CN101626784B - 利用包含抗体的组合物治疗和/或预防非传染性医学病症 - Google Patents

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Abstract

本发明提供制备包含抗体的乳制品或蛋制品的方法，所述乳制品或蛋制品用于预防和/或治疗非传染性医学病症。本发明还提供包括向GIGI道施用药物组合物的非-全身性模式，所述药物组合物包括含抗体的乳制品或蛋制品。

Description

利用包含抗体的组合物治疗和/或预防非传染性医学病症
发明领域
本发明涉及利用包含抗体的组合物，优选地通过局部施药，治疗和/或预防非传染性医学病症。在具体的实施方案中，本发明涉及治疗和/或预防癌症或非癌症或过增殖性疾病的方法，其包括，优选地通过局部施药，施用包含抗体的乳制品和或蛋制品的步骤。
技术背景
许多严重医学病症的治疗几乎全部是通过全身进行的。然而，存在一些这样的医学病症，对于这些医学病症而言非-全身性(包括局部的)治疗可能更合适，诸如包括但不仅限于侵袭皮肤、胃肠(GI)道(包括口咽)、眼睛、耳朵、鼻咽、膀胱、阴道和子宫颈的病症。
在澳大利亚，皮肤癌占每年诊断出的全部新癌症的约81％。存在着3种主要的皮肤癌类型：基细胞(basal cell)癌和鳞状细胞癌(也称为非-黑素瘤皮肤癌)和黑素瘤。非-黑素瘤皮肤癌在澳大利亚是最频繁出现的癌症(每年超过374,000个新病例)，但也是最少威胁生命的癌症，尽管有些病例可能是致命的。
GI癌包括大量癌症，包括结肠直肠癌。全世界，结肠直肠癌(大肠的癌症)在男性和女性中是第三常见的癌症，代表全部癌症的13％。在澳大利亚，它在男性和女性中均是第二常见的癌症。大约20％的患者在诊断时患有转移性疾病(扩散到大肠外)，且所有结肠直肠癌患者的50％将会发展为转移瘤，并最终死于该疾病。在美国每年大约56,000人死于结肠直肠癌，且在欧洲的死亡率超过100,000患者/年。
结肠直肠癌是固体肿瘤(瘤)，其从肠的最内层(即内皮内衬)开始，并能够生长穿过一些或全部其他层。结肠癌由良性瘤引起，并通过逐步的组织学发展顺序发展为腺癌，其由腺瘤或增生性息肉/锯齿状腺瘤发展而来。
结肠直肠癌通常从息肉生长开始。在1994年，在美国进行了多于2,000,000例结肠镜检查，且这些患者中超过650,000名经历了息肉切除术。早期发现和切除息肉显著减小结肠直肠癌的发生率。然而，约50％年龄达到60岁的人群至少具有一个1cm直径或更大的腺瘤(潜在癌的)息肉。
由于大部分显现结肠直肠癌的患者是在疾病的晚期显现，因此具有能够在不需要手术的条件下帮助预防和/或治疗结肠直肠癌，或降低手术后，例如息肉切除术后复发风险的治疗将是理想的。
食道癌现在是英国成年人中第九常见的癌症。食道癌的预兆病症是巴雷特(Barrett’s)食道。在巴雷特食道中，内衬食道的细胞变为类似内衬胃的细胞。它可以在长期来自胃的酸回流后发育。具有巴雷特食道的人群发展为食道癌的可能性是一般人的125倍。
头颈癌，包括口癌和咽癌，是全世界报告的第六常见恶性肿瘤，且对于所有恶性肿瘤类型存在非常高的死亡率。约90％的头颈癌是鳞状细胞变化。尽管在化学疗法和外科手术技术中已经有了显著的进步，但是该疾病通常特别难以治疗，因为大多数显现晚期疾病的患者具有次级肿瘤和患有其他并发症(co-morbidities)。
膀胱癌在男性中是第四常见癌症，在英国每年诊断出超过10,000名患有该疾病的人。膀胱癌在40岁以下的人群中很少见；平均诊断年龄是65岁。在诊断时，约85％的膀胱癌还仅限于膀胱。膀胱癌通常从粘膜中开始，且，在一段时期内，仅朝向膀胱内部生长。
眼睛的癌症不常见，但是是一组严重的病症，它需要有效的治疗和预防方法。癌症可以发生在眼睛的所有部分。成年人中最常见的恶性原发性眼内肿瘤是黑素瘤。虽然将大部分注意力给予了后部脉络膜黑素瘤，但是这些肿瘤还可以发生在虹膜和睫状体中。最常见的眼睑癌是基细胞癌。这种癌症可以在眼睛周围生长，但很少扩散到身体的其他部分。其他常见的眼睑癌类型包括鳞状癌、皮脂癌和恶性黑素瘤。
子宫癌是最常见的妇科癌症。大多数子宫的癌症是子宫内衬(子宫内膜)的癌症。癌症也在子宫的肌肉层中发育。其他较不常见的子宫癌症类型是腺鳞状癌、乳突浆液癌和，罕见地，明细胞癌或子宫肉瘤。这些癌症是侵袭性的，并更可能发展为转移瘤。宫颈癌，尽管不如子宫癌常见，典型地在覆盖子宫颈的外表面的鳞状细胞中开始。具有能够在不需要外科手术的条件下帮助预防和/或治疗以上以及相关病症，或降低手术后复发风险的治疗将是理想的。
本说明书中包括的文献、报告(acts)、材料、装置、制品(article)等的讨论仅是为了对本发明提供上下文的目的。不暗示或意指任何或全部这些内容形成如同在本申请各个权利要求优先权日前存在的现有技术基础部分或是与本发明相关领域中的常见一般知识。
发明概述
本发明基于包含抗体的乳制品或蛋制品，所述乳制品或蛋制品适合用于，优选地通过局部应用，治疗非传染性医学病症。
在第一方面，本发明提供包含抗体的乳制品-或蛋制品制造用于预防和/或治疗非传染性医学病症的药物的用途。本发明的这个方面还提供制备处于食品、专业营养或药物产品形式，用于预防和/或治疗非传染性医学病症的药物的方法，所述方法包括对哺乳动物或禽(bird)进行接种，从而产生包含抗体的乳制品或蛋制品。在本发明的一种形式中，哺乳动物是选自由牛、绵羊、猪和山羊组成的组。在另一种形式中，禽是选自由鸡、鹅和鸭组成的组。在本发明的其他形式中，接种步骤涉及向哺乳动物或禽施用免疫原性蛋白或肽，其中所述免疫原性蛋白或肽能够引起针对哺乳动物-来源分子的免疫应答，所述哺乳动物-来源的分子包括，但不仅限于，哺乳动物细胞诸如但不仅限于癌细胞表面上存在的分子。
在第二方面，本发明提供用于预防和/或治疗患者中非传染性医学病症的方法，其包括向所述患者施用包含抗体的乳制品和或蛋制品。在本发明的一种形式中，所述乳制品和或蛋制品包含针对哺乳动物-来源的分子的抗体，所述哺乳动物-来源的分子包括，但不仅限于，哺乳动物细胞诸如但不仅限于癌细胞表面上存在的分子。
在第三方面，本发明提供制备用于预防和/或治疗非传染性医学疾病的包含抗体的乳制品或蛋制品的方法，所述方法包括用免疫原性蛋白或肽接种哺乳动物或禽的步骤。
本发明提供抗体、营养和药物组合物和试剂盒，所述试剂盒包括按照本申请的包含抗体的乳制品和/或蛋制品和/或按照本申请的方法产生的抗体。
本发明还提供抗-EphB4抗体用于治疗和/或预防食道病症以及诊断和监测所述病症的用途。在本发明的某些形式中，诊断食道病症的方法包括确定食道样品中的EphB4表达，其中检测到相对于正常食道样品增高的EphB4表达是出现食道病症的指示。在某些实施方案中，食道病症选自巴雷特食道和食道癌组成的组。本发明还提供用于执行该方法的试剂盒。
本发明还提供抗-EphB4抗体在治疗和/或预防结肠直肠息肉中和在结肠直肠癌中息肉切除术后的后手术处理中的用途。
附图简述
图1显示不同组织学组中的相对EphA1(A)、EphA2(B)和EfnA1(C)mRNA水平。方框显示第25和第75百分点(四分位值间)范围。以每个方框中的水平线表示中值。细线表示第25和第75百分点外的水平。星号(*)代表p＜0.017对比正常。
图2显示不同组织学组中的相对EphB1(A)、EphB2(B)、EphB4(C)和EfnB2(D)mRNA水平。方框显示第25和第75百分点(四分位值间)范围。以每个方框中的水平线表示中值。细线表示第25和第75百分点外的水平。星号(*)代表p＜0.017对比正常。
图3显示Het1A(食道上皮细胞)和OE33(食道癌)细胞系中标准化的EphB4mRNA水平。
图4显示人EphB4的蛋白质序列(SEQ ID NO：1)。
图5显示鼠EphB4的蛋白质序列(SEQ ID NO：2)。
图6显示牛EphB4的蛋白质序列(SEQ ID NO：3)。
本发明详述
本发明寻求提供通过非-全身性施用生物活性试剂来治疗和/或预防非传染性医学病症的方法。例如，直接对癌症应用抗癌试剂应该比经历全身性治疗更方便。在GI病症和癌症的情形中，通过GI道内腔施用生物活性试剂应该比经历全身性治疗更方便。在例如GI癌中，生物活性分子应该特异性靶向内衬GI道的任何异常细胞，并防止它们的增殖。
普遍公认所有类型的癌症治疗都具有一些副作用。认为全身性施用的单克隆抗体具有比其他治疗更低的副作用，因为它们由体内自然存在的蛋白质发育而来，并应该靶向特异性细胞且不攻击非-靶细胞。然而，抗体的全身性施用通常与副作用诸如发烧、寒冷和颤抖、恶心、发痒的皮疹、头痛；以及在一些情形中气喘和血压下降有关。
疾病的非-全身性治疗，包括局部治疗，对于直接靶向患病细胞，降低副作用和充分防止药物对非-靶组织的有害作用是理想的。虽然不是所有的医学病症对局部治疗是顺应的，但是某些侵袭皮肤、GI道、眼睛、耳朵、鼻咽、膀胱、阴道和子宫颈的非传染性医学病症特别适合于这种方式的治疗。
GI道和鼻咽内腔中的物质在体外有效保持，并通过GI道和鼻咽的完整性防止其流入到生物体的剩余物中。该完整性是通过内衬身体这些部分的细胞间存在的紧密连接提供的。本发明利用这种分离，以及膀胱、眼睛、阴道、子宫和子宫颈中存在的类似各自的屏障，所述膀胱、眼睛、阴道、子宫和子宫颈允许在不侵入身体其他部分的条件下治疗特定的靶标。例如，当用生物活性试剂以全身性方式治疗病症时，需要在有效剂量和将会对遍及全身的非-靶位点引起显著作用的剂量之间建立平衡。通过本发明的方法显著的降低了这种局限性。
皮肤类似地提供体内和体外之间的屏障。因此，直接对皮肤病症应用生物活性试剂提供类似的超越全身性施用试剂的优势。
抗体特别地是大分子，所述大分子通常不能完整穿过GI道、皮肤、膀胱的内衬、角膜或穿过粘膜诸如内衬阴道和子宫颈的那些。因此，通常以肠胃外的方式，诸如但不仅限于皮下、肌肉内、或静脉内完成向患者施用抗体。这些施药模式允许完整分子进入身体并以全身性方式递送到身体各处。一些小分子可以通过口服施药全身递送，然而，本发明涉及需要诸如注射的方法进入身体的完整和功能性抗体和相关分子。
目前，许多研究小组和公司正在开发用于预防多种GI道感染的乳-施用制品，所述GI道感染是由如艰难梭菌(Clostridium difficile)、隐孢子虫(Cryptosporidium)、大肠杆菌(E.coli)、轮状病毒、幽门螺旋菌(H.pylori)、台湾E71病毒(Taiwanese E71 virus)、和炭疽热的传染性生物体，通过用疫苗超免疫牛引起的，所述疫苗产生针对这些感染的抗体。然而，所有这些制品意欲用于预防或治疗感染。本发明寻求超越这些感染控制应用，并为本领域尚未解决的问题提供解决方案，即关于非-全身性治疗非传染性医学病症包括但不仅限于癌症、癌前病症和非-癌病症，诸如过增殖性疾病简单有效的预防和/或治疗方法。侵袭上皮细胞的过增殖性疾病或癌前病症，诸如牛皮癣、白斑、特应性皮炎、或过增殖性或UV-响应的皮肤病也是适合于按照本发明的方法预防和或治疗的候选者。
本发明提供包含抗体的乳制品和或蛋制品，其可以用于治疗和/或预防非传染性皮肤、GI道、眼睛、耳朵、鼻咽、膀胱、阴道、子宫或子宫颈病症。
实际上，结肠直肠癌通常作为息肉起始，所述息肉可以从GI道内腔接近，这为治疗该疾病的非-全身性方法提供了机会。一些GI道的其他的癌症和非-癌病症也易受这种方法的影响。本发明可以对其有效的非-癌GI病症的实例是巴雷特食道(讨论如下)。
用于本文时，术语“抗体”意欲包括抗体的所有形式和片段，所述抗体包括但不仅限于：哺乳动物抗体、鸟类抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体及其片段。例如，抗体的片段包括，但不仅限于Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2、和CDR(互补决定区)。还包括所有免疫种类的抗体，所述免疫种类包括但不仅限于：IgA、IgE、IgG、IgM和IgY。还包括抗体的降解产物和片段，其保持它们以特异性方式结合抗原的能力。降解可能在例如抗体通过GI道时进行。
用于本文时，术语“哺乳动物细胞表面上的分子”意欲包括通常在哺乳动物细胞外表面上存在的蛋白质，或细胞外表面上至少存在蛋白质的一部分，例如跨膜蛋白。所述蛋白质可以包括能够引起免疫应答的翻译后修饰。典型的翻译后修饰包括，但不仅限于：糖基化和磷酸化。这些分子自身可能由于它们的微小尺寸而不具免疫原性，但是这样的方法，诸如缀合于载体蛋白，能够用于增加针对相关哺乳动物分子的免疫原性。所述分子还可以是通常存在于细胞外表面上的蛋白质的突变形式。
用于本文时，术语“GI道”意欲包括鼻咽、口腔、食道、胃、十二指肠、小肠、大肠(结肠)、直肠和肛门。
用于本文时，术语“非传染性医学病症”意欲包括这样的病症，其包括但不仅限于：癌症、癌前病症、非癌过增殖性疾病和“自”细胞的异常生长。在本发明的特殊实施方案中，癌症可以是GI癌或皮肤癌。细胞的异常生长可以包括这样的病症，诸如但不仅限于，巴雷特食道、牛皮癣、白斑、特应性皮炎、和过增殖性或UV-响应的皮肤病。该术语所包括的是炎性和非-炎性病症。技术人员已知许多炎性疾病，包括，不以任何方式局限于下列各项：偏头痛、类风湿性关节炎、哮喘、炎性肠疾病、晕动病、诱导的呕吐、疼痛、头痛、偏头痛、多发性硬化、心血管改变、水肿、哮喘/支气管超反应性和其他呼吸道疾病，包括过敏性鼻炎、肠的炎性疾病包括溃疡性结肠炎和局限性回肠炎、眼睛损伤和眼睛的炎性疾病。非-炎性病症包括，但不以任何方式局限于下列各项：纤维肌痛(fibromyalgia)和非-炎性神经病。
用于本文时，术语“非传染性”意欲包括由外源实体的入侵或传播(transmission)引起的病症。在非传染性条件下引起所述病症的实体通常是完整的实体，且不能入侵其他细胞。
用于本文时，术语“GI癌”意欲包括GI道中产生的和其上侵入的所有癌症。这些癌症包括，但不仅限于：肛门癌、胆管癌、结肠直肠(结肠和/或直肠)癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、肝癌(肝细胞瘤)、胰腺癌和小肠癌和口咽、口、舌和鼻癌。这些中，最适合于按照本发明方法治疗的癌症是易于从GI道内腔直接接近的那些，或侵入GI道内腔的那些。还包括发源自在GI道中转移的内脏或能够被局部治疗的其他器官的癌症。
用于本文时，术语“非-癌”和“癌前”意欲包括需要治疗但不是癌症的非传染性医学病症。例如，诸如巴雷特食道的病症是这样的病症，其中异常细胞在食道下部的内部内衬上发育，这可能归因于胃内容物回流进入食道的那个区域。虽然巴雷特食道不是癌病症，但是经过一段较长的时期，它偶尔可以导致癌症在食道下部发生。因此，也可以认为巴雷特食道是癌前病症，且因此，它的治疗是必要的。本发明第一次描述了巴雷特食道中EphB4的上调作用，且这为描述本发明的某些方面提供了模型。
用于本文时，术语“皮肤癌”意欲包括皮肤中产生的所有癌症。这些癌症包括，但不仅限于：基细胞癌、鳞状细胞癌(也称为非-黑素瘤皮肤癌)和黑素瘤。
用于本文时，术语“患者”意欲包括人和动物，特别是患有或处于发展为GI、皮肤、眼睛、膀胱或子宫颈病症风险中的那些。在本发明的大多数实施方案中，患者应该是哺乳动物，且最经常是人。
用于本文时，术语“施药”意欲局限于非-全身性施药，诸如但不仅限于，局部应用、口服施药和摄取。还包括将包含抗体的乳制品或蛋制品直接引入到患者的GI道、鼻、膀胱、眼睛或阴道/子宫颈中的形式，例如作为液体直接进入食道或以栓剂或作为灌肠剂的形式进入结肠，或通过导管进入膀胱。还可能由包含抗体的乳制品或蛋制品制备纯免疫球蛋白制剂，且这可以被用于直接应用到肿瘤细胞上，例如在结肠中，以“结肠-冲洗剂”的形式，在眼睛中，以“眼睛冲洗剂”的形式，或其他适当的程序。存在许多潜在应用于皮肤的剂型。
术语“非-全身性施药”意欲排除全身性施药途径，诸如例如，静脉内施药。其他的全身性施药途径为本领域技术人员所熟知。
将需要施用的抗体的量描述为“治疗有效量”。“治疗有效量”是引起所寻求的组织或系统生物或医学响应的量。例如，在治疗GI癌的情形中，它是能够延迟或预防GI癌细胞增殖的抗体量(包含在营养或药物基质中)。“治疗有效量”还可以减少存在的GI癌细胞的数量。
在本发明的某些实施方案中，施用于患者的抗体的量可以在0.1-30g抗体干重/日的数量级。在某些应用中，可以利用公式0.05-2.0g抗体干重/千克体重/日计算待施用的抗体的量。利用该公式，可以对婴儿施用0.2-5g抗体干重/日，且可以对成年人施用0.5-15g抗体干重/日。
用于本文时，术语“乳制品”意欲包括来自所有哺乳动物物种的全部乳形式。这些形式包括，但不仅限于：初乳、初乳-来源的制品、乳制品和乳-来源的制品。另外，超免疫乳和超免疫乳-来源的制品也包括在术语“乳制品”中。通常设想牛应该是乳制品的来源。然而，可以使用另外的物种，诸如但不仅限于，绵羊、猪和山羊。
术语“初乳”用于本文时包括初乳(colostral milk)；加工的初乳，诸如加工部分或完全除去脂肪、细胞碎片、乳糖和酪蛋白中一种或数种的初乳；和经过由例如冷冻干燥、喷雾干燥或本领域中已知的其他干燥方法干燥过的初乳或加工的初乳。通常在分娩后5天内从哺乳动物，诸如牛中获取初乳。
用于本文时，术语“蛋制品”意欲包括来自所有禽物种的全部蛋形式。这些形式包括但不仅限于整蛋、蛋黄、蛋或蛋黄来源的制品。通常设想鸡应该是蛋制品的来源，然而还可以使用另外的或备选的物种，诸如但不仅限于鹅和鸭。
本发明意欲包括的引入抗体的其他制品包括，但不仅限于：分馏的和/或浓缩的免疫球蛋白级分；纯抗体级分；特异性抗体级分(例如，通过亲合层析法分离的)；长保存期液体、喷雾或冷冻干燥的粉末；新鲜的乳制品；具有高粘性的营养品例如“啜饮饲料(sip feed)”，以延长在口咽和食道中的接触时间。还设计可以将本发明的抗体引入到容许以活性形式递送抗体到多种预防/治疗位点的药物组合物和制品中，所述位点包括但不仅限于下GI道、眼睛、膀胱、子宫、子宫颈和皮肤。
在第一方面，本发明提供包含抗体的乳制品或蛋制品制造用于预防和/或治疗非传染性医学病症的药物的用途。本发明的这个方面还提供制备用于非-全身性施用的药物或具有有益于预防和/或治疗非传染性医学病症药物的食品的方法，所述方法包括用免疫原性蛋白或肽接种哺乳动物或禽的步骤，从而产生包含抗体的乳制品和或蛋制品。
待接种的哺乳动物可能能够产生商业可用量的乳。因此设计所述哺乳动物选自由牛、绵羊、猪和山羊组成的组。待接种的禽可能能够产生商业可用量的蛋，因此最可能是鸡、鹅或鸭。
接种的步骤涉及向哺乳动物或禽施用免疫原性蛋白或肽，其中所述免疫原性蛋白或肽能够引起针对哺乳动物-来源分子的免疫应答。在本发明的一种形式中，所述哺乳动物-来源的分子可以存在于哺乳动物细胞，诸如癌细胞的表面上。在本发明的其他形式中，所述哺乳动物-来源的分子可以是突变的蛋白质或哺乳动物细胞表面上通常不存在的蛋白质。
为了包含抗体的乳制品或蛋制品疗法的成功，所述乳制品或蛋制品理想地应该包含针对靶分子的高亲和性抗体(免疫球蛋白)，因此生成在接种的哺乳动物或禽中不引起哺乳动物、其后代、或禽疾病条件下，能够引起这类体液响应的抗原是理想的。
哺乳动物或禽的接种涉及施用抗原，所述抗原理想地导致针对靶分子的高亲和性、选择性抗体的产生。可以使用若干程序来产生合适的抗原。在一种方法中，可以使用纯配体来纯化靶分子，这是通过使配体共价附着于合适的层析基质并以此从粗细胞提取物中亲合纯化靶分子而实现的。在另一种方法中，可以利用免疫亲和性纯化法，使用与合适的层析基质共价连接的特异性多克隆抗体，纯化靶分子。在又一种方法中，可以通过重组技术产生靶分子，然后在本领域中的标准程序后纯化。
设计针对癌细胞表面上的分子的抗体可以提供治疗和/或预防癌症的有效疗法，那些细胞是从所述癌症中获得的。
鉴定癌症-特异性、细胞表面分子已经成为试图为不同癌症细胞的细胞表面蛋白质组编辑目录的研究小组的目标。一种鉴定所述分子的方法曾经是生物素化细胞表面，然后利用抗生物素蛋白捕获生物素化的蛋白质。然后对捕获的蛋白质进行鉴定技术，诸如二维聚丙烯酰胺电泳和/或部分测序。
该研究还容许鉴定本发明方法的潜在靶标。显示限制性(restricted)表达模式的分子可以是特别引起注意的，特别是如果它更多地表达在细胞，诸如癌细胞的靶群上。备选地，在肿瘤发生中起作用的分子也是潜在的靶标。
所述潜在靶标分子之一是血管内皮生长因子(VEGF)，其尽管不是细胞表面分子，但是在肿瘤血管发生中起作用。认为血管发生的开始是肿瘤发生的早期事件，并促进肿瘤的发展和转移。记述了若干具有血管发生活性的生长因子。这些包括成纤维细胞生长因子(FGF)、血小板来源的生长因子(PDGF)和VEGF。VEGF是与PDGF结构同源的二聚糖蛋白。记述了若干VEGF的变体，其由备选的mRNA剪接产生。推测VEGF可以在体内起肿瘤血管发生因子的作用，因为VEGF的表达模式与胚胎血管发生中的作用相一致。在一些原发性肿瘤中形成VEGF mRNA，通过肿瘤细胞系体外产生VEGF，且VEGF促有丝分裂的活性似乎局限于内皮细胞。此外，显示出单克隆抗-VEGF抗体减少肿瘤血管发生。
可以为本发明的方法提供有效靶标的其他抗原包括过增殖性细胞表面上存在的分子。例如，认为牛皮癣是自身免疫疾病，其中免疫系统的T细胞识别皮肤中的蛋白质/抗原，并攻击该蛋白质存在的区域，由此导致新皮细胞过快生长和疼痛、凸起、鳞状损伤。这些损伤的特征在于牛皮癣损伤表皮中角化细胞的过增殖和活化的T-细胞的累积。T-细胞针对的皮肤蛋白/抗原可以为本发明的方法提供有效的靶分子。例如，MUC18(也称为Mel-CAM或CD146)证明了一些与牛皮癣以及一些癌症的联系，并由此提供潜在的靶标。类似地，其他过增殖性疾病具有可以在本发明方法中使用的特异性抗原。
一大组潜在的靶分子是蛋白质的Eph受体家族。Eph受体构成受体酪氨酸激酶(RTK)家族的最大亚组。RTK是具有细胞外结构域的跨膜蛋白，并能够通过直接对基因转录起作用或间接对产生第二信使起作用来影响细胞的生长和生存，所述细胞外结构域能够识别来自细胞环境的信号。
本发明人将EphB4确定为关于治疗一定范围癌症的潜在靶标的一个实例，所述癌症是可以局部治疗的，包括一些GI、鼻咽、皮肤、子宫和膀胱癌(见实施例)。在Eph/肝配蛋白组中，还被确定为潜在靶蛋白的是EphB1、EphB2、EfnA1和EfnB2。以下讨论集中于EphB4，然而，所述方法学同样适应于Eph/肝配蛋白家族的其他成员，以及其他细胞-表面分子。
EphB4结合于肝配蛋白-B1和B2，并在介导分化和发育的事件中起作用。其大量表达于胎盘中以及一系列初生组织和恶性细胞系中。EphB4表达于胎儿的(而非成年人)脑中，以及原生的和骨髓的(而非淋巴的)造血细胞中。其出现在若干癌：乳腺癌(在MCF7、MDA-MB-231、SKBR、T47D、BT20和BT474人细胞系中检测到mRNA)、肝癌、胃肠癌、白血病、前列腺癌、肺癌(被下调3倍)、和黑素瘤中。在关于结肠肿瘤中EphB4表达的一项研究中，发现在82％(51/62)的样品中的表达被上调＞1.5倍且在63％(39/62)的样品中的表达被上调＞2倍。它还在卵巢癌中过表达，并在成胶质细胞瘤中被上调(＞5倍)。然而，其他研究显示EphB4的表达在肾癌中被下调2.2倍。另外，一些结肠直肠癌中的低EphB4表达与较短的患者存活时间相关，且存在着关于乳腺癌中可变的EphB4表达的报告。因此，不存在EphB4表达和患者生存癌症发展间的一致联系。
下列实施例中出现的结果第一次显示出当与正常食道组织的表达水平相比较时，EphB4表达在巴雷特食道和相关的食道腺癌中增高。因此，针对EphB4的抗体可以在预防和/或治疗食道病症，诸如巴雷特食道和食道腺癌中存在应用。进一步预期EphB4可以为指示巴雷特食道和/或食道腺癌的发育和/或进展提供标记。因此，本发明提供抗-EphB4抗体在治疗和/或预防食道病症以及在诊断所述病症中的用途。还设计在检测到患者食道中增高的EphB4表达后，可以对该患者施用抗-EphB4抗体，从而预防或减缓病症诸如巴雷特食道和/或食道腺癌的发展。
因此，本发明提供诊断食道病症的方法，所述方法包括提供来自患者的食道细胞样品，并确定EphB4的表达，其中检测到相对于正常食道样品增高的EphB4表达是出现食道病症的指示。在某些实施方案中，食道病症选自由巴雷特食道和食道癌组成的组。设计该诊断方法还包括监测患者中EphB4的表达。例如，所述监测可以涉及重复对患者取样和确定EphB4表达，以作为监测患者疾病出现和/或进展的方法。本发明还提供用于执行这些方法的试剂盒，其包括用于检测EphB4蛋白表达的抗-EphB4抗体和/或用于检测EphB4 mRNA表达的PCR引物。本发明设计的一种所述试剂盒是基于ELISA的试剂盒，其容许定量或定性确定或比较样品中的EphB4蛋白水平。技术人员可以方便地使用不同的免疫学测定来检测EphB4蛋白的表达。许多公司销售能够用于特异性检测食道样品中EphB4的抗体。这些执行确定EphB4水平的方法可以包括，但不仅限于，用于确定EphB4存在或缺乏的Western印迹的免疫组化和密度计量学。技术人员应该意识到并能够使用备选的方法，诸如但不仅限于，ELISA和实时RT-PCR。下文提供的实施例举例说明了PCR检测EphB4表达的应用；技术人员能够方便地利用标准技术制备适合于检测EphB4表达的引物。
正常GI上皮细胞上的EphB4表达非常低，这，外加关于与健康细胞相比来自癌症细胞的EphB4受体构象改变的鉴定，为哺乳动物或禽的安全和有效接种，以及为利用乳或蛋抗体安全和有效预防和/或治疗癌症，增加了机会。健康消化道(gut)上皮细胞通常仅在紧密连接的下方表达EphB4，在该位置处它们对局部施用的抗体而言是不可及的。由于这个原因，对细胞表面分子局部应用的抗体应该比全身性施用的单克隆抗体具有安全得多的特征。
本发明涉及非传染性医学病症。与传染性病症相反，非传染性医学病症通常被固定在患者上或内。由于被固定，所以非传染性医学病症不易受通过经过的试剂(passing agent)的治疗的影响，并且因此比通常包括传染性实体的传染性病症更难治疗，所述传染性实体不必须附着于患者。传染性实体通常是自由的“生命”，诸如细菌或病毒，且容易受到利用例如抗细菌或抗病毒试剂的治疗的影响。本发明涉及在不支持通常由免疫系统提供的全身性因子的条件下，对非传染性医学病症更挑战的预防和/或治疗。
如上所示，为了生成具有高亲和性的乳，即针对靶分子的选择性抗体，应该利用合适的抗原接种哺乳动物。存在若干生成合适纯度和数量抗原的可能方案。以下描述了这些方案的选择。然而，应该注意到这些方案和靶蛋白是示范性的，且技术人员可以了解另外的方案，或根据以下描述的那些的变化。此外，使用EphB4仅作为适用这些方法的分子的实施例。技术人员应该能够对其他潜在的靶分子应用这些方法，等等。
通过与其配体结合的EphB4亲和性纯化需要纯肝配蛋白-B1和/或B2。可以利用标准生物化学蛋白质纯化技术，诸如但不仅限于：离子或阳离子交换层析法和尺寸排除层析法，从合适的细胞纯化天然肝配蛋白B1配体。备选地，可以通过使用抗-肝配蛋白抗体亲合纯化肝配蛋白。一种方法是制备特异性免疫亲合柱，从而纯化肝配蛋白-B1/B2。另一种备选方法是使用重组方法生成大量肝配蛋白-B1/B2。存在实现这种方法的公开程序。该方法的优势是仅需要生成分子的Eph-结合区域。一旦被纯化，可以将肝配蛋白或肝配蛋白片段固定在支持物上，从而允许通过标准程序从细胞溶解产物中亲合纯化EphB4。
一些方法学产生完整的EphB4，其具有分子的细胞外和细胞内部分。然而，只有分子的细胞外部分与作为抗原有关。EphB4分子大小约为120kDa，且分子的细胞外部分约为50kDa。
一种生成大量EphB4的备选方法是使用重组方法。由于具有肝配蛋白，所以仅需要生成分子的细胞外部分。如上所示，存在实现这种方法的公开程序。
用大分子接种哺乳动物或禽可能不是生成具有理想治疗功效的高度特异性抗体的最有效方法。因此，为了确定对接种哺乳动物或禽最合适的抗原，必需使EphB4或其他靶分子片段化，并测试针对这些片段产生的抗体的治疗功效。
例如，若干不溶性蛋白水解酶可以用于全身性降解(水解)EphB4分子(或其细胞外结构域)。示范性酶包括，但不仅限于：胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶。蛋白水解酶水解EphB4产生多种肽，并通过单独和组合地使用酶容许产生重叠的片段。
一种生成针对每种片段抗体的方法是分别纯化每种片段，并用每种片段免疫测试的动物。备选地，可以使用众多片段接种单一动物，并利用单独的肽通过亲合层析法从免疫血清纯化由此产生的抗体，其中合适的抗体结合于它们各自的肽。
设计为了抗原鉴定的这个阶段应该使用标准实验室动物。例如，小鼠或兔可以用于利用EphB4片段生成多克隆抗体。可以使用抗体接种和纯化的标准方案。
可以在体外细胞培养测定中测试由此生成的抗血清，例如，利用人结肠癌细胞系检测针对每种EphB片段的抗体的抗-肿瘤功效。一旦鉴定了抗-肿瘤功效，就能够鉴定与引起该功效的抗体的相关的片段。
可以利用标准程序，诸如但不仅限于重组技术或肽生成和缀合，大量生成具有抗-肿瘤或其他治疗功效的EphB4片段或靶分子的其他肽形成部分。然后可以将这些片段用作免疫原性肽(接种抗原)，从而产生抗-EphB4或其他包含特异性抗体的乳。
设计免疫原性肽，无论针对EphB4或针对其他靶分子，长度应该为至少10个氨基酸残基。在本发明的其他形式中，免疫原性肽的长度可以是至少20，30，40，50，60或100个残基。在本发明其他形式中，免疫原性肽可以是蛋白质的结构域，例如蛋白质的细胞外结构域。在本发明的某些形式中，免疫原性肽的长度、组成和构象可以通过哺乳动物或禽中存在的天然存在蛋白质和待施用包含抗体的乳制品或蛋制品的患者之间的序列同源程度决定。
肽疫苗的成本与传染性疾病使用的病毒或细菌疫苗相比，可能非常低。这可以具有许多超越常规治疗模式和治疗性抗体生成的优势，其包括但不仅限于：
1.局部应用的用包含多克隆抗体的乳制品或蛋制品的局部治疗具有超越全身性应用的单克隆抗体的成本和安全性优势；和
2.本发明利用包含抗体的乳制品或蛋制品克服了被证明的生产非常昂贵的困难。全身性治疗方案中使用的单克隆抗体的生产与生产包含抗体的乳制品或蛋制品相比，非常昂贵。此外，本发明的方法可以使用大量动物中的一种生产乳制品或蛋制品，由此为生成针对任何潜在抗原的高度特异性和活性抗体提供明显更好的机会。
对本发明方法中使用的哺乳动物或禽的选择应该由大量因素决定，所述因素包括包含抗体的乳制品或蛋制品的需要量和可以由所选的免疫原性蛋白或肽产生的免疫应答的水平。产生的免疫应答的水平可以反映免疫原性蛋白或肽和哺乳动物或禽中相应序列的序列同源程度。哺乳动物或禽不太可能启动针对“自体抗原”的免疫应答，因为这将会有效地起始自体免疫疾病。如果发生所述情况，显然将会对所述哺乳动物或禽有害。因此，本发明设计需要使用多种物种，从而确定获得所需免疫应答的物种。
还应该注意到由健康和患病细胞表达的相同靶分子之间可能存在或不存在区别。如果存在区别，则可以使用引入该区别的免疫原性肽，从而产生针对仅存在于患病细胞分子中的非-野生型抗原的免疫应答。如果患病的细胞仅表达比正常细胞更高水平的完全相同的靶抗原，则需要进行仔细的免疫原选择。例如，在一些GI肿瘤中，在癌细胞和健康细胞表达的EphB4之间存在区别。因此，本发明方法中使用的抗体可以针对EphB4肽生成，所述EphB4肽既不以序列也不以结构形式呈现在健康细胞的EphB4中。在仅上调EphB4的情形中，可能需要仔细监测抗体的施用，从而避免潜在危险的副作用。由本发明提供的优势是抗体局部化的施用，且这具有显著降低副作用的量或严重性的潜力，并由此提供比利用单克隆抗体的全身性方法更好的安全性，因为它可能靶向患病细胞出现的区域。
可以通过使用肽合成器合成免疫原性肽。此外，如果需要，可以以取代或添加的方式，将非-经典氨基酸或化学氨基酸类似物引入到多肽序列中。非-经典氨基酸包括，但不仅限于，常见氨基酸的D-异构体、鸟氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、羟脯氨酸、肌氨酸、瓜氨酸、高瓜氨酸、半胱磺酸、叔-丁基甘氨酸、叔-丁基丙氨酸、苯基甘氨酸、环己基丙氨酸、β-丙氨酸。
如果需要，可以使用不同的技术来增加由免疫原性肽产生的获得的免疫应答，从而开发更高的抗体反应性。例如，理想的肽可以与另一种载体蛋白包括但不仅限于卵清蛋白或匙孔血蓝蛋白(KLH)偶联，和/或通过使用佐剂包括，但不仅限于弗氏完全或不完全佐剂。
可以用于本发明方法中的一种示范性免疫原性肽是PVAGSCVVDAVPAPGPSPSLY(SEQ ID NO：4)。这21个氨基酸的序列代表来自癌细胞的人EphB4的细胞外结构域片段。设计可以对EphB4制备更短、更长或不同的免疫原性肽，这些备选项中的一些记述在WO2004024773中。
已发现SEQ ID NO：4中表示的序列与相应的牛序列(PVAGSCVADAMPAPGPSPSLY，SEQ ID NO：5)仅有2处不同。因此，在本发明的一个方面，针对EphB4肽的多克隆抗-Ephb4抗体可以在禽物种中产生，且由此生成的多克隆IgY抗体可以用于非-全身性预防和/或治疗特征为EphB4蛋白上调作用的癌症或病症。一种所述病症是如本文中所述和实施例中所示的巴雷特食道。
以上讨论指出单免疫原性肽可以用于接种哺乳动物或禽。应该注意到可以使用多于一种免疫原性肽。可以同时或连续地施用多于一种免疫原性肽。此外，一种或多种免疫原性肽可以代表相同或不同的分子。如果所述一种或多种免疫原性肽代表相同的分子，则不同的免疫原性肽可以针对一种分子或所述一种分子的变体提供更强的免疫原性响应。如果所述一种或多种免疫原性肽代表不同的分子，则如本文中所述，在使用包含抗体的乳制品或蛋制品预防和/或治疗非传染性医学病症时，其可以提供更广泛的抑制靶细胞生长的方法。
如上所示，还可能在除牛以外的哺乳动物中使用本发明的方法，从而生成包含抗体的乳制品。使用这些其他的哺乳动物可能是需要的，特别是当牛不能针对所需免疫原启动有效的免疫应答时。当牛和待治疗患者之间的免疫原性肽的序列同源性很高时，这可能发生。可以典型地使用这样的其他哺乳动物如绵羊、猪和山羊。由于不意欲使用与正常乳相同规模的包含抗体的乳，所以对于非常大规模生成的要求降低了，因此这些备选的乳来源可能是有用的。这可能是有利的，其原因在于导致增高的免疫应答的异源性和/或患者嗜好和/或生成包含抗体的蛋制品以及或替代包含抗体的乳制品的节约。
可以通过利用多抗原接种单一哺乳动物或禽，或通过混合来自利用针对不同靶分子的抗原接种的哺乳动物或禽的乳和或蛋产生包含针对多于一种特异性分子的抗体的乳和或蛋。
一旦在哺乳动物或禽体内引发了免疫应答，则需要获得尽可能多的包含抗体的乳或蛋。典型地，初乳包含高水平的抗体，然而，随着正常乳生产的开始，抗体水平通常降低。因此，仅收集初乳来获得抗原可能是理想。然而，通过使用不同的接种方法，可能在初乳生产停止后的一段延长的时期内保持乳中相对高的抗体水平。这些方法特别地用于本发明中，从而产生更大量的适合于应用和药物制品的最终产物。
在本发明的某些实施方案中，可以在臀部对哺乳动物，诸如在商业乳牛场上的牛，进行肌肉内接种。设计为了最多的特异性抗体被递送到初乳中，在产子前使哺乳动物接触过抗原，并在整个哺乳期中一直进行加强，从而维持乳中的特异性抗体水平。
在禽(诸如鸡、鹅和鸭)的情形中，可以利用在不同时间提供的加强接种，在任何时间使它们接触抗原，从而在长时期内最大化蛋中的抗体水平。
一旦获得了包含抗体的乳制品或蛋制品，通常，尽管不是总是，需要将该制品加工成适合于施药的形式。抗体不受到任何处理的不利影响是很重要的。这些方法中的一些要求低温，以保持抗体的功能性。此外，保持抗体免于受到待施药的动物或人的蛋白水解作用是理想的。
本文中以下所述的是利用包含抗体的乳制品的示范性实施方案。一种示范性包含抗体的乳制品是牛初乳。牛初乳保留自分娩后最初的4天，更优选地，牛初乳保留自分娩后最初的2天，甚至更优选地，牛初乳保留自分娩后第一天，和最优选地，牛初乳保留自分娩后第一次挤奶。
在本发明具体的实施方案中，可以利用脱脂操作加工包含抗体的乳制品。在其他实施方案中，加工还包括去除细胞碎片的操作。在其他的实施方案中，加工还可以包括去除盐、糖、其他低分子量实体和一些水的操作。
在本发明具体的实施方案中，包含抗体的乳制品包括至少4％总蛋白(重量％)。在其他实施方案中，蛋白质含量可以是至少50％，或至少70％，或至少80％。
还可以测量包含抗体的乳制品中的抗体含量。根据制品的最终用途，IgG占最终配方的百分比可以是从啜饮饲料剂型的约2％到关于亲合纯化的局部剂型的超过90％之间的任意值。
设计如上所述，包含抗体的乳制品包括抗体或其片段，诸如：单克隆或多克隆免疫球蛋白。该制品可以包含嵌合单克隆抗体或人源化单克隆抗体或呈现树状聚体的免疫活性片段或免疫活性片段诸如F(ab)和F(ab)2片段或重组免疫活性片段，或亲合纯化的免疫球蛋白或其免疫活性片段。对于技术人员清楚地是，以上列出的抗体中的一些可以不通过免疫的哺乳动物或禽产生，且可以在向患者施用前，将这样的抗体加入到乳制品或蛋制品中。
设计可以利用本领域中已知的标准方法加工按照本发明产生的包含抗体的蛋。这些方法中的一些要求低温，以保持抗体的功能性。还设计可以通过如亲合层析法的技术从蛋中分离特异性抗体。
可以通过许多方法处理本发明的乳制品或蛋制品，从而去除污染的细菌并延长保存期。所述方法包括，但不仅限于，微量过滤。
可以以一系列的形式诸如，但不仅限于胶囊、粉末片剂、气雾喷雾、糖浆、液体、栓剂、灌肠剂或本领域中已知的其他适合非-全身性施药的形式施用本发明的组合物。所述组合物还可以包括适合于胃肠或其他局部施药的载体或赋形剂。载体和赋形剂的实例包括：二氧化硅、滑石、二氧化钛、氧化铝、淀粉、高岭土、粉末状纤维素、微晶纤维素、支链淀粉N、蔗糖、乳糖、葡萄糖、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、柠檬酸、碳酸氢钠、硬脂酸镁、紫胶、醋酸纤维素、鲸蜡醇、柠檬酸三乙酯、聚乙二醇。
制备营养或药物还可以需要将包含抗体的乳制品或蛋制品配制为可施用的形式。例如含有包含抗体的乳制品或蛋制品的片剂或栓剂可能需要包衣，从而使其在需要时适合于吞咽或插入。所述包衣可以包括保护性材料，从而防止所包含的制品在例如，经过胃的过程中失活，但是容许该制品在患者的肠中释放。所述包衣和保护性材料是本领域中已知的。
利用包含抗体的乳制品或蛋制品制备营养品还可以包括具有另外营养成分的剂型。所述另外的营养成分可以对待治疗的患者具有有益的医学功效。其他成分不受到特别的限制，且包括，例如，氨基酸、维生素、矿物质、益生素、益生菌剂和其他功能性成分。
所述营养品中关于内含物的氨基酸可以选自由包括但不仅限于下列各项组成的组：谷氨酰胺、谷氨酸、色氨酸、丙氨酸、精氨酸、天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、γ-氨基丁酸、牛磺酸、硫代牛磺酸(tiotaurine)、亚牛磺酸。
所述营养品中关于内含物的维生素可以选自由包括但不仅限于下列各项组成的组：维生素A、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12、维生素C、维生素D、维生素E、维生素K、叶酸、烟酸、硫辛酸、泛酸、生物素、泛醌、前列腺素和这些维生素的衍生物。
所述营养品中关于内含物的矿物质可以选自由包括但不仅限于下列各项组成的组：钙、铁、镁、铜、锌、硒和钾。
所述营养品中关于内含物的益生素可以选自由包括但不仅限于下列各项组成的组：果-寡糖(FOS)、半乳糖-寡糖(GOS)、酸寡糖(AOS)和菊粉。
所述营养品中关于内含物的其他功能性物质可以选自由包括但不仅限于下列各项组成的组：小连翘(St.John′s wort，)、草药诸如洋甘菊(Chamomile)、Gymnema/Garcinia、属于中药的植物诸如杜仲(Eucommiaulmoides)和人参(Pnanx ginnseng)或其提取物、动物来源诸如胎盘的提取物、膳食纤维(诸如寡糖和多糖)、大豆肽、饮食甜味剂和咖啡因。
本发明的乳制品或蛋制品可以处于营养组合物的形式。所述组合物可以包含10-60en％脂质、5-50en％蛋白质、15-90en％碳水化合物。以“en％”测量该组合物中各种成分的量，这个单位是“能量百分比”，并且表现出每种组成对制剂总热量值贡献的相对量。某些营养组合物可以包含7.5-12.5en％蛋白质；40-55en％碳水化合物；和35-50en％脂肪。
所述组合物还可以包含至少一种长链多未饱和脂肪酸(LC-PUFA)，其选自由二十碳五烯酸(EPA，n-3)、二十二碳六烯酸(DHA，n-3)和花生四烯酸(AA，n-6)组成的组，因为这些进一步降低呼吸道传染和/或其症状。本组合物还可以包含AA和DHA，和任选地EPA。
所述组合物还可以包含占总脂肪含量至少0.1wt.％、至少0.25wt％、至少0.5wt.％、或至少0.75wt.％的具有20和22个碳原子的LC-PUFA。本组合物中具有20和22个碳原子的LC-PUFA的含量不应该超过总脂肪含量的15wt.％，任选地，所述含量不应该超过总脂肪含量的10wt.％，和任选地，不应该超过总脂肪含量的5wt.％。
所述组合物的EPA含量不应该超过总脂肪的15wt.％，任选地，所述含量不应该超过5wt.％，和任选地，不应该超过1wt.％。然而，EPA含量可以是总脂肪的至少0.05wt％，或至少0.1wt.％。The DHA含量不应该超过10wt.％，任选地，所述含量不应该超过5wt.％，和任选地，不应该超过1wt.％。然而，DHA含量可以是总脂肪的至少0.1wt％。本组合物可以包含基于总脂肪至少0.1wt.％的AA，至少0.25wt.％的AA，或至少0.5wt.％的AA。AA含量不应该超过总脂肪的5wt.％，和任选地，不应该超过1wt.％。
可以使用本领域中已知的适合于通过导管递送到膀胱、通过液滴或药膏递送到眼睛，通过贴剂或口香糖等递送到口/口腔的剂型。
本发明的乳制品或蛋制品还可以用于治疗和/或预防皮肤癌或皮肤的过增殖性病症。在本发明的具体实施方案中，所述乳制品或蛋制品可以包含在适合于向皮肤施用的化妆品和/或药物局部制剂中。
设计按照本发明的化妆品制剂会提供治疗有效剂量，维持抗体稳定性一段时间，且容许抗体与靶分子接触。在制剂加工中需要避免高温，从而保持抗体的功能性。还设计所述化妆品制剂可以处于霜剂、膏剂、滴剂、喷雾剂、贴剂、面具状剂型等的形式。
在第二方面中，本发明提供用于预防和/或治疗患者体内非传染性医学病症的方法，其包括以非-全身性方式向所述患者施用包含抗体的乳制品或蛋制品的步骤。在本发明的一种形式中，所述乳制品或蛋制品包含针对哺乳动物-来源的免疫原性分子的抗体。在本发明的其他形式中，所述哺乳动物-来源的免疫原性分子可以存在于哺乳动物细胞，诸如癌细胞表面上。在本发明的其他形式中，所述哺乳动物-来源的免疫原性分子可以是突变的蛋白质或哺乳动物细胞表面上通常不存在的蛋白质。
设计本发明的方法和制品不仅可以协助治疗GI道(包括口咽)、眼睛、耳朵、鼻咽、膀胱、阴道、子宫、子宫颈和皮肤病症，还可以协助它们的预防。预防会受到这样的事实的协助，所述事实是抗体仅靶向癌细胞上存在的或受到上调的分子，且身体具有对完整抗体全身性进入的屏障。
本发明的方法可以帮助预防在危险群体中的个体中形成癌症。设计在包含抗体的乳制品或蛋制品中的抗体会结合于过表达所述抗体针对的蛋白质或分子的细胞，并随后导致对该细胞生长的抑制。因此，包含抗体的乳制品或蛋制品可以，例如，为处于结肠直肠癌或其他GI癌和病症危险中的人群提供营养支持和预防功效，或者它可以在施用于皮肤或其他器官的癌症-预防化妆品，或用于皮肤、眼睛、口咽、子宫、阴道/子宫颈或膀胱的药物制剂中存在应用。
局部治疗角膜癌可能是向眼睛递送有效治疗的最有效方法，如本申请所设计地，它是免疫学惰性的且不会受到外来蛋白质局部施药的不利影响。
目前对皮肤癌的治疗典型地涉及去除癌症的外科手术。本发明的方法对于去除内部癌症显然比外科手术简单。然而，需要预防皮肤癌形成，即本发明的乳制品或蛋制品可实现的功能。设计引入本发明乳制品或蛋制品的组合物可以被安全地应用于皮肤。所述乳制品或蛋制品中的抗体可以结合于在其表面上表达与皮肤癌相关的分子的细胞。然后该事件导致细胞在发展为癌症前毁灭。所述组合物还可以在外科手术后存在降低皮肤癌复发可能性的应用。
本发明的方法还存在治疗GI癌的应用。在本发明的一种形式中，在包含抗体的乳制品或蛋制品中的抗体会结合于过表达所述抗体针对的蛋白质的细胞，并随后导致对该细胞生长的抑制。这样的作用可以存在作为GI癌治疗法的用途。在本发明的另一种形式中，包含抗体的乳制品或蛋制品的摄取可以被用作补充常规GI癌治疗的另外的治疗。设计包含抗体的乳制品或蛋制品可以增加患者中GI癌好转的可能性和持续时间。因此，本发明的方法可以提高GI癌患者每年的生存率。
目前关于结肠直肠癌的治疗包括附带3-5cm无病边缘的外科手术切除术和血液供给源处肠系膜的切除术，所述血液供给源包括原发性淋巴排流位点。试图治愈疾病需要积极的治疗。通常可以避免结肠造口术，除非癌症在肛门的5cm之内。
在许多患者中，可以单独利用外科手术完成治愈。当在早期检测出癌症时，治愈率高得多。总之，初次切除术治愈大约75％的患者，且在形成复发的25％患者中，这些中的20％通过第二次切除术治愈。
化学疗法对于大多数患者也是标准的。这通常包括手术后1年期的5-氟脲嘧啶(5-FU)和左旋咪唑联合处理，并可以与放射疗法相结合。显示出利用5-FU和左旋咪唑的化学疗法与仅通过外科手术治疗的那些相比，增高患者中的总存活，6.5年后从46％增至60％。
食道癌的存活率通常很低，因为患者经常受到吞咽和/或进食问题的痛苦，这随之可以导致营养不良。在本发明的某些实施方案中，可以将包含抗体的乳制品或蛋制品直接施用于食道癌邻近的GI道内腔。此外，如本文中所讨论地，该制品可以不仅包含针对靶细胞的抗体，还可以包含可以协助减轻一些与营养不良相关的症状的营养成分。
在GI病症的情形中，本发明的方法包括通过GI道内腔向患者施用包含抗体的乳制品或蛋制品的步骤，由此所述乳制品中的抗体与GI道中的癌细胞相接触。抗体的附着可以非常迅速，和持久，因此即使单一剂量的抗体可以对病症具有显著的短期功效。预期持续给药可以对病症具有明显更长期的功效。关于施用包含抗体的乳制品或蛋制品的示范性方法包括，但不仅限于：
-饮用包含抗体的乳制品或蛋制品，以使其通过GI道，由此所述乳制品或蛋制品中的抗体在它们通过时结合它们的靶抗原/分子。设计适合于这种方法的组合物可以包括
1)保护性成分和或
2)伴随的抗酸剂疗法和或
3)随时间啜饮的粘性组合物
其将协助所述乳制品或蛋制品中的抗体幸免于GI道内(特别是食道内)的消化处理，或在GI道中坚持更长时间，从而增长抗体和靶分子之间的接触时间。
-直接将包含抗体的乳制品或蛋制品引入到食道或肠(大肠或小肠)内。这可以通过经由导管将包含抗体的乳制品或蛋制品灌注或泵注到GI道所需的部分，或通过经由泵/管装置直接喷雾到需要治疗的区域来实现。
-为了食道病症的治疗，设计可以使用定位于胃中或附近的气囊来防止包含抗体的乳制品或蛋制品太快地进入胃，任选地，可以使用定位于上食道内的另外的气囊来防止包含抗体的乳制品或蛋制品回流。这样，可以在不需要大量包含抗体的乳制品或蛋制品的条件下，实现对患病的或危险的区域延长的治疗。
-为了治疗结肠病症，可能以灌肠剂的形式或通过结肠冲洗，或以作为栓剂的固体或半固体形式将包含抗体的乳制品直接引入到结肠中。
设计本发明的方法和制品能够降低危险群体中GI癌的发生率，延迟危险群体中GI癌的发作；并增长GI癌患者的好转期，和好转的持续时间。作为这些功效的结果，期待在危险和患者群体中伴随着每年存活率的增高。
关于皮肤病症，所述方法包括将包含抗体的乳制品或蛋制品直接施用于患者皮肤的步骤，由此所述乳制品或蛋制品中的抗体接触靶细胞。
设计将本发明的制品引入到化妆品中还可以协助降低皮肤癌的发生率，或预防皮肤癌。目前，许多化妆品包括防晒剂，以减少阳光对皮肤损伤的可能性。通过引入本发明的制品，化妆品还能够帮助逆转已经对皮肤造成的损伤，并由此预防皮肤癌的形成。
对于其他局部施药(眼睛、耳朵、鼻子、咽喉、阴道、子宫颈、膀胱)，合适药物剂型的直接施药是优选的。
局部治疗角膜癌可能是向眼睛递送有效治疗的最有效方法，如本申请所设计地，它是免疫学惰性的且不会受到外来蛋白质局部施药的不利影响。
在其他方面中，本发明提供从本发明包含抗体的乳制品或蛋制品中分离的抗体。可以利用技术人员已知的标准方法分离所述抗体。这些方法包括，但不仅限于，通过使抗体结合于固定的抗原的亲合纯化，通过亲合层析法进行。
本发明还提供药物组合物，其包括本发明的包含抗体的乳制品或蛋制品和/或本发明的抗体。所述组合物还可以包括不同的生理用成分，所述生理用成分使所述组合物适合于向患者施用。所述不同成分包括，但不仅限于，生理用稀释剂和缓冲剂。如上所讨论地，按照本发明存在不同的施药途径；技术人员能够为那些不同的施药途径配制适合的组合物。
在另一方面，本发明提供可以用于诊断和/或治疗和/或预防患者中非传染性医学病症的试剂盒。所述试剂盒包括本发明的包含抗体的乳制品或蛋制品和/或本发明的抗体和/或本发明的药物组合物。所述试剂盒可以用于诊断和/或治疗和/或预防非传染性医学病症，诸如癌症，诸如胃肠癌或皮肤癌。在本发明的某些形式中，所述试剂盒可以用于诊断和/或治疗和/或预防胃肠癌，所述胃肠癌选自由下列各项组成的组：肛门癌、胆管癌、结肠直肠(结肠和/或直肠)癌、食道癌、胆囊癌、胃癌、肝癌(肝细胞瘤)、胰腺癌和小肠癌。
现将通过参考所附的实施例详细讨论本发明的具体实施方案和应用。该讨论不意欲以任何方式限制本发明的范围。
实施例
实施例1.鉴定细胞表面靶分子
在常规内窥镜检查中以活组织检查或从食管部分切除术后保持的过量组织中收集来自健康捐献者和患有食道腺癌患者的样品。来自患者的对照组织取自正常鳞状上皮的内窥镜检查可视区域，即由肿瘤边缘开始最靠近的2-5cm。立即将组织保存在RNA LaterTM或RNA Later IceTM中。通过组织病理学证实了用于RNA提取相同组织的一小部分是正常鳞状上皮(N)、或巴雷特上皮(Barrett’s epithelium)(肠组织转化，IM)、或腺癌(肿瘤，T)。
利用TrizolTM提取RNA，并利用Superscript IIITM反-转录为cDNA。将cDNA配制为最终体积400μl。将6μl cDNA用在20μl的PCR反应中，所述反应含有1x QuantitectTM Sybr Green实时PCR混合物和正向和反向引物各200nM。PCR反应是在Corbett RotorgeneTM实时PCR仪(型号3000或6000)上进行的。利用β-肌动蛋白标准化基因-特异性PCR信号。相对于结肠腺癌细胞系HT29报告Ephs和肝配蛋白的量，任意地将结肠腺癌细胞系HT29设定为1。
利用非-参数Kruskal-Wallis检验评估数据的统计学显著性。通过Kruskal-Wallis检验进行了多重比较，并随后进行了hoc Bonferroni修正。认为小于0.017的p值是显著的。
该研究中包括11名患有食道腺癌的患者。图1和2说明来自这些患者和来自健康捐献者的组织中Ephs和Efns的相对mRNA水平。以具有细线的方框图表示数据，细线代表数据点的范围。分别的方框图中表示这三种组织学-证实的组织类型(N、IM和T)。所有分析的Ephs和Efns均在正常对比巴雷特组织和正常对比食道腺癌组织之间显示出mRNA水平的显著差别。
通常，与N相比，IM和T中评估的全部两种EphA受体的mRNA水平显著更低，而与N相比，IM和T中检验的全部EphB的mRNA水平均显著更高。与N相比，IM和T中的EfnA1和EfnB2都显著更高。表1中总结了不同组织学组中关于这些基因中每一种的mRNA中值水平的倍数-改变。
表1：相对于N组织，IM和T组织中Ephs和Efns中值mRNA水平的倍数改变。
  mRNA   IM/N   T/N  从N起大约的倍数改变
  EphA1   0.313   0.236   降低3-4x
  EphA2   0.502   0.501   降低2x
  EfnA1   2.041   3.068   升高2-3x
  EphB1   20.326   9.093   升高9-20x
  EphB2   105.000   78.667   升高80-100x
  EphB4   1.929   2.738   升高2-3x
  EfnB2   4.769   2.923   升高3-5x
比较正常组织和IM和T组，EphB2 mRNA水平具有中值mRNA水平的最高上升(80-100倍)，且EphA1具有中值mRNA水平的最大下降(3-4倍)。相对于巴雷特上皮，在食道腺癌中存在趋向于中值EphB2和EfnB2mRNA水平降低的趋势。相反，相对于巴雷特上皮，在食道腺癌中存在趋向于中值EphB4 mRNA水平升高的趋势。如本文中所述，在IM和/或T中表现出增高表达的任何基因可能是产生抗体和指导治疗的潜在靶标。
相对于正常组织，腺癌中EphB4 mRNA水平的显著升高，尽管比EphB2的升高更适中，但是是令人感兴趣的，这归因于升高的EphB4水平和癌细胞生存之间的联系。相对于巴雷特上皮，食道腺癌中EphB4 mRNA趋向增加的趋势可能与转化的攻击性癌症表现型的获得相关。
实施例2.食道细胞系中的EphB4表达
以上实施例1中概述的方法用于检查Het1A和OE33细胞系中的EphB4 mRNA表达。Het1A细胞源自正常食道上皮，且OE33源自食道腺癌上皮。检查了4个Het-1A的培养物和3个OE-33的培养物。图3中显示的结果显示腺癌-来源的细胞系(OE33)中的EphB4表达显著高于基本正常Het1A细胞系。
实施例3.EphB4免疫原制备
可以使用若干程序产生合适的纯EphB4抗原；在一种方法中，纯肝配蛋白B1(或B2)配体通过共价附着(肝配蛋白-B1，B2)于合适的层析基质，用于纯化EphB4受体，并以此从粗(结肠-肿瘤)细胞提取物中亲合纯化EphB4受体。在另一种方法中，利用免疫亲合纯化法，使用与合适层析基质共价连接的特异性多克隆抗-EphB4抗体，纯化EphB4受体。在又一种方法中，遵照公开的程序，通过重组技术生成EphB4。
制造纯肝配蛋白-B1(B2)-配体的可能方法包括利用标准的生物化学蛋白质纯化技术，诸如：离子或阳离子交换层析、尺寸排除层析等从合适的人细胞中分离天然肝配蛋白-B1配体。第二种方法是免疫亲合纯化肝配蛋白-B1配体。在这两种情形中，都能够利用商业生产的多克隆抗-肝配蛋白B1(B2)配体抗血清进行最后的纯化。第三种备选方案是制造重组肝配蛋白-B1配体。这具有能够在短期内产生大量所述分子的优势。另外，仅需要制备所述分子的细胞外(Eph-受体结合)部分。
如上所示，制备EphB4抗原的一个选择是通过利用如上制备的肝配蛋白-B1配体的亲合纯化法从天然来源，诸如从不同类型的结肠癌细胞中分离EphB4抗原。该程序产生完整的EphB4受体，其具有所述分子的细胞外和细胞内部分。
由于只有所述分子的细胞外部分(总120kDa的～50kDa)与作为抗原相关，所以制备EphB4分子的备选方法是利用重组方法仅制备细胞外结构域。重组方法具有允许大规模制备特异性分子的优势。然而，潜在的缺点是翻译后修饰在重组产生的分子中通常不复制。如果所述细胞外结构域中修饰的残基对引起针对EphB4免疫反应是重要的，则纯化的蛋白质可能是更好的方法。
可能利用若干不可溶的蛋白水解酶全身性降解(水解)EphB4-受体。使用的酶包括：胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、和菠萝蛋白酶。蛋白水解酶水解EphB4受体从所述分子的细胞内和细胞外部分产生不同的肽。纯化这些肽，从而生成单独的EphB4肽。由于尺寸排除层析法仅根据尺寸差别分离肽，所以具有相同尺寸的不同肽被洗脱在同一级分中。然而，如果发现这些肽是良好的抗原，则可以通过离子交换(或其他)层析法对它们进行进一步的分离。
通过利用不可溶的蛋白水解酶(胰蛋白酶、胃蛋白酶等)，可以进行有限的EphB4水解。这生成少量大EphB4蛋白片段(20-40kDa)。这些蛋白质片段足够大到在免疫的动物中引起良好的抗体响应。这些大的蛋白质片段还保持区域性蛋白表面拓扑图(三级-结构)。这可以确保产生的抗体会针对天然EphB4蛋白上存在的表位。
实施例4.EphB4抗原识别
需要确定EphB4肽片段中的哪一种，在作为抗原使用时，产生高亲和性EphB4抗体。为了实现该目的，可以利用以上肽免疫若干兔(例如)，并在体外细胞培养测定中，利用人结肠癌细胞系测试由此生成的抗血清。
如上提及地，只有源自EphB4受体细胞外部分的肽片段能够被用作有效的抗原。只有可接近细胞外抗体，以及肝配蛋白配体结合位点的分子的这个部分在所述分子的这个部分上，并阻断它，终止EphB4信号传导。
可以用完整的(未消化的)EphB4-受体免疫兔。来自这些兔的抗血清起“对照-血清”的作用，针对它测试其他抗血清。还可以用EphB4肽片段免疫兔(用包含所有肽片段的混合物免疫该组中的每只动物)。
为了免疫，可以使用除兔以外的动物；例如小鼠、大鼠、豚鼠等。然而，很难对小动物进行免疫和放血，并且能够收集的抗-血清的量非常有限。
尽管可能用单独的肽片段免疫兔，并仅获得特异于每种具体的EphB4肽的抗血清，但是在制备纯片段和每种片段免疫若干动物中涉及大量的工作。利用片段混合物的免疫更高效。大约12周后，可以在体外细胞培养测定中，利用人结肠肿瘤细胞测试粗兔抗血清的功效。这些测定仅需要证明肿瘤细胞生长和增殖中的一些抑制。一旦证明了阳性抗-肿瘤功效，就从超免疫的兔血清中纯化抗-EphB4抗体，并识别最有效的抗体。这是通过为作为抗原使用的每种EphB4肽片段制备小亲合柱而实现的。粗兔血清流过所述柱，合适的抗体结合于它们各自的肽抗原。照这样，从粗兔血清中分离中所有的抗-EphB4(肽片段)抗体。然后，在体外细胞培养测定中，利用人结肠癌细胞系测试(分别地)特异性EphB4肽抗体。这样，可以鉴定是最有效抗原的EphB4肽片段。然后，这些肽可以用作免疫原(接种抗原)，从而产生包含抗-EphB4抗体的乳制品。
尽管可以使用商购的α-EphB4多克隆抗体来鉴定免疫原性EphB4蛋白片段，但是该程序的问题是这种抗体可能不与异常/肿瘤-来源的EphB4受体良好地反应。这些，即癌症/肿瘤-来源的、异常的(突变的)EphB4-受体作为抗原是最重要的。利用商业抗体，可能会忽略生物学显著的抗原。
可以确定这些片段的氨基酸序列，并由此可以建立通过重组方式制造它们的方法。这容许制造无限量的抗原。所述抗原产生有效的高亲和性抗-EphB4抗体。
在本申请的基础上可以在澳大利亚或国外提交将来的专利申请，例如通过要求来自本申请的优先权，通过要求分案的情况和/或通过要求继续的情况。应该理解提供以下权利要求仅是为了举例，且不意欲限制任何所述将来申请中可能要求的范围；也不应该将所述权利要求认为是限制本发明或本公开内容中固有发明的理解(或排除其它理解)。今后可以对举例的权利要求添加或从中去除特征，从而进一步定义发明。
实施例5.肽制造和缀合
可以通过本领域中技术人员已知的标准方法进行本发明方法中使用的肽的合成。有效地，通过自动化过程将氨基酸残基连续地添加到固定的氨基酸中。一旦添加了一个氨基酸，它就会被去-保护，从而使其接受下一个氨基酸残基。保护氨基酸残基，以确保每个反应步骤仅添加单个残基，并且氨基酸残基的侧链不反应。通常可以按照下列过程进行肽的合成：
将载体树脂Fmoc-NH置于自动化合成器的反应容器中。向其中加入DMF，并搅拌3分钟。然后倒出溶液。然后加入30％哌啶-DMF溶液，搅拌该混合物4分钟，倒出溶液，并重复该操作。然后用DMF清洗载体树脂1分钟，倒出溶液，并重复该操作5次。然后，以部分去保护步骤为间隔，连续添加受保护的氨基酸残基，从而容许在正确的位置中并以正确的序列添加残基。
然后，可以从所述树脂中裂解所述肽，并同时去除侧链保护基团。再将该粗产物溶解在水性乙酸溶液中，并再使其流过充满反相硅胶的筒，从而粘附所述肽。随着利用0.1％TFA和15％乙腈水性溶液的清洗和利用0.1％TFA和25％乙腈水性溶液的洗脱，获得包含所述肽的级分。
通常利用末端半胱氨酸残基合成所述肽，所述末端半胱氨酸残基容许所述肽再与KLH缀合，从而提高所述肽的免疫原性。例如，通过将KLH溶解在PBS中制备10mg/ml KLH溶液，并且逐滴加入1/10体积的25mg/mlMBS(N-(m-马来酰亚胺并苯甲酸基)琥珀酰亚胺)，并且然后容许其在搅拌下反应30分钟。下一步，将通过利用在PBS中预平衡的Sephadex G-25柱去除游离的MBS而获得的2.5mg KLH-MB与溶解在0.1M磷酸钠缓冲液(pH 7.0)中1mg所述肽相混合。容许其在搅拌的条件下，在室温下反应3小时。反应后，用PBS透析产物，并可以将其作为免疫原使用。
实施例6.在酸/胃蛋白酶处理过程中维持抗体活性
为了研究牛初乳在胃环境中作为抗体活性保护剂的保护功效，对特异性单克隆抗体测试了模拟的胃液。比较存在和缺乏牛初乳时的活性。
在该实施例中提出病毒-特异性IgG2a单克隆，将其1∶10稀释在磷酸盐缓冲液中。模拟的胃液是0.03M NaCl中的0.32％猪胃蛋白酶溶液，并用HCl将其调节为pH1.2。脱脂、冷冻干燥的牛初乳源自非-免疫的牛，并在水中以300mg/mL重构。
将以1∶10稀释在磷酸盐缓冲液中的抗体等分试样与等体积的重构初乳或水相混合。将初乳制剂和水的混合物用作对照。在测定抗体活性前，在37℃水浴中预加热所述混合物5分钟。
利用模拟胃液处理单克隆抗体引起抗体活性降低6倍。相反，对抗体制剂添加初乳为抗体免受胃蛋白酶和酸的作用提供保护。存在初乳时，受保护的抗体不显示出活性的降低。利用该抗体模型，显示出牛初乳在模拟的胃环境中提供对抗体活性的保护。
实施例7.包含抗体的乳制品的用途
患者表现未知的食道病症。进行食道活组织检查，并确定并发现EphB4表达水平高于周围正常食道组织。结论是该患者患有巴雷特食道。向该患者施用(口服)日剂量的包含针对EphB4的抗体的乳制品。所述乳制品的持续施用具有治疗效果，并减轻患者的巴雷特食道症状。
实施例8.在鸡中产生抗体
鉴定了潜在的靶分子及其表位后，制备足以免疫至多10只成年母鸡的抗原量。肽的量是本领域中技术人员已知的，且可以容易地利用最少的实验得到最优化。
将稀释的抗原混合物注射到每只鸡中，并在6个月的时期内以2周为间隔进行重复的免疫。由第一次免疫后1个月开始从鸡收集蛋。
实施例9.包含抗体的蛋制品的用途
先前显示了利用特异性细菌抗原超免疫的雌性禽产的蛋中的抗体，或其级分，活着进入肠，并保持活性。因此，如实施例5中，如果患者表现出巴雷特食道，则可以向患者施用(口服)日剂量的包含针对EphB4的抗体的蛋制品。所述蛋制品可以处于每日“egg-flip”形式。可以利用喷雾干燥的蛋黄作为成分来制备所述egg-flip。于是，所述蛋制品的持续施用具有治疗功效，并减轻患者的巴雷特食道症状。这样的方案还可以用于治疗和/或预防GI道癌。
本发明在范围方面不会受到本文中所述具体实施方案的限制，所述实施方案意欲作为本发明各个方面单纯的例证，且功能等价方法和成分属于本发明的范围。实际上，除本发明中所示和所述的那些以外，本发明的各种修改，由于前述说明书和附图，应该对本领域中技术人员是显然的。这样的修改意欲属于所附权利要求的范围。

Claims (19)

1.包含抗体的乳制品或蛋制品在制备用于治疗巴雷特食道或食道癌的药物中的应用，其中所述抗体是通过用哺乳动物细胞表面上的分子接种非人哺乳动物或禽以产生含抗体的乳制品或蛋制品而制备的，所述分子选自由EphB1、EphB2、EphB4、EfnA1和EfnB2组成的组。
2.权利要求1的应用，其中所述哺乳动物选自由牛、绵羊、猪和山羊组成的组，且所述禽选自由鸡和鸭组成的组。
3.权利要求1或2的应用，其中所述接种步骤涉及向所述非人哺乳动物或所述禽施用免疫原性蛋白或肽，其中所述免疫原性蛋白或肽能够引起针对哺乳动物-来源的免疫原性分子的免疫应答。
4.权利要求1-2任一项的应用，其中所述分子是EphB4，且所述免疫原性肽是PVAGSCVVDAVPAPG PSPSLY(SEQ ID NO：4)。
5.组合物在制备用于治疗巴雷特食道或食道癌的药物中的应用，其中所述组合物包括权利要求1中定义的包含抗体的乳制品或蛋制品，且其中所述组合物处于食品、专业营养品或药物的形式。
6.按照权利要求5的应用，其中所述组合物包含10-60en％脂质、5-50en％蛋白质和15-90en％碳水化合物。
7.权利要求1的用途，其中将所述药物配制为每日施用0.05克免疫球蛋白/kg体重-2克免疫球蛋白/kg体重。
8.权利要求1或7的用途，其中所述药物包含10-60en％脂质、5-50en％蛋白质和15-90en％碳水化合物。
9.权利要求1或7的用途，其中所述药物是适于非-全身性施用的形式。
10.权利要求9的用途，其中所述包含抗体的乳制品或蛋制品为适于直接引入到受试者的胃肠道中的形式。
11.权利要求10的用途，其中所述包含抗体的乳制品或蛋制品为适于口服施用的形式。
12.权利要求10或11的用途，其中所述包含抗体的乳制品或蛋制品为食品的形式。
13.权利要求9的用途，其中所述包含抗体的乳制品或蛋制品为适于通过直肠施用的形式。
14.以下各项中任意一项或多项：按照权利要求1-4中任一项定义的包含抗体的乳制品或蛋制品，权利要求5或6任一项中定义的组合物在制备用于诊断、治疗患者中非传染性医学病症的试剂盒中的应用，其中所述医学病症是巴雷特食道或食道癌。
15.抗-EphB4抗体在制备用于治疗巴雷特食道和食道癌的药物中的用途。
16.权利要求15的用途，其中所述抗-EphB4抗体是针对由序列PVAGSCVVDAVPAPGPSPSLY(SEQ ID NO：4)组成的肽产生的。
17.权利要求15-16中任一项的用途，其中所述抗体为适于非-全身性方式施用的形式。
18.确定EphB4的表达的试剂在制备用于诊断食道病症的诊断剂中的用途，其中相对于正常食道样品，来自患者的食道细胞样品中增高的EphB4表达是存在食道病症的指示，其中所述食道病症选自由巴雷特食道和食道癌组成的组。
19.用于检测EphB4蛋白表达的抗-EphB4抗体和/或用于检测EphB4mRNA表达的PCR引物在制备用于诊断食道病症的试剂盒中的应用，其中所述食道病症选自由巴雷特食道和食道癌组成的组。
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