CN101766675A - 一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物的制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物及其制备方法和实际应用，其特征在于用水来提取合欢皮的干燥树皮、茎皮、叶、花、种子、豆荚或根，然后水提取液依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，分离合并正丁醇萃取相并且浓缩除去正丁醇溶剂、冷冻干燥制成合欢皮提取物粉末。此种合欢皮提取物有抗肿瘤血管生成及其它与血管生成有关疾病治疗、预防的用途；其可以在抑制血管生成的药物中使用；或者在制备抑制血管生成的保健食品中的应用；或者在制备抑制血管生成的化妆品中的应用。

Description

一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物的制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物及其制备方法，并且阐明了其在医药，食品、化妆品方面的用途，属于中药应用技术领域。

背景技术

统计资料表明，全世界每年癌症发病人数约1000万，死亡约700万人，己成为仅次于心血管病的人类第二杀手。我国每年新增恶性肿瘤患者约160万人以上，因恶性肿瘤死亡的人数占全国总死亡人数的17.9％。如何找到符合中国国情的抗肿瘤药物研发方向，是摆在国内药物研发机构面前一个现实而严峻的问题。

目前临床治疗肿瘤的药物主要分为两大类，除常见的直接杀死肿瘤细胞的化疗药物以外，改变肿瘤恶性行为的药物，如血管生成抑制剂越来越受到药物研究者的关注。血管生成抑制剂以血管内皮细胞为目标靶细胞，通过切断肿瘤的供养，从而遏制肿瘤的生长和转移，它已成为当今新型抗肿瘤药物研究最活跃的领域之一。与常规的肿瘤化疗药物相比，血管生成抑制剂最大的优点是抗癌谱广，不易产生耐药性，针对各种实体瘤均有效。国外在此领域发展迅速，已成功开发了血管生成抑素(Angiostatin)、内皮抑素(Endostatin)等生物制剂，每年可创8.5亿美金的利润。但由于这些生物制剂属多肽类药物，体内稳定性差，生物利用度低，只能静脉给药，且给药剂量大(50mg/kg)，疗程长，治疗费用高，长期使用的毒副作用尚有待评价。例如Endostatin临床每天静脉给药15mg，十四天为一治疗周期，通常要进行2～4个周期的治疗，仅药物费用高达3～6万元，不但加重了患者的精神负担与经济负担，而且大剂量、长时间给药所带来的安全性问题也不容忽视。因此，开发口服、高效、低毒、分子量小、价格便宜、特异性高的肿瘤血管生成抑制剂已成为急需解决的问题。天然药物，特别是中国传统中药以其疗效可靠、毒副作用小、资源丰富、价格便宜等优点日益受到国内外药学研究者的重视。以我国中药为研发对象，在传统中医药理论指导下，临床与科研单位紧密协作，运用现代生物技术开展中药的研究与开发，有可能获得拥有完全自主知识产权的药物。

合欢皮是我国的一味常用中药，为豆科植物合欢Albizia julibrissinDurazz.的干燥树皮，具有解郁安神、活血消肿的功能，用于心神不安、忧郁失眠、肺痈疮肿、跌扑伤痛等症。文献报道合欢皮提取物具有广泛的体内、体外抑制肿瘤细胞增殖的细胞毒活性。但它是否具有的抗血管生成的作用，以及它的抗肿瘤作用是否与其抑制肿瘤血管形成有关尚不清楚。经过调研，未见合欢皮抑制血管生成作用的相关文献报道，因此合欢皮在抑制血管生成的药理、药效等研究领域尚处于空白阶段。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的是提供一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物，以及阐述了它的制备方法和实际应用。

本发明的技术方案：一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物。

所述合欢皮提取物的制备方法，是用水来提取合欢皮的干燥树皮、茎皮、叶、花、种子、豆荚或根，水提取液依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取后，分离合并正丁醇萃取相并且浓缩除去正丁醇溶剂、干燥制成合欢皮提取物粉末。

所述合欢皮提取物在制备抑制血管生成药物中的应用，是该抑制血管生成药物含有有效剂量的合欢皮提取物及常规药用载体和/或赋形剂。

所述的应用，还指所述合欢皮提取物被制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、注射液、膏剂、霜剂或乳剂。

所述的应用，还指所述合欢皮提取物可以用于预防和/或治疗至少一种选自下述之一的疾病：癌症和/或癌症转移，血管瘤，血管纤维瘤，新生血管性青光眼，糖尿病视网膜病变，早熟视网膜病及视网膜静脉闭塞，视网膜变性，晶体后纤维组织增生，颗粒性结膜炎，血管生成引起的角膜疾病，更年期黄斑和黄斑变性，牛皮癣，老年盘状斑变性及风湿性关节炎，银屑病，毛细管扩张，脓性肉芽肿，伤口愈合中抑制斑痕形成，动脉粥样硬化，脂溢性皮炎和痤疮。

所述的应用，还指所述合欢皮提取物有抗肿瘤血管生成及其他与血管生成有关疾病治疗、预防的用途，以及有用于肿瘤化疗和/或辅助化疗的用途。

所述的应用，还指所述合欢皮提取物可以制成用于抑制血管生成的保健食品和化妆品。

本发明中合欢皮提取物可用常规方法制备。在实际需要的时候，在合欢皮提取物中可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂，赋形剂、填充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂、乳化剂、渗透压调节剂，必要时还可以加入香味剂、甜味剂等。

本发明巧妙地以血管生成作为治疗疾病的靶点，研究并阐明合欢皮提取物的药用疗效和机制，为其新用途开发和发现药物作用新的靶点提供科学依据和重要信息，是中医药理论新的发展方向。

本发明是结合最佳实施例进行描述的，然而在阅读了本发明的上述内容后，本领域技术人员能领会在公开的实施例中作许多改变也可获得相同或类似的结果，而不超出本发明的构思、精神和范围。更具体地说，显然有些化学和生理性的相关试剂可替代本文所公开的试剂而得到相同或类似的结果。所有类似的取代和修饰对本领域技术人员来说，显然都认为是本发明的精神、范围和构思及权利要求范围内的，即所有上述这些等价形式都同样落于本发明的权利要求书所限定的范围。

附图说明

图1合欢皮水提取物各个有机溶液萃取相对人血管内皮细胞增殖的抑制作用

图2合欢皮提取物对鸡胚尿囊膜血管生成的抑制作用

具体实施方式

下面的实例将具体说明本发明的操作方法，但不能作为对本发明的限定。

实施例一：本发明提供的合欢皮提取物的制备方法如下

合欢皮生药材50g加水600mL煎煮提取两次，每次提取两小时，合并两次水提取液，离心(8000rpm，20min)，取上清液，浓缩成100mL的浸膏。然后按体积比1∶1的方式，依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇三种溶剂在常温下对浓缩浸膏进行萃取，每种溶剂均萃取4次，合并三个萃取相，浓缩回收有机溶液，冷冻干燥，备用。

实验结果显示，合欢皮水提取液的正丁醇萃取物粉末呈白色，干物质提取率为0.52％。

实施例二：合欢皮提取物对人血管内皮细胞增殖的抑制作用。

将人微血管内皮细胞(HMEC-1，法国国家卫生医学研究所惠赠)置于含1mmol谷氨酰胺，1μg/mL氢化可的松，10ng/mL表皮生长因子(EGF)和15％小牛血清的MCDB-131培养液中培养(37℃、5％CO2、95％湿度)。取对数生长期细胞，以10⁵cell/mL细胞接种于96孔板，100μL/孔，每组设4个平行孔，放置于37℃、5％湿化CO₂的培养箱过夜。加不同浓度本发明实施例一中制得的乙醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取物以及萃取后剩下的残渣，培养72小时后，去掉上清液，每孔轻轻地加入10％三氯醋酸100μL固定，静置5min后移到4℃放置1h后倒掉固定液，用去离子水洗5次，空气干燥。每孔加入0.4％磺酰罗丹明B(SRB)100μL 37℃培养箱放置30min，用1％醋酸液洗5次，空气干燥。加100μL 10Mm Tris碱液(pH 10.5)溶解，自动分光光度仪在531nm波长处测定每个小孔的吸光度值(A)。上述实验重复3次。抑制率(％)计算如下：

根据所得的结果计算其半数抑制量(IC₅₀)。

实验结果如图1所示，合欢皮水提取物的正丁醇萃取部位对HMEC-1细胞有抑制增殖的活性，其半数抑制量约为55μg/mL，而乙醚萃取部位、乙酸乙酯萃取部位以及萃取后的水液则没有活性体现，提示合欢皮的活性成分经过萃取后富集于正丁醇萃取部位之中。

实施例三：合欢皮提取物抑制鸡胚尿囊膜血管生成(CAM实验)。

实验样品为本发明实施例一中制得的合欢皮水提取物正丁醇萃取部位。

白皮种蛋，参考张树成的方法【张树成，吴志奎，王蕾，等.研究中药血管生成活性和作用的鸡胚绒毛尿囊膜试验模型的应用.中国中医基础医学杂志，1999，5：16-19.】制备鸡胚尿囊膜。用打孔器制备直径为6mm的微孔滤膜圆片，湿热高压消毒。设合欢皮提取物给药组(250μg/mL)和生理盐水阴性对照组。将药物滴于滤纸上，制成药膜，吹干备用。鸡胚培养3d后分组，将药膜贴于CAM的部位。加药48h后，观察药膜周围的血管数，并摄影记录。

CAM是经典的血管生成评价模型。实验结果如图2所示，生理盐水阴性对照组CAM血管生成非常明显，整体呈鲜红色，血管在药膜下呈放射状生长，血管粗大，血液充盈，血管分支较多，毛细血管密度大。合欢皮提取物给药组浓度为250μg/mL时则明显抑制了血管生成，放射状生长的血管数目大为减少，血管主要以零星、杂乱、叶脉样等表现形式存在，血管细小，稀疏，血管分支少，血管色淡浅黄，在药膜片下及周围局部鲜有血管区，或者血管断裂或消失。

实施例四：合欢皮提取物的片剂制备工艺。

按本发明实施例一中的制备方法制得的合欢皮水提取物正丁醇萃取部位白色粉末，加水溶解制成相对密度为1.0(60℃)的清膏，清膏加入糊精后混匀，喷雾制粒，过14目筛整粒，加入0.2％硬脂酸镁，混匀，压制成片，包薄膜衣，消毒后包装即可。用法和用量：每日3次，每次4片，每片0.25克，饭后30分服用，3个月为一疗程。

Claims (7)

1.一种用于抑制血管生成的合欢皮提取物。

2.权利要求1所述合欢皮提取物的制备方法，其特征是用水来提取合欢皮的干燥树皮、茎皮、叶、花、种子、豆荚或根，水提取液依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取后，分离合并正丁醇萃取相并且浓缩除去正丁醇溶剂、干燥制成合欢皮提取物粉末。

3.权利要求1、2所述合欢皮提取物在制备抑制血管生成药物中的应用，其特征是该抑制血管生成药物含有有效剂量的合欢皮提取物及常规药用载体和/或赋形剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述合欢皮提取物被制成片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊剂、口服液、注射液、膏剂、霜剂或乳剂。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述合欢皮提取物是用于预防和/或治疗至少一种选自下述之一的疾病：癌症和/或癌症转移，血管瘤，血管纤维瘤，新生血管性青光眼，糖尿病视网膜病变，早熟视网膜病及视网膜静脉闭塞，视网膜变性，晶体后纤维组织增生，颗粒性结膜炎，血管生成引起的角膜疾病，更年期黄斑和黄斑变性，牛皮癣，老年盘状斑变性及风湿性关节炎，银屑病，毛细管扩张，脓性肉芽肿，伤口愈合中抑制斑痕形成，动脉粥样硬化，脂溢性皮炎和痤疮。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征是该提取物有抗肿瘤血管生成及其他与血管生成有关疾病治疗、预防的用途，还有用于肿瘤化疗和/或辅助化疗的用途。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征是该提取物在制备抑制血管生成的保健食品中的应用，或者在制备抑制血管生成的化妆品中的应用。

Images