

制备1

在55分钟的时间内，向在干燥的乙腈(600ml)中的6-氯嘌呤核苷(50.0g，174.4mmol)和经蒸馏的吡啶(30ml，370mmol)的冷(0℃，冰浴)悬浮液中滴加亚硫酰氯(SOCl₂，66.0ml，907mmol)。在0℃下搅拌反应混合物3小时，然后在室温下搅拌18小时。在减压和40℃下浓缩黄色溶液，然后在高真空下干燥6小时。将残留物(6S，4R，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4-(6-氯嘌呤-9-基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮(12)用于随后的反应而无需进一步提纯。

2.化学式(12)的化合物的可替换的制备

在30～60分钟的时间内，向在干燥的二氯甲烷(15升)中的6-氯嘌呤核苷(1Kg)和经蒸馏的吡啶(850ml)的混合物中滴加亚硫酰氯(SOCl₂，530ml)，同时保持温度低于30℃。在30℃下搅拌反应混合物4小时，然后冷却至20℃。加入无水乙醇(1700ml)，保持温度在20℃，并搅拌混合物15分钟。然后缓慢加入水(3.5升)，并搅拌混合物30分钟，其后分离内容物。进行相分离，然后用饱和碳酸氢钠(4升)洗涤有机层。在两相分离后，用饱和氯化钠(2.6升)洗涤有机层，分离，然后在减压下除去溶剂直至达到大约4升的体积，从而提供溶解状态的(6S，4R，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4-(6-氯嘌呤-9-基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮(12)的溶液，其用于随后的反应而无需进一步提纯。

实施例7

化学式(13)的化合物的制备

将获自实施例6(制备1)的化学式(12)的化合物溶解于甲醇(1000ml)和蒸馏水(50ml)中。将溶液冷却至0℃，然后在25分钟内滴加浓氨水(28％，56ml)。在0℃下连续搅拌1小时，然后在室温下搅拌3小时。在此期间加入另外10ml的浓氨水(28％)(通过TLC跟踪反应进程，CH₂Cl₂/MeOH为9∶1)。然后在减压下浓缩反应混合物并在室温下用柠檬酸的5％水溶液(1000ml)水解残留物。用乙酸乙酯(1×900ml，1×400ml，1×200ml，2×100ml)萃取水层，然后用饱和碳酸氢钠(450ml)洗涤合并的有机层。用乙酸乙酯(3×50ml)萃取碳酸氢钠水层。用盐水(400ml)洗涤合并的有机层，然后用乙酸乙酯(3×50ml)萃取氯化钠水层。用硫酸钠干燥合并的有机层，过滤，然后在减压下浓缩滤液以给出41.8g化学式(13)的化合物(4S，5S，2R，3R)-5-(氯甲基)-2-(6-氯嘌呤-9-基)草脲胺-3，4-二醇。未进行进一步提纯。

制备2

可替换地，向在实施例6制备2中获得的溶解状态的(6S，4R，3aR，6aR)-6-(氯甲基)-4-(6-氯嘌呤-9-基)-4H，6H，3aH，6aH-草脲胺并[3，4-d]1，3，2-二氧杂硫杂环戊烷-2-酮(12)的溶液中加入氢氧化铵(500ml)，然后在25℃下搅拌混合物12小时。滤出固体，然后用二氯甲烷(500ml)洗涤。合并滤液和洗涤物，然后在真空下将体积减少至约6升。未进行进一步提纯。

实施例8

化学式(5)的化合物的制备

制备1

向在脱气异丙醇(100ml)中的(R，R)-2-氨基戊醇盐酸盐(或氢氯化物)(34.2g，249mmol)和蒸馏三乙胺(用氢化钙干燥，95ml，69g，226mmol)的悬浮液中滴加在400ml异丙醇中的(4S，5S，2R，3R)-5-(氯甲基)-2-(6-氯嘌呤-9-基)草脲胺-3，4-二醇(36.3g，118.7mmol)溶液。在室温下搅拌反应混合物30分钟，然后回流(油浴温度约80℃)20小时。在将反应混合物冷却至室温后，在减压下除去溶剂，然后向残留物中加入1000ml水。在室温下搅拌悬浮液3.5小时，随后滤出固体物质，用水洗涤(1×60ml和1×90ml)，然后在真空下用P₂O₅干燥3天以提供68.0g(81％)作为浅棕色粉末的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇。

制备2

可替换地，将在实施例7、制备2中获得的溶液冷却至20～25℃，然后加入三乙胺(1000ml)，接着加入(R，R)-2-氨基戊醇(530g)。回流混合物8小时，然后在大气压下除去溶剂直至达到约4升的体积。将混合物冷却至55～60℃，加入水(15升)，然后将混合物冷却至20～25℃。搅拌混合物约1小时，然后过滤，用无水乙醇(1.25升)洗涤固体，随后在减压下干燥固体，其间不允许温度超过60℃。

B.类似地，按照以上8A(制备1或制备2)的步骤，但用(S，S)-2-氨基戊醇盐酸盐(或氢氯化物)代替(R，R)-2-氨基戊醇盐酸盐(或氢氯化物)，则制得2-{6-[((1S，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇。

C.类似地，按照以上8A(制备1或制备2)的步骤，但用(1R，2S)-2-氨基戊醇盐酸盐(或氢氯化物)代替(R，R)-2-氨基戊醇盐酸盐(或氢氯化物)，则制得2-{6-[((1R，2S)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇。

D.类似地，按照以上8A(制备1或制备2)的步骤，但用(1S，2R)-2-氨基戊醇氢氯化物代替(R，R)-2-氨基戊醇氢氯化物，则制得2-{6-[((1S，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇。

实施例9

化学式I的化合物的制备，其中R是2-氟苯基

制备1

向在脱气无水N，N-二甲基甲酰胺(1.8升)中的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]-嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇(166.5g，0.457mol)和由氢化钙蒸馏的三乙胺(352ml，256g，2.53mol，4当量)的溶液中加入2-氟苯硫酚(190ml，228g，1.78mol，4当量)，每2-3小时加入38.5ml的部分。在室温下搅拌混合物4天，同时连续将氮气鼓入溶液中(通过¹H NMR对反应进行监测)。在反应完成以后，将反应混合物注入到7升的乙酸乙酯中，然后用3升水进行洗涤。用乙酸乙酯(2×500ml)萃取水层，并用水(3×2升)洗涤合并的有机层，然后减少至约1.8升的体积，从而提供白色固体的悬浮液。在室温下搅拌悬浮液9小时，然后滤出白色沉淀物，用乙醚(3×200ml)洗涤，接着在高真空下干燥24小时，以给出131g(产率为63％)作为白色粉末的2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇(纯度为98.9％)。

通过在1升乙醚/乙醇(50∶1)中搅拌过夜对产物进行进一步纯化，以给出127g的纯2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇。

制备2

将实施例8、制备2的产物(1Kg)溶解在N，N-二甲基乙酰胺(2.7升)中，然后加入碳酸钾(560g)。向保持低于25℃的混合物中加入2-氟苯硫酚(380g)，然后在60～65℃下加热混合物约6小时。然后将混合物冷却至25～30℃，并加入乙酸乙酯(10升)，接着加入氯化钠(260g)的水(4.9升)的溶液，并搅拌混合物15分钟。在分离成两层以后，用氯化钠(260g)的水(4.9升)溶液再次洗涤有机相，然后搅拌混合物15分钟。在分离以后，在大气压下将有机层浓缩至约5升的体积，然后加入甲醇(10升)。在大气压下再次将混合物浓缩至约2.8升的体积，然后将获得的溶液冷却至约35～40℃。然后加入二氯甲烷(5升)，并将混合物保持在约35～40℃1小时，接着冷却至0～5℃之间30分钟。滤出固体产物，用二氯甲烷(2.8升)洗涤，然后在减压下干燥至恒重，其间不允许温度高于50℃，以提供2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇。

通过下述步骤对产物进行进一步提纯：在60～70℃之间的温度下，将1Kg的产物(2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇)溶解在甲醇(20升)中，保温1小时，冷却至45～50℃，然后通过1微米的过滤器过滤溶液，并保持溶液温度高于40℃。将溶液浓缩至约7升，并保持溶液温度高于40℃，然后将得到的溶液保持在50～55℃1小时。然后在2小时内将溶液冷却至-5℃，并将温度保持在-5℃1小时。在-5℃下滤出产物，并使用滤液来洗涤固体，以提供纯的(2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-[(2-氟苯基硫代)甲基]-草脲胺-3，4-二醇)。

B.化学式I的化合物的制备，其中R是2-氟苯基

类似地，按照以上9A(制备1或制备2)的步骤，但用2-{6-[(2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇的其它异构体代替2-{6-[((1R，2R)-2-羟基环戊基)氨基]嘌呤-9-基}(4S，5S，3R)-5-(氯甲基)草脲胺-3，4-二醇，制得以下化合物：

C.化学式I的化合物的制备，其中改变R

类似地，按照以上9A(制备1或制备2)的步骤，但用化学式RSH的其它苯硫酚代替2-氟苯硫酚，制得化学式I的其它化合物。

实施例10

结合测定-DDT ₁ 细胞

细胞培养

在95％空气和5％CO₂的调湿气氛中，利用杜伯科(Dulbecco)改进的Eagle介质(DMEM)，使DDT细胞(仓鼠输精管平滑肌细胞系)在培养皿中生长为单层，其中杜尔贝科改进的Eagle介质(DMEM)含有2.5μg/ml的两性霉素B、100U/ml的青霉素G、0.1mg/ml的硫酸链霉素以及5％的胎牛血清。通过分散在汉克平衡盐溶液(HBSS)(其不含二价阳离子并含有1mM EDTA)中而使细胞每周传代培养两次。然后将细胞接种在生长培养基中，密度为1.2×10⁵个细胞/平皿，接着在大约1天预融合的4天以后进行实验。

膜制品

用HBSS(2×10mL)洗涤附着的细胞两次，在4℃下在5ml的50mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)中借助于橡胶淀帚(橡胶头玻璃搅棒，rubber policeman)擦净平皿，然后均化悬浮液10秒钟。然后在27,000×g下离心悬浮液10分钟。如上所述，通过旋转和离心将小丸再悬浮在均化缓冲液中。将最终的小丸再悬浮在1体积50mM的Tris-HCl缓冲液(pH 7.4，含有5mM的MgCl2)中，用于A1AdoR测定。对于[³⁵S]GTPγS结合测定，将最终的小丸再悬浮在50mM的Tris-HCl中，其pH 7.4、含有5mM的MgCl₂、100mM的NaCl以及1mM的二硫苏糖醇。然后将这种膜悬浮液置于液氮中10分钟，融化(解冻)然后用于测定。借助Bradford^TM测定试剂盒并利用牛血清白蛋白作为标准对蛋白质含量进行测定。

竞争性结合测定

通过在50mM的Tris缓冲液中(5×组织质量的体积，pH＝7.4)均浆来制备猪纹状体。在4℃以及19,000rpm下离心25分钟以后，弃去上清液，并重复该过程两次。对化学式I的化合物进行测定以确定它们对猪纹状体膜制品或DDT1膜制品中的A1受体的亲合力。简单地说，用腺苷脱氨酶和50mM Tris缓冲液(pH＝7.4)处理0.2mg的猪纹状体膜或DDT1细胞膜，接着混合。向猪的膜中加入2μL的本发明化合物的连续稀释的DMSO储备液，其浓度为100微摩尔至10nM。对照(样)只接收2微升的DMSO，然后加入在Tris缓冲液(50mM，pH为7.4)中的用于猪纹状体的拮抗剂[3H]8-环戊基黄嘌呤(CPX)或用于DDT1膜的激动剂[³H]2-氯-6-环戊基腺苷(CCPA)，以获得2nM的最终浓度。在23℃下温育2小时以后，利用膜采集器并利用膜的多次洗涤(3×)来过滤溶液。在提供氚化CPX置换量的闪烁混合剂(scintillation cocktail)中或通过化学式I的化合物的竞争结合来计数滤片(filter disk)。

本测定表明，化学式I的化合物对于A1腺苷受体显示出较高、中等、或较低的亲合力。

实施例11

[ ³⁵ S]GTPγS结合测定

A₁激动剂刺激的[³⁵S]GTPγS结合是通过由Giersckik等人(1991)和Lorenzen等人(1993)所描述方法的改进方法加以测定的。在30℃下，在0.1ml的体积中温育膜蛋白质(30～50μg)90分钟，其中在0.1ml的体积中含有50mM的Tris-HCL缓冲液(pH7.4)、5mM的MgCl₂、100mM的NaCl、1mM的二硫苏糖醇、0.2单位/ml的腺苷脱氨酶、0.5％BSA、1mM EDTA、10mM GDP、0.3nM[³⁵S]GTPγS以及含有或不含有不同浓度的CPA。非特异性结合是通过加入10μM的GTPγS来测定的。激动剂刺激的结合测定为在有CPA的情况下的总结合和在没有CPA的情况下测定的基础结合之间的差异。先前的报道已经表明，激动剂刺激的[35S]GTPγS结合依赖于GDP的存在(Gierschik et al.，1991；Lorenzen et al.，1993；Traynor&Nahorski，1995)。在初步实验中，研究发现，10μMGDP给出CPA依赖性[³⁵S]GTPγS结合的最佳刺激，因而将此浓度用于所有研究中。在饱和实验中，用0.5～1000nM的GTPγS温育0.5nM的[³⁵S]GTPγS。在温育结束时，如上所述，过滤每种悬浮液并测定保留的放射性。

本测定表明，化学式I的化合物是A1腺苷受体的部分或完全激动剂。

实施例12

cAMP测定

利用兔抗体进行的闪烁迫近分析法(SPA)指向cAMP，其中利用腺苷3’，5’-环磷酸2’-O-丁二酰-3-[¹²⁵I]碘酪氨酸甲酯的附加示踪物以及含有抗兔特异性抗体的荧光微球(fluoromicrosphere)，如由Amersham Pharmacia Biotech(Biotrak cellular communication assays(Biotrak细胞通讯测定))所描述的。简单地说，在37℃(5％CO₂和95％湿度)下，在底部透明的96孔微量滴定板中培养DDT1细胞，其中不透明孔的浓度在40μl的HBSS中为10⁴至10⁶个细胞/孔之间。在37℃，在咯利普兰(50μM)以及5μM弗司扣林存在的情况下，用DDT₁细胞在不同浓度下温育本发明的部分或完全A1激动剂(5μl)10分钟。通过用5μl的10％溴化十二烷基三甲铵进行处理来立即溶解细胞，接着利用微孔板摇床进行摇动。在温育(微孔)板5分钟以后，向每个孔中加入免疫试剂溶液(150μl，含有等体积的示踪物、抗血清、以及SPA荧光球(fluorosphere))，接着密封(微孔)板。在23℃下15～20小时以后，通过在微量滴定板闪烁计数器中计数2分钟来测定与荧光微球结合的[¹²⁵I]cAMP的量。与利用类似程序针对cAMP所产生的标准曲线的计数比较来提供在细胞溶胞作用以后存在的cAMP。

本测定表明，化学式I的化合物作为A₁激动剂具有cAMP的部分或完全降低而在功能上是活性的。

虽然本发明根据其特定的具体实施方式而加以描述，但是本领域技术人员应当明了，在不偏离本发明的真正精神和范围的情况下，可以进行多种改进以及进行等同替换。此外，可以作出多种改进以使特定的情况、材料、物质组成、工艺、一个工艺步骤或多个工艺步骤适应本发明的目的、精神和范围。所有这样的改进均包括在所附的权利要求书的范围内。以上引用的所有专利和出版物均以引用方式结合于本文中。

Claims

1.一种用于制备以下化学式的化合物的方法：

包括：

用碱与以下化学式的化合物接触：

2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述碱是氨。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述反应是在甲醇或二氯甲烷中进行的。

4.一种用于制备以下化学式的化合物的方法：

包括：

在碱存在的情况下用亚硫酰氯与以下化学式的化合物接触：

5.根据权利要求4所述的方法，其中，所述碱是吡啶。

6.根据权利要求4或5所述的方法，其中，所述反应是在二氯甲烷中进行的。