CN101584715B - 一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂，属于中药制剂领域。该喷剂由以下按重量百分比的组份制成：蜂胶0.2-5％；95％乙醇1-20％；吐温80 3-20％；冰片0.04-0.3％；甘草酸单铵盐0.5-8％；余量为蒸馏水；本发明的药物是一种防治皮肤损伤与抗感染的中药喷剂。该喷剂疗效稳定、毒副作用小、用药安全，治疗成本较低。
Description
技术领域
本发明涉及一种外用药物组合物，具体涉及一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂。
背景技术
蜂胶是一种安全、无毒、温和、有效的天然抗生素。近几十余年来，大量的文献资料证明，蜂胶对众多种细菌、真菌、病毒同时具有抑制、杀灭作用，被称为珍贵的天然广谱抗生素物质。目前，中国已成为世界上蜂胶生产量最多、而且是出口量最大的国家，长期以来由于缺乏对蜂胶的药用价值进行系统深入的研究，国内蜂胶市场的开发是九十年代初刚刚起步，虽然在国内市场上已出现少量蜂胶保健产品，但90％以上仍处于低水平的开发利用，检索证明：国内外尚未以蜂胶为原料开发出有价值、有影响、能代表高水平的药物。
现有的皮肤病治疗药物市场主要是供应化学药与生物制剂，尚缺乏用于皮肤病治疗的纯中药或天然药物制剂.与中药相比较，化学药物虽然短时期内疗效明显，但长期用药不安全，毒副作用明显，且药效极期不稳定，停药后易使病情反复，治疗成本较高。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点，提供一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂。
一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂，由以下按重量百分比的组份制成：蜂胶0.2-5％；95％乙醇1-20％；吐温803-20％；冰片0.04-0.3％；甘草酸单铵盐0.5-8％；余量为蒸馏水。
所述喷剂优选各组份的重量百分比为：蜂胶0.8-3％；95％乙醇5-18％；吐温804-10％；冰片0.05-0.15％；甘草酸单铵盐0.7-4％；余量为蒸馏水。
所述喷剂最优选各组份的重量百分比为：蜂胶1.2％；95％乙醇15％；吐温805％；冰片0.1％；甘草酸单铵盐2.5％；余量为蒸馏水。
蜂胶作为主药，取其消炎抗菌的功效。从加强其药效协同作用及药物稳定性等方面来考虑，选取甘草酸单铵盐做为协同作用的另一主药。蜂胶不溶于水，用95％乙醇溶解提取其中的总黄酮类物质时，无论是超声、手动研磨或是搅拌机搅拌都很难完全溶解，所以选择了吐温80作为助溶剂加入其中帮助溶解。另外考虑到药物是喷射到身体的表面创伤处，也选择了有冰凉触感的冰片作为芳香剂和收敛剂。
一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂，其制备方法如下：取蜂胶加入95％乙醇中，边搅拌边加入吐温80，然后缓慢加入蒸馏水，得到溶液1，将甘草酸单铵盐高温下，溶于蒸馏水中，溶解后冷却，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2，最后将冰片溶于95％乙醇中，将其加入到溶液2中，调节PH为4-6，装瓶后即得喷剂。
上述调节PH的试剂为氢氧化钠或盐酸。
其中，蜂胶由中国农业科学院蜜蜂研究所提供，其质量符合农业部部颁标准；甘草酸单铵盐购自内蒙呼和浩特天坛甘草制品有限责任公司，含量≥98.00％。产品代号：Q/HTG04-1998。
本发明的喷剂具有疗效稳定、毒副作用小、用药安全，治疗成本较低，适用于防治战伤和特需环境引发的疾病的需要，能够较好解决部队在特需军事环境下特需药品的需要，亦可作为同类民用药物资源的补充。
具体实施方式
实施例1-6为配制本发明喷剂2000ml的制备方法，实施例7-11为本发明喷剂的药理、药效学实验。
实施例1
取蜂胶16g，加入95％乙醇100ml，充分搅拌。再边搅拌边加入吐温-80，132ml，充分搅拌。然后缓慢加入蒸馏水768ml，得到溶液1。精密称取甘草酸单铵盐50g，90℃高温溶于1000ml的蒸馏水中。溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2。最后称取2g冰片溶于11ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为5，装瓶后即得喷剂。
实施例2
取蜂胶100g，加入95％乙醇388ml，充分搅拌。再边搅拌边加入吐温-80，377ml，充分搅拌。然后缓慢加入蒸馏水623ml，得到溶液1。精密称取甘草酸单铵盐40g，90℃高温溶于600ml的蒸馏水中。溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2。最后称取3g冰片溶于12ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为5.5，装瓶后即得喷剂。
实施例3
取蜂胶4g，加入95％乙醇25ml，充分搅拌。再边搅拌边加入吐温-80，57ml，充分搅拌。然后缓慢加入蒸馏水1413ml，得到溶液1。精密称取甘草酸单铵盐10g，90℃高温溶于500ml的蒸馏水中。溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2。最后称取1g冰片溶于5ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为5，装瓶后即得喷剂。
实施例4
取蜂胶60g，加入95％乙醇434ml，充分搅拌。再边搅拌边加入吐温-80，94ml，充分搅拌。然后缓慢加入蒸馏水461ml，得到溶液1。精密称取甘草酸单铵盐140g，90℃高温溶于1000ml的蒸馏水中。溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2。最后称取0.8g冰片溶于10ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为6，装瓶后即得喷剂。
实施例5
取蜂胶24g，加入95％乙醇300ml，充分搅拌。再边搅拌边加入吐温-80，189ml，充分搅拌。然后缓慢加入蒸馏水276ml，得到溶液1。精密称取甘草酸单铵盐160g，90℃高温溶于1200ml的蒸馏水中。溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2。最后称取6g冰片溶于33ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为5.5，装瓶后即得喷剂。
实施例6
取蜂胶24g，加入95％乙醇330ml，充分搅拌。再边搅拌边加入吐温-80，95ml，充分搅拌。然后缓慢加入蒸馏水550ml，得到溶液1。精密称取甘草酸单铵盐50g，90℃高温溶于1000ml的蒸馏水中。溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2。最后称取2g冰片溶于20ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为4.5，装瓶后即得喷剂。
下面结合药理、药效学实验来说明该喷剂的药效结果。
实施例7抑菌作用：液体试管抑菌法
实验菌株及来源：
乙型溶血性链球菌A群为中国人民解放军第302院收治的急性咽峡炎，猩红热患者咽部分离所得；脑膜炎双球菌A群、B群，单核细胞增多性李斯特氏菌、肺炎双球菌，为302医院的收治流脑、化脓性脑脊髓膜炎患者血液或脑脊液中分离获得；乙型溶血性链球菌B群为世界卫生组织质控标准株；产黑色素拟杆菌、消化链球菌均购自中国人民解放军第三0四医院烧伤外科中心实验室。
实验方法：
二倍浓缩的水解酪蛋白MH肉汤1毫升，加等量按实施例1方法配制的喷剂，配成1∶1倍稀释的喷剂肉汤。再与普通营养肉汤倍比稀释至第七管，喷剂药液的稀释浓度顺序排列为1∶2，1∶4，1∶8，1∶16，1∶32，1∶64，1∶128，各加入上述已知菌液0.1毫升，摇匀，37℃24h后观察结果。在乙型溶血性链球菌、脑膜炎双球菌、肺炎球菌每管加入小牛血清0.1毫升，以利细菌生长，每株测定以培养基营养肉汤作对照。厌氧菌按厌氧菌生长培养，牛心脑浸液代替普通肉汤稀释喷剂，每株菌重复测试两次。
判定标准：
对照管细菌生长良好，肉汤混浊或有沉淀，取0.1毫升传血平板，为该菌的纯培养。如果测定管肉汤清，无混浊或沉淀，取0.1毫升液体传备平板，无菌生长或仅生长1-5个菌落，均视为有抑制作用。
实验结果：
表1本发明喷剂对金黄色葡萄球菌等菌株抑菌试验结果
| 实验菌株(编号) | 喷剂最低抑菌浓度 | 实验菌株(编号) | 喷剂最低抑菌浓度 |
| 乙型溶血性链球菌A群(1)(2)(3)(4)(5)(6) | 1∶21∶21∶1281∶41∶41∶1 | 乙型溶血性链球菌B群(7)脑膜炎双球菌A群(1)(2)脑膜炎双球菌B群肺炎球菌单核细胞增多性李斯特氏菌产黑色素拟杆菌消化链球菌 | 1∶11∶161∶61∶321∶21∶11∶41∶1 |
由表1可知，本发明的喷剂对引起急性咽峡炎与猩红热的致病菌乙型溶血性链球菌A群有良好的直接抑菌效果，临床标本分离的6株菌无耐药株；脑膜炎双球菌A群、B群对低浓度的本发明喷剂敏感；对齿龈炎、牙周炎的致病菌产黑色素拟杆菌和消化链球菌有抑制效果。
实施例8抗炎作用
1)小鼠耳廓二甲苯致炎试验：
将昆明种小鼠(雌雄兼用，体重18～22g)随机分为5组，每组10只。阴性对照组、阳性药组、给药组三个剂量组。阳性药组给氢化可的松软膏(规格：10g∶100mg，北京双吉制药有限公司，批号：20060924)，涂药量为0.1g，给药组给本发明实施例6制备的喷剂，三个剂量分别为每次0.15、0.3和0.6ml，实验当日给小鼠耳廓分别涂药1次，1h后各组以蒸馏水洗去药物，用干棉球擦。给小鼠右耳涂以二甲苯0.05ml/只，左耳作对照，15min后处死，用直径6mm的打孔器将双耳同部位等面积切下，分别称重，以左、右耳片重量之差为肿胀程度。计算各组肿胀度，求出肿胀抑制率。其中，
肿胀抑制率(％)＝(阴性对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/阴性对照组平均肿胀度×100％
本发明的喷剂3个剂量组对二甲苯所致小鼠耳廓肿的有明显抑制作用，与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.01，＜0.05)，且随着剂量增大而抑制作用增强，结果见表2。
表2本发明喷剂对小鼠耳廓二甲苯致炎的抗炎作用
| 组别 | 给药量/次 | 肿胀度(mg) | 抑制率(％) |
| 阴性对照组 | - | 17.3±4.6 | |
| 阳性药组 | 0.1g | 5.2±6.9c | 70 |
| 本发明喷剂组(高) | 0.6ml | 10.4±3.5c | 41 |
| 本发明喷剂组(中) | 0.3ml | 11.8±4.7c | 32 |
| 本发明喷剂组(低) | 0.1ml | 13.9±6.2b | 19 |
注：与阴性对照组比较，bP＜0.05，cP＜0.01
2)大鼠蛋清足跖肿胀试验：
将Wistar大鼠(雌雄各半，体重120～180g)随机分为6组，每组10只。C1组生理氯化钠溶液；C2组为阴性对照；C3组阳性对照(氢化可的松软膏，规格：10g∶100mg，北京双吉制药有限公司，批号：20060924)；C4、C5、C6为本发明实施例6喷剂的三个剂量组。各组给药量见表3。
实验前按毛细管放大测量法测定各组大鼠右后足的正常体积，实验当日各组涂药，1h后，各组右后足跖皮下注射100％新鲜蛋清0.05ml/只，同时再涂药1次。测定致炎后1、2、4、6h的右后足体积。各大鼠致炎前后足跖体积的差值为肿胀度，比较各组肿胀度的差异。
本发明喷剂高、中、低3个剂量组随着剂量增大其抑制大鼠足跖肿胀的作用增强。高、中、低剂量组与阴性对照组比较有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，与阳性对照组比较无显著性差异。低剂量组与阴性对照组比较，阴性对照无明显的抗炎作用，结果见表3。
表3本发明喷剂对大鼠蛋清足跖肿胀的影响
注：与阴性对照组比较，bP＜0.05，cP＜0.01
实施例9止痒作用试验：
将豚鼠(雌雄兼用，体重250～400g)随机分为5组，每组10只。分别为阴性对照组；阳性对照组(复方薄荷脑止痒霜，规格：20g/盒，解放军第307医院制剂室，批号：20070324)；本发明实施例6喷剂三个剂量组。各组给药量见表4。
试验前1d，给各组豚鼠右后足背剃毛，分别涂药1次。试验当日，用粗砂纸擦伤足背剃毛处，面积1cm2，各组局部再涂药1次，末次涂药后10min，开始在创面处滴0.01％磷酸组织胺(规格：25mg/支，中国药品生物检定所，批号：20070203)溶液，0.05ml/次/只，此后每隔3min依0.01％、0.02％、0.03％、0.04％递增浓度，均为0.05ml/次/只。直至出现豚鼠回头舔右后足止，以最后出现豚鼠回头舔右足时所给予的磷酸组织胺总量为致痒阈，记录并比较各组的致痒阈。
本发明喷剂有明显提高豚鼠对磷酸组致痒阈的作用，阳性对照组与阴性对照组比较，喷剂高、中剂量组有非常显著性差异(P＜0.01)；低剂量组也有显著性差异(P＜0.05)。结果见表4。
表4本发明喷剂对磷酸组织胺致痒反应的影响
| 组别 | 给药量 | 致痒阈(磷酸组织胺总量μg) |
| 阴性对照组 | - | 16.5±11.2 |
| 阳性对照组 | 0.5g | 195.4±46.3c |
| 蜂胶气雾剂(高) | 0.6ml | 316.8±109.5c |
| 蜂胶气雾剂(中) | 0.3ml | 224.8.0±45.3c |
| 蜂胶气雾剂(低) | 0.1ml | 128.1±75.2b |
注：与阴性对照组比较，bP＜0.05，cP＜0.01
实施例10皮肤刺激试验
1)实验方法
实验动物为健康大耳白种兔(来源于军事医学科学院医学实验动物中心)，体重2-3kg，雌雄不分，共6只实验动物。实验前将兔背部脊柱两侧脱毛而不损伤皮肤，脱毛面积为两侧5×10cm(约为体表面积为10％)。一块脱毛区作正常皮肤刺激试验，分为给药区与对照区。给药区涂抹按实施例1制得的喷剂0.2ml；对照区涂以等量的生理盐水，用一层油纸两层纱布覆盖，再用胶布固定。另一块脱毛区作损伤皮肤刺激试验，给药前用针头在脱毛区皮肤上划出“#”形擦伤，直径2cm，以刺伤表皮，不伤真皮，有轻度渗血为度。涂药方法同前；另一侧作对照。给药24小时后，用湿纱布洗去药物；分别记录1、24、48及72小时给药部位出现红斑和水肿的情况。
2)皮肤刺激反应的评定标准：
无刺激(-)：无异常所见；轻度刺激(+)：充血、红斑；中度刺激(++)：红斑，少量出血点，水肿，少量血疹、小水疱形成；严重刺激(+++)：红肿、皮下出血、水肿、小水疱合并大小疱、糜烂、溃疡形成。
结果见表5，给药组均未出现红斑和水肿的情况，本发明喷剂无皮肤刺激作用。
表5皮肤刺激实验结果
| 动物编号 | 给药组 | 对照组 |
| 1 | - | - |
| 2 | - | - |
| 3 | - | - |
| 4 | - | - |
| 5 | - | - |
| 6 | - | - |
实施例11皮肤过敏试验
豚鼠40只，雌雄各半，体重250-330克。将动物随机分为4组，每组10只。(1)阴性对照组，(2)按实施例1制得的本发明喷剂，(3)赋形剂组(所用赋形剂为甘油)，(4)1％2，4-二硝基氯苯(上海试剂一厂生产)组(阳性对照组)。实验前24小时在豚鼠背部左侧，仔细剪出22cm的去毛区。按皮肤涂抹法给药。致敏接触各给药组分别涂以0.2ml药液于去毛区，对照组涂予等量自来水持续6小时，试验第一天与第十四天以同样方式重复给药。第28天激发给药，用同样方法将各组药物分别涂于动物背部右侧去毛区，6小时后洗去受试物，即刻观察，然后于24、48及72小时再次观察皮肤病过敏反应情况，按表6-A标准进行评分并按表6-B评价受试药物的致敏强度，试验结果见表7。
表7的结果表明，药物2，4-二硝基氯苯在激发给药6小时后即出现明显轻、重度红斑，轻度水肿，致敏率100％，而其他各给药组均无过敏反应。
表6-A皮肤过敏反应评分标准
| 皮肤反应 | 分值 |
| 红斑形成：无红斑轻度红斑，勉强可见中度红斑，明显可见重度红斑紫红色红斑并有焦痂水肿形成：无水肿轻度水肿，勉强可见中度水肿，明显可见重度水肿皮肤隆起1mm，轮廓清晰严重水肿，皮肤隆起1mm以上并有扩大或水泡或破溃 | 0123401234 |
| 总分 | 8 |
表6-B皮肤致敏性评价标准
| 致敏率(％) | 皮肤致敏性评价 |
| 0-10 | 无致敏性 |
| 11-30 | 轻度致敏性 |
| 31-60 | 中度致敏性 |
| 61-80 | 高度致敏性 |
| 81-100 | 极度致敏性 |
表7对豚鼠皮肤过敏反应的影响
Claims (1)
1.一种防治皮肤损伤与抗感染的喷剂的制备方法，其特征在于，按照如下步骤进行：
取蜂胶16g，加入95％乙醇100ml，充分搅拌，再边搅拌边加入吐温-80，132ml，充分搅拌，然后缓慢加入蒸馏水768ml，得到溶液1；精密称取甘草酸单铵盐50g，90℃高温溶于1000ml的蒸馏水中；溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液1，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液2；最后称取2g冰片溶于11ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液2中，调节溶液的PH值约为5，装瓶后即得喷剂；
或者，取蜂胶24g，加入95％乙醇330ml，充分搅拌；再边搅拌边加入吐温-80，95ml，充分搅拌，然后缓慢加入蒸馏水550ml，得到溶液3；精密称取甘草酸单铵盐50g，90℃高温溶于1000ml的蒸馏水中；溶解后冷却至45℃，边搅拌溶液3，边缓慢加入上述甘草酸单铵盐溶液中，得到溶液4；最后称取2g冰片溶于20ml的95％乙醇中，将其缓缓加入到溶液4中，调节溶液的PH值约为4.5，装瓶后即得喷剂。
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