CN101616676B - 三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病的应用 - Google Patents

三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN101616676B
CN101616676B CN200780046932.8A CN200780046932A CN101616676B CN 101616676 B CN101616676 B CN 101616676B CN 200780046932 A CN200780046932 A CN 200780046932A CN 101616676 B CN101616676 B CN 101616676B
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
people
medicine
present
leukemia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CN200780046932.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101616676A (zh
Inventor
阿克塞尔·罗尔夫·赞德尔
弗朗西斯·阿玉克·阿玉克堂
沃尔夫冈·里基特
鲁兹·韦伯尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Universitatsklinikum Hamburg Eppendorf
Alphaptose GmbH
Original Assignee
Universitatsklinikum Hamburg Eppendorf
Alphaptose GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=39009616&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN101616676(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Universitatsklinikum Hamburg Eppendorf, Alphaptose GmbH filed Critical Universitatsklinikum Hamburg Eppendorf
Publication of CN101616676A publication Critical patent/CN101616676A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101616676B publication Critical patent/CN101616676B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/661—Phosphorus acids or esters thereof not having P—C bonds, e.g. fosfosal, dichlorvos, malathion or mevinphos
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/513—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. cytosine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A61K31/52—Purines, e.g. adenine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/08—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/09—Esters of phosphoric acids
    • C07F9/091—Esters of phosphoric acids with hydroxyalkyl compounds with further substituents on alkyl

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明涉及三取代的甘油化合物在制备用于治疗恶性血液病的药物中的应用。本发明还涉及包含这种药物的多组分套包(kit-of-parts)。最后，本发明还涉及相应的治疗这种病况的方法以及涉及用于体外测定这种恶性细胞对本文所定义的药物的敏感性的方法。

Description

三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病的应用
本发明涉及三取代的甘油化合物在制备用于治疗恶性血液病的药物中的应用。本发明还涉及包含这种药物的多组分套包(kit-of-parts)。最后，本发明还涉及相应的治疗这种病况的方法以及涉及用于体外测定这种恶性细胞对本文所定义的药物的敏感性的方法。
恶性血液病诸如白血病和淋巴瘤是影响血液、骨髓和淋巴结的癌类型。染色体易位强烈地影响这些疾病的病因学，尽管这在实体瘤中是罕见的。这导致在恶性血液病的诊断和治疗中采用不同的方法(例如，参见，Dewald，G.W.等人，(1995)Semin.Oncol.22，341-354；Grimwade，D.等人，(1998)Blood 92，2322-2333；Jaffe，E.S.等人，(2001)Tumors of hematopoietic and lymphoid tissue.International Agencyfor Research on Cancer，IARC Press，Lyon，France；Grimwade，D.等人，(2004)Ann.Hematol.83，Suppl.1，S45-S48)。
许多罹患弥散性恶性血液病的患者在其患病期间的某些时间点采用化疗(任选地与照射联用)进行治疗。尽管在某些恶性病诸如恶性淋巴病中应答率通常较高，但是只有一部分患者被治愈。在恶性淋巴病中，某些恶性病(例如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、III/IV期滤泡小裂细胞性淋巴瘤，III/IV期缘区淋巴瘤，III/IV期套细胞淋巴瘤和多发性骨髓瘤)目前尚且无标准的剂量化疗方法。
然而，目前的非手术治疗与不利的药物反应有关，其中有一些反应是严重的，这特别是对于越来越多的具有多重病变的老年人口采用化疗方法构成了限制因素。
在治疗这些恶性病中尚待解决的一个问题是这些肿瘤的复发是不可避免的，即使或尽管使用了介入性的治疗方案。因为这些物质的毒性，采用化疗进行长期治疗是不可能的，并且因为反复使用的话答率接近为零，因此反复使用不值得被采纳。射线照射也相对迅速地达到其限度，即使其可用于更有效地治疗原发瘤。因此，现有状况仍旧是在完成第一治疗方案之后有必要“等待”直到疾病再次发生。
目前，用于治疗恶性血液病的化学治疗包括给予一种或多种抗肿瘤药(即，抑制细胞生长的和/或发挥细胞毒性的化疗药物)诸如烷化剂、植物生物碱类、抗代谢药、抗生素、拓扑异构酶I和/或II的抑制剂、酪氨酸激酶的抑制剂、蛋白酶体抑制剂和甾族化合物(例如，参见，Alexanian，R.等人，(1969)JAMA 208，1680-1685；Rai，K.R.等人，(1981)Blood 58，1203-1212；Alexanian，R.等人，(1990)Am.J.Hematol.33，86-89；Bassan，R.等人，1992，Leukemia 6(suppl.2)，186-190；Keating，M.J.(1993)Chemotherapy of chronic lymphocytic leukemia，in：Cheson，B.D.(编)Chronic Lymphocytic Leukemia.Scientific Advances and ClinicalDevelopments.Marcel Dekker，New York，NY，p.297 ff.；Boulard，F.等人，(1993)Cancer Invest.11，534-553；Smith，M.等人，(1996)J.Clin.Oncol.14，18-24；Noordijk E.等人，(1997)Int.J.Radiat.Oncol.Biol.Phys.39，173；Miller，T.P.等人，(1998)N.Eng.J.Med.339，21-26；Drucker，B.J.(2001)N.Engl.J.Med.344，1031-1037；Richardson，P.G.等人，(2002)ASCO Annual Meeting Proceedings，11a)。所有常见的抗肿瘤药毫无疑问进行系统给药，因此它们代表了一类还对它们的生理学靶标发挥非选择性效应的分子。然而，这暗示了这种抗肿瘤药(细胞生长抑制剂)，特别是如果长期施用时，将对人体正常细胞造成有害效果，即，它们的使用与主要影响快速分裂的体细胞的显著的不良副作用有关。常见的副作用特别地包括遗传损害、恶心、呕吐、腹泻、便秘、脱发、免疫抑制、骨髓抑制、贫血、出血、细胞毒性、继发性赘生物等等。
因此，仍然需要显示出更低的不良副作用并保持它们的药理学效力的可供选择的化学治疗，或者仍然需要任何的要与上述抗肿瘤药联合被给予的任何化合物，其中该联用与单独使用相比对恶性细胞产生协同的细胞生长抑制效果和/或细胞毒性效果。这种联用还允许给予更低剂量的抗肿瘤药来实现相同的治疗效力，从而产生严重性较低的不良副作用。
属于合成的醚连接的烷基-溶血磷脂类别的三取代的甘油化合物是用于这种联用的候选化合物。
这种合成的醚连接的烷基-溶血磷脂已知具有抗致癌活性(例如，综述参见Arthur，G.和Bittman，R.(1998)Biochim.Biophys.Acta 1390，85-102；Jendrossek，V.和Handrick，R.(2003)Curr.Med.Chem.Anti-Canc.Agents 3，343-353；Mollinedo，F.等人，(2004)Curr.Med.Chem.11，3163-3184)。1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱(还被称作ET-18-OCH3，AP-121或依地福新)被认为是这些脂类的原型。1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱代表了血小板活化因子(PAF；1-O-烷基-2-乙酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)的合成类似物，所述血小板活化因子是许多白细胞发挥作用(包括血小板聚集、炎症和过敏反应在内)的强力的磷脂活化剂和递质。与大部分常规的化疗药物不同，这些合成的醚-脂类不直接靶向于细胞DNA，而是影响质膜的脂质组成和/或干扰各种信号转导途径。因此，它们的作用方式不依赖于特定细胞受体的存在，或者说，它们是细胞周期依赖性的。
癌的化学治疗的目的通常是减慢癌细胞生长或破坏癌细胞，并同时避免对周围的细胞和组织造成附带性损害。因此，最有效的抗癌药是能够选择性地靶向于癌细胞同时对正常细胞相对无影响的那些。合成的醚-脂类已被显示发挥这种效果(例如，参见，Magistrelli，A.等人，(1995)Drug.Metab.Dispos.23，113-118)。已经提议了醚-脂类对癌细胞的毒性的几种作用机理，包括细胞缺乏烷基裂解酶。作为结果而发生的醚-脂类不能被水解，导致它们在细胞内积聚并随后损伤细胞膜的脂质所结构。醚-脂类的其它可能的作用机理包括影响细胞内蛋白质磷酸化的水平以及破坏细胞脂类代谢。正常细胞典型地具有避免或克服醚-脂类的可能的毒性影响的手段，但是癌细胞却没有。
到现在为止，合成的醚-脂类已被用来治疗不同类型的实体瘤，诸如脑肿瘤或乳癌(mamma carcinomas)(例如，分别参见，德国专利DE 2619686以及国际专利公报WO 99/59599和WO 00/01392)。然而，尽管这些合成的醚-脂类的抗肿瘤活性已经在若干种动物肿瘤模型中用实验方法得以被证实，但是它们的临床应用通常由于系统性细胞毒性效果(包括溶血，特别是在胃肠道中，而且还特别是在肺、肝或肾中)而受到阻碍。
目前，在关于合成的醚-脂类的大部分的临床试验中，所述化合物经口或采用静脉内途径被给予至患者。在这方面，发现脂质体制剂和亲脂性水包油型乳剂各自的静脉内给药与游离化合物相比是有利的，目的是改善治疗效力并同时降低了非特异性的体内毒性(例如，参见Ahmad，I.等人，(1997)Cancer Res.57，1915-1921以及国际专利公报WO 91/09590)。
然而，本领域还已知的是，某些醚磷脂和氨甲酰盐尽管在单次或重复注射时作为PAF或瘤生长的竞争性抑制剂而有利于患者，但是在注射区域带来不利影响。这些不利影响是显然的，诸如红细胞裂解，严重浮肿，炎症和注射部位坏死。这些副作用也被称作“清洁剂(detergent)”效果。当需要重复注射时，这些不利影响是特别不利的，因为它们使得给药部位变得不适合注射并且需要新的给药部位。因为患者的合适的给药部位的数量是有限的，因此非常需要避免所述的与1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱的静脉内给药有关的不利影响。
最近，显示出为了限制系统性副作用，还有可能与液体可饮用的媒介物一起经口给予合成的醚-脂类。在国际专利公报WO 99/59599中，其描述了1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱可与包含至少3％(w/w)的油脂和/或蛋白质的水基媒介物或乳基媒介物一起被给予。试探着推测1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱与蛋白质和/或其它油脂的有效结合“掩蔽”了醚-脂类，从而导致不良副作用降低。
然而，在用这种水基媒介物和/或乳基媒介物进行治疗的患者中，有10-20％的患者被观察到发生显著的胃肠道不相容性(分别相当于WHO的毒性等级III和IV)，与食欲不振、恶心和/或呕吐、腹泻、便秘等等有关(例如，参见Drings，P.等人，(1992)Onkologie 15，375-382)。
因此，仍然需要一种用于治疗恶性血液病并克服上述缺点的药物。特别地，需要一种药物，其允许容易的和方便的给药并提供所需的药物效力而无显著的副作用。
因此，本发明的目的是提供这种用于治疗恶性血液病的药物。
这一目的通过采用具有用于制备相应药物的权利要求1所述的特征的三取代的甘油化合物来实现，该化合物可单独使用或与一种或多种其它药物联用。本发明的一些优选方案由从属权利要求进行限定。
根据本发明，已经发现三取代的甘油化合物诸如1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱不仅适合用作用于选择性治疗恶性血液病的药物而且以协同方式增强恶性细胞的几种已知的化疗药物的细胞生长抑制效果和/或细胞毒性效果。因此，这些协同效果与单独给药相比允许给予更低的药物剂量来实现相同的药物效力，其还降低了观察到系统性不良副作用的风险。
在本发明的背景下，任何所指出的数值典型地与准确度区间相结合，本领域技术人员可理解这仍然确保了正被讨论的特征的技术效果。如本文使用的，与所指出的数值的偏差在±10％、优选在±5％的范围内。
在第一方面，本发明涉及下式(I)的三取代的甘油化合物或其对映体、非对映体或药学可接受的盐在制备用于治疗恶性血液病的药物中的应用，
其中
X选自磷酸化物和硫酸化物；
R1选自C16-C20烷基；
R2选自C1-C3烷基和C1-C3羟基烷基；
R3选自氢和C1-C3烷基；
R4选自C1-C3烷基和C3-C6环烷基；和
R5选自氢和甲基。
本发明的三取代的甘油化合物可以无定形形式或结晶形式被使用。本文使用的术语“无定形”是指其中没有原子位置的长程有序的固体，即，是非结晶材料。在本发明的优选方案中，三取代的甘油化合物以结晶形式存在。
本文使用的术语″Cn烷基″、″Cn羟基烷基″和″Cn环烷基″分别是指具有n个碳原子的烷基、羟基烷基或环烷基。例如，术语″C18烷基″是指具有18个碳原子的烷基。本发明的烷基或羟基烷基可以是直链或支链的。
式(I)的三取代的甘油化合物具有一个或多个不对称中心，因此它们可以对映体或非对映体的形式存在。因此，本发明使用的药物可包括一个或多个分离的单独的异构体(诸如L型和D型)，或者是异构体的混合物，优选是外消旋混合物。
式(I)的三取代的甘油化合物可作为药学可接受的盐形式被包含在药物中。这种盐可包括“中和”氮的正电荷的任何药学可接受的阴离子(例如氯离子、溴离子或碘离子)或“中和”磷酸化物部分或硫酸化物部分的负电荷的药学可接受的阳离子(例如钠或钾的阳离子)。
在本发明的特别优选方案中，药物包含式(I)的三取代的甘油化合物，其中X是磷酸化物，R1是-(CH2)17-CH3，R2是CH3，R3是H，R4是-(CH2)2-和R5是CH3。
本发明的药物可以是具有治疗有效性的任何药物剂型。这种药物剂型的实例特别包括片剂、丸剂、胶囊、悬浮剂、乳剂、注射液或输注液，酊剂、粉剂等等。
本发明使用的药物包含至少一种药学可接受的赋形剂。本文使用的术语“药学可接受的赋形剂”可以是用于制备药物剂型的任何物质，诸如包衣材料、成膜材料、填充剂、崩解剂、释放调节材料、载体材料、稀释剂、粘合剂和其它助剂，所有这些都是本领域公知的(参见下文引述的参考文献)。本发明使用的赋形剂优选包含至少一种填充剂、至少一种粘合剂、至少一种崩解剂、至少一种流动性控制剂和至少一种润滑剂。
药物可借助于任何非肠道途径或肠道途径被给予。非肠道给药方法包括，例如，皮内、皮下、肌肉内或静脉内注射和输注技术。肠道递送方式包括，例如，经口给药或局部给药。另外，该药物可进行局部或系统地给药。
本发明使用的药物优选是固体剂型，特别优选是适于经口给药的药物固体剂型。这些剂型的实例特别包括片剂、丸剂、胶囊、粒剂、小球剂、粉剂、多粒子制剂(例如小珠、小粒或结晶)和糖衣丸。单位剂量的多粒子可被并入到药物固体剂型中，例如借助于压缩或成型为片剂或通过将必要量置于明胶胶囊内进行。
用于经口施用的所有这些固体剂型及其制备方法是本领域公知的(例如，参见，Gennaro，A.L.和Gennaro，A.R.(2000)Remington：TheScience and Practice of Pharmacy，20th Ed.，Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，PA；Ritschel，W.A.&Bauer-Brandl，A.(2002)DieTablette：Handbuch der Entwicklung，Herstellung undEditio-Cantor Verlag，Aulendorf，Germany；Crowder，T.M.等人，(2003)A Guide to Pharmaceutical Particulate Science.Interpharm/CRC，BocaRaton，FL；Stricker，H.(2003)Arzneiformenentwicklung，Springer Verlag，Berlin，Germany；Niazi，S.K.(2004)Handbook of PharmaceuticalManufacturing Formulations，CRC Press，Boca Raton，FL)。
在本发明的优选方案中，药物固体剂型选自片剂、丸剂、胶囊和粒剂，特别优选片剂。
在本发明的另一个优选方案中，固体剂型是肠溶剂型。也就是说，该剂型在pH值≤2.5的胃中，即，在强酸性环境中，保持稳定。这可通过提供包含薄膜包衣的固体剂型来实现。例如，本发明的剂型可以是所谓的薄膜包衣片剂的形式。
薄膜包衣剂型的制备方式是本领域公知的(例如，参见Gennaro，A.L.和Gennaro，A.R.(2000)Remington：The Science and Practice ofPharmacy，20th Ed.，Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，PA；Ritschel，W.A.&Bauer-Brandl，A.(2002)Die Tablette：Handbuch derEntwicklung，Herstellung undEditio-Cantor Verlag，Aulendorf，Germany；Crowder，T.M.等人，(2003)A Guide toPharmaceutical Particulate Science.Interpharm/CRC，Boca Raton，FL；Niazi，S.K.(2004)Handbook of Pharmaceutical ManufacturingFormulations，CRC Press，Boca Raton，FL)。另外，本领域技术人员还知晓如何提供具有特定性质的薄膜包衣，如肠溶包衣，当接触体液时发生溶解的薄膜包衣，受控释放包衣、掩味包衣或崩解包衣。在特别优选方案中，本发明的固体剂型包含肠溶包衣。
根据本发明，可理解的是，三取代的甘油化合物以当被给予至患者时有效实现所需的药理学效果诸如终止肿瘤进展或诱导肿瘤细胞的凋亡作用的任何量存在于该药物中。有效量通常根据例如以下的许多因素进行选择：患者的年龄、尺寸和一般状况以及所治疗的医学病况，并且通过例如以下的许多手段例如剂量范围试验进行确定，所述手段是本领域普通技术人员公知的或者在本发明的教导下可容易地进行实践的。
典型地，在本发明的药物中，式(I)的三取代的甘油化合物的量低于400毫克，优选为30至250毫克，最优选为50至150毫克。根据本发明的特别优选方案，式(I)的三取代的甘油化合物在药物中的量分别在75毫克到100毫克之间。
在药物中的三取代的甘油化合物的被给予至患者的日剂量低于1200毫克，通常低于900毫克，优选为30至600毫克，更优选为40至400毫克，最优选为50至350毫克。在具体的实施方案中，日剂量为75、100、150、200、225和300毫克。三取代的甘油化合物的日剂量优选作为单剂量被给予，诸如以1-4片片剂或1-4粒胶囊的形式被给予。然而，还有可能以多剂量给予该化合物，诸如在一天中以两个或三个单独剂量被给予，例如，在上午、中午和晚上被给予。
本文使用的术语“恶性血液病”(还被称作“血液瘤”)是指任何影响血液、骨髓或淋巴器官的癌类型。恶性血液病特别包括白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合征。
本文使用的术语“白血病”是指任何以血细胞(通常是白血球(即白细胞))异常增殖为特征的任何血液癌或骨髓癌。在本发明的范围内，该术语包括任何急性和慢性形式的白血病以及任何形式的淋巴性白血病或髓性白血病。淋巴性白血病(或淋巴细胞白血病)类型的特征在于淋巴样细胞(即无颗粒白细胞)诸如淋巴细胞和单核细胞受到影响，而当髓细胞(即粒细胞)诸如嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和嗜碱性白细胞受到影响时，该疾病被称为髓性白血病(骨髓性白血病)。在本发明的优选方案中，白血病选自急性髓性白血病(AML)、急性淋巴细胞白血病(ALL)、慢性髓性白血病(CML)和慢性淋巴细胞白血病(CLL)。
本文使用的术语“淋巴瘤”是指起源于淋巴细胞的任何癌形式，也就是说，其包括以疾病自一个淋巴结发生有序弥漫并且存在里-斯二氏细胞的霍奇金淋巴瘤以及任何类型的非霍奇金淋巴瘤。在本发明的优选方案中，恶性血液病选自霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤。
本文使用的术语“多发性骨髓瘤”(还被称作“骨髓瘤”或“浆细胞瘤”)表示浆细胞(即在骨髓中产生抗体的免疫细胞)的一种癌类型。
本文使用的术语“骨髓增生异常综合征”(以前被称作“前白血病”)表示由无效的血细胞生成以及转化为急性髓性白血病的不同风险组合形成的不同的血液学病况集合。通常发生要求长期输血的贫血症。尽管骨髓增生异常综合征不是真正的恶性肿瘤，但还是被分在血液瘤中。
本发明的药物可单独地或与至少一种包含至少一种另外的活性成分的其它药物联用，用于治疗恶性血液病。也就是说，联用也处在本发明的范围内，其中包含三取代的甘油化合物的药物与至少一种包含一种或多种另外的活性成分(即，与权利要求1所定义的三取代的甘油化合物是不同的活性成分)的其它药物一起使用。在本发明的优选方案中，一种或多种另外的活性成分选自抗肿瘤药和/或选自针对血(造血)细胞的细胞表面上的一个或多个表位的抗体。
本文使用的术语“抗肿瘤药”(本文还被称作“细胞生长抑制剂”)是指干扰特别是在恶性细胞(即肿瘤细胞)中的细胞有丝分裂(即有丝分裂)和/或胞质分裂(即细胞分裂)的任何药物，即，其引起所述的一个或多个过程中断、延迟或抑制。本文还包括还具有细胞毒性效果的细胞生长抑制剂，其是通过干扰有丝分裂和/或胞质分裂引起细胞死亡的药物。
可用于本发明的抗肿瘤药(细胞生长抑制剂)的实例特别包括烷化剂、抗代谢药、植物生物碱类、抗生素、拓扑异构酶I和/或II的抑制剂、甾族化合物、酪氨酸激酶的抑制剂、蛋白酶体抑制剂和DNA插入剂。
本文使用的术语“烷化剂”是指能够对存在于细胞分子诸如核酸或蛋白质中的各种带负电荷的基团附加烷基的化合物。通常，这些化合物通过使DNA链中的鸟嘌呤核碱基发生交联而干扰肿瘤的生长和进展。这一修饰阻止DNA解旋和链分离，从而阻止DNA复制。
在本发明的优选方案中，烷化剂选自氮芥类，亚硝基脲类，铂衍生物和烷基磺酸酯类。氮芥类的实例特别包括苯丁酸氮芥(CLL)、环磷酰胺(淋巴瘤)、美法仑(多发性骨髓瘤)和氮芥(霍奇金淋巴瘤)。亚硝基脲类的实例特别是卡莫司汀(淋巴瘤)，铂衍生物的实例特别包括顺铂(淋巴瘤)和卡铂(淋巴瘤，ALL)。烷基磺酸酯类的实例特别包括白消安(CML)和曲奥舒凡(淋巴瘤)。
本文使用的术语“抗代谢药”是指与细胞的生物化学反应所需的物质(代谢物)具有类似结构、然而又足够不同，从而干扰正常细胞功能的化合物。
在本发明的优选方案中，抗代谢药选自甲氨蝶呤(ALL)，嘌呤类似物和嘧啶类似物。嘌呤类似物的实例特别包括氟达拉滨(非霍奇金淋巴瘤，AML)，克罗拉滨(ALL)，喷司他丁(CLL)和克拉屈滨(CLL)。嘧啶类似物的实例特别包括阿糖胞苷(白血病，非霍奇金淋巴瘤)和地西他滨(骨髓增生异常综合征)。
本发明可使用的植物生物碱类(即天然存在的或合成得到的植物胺类)的实例特别包括长春新碱(非霍奇金淋巴瘤，ALL)和长春碱(霍奇金淋巴瘤)。本发明可使用的示例性的抗生素特别包括米托蒽醌(AML)、表柔比星(淋巴瘤)、多柔比星(霍奇金淋巴瘤)、柔红霉素(AML，ALL)和博来霉素(霍奇金淋巴瘤)。拓扑异构酶抑制剂干扰I型和/或II型拓扑异构酶(其是作用于DNA拓扑学的酶)的正常功能。在本发明的范围内，优选拓扑异构酶II抑制剂诸如依托泊苷(淋巴瘤，AML，CML)或替尼泊苷(ALL)。
本发明使用的另外的抗肿瘤药特别包括甾族化合物地塞米松(非霍奇金淋巴瘤)、酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼(CML)、蛋白酶体抑制剂硼替佐米(多发性骨髓瘤)，以及DNA插入剂安吖啶(ALL，AML)和沙利度胺(多发性骨髓瘤)。
在本发明范围内上述抗肿瘤药的各自的主要的医学应用在括号中被指明。然而，这不妨碍这些药物用于治疗任何其它的恶性血液病的应用。另外，还可能使用这些药物中的两种或更多种的组合来治疗任何的恶性血液病。
在本发明的特别优选方案中，抗肿瘤药选自：苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑、氮芥、卡莫司汀、顺铂、卡铂、白消安、曲奥舒凡、甲氨蝶呤、氟达拉滨、克罗拉滨、喷司他丁、克拉屈滨、阿糖胞苷、地西他滨、长春新碱、长春碱、米托蒽醌、表柔比星、多柔比星、柔红霉素、博来霉素、依托泊苷、替尼泊苷、地塞米松、伊马替尼、硼替佐米、安吖啶和沙利度胺。
本发明使用的抗体包括针对血(造血)细胞的细胞表面上的一个或多个表位的单克隆抗体和多克隆抗体。本文使用的术语“血(造血)细胞”是指包括骨髓和淋巴由来的细胞在内的任何造血来源的细胞。本文使用的术语“针对细胞表面上的一个或多个表位”是指这样的事实，即，本发明使用的抗体可识别/结合血细胞的一个或多个细胞表面分子(即表位)。
在本发明的优选方案中，抗体是单克隆抗体，其是针对从B细胞淋巴细胞群(其是起源于一个初始抗体产生细胞的所有副本)产生的特异性抗原的抗体。抗体可以是人抗体或嵌合(人源化)抗体，例如鼠/人嵌合抗体。产生这种“工程”单克隆抗体的方法是本领域公知的(例如，综述参见Coligan，J.E.等人，(2002)Current Protocols inImmunology，Wiley&Sons，Hoboken，NJ)。
本发明可使用的这种单克隆抗体的实例特别包括阿伦单抗(抗-CD52；CLL，淋巴瘤)，利妥西单抗(抗-CD20；CLL，非霍奇金淋巴瘤)，吉妥珠单抗奥唑米星(抗-CD33；AML)。
在第二方面，本发明涉及相应的用于预防和/或治疗恶性血液病的方法，其中该方法包括：
(a)对患者给予本发明所定义的药物或药物组合。
如上所述，本发明的药物或药物组合可借助于任何非肠道途径或肠道途径被给予。在使用药物的组合的情况中，单独的药物可借助于相同的或不同的给药途径被给予。包含三取代的甘油化合物的药物优选经口被给予，特别优选作为固体剂型被给予。另外，药物优选作为单剂量形式诸如片剂或胶囊形式每天被给予。然而，还可能以多剂量给予该药物诸如每天以两个或三个分剂量给予。在使用药物组合(诸如为多组分套包(kit-of-parts)的形式)的情况下，单独的药物(即，包含三取代的甘油化合物的药物和至少一种其它的药物)可同时地、分开地或连续地被给予。例如，可能在餐间给予一种药物，在一个或几个小时后给予另一种药物。
在本发明的优选方案中，该方法还包括：
(b)在给予药物或药物组合前测定待治疗患者的一个或多个恶性细胞中的Fas受体基因表达的程度。
如上所述，细胞死亡受体Fas(又名APO-1或CD95)已被确定为是1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱的细胞靶标(例如，参见，Gajate，C.等人，(2004)J.Exp.Med.200，353-365；Nieto-Miguel，T.等人，(2006)J.Biol.Chem.281，14833-14840)。在本发明的背景下，已经发现过度表达Fas受体的恶性血细胞(即肿瘤细胞)针对使用本发明权利要求书所定义的药物进行的治疗显示出增加的敏感性。
本文使用的术语“表达”或“基因表达”是指将在基因的核酸序列内被编码的信息转化到信使RNA(mRNA)中、然后转化到蛋白质中的整体调节途径。因此，基因的表达包括其转录成为初级核不均RNA，这一核不均RNA经过加工形成成熟RNA，以及将mRNA序列翻译成为相应的蛋白质氨基酸序列。
本文使用的术语“过度表达”是指是非恶性(非肿瘤性)的对照细胞(即野生型细胞)的表达水平的至少100％的表达水平。因此，在本发明的一个实施方案中，该方法还包括将在肿瘤细胞中获得的测量结果与在健康受试者的一个或多个对照细胞中获得的测量结果进行比较。
术语“测定”是指任何检测“基因表达产物”的方法。在本发明的范围内，术语“基因表达产物”不仅是指由该基因编码的蛋白质，而且还指各自的mRNA，其可被认为是在基因表达期间的“第一基因产物”。这些方法包括本领域公知的沿用已久的标准程序(例如，参见，Sambrook，J.等人，(1989)Molecular Cloning：A Laboratory Manual.2nd ed.，Cold Spring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，NY；Ausubel，F.M.等人，(2001)Current Protocols in Molecular Biology.Wiley&Sons，Hoboken，NJ)。这些方法的实例是RT-PCR、核糖核酸酶保护实验、Northern法、Western法、ELISA、放射免疫测定法或荧光滴定法。
例如，mRNA可通过与被标记的核酸探针(DNA或RNA)杂交、然后使用RNA印迹法进行分析或实施核糖核酸酶保护实验而被检测。作为替代，各自的cDNA可从细胞RNA(总RNA或mRNA)通过逆转录被制备并且通过PCR扩增(即RT-PCR)分析特定的核酸物质的不存在或存在。通过使用特异性抗体可方便地检测到蛋白质，所述抗体可以是单克隆抗体或多克隆抗体。为了可视化，抗体可进行标记，或者可使用与适当的标记物缀合的二级抗体，其与特异性的一级抗体相结合。例如通过蛋白质印迹分析或ELISA进行检测。用于实施本发明方法的合适的标记物包括酶标记物、放射性标记物、荧光标记物、发色标记物、发光标记物、毛地黄毒苷、生物素、有机小分子、金属、金属复合物和胶态金。
在另一个优选方案中，该方法还包括：
(c)在给予药物或药物组合前测定待治疗患者的一个或多个恶性细胞中的以下的一项或多项；
(i)一个或多个ras基因突变的存在或缺乏；
(ii)一个或多个FGFR3基因突变的存在或缺乏；和
(iii)一个或多个PTEN基因突变的存在或缺乏。
在一个实施方案中，该方法还包括将在一个或多个恶性细胞中获得的测量结果与在健康受试者的一个或多个对照细胞(即非致癌性细胞)中获得的测量结果进行比较。
本文使用的术语“ras基因突变”是指ras基因家族成员即H-ras、K-ras和N-ras基因，特别是人ras基因的任何遗传变异(参见，Land，H.等人，(1983)Science 222，771-778)。本发明的遗传变异包括各自的DNA序列的一个或多个核苷酸的附加、删除和置换。这些一个或多个突变优选引起各自的相应的Ras蛋白质的氨基酸序列的改变，其还包括形成截短蛋白质变体或延伸蛋白质变体。这些突变还可影响蛋白质功能。例如，它们可引起Ras蛋白质的(构成)活化或者可产生显性阴性Ras变体。这些ras基因突变的实例特别包括影响人N-ras的密码子12、13和61以及人K-ras的密码子12和71的突变(参见下文引述的参考文献)。
在本发明的优选方案中，一个或多个基因突变引起相应的Ras蛋白质的活化(即，Ras蛋白质活性的增加)。这种ras基因突变的特别优选的实例特别包括在人N-ras的密码子61处的突变，包括CAA→CGA和CAA→CAC，以及在人K-ras的密码子12处的突变，包括GGT→GCT和GGT→GAT(例如，参见，Bos，J.L.等人，(1984)Nucl.Acids Res.12，9155-9163；Pilz，R.B.等人，(1997)Cell Growth Diff.8，53-59；Delgado，M.D.等人，(2000)Oncogene 19，783-790；Chesi，M.等人，(2001)Blood 97，729-736)。
本文使用的术语“FGFR3基因突变”是指成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)基因的任何遗传变异，特别是人FGFR3基因的任何遗传变异(Ornitz，D.M.和Itoh，N.(2001)Genome Biol.2，综述3005.1-3005.12)。本发明的遗传变异包括各自的DNA序列的一个或多个核苷酸的附加、删除和置换。这些一个或多个突变优选引起各自的相应的FGFR3蛋白质的氨基酸序列的改变，其还包括形成截短蛋白质变体或延伸蛋白质变体。这些突变还可影响蛋白质功能。例如，它们可引起FGFR3蛋白质的(构成)活化或可产生显性阴性FGFR3变体。这些FGFR3基因突变的实例特别包括影响人FGFR3的密码子373、384和650的突变以及人FGFR3终止密码子的删除(参见下文引述的参考文献)。
在本发明的优选方案中，一个或多个FGFR3基因突变引起相应的FGFR3蛋白质的活化(即，FGFR3蛋白质活性的增加)。这些FGFR3基因突变的特别优选的实例特别包括人FGFR3在密码子373处的突变，包括TAT→TGT，在密码子650处的突变，包括AAG→GAG，和人FGFR3终止密码子的删除(例如，参见，Chesi，M.等人，(1997)Nat.Genet.16，260-264；Chesi，M.等人，(2001)Blood 97，729-736)。
在特别优选方案中，一个或多个FGFR3基因突变的存在或缺乏在伴随存在t(4；14)染色体易位的条件下进行测定。也就是说，在携带所述染色体易位的一个或多个恶性细胞(诸如造血细胞)中分析FGFR3基因的序列。
本文使用的术语“t(4；14)染色体易位”是指在人的染色体14上的核型非活动的基因易位，即，由非同源梁色体之间进行部分互换引起的异常染色体重排，其特别是指t(4；14)(p16；q32)易位，其导致成纤维细胞生长因子受体3基因(FGFR3基因)的失调性表达(例如，参见Richelda，R.等人，(1997)Blood 90，4062-4070；Chesi，M.等人，(2001)Blood 97，729-736)。
在待分析的一个或多个恶性细胞中t(4；14)染色体易位的存在可特别地通过经典的Southern法来测定(例如，参见，Sambrook，J.等人，(1989)，同上；Ausubel，F.M.等人，(2001)，同上)，或者通过原位杂交技术、优选荧光原位杂交技术(FISH)来测定(例如，综述参见van derPloeg，M.(2000)Eur.J.Histochem.44，7-42；Levsky，J.M.和Singer，R.H.(2003)J.Cell Sci.116，2833-2838)。
本文使用的术语“PTEN基因突变”是指PTEN肿瘤抑制基因的任何遗传变异、特别是人PTEN基因的任何遗传变异(例如，参见，Sakai，A.等人，(1998)Blood 92，3410-3415；Wu，H.等人，(2003)Oncogene 22，3113-3122)。本发明的遗传变异包括各自的DNA序列的一个或多个核苷酸的附加、删除和置换。这些一个或多个突变优选引起各自的相应的PTEN蛋白质的氨基酸序列的改变，其还包括形成截短蛋白质变体或延伸蛋白质变体。这些突变还可影响蛋白质功能。例如，它们可引起PTEN蛋白质的(构成)活化或可产生显性阴性PTEN变体。
本发明的待测定的PTEN基因突变的优选实例特别包括人PTEN基因的外显子2-5的删除，分别在人PTEN基因序列的密码子234处的2bp(碱基对)删除和9bp插入，和在人PTEN基因序列的密码子246处的39bp插入。
ras、FGFR3和PTEN基因的各自的突变通过沿用已久的标准实验室方法来测定，通常通过聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶酶切分析和/或DNA序列分析来测定(例如，参见，Sambrook，J.等人，(1989)，同上；Ausubel，F.M.等人，(2001)，同上)。
分别地不测定ras、FGFR3和/或PTEN基因的一个或多个突变的缺乏或存在，或者除了测定ras、FGFR3和/或PTEN基因的一个或多个突变的缺乏或存在之外，其全部影响MAPK/ERK-和/或PI3K/AKT-信号转导(例如，综述参见Johnson，G.L.和Lapadat，R.(2002)Science 298，1911-1913；Lee，J.T和McCubrey，J.A.(2002)Leukemia 16，486-507；Platanias，L.C.(2003)Blood 101，4667-4679；Meier，F.等人，(2005)Front.Biosci.10，2986-3001；Martelli，A.M.等人，(2006)Leukemia 20，911-928)，在本发明的范围内还有可能测定各自的信号转导途径“本身”的“活性状态”(即活化与否)。例如，MAPK/ERK途径的活化可通过本领域公知的免疫化学方法诸如Western法、免疫沉淀法和ELISA测量ERK-1/2的磷酸化进行测定，优选采用由多个供应商提供的市售的磷酸化特异性的抗-ERK-1/2抗体(关于免疫学方法的综述，例如，参见，Coico，R.等人，(2006)Current Protocols in Immunology.Wiley&Sons，Hoboken，NJ)。
在第三方面，本发明涉及体外测定一个或多个恶性细胞对本发明所定义的药物或药物组合的敏感性的方法，该方法包括：
(a)测定在一个或多个恶性细胞中的Fas受体基因表达的程度。
在本发明的优选方案中，该方法还包括：
(b)测定在一个或多个恶性细胞中的以下的一项或多项：
(i)一个或多个ras基因突变的存在或缺乏；
(ii)一个或多个FGFR3基因突变的存在或缺乏；和
(iii)一个或多个PTEN基因突变的存在或缺乏。
在本发明的优选方案中，一个或多个FGFR3基因突变的存在或缺乏在伴随存在t(4；14)染色体易位的条件下进行测定。
任选地，该方法还包括：
(c)将在(a)和/或(b)中获得的测量结果与在一个或多个对照细胞中获得的测量结果进行比较。
在第四方面，本发明涉及本文定义的三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病。在优选方案中，恶性血液病选自白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤和骨髓增生异常综合征。
在第五方面，本发明涉及包含药物的多组分套包用于治疗恶性血液病，该药物包含本发明定义的三取代的甘油化合物。
在优选方案中，多组分套包还包含另外的药物，该药物包含一种或多种另外的活性成分。该一种或多种另外的活性成分特别优选选自抗肿瘤药或选自抗体，其中所述抗体如上所述针对血细胞的细胞表面上的一个或多个表位。
套包的各部分(组分)(即单独的药物或活性成分)可在联合治疗(方案)中被同时地、分开地或者连续地给予(例如，参见，Sambrook，J.等人，(1989)，同上；Ausubel，F.M.等人，(2001)，同上)。
本发明进一步通过以下附图和实施例进行描述，所述附图和实施例仅仅用于说明本发明的具体实施方案的目的，并且决不被认为以任何方式限制本发明的范围。
在以下的试验中使用的材料是市售的或者可由本领域技术人员从市售材料容易地制备得到。
附图说明
图1描述了ET-18-OCH3(1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱)对各种肿瘤细胞系的细胞毒性效果。使用以下的细胞系：KMS-12-BM、K562、RPMI8226、OPM-2、NCI-H929、U266和HL60。将细胞在96孔组织培养皿中在200μl体积下生长至1×106个细胞/毫升的浓度。然后，细胞分别与5μg/ml、10μg/ml和20μg/mlET-18-OCH3(最终浓度)进行培养。通过用7-氨基-放线菌素D(最终浓度200μg/ml)对细胞进行染色并如所述那样通过流式细胞光度术进行分析来评价细胞死亡(例如，参见，Schmid，I.等人，(1994)J.Immunol.Meth.170，145-157；Ayuk，F.A.等人，(2005)Exp.Hematol.33，1531-1536)。
图2描述了ET-18-OCH3单用或与硼替佐米(26S蛋白酶体的抑制剂)联用对Jurkat细胞的细胞毒性效果。如图1所述进行细胞培养。以2.5或5.0μg/ml(分别为“E2.5”和“E5”)的最终浓度加入单独的或与5或10ng/ml硼替佐米(分别为“Vel5”和“Vel10”)联用的ET-18-OCH3，将细胞培养20小时，如图1所述来评价细胞死亡。结果用三次独立实验的平均±SEM表示。
图3描述了ET-18-OCH3单用或与硼替佐米联用对HL60细胞的细胞毒性效果。细胞培养、化合物浓度和试验条件如图2所述。结果用四次独立实验的平均±SEM表示。
图4描述了ET-18-OCH3单用或与硼替佐米联用对RPMI8226的细胞毒性效果。细胞培养、化合物浓度和实验条件如图2所述。结果用三次独立实验的平均±SEM表示。
图5描述了ET-18-OCH3单用或与氟达拉滨(嘌呤类似物)联用对Jurkat细胞的细胞毒性效果。如图1所述进行细胞培养。以2.5或5.0μg/ml(分别为“E2.5”和“E5”)的最终浓度加入单独的或与10或50μM氟达拉滨(分别为“Flu10”和“Flu50”)联用的ET-18-OCH3，将细胞培养20小时，如图1所述来评价细胞死亡。结果用三次独立实验的平均±SEM表示。
图6描述了ET-18-OCH3单用或与氟达拉滨联用对HL60细胞的细胞毒性效果。细胞培养、化合物浓度和实验条件如图5所述。结果用四次独立实验的平均±SEM表示。
图7描述了ET-18-OCH3单用或与阿糖胞苷(嘧啶类似物)联用对Jurkat细胞的细胞毒性效果。如图1所述进行细胞培养。以2.5或5.0μg/ml(分别为“E2.5”和“E5”)的最终浓度加入单独的或与10或40μM阿糖胞苷(分别为“Ara-C10”和“Ara-C40”)联用的ET-18-OCH3，将细胞培养20小时，如图1所述来评价细胞死亡。结果用三次独立实验的平均±SEM表示。
图8描述了ET-18-OCH3单用或与阿糖胞苷联用对HL60细胞的细胞毒性效果。细胞培养、化合物浓度和实验条件如图7所述。结果用四次独立实验的平均±SEM表示。
图9描述了ET-18-OCH3单用或与依托泊苷(拓扑异构酶II抑制剂)联用对Jurkat细胞的细胞毒性效果。如图1所述进行细胞培养。如图1所述进行细胞培养。以2.5或5.0μg/ml(分别为“E2.5”和“E5”)的最终浓度加入单独的或与1.0、2.5或5.0μM依托泊苷(分别为“Eto1”、“Eto2.5”和“Eto5”)联用的ET-18-OCH3，将细胞培养20小时，如图1所述来评价细胞死亡。结果用三次独立实验的平均±SEM表示。
图10描述了ET-18-OCH3单用或与依托泊苷联用对HL60细胞的细胞毒性效果。细胞培养、化合物浓度和实验条件如图9所述。结果用四次独立实验的平均±SEM表示。
实施例
实施例1：测定1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱对各种人 血液学肿瘤细胞系的细胞毒性效果
使用以下的人细胞系：
1.KMS-12-BM(DMSZ no.ACC 551)；骨髓细胞；骨髓瘤/浆细胞瘤；无本文定义的基因改变；Chesi，M.等人，(2001)，同上。
2.K562(ATCC no.CCL-243)；骨髓细胞；CML；无本文定义的基因改变；Delgado，M.D.等人，(2001)，同上。
3.RPMI8226(ATCC no.CLL-155)；周围血液细胞；骨髓瘤/浆细胞瘤；K12-G＞A K-ras基因突变(GGT→GCT，在密码子12处)；Chesi，M.等人，(2001)，同上。
4.OPM-2(ATCC no.CRL-13007)；淋巴母细胞细胞；骨髓瘤；t(4；14)染色体易位；K650E FGFR3基因突变(AAG→GAG，在密码子650处)；Chesi，M.等人，(2001)，同上。
5.NCI-H929(ATCC no.CRL-9068)；骨髓细胞；骨髓瘤/浆细胞瘤；t(4；14)染色体易位；N13-G＞D N-ras基因突变(GGT→GAT，在密码子13处)；Chesi，M.等人，(2001)，同上。
6.U266(ATCC no.TIB-196)；周围血液细胞；骨髓瘤/浆细胞瘤；无本文定义的基因改变；Chesi，M.等人，(2001)，同上。
7.HL60(ATCC no.CCL-240)；周围血液细胞；AML；N61-Q＞RN-ras基因突变(CAA→CGA，在密码子61处)；Bos，J.L.等人，(1984)，同上。
8.Jurkat(ATCC no.TIB-152)；周围血液细胞；ALL；在PTEN基因的外显子7内的密码子234处的2bp删除和9bp插入(产生下游终止密码子)；Sakai，A.等人，(1998)，同上。
将细胞在96孔组织培养皿中在200μl体积下生长至1×106个细胞/毫升的浓度。然后，细胞与最终浓度分别为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml的1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱(ET-18-OCH3)进行培养20小时。通过用7-氨基-放线菌素D(Calbiochem，Darmstadt，Germany；最终浓度200μg/ml)对细胞进行染色并采用FACS-Scan流式细胞仪(BD Biosciences，San Jose，California，USA)的流式细胞术如所述的那样(例如，参见，Schmid，I.等人，(1994)J.Immunol.Meth.170，145-157；Ayuk，F.A.等人，(2005)Exp.Hematol.33，1531-1536)进行分析来评价细胞死亡。
在典型的实验中获得的结果在图1中概括。除了U266细胞(其显然对ET-18-OCH3根本不应答)之外，当暴露于ET-18-OCH3下时，所有细胞系显示剂量依赖性效果。施加20μg/ml的ET-18-OCH3导致分别在RPMI8226、NCI-H929和HL60细胞中产生几乎完全的细胞死亡。在OPM-2细胞中，约75％的细胞当暴露于20μg/ml的ET-18-OCH3下时死亡。有趣地是，在不携带本文定义的基因改变(即，分别是t(4；14)染色体易位、ras、FGFR3和PTEN基因突变)的那些细胞系中，即，在KMS-12-BM、K562和U266中，细胞毒性被显著地降低或甚至几乎被消除。这些结果证明了一个或多个上述基因改变的存在是所给定细胞对使用ET-18-OCH3进行治疗的敏感性的强指标。
实施例2：测定1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱与不同的 抗肿瘤药联用对各种细胞系的细胞毒性效果。
使用以下的细胞生长抑制剂：硼替佐米(Janssen Cilag，Neuss，Germany)，一种26S蛋白酶体的抑制剂，其通常被用来治疗多发性骨髓瘤；氟达拉滨(Sigma，St.Louis，USA)，一种嘌呤类似物，主要被用来治疗AML和CLL；阿糖胞苷(还被称作“胞嘧啶阿拉伯糖苷”或“Ara-C”；Sigma，St.Louis，USA)，一种嘧啶类似物，主要被用来治疗AML和非霍奇金淋巴瘤；和依托泊苷(Sigma，St.Louis，USA)，一种拓扑异构酶II的抑制剂，其通常被用来治疗淋巴瘤。
将细胞再次在96孔组织培养皿中在200μl体积下生长至1×106个细胞/毫升的浓度。然后，细胞与各药物培养20小时。分别使用以下的浓度(通常，当被单独给予时所用浓度产生低于50％的细胞毒性)：2.5μg/ml和5.0μg/ml的1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱(ET-18-OCH3)；5ng/ml和10ng/ml的硼替佐米；10μM和50μM的氟达拉滨；10μM和40μM的阿糖胞苷；和1μM、2.5μM和10μM的依托泊苷。在Jurkat细胞、HL60细胞和RPMI8226细胞中测定了ET-18-OCH3与硼替佐米联用的细胞毒性效果，而在Jurkat细胞和HL60细胞中测定了ET-18-OCH3分别与阿糖胞苷、氟达拉滨和依托泊苷联用的细胞毒性效果。如实施例1所述评价细胞死亡。
所得结果总结在表1-4中(数据表示3次独立实验(Jurkat细胞和RPMI8226细胞)或4次独立实验(HL60细胞)的平均±SEM)。
表1：ET-18-OCH3与硼替佐米联用的效果
  细胞系   ET-18-OCH3   硼替佐米   细胞毒性(％)
  Jurkat   2.5μg/ml   2.1±1.0
  5.0μg/ml   13.1±5.3
  5ng/ml   0.4±0.5
  10ng/ml   3.6±1.4
  2.5μg/ml   5ng/ml   11.7±6.1
  2.5μg/ml   10ng/ml   18.3±3.4
  5.0μg/ml   5ng/ml   24.1±10.0
  5.0μg/ml   10ng/ml   37.5±7.4
  HL60   2.5μg/ml   11.3±7.3
5.0μg/ml 35.0±15.9
  5ng/ml   2.7±1.9
  20ng/ml   10.9±3.7
  2.5μg/ml   5ng/ml   26.3±11.0
  2.5μg/ml   10ng/ml   52.5±9.2
  5.0μg/ml   5ng/ml   53.6±16.7
  5.0μg/ml   10ng/ml   69.1±10.4
  RPMI8226   2.5μg/ml   11.2±8.1
  5.0μg/ml   34.7±13.2
  5ng/ml   7.3±4.5
  10ng/ml   25.1±4.0
  2.5μg/ml   5ng/ml   29.7±8.3
  2.5μg/ml   10ng/ml   44.4±13.9
  5.0μg/ml   5ng/ml   53.6±16.7
  5.0μg/ml   10ng/ml   69.1±10.4
表2：ET-28-OCH3与氟达拉滨联用的效果
  细胞系   ET-18-OCH3   氟达拉滨   细胞毒性(％)
  Jurkat   2.5μg/ml   2.1±1.0
  5.0μg/ml   13.1±5.3
  10μM   2.4±0.9
  50μM   6.2±2.4
  2.5μg/ml   10μM   5.1±2.6
  2.5μg/ml   50μM   18.0±5.0
  5.0μg/ml   10μM   25.1±3.9
  5.0μg/ml   50μM   36.1±9.9
  HL60   2.5μg/ml   11.3±7.3
  5.0μg/ml   35.0±15.9
  10μM   13.8±9.4
  50μM   37.2±4.6
  2.5μg/ml   10μM   54.5±8.2
  2.5μg/ml   50μM   81.0±7.3
  5.0μg/ml   10μM   62.3±15.6
  5.0μg/ml   50μM   84.9±7.5
表3：ET-38-OCH3与阿糖胞苷联用的效果
  细胞系   ET-18-OCH3   阿糖胞苷   细胞毒性(％)
  Jurkat   2.5μg/ml   2.1±1.0
  5.0μg/ml   13.1±5.3
  10μM   11.1±0.5
  40μM   12.4±1.2
  2.5μg/ml   10μM   22.7±6.5
  2.5μg/ml   40μM   20.5±5.5
  5.0μg/ml   10μM   39.5±7.0
  5.0μg/ml   40μM   40.5±11.1
  HL60   2.5μg/ml   11.3±7.3
  5.0μg/ml   35.0±15.9
  10μM   24.0±2.8
  40μM   26.9±5.0
  2.5μg/ml   10μM   66.2±12.3
  2.5μg/ml   40μM   70.8±15.5
  5.0μg/ml   10μM   85.0±9.2
  5.0μg/ml   40μM   82.0±9.6
表4：ET-48-OCH4与依托泊苷联用的效果
  细胞系   ET-18-OCH3   依托泊苷   细胞毒性(％)
  Jurkat   2.5μg/ml   2.1±1.0
  5.0μg/ml   13.1±5.3
  1.0μM   5.9±1.1
  2.5μM   10.0±0.8
  5.0μM   16.8±8.4
  2.5μg/ml   1.0μM   10.1±2.3
  2.5μg/ml   2.5μM   20.8±3.3
  2.5μg/ml   5.0μM   26.0±6.6
  5.0μg/ml   1.0μM   33.4±11.0
  5.0μg/ml   2.5μM   40.3±13.2
  5.0μg/ml   5.0μM   37.6±8.5
  HL60   2.5μg/ml   11.3±7.3
  5.0μg/ml   35.0±15.9
  1.0μM   4.1±0.7
  2.5μM   10.7±5.4
  5.0μM   23.3±8.2
2.5μg/ml 1.0μM 22.0±11.4
  2.5μg/ml   2.5μM   58.0±18.3
2.5μg/ml 5.0μM 74.1±15.3
  5.0μg/ml   1.0μM   59.2±19.8
  5.0μg/ml   2.5μM   81.1±8.2
  5.0μg/ml   5.0μM   85.6±7.7
从上述结果可知，1-O-十八烷基-2-O-甲基-甘油-3-磷酸胆碱(ET-18-OCH3)与供试的任何抗肿瘤药联用导致在所用的任一细胞系中引起改善的细胞毒性效果。重要地是，活性成分的不同组合不仅以加合方式起作用，而且以协同方式起作用。因此，这些协同作用方式与单独给药相比允许给予更低的药物剂量来实现相同的药物效力，其还降低了不良副作用发生的风险。
在本文中示例性描述的本发明可适当地在缺乏本文所具体公开的任何一个或多个元素、一个或多个限制条件下合适地实施。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应作以可扩展地和非限制性的理解。
另外，本文使用的术语和表述用作说明性术语并且是非限制性的，在使用这些术语和表述时并无意排除所显示的和描述的特征或其部分的任何等价物，但是还承认可在要求保护的本发明的范围内进行各种可能的修改。因此，可以理解的是，尽管已经通过优选方案和任选特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可对本文所公开的具体实施方案进行修改和改变，并且这些修改和改变被认为处在本发明的范围内。
本文所引述和参考的所有文献，包括用于本文所提及的任何产品或位于本文所述任何文献中的任何生产商的指导、说明书、产品规格和产品图纸，作为参考被并入本文，并且可用于实践本发明。本申请中对任何文献的引述或确认并非是对该文献作为本发明的现有技术可被获得的一种承认。
本文中已将广泛地和一般性地描述了本发明。落在一般公开内的具有较窄范围的类和亚类各自也构成了本发明的一部分。其包括本发明的一般性描述，以及从该类别中除去任何主题的条件或消极限制条件，而与本文中是否明确阐述了被排除的材料无关。
其它实施方案处于权利要求书的范围内。另外，当本发明的特征或方面用马库什(Markush)型进行描述时，本领域技术人员承认本发明也因此以马库什型中成员的任何独立成员或亚组进行描述。

Claims (7)

1.式(I)的三取代的甘油化合物
或其对映体或非对映体或药学可接受的盐与一种或多种另外的活性成分的组合以及至少一种药学可接受的赋形剂在制备用于治疗白血病和/或骨髓瘤的用于经口给药的药物固体剂型中的应用，其中：X是磷酸化物，R1是-(CH2)17-CH3，R2是CH3，R3是H，R4是-(CH2)2-，和R5是CH3；所述一种或多种另外的活性成分选自硼替佐米、氟达拉滨、阿糖胞苷和依托泊苷。
2.权利要求1的应用，其中药物固体剂型选自片剂、丸剂、胶囊和粒剂。
3.权利要求1至2中任一项的应用，其中药物固体剂型是肠溶剂型。
4.权利要求1至2中任一项的应用，其中白血病选自急性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓性白血病和慢性淋巴细胞白血病。
5.测定一个或多个恶性细胞对权利要求1至4中任一项的药物组合的敏感性的体外方法，该方法包括：
(a)测定在一个或多个恶性细胞中的Fas受体基因表达的程度；
(b)测定在一个或多个恶性细胞中的以下的一项或多项：
(i)一个或多个ras基因突变的存在或缺乏；
(ii)一个或多个FGFR3基因突变的存在或缺乏；和
(iii)一个或多个PTEN基因突变的存在或缺乏；其中一个或多个FGFR3基因突变的存在或缺乏在伴随存在t(4；14)染色体易位的条件下进行测定。
6.权利要求5的体外方法，还包括：
(c)将在(a)和/或(b)中获得的测量结果与在一个或多个对照细胞中获得的测量结果进行比较。
7.多组分套包，其包含权利要求1至4中任一项的药物的组合。
CN200780046932.8A 2006-12-20 2007-11-09 三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病的应用 Expired - Fee Related CN101616676B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US87596306P 2006-12-20 2006-12-20
US60/875,963 2006-12-20
PCT/EP2007/062178 WO2008074572A1 (en) 2006-12-20 2007-11-09 Use of tri-substituted glycerol compounds for the treatment of hematological malignancies

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101616676A CN101616676A (zh) 2009-12-30
CN101616676B true CN101616676B (zh) 2015-09-09

Family

ID=39009616

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200780046932.8A Expired - Fee Related CN101616676B (zh) 2006-12-20 2007-11-09 三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病的应用

Country Status (8)

Country Link
US (2) US20100136029A1 (zh)
EP (1) EP2117555B1 (zh)
CN (1) CN101616676B (zh)
AU (1) AU2007334775A1 (zh)
CA (1) CA2673040C (zh)
ES (1) ES2396718T3 (zh)
RU (1) RU2474427C2 (zh)
WO (1) WO2008074572A1 (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140154304A1 (en) * 2012-11-30 2014-06-05 Boehringer Ingelheim International Gmbh Combination therapy with volasertib
EP3401320B1 (en) * 2013-03-15 2020-05-13 The Regents of the University of California Acyclic nucleoside phosphonate diesters for use in treating human papilloma virus, cervical intraepithelial neoplasia, anal intraepithelial neoplasia, or vulvar intraepithelial neoplasia

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6180137B1 (en) * 1996-02-16 2001-01-30 The Liposome Company, Inc. Etherlipid-containing multiple lipid liposomes
CN101610758A (zh) * 2006-11-10 2009-12-23 阿尔法普托斯有限公司 含有三取代甘油化合物的口服剂型

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2619686C2 (de) * 1976-05-04 1986-08-07 Max-Planck-Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften e.V., 3400 Göttingen Verwendung eines Lysolecithins zur Tumorbehandlung
DE4000084A1 (de) 1990-01-03 1991-07-04 Medmark Pharma Gmbh Intravenoes applizierbare pharmazeutische zubereitung von et18-och(pfeil abwaerts)3(pfeil abwaerts)
JPH11511130A (ja) * 1995-07-25 1999-09-28 スミスクライン・ビーチャム・コーポレイション ＣｏＡ−非依存性トランスアシラーゼの阻害およびアポトーシス
US6667053B1 (en) * 1996-02-16 2003-12-23 Elan Pharmaceuticals, Inc. D and L etherlipid stereoisomers and liposomes
DE19822509A1 (de) 1998-05-19 1999-11-25 Medmark Pharma Gmbh Edelfosin zur Behandlung von Hirntumoren
DE19829448A1 (de) 1998-07-01 2000-10-12 Medmark Pharma Gmbh 1-Octadecyl-2-methyl-sn-glycero-3-phosphocholin (ET180CH3) zur Behandlung von humanen Mammakarzinomen

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6180137B1 (en) * 1996-02-16 2001-01-30 The Liposome Company, Inc. Etherlipid-containing multiple lipid liposomes
CN101610758A (zh) * 2006-11-10 2009-12-23 阿尔法普托斯有限公司 含有三取代甘油化合物的口服剂型

Also Published As

Publication number Publication date
RU2474427C2 (ru) 2013-02-10
AU2007334775A1 (en) 2008-06-26
EP2117555B1 (en) 2012-10-17
RU2009127505A (ru) 2011-01-27
WO2008074572A1 (en) 2008-06-26
US20130266591A1 (en) 2013-10-10
CN101616676A (zh) 2009-12-30
EP2117555A1 (en) 2009-11-18
US20100136029A1 (en) 2010-06-03
ES2396718T3 (es) 2013-02-25
CA2673040A1 (en) 2008-06-26
CA2673040C (en) 2016-02-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
van Blitterswijk et al. Anticancer mechanisms and clinical application of alkylphospholipids
Berkovic Cytotoxic etherphospholipid analogues
CN101442994A (zh) 用于治疗恶性血液病的方法和组合物
Nemunaitis et al. Phase I study of oral CI-994 in combination with gemcitabine in treatment of patients with advanced cancer
TW422685B (en) A pharmaceutical composition for treating viral infections and cancers or tumors
EP1402894B1 (en) Cancerous metastasis inhibitors containing carbacyclic phosphatidic acid derivatives
Rezaie et al. Inhibition of extracellular vesicle biogenesis in tumor cells: A possible way to reduce tumorigenesis
CN101616676B (zh) 三取代的甘油化合物用于治疗恶性血液病的应用
Martino et al. A phase II study of cis-diamminedichloroplatinum II for advanced breast cancer two dose schedules
CN1302780C (zh) 烷基胆碱磷酸在制备用抗肿瘤药之前和/或期间治疗肿瘤的药物中的应用
EP3955935A1 (en) Alkyl-tpp compounds for mitochondria targeting and anti-cancer treatments
US20080089949A1 (en) Method for treating cancer using oral arsenic trioxide
Adams et al. Nitric oxide enhancement of fludarabine cytotoxicity for B-CLL lymphocytes
CN101623277B (zh) 芬维a胺及其活性衍生物的新用途及其药物组合物
Chang et al. Inositol phospholipid pathway inhibitors and regulators Inositol phospholipid pathway inhibitors and regulators
KR20150090091A (ko) 볼라세르티브와의 병용 요법
ES2393762T3 (es) Procedimientos y composiciones para detectar miméticos de ligandos de receptores
KR20140035974A (ko) 종양 질환 치료를 위한 약제 조성물
WO2020092845A1 (en) Method and composition embodiments for treating acute myeloid leukemia
US11052101B2 (en) Methods for treating cancer using purine analogs by depleting intracellular ATP
US20240148688A1 (en) Methods for treating and ameliorating cancer
Gugiatti et al. A reversible carnitine palmitoyltransferase I (CPT1) inhibitor offsets chronic lymphocytic leukemia cell proliferation
Xu et al. Antitumor efficacy and molecular mechanism of TLK58747, a novel DNA-alkylating prodrug
CN109195606A (zh) 用于治疗晚期非小细胞肺癌的方法和组合物
Bofill et al. American Society of Hematology (ASH)-56Th Annual Meeting and Exposition-San Francisco, California, USA, December 6-9, 2014

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20150909

Termination date: 20161109