CN101701035B - 一种与植物耐旱相关的蛋白GaTPSP及其编码基因与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种蛋白质。所述蛋白质是如下1)或2)的蛋白：1)序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；2)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与植物耐旱相关的有1)衍生的蛋白质。将所述蛋白的编码基因导入植物后，显著提高了植物的耐旱性。

Description

一种与植物耐旱相关的蛋白GaTPSP及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种与植物耐旱相关的蛋白及其编码基因与应用。

背景技术

棉花是我国重要的纤维作物，在国民经济中占有重要地位。但是我国棉花种植区大部分处于干旱(如新疆棉区)和半干旱地区(如黄河流域棉区)，目前干旱已经成为棉花生产的主要限制因素之一。

在轻度和中度干旱的胁迫下，农作物主要通过渗透调节保护作物免受干旱胁迫的伤害。海藻糖是一类重要的有机渗透调节物质。它不仅能够在正常条件下为生物体的新陈代谢储存和提供能量，更为重要的是，当生物体遭遇逆境环境时，海藻糖在细胞表面形成特殊的保护膜，有效地保护生物分子结构不被破坏。海藻糖所特有的生物细胞活性保护特性使其在植物抗逆性机理及其遗传改良中具有潜在的应用价值。海藻糖的合成涉及两种酶：海藻糖-6-磷酸合成酶(trehalose-6-phosphate-synthase，TPS)；海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(Trehalose-6-phosphate-phosphatase，TPP)。将外源海藻糖合成相关基因转入植物中可明显增强植物的耐旱性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白。

本发明提供的蛋白，命名为GaTPSP，来源于亚洲棉(Gossypium arboreum)，是如下1)或2)的蛋白：

1)序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2)在序列表中序列2的氨基酸序列经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸且与植物耐旱相关的有1)衍生的蛋白质。

为了使1)中的GaTPSP便于纯化，可在由序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。

表1.标签的序列

标签	残基	序列
			Poly-Arg	5-6(通常为5个)	RRRRR
Poly-His	2-10(通常为6个)	HHHHHH
			FLAG	8	DYKDDDDK
Strep-tagII	8	WSHPQFEK
			c-myc	10	EQKLISEEDL

上述2)中的GaTPSP可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述2)中的GaTPSP的编码基因可通过将序列表中序列1自5′末端第256-2841位碱基所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。

本发明的另一目的在于提供编码上述蛋白的cDNA，命名为GaTPSP，也在本发明的保护范围内。

本发明提供的编码基因基因是如下1)或2)或3)或4)的基因：

1)其编码序列是序列表中序列1自5’末端第256-2841位；

2)其核苷酸序列是序列表中序列1；

3)在严格条件下与1)或2)限定的基因杂交且编码与植物耐旱相关蛋白的基因；

4)与1)或2)的基因具有90％以上的同源性，且编码与植物耐旱相关蛋白的基因。

所述的严格杂交条件是指，将杂交膜置于预杂交液(0.25mol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，7％SDS)中，65℃预杂交30min；弃预杂交液，加入杂交液(0.25mol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，7％SDS，同位素标记的核苷酸片段)，65℃杂交12hr；弃杂交液，加入洗膜液I(20mmol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，5％SDS)，65℃洗膜2次，每次30min；加入洗膜液II(20mmol/L磷酸钠缓冲液，pH7.2，1％SDS)，65℃洗膜30min。

上述4)中的基因与1)的基因最好有95％以上的同源性。

扩增GaTPSP基因全长或任一片段的引物对也属于本发明的保护范围。

含有上述基因的重组载体也属于本发明的保护范围之内。

可用现有的植物表达载体构建含有GaTPSP基因的重组表达载体。所述植物表达载体包括双元农杆菌载体和可用于植物微弹轰击的载体等，如pCAMBIA3301、pCAMBIA1300、pBI121、pBin19、pCAMBIA2301、pCAMBIA1301-UbiN、pBY505或其它衍生植物表达载体。

使用GaTPSP基因构建重组表达载体时，可在其转录起始核苷酸前加上任何一种增强型、组成型、组织特异型或诱导型启动子，如花椰菜花叶病毒(CAMV)35S启动子、泛素(Ubiquitin)基因启动子(pUbi)、Actin启动子等，它们可单独使用或与其它的植物启动子结合使用。

此外，使用本发明的基因构建植物表达载体时，还可使用增强子，包括翻译增强子或转录增强子，这些增强子区域可以是ATG起始密码子或邻接区域起始密码子等，但必需与编码序列的阅读框相同，以保证整个序列的正确翻译。所述翻译控制信号和起始密码子的来源是广泛的，可以是天然的，也可以是合成的。翻译起始区域可以来自转录起始区域或结构基因。

为了便于对转基因植物细胞或植物进行鉴定及筛选，可对所用植物表达载体进行加工，如加入在植物中表达可产生颜色变化的酶或发光化合物的基因(GUS基因、GFP基因、萤光素酶基因等)、具有抗性的抗生素标记物(庆大霉素标记物、卡那霉素标记物等)或是抗化学试剂标记基因(如抗除莠剂基因)等。

上述重组载体具体是将上述的基因插入载体pBI121的多克隆位点，得到的重组载体。

含有上述基因的重组菌也属于本发明的保护范围之内。

含有上述基因的转基因细胞系也属于本发明的保护范围之内。

本发明的另一目的在于提供一种培育耐旱植物的方法。

本发明提供的培育耐旱植物的方法是将上述的基因导入目的植物中，得到耐旱性强于目的植物的转基因植物。具体地讲，上述的基因是通过上述的重组载体导入目的植物中的。携带有本发明的GaTPSP基因的植物表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、如基因枪法、花粉管通道、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。

本发明的又一目的在于提供一种培育持水力增强的转基因植物的方法。

本发明提供的培育持水力增强的转基因植物的方法是将上述的基因导入目的植物中，得到持水性高于目的植物的转基因植物。具体地讲，上述的基因是通过上述的重组载体导入目的植物中的。携带有本发明的GaTPSP基因的植物表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、如基因枪法、花粉管通道、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。

本发明的再一目的在于提供一种培育细胞质膜对干旱抵抗能力增强的转基因植物的方法，是将上述的基因导入目的植物中，得到细胞质膜对干旱抵抗能力强于目的植物的转基因植物。具体地讲，上述的基因是通过上述的重组载体导入目的植物中的。携带有本发明的GaTPSP基因的植物表达载体可通过Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、如基因枪法、花粉管通道、显微注射、电导、农杆菌介导等常规生物学方法转化到植物细胞或组织中。

上述目的植物可以是双子叶植物或单子叶植物；所述双子叶植物是棉花、烟草、拟南芥、大豆或油菜；所述单子叶植物是水稻或小麦。

本发明的GaTPSP基因可被PEG6000诱导表达。对转化本发明的耐旱基因GaTPSP后得到的过量表达的烟草植株进行逆境生理实验，证明转入本发明GaTPSP基因后，持水力增强，细胞质膜对干旱抵抗能力增强，显著提高了烟草的耐旱性。本发明的耐旱相关蛋白及其编码基因为人为控制植物中耐旱相关基因的表达提供了基础，将在培育耐旱植物中发挥重要的作用。

附图说明

图1为GaTPSP基因受到PEG6000胁迫条件诱导表达。

图2为pBI121-GaTPSP表达载体的构建示意图。

图3为获得的抗卡那霉素转pBI121/GaTPSP烟草，CK为空载体对照，L1-L4为转pBI121/GaTPSP烟草。

图4为转pBI121/GaTPSP烟草基因组PCR检测结果，M为分子量标准，CK为空载体对照，1-4为转pBI121/GaTPSP烟草株系。

图5为干旱条件下转pBI121/GaTPSP烟草和空载体对照烟草比较，其中CK为空载体对照，1、2为转pBI121/GaTPSP烟草。

图6为转基因烟草叶片在脱水过程中失水速率的变化，CK为空载体对照，L1-L4为转pBI121/GaTPSP烟草。

图7为转基因烟草叶片在脱水过程中离子渗漏的变化，CK为空载体对照，L1-L4为转pBI121/GaTPSP烟草。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。

下述实施例中，如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中，所述百分含量如无特殊说明，均为质量百分含量。

实施例1、干旱胁迫下基因的表达分析

将在28℃恒温培养箱中培养至3-6片真叶的石系亚1号幼苗，小心拔出幼苗以进行胁迫处理。在17％PEG6000(聚乙二醇6000，Promega)处理0、0.5、1、2、3、4、5、6h后，分别提取幼苗总RNA，总RNA纯度与质量都较高，每个样品RNA的A260/A280都在1.8-2.1之间，浓度在1.0ug/ul以上。经1％琼脂糖凝胶电泳检测，28SrRNA与18SrRNA条带非常清晰，表明所提取的RNA样品能用于RT-PCR反应。

以棉花看家基因Histone 3(AF024716)为内参，作为衡量模板量的对照，内参的引物(请核对下列引物序列)：

上游引物：5’-TCAAGACTGATTTGCGTTTCCA-3’；

下游引物：5’-GCGCAAAGGTTGGTGTCTTC-3’。

待检测基因GaTPSP所用引物：

上游引物：5’-CCGATGAAGATATGTTTCAGAGCATATTAACTT-3’；

下游引物：5’-ATTCCTCTCTCTCTCGCAGT-3’；

通过RT-PCR分析GaTPSP基因在不同胁迫时间的表达。

结果如图1所示。PEG6000模拟干旱胁迫处理时，GaTPSP基因的mRNA迅速积累并在胁迫2h时达到最大值，PEG胁迫4h后，GaTPSP的转录本开始下降，之后在胁迫6h时又开始回升。

实施例2、抗逆转基因植物的获得及其耐旱功能实验

一、抗逆转基因植物的获得

1、抗逆转基因的获得

提取3-6片真叶幼苗期棉花(石系亚1号，中国农业科学院棉花研究所棉花种质资源中期库，库编号：I3A01616。该种质库向公众出售棉花资源)幼苗总RNA，反转录得其全基因组的cDNA，作为模板，以如下引物进行PCR扩增：

上游引物：5’-ATGGCATCAAGATCATGTGCAAATTTTTTAC-3’；

下游引物：5’-TCAAGCATTACTCTCGAAAGATACCTT-3’。

PCR扩增体系为共50ul，其中MgCl₂(25mM)：2ul，10×Buffer：5ul，dNTP Mixture(10uM)：4ul，Easy-A High-Fidelity PCR Cloning Enzyme(5u/ul)：1ul，反转录反应液：5ul(0.25ug)，上游引物(10uM)：2ul，下游引物(10uM)：2ul，ddH₂O补齐至50ul。反应条件：94℃预变性3min，94℃30s，53℃40s，72℃5min，30个循环，72℃延伸10min。PCR扩增得到2.5Kb左右的片段，将得到的片段连接T载体进行测序鉴定，测序结果表明该PCR产物片段具有序列表中序列1的自5’端第256-2841位所示的核苷酸，且具有完整的编码框，将其命名为GaTPSP。随后利用RACE技术获得基因的UTR区，经拼接获得基因的cDNA全长。

GaTPSP基因的编码阅读框(第256-2841位)编码861个氨基酸残基组成的蛋白，其氨基酸序列如序列表中的序列2所示。在GaTPSP编码蛋白的氨基酸序列上，发现了海藻糖-6-磷酸合成酶的典型特征，GaTPSP蛋白包含两个功能域：海藻糖-6-磷酸合成酶(Trehalose-6-phosphate-synthase，TPS)和海藻糖磷酸酶(trehalose-6-phosphate-phosphatase，TPP)。因此，GaTPSP能编码一个催化合成海藻糖合成的酶，从而起到耐旱功能。

2、重组载体的构建

构建流程图如图2所示。

制备出如序列表中序列1的自5’端第256-2841位所示的GaTPSP基因，带上BamH I和Sac I酶切位点。

用BamH I和Sac I双酶切植物表达载体pBI121(购自Clontech；Cat.#6018-1)和上述带有相同酶切位点接头的GaTPSP，将基因的编码区全长插入到启动子下游，将经测序鉴定表明含有序列1的自5’端第256-2841位所示核苷酸的pBI121重组载体命名为：pBI121/GaTPSP。

3、抗逆转基因植物的获得

将步骤2构建的pBI121/GaTPSP，冻融法转化至农杆菌LBA4404(购自Invitrogen；Cat.No.18313-015)，采用叶盘转化法转化野生型烟草NC89(购自中国农业科学院烟草研究所烟草种质资源中期库，库编号：I5A01846)：烟草种子用2.5％次氯酸钠处理8min，用无菌水洗一次，然后用70％乙醇浸泡1min，无菌水洗3～4次，播种于MS培养基上，于25℃，16h光照/8h黑暗条件培养5周；将烟草叶片剪去边缘和叶脉，切成0.4cm×0.6cm大小；切好的烟草叶盘用农杆菌菌液浸泡3-5min；用无菌滤纸吸干植物材料表面的菌液，转入烟草共培养基中，25℃黑暗条件下共培养两天；将转化处理的烟草叶盘浸于MS液体培养基(含500mg/L羧苄青霉素)中，浸泡3～5min后用无菌滤纸吸去残留液，转入分化培养基(含20-100mg/L的卡那霉素)中，约一周继代一次，直到分化出幼芽；将幼芽切下，置入生根培养基中诱导生根，获得转pBI121/GaTPSP烟草(图3)。

按照获得转pBI121/GaTPSP烟草的方法获得转pBI121的空载体对照。

提取抗卡那霉素转pBI121/GaTPSP烟草和空载体对照的基因组DNA作为模板，进行PCR检测，烟草中可能含有目的基因的同源基因，为了保证PCR检测的特异性，根据载体启动子序列以及外源转化基因的保守区设计引物，来区别外源转化基因和内源基因。所用引物如下：

上游引物：5’-GCTCCTACAAATGCCATCA-3’；

下游引物：5’-TTGCGTTCTCTACACCCAGAT-3’。

结果如图4(M是marker，ck是转空载体对照，1-4是转基因株系)所示，4株抗卡那霉素转pBI121/GaTPSP烟草植株中，含有GaTPSP基因的载体转入受体烟草中，4株烟草株系命名为L1、L2、L3和L4。

二、耐旱功能实验

以转基因烟草的离体叶片为实验材料，针对离体叶片失水速率和离子渗透在离体叶片脱水过程中的生理学变化，研究转基因烟草的耐旱性。

烟草为盆栽土培，正常供水，定期施MS营养液。叶片取自水分供应良好的成熟植株。

以野生型烟草NC89为野生型对照。

1、自然干旱处理

待转pBI121/GaTPSP烟草、空载体对照植株(转pBI121植株)和野生型对照生长至4个月左右时，在棉花所温室内(室温25-30℃，相对湿度30％)，停止供水，第5天观察植株的萎蔫程度。如图5所示(ck为空载体对照)，空载体对照植株和野生型对照明显萎蔫，转pBI121/GaTPSP植株(1是L2；2是L1)受影响程度明显好于空载体对照植株和野生型对照，空载体对照植株和野生型对照的表型一致。

2、离体叶片失水速率测定

待转pBI121/GaTPSP烟草、空载体对照植株和野生型对照苗龄是4个月时，快速剪取生长一致的烟草新鲜叶片，迅速装入塑料袋密封蔽光。在温湿度相对稳定的实验室内称取初始叶重后，空气中放置9h自然风干后称重，最后于105℃，烘干30min，80℃，10h烘干，测干重，计算单位重量的叶片在单位时间的失水量。离体叶片失水速率由RWL＝(IW-Wi)/{DW×(Ti-T0)}计算。式中IW为T0时初始叶重(g)，Wi为Ti时叶重(g)，DW为干重(g)，T0和Ti分别为称取IW和某Wi的时间(h)。作物离体叶片在空气中的失水速率(单位时间的失水量)反映叶片的持水力，或称植物组织抗脱水能力。前人研究业已明确，离体叶片失水速率与植株的抗旱性之间有密切关系，且与某些产量和植株性状存在较明确的关系。如图6所示，在空气中自然风干9h后，4个烟草转基因株系的叶片失水速率明显小于空载体对照和野生型对照，说明GaTPSP的转入，增强了烟草的持水力。空载体对照和野生型对照的叶片失水速率一致。

3、叶片细胞的离子渗漏的测定

将上述步骤2中的在空气中自然干燥9h的烟草叶片放入75ml去离子水中，25℃，2h后测定电阻率R1。100℃煮沸20分钟，冷却至25℃测定电阻率R2。离子渗漏＝(R1/R2)×100％。干旱胁迫会导致细胞膜结构的破坏，离子渗漏反映细胞质膜的完整性。如图7所示，在空气中自然干燥9h后，烟草转基因株系的叶片离子渗透均小于空载体对照和野生型对照，空载体对照和野生型对照的叶片离子渗透一致。特别是L3的电导率仅为空载体对照的75％，表明干旱胁迫条件下，转基因植株对干旱逆境膜伤害的抵抗能力显著增强。推测这与脯氨酸和海藻糖所具有的对生物膜结构的保护作用有关。

序列表

<110>中国农业科学院棉花研究所

<120>一种棉花耐旱相关蛋白及其编码基因与应用

<160>2

<210>1

<211>3219

<212>DNA

<213>棉花(Gossypium arboreum L.)

<400>1

gaaaacgctt tgattcattc attcatccat tccagcacat cttccatttt cttcttctcc   60

cttctttcct cacgccttac ccttctcttt ctactttatc ttcttcaact ttaacgaact  120

ttcccatttc ctttcgaaac ccacaaatcc gcctctcctc cgccgtagat ttttttcaac  180

cgccgtgacc tgcaaatctg tgaacatttt aatcgaaaca atttcttgta gtgagggttt  240

tgtttgtatg ctttcatggc atcaagatca tgtgcaaatt ttttacactt agcctctggg  300

aatctacttg atattcctca aactccgaga ggtcttcctc gggtaatgac tgttcctggg  360

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ggtgaaactt cgaaatggcg cttcagctgg gatgaggatt cacttttact acatctaaag  540

gatgggtttt ctcctgaaat ggaggttgta tacgtaggat ctctcaaggt tgatatagat  600

gtgaatgaac aggaagaagt tgcccaaaag ctgttagaag atttcaattg cgtccctaca  660

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cctctttttc actacatgct gcccatgtgt cctgaccatg gcgatcggtt tgaccgtatt  780

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aatccagatg atgattatgt ctggattcat gattatcatt tgatggttct tcccacattt  900

ttgaggaagc acctgaatag aatcaagctt ggttttttcc tccacagccc gttcccttca  960

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gatctaattg gttttcatac gttcgattat gcacgacatt tcttatcttg ctgcagtaga 1080

atgctgggtc ttgattatga atctaaaaga gggcatattg gtcttgatta ctttggtcgc 1140

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gtggaacagc tcttacagca gcacccagac ctgcagggta aaatagtcct ggttcagatt 1380

gtgaatcctg caaggggctt tggaaaggat gtccaggagg ctaagaagga gacttatatg 1440

actgctaaaa agatcaatga ggtttatggt tcccccaatt atcagccagt gattttgatt 1500

gatcgccctg ttccccgtta tgagaaatcg gcctattatg cgctagcaga atgttgcata 1560

gtaaatgctg tgagggatgg gatgaacctg gttccttaca agtatattgt ttgtcggcag 1620

ggaactcctg gcatggatga ggcactgggt gtaaagccag aatatccacg aacaagcatg 1680

cttgttgttt ctgagttcat cggttgctca ccatctttaa gtggagcgat tagggtaaat 1740

ccatgggata ttgatgctgt ggctgaggct ttaaatacag ctattaccat acctgagtca 1800

gagaagcaat tgcgacatga gaaacactac cggtatgtca gcactcatga tgtggcatat 1860

tgggctcgca gctttgtgat ggacttggat agagcatgcc aggatcacta tagtaaacgt 1920

tgctggggca ttggtttggg cctaagtttc agagttgtgt ctctttcacc taattttagg 1980

aggctagcta tcgatcacat ttgttcagca tatagacgaa caagtagaag agcaatattc 2040

ctggactatg atggcactct tgttcctgaa gcttccatta tcaaaactcc tagccctgag 2100

gttatctcta tcattaagac cctctgtgat gatcctaaga acacagtgtt tattgttagt 2160

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gctgaacacg ggtacttcat aagatggagt aaagactccg aatgggaaac cagccctgtt 2280

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gaccctgact tcggatcatg ccaagccaag gaattgttgg atcatttgga aagtgttctc 2460

gcaaatgaac cagcggttgt ccatagaggc cagcatattg ttgaagttaa gccgcaagga 2520

gtaagcaaag ggctggtagc agagaaagtt ttgtcgagaa tggtcaatgg tgggaagcca 2580

cctgatttcg tgatgtgtgt tggtgatgat aaatccgatg aagatatgtt tcagagcata 2640

ttaacttcag tttctaatcc atccttgcct gtggctccgg aaatctttgc atgcacagtt 2700

gggcgaaagc ctagcaaagc taggtattac ctcgatgaca ctgcagatgt tttaaagtta 2760

cttaaaggcc ttgcaactgc tacaatttca aagcctaggt gcctgcctga gattaaggta 2820

tctttcgaga gtaatgcttg acacaaacag ggtagccggc ctaaatttac cagttctata 2880

cgttgggagt gtctgatttg cttcaaggga ttcccttgaa tgagaaaaac tttgatcata 2940

actcatccga atcgtgattg gcacttgcta gcatagagat ggtggcagga gccgaaatgc 3000

taagattaac tgcgagagag agaggaattg atattattac tgtaaatgac gataggggaa 3060

ttatgcattt ttctggtgca ggcaaaaact aaatggtggg atgagttcgt agttctcact 3120

ttgtttataa tggtattact gattagaggc acctttgact tgtatagata cattgctttc 3180

caatacaaat cgccaatttg tttttcaaaa aaaaaaaaa                        3219

<210>2

<211>861

<212>PRT

<213>棉花(Gossypium arboreum L.)

<400>2

Met Ala Ser Arg Ser Cys Ala Asn Phe Leu His Leu Ala Ser Gly Asn

1               5                   10                  15

Leu Leu Asp Ile Pro Gln Thr Pro Arg Gly Leu Pro Arg Val Met Thr

            20                  25                  30

Val Pro Gly Ile Ile Ser Asp Met Asp Ser Cys Ser Ser Asn Asp Gly

        35                  40                  45

Asp Ser Asp Val Ala Ser Ser Gly Cys Arg Glu Arg Lys Ile Ile Val

    50                  55                  60

Ala Asn Met Leu Pro Leu His Ala Lys Arg Asp Gly Glu Thr Ser Lys

65                  70                  75                  80

Trp Arg Phe Ser Trp Asp Glu Asp Ser Leu Leu Leu His Leu Lys Asp

                85                  90                  95

Gly Phe Ser Pro Glu Met Glu Val Val Tyr Val Gly Ser Leu Lys Val

            100                 105                 110

Asp Ile Asp Val Asn Glu Gln Glu Glu Val Ala Gln Lys Leu Leu Glu

        115                 120                 125

Asp Phe Asn Cys Val Pro Thr Phe Val Pro His Asp Leu Gln Lys Lys

    130                 135                 140

Phe Tyr Leu Gly Phe Cys Lys Gln His Leu Trp Pro Leu Phe His Tyr

145                 150                 155                 160

Met Leu Pro Met Cys Pro Asp His Gly Asp Arg Phe Asp Arg Ile Leu

                165                 170                 175

Trp Gln Ala Tyr Val Ser Ala Asn Lys Ile Phe Ala Asp Lys Val Met

            180                 185                 190

Glu Val Ile Asn Pro Asp Asp Asp Tyr Val Trp Ile His Asp Tyr His

        195                 200                 205

Leu Met Val Leu Pro Thr Phe Leu Arg Lys His Leu Asn Arg Ile Lys

    210                 215                 220

Leu Gly Phe Phe Leu His Ser Pro Phe Pro Ser Ser Glu Ile Tyr Arg

225                 230                 235                 240

Thr Leu Pro Val Arg Asp Glu Ile Leu Arg Gly Leu Leu Asn Cys Asp

                245                 250                 255

Leu Ile Gly Phe His Thr Phe Asp Tyr Ala Arg His Phe Leu Ser Cys

            260                 265                 270

Cys Ser Arg Met Leu Gly Leu Asp Tyr Glu Ser Lys Arg Gly His Ile

        275                 280                 285

Gly Leu Asp Tyr Phe Gly Arg Thr Val Phe Ile Lys Ile Leu Pro Val

    290                 295                 300

Gly Val His Met Gly Arg Leu Glu Ser Val Leu Asn Leu Ser Ser Thr

305                 310                 315                 320

Ala Ala Arg Val Lys Glu Ile Gln Lys Gln Phe Glu Gly Lys Lys Leu

                325                 330                 335

Ile Leu Gly Ile Asp Asp Met Asp Ile Phe Lys Gly Ile Ser Leu Lys

            340                 345                 350

Leu Leu Ala Val Glu Gln Leu Leu Gln Gln His Pro Asp Leu Gln Gly

        355                 360                 365

Lys Ile Val Leu Val Gln Ile Val Asn Pro Ala Arg Gly Phe Gly Lys

    370                 375                 380

Asp Val Gln Glu Ala Lys Lys Glu Thr Tyr Met Thr Ala Lys Lys Ile

385                 390                 395                 400

Asn Glu Val Tyr Gly Ser Pro Asn Tyr Gln Pro Val Ile Leu Ile Asp

                405                 410                 415

Arg Pro Val Pro Arg Tyr Glu Lys Ser Ala Tyr Tyr Ala Leu Ala Glu

            420                 425                 430

Cys Cys Ile Val Asn Ala Val Arg Asp Gly Met Asn Leu Val Pro Tyr

        435                 440                 445

Lys Tyr Ile Val Cys Arg Gln Gly Thr Pro Gly Met Asp Glu Ala Leu

    450                 455                 460

Gly Val Lys Pro Glu Tyr Pro Arg Thr Ser Met Leu Val Val Ser Glu

465                 470                 475                 480

Phe Ile Gly Cys Ser Pro Ser Leu Ser Gly Ala Ile Arg Val Asn Pro

                485                 490                 495

Trp Asp Ile Asp Ala Val Ala Glu Ala Leu Asn Thr Ala Ile Thr Ile

            500                 505                 510

Pro Glu Ser Glu Lys Gln Leu Arg His Glu Lys His Tyr Arg Tyr Val

        515                 520                 525

Ser Thr His Asp Val Ala Tyr Trp Ala Arg Ser Phe Val Met Asp Leu

    530                 535                 540

Asp Arg Ala Cys Gln Asp His Tyr Ser Lys Arg Cys Trp Gly Ile Gly

545                 550                 555                 560

Leu Gly Leu Ser Phe Arg Val Val Ser Leu Ser Pro Asn Phe Arg Arg

                565                 570                 575

Leu Ala Ile Asp His Ile Cys Ser Ala Tyr Arg Arg Thr Ser Arg Arg

            580                 585                 590

Ala Ile Phe Leu Asp Tyr Asp Gly Thr Leu Val Pro Glu Ala Ser Ile

        595                 600                 605

Ile Lys Thr Pro Ser Pro Glu Val Ile Ser Ile Ile Lys Thr Leu Cys

    610                 615                 620

Asp Asp Pro Lys Asn Thr Val Phe Ile Val Ser Gly Arg Gly Arg Ala

625                 630                 635                 640

Ser Leu Ser Asp Trp Leu Ala Pro Cys Glu Lys Leu Gly Ile Ala Ala

                645                 650                 655

Glu His Gly Tyr Phe Ile Arg Trp Ser Lys Asp Ser Glu Trp Glu Thr

            660                 665                 670

Ser Pro Val Gly Ala Asp Leu Glu Trp Lys Lys Ile Val Glu Pro Val

        675                 680                 685

Met Ser Leu Tyr Arg Glu Ala Thr Asp Gly Ser Ser Ile Glu Thr Lys

    690                 695                 700

Glu Ser Gly Leu Val Trp His His Gln Asp Ala Asp Pro Asp Phe Gly

705                 710                 715                 720

Ser Cys Gln Ala Lys Glu Leu Leu Asp His Leu Glu Ser Val Leu Ala

                725                 730                 735

Asn Glu Pro Ala Val Val His Arg Gly Gln His Ile Val Glu Val Lys

            740                 745                 750

Pro Gln Gly Val Ser Lys Gly Leu Val Ala Glu Lys Val Leu Ser Arg

        755                 760                 765

Met Val Asn Gly Gly Lys Pro Pro Asp Phe Val Met Cys Val Gly Asp

    770                 775                 780

Asp Lys Ser Asp Glu Asp Met Phe Gln Ser Ile Leu Thr Ser Val Ser

785                 790                 795                 800

Asn Pro Ser Leu Pro Val Ala Pro Glu Ile Phe Ala Cys Thr Val Gly

                805                 810                 815

Arg Lys Pro Ser Lys Ala Arg Tyr Tyr Leu Asp Asp Thr Ala Asp Val

            820                 825                 830

Leu Lys Leu Leu Lys Gly Leu Ala Thr Ala Thr Ile Ser Lys Pro Arg

        835                 840                 845

Cys Leu Pro Glu Ile Lys Val Ser Phe Glu Ser Asn Ala

    850                 855                 860

Claims (7)

1.一种蛋白质，是序列表中序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质。

2.权利要求1所述蛋白的编码基因。

3.根据权利要求2所述的基因，其特征在于：所述基因是如下1)或2)的基因：

1)其编码序列是序列表中序列1自5’末端第256-2841位；

2)其核苷酸序列是序列表中序列1。

4.含有权利要求2或3所述基因的重组载体或重组菌或转基因细胞系。

5.根据权利要求4所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体是将权利要求2或3所述的基因插入载体pBI121的多克隆位点，得到的重组表达载体。

6.一种培育耐旱植物的方法，是将权利要求2或3所述的基因导入目的植物中，得到耐旱性高于目的植物的转基因植物；所述目的植物是烟草。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：权利要求2或3所述的基因是通过权利要求4或5所述的重组载体导入目的植物中的。

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