CN101628923B - 一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法 - Google Patents

Abstract

一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法是将亚麻籽除杂、脱胶后，与pH为10～13的醇碱溶液以1∶2～8的重量比混合，40～60℃下提取2～5小时，过滤，滤渣反复提取至醇碱溶液无色，合并滤液；在滤液中加入酸调节pH至中性，浓缩至重量为原滤液的1/3-1/2后加入2～5倍浓缩液体积的水，用有机溶剂反复萃取至有机相无色，收集水相；将收集到的水相用大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度逐渐增大的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯；将香豆酸葡萄糖苷乙酯在碱性溶液中皂化得到香豆酸葡萄糖苷。本发明具有简单易行，工艺稳定，成本低，适合工业化生产的优点。

Description

一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法

技术领域

本发明涉及一种以亚麻籽为原料制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法。

技术背景：

亚麻籽(Flaxseed)是一种重要的经济油料作物，富含木酚素类物质，其中开环异落叶松树脂酚二葡萄糖苷(SDG)的含量最高。除此以外，亚麻籽中还含有其他酚类糖苷物质，如香豆酸葡萄糖苷、阿魏酸葡萄糖苷(WO9630468A2)。

香豆酸(p-coumaric acid)，化学名为4-羟基苯丙烯酸，广泛存在于自然界植物中，尤其以豆科植物含量居多。大量研究表明，香豆酸有很强的生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、抗化疗升白作用。香豆酸还是利胆的有效成分，其利胆作用与等量去氢氧酸相近，而且具有作用缓和持久的特点。香豆酸在酸性条件下能闭环生成香豆素，香豆素及其衍生物除了作香料以外，发现其3、4位(有取代基的衍生物)具有强有力的抗血液凝结作用，因此又用作抗凝血的药物，某些抗凝血作用特别强的又用作杀鼠剂。香豆酸广泛应用于医药、食品、日用品、饲料等领域。研究表明香豆酸葡萄糖苷和香豆酸葡萄糖苷乙酯作为香豆酸衍生物具有良好的生理活性和较低的毒性(EP 0801945 A2)。

目前有关制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法报道很少，研究工作主要集中在分析鉴定上，所用技术手段局限于色谱法，例如PernillaJohnsson等经过柱色谱和高效液相色谱分离，利用核磁证明了亚麻籽中香豆酸葡萄糖苷的存在(Polymeric fractions containing phenolglucosides in flaxseed.Food Chemistry.2002，(76)：207-212)；Eliasson C等人通过高效液相色谱分析了碱水解后亚麻籽中SDG、香豆酸葡萄糖苷和阿魏酸葡萄糖苷的含量(High performance liquidchromatographic analysis of secoisolariciresinol diglucoside andhydroxycinnamic acid glucosides in flaxseed by alkaline extraction.Journal of Chromatography A.2003，(1012)：151-159)；VickramBeejmohun等人利用微波从亚麻籽中提取SDG、香豆酸葡萄糖苷和阿魏酸葡萄糖苷，考查了微波的功率、时间和碱浓度对提取率的影响，但并未使其三者得到分离纯化(Microwave-assisted Extraction of the MainPhenolic Compounds in Flaxseed.Phytochemical Analysis.2007，18：275-282)。Xin Li等人研究了木酚素聚合物碱水解和酸水解的产物，并用高效液相色谱分析和分离这些物质，其中包括香豆酸葡萄糖苷及其乙酯(Separation and determination of secoisolariciresinoldiglucoside oligomers and their hydrolysates in the flaxseed extractby high-performance liquid chromatography.Journal ofChromatography A，2008，(1185)：223-232)。综合以上文献，目前的研究工作多是将香豆酸衍生物当作一种产品粗提得到，没有进行有效的分离，或者是通过高效液相色谱法进行分析鉴定，还远没有达到可以规模化生产的程度。

发明内容：

本发明的目的是提供一种以亚麻籽为原料制备高纯度，可工业化的制备香豆酸葡萄糖苷或香豆酸葡萄糖苷乙酯的方法。

本发明是以亚麻籽为原料，用醇碱溶液提取，经过调节pH值，浓缩，柱分离，干燥等工艺，得到高纯度的香豆酸葡萄糖苷乙酯，香豆酸葡萄糖苷乙酯可以再经过水解得到香豆酸葡萄糖苷。

本发明的具体操作步骤如下：

(1)将亚麻籽除杂、脱胶后，与pH为10～13的醇碱溶液以1∶2～8的重量比混合，40～60℃下提取2～5小时，过滤，滤渣反复提取至醇碱溶液无色，合并滤液；

(2)在滤液中加入酸调节pH至中性，浓缩至重量为原滤液的1/3-1/2后加入2～5倍浓缩液体积的水，用有机溶剂反复萃取至有机相无色，收集水相；

(3)将收集到的水相用大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度逐渐增大的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯。

本发明也可以将香豆酸葡萄糖苷乙酯在碱性溶液中皂化得到香豆酸葡萄糖苷。

如步骤(1)所述，醇碱溶液是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠与乙醇形成的溶液。

如步骤(2)所述，调节pH所用的酸可以是任何酸性较强的有机酸或无机酸，有机酸为甲酸、乙酸、草酸；无机酸为盐酸、硝酸、硫酸、磷酸。优选盐酸和硫酸。

如步骤(2)所述，有机溶剂是二氯化碳、氯仿、四氯化碳、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲苯、乙苯、二甲苯、乙醚、石油醚等。

如步骤(3)所述体积浓度逐渐增大的乙醇-水溶液分别为体积浓度20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液。

如步骤(3)所述大孔树脂是极性或非极性大孔树脂，型号为D3520、D4020，AB-8、S-8、X-5等，优选AB-8和X-5大孔吸附树脂。

如上所述的碱性溶液为氢氧化钠溶液，氢氧化钾溶液等。本发明具有如下优点：

1、整个过程简单易行，工艺稳定，成本低，适合工业化生产。

2、香豆酸葡萄糖苷乙酯可以不经过皂化而作为一种产品，也可以经过皂化生产得到香豆酸葡萄糖苷，而且产品纯度高。

3、综合考虑亚麻籽其他产品的开发，提取分离后的亚麻籽还可继续用于其它产品的开发。

具体实施方式

实施例1

称取200g脱胶后的干燥亚麻籽，加入400g pH值为10的氢氧化钠的乙醇碱溶液60℃水浴下搅拌提取3小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用盐酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为50g，加入250ml水，用乙酸乙酯反复萃取至乙酸乙酯相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用AB-8大孔树脂完全吸附其中香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为95.2％；香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钠溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷，纯度为93.6％。

实施例2

称取400g脱胶后的干燥亚麻籽，加入1000g pH值为11的氢氧化钾的乙醇碱溶液40℃水浴下搅拌提取2.5小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用盐酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为60g，加入120ml水，用乙酸甲酯反复萃取至乙酸甲酯相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用D3520大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为90.1％。香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钾溶液溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷，纯度为89％。

实施例3

称取200g脱胶后的干燥亚麻籽，加入1600g pH值为12的氢氧化钠的乙醇溶液50℃水浴下搅拌提取2小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用硫酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为70g，加入300ml水，用甲苯反复萃取至甲苯相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用D4020大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为91.0％；香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钠溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷，纯度为89.8％。

实施例4

称取300g脱胶后的干燥亚麻籽，加入1200g pH值为13的氢氧化钾的乙醇溶液50℃水浴下搅拌提取5小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用磷酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为50g，加入150ml水，用氯仿反复萃取至氯仿相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用S-8大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为92.4％。香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钠溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷，纯度为90.2％。

实施例5

称取400g脱胶后的干燥亚麻籽，加入2400g pH值为12的碳酸钠醇的乙醇溶液60℃水浴下搅拌提取4小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用乙酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为80g，加入300ml水，用乙酸丁酯反复萃取至乙酸丁酯相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用X-5大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为93.4％；香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钠溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷纯度为91.7％。

实施例6

称取350g脱胶后的干燥亚麻籽，加入1750g pH值为13的氢氧化钠醇的乙醇溶液40℃水浴下搅拌提取2小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用草酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为80g，加入260ml水，用乙醚反复萃取至乙醚相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用AB-8大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为92.6％；香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钠溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷纯度为90.1％。

实施例7

称取260g脱胶后的干燥亚麻籽，加入780g pH值为10的碳酸氢钠醇的乙醇溶液60℃水浴下搅拌提取3小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用甲酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为50g，加入150ml水，用石油醚反复萃取至石油醚相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用X-5大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为93.2％。香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钠溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷，纯度为91.1％。

实施例8

称取300g脱胶后的干燥亚麻籽，加入2100g pH值为11的碳酸氢钠醇的乙醇溶液50℃水浴下搅拌提取2.5小时，过滤，滤渣用上述提取液反复提取至提取液无色，合并滤液。用盐酸调节滤液至中性，提取液浓缩至重量为100g，加入400ml水，用四氯化碳反复萃取至四氯化碳相无色，分液，收集水相，将收集到的水相用D4020大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度为20％、40％、60％、80％的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯，纯度为91.8％；香豆酸葡萄糖苷乙酯在氢氧化钾溶液中皂化，即得香豆酸葡萄糖苷，纯度为90.0％。

Claims (9)

1.一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)将亚麻籽除杂、脱胶后，与pH为10～13的醇碱溶液以1∶2～8的重量比混合，40～60℃下提取2～5小时，过滤，滤渣反复提取至醇碱溶液无色，合并滤液；

(2)在滤液中加入酸调节pH至中性，浓缩至重量为原滤液的1/3-1/2后加入2～5倍浓缩液体积的水，用有机溶剂反复萃取至有机相无色，收集水相；

(3)将收集到的水相用大孔树脂完全吸附其中的香豆酸葡萄糖苷乙酯，然后分别采用水和体积浓度逐渐增大的乙醇-水溶液作流动相洗脱，收集80％乙醇洗脱液，蒸干即得香豆酸葡萄糖苷乙酯；

(4)将香豆酸葡萄糖苷乙酯在碱性溶液中皂化得到香豆酸葡萄糖苷；

如步骤(3)所述的体积浓度逐渐增大的乙醇-水溶液分别为体积浓度20％、40％、60％或80％的乙醇-水溶液；

所述步骤(1)中醇碱溶液是氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠或碳酸氢钠与乙醇形成的溶液。

2.如权利要求1所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于如步骤(2)所述，调节pH所用的酸是有机酸或无机酸。

3.如权利要求2所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于所述的有机酸为甲酸、乙酸或草酸。

4.如权利要求2所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于所述的无机酸为盐酸、硝酸、硫酸或磷酸。

5.如权利要求4所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于所述的无机酸为盐酸或硫酸。

6.如权利要求1所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于如步骤(2)所述的有机溶剂是二氯化碳、氯仿、四氯化碳、乙酸甲酯、乙酸乙酯、乙酸丁酯、甲苯、乙苯、二甲苯、乙醚或石油醚。

7.如权利要求1所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于如步骤(3)所述的大孔树脂的型号为D3520、D4020、AB-8、S-8或X-5。

8.如权利要求7所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于所述的大孔树脂是AB-8或X-5大孔吸附树脂。

9.如权利要求1所述的一种制备香豆酸葡萄糖苷及其乙酯的方法，其特征在于所述的碱性溶液为氢氧化钠溶液或氢氧化钾溶液。