CN101597577A

CN101597577A - 一种抗重金属铅的放线菌新种及其应用

Info

Publication number: CN101597577A
Application number: CNA2009100215619A
Authority: CN
Inventors: 韦革宏; 林雁冰; 王莉; 杨文权; 郭军康
Original assignee: Northwest A&F University
Current assignee: Northwest A&F University
Priority date: 2009-03-17
Filing date: 2009-03-17
Publication date: 2009-12-09

Abstract

本发明公开了一种抗重金属铅的放线菌新种及其应用，该菌种属于链霉菌属，命名为抗铅链霉菌(Streptomyces plumbiresistens sp.nov.)，应用于重金属铅污染环境的生物修复。通过形态特征、培养特征、细胞壁化学组分分析、生理生化特征、16S rDNA全序列分析、DNA－DNA杂交等鉴定方法对具有较高抗铅特征的菌株CCTCC M 209033进行了系统研究，与已知链霉菌的16S rDNA相似性小于99.0％，DNA同源性小于50％，结果表明该菌种属于链霉菌的一个新种。该菌种适用于污染环境的生物修复，尤其是Pb²⁺污染的环境生物修复。

Description

一种抗重金属铅的放线菌新种及其应用

技术领域

本发明涉及一种放线菌，特别涉及一种抗重金属铅的放线菌新种，该菌种属于链霉菌属，应用于重金属污染环境的生物修复。

背景技术

土壤是地球生态环境的重要组成部分，是人类赖以生存的重要不可再生资源之一，但是随着人类经济社会的发展，尤其是工矿业对于自然界矿产资源的大量开发和利用，所形成的矿业废弃地高浓度重金属污染物是重要的环境污染物之一，加剧了土壤环境日益恶化。目前用于重金属治理的方法主要有传统的物理化学法和生物修复方法。生物修复法是利用生物的代谢机制吸收、沉淀、降解或氧化还原一定浓度的有毒有害物，因此生物修复对低浓度的污染物较为有效，此外生物修复投资较少，不需要昂贵的设备，可直接进行原位修复，且不会造成二次污染。因此生物修复法越来越受到各国研究者的重视。

放线菌发达的丝状菌体对重金属的吸附与真菌尤其是霉菌有着相似的效果。尤其值得一提的是，放线菌能产多种次生代谢产物和多种胞外胞内酶。因而放线菌在重金属的微生物修复中具有很大的潜在应用价值。已有的研究报道表明一些放线菌对重金属具有一定的抗性。Geoffrey等筛选到CHR3和CHR28两株抗Hg链霉菌，DNA杂交实验证实它们和已知抗Hg链霉菌Streptomyces lividans 1326同源性很高。Jacques等从铜矿厂等地分离到51株对六价铬有抗性的放线菌，其中最高抗性达到17mM。但目前还没有有关抗铅链霉菌方面的报道。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种放线菌新种，该菌种可应用于污染环境的生物修复。

本发明采取如下的技术方案实现：

一种放线菌新种，该菌种属于链霉菌属，命名为抗铅链霉菌(Streptomyces plumbiresistens sp.nov.)；该菌种保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)；保藏号为CCTCC M 209033。

所述新种的形态及生理生化特征：

a、具有能够分化为柔曲或螺旋孢子链的气生菌丝、基内菌丝；菌丝分枝发达、无横隔、不断裂，孢子表面光滑；

b、在无机盐淀粉琼脂、甘油天门冬酰胺琼脂、营养琼脂、高氏一号合成琼脂或贝奈特琼脂培养基上有可溶性色素产生；

c、能利用L-阿拉伯糖、鼠李糖、半乳糖、木糖、D-山梨糖、D-棉子糖、肌醇或甘油作为唯一碳源，不能利用海藻糖或D-核糖作为唯一碳源；不能利用L-酪氨酸或L-苯丙氨酸作为唯一氮源；能降解黄嘌呤，不能降解纤维素；牛奶固化、牛奶胨化、H₂S产生或硝酸盐还原作用阳性；能在45℃或pH 12的条件下生长，不能在含8％NaCl的条件下生长。

所述新种的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

所述新种应用于重金属铅污染环境的生物修复。

一种分离或培养所述菌种的培养基，其培养基配方：可溶性淀粉20.0g，KNO₃1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，K₂HPO₄0.5g，复合维生素B 0.5mg，k₂Cr₂O₇100mg，蒸馏水1000ml，pH7.2，121℃灭菌30min。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

通过形态特征、培养特征、细胞壁化学组分分析、生理生化特征、16SrDNA全序列分析、DNA-DNA杂交等鉴定方法对具有较高抗铅特征的CCTCC M 209033菌株进行的系统研究，与已知链霉菌的16S rDNA相似性小于99.0％，DNA同源性小于50％，结果表明该菌种属于链霉菌的一个新种，命名为抗铅链霉菌(Streptomyces plumbiresistens sp.nov.)，模式菌株为CCTCC M 209033。

模式菌株CCTCC M 209033能够耐受高浓度的Pb²⁺同时具有好的吸附能力，对重金属Pb(NO₃)₂的最小抑制浓度(MIC)为4.0mM。对于重金属Pb²⁺的吸附率在1mM时达到94.5％，而在4.0mM时吸附率为26.0％；适用于污染环境的生物修复，尤其是Pb²⁺污染的环境生物修复。

保藏说明

本发明所述的链霉菌的新种抗铅链霉菌(Streptomyces plumbiresistens sp.nov.)分别进行了下述保藏：

1、保藏时间：2009年2月25日；保藏单位：中国典型培养物保藏中心，CCTCC，地址：湖北省武汉市武汉大学；保藏号为：CCTCC M 209033；分类命名为抗铅链霉菌CCNWHX13-160^T、Streptomyces plumbiresistens sp.nov.CCNWHX 13-160^T。

2、保藏时间：2008年1月10日；保藏单位：西北农林科技大学微生物研究中心，CCNW；保藏号为：CCNWHX13-160^T；

3、保藏时间：2008年3月12日；保藏单位：中国农业微生物菌种保藏中心，ACCC；保藏号为：ACCC 41207^T；

4、保藏时间：2008年5月14日；保藏单位：芬兰赫尔辛基大学应用微生物保藏中心，HAMBI；保藏号为：HAMBI 2991^T。

附图说明

图1是CCTCC M 209033的菌落特征图；

图2是CCTCC M 209033的形态观察光学显微镜图；

图3是CCTCC M 209033的扫描电镜照片图；

图4是CCTCC M 209033的16S rDNA全序列系统发育树状图；

图5是CCTCC M 209033对铅的耐受曲线图，横坐标为铅的浓度，纵坐标为菌株相对存活率；

图6是CCTCC M 209033对铅的吸附曲线图，横坐标为铅的浓度，纵坐标铅的吸附率。

具体实施方式

以下对本发明作进一步详细描述，所述是对本发明的解释而不是限定。

1、微生物样本采集

本发明所述的放线菌新种CCTCC M 209033分离自重金属污染的土壤，该重金属污染的土壤采自甘肃省徽县柳林镇铅锌矿区(106°07′44.3″E，33°54′10.3″N，海拔1049米)。

采集表土层土壤样品约500g，分装入密封塑料袋中，室温风干，用18号筛(孔径1mm)筛去其中颗粒较大的石砾和动植物残体，收集土样，4℃干燥保藏备用。

2、在分离和鉴定过程主要利用的培养基配方分别为：

分离和培养链霉菌培养基

改良高氏一号培养基配方：可溶性淀粉20.0g，KNO₃1.0g，MgSO₄·7H₂O0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，K₂HPO₄0.5g，复合维生素B 0.5mg，k₂Cr₂O₇100mg，蒸馏水1000ml，pH7.2，121℃灭菌30min。k₂Cr₂O₇用于抑制杂菌生长。

形态及培养特征观察培养基

高氏一号合成培养基配方：可溶性淀粉20.0g，KNO₃1.0g，MgSO₄·7H₂O0.5g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，K₂HPO₄0.5g，NaCl 0.5g，蒸馏水1000ml，pH7.2-7.4，121℃灭菌30min。

甘油-天门冬酰胺培养基(ISP 5)：L-天门冬酰胺1g，甘油10g，K₂HPO₄1g，微量盐1ml，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2-7.4。

麦芽膏-酵母膏培养基(ISP 2)：麦芽膏4g，葡萄糖4g，酵母膏10g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2-7.4。

营养琼脂培养基：蛋白胨10g，牛肉膏5g，NaCl 5g，琼脂20g，蒸馏水1000ml，pH 7.2-7.4。

燕麦片琼脂培养基(ISP 3)：燕麦粥20g(煮沸20min，过滤)；微量盐1ml；琼脂粉20g；蒸馏水1000ml；pH 7.2-7.4。

无机盐淀粉琼脂培养基(ISP 4)：可溶性淀粉10g；K₂HPO₄1.0g；MgSO₄·7H₂O 1.0g；NaCl 1.0g；(NH₄)₂SO₄2.0g；CaCO₃2.0g；微量盐1ml；琼脂粉20g；蒸馏水1000ml；pH 7.0-7.4。

察氏培养基：蔗糖30g；NaNO₃2g；K₂HPO₄1g；MgSO₄·7H₂O 0.5g；KCl 0.5g；FeSO₄·0.01g；琼脂20g；蒸馏水1000ml；pH 7.2-7.4。

葡萄糖-天门冬酰胺培养基：葡萄糖10g；天门冬酰胺0.5g；K₂HPO₄0.5g；MgSO₄·7H₂O 0.5g；FeSO₄·10mg；琼脂粉20g；蒸馏水1000ml；pH7.2-7.4。

Bennett’s琼脂培养基：葡萄糖10g；酵母粉1g；牛肉膏1g；N-Z-酪蛋白素2g；琼脂粉20g；蒸馏水1000ml；pH7.2-7.4。

所述的微量盐：FeSO₄·7H₂O·0.2g；MnCl₂·7H₂O 0.1g；ZnSO₄·7H₂O 0.1g；蒸馏水100ml。

3、抗重金属铅放线菌分离筛选及纯化

3.1平板稀释法(Dilution Plating Method)初筛

1)称取风干土样5克，65℃热处理2h；

2)加入酵母粉6％(w/v)，SDS 0.05％(w/v)，pH 7.0磷酸缓冲液45ml和20颗玻璃珠；

3)置120rpm摇床，40℃，30分钟；

4)静置，取上清1ml转移至装有9ml无菌水的大试管中漩涡混合器混匀；

5)依次梯度稀释至10^-2、10^-3、10^-4；

6)取稀释液0.1ml，涂布于重金属Pb²⁺浓度为75mg/L的改良高氏一号琼脂培养基上，28℃培养7、14、21天观察生长情况；

平板培养14天后挑取放线菌单菌落，平板划线法纯化两次，用接种环刮取孢子或菌丝体于改良高氏一号斜面，28℃培养至菌体生长旺盛，4℃短期保藏。取孢子或菌丝体置于添加有20％甘油的冻存管中，-20℃长期保藏。

3.2液体培养基复筛

1)孢子悬液制备：将平板培养纯化好的菌株在改良高氏一号平板培养基上划线28℃培养7d后，用无菌竹签挑取斜面保藏的放线菌菌株的孢子丝于装有100ml无菌水的三角瓶中，使孢子最终浓度约为1×10⁹CFU/ml(孢子浓度由血球计数板计得)；

2)按1％(v/v)的接种量接入添加有1mM～5mM梯度浓度Pb(NO₃)₂的100ml复筛用液体改良高氏一号培养液中，以未加重金属Pb²⁺的孢子悬液作为阳性对照，以加入重金属Pb²⁺未接种孢子悬液改良高氏一号培养液作为阴性对照，观察生长情况；

3)置150rpm摇床，28℃，培养4d；

4)5000rpm，15min离心收集菌株。

通过平板初筛与液体复筛得到分离到具有抗铅能力的放线菌，其模式菌株为CCTCC M 209033。

4、模式菌株CCTCC M 209033的鉴定

1)形态特征鉴定

如附图1-3所示，菌株CCTCC M 209033具有可分化为柔曲或螺旋孢子链的气生菌丝或基内菌丝，且菌丝分枝发达、无横隔、不断裂。从扫描电镜图中可以看出菌株CCTCC M 209033气生与基内菌丝发育良好，分支广泛，孢子表面光滑，它们与链霉菌属形态特征相似。根据基丝、气丝和可溶性色素的特征将菌株CCTCC M 209033初步归属于白孢类群。

2)在不同鉴定培养基上的形态特征

菌株CCTCC M 209033在酵母麦芽浸膏琼脂，高氏一号合成琼脂，贝奈特琼脂培养基上生长良好，基内菌丝和气生菌丝发育良好；在营养琼脂培养基生长较差且无气生菌丝形成；在无机盐淀粉琼脂培养基，甘油天门冬酰胺琼脂，营养琼脂，高氏一号合成琼脂，贝奈特琼脂培养基上有可溶性色素产生。如表1所示。

表1菌株CCTCC M 209033在不同培养基上的形态特征

3)化学分类研究结果

菌株CCTCC M 209033细胞壁含L，L-DAP(磷酸二铵)，甘氨酸，细胞壁类型I(cell-wall type I)。全细胞水解液主要糖为Arabinose，Galactose及少量Glucose，全细胞糖类型A。磷酸类脂组分主要是磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)和磷脂酰肌醇甘露糖(phosphatidylinositol mannosides)，即磷酸类脂类型为PII型(phospholipid type II)。甲基萘醌类型主要是[MK-9(H6，H8and H4)]，符合典型链霉菌醌型。脂肪酸主要由异式十四碳饱和脂肪酸iso-C_14:0(8.53％)，十四碳饱和脂肪酸C_14:0(2.91％)，异式十五碳饱和脂肪酸iso-C_15:0(5.12％)，反异式十五碳饱和脂肪酸anteiso-C_15:0(13.25％)，十五碳饱和脂肪酸C_15:0(6.69％)，异式十六碳饱和脂肪酸iso-C_16:0(18.97％)，十六碳饱和脂肪酸C_16:0(20.97％)，反异式十七碳饱和脂肪酸anteiso-C17:0(3.21％)等直链饱和、不饱和及少量甲基分枝脂肪酸等成分组成如表2所示。

由分析结果可以得出，菌株CCTCC M 209033脂肪酸主要由14、15、16、17碳的饱和、异式(iso-)、反异式(anteiso-)构型脂肪酸构成，其种类与含量和大多数链霉菌脂肪酸的构成相符合。

菌株CCTCC M 209033的细胞(壁)化学组分分析、磷酸类脂分析、甲基萘醌分析和脂肪酸分析结果表明：菌株CCTCC M 209033化学分类特征与链霉菌属符合，属于链霉菌属。

表2菌株CCTCC M 209033脂肪酸构成

Fatty acid Content(％)	Fatty acid Content(％)
Fatty acid Content(％)	Fatty acid Content(％)	10:0 ISO 0.0310:0 0.0311:0 ANTEISO 0.0311:0 0.0412:0 ISO 0.1912:0 0.3213:0 ISO 0.3713:0 ANTEISO 0.4913:1 AT 12-13 0.03	16:0 ISO 18.97Sum In Feature 3 8.8416:0 20.9715:0 2OH 0.08ISO 17:1 w9c 0.86ANTEISO 17:1 w9c 1.1117:0 ISO 0.9217:0 ANTEISO 3.2117:1 w8c 1.12

13:0 0.2414:0 ISO 8.5314:0 2.9115:1 ISO G 0.0615:1 ANTEISO A 0.3215:0 ISO 5.1215:0 ANTEISO 13.2515:1 w6c 0.2815:0 6.6914:0 ISO 3OH 0.0716:1 ISO H 1.58

17:0 CYCLO 0.5817:0 1.0616:0 ISO 3OH 0.1117:0 10 methyl 0.0918:1 ISO H 0.0516:0 3OH 0.1218:0 ISO 0.08Sum In Feature 5 0.5018:1 w9c 0.6218:0 0.13

4)生理生化特征研究

菌株CCTCC M 209033能利用L-阿拉伯糖，鼠李糖，半乳糖，木糖，D-山梨糖，D-棉子糖，肌醇，甘油作为唯一碳源，不能利用海藻糖或D-核糖作为唯一碳源；不能利用L-酪氨酸或L-苯丙氨酸作为唯一氮源；能降解黄嘌呤，不能降解纤维素。牛奶固化、牛奶胨化、H₂S产生、硝酸盐还原作用阳性；能在45℃或pH 12的条件下生长，不能含8％NaCl的条件下生长。

菌株CCTCC M 209033和与其相似性最高的模式菌株S.pseudovenezuelae NBRC12904和S.resistomycificus NBRC12814生理生化特征研究结果表明：除了体现出链霉菌属所具有的共同特征外更有意义的是它们之间存在着比较普遍而明显的生理生化差异，如表3所示；说明CCTCC M209033与S.pseudovenezuelae和S.resistomycificus是不同的种。

表3菌株CCTCC M 209033与S.pseudovenezuelae和S.resistomycificus的生理生化特征比较

特征

CCTCC M 209033

S.pseudovenezuelae

S.resistomycificus

		NBRC12904	NBRC12814
		NBRC12904	NBRC12814	唯一碳源利用：(1.0％，w/v)木糖海藻糖D-核糖甘油	+--+	+---	-++-
唯一氮源利用(1.0％，w/v)：L-酪氨酸L-苯丙氨酸	--	++	-+	唯一碳源利用：(1.0％，w/v)木糖海藻糖D-核糖甘油	+--+	+---	-++-
唯一氮源利用(1.0％，w/v)：L-酪氨酸L-苯丙氨酸	--	++	-+	下列物质降解：黄嘌呤纤维素	+-	++	--
抗生素抗性：青霉素(100μg ml^-1)林可霉素(100μg ml^-1)氯霉素(300μg ml^-1)链霉素(300μg ml^-1)	----	++-+	++++	下列物质降解：黄嘌呤纤维素	+-	++	--
	----	++-+	++++	明胶液化45℃pH 12NaCl(8％)	-++-	-+++	+-+-
牛奶固化牛奶胨化	++	--	++	明胶液化45℃pH 12NaCl(8％)	-++-	-+++	+-+-
牛奶固化牛奶胨化	++	--	++	H₂S产生硝酸盐还原作用	++	+-	-+

注：“+”为阳性；“-”为阴性；

5)16S rDNA全序列分析

16S rDNA基因序列在某些位点会以不同的几率发生突变，在种、属等水平表现出结构和功能的保守性，有“细菌化石”之称，特别是其进化具有良好的时钟特性，是生物进化史的计时器。应用16S rDNA作为分子指标，可以实现快速、微量、准确、简便的对微生物进行分类鉴定。

将菌株CCTCC M 209033的16S rDNA PCR扩增产物送上海英俊生物技术有限公司全自动测序仪(ABI 3730XL)测序，16S rDNA的序列如SEQ.ID.NO.1所示。

将测得的16S rDNA全序列提交Blast(GenBank/EMBL/DDBJ)进行多重序列比对，找出已有效发表的模式菌株序列后用Clustal X version 1.8，neighbour-joining法和TREECON软件包version 1.3b构建出以16S rDNA全序列为基础的系统发育树状图，然后使用DNAMAN version 5.2.9(LynnonBiosoft，Quebec，Canada)计算菌株间16S rDNA序列的相似性。

从菌株CCTCC M 209033与链霉菌属已有效发表种的16S rDNA序列构建出的系统发育树状图，如图4所示。16S rDNA序列分析显示：菌株CCTCCM 209033与分枝中所有菌株的16S rDNA序列相似性介于98.2％～98.9％之间，它与S.pseudovenezuelae NBRC 12904和S.resistomycificus NBRC 12814的相似性最高，分别为98.9％和98.8％，但都低于99％，具有较大的差异性，单独构成一个分支；表明以菌株CCTCC M 209033为模式菌株的菌种是链霉菌属内的一个新种。

6)DNA-DNA同源性分析及G+C％测定结果

选取与菌株CCTCC M 209033的16S rDNA序列相似性最高的链霉菌属已发表有效种Streptomyces pseudovenezuelae NBRC 12904和Streptomycesresistomycificus NBRC12814进行DNA-DNA体外分子杂交实验，结果表明：CCTCC M 209033与Streptomyces pseudovenezuelae NBRC 12904和Streptomyces resistomycificus NBRC 12814的DNA同源性分别为49.7％和43.2％，都低于50％，显著低于分类学上70％的种判定临界值。

同时菌株CCTCC M 209033的G+C mol％值为70.9mol％，符合链霉菌属高GC含量的特点。

以上通过形态特征、培养特征、细胞壁化学组分分析、生理生化特征、16S rDNA全序列分析、DNA-DNA杂交等鉴定方法对具有较高抗铅特征的菌株CCTCC M 209033进行的系统研究，结果表明：该菌株属于链霉菌的一个新种，命名为抗铅链霉菌，Streptomyces plumbiresistens sp.nov.，模式菌株为CCTCC M 209033。现分别保藏于中国典型培养物保藏中心(保藏号为：CCTCC M 209033)、西北农林科技大学微生物研究中心(保藏号为CCNWHX13-160^T)、中国农业微生物菌种保藏中心(保藏号为ACCC41207^T)和芬兰赫尔辛基大学应用微生物保藏中心(保藏号为HAMBI2991^T)。

5、模式菌株CCTCC M 209033的抗铅特性分析

5.1供试菌体的培养与收集

将菌株CCTCC M 209033在改良高氏一号平板培养基上划线28℃培养7d后，用无菌竹签挑取孢子丝于装有100ml无菌水的三角瓶中，使孢子最终浓度约为1×10⁹CFU/ml(孢子浓度由血球计数板计得)。按1％(v/v)的接种量分别接入加有1mM～5mM梯度浓度Pb(NO₃)₂的改良高氏一号液体培养基中，置150rpm摇床，28℃，培养4d，离心(5000rpm，15min)收集菌体。

5.2菌体生物量随重金属Pb²⁺浓度变化的测定

将离心收集到的菌体置于105℃烘箱约1h至衡重，分析天平准确称量；含菌体的离心管全重减去干燥空离心管重量即液体培养后菌体总生物量。液体培养后菌体总生物量的变化反映了随Pb²⁺浓度变化的菌体的生长情况。

5.3重金属Pb²⁺吸附的测定

1)将离心上清液混匀后移入50mL具塞锥形瓶中，加5mL硝酸和2ml高氯酸，移入消解炉中于230℃消解至消化液呈无色或略带黄色，冷却后转移至25mL容量瓶中定容，原子分光光度法(HITACHI 180-80)测定样品中重金属含量。

2)以未加孢子悬液而加入相应浓度重金属Pb²⁺的为对照，同样条件培养后原子吸收法测定对照重金属离子含量；对照液的重金属离子含量减去培养液的重金属离子含量即为菌体吸附的重金属量。

5.4重金属Pb²⁺吸附的测定结果

1)随着培养基中重金属Pb²⁺浓度的升高，CCTCC M 209033菌体总生物量呈下降趋势，低浓度的铅对菌体生长影响相对较小，随着Pb²⁺浓度的升高到2.0mM时孢子萌发、菌体生长明显受到抑制，生物量迅速减少，当重金属Pb²⁺浓度升高到一定值时菌体生物量接近于零且不再有明显的变化，这时的重金属Pb²⁺浓度就是其对于CCTCC M 209033的最低抑制浓度(MIC)为4.0mM，如图5所示；与其他微生物相比，菌株CCTCC M 209033对于重金属Pb²⁺的耐受浓度大大提高。

2)菌株CCTCC M 209033对于重金属Pb²⁺的吸附率如图6所示，在Pb²⁺为1mM时达到94.5％，表明该菌株对于低浓度Pb²⁺具有非常好的吸附净化效果，能够满足生物净化的需求，实现土壤净化。随着Pb²⁺浓度升高，菌株生长收到抑制，吸附率逐渐下降，而在最低抑制浓度4.0mM时吸附率任然为26.0％，说明该菌株在耐受高浓度的Pb²⁺同时吸附了相当的Pb²⁺，适用于菌种大批投放的生物治理。

以上两个方面的检测结果说明从重金属污染的土壤分离到的放线菌新种Streptomyces plumbiresistens sp.nov.，模式菌株CCTCC M 209033能够耐受高浓度的Pb²⁺同时具有好的吸附能力，适用于污染环境的生物修复，尤其是Pb²⁺污染的环境生物修复。

核苷酸序列表

<110>西北农林科技大学

<120>一种抗重金属铅的放线菌新种及其应用

<160>1

<210>1

<211>1429

<212>DNA

<213>Streptomyces plumbiresistens sp.nov.

<400>1

gcggcgtgct tacacatgca agtcgaacga tgaaccactt cggtggggat tagtggcgaa 60

cgggtgagta acacgtgggc aatctgccct tcactctggg acaagccctg gaaacggggt 120

ctaataccgg ataacactcc ctccctcctg ggtgggggtt gaaagctccg gcggtgaagg 180

atgagcccgc ggcctatcag cttgttggtg aggtaatggc tcaccaaggc gacgacgggt 240

agccggcctg agagggcgac cggccacact gggactgaga cacggcccag actcctacgg 300

gaggcagcag tggggaatat tgcacaatgg gcgaaagcct gatgcagcga cgccgcgtga 360

gggatgacgg ccttcgggtt gtaaacctct ttcagcaggg aagaagcgaa agtgacggta 420

cctgcagaag aagcgccggc taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg tagggcgcaa 480

gcgttgtccg gaattattgg gcgtaaagag ctcgtaggcg gcttgtcacg tcgggtgtga 540

aagcccgggg cttaaccccg ggtctgcatt cgatacgggc tagctagagt gtggtagggg 600

agatcggaat tcctggtgta gcggtgaaat gcgcagatat caggaggaac accggtggcg 660

aaggcggatc tctgggccat tactgacgct gaggagcgaa agcgtgggga gcgaacagga 720

ttagataccc tggtagtcca cgccgtaaac ggtgggaact aggtgttggc gacattccac 780

gtcgtcggtg ccgcagctaa cgcattaagt tccccgcctg gggagtacgg ccgcaaggct 840

aaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcagcgg agcatgtggc ttaattcgac 900

gcaacgcgaa gaaccttacc aaggcttgac atcgcccgga aagcatcaga gatggtgccc 960

cccttgtggc cgggtgacag gtggtgcatg gctgtcgtca gctcgtgtcg tgagatgttg 1020

ggttaagtcc cgcaacgagc gcaacccttg ttctgtgttg ccagcatgcc cttcggggtg 1080

atggggactc acaggagacc gccggggtca actcggagga aggtggggac gacgtcaagt 1140

catcatgccc cttatgtctt gggctgcaca cgtgctacaa tggcaggtac aatgagctgc 1200

gataccgtga ggtggagcga atctcaaaaa gcctgtctca gttcggattg gggtctgcaa 1260

ctcgacccca tgaagtcgga gttgctagta atcgcagatc agcattgctg cggtgaatac 1320

gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca cgtcacgaaa gtcggtaaca cccgaagccg 1380

gtggcccaac ccccttgtgg ggagggagct gtcgaaggtg gactggcga 1429

Claims

1、一种放线菌新种，其特征在于，该菌种属于链霉菌属，命名为抗铅链霉菌(Streptomyces plumbiresistens sp.nov.)；

该菌种保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCCM 209033。

2、如权利要求1所述的放线菌新种，其特征在于，该菌种的形态及生理生化特征：

3、如权利要求1所述的放线菌新种，其特征在于，所述菌种的16S rDNA序列如SEQ ID NO.1所示。

4、权利要求1所述的放线菌新种应用于重金属铅污染环境的生物修复。

5、一种分离或培养权利要求1所述菌种的培养基，其特在于，其培养基配方：可溶性淀粉20.0g，KNO₃1.0g，MgSO₄·7H₂O 0.5g，FeSO₄·7H₂O0.01g，K₂HPO₄ 0.5g，复合维生素B 0.5mg，k₂Cr₂O₇ 100mg，蒸馏水1000ml，pH7.2，121℃灭菌30min。