CN101671635B

CN101671635B - 一种复合微生物制剂及其制备方法

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Publication number: CN101671635B
Application number: CN 200910067552
Authority: CN
Inventors: 杨静; 杨坤
Original assignee: TONGHUA WANYING BIO-TECH Co Ltd
Current assignee: TONGHUA WANYING BIO-TECH Co Ltd
Priority date: 2009-09-21
Filing date: 2009-09-21
Publication date: 2013-12-25
Anticipated expiration: 2029-09-21
Also published as: CN101671635A

Abstract

本发明提供了一种复合微生物制剂及其制备方法，用于农业生产和畜牧业生产。本发明的复合微生物制剂是由干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、少孢酵母(Saccharomyces exiguus)经液体培养发酵，按不同规格分装成的液体制剂。本发明涉及的干酪乳杆菌菌种和少孢酵母菌种使用比例为3∶1～2。本发明的复合微生物制剂具有以下特点：1、抑制土壤中有害微生物繁殖，产生有益物质防治农作物各类病害。2、提高土壤肥质，形成良好的作物生长环境，提高作物产量。3、增加动物肠道内有益菌数量，增强动物免疫力、抗病力。4、提高畜禽饲料利用率，改善饲养环境，降低饲养成本。5、减少、甚至不用抗生素提高畜产品(肉、蛋、奶)品质。

Description

一种复合微生物制剂及其制备方法

技术领域本发明公开了一种复合微生物制剂及其制备方法，用于农业生产和畜牧业生产。

背景技术在现代农业年产过程中，由于大量使用化肥、农药、有机肥(含农家肥)应用减少，造成土壤中有机质减少，有害物质残留增多，土壤板结，土壤中有益微生物减少，有害微生物增加，土壤盐化、碱化、沙化，恶化程度较重，作物产量降低，品质下降，病虫害发生率逐年递增。在畜牧业方面，由于大量使用抗生素、激素等药物，造成畜产品(肉、蛋、奶)品质下降，药物残留超标，免疫力下降，发病率高。本发明通过有益微生物的复合培养，提供了一种质量稳定，效果明显的微生物制剂。本发明产品可以增加土壤中有益菌数量，抑制有害菌，有效分解被土壤固化的磷、钾、钙等物质，加速土壤养份的释放，提高作物对土壤养份的吸收能力，可以改良土壤，增进肥力，提高作物产量和品质，减少病虫害。本发明产品用于畜牧业生产上，可以提高动物肠道内有益菌数量，调节肠道菌群平衡，抑制有害菌生长，提高免疫力，提高饲料的转化率，促进动物的生长发育。降解动物舍内有害气体含量，净化饲养环境，提高养殖业的经济效益，社会效益和生态效益。

发明内容本发明的复合微生物制剂是由干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、少孢酵母(Saccharomyces exiguus)经液体培养发酵，按不同规格分装成的液体制剂。本发明涉及的干酪乳杆菌菌种和少孢酵母菌种使用比例为3∶1～2。

本发明的复合微生物制剂，按如下制备方法进行制备：

1、斜面培养：斜面培养基配制：尿素0.1～0.3％，磷酸二氢钾0.001～0.002％、磷酸氢二钾0.001～0.002％、硫酸镁0.02～0.04％、氯化钠0.02～0.04％、蛋白胨0.1～0.2％、牛肉膏0.04～0.06％、酵母膏0.04～0.06％、糖蜜3～5％、琼脂1.0～0.2％，分装成20ml/支试管，灭菌。取干酪乳杆菌菌种与少孢酵母菌种按3∶1～2的比例在无菌室接入同一个试管斜面，干酪乳杆菌1支可接入10支试管斜面，少孢酵母菌种1支可接入20～30支试管斜面。斜面培养温度24～26℃、培养时间4～5天，斜面菌态光滑无染菌。

2、一级种液培养(一级菌种制备、接种)：培养基制备：尿素0.1～0.3％，磷酸二氢钾0.001～0.002％、磷酸氢二钾0.001～0.002％、硫酸镁0.02～0.04％、氯化钠0.02～0.04％、蛋白胨0.1～0.2％、牛肉膏0.04～0.06％、酵母膏0.04～0.06％、糖蜜3～5％，制成液体培养基，每瓶装量为1kg左右，进行消毒，温度121℃消毒30分钟。操作人员在无菌室进行操作，将斜面菌种挖块接种于一级培养瓶内，1支斜面菌种接1个培养瓶。培养温度24～26℃、培养时间4～5天。pH达到2.8～3.8左右，取样，镜检，无染菌即可转入发酵培养。

3、发酵液培养：按一级种液培养基制备方法制成液体培养基5000ml，装于一个发酵培养瓶内，密封，温度121℃消毒30分钟。操作人员在无菌室将一级种液接种于发酵培养瓶内。培养温度24～26℃、培养时间4～5天，pH达到2.8～3.8左右，取样，镜检，无染菌即可转入种子罐培养。

4、种子罐培养：按一级种液培养基制备方法，在种子罐内制成液体培养基1000kg，温度121℃灭菌40分钟。冷却后温度降至25～26℃以后，操作人员将5000ml发酵种液投入种子罐中，培养温度24～26℃、培养时间5～6天。在培养过程当中，每天取样进行镜检，检查生长是否正常。pH达到2.8～3.8左右，取样，镜检，无染菌即可转入发酵罐培养。

5、发酵罐培养：按一级种液培养基制备方法，在发酵罐内制成液体培养基5000kg，121℃灭菌40分钟。冷却后温度降至25～26℃以后，从物料管道将种子罐中发酵种液移入发酵罐内进行培养，培养温度24～26℃，培养时间5～6天，pH值应达到2.8～3.8，外观为淡黄色，气味微酸，无异味，在显微镜下观察，干酪乳杆菌和少孢酵母活菌总量达到2亿/ml以上，无其他杂菌，即可灌装、包装，本品常温条件下可保存2年以上。

本发明的复合微生物制剂具有以下特点：

1、抑制土壤中有害微生物繁殖，产生有益物质防治农作物各类病害。

2、提高土壤肥质，形成良好的作物生长环境，提高作物产量。

3、增加动物肠道内有益菌数量，增强动物免疫力、抗病力。

4、提高畜禽饲料利用率，改善饲养环境，降低饲养成本。

5、减少、甚至不用抗生素提高畜产品(肉、蛋、奶)品质。

使用注意：

1、禁止与抗生素、消毒剂一起使用。

2、防止暴晒、冷冻。

具体实施方式

实施实例1

1、斜面培养：斜面培养基配制：尿素0.1％，磷酸二氢钾0.01％、磷酸氢二钾0.01％、硫酸镁0.03％、氯化钠0.03％、蛋白胨0.1％、牛肉膏0.05％、酵母膏0.05％、糖蜜4％、琼脂1.2％，分装成20ml/支试管，灭菌。取干酪乳杆菌菌种与少孢酵母菌种按3∶1的比例在无菌室接入同一个试管斜面，干酪乳杆菌1支可接入10支试管斜面，少孢酵母菌种1支可接入30支试管斜面。斜面培养温度25℃、培养时间5天，斜面菌态光滑无染菌。

2、一级种液培养(一级菌种制备、接种)：培养基制备：尿素0.1％，磷酸二氢钾0.01％、磷酸氢二钾0.01％、硫酸镁0.03％、氯化钠0.03％、蛋白胨0.1％、牛肉膏0.05％、酵母膏0.05％、糖蜜4％，制成液体培养基，每瓶装量为1kg左右，进行消毒，温度121℃消毒30分钟。操作人员在无菌室进行操作，将斜面菌种挖块接种于一级培养瓶内，1支斜面菌种接1个培养瓶。培养温度25℃、培养时间5天。pH达到3.0左右，取样，镜检，无染菌转入发酵培养。

3、发酵液培养：按一级种液培养基制备方法制成液体培养基5000ml，装于一个发酵培养瓶内，密封，温度121℃消毒30分钟。操作人员在无菌室将一级种液接种于发酵培养瓶内。培养温度25℃、培养时间5天，pH达到3.0左右，取样，镜检，无染菌转入种子罐培养。

4、种子罐培养：按一级种液培养基制备方法，在种子罐内制成液体培养基1000kg，温度121℃灭菌40分钟。冷却后温度降至26℃以后，操作人员将5000ml发酵种液投入种子罐中，培养温度25℃、培养时间6天。在培养过程当中，每天取样进行镜检，检查生长是否正常。pH达到3.0左右，取样，镜检，无染菌转入发酵罐培养。

5、发酵罐培养：按一级种液培养基制备方法，在发酵罐内制成液体培养基5000kg，121℃灭菌40分钟。冷却后温度降至26℃以后，从物料管道将种子罐中发酵种液移入发酵罐内进行培养，培养温度25℃、培养时间6天，pH值达到2.9，外观为淡黄色，气味微酸，无异味，在显微镜下观察，干酪乳杆菌和少孢酵母活菌总量达到2.6亿/ml，无其他杂菌，灌装成1000ml/瓶，包装。

本品常温条件下可保存2年以上。

实验实例1

通过试验验证本发明活菌剂在农作物上的增产作用。

1、试验单位及试验作物

农业站名称	试验作物	试验地点	试验地状况
				大安镇	玉米	水洞四组	冲积土、肥力中上等、前茬玉米。
大泉源乡	水稻	爱国农业站试验田	肥力中上等、前茬水稻。
				石湖镇	大豆	公益村
兴林镇	大豆(示范)	兴华村4个农户4亩	平地
				果松镇	西瓜	先锋12组李青地3.3亩	砂壤土、肥力中上等。

2、试验处理

作物名称

处理(个)

处理1

处理2

处理3

处理4

处理5

玉米

4

1∶100倍液浸种2小时

1∶500倍液苗高10cm喷一次

1∶500倍液苗高10cm喷一次，每隔10天再喷两次。

对照(不施用)

水稻

5

1∶100倍液浸种6小时

1∶100倍液苗床1kg/m²

1∶100倍液沾根5分钟

1∶100倍液叶面喷施，苗期、分蘖期、孕穗期、抽穗期、喷4次。

对照(不施用)

大豆

5

1∶100倍液浸种1～2小时

1000ml兑水500kg拌有机肥1m³

1∶500倍液在第一片复叶展开前进行喷雾

1∶300倍液开花期、结荚期各喷一次。

对照(不施用)

西瓜

5

1∶300倍液整地前泼洒地面

300ml兑水150kg拌农肥0.3m³

1∶300倍液幼苗移栽时浇定根水

1∶500倍液生长期7～10天喷一次，连喷3次。

对照(不施用)

3、对作物生育形状及产量的影响

(1)对玉米生育性状及产量的影响

(2)对水稻生育性状及产量的影响

(3)对大豆生育性状及产量的影响

	虫食率(％)	株高(cm)	底荚高(cm)	亩产(kg)	增产率(％)
						处理1	0.5	90	6.5	200	25
处理2	0.5	92	7	209	30.6
						处理3	0.5	92	7.5	202	26.2

处理4	0.5	90	8	222	38.7
						处理5	0.5	95	8	160	——

兴华村4户产量结果：

处理	平均亩产(kg)	增产率(％)
			施用活菌剂	160	28
未施用活菌剂	125	——

(4)对西瓜生长发育的影响

处理1：移栽后，生根、缓苗快、根系发达，相对抗枯萎病能力强。

处理2：移栽后，吸收水能力强，叶色浓绿，土传病害减轻。

处理3：生根快，根系发达茎蔓粗壮，对枯萎病、根腐病等土传病害抗性强。

处理4：时色浓绿，抗病性增强，茎蔓粗壮，减少了农药的使用量。

施用活菌剂平均亩产5000kg左右，未施用的亩产4000左右，增产幅度在20％以上。

实验实例2

通过试验验证本发明活菌剂在畜牧业上的应用效果。

1、活菌剂对种鸡产蛋后期生产性能的影响

(1)试验材料：试验选用56周龄肉用种鸡，养殖户为通化市二道江华树村养殖户。

(2)试验条件与饲养管理：自由采食，自由饮水，光照16小时/天，3层笼养，预试期饲喂基础日粮。正式期对照组喂基础日粮，试验组喂基础日粮添加活菌剂(活菌剂与水1∶500倍稀释饮水)。

(3)试验设计：1000只试验鸡随机分组。试验组500只，对照组500只，每组设3重复，试验期为8周。

(4)试验结果：在种鸡基础日粮中添加活菌剂，通过对比试验取平均值，比较了种鸡产蛋率，其结果见对比表。

种鸡产蛋后期产蛋率(％)

组号	1	2	3	平均值
					试验组	63.21	61.33	62.38	62.31
对照组	56.22	54.36	58.49	56.35

(5)小结：

试验组比对照组产蛋率增加5.96％；添加活菌剂组改善了鸡舍环境，降低了舍内的粪臭和氨气的浓度，提高鸡舍的空气清新度；添加活菌剂组可延长产蛋期2个月，提高蛋壳质量，减少种蛋破损率，提高产出效益。

2、活菌剂对育雏鸡应用效果的试验

(1)试验分组：选择罗曼品种雏鸡12,000只，随机分成两组，试验组6000只，对照组6000只。

(2)试验地点：通化县葫芦套乡孤砬子村养鸡大户于春宏鸡场。

(3)试验方法：试验组，1～3日龄按1∶50倍兑水用，4～14日龄按1∶500倍兑水饮用。15～17日龄按1∶50倍兑水用，18～42日龄按1∶500兑水饮用。连续使用42天。

(4)饲养管理：笼养，饲喂全价配合料，自由饮水，控制好饲养环境：光照、温度、湿度、空气，按照正常的免疫程序进行免疫。、

(5)测定项目：观察各组雏鸡生长发育情况，主要看雏群均匀度，雏群健康状况，雏鸡成活率。注意观察各组大肠杆菌病的发病率、死亡率，每天跟踪记录，整理归档。做好各数据的统计与分析。

(6)结果分析：活菌剂对雏鸡生产性能的影响

在雏鸡饮水中添加活菌剂，通过对比试验，验证活菌剂对雏鸡生产性能的影响，其结果见下表。

试验对比表

组别	试验组	对照组
			育雏(只)	6000	6000
死亡(只)	23	198
			成活(只)	5977	5802
成活率(％)	9962	96.7
			死亡率(％)	0.38	3.3
均匀度(％)	99.6	95.1

从表上我们可以看到，同样的饲养管理水平试验组育雏6000只，死亡23只，成活5977只，成活率99.62.％，死亡率0.38％，雏鸡生长发育均匀度为99.6％，体质健壮。对照组育雏6000只，死亡198只，成活5802只，成活率96.7％，死亡率3.3％，雏鸡生长发育均匀度为95.1％。两组对比，试验组雏鸡比对照组少死175只，成活率比对照组高2.92％，雏鸡生长发育均匀度比照组高4.5％。

3、活菌剂发酵饲料育肥牛效果试验

(1)试验材料与方法

供试牛选择及分组：12头夏黄杂育肥公牛随机分成实验组和对照组，每组6头。试验牛由通化县江甸镇肉牛育肥大户提供。生长发育正常，健康无病，年龄1.5～2.5岁之间。

活菌剂发酵玉米秸杆饲料的制备：试验秸杆发酵使用活菌剂，其加工制作按程序说明进行，并在预试验前30天制备，待发酵成熟后饲喂。

预试期：预试期15天，试验前要对牛驱虫、健胃、免疫，全期采取同舍、同槽、栓系、圈养。试验期为60天。

饲养管理：供试牛混合精料给量相同，每日每头2.5kg，分三次投料。混合精料的配方：玉米75％，豆粕11％，麦麸10.5％，骨粉2％，盐1％，微量元素添加剂0.5％。粗饲料试验组喂活菌剂发酵秸杆饲料，对照组喂未经处理的玉米秸杆(机械铡短)均自由采食，满足饮水。做好试验记录：记录牛的采食量，测始重，末重。

(2)结果与分析

在秸杆饲料中加入活菌剂原液，通过对比试验，比较了加入活菌剂秸杆饲料与不加活菌剂秸杆饲料对牛的育肥效果，结果见下表。

对比试验结果

组别	试验组(kg)	对照组(kg)
			始重	2328.6(总重量)	2343.3(总重量)
	388.1(个体重)	390.55(个体重)
			末重	2998.8(总重量)	2894.1(总重量)
	499.8(个体重)	482.35(个体重)
			总重量	669.9	550.8
平均日增重	1.86	1.53

试验组平均始重388.1kg，末重499.8kg，平均每头日增重1.86kg。对照组平均始重390.55kg，末重482.35kg，平均日增重1.53kg。两组对比，平均每头牛日增重试验组比对照组高0.33kg。

Claims

1.一种复合微生物制剂的制备方法，其特征在于步骤如下：

(1)斜面培养：斜面培养基配制：尿素0.1-0.3％、磷酸二氢钾0.001-0.002％、磷酸氢二钾0.001-0.002％、硫酸镁0.02-0.04％、氯化钠0.02-0.04％、蛋白胨0.1-0.2％、牛肉膏0.04-0.06％、酵母膏0.04-0.06％、糖蜜3-5％、琼脂1.0-0.2％，分装成20ml/支试管，灭菌；取干酪乳杆菌菌种与少孢酵母菌种按3∶1-2的比例在无菌室接入同一个试管斜面，干酪乳杆菌1支接入10支试管斜面，少孢酵母菌种1支接入20-30支试管斜面；斜面培养温度24-26℃、培养时间4-5天，斜面菌态光滑无染菌；

(2)一级种液培养：培养基制备：尿素0.1-0.3％、磷酸二氢钾0.001-0.002％、磷酸氢二钾0.001-0.002％、硫酸镁0.02-0.04％、氯化钠0.02-0.04％、蛋白胨0.1-0.2％、牛肉膏0.04-0.06％、酵母膏0.04-0.06％、糖蜜3-5％，制成液体培养基，每瓶装量为1kg，进行消毒，温度121℃消毒30分钟；操作人员在无菌室进行操作，将斜面菌种挖块接种于一级培养瓶内，1支斜面菌种接1个培养瓶；培养温度24-26℃、培养时间4-5天；pH值2.8-3.8，取样，镜检，无染菌即可转入发酵培养；

(3)发酵液培养：按一级种液培养基制备方法制成液体培养基5000ml，装于一个发酵培养瓶内，密封，温度121℃消毒30分钟；操作人员在无菌室将一级种液接种于发酵培养瓶内；培养温度24-26℃，培养时间4-5天，pH值2.8-3.8，取样，镜检，无染菌即可转入种子罐培养；

(4)种子罐培养：按一级种液培养基制备方法，在种子罐内制成液体培养基1000kg，温度121℃灭菌40分钟；冷却后温度降至25-26℃以后，操作人员将5000ml发酵种液投入种子罐中，培养温度24-26℃，培养时间5-6天；在培养过程当中，每天取样进行镜检，检查生长是否正常；pH值2.8-3.8，取样，镜检，无染菌即可转入发酵罐培养；

(5)发酵罐培养：按一级种液培养基制备方法，在发酵罐内制成液体培养基5000kg，121℃灭菌40分钟；冷却后温度降至25-26℃以后，从物料管道将种子罐中发酵种液移入发酵罐内进行培养，培养温度24-26℃，培养时间5-6天，pH值2.8-3.8，外观为淡黄色，气味微酸，无异味，在显微镜下观察，干酪乳杆菌和少孢酵母活菌总量达到2亿/ml以上，无其他杂菌，即可灌装、包装。