CN101627728A - 一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法，属甘薯有性杂交和组织培养方法。分析亲本遗传差异，筛选定向杂交亲本，通过嫁接和暗处理诱导开花，有性杂交获得甘薯实生种籽，结合组织培养，快速繁殖来源于实生种籽的试管苗，达到培育甘薯无病无毒试管苗的目的。本发明的有益效果是：将甘薯实生种籽和甘薯组织培养相结合，可以快速获得不同甘薯实生苗系无病无毒试管苗，为培养甘薯无病无毒种薯苗打下基础。
Description
技术领域
本发明涉及甘薯有性杂交和组织培养相结合的方法，具体是一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法。
背景技术
甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)是世界上重要的粮食、饲料、工业原料和新型能源作物，在亚洲、非洲和拉丁美洲等热带、亚热带、温带地区广为栽培。甘薯在世界粮食生产中，总产排列第7位。在我国粮食生产中，仅次于水稻、小麦和玉米，居第4位，具有重要的经济价值和战略地位。目前我国甘薯常年种植面积在5-6×106hm2，占世界总面积的60％以上，年总产量占世界总产量的80％以上。随着甘薯保健功能和能源功能的凸现，甘薯越来越受到人们的重视。但是，甘薯病毒病是制约甘薯生产的重要因素之一，甘薯感染病毒病对甘薯产量和品质影响很大，轻则减产10-20％，重则减产70-80％。目前，主要利用甘薯茎尖病毒含量低的特点，通过切取0.3-0.5mm的茎尖分生组织来培育无病毒试管苗，由于茎尖分生组织并不是绝对不含病毒，因此，获得的试管苗脱除病毒并不彻底，经过几代的繁殖，病毒又会进一步积累。因此，需要投入更多的人力和物力，更新脱毒苗。
发明内容
本发明的目的在于克服甘薯茎尖分生组织培养脱毒不彻底的问题，提供一种无病无毒甘薯试管苗培育方法。它是利用甘薯实生种籽不带病菌不带病毒的特点，结合组织培养，快速繁殖培育无病无毒甘薯试管苗，为进一步培育无病无毒甘薯种薯苗打下基础。
本发明是通过如下技术方案实现的：一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法，其特征是：利用甘薯实生种籽不带病菌不带病毒的特点，通过有性杂交获得实生种籽，结合组织培养，培育大量的无病无毒试管苗，具体步骤如下：
(1)甘薯有性杂交亲本的筛选：
筛选甘薯高淀粉育种常用亲本，利用ISSR、AFLP等分子标记手段，结合田间农艺性状等，分析常用亲本的遗传差异，筛选遗传差异大的材料做亲本。
(2)甘薯亲本花蕾的诱导：
利用茑萝、蕹菜等甘薯近缘野生种做砧木，嫁接亲本材料的薯苗，每天光照7-9小时，暗处理15-17小时，处理25-35天，诱导甘薯现蕾开花。
(3)有性杂交实生种籽的获得：
前一天下午把即将开花的花蕾用纸袋套上，第二天上午分别取不同亲本的花粉，隔离定向授粉，并封闭花冠，经过30-40天，种子成熟，收获蒴果，去除萼片和果皮，获得有性杂交实生种子。
(4)无病无毒试管苗培育：
将实生种子沿种子底部刻去1-1.5mm见方的种皮，用蒸馏水冲洗干净，超净工作台内用70％酒精浸泡30s，0.1％HgCl2消毒3min，无菌水清洗3-4次，接种在PH5.8培养基上进行培养；所述的培养基的组分和用量是：1L MS基本培养基添加蔗糖30g、琼脂7g；培养条件为光照2000-3000lux，14hr/d，温度29±1℃，试管18mm×150mm，每管装入培养基约10ml，铝箔封口；培养15-20天获得试管苗；将获得的试管苗接种到快繁培养基上进行培养，所述的培养基为：每1L MS基本培养基添加0.3-0.5mg萘乙酸(NAA)、40g蔗糖和8g琼脂，其PH5.8；培养条件同前，每隔4-5周，将试管苗剪取单茎节段继代培养，获得相同来源的无病无毒试管苗。
本发明的有益效果是：将甘薯实生种籽和甘薯组织培养相结合，可以快速获得不同甘薯实生苗系无病无毒试管苗，为培养无病无毒甘薯种薯苗打下基础。
具体实施方式
下面结合实施例进一步说明本发明的方法。
实施例：
通过亲本遗传差异分析，2005年筛选遗传差异较大，遗传距离较远的徐薯18(江苏徐州甘薯研究中心选育)做母本和徐薯781(江苏徐州甘薯研究中心从引进的国际马铃薯中心的实生种籽中筛选的优异育种材料)做父本进行定向杂交，当年收获实生种籽，任选5粒实生种籽，分别编号063601、063602、063603、063604、063605，用利器沿种子底部刻去1-1.5mm见方的种皮，蒸馏水冲洗干净。超净工作台内用70％酒精浸泡30s，0.1％HgCl2消毒3min，无菌水清洗3-4次，接种在每1L MS(Murashige & Skoog)基本培养基加入30g蔗糖和7g琼脂的培养基(PH5.8)上进行培养。培养条件为光照2000-3000lux，14hr/d，温度29±1℃，试管18mm×150mm，每管装入培养基约10ml，铝箔封口。培养15-20天，将获得的试管苗接种至添加0.3-0.5mg/L的NAA(萘乙酸)、40g/L蔗糖和8g/L琼脂的MS培养基(PH5.8)上进行培养。培养条件同前，每隔4-5周，将试管苗剪取单茎节段继代培养，经过4代培养，获得超过500株无病无毒试管苗。
Claims (1)
1、一种利用甘薯实生种籽培育无病无毒试管苗的方法，其特征是，利用甘薯实生种籽不带病菌不带病毒的特点，通过有性杂交获得实生种籽，结合组织培养，培育无病无毒试管苗，具体步骤如下：
(1)甘薯有性杂交亲本的筛选：
筛选甘薯高淀粉育种常用亲本，利用ISSR、AFLP等分子标记手段，结合田间农艺性状，分析常用亲本的遗传差异，筛选遗传差异大的材料做亲本；
(2)甘薯亲本花蕾的诱导：
利用茑萝、蕹菜等甘薯近缘野生种做砧木，嫁接亲本材料的薯苗，每天光照7-9小时，暗处理15-17小时，处理25-35天，诱导甘薯现蕾开花；
(3)有性杂交实生种子的获得：
前一天下午把即将开花的花蕾用纸袋套上，第二天上午分别取不同亲本的花粉，隔离定向授粉，并封闭花冠，经过30-40天，种子成熟，收获蒴果，去除萼片和果皮，获得有性杂交实生种子；
(4)无病无毒试管苗培育：
将实生种子沿种子底部刻去1-1.5mm见方的种皮，用蒸馏水冲洗干净，超净工作台内用70％酒精浸泡30s，0.1％HgCl2消毒3min，无菌水清洗3-4次，接种在PH5.8培养基上进行培养；所述的培养基的组分和用量是：MS基本培养基1L，蔗糖30g，琼脂7g；培养条件为光照2000-3000lux，14hr/d，温度29±1℃，试管18mm×150mm，每管装入培养基约10ml，铝箔封口；培养15-20天获得试管苗；将获得的试管苗接种到培养基上进行培养，所述的培养基为：每1L MS基本培养基添加0.3-0.5mg萘乙酸(NAA)、40g蔗糖和8g琼脂，其PH5.8；培养条件同前，每隔4-5周，将试管苗剪取单茎节段继代培养，获得相同来源的无病无毒试管苗。
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-
2009
- 2009-08-11 CN CN200910183791A patent/CN101627728A/zh active Pending
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