CN101708236A - 荷丹片在治疗脂肪肝的应用 - Google Patents

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Abstract

荷丹片在治疗脂肪肝的应用，荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)荷叶：60丹参：10山楂：30番泻叶：3补骨脂：10，成人一日服用量为3-12片，即42.375-169.5g生药/日。荷丹片具有降低脂肪肝小鼠模型血清ALT和TG及肝组织TG值；荷丹片能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT，降低血清TG，TCH和LDL，增加血清HDL，降低肝组织CHO和TG。同时，可减轻脂肪肝模型小鼠、大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。提示荷丹片对脂肪肝具有一定得疗效。

Description

荷丹片在治疗脂肪肝的应用
技术领域
本发明涉及中药方剂，特别是荷丹片在治疗脂肪肝的应用。
技术背景
荷丹片，是由南昌济顺制药有限公司生产，处方为荷叶、丹参、山楂、番泻叶、补骨脂(盐炒)。功能主治为化痰降浊，活血化瘀。临床用于高脂血症属挟痰浊瘀证侯者。
发明内容
本发明的目的在于提供一种荷丹片在治疗脂肪肝的应用方法。
本发明药物荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)：
荷叶：1～100  丹参：1～100  山楂：1～100  番泻叶：1～100补骨脂：1～100
本发明药物荷丹片优选的组分(用量为重量份)如下：
荷叶：60    丹参：10    山楂：30    番泻叶：3    补骨脂：10
将上述各组分制成本发明药物的生产方法为：将番泻叶洗净，加10倍量900C热水浸泡三次药液，滤过，滤液备用：丹参粉碎成粗粉，用乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，备用，补骨脂盐炒后备用。荷叶、补骨脂、
山楂及丹参药渣加10倍量水煎煮二次，每次2小时，药液合并，滤过，滤液备用。将上述药液合并，减压浓缩至相对密度为1.20(600C)，放置，待药液温度降至约400C，加2倍量乙醇，搅匀，静置48小时，取上清液，滤过，回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加适量淀粉，混匀，减压干燥(60-700C，6-8小时)，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，压制成1000片，包衣，即得。
本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1-4片，成人一日服用量为3-12片，即42.375---169.5g生药/日。
经病理组织学检查，荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻CCl4脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片47.07g/kg剂量可减轻酒精性脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻乙硫氨酸脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。荷丹片14.12g/kg剂量可减轻复合因素酒精性和非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片3.53g/kg剂量可减轻复合因素酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片7.06g/kg剂量可减轻非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：
本发明药物是由以下组分制成(用量为重量份)
荷叶：60    丹参：10    山楂：30    番泻叶：3    补骨脂：10
将上述各组分制成本发明药物的生产方法为：将番泻叶洗净，加10倍量900C热水浸泡三次药液，滤过，滤液备用：丹参粉碎成粗粉，用乙醇加热回流1.5小时，滤过，滤液回收乙醇，备用，补骨脂盐炒后备用。荷叶、补骨脂、山楂及丹参药渣加10倍量水煎煮二次，每次2小时，药液合并，滤过，滤液备用。将上述药液合并，减压浓缩至相对密度为1.20(600C)，放置，待药液温度降至约40″C，加2倍量乙醇，搅匀，静置48小时，取上清液，滤过，回收乙醇，减压浓缩成稠膏，加适量淀粉，混匀，减压干燥(60-700C，6-8小时)，制成颗粒，加入硬脂酸镁适量，压制成1000片，包衣，即得。
本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次2片，即成人一日服用量为6片，即84.75g生药/日。
我们对荷丹片进行相关药效学试验，现将试验结果报告如下：
1.试验材料
1.1供试品
荷丹片，由南昌济顺制药有限公司提供，每片重0.73g，含生药14.125g，批号：20080601。
20.1.1.1小鼠剂量确定：成人一日3次，每次2片，即成人一日服用量为6片，即84.75g生药/日；小鼠中剂量为60kg成人临床剂量的10倍计算，小鼠中剂量为14.12g生药/kg，取组间剂量比为1∶3∶10，即小鼠低、中、高剂量分别为4.71、14.12、47.07g生药/kg。
20.1.1.2大鼠剂量确定：大鼠中剂量为60kg成人临床剂量的5倍计算，大鼠中剂量为7.06g/kg，取组间剂量比为1∶2∶4，即大鼠低、中、高剂量分别为3.53、7.06、14.12g/kg。
.1.2阳性对照药
.1.2.1血脂康胶囊，北京北大维信生物科技有限公司，每粒装0.3g，批号：20080501。
小鼠剂量确定：成人一日2次，每次2粒，即成人一日服用量为4粒，即1.2g/日，小鼠剂量为60kg成人临床剂量的10倍计算，即小鼠为0.2g/kg。
大鼠剂量确定：大鼠剂量为60kg成人临床剂量的5倍计算，即大鼠为0.1g/kg。
1.2.2联苯双酯滴丸，浙江医药股份有限公司新昌药厂，规格，1.5mg/粒，批号：080102。
小鼠剂量确定：按参考文献资料[1]，小鼠剂量为0.2g/kg。
1.2.3非诺贝特片，上海黄海制药有限责任公司，规格，0.1g/片，批号：070301。
小鼠剂量确定：按参考文献[4]，小鼠剂量为0.1g/kg。
大鼠剂量确定：按参考文献[4、8]，大鼠剂量为0.05g/kg。
1.2.4复方蛋氨酸胆碱片(东宝甘泰)，通化东宝药业股份有限公司，批号：070507。
小鼠剂量确定：成人一日3次，每次3片，即成人一日服用量为9片，即9片/日，小鼠剂量为60kg成人临床剂量的10倍计算，即小鼠为1.5片/kg。
1.3试剂
乙硫氨酸(DL-Ethionine)，Sigama Chemical CO.lot：1063551。
四氯化碳(CCl4)，分析纯，湖北大学化工厂，批号：050817。
橄榄油(Olive oil)，化学纯，国药集团化学试剂有限公司，批号：F20060404。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号：080871.200804、080891。
甘油三脂(TG)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号：082291.200804、082611。
还原型谷胱甘肽(GSH)试剂盒，南京建成生物工程研究所，批号：20080702、20081127。
丙二醛(MDA)测试盒，南京建成生物工程研究所，批号：20080702、20081127。
胆固醇(C27H40O)，上海精析化工科技有限公司，批号：080303。
胆酸钠(Cow Sodium Cholate)，北京市海淀区微生物培养基制品厂，批号：20080117。
1，2-丙二醇(1，2-Propanediol)，上海试剂一厂，批号：试2005-05-10。
总胆固醇(TCH)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号：080691。
低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号：080231200809。
高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号：080221.200807。
二锅头白酒(56％)，北京红星股份有限公司生产，批号：20071011。
北京二锅头白酒(56％)，北京双庆和酒业有限责任公司生产，批号：20071220。
1.4动物
1.4.1昆明种小鼠，雄性，清洁级，18～20g，购自湖南省长沙市开福区东创
实验动物科技服务部，生产许可证号：SCXK(湘)2006-001，合格证编号：002580。
1.4.2Wistar大鼠，雄性，SPF级，140～170g，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK(沪)2008-0016，合格证编号：0047636、0047391。
1.4.3动物饲养条件：
●实验动物房室温：19～26℃，
●湿度：40～70％，
●每日照明10h(8Am～6Pm)熄灯14h，
●给予常规的实验室饮食，自由饮水，
●全价营养颗粒饲料：购自江西省实验动物中心，批号：080701、081020。
1.5仪器
BT-224半自动生化分析仪，意大利产。
2试验方法与结果
2.1荷丹片对小鼠急性CCl4肝损伤脂肪肝模型的影响[2、3]
方法：将小鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、联苯双酯组和血脂康胶囊组。供试品组灌胃给药，1次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为0.2ml/10g体重，连续给药10天；第10天，除空白组外，其余动物用0.15％的四氯化碳橄榄油溶液10mL/kg给小鼠腹腔注射，禁食16小时，摘除小鼠眼球取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG。脱颈椎处死小鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织约0.1g，精密称定，剪碎后加入9倍0.9％的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，3500rmp离心15min，按试剂盒说明测GSH、MDA和TG含量。另取肝脏左叶，用10％甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。
肝损伤病理组织学分级标准如下。0级：正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级：肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级：肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级：肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。
结果：荷丹片47.07g(指生药量，下同)/kg剂量和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著增加小鼠肝系数，荷丹片47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著降低血清ALT，荷丹片4.71和14.12g/kg剂量具有显著降低血清TG，荷丹片47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著降低肝组织TG，血脂康0.2g/kg剂量和联苯双酯0.2g/kg剂量能显著降低肝组织MDA和显著增加肝组织GSH与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P＜0.05和P＜0.01)。结果见表1、2、3。
病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组肝细胞肿胀，胞质内出现弥漫性的圆形脂滴，胞浆内出现脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片14.12和47.07g/kg组肝细胞肿胀不明显，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片4.71g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。联苯双酯0.2g/kg组和血脂康0.2g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表4。
表1、荷丹片对小鼠急性CCl4肝损伤脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00051
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表2、荷丹片对小鼠急性CCl4肝损伤脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00061
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表3、荷丹片对小鼠急性CCl4肝损伤脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00062
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表4、荷丹片对小鼠急性CCl4肝损伤脂肪肝模型的影响
Figure G2009101867094D00071
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
2.2荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响[5]
方法：将小鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、血脂康胶囊组和非诺贝特片组。除空白组外，其余各组均灌胃给予酒精度为35％的二锅头白酒，灌胃容积16ml/kg，每日1次，连续17天，造模第8天灌胃酒精后3小时开始灌胃给药，供试品组灌胃给予相应药物，1次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为0.2ml/10g体重，连续给药10天。末次给药后禁食12h，摘除小鼠眼球取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG。脱颈椎处死小鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织约0.1g，精密称定，剪碎后加入9倍0.9％的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，3500rmp离心15min，按试剂盒说明测TG、GSH和MDA含量。另取肝脏左叶，用10％甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。
肝损伤病理组织学分级标准如下。0级：正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级：肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级：肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级：肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。
结果：非诺贝特0.1g/kg剂量能显著增加小鼠肝系数，荷丹片4.71g(指生药，下同)/kg、47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和非诺贝特0.1g/kg剂量具有显著降低血清TG，荷丹片4.71g/kg和非诺贝特0.1g/kg剂量能显著降低肝组织TG，荷丹片4.71和47.07g/kg剂量显著增加肝组织GSH，荷丹片4.71、14.12g/kg和非诺贝特0.1g/kg剂量能显著降低肝组织MDA，与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P＜0.05和P＜0.01)。结果见表5、6、7。
病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组肝细胞肿胀，胞质内出现弥漫性的圆形脂滴，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片47.07g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片14.12和4.71g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。非诺贝特0.1g/kg组和血脂康0.2g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表8。
表5、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00081
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表6、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00082
Figure G2009101867094D00091
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表7、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00092
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表8、荷丹片对小鼠急性酒精性脂肪肝模型的影响
Figure G2009101867094D00093
Figure G2009101867094D00101
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
2.3荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响
方法：将小鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、复方蛋氨酸胆碱片组和血脂康组。供试品组灌胃给药，1次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，灌胃容积均为0.2ml/10g体重，连续给药10天；第10天，除空白组外，其余动物灌胃给予1.25％乙硫氨酸0.25g/kg造模，即刻禁食24h，造模后3小时，正常组和模型组给予蒸馏水，供试品组灌胃给药1次。禁食24h后小鼠眼球取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG。脱颈椎处死小鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织约0.1g，精密称定，剪碎后加入9倍0.9％的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，3500rmp离心15min，按试剂盒说明测GSH、MDA和TG含量。另取肝脏左叶，用10％甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。
肝损伤病理组织学分级标准如下。0级：正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级：肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级：肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级：肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。
结果：荷丹片4.71、14.12和47.07g(指生药量，下同)/kg剂量能显著降低小鼠肝系数，荷丹片14.12、47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和东宝甘泰1.5片/kg剂量具有显著降低血清ALT，东宝甘泰1.5片/kg剂量组具有显著增加血清TG，荷丹片47.07g/kg、血脂康0.2g/kg和东宝甘泰1.5片/kg剂量能显著降低肝组织TG，荷丹片14.12和47.07g/kg剂量显著增加肝组织GSH，与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P＜0.05和P＜0.01)。结果见表9、10、11。
病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组肝细胞肿胀，胞质内出现弥漫性的圆形脂滴，脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片14.12和47.07g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片4.71g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。东宝甘泰1.5片/kg组和血脂康0.2g/kg组肝细胞肿胀消失，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表12。
表9、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00111
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表10、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00112
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表11、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00113
Figure G2009101867094D00121
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表12、荷丹片对小鼠急性乙硫氨酸脂肪肝模型的影响
Figure G2009101867094D00122
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
2.4荷丹片对大鼠慢性复合因素酒精性脂肪肝模型的影响
方法：将大鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、血脂康胶囊组和非诺贝特片组。除空白组外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂和56％白酒，灌胃体积均为5ml/kg，每天1次，连续9周，空白组灌胃给予等容量蒸馏水。连续造模5周后，各组均于每日上午灌胃给予高脂乳剂和56％白酒，下午灌胃给药，给药灌胃容积均为1.0ml/100g体重，1次/天，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，连续给药4周。末次给药后禁食12h，大鼠腹主动脉取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG、TCH、LDL、HDL。脱颈椎处死大鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织精密称定0.3g，剪碎后加入9倍0.9％的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，2000rmp离心10min，取上清液测GSH和MDA含量，并取肝脏同部位组织精密称定0.2g，剪碎后加入9倍丙酮乙醇(1∶1)溶液中匀浆，3500rmp离心15min，取上清液TG、TCH。另取肝脏左叶，用10％甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。
高脂乳剂：猪油500g，胆固醇100g，胆酸33g，丙二醇150ml。
肝损伤病理组织学分级标准如下。0级：正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级：肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级：肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级：肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。
结果：非诺贝特0.2g/kg剂量能显著增加大鼠肝系数，荷丹片3.53、14.02g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT；荷丹片14.12g/kg，血脂康0.1g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TG；荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TCH；荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著增加脂肪肝模型大鼠血清HDL，非诺贝特0.05g/kg剂量组则降低；荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清LDL；荷丹片14.12g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织MDA；荷丹片14.12g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著增加脂肪肝模型大鼠肝组织GSH；荷丹片7.06、14.12g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织CHO，而非诺贝特0.05g/kg剂量增加大鼠肝组织CHO；荷丹片7.06、14.12g/kg、血脂康0.1g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织TG；与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P＜0.05和P＜0.01)。结果见表13、14、15、16、17。
大体病理检查，空白组肝组织外观红褐色，质软富弹性。模型组大鼠肝脏色泽稍色黄，肝脏肿大，边缘钝厚，质脆。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常；模型组中央静脉周围的肝细胞肿胀，胞浆内出现脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片3.53和14.12g/kg组肝细胞肿胀不明显，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片7.06g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。血脂康0.1g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表18。
表13、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00141
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表14、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00142
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表15、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00143
Figure G2009101867094D00151
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表17、荷丹片对复合因素酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00152
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表18、荷丹片对大鼠复合因素酒精性脂肪肝模型的影响
Figure G2009101867094D00153
Figure G2009101867094D00161
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
2.5荷丹片对大鼠慢性非酒精性脂肪肝模型的影响
方法：将大鼠按体重随机分成7组，每组10只，分别为空白组、模型组、荷丹片低、中、高剂量组、血脂康胶囊组和非诺贝特片组。除空白组外，其余各组均灌胃给予高脂乳剂和高糖溶液，灌胃容积均为5ml/kg，每日1次，连续8周。连续造模4周后，各组均于每日上午灌胃给予高糖高脂乳剂，下午灌胃给药，灌胃给药容积均为1.0ml/100g，空白组和模型组给予等容积蒸馏水，1次/天，连续给药4周。末次给药后禁食12h，大鼠腹主动脉取血，室温静置10min，3500rmp离心15min，分离血清，按试剂盒说明分别测血清ALT、TG、TCH、LDL、HDL。脱颈椎处死大鼠，剖腹取肝脏，称其湿重，并取肝脏同部位组织精密称定0.3g，剪碎后加入9倍0.9％的氯化钠溶液，冰浴中手动制匀浆，2000rmp离心10min，取上清液测GSH和MDA含量，并取肝脏同部位组织精密称定0.2g，剪碎后加入9倍丙酮乙醇(1∶1)溶液中匀浆，3500rmp离心15min，取上清液TG、TCH。另取肝脏左叶，用10％甲醛固定，HE染色，于光学显微镜下观察各组织形态学变化，拍摄照片。试验结果采用t检验和Ridit检验。
高脂乳剂：玉米油400g、胆固醇100g、胆酸钠33g、丙二醇300ml。
高糖溶液：奶粉40g、蔗糖75g、蒸馏水100ml。
肝损伤病理组织学分级标准如下。0级：正常肝组织，无肝细胞变性、坏死，无炎症细胞浸润。I级：肝小叶内肝细胞轻度脂肪变性，偶见肝细胞点状坏死。II级：肝小叶内肝细胞中度脂肪变性，可见肝细胞点状坏死，炎症细胞浸润。III级：肝小叶内肝细胞重度弥漫性脂肪变性，点状坏死多见或可见大片肝细胞坏死。
结果：非诺贝特0.2g/kg剂量能显著增加大鼠肝系数，荷丹片3.53、7.06、14.02g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT；荷丹片7.06、14.12g/kg，血脂康0.1g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TG；荷丹片3.53、7.06、14.12g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清TCH，而非诺贝特0.05g/kg增加血清TCH；荷丹片3.53、7.06、14.12g/kg能显著增加脂肪肝模型大鼠血清HDL，非诺贝特0.05g/kg剂量则降低血清HDL；荷丹片3.53、7.06、14.12g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠血清LDL，而非诺贝特0.05g/kg剂量则增加血清LDL；荷丹片14.12g/kg和血脂康0.1g/kg能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织MDA；非诺贝特0.05g/kg能显著增加脂肪肝模型大鼠肝组织GSH；荷丹片7.06、14.12g/kg和血脂康0.1g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织CHO；荷丹片3.53、14.12g/kg、血脂康0.1g/kg和非诺贝特0.05g/kg剂量能显著降低脂肪肝模型大鼠肝组织TG；与模型组比较，差异有显著性和非常显著性意义(P＜0.05和P＜0.01)。结果见表19、20、21、22、23。
大体病理检查，空白组肝组织外观红褐色，质软富弹性。模型组大鼠肝脏色泽稍色黄，肝脏肿大，边缘钝厚，质脆。病理组织学检查，空白组肝组织结构正常，肝小叶结构清楚，细胞索排列整齐，肝血窦正常，核圆，位于细胞中央，胞质均匀；模型组中央静脉周围的肝细胞肿胀，胞浆内出现脂肪空泡，肝小叶界限模糊，小叶内出现多个点状或大片状坏死，汇管区见大量炎症细胞浸润。荷丹片7.06和14.12g/kg组肝细胞肿胀不明显，脂肪变性及炎症细胞浸润均较模型对照组显著减轻，无大片状坏死。荷丹片3.53g/kg组时肝细胞肿胀较模型组减轻，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度改变不明显。血脂康0.1g/kg组肝细胞肿胀，脂肪变性、炎症细胞浸润及坏死程度均显著降低。结果见表24。
表19、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00171
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表20、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00172
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表21、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00181
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表22、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00182
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表23、荷丹片对非酒精脂肪肝大鼠模型的影响(x±s)
Figure G2009101867094D00183
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
表24、荷丹片对大鼠非酒精性脂肪肝模型的影响
Figure G2009101867094D00184
Figure G2009101867094D00191
与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01
3结论
综上所述，荷丹片具有降低脂肪肝小鼠模型血清ALT和TG及肝组织TG值；荷丹片能显著降低脂肪肝模型大鼠血清ALT，降低血清TG，TCH和LDL，增加血清HDL，降低肝组织CHO和TG。同时，可减轻脂肪肝模型小鼠、大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。提示荷丹片对脂肪肝具有一定得疗效。
荷丹片47.07g/kg剂量能降低CCl4脂肪肝模型小鼠血清ALT和肝组织TG，荷丹片4.71和14.12g/kg剂量组能降低其血清TG。荷丹片4.71g/kg、47.07g/kg剂量能降低酒精性脂肪肝模型小鼠血清TG和增加肝组织GSH，荷丹片4.71g/kg剂量能降低其肝组织TG，荷丹片4.71、14.12g/kg剂量能显著降低肝组织MDA。荷丹片4.71、14.12和47.07g/kg剂量能降低乙硫氨酸脂肪肝模型小鼠肝系数，荷丹片14.12、47.07g/kg剂量能降低血清ALT和增加肝组织GSH，荷丹片47.07g/kg剂量能降低肝组织TG。荷丹片3.53、14.02g/kg剂量能显著降低复合因素酒精性脂肪肝模型大鼠血清ALT，荷丹片14.12g/kg剂量能显著降低其血清TG，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其血清TCH和LDL，荷丹片7.06和14.12g/kg能显著增加其血清HDL，荷丹片14.12g/kg能显著降低其肝组织MDA和增加GSH，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其肝组织CHO和TG。荷丹片3.53、7.06和14.02g/kg剂量能显著降低非酒精性脂肪肝模型大鼠血清ALT和TCH，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其血清TG，荷丹片3.53、7.06和14.12g/kg能显著增加其血清HDL和降低LDL，荷丹片14.12g/kg能显著降低其肝组织MDA，荷丹片7.06和14.12g/kg剂量能显著降低其肝组织TCH；荷丹片3.53和14.12g/kg剂量能显著降低其肝组织TG。
病理组织学检查，荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻CCl4脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片47.07g/kg剂量可减轻酒精性脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片14.12g/kg和47.07g/kg剂量可减轻乙硫氨酸脂肪肝模型小鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。荷丹片14.12g/kg剂量可减轻酒精性和非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片3.53g/kg剂量可减轻复合因素酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度；荷丹片7.06g/kg剂量可减轻非酒精性脂肪肝模型大鼠肝细胞肿胀，脂肪变性、坏死及炎症细胞浸润程度。
实施例2：
本发明药物是由以下组分制成(用量为重量份)
荷叶：50    丹参：8    山楂：30    番泻叶：3    补骨脂：10
本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1片，成人一日服用量为3片，即42.375g生药/日。
实施例3：
本发明药物是由以下组分制成(用量为重量份)
荷叶：30    丹参：10    山楂：20    番泻叶：3    补骨脂：10
本发明药物荷丹片，每片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次3片，成人一日服用量为9片，即127.125g生药/日。

Claims (4)

1.荷丹片在治疗脂肪肝的应用，荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)：
荷叶：1～100  丹参：1～100  山楂：1～100  番泻叶：1～100补骨脂：1～100
每片荷丹片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1-4片，成人一日服用量为3-12片，即42.375---169.5g生药/日。
2.如权利要求1所述荷丹片在治疗脂肪肝的应用，其特征在于：荷丹片是由以下组分制成(用量为重量份)：荷叶：60  丹参：10  山楂：30  番泻叶：3  补骨脂：10。
3.如权利要求1或2所述荷丹片在治疗脂肪肝的应用，其特征在于：每片荷丹片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次1片，即42.375g生药/日。
4.如权利要求1或2所述荷丹片在治疗脂肪肝的应用，其特征在于：每片荷丹片重0.73g，含生药14.125g，成人一日3次，每次3片，即127.125g生药/日。
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