CN101716255A - 一种具有视神经保护作用的药物组合物及制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种具有视神经保护作用的药物组合物,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂;枸杞40-400份、灯盏花45-480份。本发明药物用于肝肾不足,目络瘀滞的视神经病变的治疗。经研究显示该药物组合具有具有保护视神经的作用。可用于治疗主要包括正常眼压青光眼、视网膜血管闭塞、糖尿病性视网膜病、缺血性视神经病、黄斑变性、色素性视网膜炎和利伯氏病的视网膜疾病的视神经保护药物。

Description

一种具有视神经保护作用的药物组合物及制备方法和用途
技术领域
本发明涉及一种具有视神经保护作用的药物组合及制备方法。
背景技术
人类的视神经由大约1,000,000根视神经纤维组成。现在认为当30%的纤维紊乱时,静态视野计能够检测到异常;当50%的纤维紊乱时,会对视野造成影响并被动态视野计检测到。视神经纤维是由视网膜神经节细胞的轴突组成,延长至外侧膝状体核。西医学大多根据视神经损害的部位而将视神经萎缩分为三种:一、下行性视神经萎缩(descending optic atrophy),它是由于筛板以后的眶内、管内、颅内段视神经或视交叉、视束、外侧膝状体的损害,而引起的视神经的萎缩:又称为原发性视神经萎缩(primary opticatrophy)。二、继发性视神经萎缩(Secondary optic atrophy),它是由于长欺的视神经乳头水肿或严重的视神经乳头炎而引起的视神经萎缩,病变多局限于视神经乳头及其邻近区域。三、上行性视神经萎缩(ascending opticatrophy),它是由于视网膜或脉络膜的广泛病变,引起视网膜神经节细胞的损害而导致的视神经萎缩,故又名视网膜性视神经萎缩(retinitic opticatrophy)。
引起视神经萎缩的原因多种多样,甚至有时临床上很难查出视神经萎缩的病因。一般来说常见的病因有:一、视网膜神经节细胞或神经纤维的损害,如视网膜色素变性、严重的脉络膜视网膜的变性、炎症及萎缩;二、视神经的脱髓鞘疾病,如多发性硬化、弥散性硬化、视神经脊髓炎:三、炎症,如视神经炎、脑膜炎、脑炎、脑脓肿、败血症等;四、缺血性疾病,如视网膜中央动脉阻塞、颈内动脉供血不足或阻塞、动脉硬化、高血压、巨细胞动脉炎、红斑狼疮、大量失血、低压青光眼等:五、视神经乳头水肿;六、中毒及营养障碍,如砷、铅、甲醇、奎宁、乙胺丁醇、烟草等的中毒,以及维生素B族的缺乏,如严重营养不良、脚气病、恶性贫血等:七、压迫,如颅内、眶内肿瘤或血管瘤的压迫,骨质增生,视神经管骨折的碎片压迫;八、遗传性疾病,如Leber病、粘多糖贮积病等;九、视神经原发性肿瘤或转移性肿瘤;十、外伤,如视神经的直接挫伤或撕脱;十一、青光眼:十二、晚期梅毒,如脊髓疹及麻痹性痴呆常引起视神经萎维。
视神经萎缩的病理机制目前还不十分清楚,目前主要有以下几种认识:一、视神经纤维的退变和萎缩致视功能明显减退或丧失。二、视神经内毛细血管的闭塞以及神经胶质的增生,致使视神经乳头苍白。三、视神经髓鞘的丧失,使神经纤维的体积缩小或视网膜神经纤维束的缺损。
关于其治疗,西医学多认为其为一种不可逆的损害,故长期以来大多数学者认为其无特殊治疗方法,常采用补充维生素和能量合剂以营养视神经的方法,其效果并不理想,为西医学之难治之症。近年来,一些研究表明,萎缩之视神经可以部分再生,部分处于死亡边缘的视神经细胞可以重新活化而存活,为治疗本病的有效性提供了理论上的依据。因此需要开发用于保护视神经细胞和预防该细胞死亡的视神经保护药物,以保护患者的视力。
中医对视神经萎缩的治疗常从虚、瘀、湿阻、气滞、余邪等方面着手。在选方用药方面在本着损有余而补不足的原则,以开通玄府的法则应贯穿于各临床证型治疗的始终。
枸杞和灯盏花在眼科中的使用均有报道,如:马丽,等,灯盏花素对糖尿病大鼠视网膜血流动力学变化的影响,中山大学研究生学刊;二00五年第三期,报道了灯盏花素能够改善糖尿病视网膜的血流动力学的低流速和高阻力状态,降低血管阻力,增加血流量和灌注量。盛艳梅,等,灯盏花素对体外高压致视网膜神经节细胞凋亡的影响,成都医学院,2007,2(1),报道了灯盏花素能对抗诱导的RGCs凋亡(RGCs:视网膜神经节细胞retinalganglion cells),为灯盏细辛视神经保护的有效组分。林碧珠,等,灯盏花素治疗缺血性视神经病变的疗效特点,中国临床康复,第10卷,第23期,结论:灯盏花素注射液治疗缺血性视神经病变其特点为视力提高明显,视野改善明显,平均臂-视网膜循环时间缩短明显,疗效明显,且无明显不良反应。何剑峰,等,枸杞对糖尿病视网膜病变患者抗氧化反应作用的临床研究,1998年5月第8卷第2期,报道了枸杞对糖尿病视网膜病变患者的氧化损伤有保护作用。刘娜,等,枸杞在保护大鼠视网膜光损伤中作用的研究,中华眼底病杂志,1995年3月第11卷第1期,报道了枸杞对大鼠视网膜锥体、杆体层、外核层和RPE有明显的保护作用。何剑峰,等,枸杞在糖尿病大鼠视网膜组织抗氧化反应中的作用,1997年8月第7卷第3期,报道枸杞具有保护糖尿病大鼠视网膜组织氧化损伤的作用。
但是将两味药物组合,发挥怎么样的作用,对本领域技术人员来说,是难以预料的。目前也没有将枸杞和灯盏花合用的相关报道。
发明内容
本发明的技术方案是提供一种具有视神经保护作用的药物组合物,它具有补益肝肾、活血通络明目的功效。本发明另一个技术方案是提供该药物组合物的制备方法和用途。
本发明提供了一种具有视神经保护作用的药物组合物,它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂;
枸杞40-400份、灯盏花45-480份。
其中,所述原料的重量配比为:
枸杞60-360份、灯盏花80-300份。
进一步优选的,所述原料的重量配比为:
枸杞100-240份、灯盏花80-270份。
更进一步优选的,所述原料的重量配比为
枸杞200份、灯盏花180份。
其中,所述的制剂是片剂、胶囊、颗粒剂或滴丸。
本发明药物是由枸杞、灯盏花中的总黄酮为活性性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂,其中,枸杞多糖、灯盏花总黄酮的重量配比为:
枸杞多糖1-5份、灯盏花总黄酮2-8份。
进一步优选地,所述的枸枸杞多糖、灯盏花总黄酮的重量配比为:
枸杞多糖1份、灯盏花总黄酮2份。
所述的枸杞多糖中总多糖的重量百分含量不低于30%;灯盏花总黄酮中含有野黄芩苷的重量百分含量不低于80%。
其中,所述的制剂是片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸或口服液。
本发明还提供了一种制备所述的药物组合物的方法,该方法包括如下步骤:
a、取重量配比的原料药:枸杞40-400份、灯盏花45-480份;
b、取枸杞加水煎煮,过滤,滤液浓缩,加乙醇至浓度为80%,冷藏,沉淀;所得的上清液,回收乙醇,浓度,加盐酸调pH值为2,于50℃保温20分钟,室温静置,收集酸水液,即得枸杞多糖;
c、取灯盏花加水煎煮,过滤,滤液浓缩,加乙醇至浓度为80%,冷藏,沉淀;所得的上清液,回收乙醇,浓度,加盐酸调pH值为2,于50℃保温20分钟,室温静置,收集沉淀物,即得灯盏花总黄酮;
d、取d、c步骤制备的枸杞多糖和灯盏花总黄酮,按重量配比为:枸杞多糖1-5份、灯盏花总黄酮2-8份配比,加入药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的药剂。
本发明还提供了该药物组合物在制备治疗正常眼压青光眼、视网膜血管闭塞、糖尿病性视网膜病、缺血性视神经病、黄斑变性、色素性视网膜炎和利伯氏病的视网膜疾病的视神经保护药物中的用途。
本发明药物用于肝肾不足、目络瘀滞的视神经萎缩及损伤的辅助治疗,可以改善其视力降低,甚者失明,眼底见视盘色淡,边缘清或不清,或兼血管变细;全身见有腰膝酸软,头晕耳鸣,头眼疼痛,健忘失眠等。
本发明的中药组合物发挥了中医中药的多部位、多靶点的作用,基于中医对视神经疾病的治疗常从虚、瘀、湿阻、气滞、余邪等方面着手;在选方用药方面在本着损有余而补不足的原则,以开通玄府的法则应贯穿于各临床证型治疗的始终。选用药物枸杞性甘、平,归肝肾经,具有滋补肝肾,养肝明目的功效,灯盏花性甘、温,具有益气活血通脉的功效。按照中医理论,视神经疾病以肝肾不足,目络瘀滞的基本病机,针对这个基本病机,本发明所提供的药物可进行防治。从药效学试验分析,本发明药物可较好的针对视神经疾病(视神经萎缩等)治疗有较明确的疗效,同时采用其有效部位配伍使用,具有协同增效作用,初步的安全性试验发现,单次给药对大、小鼠和犬无明显的毒副作用。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1本发明药物的制备方法
取上述重量份的将枸杞和灯盏花药材:枸杞200g、灯盏花180g。
分别将枸杞和灯盏花加水煎煮提取两次,每次用8倍量水,提取2小时。滤过,收集滤液,浓缩至相对密度约为1.25(60℃)的浸膏,加乙醇至浓度为80%,冷藏24小时,取其上清液,回收乙醇,并浓缩至相对密度约为1.25(60℃)的浸膏,加盐酸调pH=2,于50℃保温20分钟,室温静置。其中,枸杞收集酸水液,即得枸杞多糖;灯盏花收集沉淀物,即得灯盏花总黄酮将两种总黄酮混匀,减压干燥(50℃),即得成品。
以下干燥,粉碎成细粉,然后按照中药常规制备方法制成各种制剂,如片剂、胶囊、颗粒剂等等。
实施例2本发明药物的制备
按下述表称取药材(单位:g),按实施例1的方法制备。
  药材   组方2   组方3   组方4   组方5  组方6   组方7   组方8   组方9   组方10   组方11   组方12   组方13
  枸杞   40   40   400   400  60   60   360   360   100   100   240   240
  灯盏花   45   480   45   480  80   300   80   300   80   270   80   270
实施例3本发明药物的制备方法
取实施例1制备的枸杞多糖、灯盏花总黄酮(单位:g)按下述重量配比:
  药材   组方14   组方15   组方16   组方17   组方18
  枸杞多糖   10   20   30   40   50
  灯盏花总黄酮   20   30   50   70   80
将枸杞多糖、灯盏花总黄酮配比,按照中药常规制备方法制成各种制剂,如片剂、胶囊、颗粒剂等等。
本发明使用的枸杞多糖、灯盏花总黄酮不仅仅限于实施例1的方法制备得到了,也可以按文献报道的其它提取工艺制备枸杞多糖和灯盏花总黄酮,或者直接购买市售的按行业标准制备的枸杞多糖和灯盏花总黄酮产品。
如市售的枸杞多糖,是从天然植物枸杞(拉丁文:Fructus Lycii)果实中提取制备的粉状产品。产品质量指标:外观指标:淡黄色或黄棕色粉末,易溶于水。理化指标:多糖含量:%≥30,水分:%≤10,灰分:%≤15,蛋白质:%≥15,重金属:符合国家食品卫生标准,细菌总数:(个/g)合格,致病菌:(个/g)不得检出。
以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1本发明药物有效部分配比试验
根据临床使用经验,分别进行体外和体内复方有效部位的最优配比试验。
目前关于青光眼视神经损害的确切机制尚不十分清楚,但对青光眼的机理研究表明可能有多种机制参与青光眼性视神经损伤,而无论何种机制,其最终的结局均是RGCs的凋亡,阻断RGCs的凋亡过程,可以有效地防止青光眼RGCs的进一步丢失,从而达到保护视神经的目的。因此本实验从药物配比筛选到药效学研究都将以RGCs的凋亡及其机理为主要研究对象,以明确本发明药物的视神经保护作用。
1、体外配比筛选
采用正交试验分别运用MTT法和膜片钳技术,流式细胞术检测不同配比对体外高压培养RGCs凋亡率和高压下视网膜切片视网膜神经节细胞电生理特性的影响。
实验方法:采用噻唑兰比色法(MTT法)测定及本发明药物有效部分不同配伍组(VIS1-15)对体外培养的视网膜神经细胞的保护作用,共分为15次实验,每周实验2次,每次尽量按同样实验条件进行。
每次实验均取出生1~3天SD乳鼠20只,制备成混合的视网膜神经细胞悬液,调整细胞密度,以1000个/mm2的密度加入96孔板,37℃,5%CO2孵箱培养24小时,细胞完全贴壁,无血清培养液洗涤3次,随机分组进行实验:两种药物有效部位(实施例1制备的枸杞多糖∶灯盏花总黄酮)不同配比1∶2、1∶3、2∶3、2∶5、3∶4、3∶5、4∶7、5∶6、2∶1、3∶2、5∶2、4∶3、7∶6、5∶8、8∶7,相应在硼砂缓冲液中的终浓度分别为5mg/ml、0.5mg/ml、0.05mg/ml、0.005mg/ml、0.0005mg/ml、0.00005mg/ml、0.000005mg/ml、神经生长因子、空白对照组、硼砂缓冲液组共108个组;VIS1-15在培养液中的终浓度为10mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml、0.02mg/ml、0.01mg/ml、0.002mg/ml、0.001mg/ml、神经生长因子、空白对照组、硼砂缓冲液组共108个组,每组7孔,37℃,5%CO2孵箱培养24小时后,加入MTT100ul,37℃,5%CO2孵箱培养4小时,吸净培养液,再加入DMSO150ul中止反应,充分震荡后用酶标仪测定OD值。并根据OD值计算细胞存活率。细胞存活率=(试验组OD值-空白组OD值)/空白组OD值*100%。
实验结果:
表1VIS(5∶8)对鼠视网膜神经细胞存活的影响
Figure G2009101792280D0000071
与空白对照组比较:“★★”P<0.01,与神经生长因子对照“☆☆”P<0.01。
表2VIS(1∶2)对鼠视网膜神经细胞存活的影响
Figure G2009101792280D0000072
与空白对照组比较:“★★”P<0.01,与神经生长因子对照“☆☆”P<0.01。
表3VIS(2∶3)对鼠视网膜神经细胞存活的影响
Figure G2009101792280D0000073
与空白对照组比较:“★★”P<0.01
表4VIS(3∶5)对鼠视网膜神经细胞存活的影响
Figure G2009101792280D0000081
与空白对照组比较:“★★”P<0.01。
表5VIS(4∶7)对鼠视网膜神经细胞存活的影响
Figure G2009101792280D0000082
与空白对照组比较:“★★”P<0.01。
结果表明,1∶2、2∶3、3∶5、4∶7、5∶8配比的5mg/ml,0.5mg/ml,0.05mg/ml,0.005mg/ml浓度的对视网膜神经节细胞有明显的保护作用,其OD值与空白对照组相比有显著性差异。5mg/ml、0.5mg/ml浓度的5∶8、1∶2主要成分光密度值与神经生长因子对照组相比有显著性差异。
2、本发明药物动物实验:不同配比VIS对遗传性青光眼小鼠模型RGCs凋亡率的影响
在前面体外配比筛选试验基础上,选取有阳性结果的配比和浓度给遗传性青光眼小鼠灌胃一个月,同时,运用末端脱氧核苷酸转移酶介导生物素标记的脱氧尿嘧啶核苷三磷酸缺口末端(Terminal deoxynucleotidyl transferasemediated dUTP biotin nick end labelling,TUNEL)标记技术,检测不同配比对遗传性青光眼小鼠模型(DBA/2J小鼠)RGCs凋亡率的影响。
实验方法:随机选取8只DBA/2J小鼠作为对照组,其余32只随机分为不同配比组VIS-1(5mg/ml浓度的5∶8配比)组、VIS-2组(0.5mg/ml浓度的5∶8配比)、VIS-3组(5mg/ml浓度的1∶2配比)、VIS-4组(0.5mg/ml浓度1∶2配比)各8只。其中对照组自由摄水饮食。不同配比组灌胃给药,每日1次,连续一个月。一个月后检测流式细胞仪检测视网膜神经节细胞凋亡率:过量麻醉大鼠,立即取出眼球,在显微镜下,沿角巩膜缘前约0.5-1mm处剪开角膜,去晶体、玻璃体,然后沿锯齿缘剥离视网膜,立即放入1ml PBS液,剪碎后加入1ml 0.25%胰酶消化,37℃CO2孵箱放置45min,小牛血清终止消化,以PBS液混匀洗,2000r/min离心3min,去上清液,反复洗2次,去上清液后加入1ml 70%冰酒精(4℃)固定,送四川大学华西医学中心进行流式细胞仪检测,采用碘化丙锭(propidiumiodide,PI)染色法。
实验结果:
表6各组大鼠RGCs凋亡百分率比较
Figure G2009101792280D0000091
(%)
Figure G2009101792280D0000092
与对照组比较P<0.05;**与对照组比较P<0.01
结果表明,1∶2配比的5mg/ml浓度对视网膜神经节细胞有保护作用,能减少高压导致的视网膜神经节细胞凋亡率,与空白对照组相比有显著性差异。
上述药效学试验证明,本发明药物具有明显视神经保护作用,尤其是将有效部位枸杞多糖、灯盏花总黄酮配伍使用,能发挥协同的增效的作用,在枸杞多糖1-5份、灯盏花总黄酮2-8份配伍时,具有明显的协同增效作用,其中尤其以1∶2配比药效最佳。

Claims (10)

1.一种具有视神经保护作用的药物组合物,其特征在于:它是由下述重量配比的原料制备而成的制剂;
枸杞40-400份、灯盏花45-480份。
2.如权利要求1所述的药物组合物,其特征在于:所述原料的重量配比为:
枸杞60-360份、灯盏花80-300份。
3.如权利要求2所述的药物组合物,其特征在于:所述原料的重量配比为:
枸杞100-240份、灯盏花80-270份。
4.如权利要求3所述的药物组合物,其特征在于:所述原料的重量配比为:
枸杞200份、灯盏花180份。
5.根据权利要求1-3任一项所述的药物组合物,其特征在于:它是由枸杞提取物中的枸杞多糖、灯盏花中的总黄酮为活性成分,加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的制剂,其中,枸杞多糖、灯盏花总黄酮的重量配比为:
枸杞多糖1-5份、灯盏花总黄酮2-8份。
6.根据权利要求5所述的药物组合物,其特征在于:所述的枸枸杞多糖、灯盏花总黄酮的重量配比为:
枸杞多糖1份、灯盏花总黄酮2份。
7.根据权利要求5或6所述的药物组合物,其特征在于:所述的枸杞多糖中总多糖的重量百分含量不低于30%;灯盏花总黄酮中含有野黄芩苷的重量百分含量不低于80%。
8.如权利要求1-7任一项所述的药物组合物,其特征在于:所述的制剂是片剂、胶囊、颗粒剂、滴丸或口服液。
9.一种制备权利要求1-8任一项所述的药物组合物的方法,其特征在于:该方法包括如下步骤:
a、取重量配比的原料药:枸杞40-400份、灯盏花45-480份;
b、取枸杞加水煎煮,过滤,滤液浓缩,加乙醇至浓度为80%,冷藏,沉淀;所得的上清液,回收乙醇,浓度,加盐酸调pH值为2,于50℃保温20分钟,室温静置,收集酸水液,即得枸杞多糖;
c、取灯盏花加水煎煮,过滤,滤液浓缩,加乙醇至浓度为80%,冷藏,沉淀;所得的上清液,回收乙醇,浓度,加盐酸调pH值为2,于50℃保温20分钟,室温静置,收集沉淀物,即得灯盏花总黄酮;
d、取d、c步骤制备的枸杞多糖和灯盏花总黄酮,按重量配比为:枸杞多糖1-5份、灯盏花总黄酮2-8份配比,加入药学上可接受的辅料或辅料性成分制备而成的药剂。
10.权利要求1-8任一项所述的药物组合物在制备治疗正常眼压青光眼、视网膜血管闭塞、糖尿病性视网膜病、缺血性视神经病、黄斑变性、色素性视网膜炎和利伯氏病的视网膜疾病的视神经保护药物中的用途。
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