CN109906083B

CN109906083B - 含有腺苷衍生物的药物组合物

Info

Publication number: CN109906083B
Application number: CN201780067676.4A
Authority: CN
Inventors: 李相玖; 朴钟宇
Original assignee: Future Medicine Co Ltd
Current assignee: Future Medicine Co Ltd
Priority date: 2016-10-31
Filing date: 2017-10-23
Publication date: 2021-09-17
Anticipated expiration: 2037-10-23
Also published as: US11266650B2; KR101709307B1; JP2019535659A; CA3042181C; CN109906083A; AU2017349214B2; TWI741055B; JP2021073225A; EP3533452A1; WO2018080127A1; TW201828949A; US20200046711A1; JP7175525B2; EP3533452A4; JP6912562B2; US20220143029A1; AU2017349214A1; CN113616659B; CA3042181A1; CN113616659A

Abstract

本发明提供一种用于预防或治疗肝病的药物组合物。用于预防或治疗肝病的药物组合物的活性成份作为活性成分包含以化学式1表示的化合物或其药用盐。

Description

含有腺苷衍生物的药物组合物

技术领域

本发明涉及一种能用于肝病的预防或治疗的药物组合物，更进一步，能有效地用于非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化及肝硬化症的预防或治疗的含有腺苷衍生物的药物组合物。

背景技术

腺苷是一种通过特殊的细胞膜受体来执行多种生理学功能的物质，而存在于细胞外的腺苷在多种生理学体系中起到神经递质的作用，主要起到对特定器官的过度活动进行补偿的作用以及保护身体免受压力的有害效应的作用(Jacobson，K.A.et al，J.Med.Chem.，35，407-422，1992)。这些作用是基于细胞内和细胞外的三磷酸腺苷(ATP)分解生成的腺苷的欲减少细胞的能量需求和增加氧供应的一部分负反馈循环(negativefeedback loop)来实现的。腺苷在维持重要器官(比如脑、心脏和肾脏)的内环境稳定中起重要作用。例如，当从外部将腺苷激动剂给药至脑部时，已证实具有神经保护作用，并且发现其也与疼痛、认知、运动或睡眠相关。

迄今，通过药理学研究和分子克隆研究揭示了两种类型的腺苷受体，即P1 受体和P2受体。对于P1受体而言，腺苷作为底物发挥作用，而对于P2受体而言，三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、尿苷三磷酸(UTP)和尿苷二磷酸(UDP)作为底物发挥作用，从而发挥生理活性。其中，已确认了P1受体具有四个不同亚型的腺苷受体，且可以根据对配体的亲和力、体内分布、作用途径将其分成A₁、A₂和A₃，其中可将A₂进一步分成A_2A和A_2B。这些腺苷受体是 G蛋白-偶合受体(G-protein-coupled receptor)家族的一类，已经使用多种选择性配体揭示了腺苷A₁、A_2A和A_2B受体的药理学特性。但就A₃受体而言，其是在1992年首次发现的(Zhou，Q.Y，et al，Proc.Natl.Acad.Sci.，U.S.A.，89，7432-7436，1992)，而目前进行着大量为确认该受体的病理生理学功能的研究。

腺苷A₁和A₂受体激动剂，大多数是腺苷的衍生物，已经在应用于降血压剂、精神病治疗药、心律失常治疗药、脂类代谢抑制剂(糖尿病治疗药)和神经保护剂方面进行了大量研究。另一方面，A₁和A₂受体的拮抗剂为黄嘌呤(xanthine) 衍生物或多个二环化合物稠合的形式，其被开发为平喘药、抗抑郁药、心律不齐治疗药、肾脏保护剂、帕金森病治疗药和智力增强剂。尽管进行了广泛的研究，但是目前也只开发出了少数市售产品，包括用于治疗室上性心动过速 (supraventricular tachycardia)的腺苷本身、以及腺苷转运抑制剂双嘧达莫 (dipyridamole)，其中，双嘧达莫为用于预防心脏手术后的血液凝固的华法林(Warfarin)的辅助剂。商业化发展进程这样缓慢的原因是由于腺苷受体的分布遍及全身，因此受体被激活时会伴随多种药理作用，简言之，是由于不存在能够只激活期望组织的腺苷受体的化合物。

在腺苷受体中，与众所周知的腺苷A₁和A₂相比，腺苷A₃受体是最近才发现的，因此其被阐明的功能并不多，而为了开发腺苷A₃受体的选择性受体调节剂正进行着大量的研究。目前，为了腺苷A₃受体的药理学研究使用三种放射标记配体，即[¹²⁵I]ABA(N⁶-(4-氨基-3-[¹²⁵I]碘苄基)-腺苷 (N⁶-(4-amino-3-[¹²⁵I]iodobenzyl)-adenosine))、[¹²⁵I]APNEA(N⁶-2-(4-氨基-3-[¹²⁵I] 碘苯基)-乙基腺苷(N⁶-2-(4-amino-3-[¹²⁵I]iodobenzyl)-ethyladenosine))、和 [¹²⁵I]AB-MECA(N⁶-(4-氨基-3-[¹²⁵I]碘苄基)-腺苷-5’-N-甲基甲酰胺 (N⁶-(4-amino-3-[¹²⁵I]iodobenzyl)-adenosine-5’-N-methylcarboxamide))。通过利用放射标记配体的药理学研究发现，当在中国仓鼠卵巢(Chinese Hamster Ovary，CHO)细胞中表达腺苷A₃受体时，A₃受体具有抑制由ATP生成环化一磷酸腺苷(cAMP)的腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase)的作用，并且，当由激动剂激活A₃受体时，证实了A₃受体可激活鸟苷三磷酸-依赖性磷脂酶C(Guanosine triphosphate-dependent phospholipase C)的现象，其中该酶为一种将脑中的磷脂酰肌醇(phosphatidyl inositol)分解成肌醇三磷酸(inositol phosphate)和二酰甘油(DAG)的酶(Ramkumar，V.et al，J.Biol.Chem.，268，168871-168890，1993； Abbracchio，M.P.et al，Mol.Pharmacol.，48，1038-1045，1995)。这些发现显示了在脑缺血(brain ischemia)中，可能存在基于A₃受体激活作用的反应途径的可能性，其理由在于该第二信使系统可意味着脑缺血中的神经损伤的反应途径。并且，已知A₃受体激动剂可抑制炎症介质TNF-α(肿瘤坏死因子)的释放，还抑制同为炎症介质的MIP-1α、白细胞介素-12(interleukin-12)和干扰素-γ (interferon-γ)的生成，同时不仅具有对于脑疾病(如癫痫)的保护效果，还对心脏具有保护效果。另一方面，腺苷A₃受体的失活会引起炎症诱导因子(如从肥大细胞释放的组胺)的释放，起到使支气管收缩的作用，并会在免疫细胞引起细胞凋亡(apoptosis)。因此，腺苷A₃拮抗剂具有可被开发为抗炎剂和平喘药的可能性。因此，如果能开发出具有药理选择性的化合物，可使得开发出用于治疗包括哮喘、炎症、脑缺血、心脏疾病、癌症等多种疾病的药物成为可能。

目前所研究开发触点物质中，代表性的人类腺苷A₃激动剂为核苷系列的 N⁶-(3-碘苄基)-5’-(N-甲基氨基甲酰基)-腺苷 (N⁶-(3-iodobenzyl)-5’-(N-methylcarbamoyl)-adenosine；IB-MECA)和N⁶-(3-碘苄基)-2-氯-5’-(N-甲基氨基甲酰基)-腺苷(N⁶-(3-iodobenzyl)-2-chloro-5’-(N- methylcarbamoyl)-adenosine；CI-IB-MECA)，与对于腺苷A₁和A₂受体的亲和力和选择性相比，其对腺苷A₃受体显示出更高的亲和力和选择性。另一方面，显示出高亲和力的和选择性的腺苷A₃受体拮抗剂大部分不是核苷骨架，而是非- 嘌呤系(nonpurine)的二环化合物(bicyclic compound)，对此有人指出过：其虽然在人类受体中显示出高活性，但对于鼠的A₃受体的活性较弱或几乎没有活性，因此存在无法进行开发可临床适用药物所必须的动物实验的缺点(Baraldi，P. G.et al，Curr.Med.Chem.，12，1319-1329，2005)。然而，与非-嘌呤系二环化合物相比，核苷系的化合物显示出与种间关系无关的高亲和力和选择性，具有易于进行动物实验的优点，据此开发出新药的可能性非常高，因此急需获得该系列的选择性A₃拮抗剂。

本发明人通过各种前期研究发现，为了实现腺苷A₃受体激动剂的作用，其代表性物质IB-MECA和Cl-IB-MECA的结构中的糖的第5位的N-甲基氨基甲酰基是必须要存在的，而碱基部分的第6位要以芳基氨基或烷基氨基取代。即，由于糖的第5位的N-甲基氨基甲酰基通过氢键引起受体的激动作用所必须的结构变化(conformational change)(Kim，S-K.etal，J.Mol.Graph.Model.，25， 562-577，2006)，因此如果能合成出去除糖的第5位的N-甲基氨基甲酰基的物质，被认为是有可能被开发为腺苷A₃受体拮抗剂。

另一方面，肝病(liver disease)中的非酒精性脂肪肝炎(非酒精性脂肪性肝炎(Nonalcoholic steatohepatitis；NASH)或非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholic fattyliver disease；NAFLD))指的是不源于饮酒而源于肥胖、糖尿病、高血脂、药物等的疾病。

对于非酒精性脂肪肝炎而言，脂肪蓄积在肝细胞内而导致肝细胞变性/坏死，且会由于由此导致的炎症及肝纤维化(liver fibrosis)而发展成为肝硬化 (cirrhosis)及肝癌(liver cancer)，因此在全世界范围内被视为严重疾病。

为此，本发明人首次将腺苷A₃受体拮抗剂作为非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症及肝硬化症的预防及治疗药物进行了研究，并成功地合成出了一种新型的腺苷衍生物化合物而完成了本发明，其中，该新腺苷衍生物化合物可抑制肝组织的脂肪变性(steatosis)、炎症(inflammation)及气球样变(ballooning)而具有缓解非酒精性脂肪肝炎的活性，并具有对肝组织的纤维化的抑制效应。

发明内容

本发明要解决的技术问题

本发明所要解决的技术问题为，提供一种含有腺苷衍生物的药物组合物，该含有腺苷衍生物的药物组合物作为能够预防或治疗非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症、肝硬化症等肝病的腺苷A₃受体拮抗剂而发挥作用。

本发明所要解决的技术问题不限于前述技术问题，本领域技术人员可以根据以下的记载而明确地了解到未提及的其它技术问题。

技术方案

为解决上述技术问题，根据本发明一实施例的用于预防或治疗肝病的药物组合物，作为活性成份包含以下化学式1表示的化合物或其药用盐。

化学式1

(在上述式中，A是S；R是非取代或者独立或选择性地被一个或两个以上的C₆～C₁₀的芳基取代的直链或支链的C₁～C₅的烷基、非取代或者独立或选择性地被选自卤素及直链或支链的C₁～C₄的烷氧基中的一个或两个以上取代的苄基、或由羟基羰基取代的苄基；Y是H或卤族元素。)

上述肝病可包括非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症及肝硬化症中的一种以上。

上述化学式1可以是以下化学式A表示的化合物。

化学式A

为解决上述技术问题，根据本发明另一实施例的用于预防或治疗肝病的口服制剂包含以下化学式1表示的化合物或其药用盐。

化学式1

(在上述式中，A是S；R是非取代或者独立或选择性地被一个或两个以上的C₆～C₁₀的芳基取代的直链或支链的C₁～C₅的烷基、非取代或者独立或选择性地被选自卤素及直链或支链的C₁～C₄的烷氧基中的一个或两个以上取代的苄基、或由羟基羰基取代的苄基；Y是氢或卤族元素。)

并且，还可包含赋形剂，上述赋形剂包括选自由甲基纤维素、二甲基亚砜、聚乙二醇及蒸馏水所构成的组中的一种以上。

以上述化学式1表示的化合物或其药用盐可以以粉末状态充填在胶囊剂内。

上述肝病可包括非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化症中的一种以上。

上述化学式1可以是以下化学式A表示的化合物。

化学式A

其他实施例的具体内容将包括在具体实施方式以及附图。

有益效果

本发明的腺苷衍生物能作为具有对非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症及肝硬化症的缓解效应的腺苷A₃受体拮抗剂而发挥作用，其为口服给药时药物吸收性极其优异、且几乎没有体内毒性的生物相容性物质，因此能够作为非常适合预防及治疗肝病的药物组合物而被使用。

根据本发明的实施例的效果并不局限于以上所例示的内容，本说明书包含了其他多种效果。

附图说明

图1为显示实施例4的化合物对于用激动剂Cl-IB-MECA处理的CHO细胞的拮抗作用的图。

图2为显示动物实验中的本发明的化合物(实施例2、3和4)的抗炎活性的图。

图3为显示动物实验中的本发明的化合物(实施例1和6)的抗炎活性的图。

图4为显示动物实验中的本发明的化合物(实施例5、7和8)的抗炎活性的图。

图5为显示动物实验中的本发明的化合物(实施例15和16)的抗炎活性的图。

图6是把实验例9中实验动物的肝的脂肪变性程度予以数值化后示出的曲线图。

图7是把实验例9中实验动物的肝的炎症程度予以数值化后示出的曲线图。

图8是把实验例9中实验动物的肝的气球样变程度予以数值化后示出的曲线图。

图9是把实验例9中实验动物的肝的脂肪变性、炎症及气球样变的数值予以整合后计算出对非酒精性脂肪肝炎的活性的曲线图。

图10是观察了实验例9中实验动物的肝的纤维化症发生程度的显微镜照片(photomicrograph)。

图11是示出实验例9中实验动物的肝的纤维化症发生面积的曲线图。

图12是得自实验例11(11-1及11-2)的血中浓度-时间数据的曲线图。

图13是得自实验例12(12-1及12-2)的血中浓度-时间数据的曲线图。

图14是得自实验例13的血中浓度-时间数据的曲线图。

图15是得自实验例14(14-1、14-2及14-3)的血中浓度-时间数据的曲线图。

图16是得自实验例15(15-1及15-2)的血中浓度-时间数据的曲线图。

图17是示出在实验例17中通过实时聚合酶链式反应(Real-time polymerasechain reaction，real-time PCR)对A₃腺苷受体(A₃AR)的表达进行确认的结果的曲线图。

图18是示出在实验例18中以real-time PCR对Timp1、Col1a1及Acta2 (αSMA)的表达进行分析的结果的曲线图。

具体实施方式

本研究是以保健福祉部作为资金来源，并且通过韩国保健产业振兴院的保健医疗技术研究开发项目的支援而完成的(课题固有编号：HI17C-2262-030017)。

(This research was supported by a grant of the Korea HealthTechnology R&D Project through the Korea Health Industry DevelopmentInstitute(KHIDI)、funded by the Ministry of Health&Welfare，Republic of Korea(grant number： HI17C-2262-030017))。

[支援本发明的研究开发项目]

课题固有编号：HI17C-2262-030017

部门名称：保健福祉部

研究管理专业机构：未来制药株式会社

研究项目名称：保健医疗技术研究开发项目

研究课题名称：完成为了临床一期试验性新药(IND)批准而进行的包括化学制造与控制(CMC)、毒性及药物动力学的非临床试验

贡献率：1/1

主管机构：汉阳大学产学协力图

研究时间：2017.08.25.–2018.12.31.

以下，将详细说明本发明。

本发明提供了一种作为有效成分而包含通过下述化学式1表示的化合物或其药用盐的腺苷衍生物。

[化学式1]

其中，A为O或S；

R为非取代或者独立地或选择性地被一个或两个以上的C₆～C₁₀芳基取代的直链或支链的C₁～C₅烷基、非取代或者独立地或选择性地被选自卤素及直链或支链的C₁～C₄烷氧基中的一个或两个以上以上取代的苄基，或羟基羰基取代的苄基；以及

Y为H或卤素原子。

在优选的实施方案中，

A为O或S；

R为甲基、乙基、丙基、萘基甲基、苄基、独立地或选择性地被选自由F、 Cl、Br、I、C₁～C₃烷氧基构成的组中的一个或两个以上取代基取代的苄基、或甲苯甲酸(toluic acid)；以及

Y为H或Cl。

在更优选的实施方案中，

A为O或S；

R为甲基、乙基、1-萘基甲基、苄基、2-氯苄基、3-氟苄基、3-氯苄基、3- 溴苄基、3-碘苄基、2-甲氧基-5-氯苄基、2-甲氧基苄基或3-甲苯甲酸；以及

Y为H或Cl。

根据本发明优选的实施方案的腺苷衍生物的具体实例如下：

1)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氟苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

2)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

3)(2R，3R，4S)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

4)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

5)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(2-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

6)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(5-氯-2-甲氧基苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

7)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(2-甲氧基苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

8)(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(萘-1-基甲基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

9)3-((2-氯-9-((2R，3R，4S)-3，4-二羟基四氢噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基)苯甲酸；

10)2-(2-氯-6-甲基氨基-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

11)(2R，3R，4S)-2-(6-(3-氟苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

12)(2R，3R，4S)-2-(6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

13)(2R，3R，4S)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

14)(2R，3R，4S)-2-(6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇；

15)(2R，3R，4R)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇；以及

16)(2R，3R，4R)-2-(2-氯-6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇。

根据本发明的化学式1表示的腺苷衍生物可以以药用盐的形式被使用。作为如上所述的盐，可使用由多种药用有机酸或无机酸形成的酸加成盐。作为适合的有机酸的实例，包括羧酸

膦酸、磺酸、乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、乙醇酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、己二酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、谷氨酸、门冬氨酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、邻苯二甲酸、苯乙酸、苯磺酸、 2-萘磺酸、甲基硫酸(methylsulfuric acid)、乙基硫酸(ethylsulfuricacid)和月桂基硫酸(dodecylsulfuric acid)；而作为适合的无机酸可以使用例如盐酸、硫酸等氢卤酸和磷酸。

根据本发明的上述化学式1表示的腺苷衍生物不仅可包括其药用盐，还可包括能通过常规方法制备的所有盐、水合物和溶剂化物。

并且，本发明提供一种制备上述化学式1表示的腺苷衍生物的方法。

具体而言，提供一种如以下反应式1所示出的腺苷衍生物的制备方法。

上述方法包括：在路易斯酸催化剂存在的条件下，将化学式2的化合物作为起始原料与硅烷基化(silylated)的嘌呤化合物进行反应，获得化学式3的β- 端基异构体(β-anomer)化合物的步骤(步骤1)；向步骤1中获得的化学式3 的化合物添加盐酸，从而获得化学式4的二醇化合物的步骤(步骤2)；以及，在碱催化剂存在的条件下，将步骤2中获得的化学式4的二醇化合物与胺化合物进行反应，从而获得腺苷衍生物的步骤(步骤3)。

[反应式1]

在上述反应式1中，A、R和Y为如化学式1所定义。

以下，将分步骤来详细说明本发明的制备方法。

根据本发明的步骤1为，在路易斯酸催化剂存在的条件下，将化学式2的化合物作为起始原料与硅烷基化(silylated)的嘌呤化合物进行反应，获得化学式3的β-端基异构体(β-anomer)化合物的步骤。

上述化学式3的化合物可通过在路易斯酸存在的条件下，将化学式2的化合物和硅烷基化(silylated)的嘌呤化合物进行反应而获得，其中，作为上述路易斯酸可使用三甲基硅烷基三氟甲烷磺酸酯(TMSOTf)。并且，作为步骤1中的溶剂优选使用二氯乙烷、氯仿、乙腈或二氯甲烷，其中，最优选使用二氯乙烷。上述硅烷基化的嘌呤化合物可通过在六甲基二硅氮烷(HMDS)和硫酸铵的催化条件下，使得化学式5的嘌呤化合物发生反应而获得。

根据本发明的步骤2为，向步骤1中获得的化学式3的化合物添加盐酸，从而获得化学式4的二醇化合物的步骤。此时，也可以使用乙酸、硫酸、对甲苯磺酸来代替盐酸。

根据本发明的步骤3为，在碱催化剂存在的条件下，将步骤2中获得的化学式4的二醇化合物与胺化合物进行反应，从而获得腺苷衍生物的步骤。

作为上述碱催化剂可优选使用三乙胺、吡啶、N，N-二甲基氨基吡啶和1，4- 二氧六环，其中，更优选使用三乙胺。并且，作为步骤3的溶剂可优选使用如甲醇和乙醇的低级醇或者、1，4-二氧六环、四氢呋喃和氯仿等溶剂。

就本发明的腺苷衍生物制备方法而言，作为起始原料的化学式2的化合物可根据取代基A的类型而通过下述的反应式2或者3的方法来实现制备。

取代基A为硫(S)时，制备方法可包括下述反应式2所示出的如下步骤。

在酸催化剂存在的条件下，将化学式6的D-甘露糖化合物与2，2-二甲氧基丙烷进行反应，从而获得化学式7的二缩丙酮(diacetonide)的步骤(步骤a₁)；在还原剂存在的条件下，使通过上述步骤a₁获得的化学式7的化合物开环，从而获得化学式8的二醇化合物的步骤(步骤a₂)；使通过上述步骤a₂获得的化学式8的二醇化合物甲磺酸化(mesylation)，从而获得化学式9的二甲磺酰化合物的步骤(步骤a₃)；使通过上述步骤a₃获得的化学式9的化合物环化，从而获得化学式10的硫糖化合物的步骤(步骤a₄)；使通过上述步骤a₄获得的化学式10 的化合物发生选择性水解，从而获得化学式11的二醇化合物的步骤(步骤a₅)；以及，使得通过上述步骤a₅获得的化学式11的化合物在催化剂存在的条件下转化成化学式2a的乙酸酯化合物的步骤(步骤a₆)。

[反应式2]

(在上述反应式2中，化合物2a正是化学式2的化合物。)

以下，将分步骤来详细说明本发明的化学式2的化合物的制备方法。

根据本发明的化学式2的化合物的制备方法的步骤a₁为，在酸催化剂存在的条件下，将化学式6的D-甘露糖化合物与2，2-二甲氧基丙烷进行反应，从而获得化学式7的二缩丙酮(diacetonide)的步骤。

上述化学式7的化合物可通过在酸催化剂以及无水乙酸存在的条件下，使得化学式6的D-甘露糖与2，2-二甲氧基丙烷发生反应而获得，其中，作为上述酸催化剂可使用如浓硫酸或盐酸气体的无机酸、如对甲苯磺酸的有机酸。

根据本发明的化学式2的化合物的制备方法的步骤a₂为，在还原剂存在的条件下，使通过上述步骤a₁获得的化学式7的化合物开环，从而获得化学式8 的二醇化合物的步骤。

上述化学式8的化合物可通过与还原剂硼氢化钠发生反应而获得。也可以使用如氢化铝锂的金属氢化物或亚硫酸钠来代替硼氢化钠。

根据本发明的化学式2的化合物的制备方法的步骤a₃为，使通过上述步骤a₂获得的化学式8的二醇化合物甲磺酸化，从而获得化学式9的二甲磺酰化合物的步骤。

上述化学式9的化合物可通过将化学式8的化合物与甲烷磺酰氯(MsCl) 进行反应而获得，此时，作为反应溶剂可优选使用如乙醚、石油醚、二氯甲烷、四氢呋喃和N，N-二甲基甲酰胺的惰性溶剂。

根据本发明的化学式2的化合物的制备方法的步骤a₄为，使通过上述步骤 a₃获得的化学式9的化合物环化，从而获得化学式10的硫糖化合物的步骤。

化学式10的化合物可通过将化学式9的化合物与硫化钠进行反应而获得，此时，作为代替硫化钠的方案，可通过将化学式9的化合物与如硫代乙酸甲酯的硫酯进行取代反应后，接着与醇钠进行反应而获得化学式10的化合物。作为步骤a₄的溶剂可使用N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜。

根据本发明的化学式2的化合物的制备方法的步骤a₅为，使通过上述步骤 a₄获得的化学式10的化合物发生选择性水解，从而获得化学式11的二醇化合物的步骤。

化学式11的化合物可通过利用乙酸对化学式10的化合物的5，6-缩丙酮进行选择性水解而获得，其中，也可使用硫酸、盐酸或对甲苯磺酸等来代替乙酸。

根据本发明的化学式2的化合物的制备方法的步骤a₆为，使得通过上述步骤a₅获得的化学式11的化合物在催化剂存在的条件下转化成化学式2a的乙酸酯化合物的步骤。

上述化学式2a的化合物可通过将化学式11的化合物与四乙酸铅(leadtetraacetate)(Pd(OAc)₄)进行反应而获得。

并且，当作为起始原料的化学式2的取代基A为氧(O)时，制备方法可包括下述反应式3所示出的如下步骤。

将化学式12的化合物与还原剂进行反应，从而获得化学式13的乳醇 (Lactol)化合物的步骤(步骤b₁)；以及，将通过步骤b₁获得的化学式13的化合物与无水乙酸进行反应，从而获得化学式2b的乙酸酯化合物的步骤(步骤b₂)。

[反应式3]

(在上述反应式3中，化合物2b正是化学式2的化合物。)

以下，将分步骤来详细说明本发明的化学式2的化合物的另一制备方法。

根据本发明的化学式2的化合物的另一制备方法的步骤b₁为，将化学式12 的化合物与还原剂进行反应，从而获得化学式13的乳醇(Lactol)化合物的步骤。

上述化学式13的化合物可通过利用二异丁基氢化铵(DIBAL)将能够轻易合成出的化学式12的化合物进行还原的方式获得。

根据本发明的化学式2的化合物的另一制备方法的步骤b₂为，将通过步骤 b₁获得的化学式13的化合物与无水乙酸进行反应，从而获得化学式2b的乙酸酯化合物的步骤。

上述化学式2的化合物可通过将化学式13的乳醇(Lactol)化合物与无水乙酸进行反应而获得。

并且，本发明还提供一种作为有效成分而包含化学式1表示的腺苷衍生物或其药用盐的腺苷A₃受体拮抗剂。

更进一步，本发明提供一种作为有效成分而包含化学式1表示的腺苷衍生物或其药用盐的用于预防和治疗炎症疾病的药物组合物。

当使得腺苷A₃受体在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中表达时，A₃受体具有抑制由ATP生成环化一磷酸腺苷(cAMP)的腺苷酸环化酶(adenylyl cyclase)的作用，并且，当由激动剂激活A₃受体时，证实了A₃受体可激活鸟苷三磷酸-依赖性磷脂酶C的现象，其中该酶为一种将脑中的磷脂酰肌醇(phosphatidyl inositol)分解成肌醇三磷酸(inositol phosphate)和二酰甘油(DAG)的酶 (Ramkumar，V.et al，J.Biol.Chem.，268，168871-168890，1993；Abbracchio，M.P. et al，Mol.Pharmacol.，48，1038-1045，1995)。由于这些第二信使系统意味着脑缺血中的神经损伤反应途径，因此这些发现可解释脑缺血中的基于A₃受体激活作用的反应途径。已知A₃受体激动剂可抑制炎症介质TNF-α(肿瘤坏死因子)的释放，还抑制同为炎症介质的MIP-1α、白细胞介素-12(interleukin-12)和干扰素-γ(interferon-γ)的生成，同时不仅具有对于脑疾病(如癫痫)的保护效果，还对心脏具有保护效果。另一方面，腺苷A₃受体的失活会引起炎症诱导因子(如从肥大细胞释放的组胺)的释放，起到使支气管收缩的作用，并会在免疫细胞引起细胞凋亡(apoptosis)。因此，腺苷A₃拮抗剂具有可被开发为抗炎剂和平喘药的可能性。

为了测定本发明的腺苷衍生物对于人类腺苷受体(hAR)的结合亲和度和选择性而执行的受体结合亲和度(Binding affinity)测试(参见实验例1)中，发现本发明的腺苷衍生物对于人类腺苷A₃受体(hA₃AR)具有很高的结合亲和力，但是对于腺苷A₁和A_2A受体则具有较低亲和力，即表现出了很高的选择性。尤其，本发明实施例12的化合物显示出对于hA₃受体的最高的亲和度，其K_i为 1.50±0.40nM。对于其余实施例而言，可按照结合亲和度的降序排列为：实施例 2的化合物(K_i＝1.66±0.90nM)，实施例14的化合物(K_i＝2.50+1.00nM)，实施例10的化合物(K_i＝3.69+0.25nM)和实施例4的化合物(K_i＝4.16±0.50nM)。并且，本发明的实施例4的化合物对于在CHO细胞中表达的鼠腺苷A₃受体也显示出高的结合亲和度(K_i＝3.89±1.15nM)。并且，作为具有4’-O氧代核苷 (oxonucleoside)形状的实施例15和16的化合物，也显示出了高的结合亲和度和选择性(参见表1)。

并且，为了研究本发明的腺苷衍生物的抗炎症活性而执行的实验中(参见实施例3～6)，发现本发明的腺苷衍生物具有抗炎症活性，尽管该活性相比于对照组使用的氢化可的松低。

以研究利用实施例2至4的化合物(由丙酮酸稀释)处理后的抗炎症活性的结果来看，通过化合物4处理能够对由12-氧-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯 (12-O-tetradecanoyl-phorbol-13-acetate，TPA)诱发的小鼠耳肿胀起到消肿效果 (参见图2)。并且，研究利用实施例1和6的化合物(由丙酮酸稀释)处理后的抗炎症活性，发现其相比于实施例2至4的化合物，可具有四倍以上显著增加的抑制率(参见图3)。

利用实施例5至7的化合物(利用蒸馏水和丙酮的混合溶剂(1:4)稀释为 0.5％的浓度)研究的抗炎症活性，分别显示出17％、34％和53％的炎症抑制率 (参见图4)。利用实施例15和16的化合物(利用二甲基亚砜(Dimethylsulfoxide， DMSO)和丙酮的混合溶剂(1:9)稀释为0.5％的浓度)研究的炎症抑制率分别显示为59％和79％(参见图5)。由此，可确认本发明的腺苷衍生物化合物具有抗炎症活性。

由于本发明的化学式1表示的腺苷衍生物对于腺苷A₃受体显示出高的结合亲和度和选择性，因此可作为有效的腺苷A₃受体拮抗剂来进行利用。并且，本发明的腺苷衍生物对腺苷A₃受体发挥拮抗作用而表现出抗炎症活性，因此可用作炎症疾病的预防药物和治疗药物。

并且，根据本发明的上述炎症疾病可包括变质性炎症、渗出性炎症、化脓性炎症、出血性炎症或增生性炎症等急性或慢性炎症疾病。

以下，就本发明的腺苷衍生物或其药用盐的组合物，说明其剂型化方法以及赋形剂，但其并非仅限于此。本发明的组合物可以全身或局部的方式实现给药。

对本发明的衍生物进行剂型化时，可使用通常使用的填充剂、增亮剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、表面活性剂等稀释剂或者赋形剂来进行调制。用于口服给药的固体制剂包括片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂等，这些固体制剂可通过在一个以上的化学式1的化合物中混入至少一个以上的赋形剂(如淀粉、碳酸钙、蔗糖、乳糖或明胶等)来剂型调制。并且，除了单纯使用赋形剂之外，还可使用如硬脂酸镁、滑石等润滑剂。用于口服的液体制剂对应于混悬剂、内服溶液剂、乳剂、糖浆剂等，其中除了作为常用的单纯的稀释剂的水和液体石蜡之外，还可包括如润湿剂、甜味剂、芳香剂、防腐剂等多种赋形剂。

并且，用于非口服给药的剂型包括注射剂、乳剂、吸入剂和栓剂等。对于注射剂而言，可以使用由丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、如橄榄油的植物油、酯(如油酸乙酯等)等灭菌的水性溶剂、非水性溶剂和混悬剂。作为栓剂的主剂可使用半合成脂肪酸酯(witepsol)、聚乙二醇(Macrogol)、吐温(tween) 61、可可油脂、月桂酸甘油脂、甘油明胶等。并且，为了局部适用，本发明的化合物还可剂型化为软膏或乳膏剂。

本发明的化合物的优选给药量可根据患者的状态及体重，疾病的程度、药物形态、给药途径以及时间等多种因素而有所不同，但本领域技术人员可进行适当选择。优选地，将本发明的化合物以每日0.001～100mg/体重(kg)的方式进行给药，更优选以每日0.01～30mg/体重(kg)的方式进行给药。上述给药可以是一天内直接一次性给药，或者一天内分多次给药。组合物中，相对于整体组合物的总重量，本发明的化合物可为0.0001～10重量％，优选为0.001～1重量％。并且，对于给药途径可根据患者的状态及严重程度进行适当的变化。

本发明提供一种作为有效成分而包括腺苷衍生物的用于预防及/或治疗肝病(liver disease)的药物组合物，其中，上述腺苷衍生物包含上述化学式1表示的化合物及/或其药用盐。

肝病可包括非酒精性脂肪肝炎(Nonalcholic steatohepatitis；NASH或 Non-alcoholic fatty liver disease；NAFLD)、肝纤维化症(liver fibrosis)及肝硬化症(liver cirrhosis)等在内的所有疾病、疾患、症状等。

上述化学式1表示的腺苷衍生物的优选例可为以下述化学式A表示的化合物(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇。

化学式A

本发明的用于预防及/或治疗肝病的药物组合物可以剂型化为口服制剂。

口服制剂可包括以上述化学式1表示的化合物及/或其药用盐和赋形剂。赋形剂可以包含选自由甲基纤维素(Methyl Cellulose，MC)、二甲基亚砜 (Dimethylsulfoxide，DMSO)、聚乙二醇(Polyethylene glycol，PEG)、蒸馏水 (Distilled water，DW)、胶囊剂等构成的组中的一个以上。赋形剂的优选例可以是0.5wt％的甲基纤维素。

口服制剂可以是以上述化学式1表示的化合物及/或其药用盐以粉末状态或溶解于赋形剂的溶液状态被充填至胶囊剂内而成。

本发明的用于预防及/或治疗肝病的药物组合物可以对患者实行口服给药。可根据患者的状态及体重、疾病程度、药物形态、给药路径及时间等多种因素来对优选给药量进行适当选择。

本发明的腺苷衍生物可以起到腺苷A₃拮抗剂(antagonist)的作用，其能够呈剂量依赖性地对非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症及肝硬化症发挥缓解效应(参见实验例9)，其在口服给药时血中浓度及稳定性优异(实验例10)，且是一种几乎没有体内毒性的生物相容性物质(参见实验例11～16)，因此可作为非常适合于肝病的预防及/或治疗用途的药物组合物来进行使用。

起始原料的制备

<制备例1>

(3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基乙酸酯的制备

步骤a₁：(3aR，4R，6R，6aR)-6-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2，2-二甲基-四氢呋喃并[3，4-d][1，3]-间二氧杂环戊烯-4-醇的制备

向丙酮(50ml)中加入D-甘露糖(1.74g，6.52mmol)和2，2-二甲氧基丙烷 (2.45ml，19.55mmol)之后进行搅拌混合，接着冷却至0℃。向该溶液中滴加浓硫酸(0.45g，1.96mmol)。在室温下，搅拌反应混合物24小时。接着向该混合物加入三乙胺来进行中和，并进行真空浓缩。对浓缩后获得的混合物进行硅胶柱层析，从而获得呈白色固体的目标化合物(1.61g，95％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(1∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

mp 120.3-120.5℃

¹H-NMR(CDCl₃)δ5.34(s，1H)，4.76-4.79(m，1H)，4.58(d，1H，J ＝6.0Hz)，4.34-4.39(m，1H)，4.15(dd，1H，J＝3.6，7.2Hz)，4.00-4.08(m， 2H)；

[α]²⁵ _D11.71(c 0.11，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 261[M+H]⁺。

步骤a₂：(1R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)((4R，5S)-5-(羟甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲醇的制备

将上述步骤a₁中制备的(3aR，4R，6R，6aR)-6-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2，2-二甲基-四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-醇(1.50g，5.76mmol) 小心地进行分配并加入至乙醇(25ml)中，且冷却至0℃。向该溶液中加入硼氢化钠(NaHB₄，440mg，11.53mmol)，接着在室温下搅拌2小时。用乙酸中和反应混合物之后，进行真空浓缩。利用乙酸乙酯和水对混合物进行萃取之后，用无水硫酸镁(MgSO₄)干燥有机层，并进行过滤，然后再次进行真空浓缩。对浓缩后获得的混合物进行硅胶柱层析，从而获得糖浆形式的目标化合物(1.38g， 92％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(1∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ4.33(dd，1H，J＝1.6，7.2Hz)，4.24-4.28(m，1H)， 4.06-4.13(m，2H)，3.92-3.97(m，1H)，3.76-3.85(m，2H)，3.59-3.61(m， 1H)，1.48(s，3H)，1.38(s，3H)，1.36(s，3H)，1.33(s，3H)；

[α]²⁵ _D-3.88(c 0.44，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 263[M+H]⁺。

步骤a₃：(1R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)((4S，5S)-2，2-二甲基-5-((甲基磺酰氧基)甲基)-1，3-二氧戊环-4-基)甲基甲磺酸酯的制备

将上述步骤a₂中制备的(1R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)((4R，5S)-5-(羟甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)甲醇(38.52g，146.85mmol)和4-二甲基氨基吡啶(4-DMAP，5.38mg，44.06mmol)加入至二氯甲烷(300ml)和三乙胺(163.75ml，1.17mol)的混合物后进行混合，且冷却至0℃。向该溶液中小心地滴加二甲烷磺酰氯(47.59ml，587.42mmol)。在室温下搅拌1小时后，用二氯甲烷萃取该反应混合物，并用饱和的碳酸氢钠(NaHCO₃)水溶液进行洗涤。用无水硫酸镁(MgSO₄)干燥收集的有机层，并进行过滤，然后再次进行真空浓缩。对浓缩后获得的褐色糖浆形式的二甲磺酰化合物进行硅胶柱层析，从而获得糖浆形式的目标化合物(57.83g，94％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(5∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ4.75(pseudo t，1H，J＝7.4Hz)，4.33-4.45(m，4H)， 4.06-4.20(m，3H)，3.12(s，3H)，3.07(s，3H)，1.51(s，3H)，1.43(s， 3H)，1.37(s，3H)，1.33(s，3H)；

[α]²⁵ _D38.32(c 0.29，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 419[M+H]⁺。

步骤a₄：(3aR，4S，6aS)-4-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯的制备

将上述步骤a₃中制备的(1R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)((4S，5S)-2，2-二甲基-5-((甲基磺酰氧基)甲基)-1，3-二氧戊环-4-基)甲基甲磺酸酯(993.80g，2.23mmol)溶于二甲基甲酰胺(DMF)(50ml)中，且在向该溶液中加入硫化钠 (348.30g，4.46mmol)后，在80℃的温度条件下过夜回流搅拌该混合物。在反应完成之后，在减压条件下除去溶剂，且用乙酸乙酯和水萃取残留物。用无水硫酸镁(MgSO₄)干燥有机层，并进行过滤，然后再次进行真空浓缩。浓缩后获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得呈糖浆形式的目标化合物(453.0mg， 78％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(8∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ4.92(dt，1H，J＝1.8，5.6Hz)，4.72(dd，1H，J＝2.0， 6.0Hz)，4.26-4.30(m，1H)，4.04(s，1H)，3.79(t，1H，J＝3.8Hz)，3.31-3.32 (m，1H)，3.19(dd，1H，J＝5.4，12.0Hz)，2.84(dd，1H，J＝1.6，12.0Hz)， 1.51(s，3H)，1.43(s，3H)，1.32(dd，6H，J＝8.4Hz)；

[α]²⁵ _D-96.04(c 0.20，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 261[M+H]⁺。

步骤a₅：1-((3aR，4S，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)乙烷-1，2-二醇的制备

将上述步骤a₄中制备的(3aR，4S，6aS)-4-(2，2-二甲基-1，3-二氧戊环-4-基)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯(21.78g，83.66mmol)溶于60％的乙酸水溶液(250ml)中，接着在室温下搅拌2小时。在减压条件下浓缩该反应混合物，并对所获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得呈白色固体的目标化合物(14.85g，81％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(1∶ 2，v/v)作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ4.92(dt，1H，J＝1.8，5.6Hz)，4.72(dd，1H，J＝2.0， 6.0Hz)，4.26-4.30(m，1H)，4.04(s，1H)，3.79(t，1H，J＝3.8Hz)，3.31-3.32 (m，IH)，3.19(dd，1H，J＝5.4，12.0Hz)，2.84(dd，1H，J＝1.6，12.0Hz)， 1.51(s，3H)，1.43(s，3H)，1.32(dd，6H，J＝8.4Hz)；

[α]²⁵ _D-96.04(c 0.20，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 261[M+H]⁺。

步骤a₆：(3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯 -4-基乙酸酯的制备

将上述步骤a₅中制备的1-((3aR，4S，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1， 3]间二氧杂环戊烯-4-基)乙烷-1，2-二醇(14.85g，67.41mmol)溶于乙酸乙酯 (300ml)中，并冷却至0℃。向该溶液中加入四乙酸铅(Pb(OAc)₄，157.31g， 337.06mmol)之后，在室温下过夜搅拌。通过硅藻土(Celite)过滤该反应混合物，用乙酸乙酯稀释滤液。用二氯甲烷稀释该有机层，且用饱和的碳酸氢钠 (NaHCO₃)水溶液进行洗涤之后，经无水硫酸镁进行干燥，并进行真空浓缩。对浓缩后获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得呈糖浆形式的目标化合物 (8.82g，60％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(8∶1，v/v) 作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ5.03(dd，1H，J＝5.6，9.6Hz)，4.79(dd，1H，J＝5.6， 8.8Hz)，3.21-3.27(m，2H)，3.01(dt，2H，J＝0.8，12.8Hz)，2.05(s，3H)，1.50(s，3H)，1.31(s，3H)；

[α]²⁵ _D-258.15(c 0.18，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 218[M]⁺。

<制备例2>

(3aS，4S，6aS)-2，2-二甲基-四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基乙酸酯的制备

步骤b₁：(3aR，4R，6aR)-2，2-二甲基-四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯 -4-醇的制备

将2，3-O-异亚丙基-D-赤酮酸内酯(2，3-O-isopropylidene-D-erythronolactone) (1.04g，6.42mmol)溶于甲苯(20ml)中，接着在-78℃的温度条件下，向其中加入1M的二异丁基氢化铵(DIBAL)/四氢呋喃(THF)溶液。在相同的温度条件下对该反应混合物进行30分钟的搅拌，然后缓慢地加入甲醇来停止反应。通过硅藻土(Celite)过滤该悬浮液，并用乙酸乙酯和水进行萃取，接着对其进行硅胶柱层析，从而获得糖浆形式的目标化合物(1.94g，96％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(3∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ5.39(s，1H)，4.82(dd，1H，J＝3.6，6.0Hz)，4.55 (d，1H，J＝6.0Hz)，4.05(dd，1H，J＝3.6，10.2Hz)，4.00(d，1H，J＝10.0Hz)， 1.45(s，3H)，1.30(s，3H)。

步骤b₂：(3aS，4S，6aS)-2，2-二甲基-四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯 -4-基乙酸酯的制备

将在上述制备例2的步骤b₁中制备的乳醇化合物(875.9mg，5.47mmol)溶于吡啶(10ml)中，接着在0℃的温度条件下加入无水乙酸(0.67ml，6.56mmol)。在室温下，搅拌该反应混合物3小时之后，进行真空浓缩。用乙酸乙酯和水萃取浓缩后的残留物，然后经无水硫酸镁干燥有机层，并再次进行真空浓缩。对该残留物进行硅胶柱层析，从而获得糖浆形式的目标化合物(702.1mg，65％)，其中，上述硅胶柱层析将己烷∶乙酸乙酯混合溶剂(8∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

¹H-NMR(CDCl₃)δ6.16(s，1H)，4.86(dd，1H，J＝3.6，6.0Hz)，4.66 (d，1H，J＝6.0Hz)，4.12(d，1H，J＝6.4Hz)，3.99(dd，1H，J＝3.6，10.8Hz)， 2.05(s，3H)，1.48(s，3H)，1.33(s，3H)。

<实施例1>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氟苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤1：2，6-二氯-9-((3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤的制备

将2，6-二氯嘌呤(2.29g，22.12mmol)和硫酸铵(438mg，3.32mmol)溶解于六甲基二硅氮烷(HMDS，50ml)之后，在惰性干燥的条件下过夜回流溶液。在减压条件下浓缩反应混合物，接着将所获得的固体混合物再次溶解于冷的1， 2-二氯乙烷(20ml)中。向该溶液中滴加将通过制备例1获得的(3aR，4R，6aS)-2， 2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基乙酸酯(1.41g， 11.06mmol)溶于1，2-二氯乙烷(20ml)的溶液。在该混合物中滴加三甲基硅烷基三氟甲烷磺酸酯(TMSOTf，4.0ml，22.12mmol)，并且在0℃的温度条件下搅拌30分钟后，在室温下搅拌1小时，之后再加热至80℃并搅拌2小时。在冷却反应混合物之后，用二氯甲烷进行稀释，并用饱和碳酸氢钠(NaHCO₃)水溶液洗涤。用无水硫酸镁(MgSO₄)干燥有机层之后，进行真空浓缩来获得黄色糖浆形式的残留物。对该残留物进行硅胶柱层析，从而获得泡沫(foam)形式的目标化合物(3.03g，79％)，其中，上述硅胶柱层析使用二氯甲烷∶甲醇混合溶剂(50∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

UV(CH₂Cl₂)λ_max275.0nm；

¹H-NMR(CDCl₃)δ8.17(s，1H)，5.87(s，1H)，5.32(pseudot，1H，J ＝4.8Hz)，5.21(d，1H，J＝5.6Hz)，3.79(dd，1H，J＝4.4，12.8Hz)，3.26(d， 1H，J＝13.2Hz)，1.59(s，3H)，1.36(s，3H)；

[α]²⁵ _D-42.04(c 0.16，CH₂Cl₂)；

FAB-MS m/z 347[M+H]⁺。

步骤2：(2R，3S，4S)-2-(2，6-二氯-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

将上述步骤1中制备的2，6-二氯-9-((3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤溶于四氢呋喃(20ml)后，加入2N的 HCl，接着在室温下过夜搅拌。用1N的氢氧化钠水溶液中和该反应混合物，并且小心地在减压条件下进行浓缩。对浓缩后获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得呈白色固体的目标化合物(1.94g，96％)，其中，上述硅胶柱层析使用二氯甲烷∶甲醇混合溶剂(20∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

mp 198.3-200.3℃；

UV(MeOH)λ_max275.0nm；

¹H-NMR(CD₃OD)δ8.87(s，1H)，6.08(d，1H，J＝6.8Hz)，4.69(q， 1H，J＝3.2Hz)，4.48(q，1H，J＝3.6Hz)，3.56(dd，1H，J＝4.4，11.2Hz)， 2.97(dd，1H，J＝3.4，11.2Hz)；

[α]²⁵ _D-50.43(c 0.12，DMSO)；

FAB-MS m/z 307[M+H]⁺。

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氟苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

在室温下，将上述步骤2中制备的(2R，3S，4S)-2-(2，6-二氯-9H-嘌呤-9-基) 四氢噻吩-3，4-二醇(1当量)和3-氟苄胺(1.5当量)溶解于乙醇(5ml)中，接着仍在室温下，搅拌该反应混合物2～3小时。在完成反应之后，进行真空浓缩，并对浓缩后获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得目标化合物(0.10g， 80％)，其中，上述硅胶柱层析使用二氯甲烷∶甲醇混合溶剂(20∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

mp 183.2-183.5℃；

UV(MeOH)λ_max275.0nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.91(t，1H-NH，J＝5.8Hz)，8.51(s，1H)，7.33-7.39 (m，1H)，7.13-7.18(m，2H)，7.06(dt，1H，J＝2.8，11.6Hz)，5.82(d，1H， J＝7.2Hz)，5.56(d，1H-OH，J＝6.0Hz)，5.37(d，1H-OH，J＝4.4Hz)，4.65 (d，1H，J＝6.0Hz)，4.60(m，1H)，4.33-4.35(m，1H)，3.41(dd，1H，J ＝4.0，10.8Hz)，2.79(dd，1H，J＝2.8，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-96.21(c 0.12，DMSO)；

FAB-MS m/z 396[M+H]⁺。

<实施例2>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

通过与上述实施例1的步骤1相同的方法来获得泡沫形式的目标化合物。

通过与上述实施例1的步骤2相同的方法来获得呈白色固体的目标化合物。

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用3-氯苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.11g，83％)。

mp 163.3-165.3℃；

UV(MeOH)λ_max274.5nm；

¹H-NMR(CD₃OD)δ8.34(s，1H)，7.41(s，1H)，7.24-7.34(m，3H)， 5.94(d，1H，J＝6.4Hz)，4.75(brs，2H)，4.61(q，1H，J＝3.2Hz)，4.45(q， 1H，J＝4.0Hz)，3.51(dd，1H，J＝4.8，11.2Hz)，2.95(dd，1H，J＝3.6，10.8Hz)；

FAB-MS m/z 411[M]⁺。

<实施例3>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-溴苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-溴苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用3-溴苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.12g，83％)。

mp 184.0-185.0℃；

UV(MeOH)λ_max274.0nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.91(brs，1H-NH)，8.51(s，1H)，7.55(s，1H)， 7.43(d，1H，J＝7.6Hz)，7.33-7.35(m，1H)，7.26-7.30(m，1H)，5.82(d， 1H，J＝7.2Hz)，5.57(d，1H-OH，J＝6.0Hz)，5.38(d，1H-OH，J＝4.0Hz)， 4.60-4.63(m，3H)，4.34(s，1H)，3.41(dd，1H，J＝4.4，11.2Hz)，2.80(dd， 1H，J＝2.8，10.8Hz)；

FAB-MS m/z 456[M+H]⁺。

<实施例4>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用3-碘苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.14g，84％)。

mp 198.7-199.9℃；

UV(MeOH)λ_max274.0nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.90(t，1H-NH，J＝6.4Hz)，8.51(s，1H)，7.74 (s，1H)，7.60(d，1H，J＝7.6Hz)，7.35(d，1H，J＝7.6Hz)，7.13(t，1H， J＝8.0Hz)，5.82(d，1H，J＝7.6Hz)，5.56(d，1H，J＝6.4Hz)，5.37(d，1H， J＝4.0Hz)，4.60(d，3H，J＝4.4Hz)，4.34(brs，1H)，3.38(dd，1H，J＝4.0， 10.8Hz)，2.80(dd，1H，J＝4.0，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-78.91(c 0.13，DMSO)；

FAB-MS m/z 504[M+H]⁺。

<实施例5>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(2-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(2-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用2-氯苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.11g，81％)。

mp 198.7-199.7℃；

UV(MeOH)λ_max273.5nm；

¹H-NMR(CD₃OD)δ8.35(brs，1H)，7.45-7.47(m，1H)，7.39-7.43(m，1H)，7.25-7.29(m，2H)，5.95(d，1H，J＝6.4Hz)，4.60-4.63(m，1H)，4.45 (dd，1H，J＝3.6，8.0Hz)，3.51(dd，1H，J＝4.8，10.8Hz)，2.95(dd，1H， J＝4.0，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-96.21(c 0.12，DMSO)；

FAB-MS m/z 412[M+H]⁺。

<实施例6>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(5-氯-2-甲氧基苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤1：2，6-二氯-9-[(3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(5-氯-2-甲氧基苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用5-氯-2-甲氧基苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.11g，78％)。

mp 188.8-189.8℃；

UV(MeOH)λ_max275.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.64(t，1H-NH，J＝6.0Hz)，8.51(s，1H)，7.21-7.25 (m，1H)，7.12(d，1H，J＝7.2Hz)，7.00(d，1H，J＝8.0Hz)，6.85-6.89(m， 1H)，5.82(d，1H，J＝7.6Hz)，5.57(d，1H-OH，J＝6.4Hz)，5.37(d，1H-OH， J＝4.0Hz)，4.61-4.63(m，2H)，4.35(m，1H)，3.84(s，3H)，3.71(dd，1H， J＝3.6，10.4Hz)，2.80(dd，1H，J＝2，4，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-96.10(c0.21，DMSO)；

FAB-MS m/z 442[M+H]⁺。

<实施例7>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(2-甲氧基苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(2-甲氧基苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩 -3，4-二醇的制备

使用2-甲氧基苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.12g，88％)。

mp 188.0℃；

UV(MeOH)λ_max 276.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.65(t，1H-NH，J＝6.0Hz)，8.51(s，1H)，7.21-7.25 (m，1H)，7.12(d，1H，J＝7.2Hz)，7.00(d，1H，J＝8.0Hz)，6.85-6.89(m， 1H)，5.83(d，1H，J＝6.8Hz)，5.58(d，1H-OH，J＝6.4Hz)，5.39(d，1H-OH， J＝3.6Hz)，4.62-4.64(m，2H)，4.35(s，1H)，3.84(s，1H)，3.42(dd，1H， J＝3.6，10.4Hz)，2.79-2.82(m，1H)；

[α]²⁵ _D-93.53(c0.17，DMSO)；

FAB-MS m/z 407[M+H]⁺。

<实施例8>

(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(萘-1-基甲苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(2-氯-6-(萘-1-基甲苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用萘-1-基甲苄胺(naphthalene-1-yl methylbenzyl amine)代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.13g， 90％)。

mp 226.3℃(分解(decomp))；

UV(MeOH)λ_max 281.0nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.96(t，1H-NH，J＝6.0Hz)，8.51(s，1H)，8.25 (d，1H，J＝8.0Hz)，7.95-7.97(m，1H)，7.83-7.85(m，1H)，7.53-7.61(m， 2H)，7.43-7.46(m，2H)，5.82(d，1H，J＝7.6Hz)，5.56(d，1H，J＝6.4Hz)， 5.38(d，1H，J＝4.0Hz)，5.12(d，1H，J＝6.0Hz)，4.59-4.61(m，1H)，4.34-4.35 (m，1H)，3.40-3.44(m，1H)，2.80(dd，1H，J＝2.4，6.8Hz)；

FAB-MS m/z 428[M+H]⁺。

<实施例9>

3-((2-氯-9-((2R，3S，4R)-3，4-二羟基四氢噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基) 苯甲酸的制备

步骤3：3-((2-氯-9-((2R，3S，4R)-3，4-二羟基四氢噻吩-2-基)-9H-嘌呤-6-基氨基)甲基)苯甲酸的制备

使用3-(氨基甲基)苯甲酸代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.12g，84％)。

mp 254.0-256.9℃；

UV(MeOH)λ_max 275.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.95(t，1H-NH，J＝6.0Hz)，8.52(s，1H)，7.89 (d，1H，J＝8.4Hz)，7.43(d，1H，J＝8.0Hz)，5.82(d，1H，J＝7.6Hz)，5.57 (brs，1H)，5.38(brs，1H)，4.71(d，1H，J＝6.0Hz)，4.60(brs，1H)，4.34 (brs，1H)，3.41(dd，1H，J＝4.0，10.8Hz)，2.80(dd，1H，J＝2.8，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-94.55(c 0.11，DMSO)；

FAB-MS m/z 422[M+H]⁺。

<实施例10>

2-(2-氯-6-甲基氨基-嘌呤-9-基)(2R，3S，4R)-四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：2-(2-氯-6-甲基氨基-嘌呤-9-基)(2R，3S，4R)-四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用甲胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例1的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.89g，90％)。

UV(MeOH)λ_max 269.5nm(pH 7)；

¹H-NMR(CDCl₃)δ2.99(1H，dd，4’-CH，J＝4.4，10.8Hz)，3.12(3H， brs，NH-CH3)，3.44 1H，dd，4’-CH，J＝4，10.8Hz)，4.41(1H，m，2’-CH， J＝5.6Hz)，4.47(1H，m，3’-CH)，5.89(1H，d，1’-CH，J＝5.6Hz)，8.40(s， 1H，8-CH)；

[α]²⁵ _D-34.8(c 0.115，DMSO)；

FAB-MS m/z 302.3[M+H]⁺。

<实施例11>

(2R，3R，4S)-2-(6-(3-氟苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤1：6-氯-9-((3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤的制备

使用6-氯嘌呤(2.29g，22.12mmol)代替2，6-氯嘌呤，且以与上述实施例1 的步骤1相同的条件进行合成，从而获得泡沫形式的目标化合物(1.84g，91％)。

UV(CH₂Cl₂)λ_max265.0nm；

¹H-NMR(CDCl₃)δ8.67(pseudo t，1H，J＝1.4Hz)，8.23(s，1H)，5.88 (s，1H)，5.23(m，2H，)，3.69(dd，1H，J＝4.0，13.2Hz)，3.18(d，1H，J ＝12.8Hz)，1.52(s，3H)，1.29(s，3H)；

¹³C-NMR(CDCl₃)δ152.05，151.39，151.09，144.34，132.56，111.90，89.60，84.31，70.30，40.76，26.40，24.63；

[α]2⁵ _D-157.64(c 0.15，MeOH)；

FAB-MS m/z 313[M+H]⁺。

步骤2：(2R，3S，4S)-2-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用在上述步骤1中制备的6-氯-9-((3aR，4R，6aS)-2，2-二甲基四氢噻吩并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤(1.84g，5.88mmol)，且以与上述实施例1的步骤2相同的条件进行合成，从而获得呈白色固体的目标化合物(1.27g， 79％)。

mp 192.3-192.8℃；

UV(MeOH)λ_max264.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ9.02(s，1H)，8.82(s，1H)，6.02(d，1H，J＝7.6Hz)， 5.62(d，1H-OH，J＝6.0Hz)，5.43(d，1H-OH，J＝4.0Hz)，4.70-4.74(m，1H)，4.36-4.40(m，1H)，3.47(dd，1H，J＝4.0，10.8Hz)，3.17(d，1H，J＝5.2Hz)，2.84(dd，1H，J＝2.8，11.2Hz)；

[α]²⁵ _D-109.15(c 0.16，DMSO)；

FAB-MS m/z 273[M+H]⁺。

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(6-(3-氟苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

在室温下，将上述步骤2中制备的(2R，3S，4S)-2-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇(1当量)和3-氟苄胺(1.5当量)溶解于乙醇(5ml)中，接着仍在室温下，搅拌该反应混合物2-3小时。在完成反应之后，进行真空浓缩，并对浓缩后获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得目标化合物(0.11g，82％)，其中，上述硅胶柱层析使用二氯甲烷∶甲醇混合溶剂(20∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

mp 180.5-180.7℃；

UV(MeOH)λ_max273.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.46(s，1H)，8.22(s，1H)，7.31-7.39(m，1H)， 7.12-7.18(m，2H)，7.01-7.05(m，1H)，5.90(d，1H，J＝7.2Hz)，5.53(d， 1H-OH，J＝6.4Hz)，5.35(d，1H-OH，J＝4.0Hz)，4.67-4.71(m，2H)，4.35-4.37 (m，1H)，3.39-3.43(m，1H)，3.17(d，1H，J＝5.2Hz)，2.80(dd，1H，J ＝3.2，11.2Hz)；

[α]²⁵ _D-141.2(c 0.11，DMSO)；

FAB-MS m/z 362[M+H]⁺。

<实施例12>

(2R，3R，4S)-2-(6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

通过与上述实施例11的步骤1相同的方法来获得泡沫形式的目标化合物。

通过与上述实施例11的步骤2相同的方法来获得呈白色固体的目标化合物。

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(6-(3-氯苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用3-氯苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例11的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.12g，85％)。

mp 165.0-165.3℃；

UV(MeOH)λ_max274.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.47(s，1H)，8.22(s，1H)，7.39(s，1H)，7.26-7.35 (m，3H)，5.91(d，1H，J＝7.2Hz)，5.53(d，1H-OH，J＝6.4Hz)，5.35(d， 1H-OH，J＝4.0Hz)，4.67-4.71(m，2H)，4.33-4.37(m，1H)，3.40-3.48(m， 2H)，2.80(dd，1H，J＝3.2，10.4Hz)；

[α]²⁵ _D-162.5(c 0.10，DMSO)；

FAB-MS m/z 378[M+H]⁺。

<实施例13>

(2R，3R，4S)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用3-溴苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例11的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.11g，70％)。

mp 183.0-184.0℃；

UV(MeOH)λ_max270.0nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.46(s，1H)，8.22(s，1H)，7.53(s，1H)，7.39-7.42 (m，1H)，7.34-7.35(m，1H)，7.24-7.28(m，1H)，5.90(d，1H，J＝7.2Hz)， 5.53(d，1H-OH，J＝6.4Hz)，5.35(d，1H-OH，J＝4.0Hz)，4.67-4.71(m，2H)，4.35-4.37(m，1H)，3.41(dd，1H，J＝4.0，10.8Hz)，3.06(q，1H，J＝7.2Hz)， 2.80(dd，1H，J＝2.8，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-100.72(c 0.14，DMSO)；

FAB-MS m/z 422[M+H]⁺。

<实施例14>

(2R，3R，4S)-2-(6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

步骤3：(2R，3R，4S)-2-(6-(3-碘苄基氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢噻吩-3，4-二醇的制备

使用3-碘苄胺代替3-氟苄胺，且以与上述实施例11的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.12g，72％)。

mp 198.8-199.8℃；

UV(MeOH)λ_max271.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.46(s，1H)，8.22(s，1H)，7.72(s，1H)，7.56-7.59 (m，1H)，7.35-7.36(d，1H，J＝7.6Hz)，7.01-7.12(m，1H)，5.90(d，1H， J＝7.2Hz)，5.53(d，1H-OH，J＝6.4Hz)，5.35(d，1H-OH，J＝4.4Hz)，4.67-4.71 (m，2H)，4.34-4.38(m，1H)，3.41(dd，1H，J＝4.0，10.8Hz)，3.16(d，1H，J＝7.2Hz)，2.80(dd，1H，J＝2.8，10.8Hz)；

[α]²⁵ _D-97.08(c 0.14，DMSO)；

FAB-MS m/z 470[M+H]⁺。

<实施例15>

(2R，3R，4R)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇的制备

步骤1：2，6-二氯-9-((3aR，4R，6aR)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤的制备

使用制备例2中获得的(3aR，4R，6aR)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-醇(702.1g，3.472mmol)，且以与上述实施例1的步骤1相同的条件进行合成，从而获得泡沫形式的目标化合物(793.0mg，69％)。

UV(MeOH)λ_max276.5nm；

¹H-NMR(CDCl₃)δ8.15(s，1H)，6.07(s，1H)，5.41(d，1H，J＝6.0Hz)， 5.26-5.29(m，1H)，4.25-4.31(m，2H)，1.57(s，3H)，1.41(s，3H)；

[α]²⁵ _D-21.00(c 0.10，DMSO)；

FAB-MS m/z 331[M+H]⁺。

步骤2：(2R，3R，4R)-2-(2，6-二氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇的制备

使用在上述步骤1中制备的2，6-二氯-9-((3aR，4R，6aR)-2，2-二甲基四氢呋喃并[3，4-d][1，3]间二氧杂环戊烯-4-基)-9H-嘌呤(900mg，2.0mmol)，且以与上述步骤2相同的条件进行合成，从而获得呈白色固体的目标化合物(0.46g， 80％)。

mp 122.7-123.4℃；

UV(MeOH)λ_max276.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.98(s，1H)，5.96(d，1H，J＝6.4Hz)，5.57(d， 1H-OH，J＝6.0Hz)，5.32(d，1H-OH，J＝4.0Hz)，4.69-4.74(m，1H)，4.41 (dd，1H，J＝3.6，9.2Hz)，4.29-4.32(m，1H)，3.87(dd，1H，J＝2.0，9.6Hz)；

[α]²⁵ _D-68.09(c 0.14，DMSO)；

FAB-MS m/z 291[M+H]⁺。

步骤3：(2R，3R，4R)-2-(6-(3-溴苄基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇的制备

在室温下，将上述步骤2中制备的(2R，3S，4S)-2-(2，6-二氯-9H-嘌呤-9-基) 四氢呋喃-3，4-二醇(1当量)和3-溴苄胺(1.5当量)溶解于乙醇(5ml)中，接着在室温下，搅拌该反应混合物2-3小时。在完成反应之后，进行真空浓缩，并对浓缩后获得的残留物进行硅胶柱层析，从而获得目标化合物(0.12g，82％)，其中，上述硅胶柱层析使用二氯甲烷∶甲醇混合溶剂(20∶1，v/v)作为洗脱溶剂。

mp 181.5-181.7℃；

UV(MeOH)λ_max274.5nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.92(t，1H-NH，J＝6.0Hz)，8.43(S，1H)，7.55 (s，1H)，7.44(d，1H，J＝8.0Hz)，7.33-7.35(m，1H)，7.26-7.30(m，1H)， 5.81(d，1H，J＝6.4Hz)，5.47(d，1H，J＝6.4Hz)，5.22(d，1H，J＝4，0Hz)， 4.66-4.69(m，1H)，4.62(s，2H)，4.32(dd，1H，J＝3.6，9.2Hz)，4.25(brs， 1H)，3.80(dd，1H，J＝1.6，9.2Hz)；

[α]²⁵ _D-62.75(c 0.10，DMSO)；

FAB-MS m/z 440[M+H]⁺。

<实施例16>

(2R，3R，4R)-2-(6-(3-碘苄基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇的制备

通过与上述实施例15的步骤1相同的方法来获得泡沫形式的目标化合物。

通过与上述实施例15的步骤2相同的方法来获得糖浆形式呈呈白色固体的目标化合物。

步骤3：(2R，3R，4R)-2-(6-(3-碘苄基氨基)-2-氯-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3，4-二醇的制备

使用3-碘苄胺代替3-溴苄胺，且以与上述实施例15的步骤3相同的条件进行合成，从而获得目标化合物(0.13g，78％)。

mp 195.5-195.8℃；

UV(MeOH)λ_max274.0nm；

¹H-NMR(DMSO-d₆)δ8.91(t，1H-NH，J＝6.4Hz)，8.44(s，1H)，7.75 (s，1H)，7.61(d，1H，J＝8.0Hz)，7.36(d，1H，J＝7.6Hz)，7.13(t，1H， J＝4.0Hz)，5.81(d，1H，J＝6.8Hz)，5.47(d，1H-OH，J＝6.8Hz)，5.23(d， 1H-OH，J＝4.0Hz)，4.72(dd，1H，J＝6.4，10.8Hz)，4.61(d，1H，J＝6.0Hz)， 4.34(dd，1H，J＝3.6，9.2Hz)，3.81(dd，1H，J＝1.2，9.2Hz)；

[α]²⁵ _D-68.07(c 0.12，DMSO)；

FAB-MS m/z 488[M+H]⁺。

<实验例1>对于腺苷受体的结合亲和度(Binding affinity)测定

为了测定本发明的衍生物对人类腺苷受体(hAR)中的A₁、A_2A和A₃受体的亲和度和选择性，进行以下实验。

将表达腺苷A₁和A₃受体的中国仓鼠卵巢(CHO，ATCC美国细胞银行 No.CCL-61)细胞，在包括10％胎牛血清(FBS)和青霉素/链霉素(100单位/ml 和100μg/ml)的F-12(Gibco，U.S.A.)培养基中，以37℃，5％CO₂的条件进行培养，并对其进行使用。在试管中的加入50/10/1缓冲溶液，并混合一定量的表达合适的hAR的CHO细胞以及选择性地结合于各腺苷A₁和A₃受体的标记配体(1nM[³H]CCPA(2-氯-N⁶-[³H]环戊基腺苷， 2-Chloro-N⁶-[³H]cyclopentyladenosine)和0.5nM[¹²⁵I]AB-MECA)。首先，将本发明的衍生物以不同浓度溶解在二甲基亚砜(DMSO)后，用缓冲溶液进行稀释(但需要注意DMSO的最终浓度不能超过1％)，然后在37℃的恒温箱中培养1小时，接着使用细胞收集器(TOMTEC，U.S.A.)快速进行减压过滤。接着，用3ml 的缓冲溶液洗涤上述试管三次，之后使用γ-计数器来确定放射性。非特异性结合(nonspecific binding)在与用于测量全部结合的条件相同的条件下，当作为非标记配体的5’-N-乙基甲酰胺基腺苷(NECA)存在10μM的情况下被确定，对于作为平衡常数的K_i值是在假设[¹²⁵I]AB-MECA的K_d值为1.48nM前提下，根据郑-普鲁萨福(Cheng-Prusoff)方程式进行确定。通过从全部结合减去非特异性结合来计算出特异性结合。基于这样测量的特异性结合，得出对多种受体的各样品的结合亲和度。

另外，以如下方式测量对于从HEK 293细胞(人类肾脏内皮细胞株)表达的A_2A受体与标记配体[³H]CGS-21680(2-(((4-(2-羧乙基)苯基)乙基氨基)-5’-N- 乙基氨基甲酰基)腺苷)的结合。在将脑膜在30℃下培养30分钟时，以及在加入放射性配体后进行培养时，加入腺苷脱氨酶(adenosine deaminase)，并且至少在6种不同浓度下测量对各个实施例中的化合物的IC₅₀，并使用普来特(PLAT) 软件来确定K_i值。将根据本发明的实施例中化合物的结构、取代基和结合亲和度的测量结果以及得出的K_i值一起表示在表1中。

<表1>

如表1所示，本发明实施例的化合物对人类腺苷A₃受体显示出了高的结合亲和度，但是对于腺苷A₁和A_2A受体显示出了低的亲和度，即显示出了高选择性。尤其，本发明实施例12的化合物对于hA₃受体显示出最高的亲和度，其亲和度常数K_i值为1.50±0.40nM，其次，对于其余实施例而言，，可按照结合亲和度的降序排列为：实施例2的化合物(K_i＝1.66±0.90nM)，实施例14的化合物 (K_i＝2.50+1.00nM)，实施例10的化合物(K_i＝3.69±0.25nM)和实施例4的化合物(K_i＝4.16±0.50nM)。并且，本发明实施例4的化合物对于在中国仓鼠卵巢 (CHO)细胞表达的鼠腺苷A₃受体也显示出高亲和度(K_i＝3.89±1.15nM)，而且对人类腺苷A_2B受体的没有显示出作为激动剂或拮抗剂的活性。

另外，在具有卤苄基取代基的实施例的化合物中，其结合亲和度显示出Cl ＞I＞F＞Br的排序，其中具有3-氯苄基的实施例2的化合物相比于具有2-氯苄基的实施例5的化合物(K_i＝25.8±6.3nM)，显示出对hA₃腺苷受体的更高的亲和度。另外，对于结合亲和度而言，相比于苯环的2-位或4-位被取代的化合物或者2，5-位双取代的化合物，人类腺苷A₃受体显示出更偏好苯环的3-位被取代的实施例的化合物。而且，具有4’-O的氧代核苷形式的腺苷衍生物的实施例15 和16的化合物也显示出了高的结合亲和度和选择性，然而，与作为具有相应的 4’-S的硫代核苷形式的腺苷衍生物的实施例3和4的化合物相比并未显示出更好的特性。并且，确认了嘌呤碱基第2位的氯基被氢原子取代的实施例10至14 的化合物相比于2-氯基的化合物具有更好的亲和力和选择性。

<实施例2>根据本发明衍生物的对腺苷A₃受体的拮抗作用和cAMP抑制实验

为了证实本发明的衍生物作为拮抗剂是否对人类腺苷A₃受体有效，通过用实施例4的化合物和Cl-IB-MECA一起处理CHO细胞，从而进行了本发明的衍生物的拮抗作用和cAMP抑制作用的实验。

如图1所示，对于人类腺苷A₃受体而言，在用不同浓度的实施例4的化合物处理的CHO细胞中，作为100％纯激动剂的Cl-IB-MECA的激动作用以浓度依赖性的方式被实施例4的化合物所抑制。这表明本发明的化合物与 Cl-IB-MECA在受体的相同的结合位点以竞争的方式发挥作用。并且，利用CHO 细胞进行以人类腺苷A₃受体介导的cAMP抑制实验的结果，可以证实本发明的实施例的化合物为100％的纯腺苷A₃拮抗剂。因此，进行Schild分析时测定出的根据本发明合成的化合物的解离常数K_B值为1.92nM。

<实施例3～6>根据本发明衍生物的抗炎活性测定

为了检验本发明的衍生物的抗炎活性，进行了如下的动物实验。对七周龄雄性ICR小鼠，用TPA(12-氧-十四烷酰佛波醇-13-醋酸酯，20μl)处理右耳。在15分钟内，将实施例1至16的化合物以0.5％的浓度稀释在丙酮(20μl)、蒸馏水或将DMSO和丙酮混合的混合溶剂(在表2至表5显示了该组合)中，并给药至上述小鼠。并且，将作为炎症治疗剂使用的氢化可的松(hydrocortisone) 作为对照组，并以相同的浓度进行处理从而执行相同的实验。

接着，TPA处理6小时后，用本发明的腺苷衍生物化合物进行二次处理。 TPA处理24小时后，使用颈椎脱臼法(cervical dislocation method)将实验动物安乐死。然后，使用直径为6mm的穿孔器获得右耳的样品。并且，其活性可通过使用微量天平测量重量而进行确定。使用以下数学式1来计算抑制率(％)。实验例3至6的处理组合和处理用量表示在表2至表5中，并且将其抗炎活性显示在图2至5中。

数学式1

[表2]

实验例3	处理组合	处理用量
			3-1	未处理	-
3-2	单独的TPA	20μl
			3-3	TPA+丙酮	20μl+20μl
3-4	TPA+丙酮+实施例2的化合物	20μl+0.5％/20μl
			3-5	TPA+丙酮+实施例3的化合物	20μl+0.5％/20μl
3-6	TPA+丙酮+实施例4的化合物	20μl+0.5％/20μl
			3-7	TPA+丙酮+氢化可的松	20μl+0.5％/20μl

[表3]

实验例4	处理组合	处理用量
			4-1	未处理	-
4-2	单独的TPA	20μl
			4-3	TPA+丙酮	20μl+20μl
4-4	TPA+丙酮+实施例1的化合物	20μl+0.5％/20μl
			4-5	TPA+丙酮+实施例6的化合物	20μ1+0.5％/20μl
4-6	TPA+丙酮+氢化可的松	20μl+0.5％/20μl

[表4]

实验例5	处理组合	处理用量
			5-1	未处理	-
5-2	单独的TPA	20μl
			5-3	TPA+混合溶剂(蒸馏水∶丙酮＝1∶4)	20μl+20μl
5-4	TPA+混合溶剂+实施例5的化合物	20μl+0.5％/20μl
			5-5	TPA+混合溶剂+实施例7的化合物	20μl+0.5％/20μl
5-6	TPA+混合溶剂+实施例8的化合物	20μl+0.5％/20μl
			5-7	TPA+混合溶剂+氢化可的松	20μl+0.5％/20μl

[表5]

实验例6	处理组合	处理用量
			6-1	未处理	-
6-2	单独的TPA	20μl
			6-3	TPA+混合溶剂(DMSO∶丙酮＝1∶9)	20μl+20μl
6-4	TPA+混合溶剂+实施例15的化合物	20μl+0.5％/20μl
			6-5	TPA+混合溶剂+实施例16的化合物	20μl+0.5％/20μl
6-6	TPA+混合溶剂+氢化可的松	20μl+0.5％/20μl

如图2所示，虽然相比于作为对照组的氢化可的松是很小的变化，但是将实施例2至4的化合物稀释在丙酮并进行处理后，检验抗炎活性的结果，可以证实能少量减少由TPA诱发的小鼠的耳肿胀。

如图3所示，将本发明实施例1和6的化合物稀释在丙酮并进行处理后，检验的抗炎活性相比于图2所示的实施例2至4的化合物具有增加4倍以上的显著的抑制率。

如图4所示，将本发明实施例5、6和7的化合物以0.5％的浓度稀释在蒸馏水和丙酮的混合溶剂(1∶4)中来检验抗炎活性的结果，分别显示出17％、 34％和53％的炎症抑制率。

如图5所示，将本发明实施例15和16的化合物以0.5％的浓度稀释在DMSO 和丙酮的混合溶剂(1∶9)中来检验抗炎活性的结果，分别显示出59％和79％的炎症抑制率，从而能证实上述化合物具有抗炎活性。

<实施例8>毒性试验

为了试验本发明实施例的化合物的毒性，进行了动物实验。将25±5g的ICR 小鼠(中央实验动物，韩国)和235±10g的无特异性致病菌(SPF)的斯泼累格多雷大鼠(SpragueDawley)(中央试验动物，韩国)分别分成三组，且每组三只。之后，利用实施例2的化合物，分别以20mg/kg、10mg/kg和1mg/kg的剂量进行腹腔给药，观察24小时并判断是否具有毒性。

实验结果，三组中均没有出现死亡的例，并且从表观上(重量增加程度、摄食量等)并未见与对照组存在何种差异，因此能证实本发明的衍生物化合物是安全的药物。

本发明的腺苷衍生物化合物能够以下述剂型的方式实现给药，并且以下制剂仅是对本发明的示例，本发明的内容并不仅限于此。

<制剂例1>粉剂的制备

混合上述成分并填充到气密包装袋中，从而制备出粉剂。

<制剂例2>片剂的制备

混合上述成分并通过常规的片剂制备方法压片，从而制备出片剂。

<制剂例3>胶囊的制备

本发明的腺苷衍生物化合物 50mg

乳糖 50mg

硬脂酸镁 1mg

混合上述成分并通过常规的胶囊剂制备方法定型，从而填充到明胶胶囊中。

<制剂例4>注射剂的制备

本发明的腺苷衍生物化合物 10mg

注射用无菌蒸馏水适量

pH调节剂适量

通过常规的注射剂制备方法，将活性成分溶解在注射用无菌蒸馏水，并将 pH调节至7.5左右，接着将全部注射用蒸馏水填充至容量为2ml的安瓿，并进行灭菌，从而制备出注射剂。

<制剂例5>液体制剂的制备

通过常规的液体制剂制备方法，将上述成分溶解在纯净水中，加入适量的柠檬调味剂，接着用纯净水将体积调整为100ml，之后将该溶液填充至棕色小瓶并进行灭菌，从而制备出液体制剂。

<制剂例6>口服制剂的制备

本发明的腺苷衍生物化合物适量

0.5wt％甲基纤维素(Methyl Cellulose，MC) 适量

使本发明的腺苷衍生物化合物悬浮在0.5wt％甲基纤维素(Wako Pure ChemicalIndustry，Japan)，从而完成制备。

<实验例9>用于确认本发明腺苷衍生物对非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症及肝硬化症的效果的实验

为了确认本发明腺苷衍生物对非酒精性脂肪肝炎及肝纤维化症的效果，进行了以下动物实验。

对诱发了非酒精性脂肪肝炎的24只小鼠(mice)(下述每个实验例各8只)，在6周龄到10周龄期间，如表6所示，将实施例2的化合物和赋形剂(0.5％甲基纤维素(Methylcellulose))一起每天口服给药1次。

[表6]

实验例9	给药量
		9-1	实施例2的化合物7mg/kg+0.5％MC
9-2	实施例2的化合物15mg/kg+0.5％MC
		9-3	实施例2的化合物30mg/kg+0.5％MC

作为对照组，对于8只正常的小鼠(mice)，在10周龄之前没有进行任何处理，作为阳性对照组(positive control)，对于诱发了非酒精性脂肪肝炎的8只小鼠，在6周龄到10周龄期间，按照10mg/kg每天口服给药1次作为高血压治疗剂的替米沙坦(telmisartan)，作为阴性对照组(negative control)，对于诱发了非酒精性脂肪肝炎的8只小鼠，在6周龄到10周龄期间，按照10mL/kg每天口服给药1次作为赋形剂的0.5％的甲基纤维素(Methylcellulose)。

接着，用HE染色对10周龄的实验动物的肝(liver)测量了脂肪变性 (steatosis)、炎症(inflammation)及气球样变(Ballooning)的程度，使用天狼星红(Sirius red)染色观察及测量了纤维化症(fibrosis)的发生面积，并且将其结果以邦弗朗尼多重比较检验(Bonferroni Multiple Comparison Test)予以数值化(scoring)后表示于图6至图11。

图6至图11中，低剂量组(Low dose group)、中剂量组(Medium dose group) 及高剂量组(High dose group)分别表示实验例9-1、9-2及9-3，正常(Normal)、空白组(Vehicle)及替米沙坦(Telmisartan)分别表示对照组、阴性对照组及阳性对照组。

图6是将实验动物的肝的脂肪变性程度予以数值化后示出的曲线图。如图6 所示，与阴性对照组相比，在给予本发明腺苷衍生物的实验例9的小鼠和阳性对照组的小鼠并没有出现脂肪变性的显著减少。

图7是把实验动物的肝的炎症程度予以数值化后示出的曲线图。如图7所示，在给予本发明腺苷衍生物的小鼠中，确认了本发明腺苷衍生物具有依赖于上述衍生物剂量的抗炎症活性。

图8是把实验动物的肝的气球样变程度予以数值化后示出的曲线图。如图8 所示，在给予了本发明腺苷衍生物的小鼠中，出现了依赖于上述衍生物剂量的气球样变抑制效果，在以较低剂量投入了本发明腺苷衍生物的实验例9-1的小鼠中，也能确认气球样变的显著减少。

图9是把实验动物的肝的脂肪变性、炎症及气球样变数值予以整合后计算出的针对非酒精性脂肪肝炎的活性的曲线图。如图9所示，可以证实本发明腺苷衍生物以剂量依赖性的方式对非酒精性脂肪肝炎的缓解具有显著的活性。

图10是观察了实验动物的肝的纤维化症发生程度的显微镜照片(photomicrograph)，图11是示出纤维化症发生面积的曲线图。图10中染成红色的部分是纤维化症发生部位。如图10与图11所示，给予了本发明腺苷衍生物的小鼠中，具有依赖于上述衍生物的剂量的纤维化症抑制活性，在以较低剂量给予本发明腺苷衍生物的实验例9-1的小鼠中也能确认纤维化症发生面积的显著减小。

<实验例10>本发明的腺苷衍生物的物理化学特性试验

为了针对本发明的腺苷衍生物的物理化学特性进行试验，在体外(in vitro) 对实施例2的化合物进行了实验，并且将其结果列示在表7。血浆(plasma)稳定性(stability)及蛋白质结合度(protein binding)是利用大鼠(Rat)和人(Human) 的血浆进行了测量。

[表7]

如表7所示，能确认本发明腺苷衍生物具有适合于利用口服制剂的口服给药的吸收、分布、代谢及排泄(ADME)的特性值。

<实验例11>对于本发明腺苷衍生物的口服给药的药物动力学试验

为了试验本发明腺苷衍生物的口服给药后的吸收、分布、代谢及排泄 (ADME)的特性，在体内(in vivo)测量了实施例2的化合物的药动 (Pharmacokinetic，PK)特性。

如表8所示，将实施例2的化合物以不同的给药方式施用于实验动物。静脉给药采取了通过插入大腿静脉的管(tube)给药的方式，口服给药则采取了利用经口灌胃(oralgavage)由口腔给药的方式。

[表8]

给药后在24小时内以规定时间间隔采血，并且对血液进行离心后分离出血浆，并且使用适当的有机溶剂对血浆样品进行预处理后根据LC-MS/MS分析浓度。利用WinNonlin(Pharsight，USA)分析实施例2的化合物的血中浓度-时间数据，并通过图12至图16示出了其曲线图，而表9至表13示出了根据其算出的对药代动力学参数(noncompartmentalpharmacokinetic parameter)的结果。图 12至图16中，I.V.表示静脉给药组，P.O.表示口腔给药组，并且表14示出了对表9至表13的各参数的定义。

[表9]

NA，not applicable；ND，not detected；NC，not calculated

表10

表11

NA，not applicable；ND，not detected；NC，not calculated

表12

NA，not applicable；ND，not detected；NC，not calculated

表13

表14

图12与表9是得自实验例11(11-1及11-2)的血中浓度-时间数据的曲线图及参数值，图13与表10是得自实验例12(12-1及12-2)的血中浓度-时间数据的曲线图及参数值。如图12、图13、表9及表10所示，本发明的腺苷衍生物的半衰期(T_1/2)最长为3.34小时以上，从而能实现长时间的暴露，相比于静脉给药，其生物利用度(Ft)最高达到99.9％以上，由此能确认其具有适合口服给药的特性。

图14和表11是得自实验例13的血中浓度-时间数据的曲线图及参数值。如图14和表11所示，本发明的腺苷衍生物在小鼠中的半衰期(T_1/2)也能达到3.61 小时左右，从而能实现长时间的暴露，由此能确认其具有适合口服给药的特性。

图15与表12是得自实验例14(14-1、14-2及14-3)的血中浓度-时间数据的曲线图及参数值。在图15中，G2及G3各自表示了溶解在溶剂后口服给药的情形和以胶囊内粉末状态进行口服给药的情形。如图15和表12所示，本发明的腺苷衍生物在利用犬的实验中的半衰期(T_1/2)最高达到5.53小时以上，相比于大鼠或小鼠，可实现更久地暴露，从而具有适合口服给药的特性，尤其是以粉末状态充填在胶囊内后给药时能进一步提高半衰期(T_1/2)及生物利用度(Ft) 等特性。

图16与表13是得自实验例15(15-1及15-2)的血中浓度-时间数据的曲线图及参数值。如图16与表13所示，本发明的腺苷衍生物在口服给药时与甲基纤维素(MC)一起投入时，相比于一起投入作为现有赋形剂的二甲基亚砜 (DMSO)、聚乙二醇(PEG)、蒸馏水(D.W.)等的情形更具有优异的特性。

<实验例16>本发明的腺苷衍生物的毒性试验

为了试验本发明的腺苷衍生物的毒性，针对实施例2的化合物评估了细胞毒性(cytotoxicity)、心脏毒性(hERG ligand binding assay)、遗传毒性及单次给药毒性。

首先，为了试验实施例2的化合物的细胞毒性而使用了Cyto XTM细胞存活率检测试剂盒(Cyto XTM cell viability assay kit)。实验结果，基于实施例2的化合物的IC₅₀在各个细胞株为10μM以上，因此其在细胞毒性方面被评估为安全。

为了试验实施例2的化合物的心脏毒性而使用了非电生理 (non-electrophysiological)试验法，该试验法通过基于红色荧光hERG通道配体示踪剂(redfluorescent hERG channel ligand tracer)的hERG通道蛋白(hERG channel protein)结合程度的荧光偏振(fluorescence polarization)评估来对心脏稳定性进行评估。试验结果，对于实施例2的化合物10μM的抑制率为基准值 (50％)以下，因此其在心脏毒性方面被评估为安全。

为了试验实施例2的化合物的遗传毒性，利用组氨酸缺陷型沙门氏菌 (TA98、TA100、TA1535及TA1537菌株)及色氨酸缺陷型大肠杆菌(WP2uvrA (pKM101)菌株)，在不存在代谢激活及存在代谢激活的情形下各自评估了实施例2的化合物的基因突变诱发性。评估结果，实施例2的化合物以与是否进行代谢激活无关的方式在各菌株的所有使用量中回复突变克隆数没有超过阴性对照组的2倍，也没有观察到使用量依赖性的增加现象，而在阳性对照组中针对各菌株的回复突变菌落数相比于阴性对照组则确实增加了2倍以上。从上述结果得知，实施例2的化合物在遗传毒性方面被评估为安全。

为了试验实施例2的化合物的单次给药毒性，将实施例2的化合物按照 2,000mg/kg分别单次给药至五只雄性大鼠(male rat)和五只雌性大鼠(female rat)。试验结果，实验动物没有死亡，根据上述结果，实施例2的化合物在单次给药毒性方面被评估为安全。

表15是整理了上述本发明的腺苷衍生物的毒性试验结果的表。从表15可确认，本发明的腺苷衍生物在细胞毒性、心脏毒性、遗传毒性及单次给药毒性方面是安全的。

[表15]

试验种类	毒性
		细胞毒性评估	没有发现
心脏毒性评估	没有发现
		遗传毒性评估	没有发现
单次给药毒性评估	没有发现

<实验例17>在肝主要细胞组中分析A₃腺苷受体的表达

在小鼠的肝中，通过直接将消化液(digestion solution)(胶原酶(collagenase)，蛋白酶(proteinase))进行灌注(perfusion)来分解肝脏中存在的结缔组织，从而制成单细胞(single cell)状态，然后分离出肝细胞(hepatocytes)、枯否细胞(Kupffer cells)及肝星状细胞(hepatic stellate cells)。在分离肝星状细胞时，利用基于碘海醇(Nycodenz)的密度梯度离心分离法(density gradient centrifugation) 分离出具有特定比重的肝星状细胞富集成分(hepatic stellate cell-enriched fraction)。最终，通过执行基于磁珠的阴性分选(magnetic bead-based negative selection)将肝星状细胞分离出，并进行培养。针对所分离出来的各细胞组，通过实时聚合酶链式反应(Real-time polymerase chain reaction，real-time PCR)确认了A3腺苷受体(A3adenosinereceptor，A3AR)的表达，而图17是示出其结果的曲线图。在图17中HSCs表示肝星状细胞，KCs则表示枯否细胞。

A3AR mRNA表达在肝细胞、枯否细胞及肝星状细胞均能实现，如图17所示，可以确认在枯否细胞表达的特别多，并且在肝星状细胞也发生显著的表达。

<实验例18>本发明的腺苷衍生物对肝星状细胞(hepatic stellate cells)的抗纤维化作用分析

培养肝星状细胞后，在非激活状态(第一天(Day 1))及激活状态(第三天 (Day3))下分析了实施例2的化合物的抗纤维化效果。用实施例2的化合物按照不同浓度(28μM、48μM及8μM)进行处理后，以real-time PCR分析了作为肝星状细胞的代表性肝纤维化活性因子Timp1、Col1a1及Acta2(αSMA)的表达，图18是示出其结果的曲线图。

参照图18可知，通过实施例2的化合物浓度依赖性的减少了Timp1在肝星状细胞中的表达(参照图18的A)，其中Timp1被认为可通过基质金属蛋白酶 (Matrixmetalloproteinases(MMPs))的抑制来诱发纤维化；通过实施例2的化合物减少了作为激活的肝星状细胞所生成的代表性细胞外基质(Extra Cellular Matrix，ECM)的胶原(Collagen)的表达(参照图18的B)；并且，通过实施例2的化合物浓度依赖性的减少了Acta2(alpha smooth muscle actin)的表达(参照图18的C)，Acta2作为激活的肝星状细胞的代表性标记物。

如图18所示，实施例2的化合物的抗纤维化效果可直接作用于肝星状细胞的肝纤维化活性。

虽然通过以上内容说明了本发明的实施例，但是本领域技术人员应当理解在不改变本发明的技术思想或必要特征的前提下，还可以用其他具体方式实施本发明。因此，上叙述的实施例仅仅是示例性的，且其并不用于限定本发明。

Claims

1.一种药物组合物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症或肝硬化症的药物中的应用，其特征在于，

其作为活性成份包含以下化学式A表示的化合物或其药用盐，

化学式A

2.根据权利要求1所述的药物组合物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症或肝硬化症的药物中的应用，其特征在于，

所述药物组合物为口服制剂。

3.根据权利要求2所述的药物组合物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症或肝硬化症的药物中的应用，其特征在于，所述口服制剂还包含赋形剂，

上述赋形剂包括选自由甲基纤维素、二甲基亚砜、聚乙二醇及蒸馏水所构成的组中的一种以上。

4.根据权利要求2所述的药物组合物在制备预防或治疗非酒精性脂肪肝炎、肝纤维化症或肝硬化症的药物中的应用，其特征在于，

以上述化学式A表示的化合物或其药用盐以粉末状态充填在胶囊剂内。