CN101570581A - 一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法 - Google Patents

一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法 Download PDF

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刘晓宇
孔娟
王蕊霞
孙灵慧
钱珍
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Abstract

本发明公开了一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法，涉及一种天然产物提取技术。本发明包括以下步骤：①把采集来的新鲜葛根切片、烘干和粉碎得葛根粉；②将葛根粉投料浸提脱脂得脱脂葛根粉；③将脱脂葛根粉水浴、冷却后离心得上清液；④将上清液进行真空旋转蒸发，得静置液；⑤将静置液离心，沉淀物即葛根多糖；上清液进行减压浓缩，得浓缩液即葛根黄酮；⑥分别冷冻干燥后储存。⑦根据标准曲线计算出多糖和黄酮的含量。本发明方法简便，生产成本低；提取率高；产品中活性成分含量高，质量好；环保，对环境污染小。

Description

一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法
技术领域
本发明涉及一种天然产物提取技术，尤其涉及一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法，并包含对葛根多糖和黄酮含量及结构进行分析。
背景技术
葛根为豆科葛属多年生落叶藤本植物的肥大块根，是传统的药食两用植物，产于我国大部分地区。
葛根富含人体必需氨基酸13种，尤其是人体不能合成的必需氨基酸含量更高。葛根主要有效活性成分有异黄酮、葛根素、葛根苷和生物碱等物质，铁、钙、硒、锗、锰等人体必需的微量元素也很丰富。葛根及其制品有清火、排毒、降血脂、降血压、降胆固醇、降血糖、减肥、预防老年痴呆和预防心脑血管疾病之功效。现代医学研究，葛根异黄酮具有防癌抗癌和雌激素样作用，可促进女性丰胸和美容，尤其对中年妇女和绝经期妇女美容保健作用明显。葛根药用价值极高，称之为“江南人参”，国际上素有“亚洲人参”之美誉。常饮葛片茶能调节人体机能，增强体质和提高机体抗病能力，抗衰延年，永保青春活力。
《中国药典方》2002年版一部及《卫生部药品标准》中药成方制剂收载含葛根的复方制剂140余种；主要有中药片剂、胶囊、冲剂、糖浆、针剂等；如愈风宁心片、感冒清热冲剂、小儿腹泻宁糖浆、葛根素葡萄糖注射液等。用于愈风宁心片的葛根提取物的特征在于其成份中含有40mg/g葛根素。
葛根提取物葛根素(黄酮)的生产工艺有很多，国内外多采用有机溶剂法，这些工艺的共同特点是在生产过程中使用大量的有机溶剂，如乙醇、甲醇等。工艺的优点是产品质量好且稳定，缺点是生产成本高，生产工艺安全性差，对环境影响大。
目前，国内外对葛根提取物的研究仅集中在葛根黄酮这一有效成分的分析，而对于葛根多糖的研究报道极少。而且国内外对葛根黄酮的提取大部分均为使用有机溶剂，这种方法成本高而且对产品的质量有影响。
发明内容
本发明的目的就在于克服现有技术存在的问题和不足，提供一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法。
本发明的目的是这样实现的：
综合提取葛根多糖和黄酮后，滤渣再用有机溶剂提取黄酮，实验证明两次水提后滤渣中已基本不含黄酮。
具体而言，本发明包括以下步骤：
①把采集来的新鲜葛根切片后放入60℃烘箱中烘干，粉碎过60目筛得葛根粉；
②将葛根粉按原料与石油醚之质量体积比为1∶3，投料浸提脱脂，浸提温度70℃，处理2h，然后抽滤，滤饼再加入相同体积的石油醚进行第二次脱脂，滤饼自然挥干石油醚后得脱脂葛根粉；
③将脱脂葛根粉按料液质量比1∶25加入水，于95℃中水浴2h，冷却后离心得上清液，再对滤渣按上述条件进行第二次提取得上清液，合并前后两次上清液；
④将上清液于65℃下进行真空旋转蒸发，浓缩后按体积比1∶3加入95％乙醇低温静置过夜，得静置液；
⑤将静置液按10000r/min离心，沉淀物即葛根多糖；上清液于45℃进行减压浓缩，得浓缩液即葛根黄酮；
⑥将葛根多糖和葛根黄酮分别冷冻干燥后储存；
⑦根据标准曲线计算出多糖和黄酮的含量。
本发明具有下述优点和积极效果：
1、方法简便，生产成本低；
2、提取率高，多糖提取率为20.8％，黄酮提取率为6.4％；
3、产品中活性成分含量高，质量好；
4、环保，因为提取过程中不使用有机溶剂，对环境污染小；
5、适用于综合提取葛根多糖和黄酮。
附图说明
图1是葡萄糖标准曲线；
图2是葛根素标准曲线；
图3是葛根提取物葛根多糖(peuraria polysaccharides)的紫外图谱；
图4是葛根提取物葛根黄酮(peuraria flavonoid)的紫外图谱；
图5是葛根提取物葛根多糖(peuraria polysaccharides)的红外图谱；
图6是葛根提取物葛根黄酮(peuraria flavonoid)的红外图谱。
具体实施方式
以下结合附图和实施例，对本发明作进一步的详细描述。
一、有关步骤
1、关于步骤②：
所述的萃取剂石油醚的沸程为60-90℃。
2、关于步骤⑥：
所述的冷冻干燥的方法为真空冷冻干燥。
3、关于步骤⑦
所述的多糖标准曲线由不同浓度的葡萄糖溶液在490nm处不同的吸光度绘制而成；葛根素标准曲线由不同浓度的葛根素溶液在250nm处测得的不同吸光度绘制而成。
根据标准曲线法测定提取的葛根粗多糖和黄酮中多糖和葡萄糖的含量，标准曲线的绘制方法如下：
分别吸取0.5mg/ml的葡萄糖标准液10、20、40、60、80、100μL，分别置于具塞试管中，各加蒸馏水使体积为2.0mL，再加苯酚试液1.0mL，摇匀，迅速滴加浓硫酸5.0mL，摇匀后放置30min，另以蒸馏水2mL加苯酚和硫酸，同上做空白对照。于490nm处测吸光度，绘制标准曲线(见图1)，将水提醇沉得到的多糖配成适当浓度按上述方法测定吸光值，根据吸光值求得多糖含量。
精密吸取溶解在95％乙醇(AR)中的0.2mg/ml的葛根素标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置10mL容量瓶中，以1.0mL95％乙醇精密加水至10mL，摇匀。同时以1.0mL95％乙醇加水至10mL作空白对照，在250nm波长处测定吸收度绘制标准曲线(见图2)，将水提醇沉得到的黄酮配成适当浓度按上述方法测定吸光值，根据吸光值求得黄酮含量。
采用本发明的葛根提取物，葛根粗黄酮中葛根素的含量≥13.4％，葛根粗多糖中多糖含量≥67.4％，无萃取剂石油醚和乙醇残留物。
二、实施例
实施例1
称取干燥粉碎的葛根粉3g，按料液比1∶25加入75ml蒸馏水，于95℃水浴中提取2个小时，待提取液冷却后离心20min，转速为4000r/min，滤出上清液，沉淀按上述料液比加入蒸馏水进行第二次提取，过程同上，合并两次上清液，在65℃下真空浓缩，得到葛根水提物的浓缩液，在浓缩液中按1∶3(v/v)加入95％乙醇，低温静置过夜，于10000r/min转速下离心10min，回收沉淀和上清液，上清液于45℃下真空浓缩。将离心得到的沉淀和上清液浓缩液进行冷冻干燥，得到葛根粗多糖0.89g和葛根粗黄酮1.22g。
检验结果：葛根粗多糖中多糖含量为67.4％，葛根粗黄酮中葛根素含量为13.4％。
实施例2
称取干燥粉碎的葛根粉5g，按料液比1∶30加入150ml蒸馏水，于90℃水浴中提取2.5个小时，待提取液冷却后离心20min，转速为4000r/min，滤出上清液，沉淀按上述料液比加入蒸馏水进行第二次提取，过程同上，合并两次上清液，在65℃下真空浓缩，得到葛根水提物的浓缩液，在浓缩液中按1∶3(v/v)加入95％乙醇，低温静置过夜，于10000r/min转速下离心10min，回收沉淀和上清液，上清液于45℃下真空浓缩。将离心得到的沉淀和上清液浓缩液进行冷冻干燥，得到葛根粗多糖1.38g和葛根粗黄酮2.5g。
检验结果：葛根粗多糖中多糖含量为65％，葛根粗黄酮中葛根素含量为12.1％。
实施例3
称取干燥粉碎的葛根粉10g，按料液比1∶20加入200ml蒸馏水，于100℃水浴中提取3个小时，待提取液冷却后离心20min，转速为4000r/min，滤出上清液，沉淀按上述料液比加入蒸馏水进行第二次提取，过程同上，合并两次上清液，在65℃下真空浓缩，得到葛根水提物的浓缩液，在浓缩液中按1∶3(v/v)加入95％乙醇，低温静置过夜，于10000r/min转速下离心10min，回收沉淀和上清液，上清液于45℃下真空浓缩。将离心得到的沉淀和上清液浓缩液进行冷冻干燥，得到葛根粗多糖3.31g和葛根粗黄酮4.68g。
检验结果：葛根粗多糖中多糖含量为66.4％，葛根粗黄酮中葛根素含量为12.6％。
三、测试结果分析
1、紫外图谱分析
如图3，得到的葛根多糖在192nm处会呈现特征吸收峰，为典型的多糖紫外吸收图谱。260nm处有核酸特征吸收峰，280nm处未见蛋白质特征吸收峰出现。
如图4，得到的黄酮在250nm处会呈现特征吸收峰，为典型的黄酮紫外吸收图谱，此图谱与葛根素标品紫外吸收图谱基本一致。
2、红外图谱分析
如图5，葛根多糖具有一般多糖在红外光谱图中的特征性结构：3500cm-1-3000cm-1的宽峰是糖类O-H的伸缩振动峰，也包括-NH2基团中N-H键的谱带吸收区，且宽峰性状为典型的-COOH峰形。在3000cm-1-2800cm-1的一组峰是糖类C-H伸缩振动，1440cm-1-1395cm-1的一组峰是羧基-COOH中C-O的伸缩振动，由这两组峰则可以初步判断这种化合物为糖类化合物。
如图6，葛根黄酮具有葛根素在红外光谱图中的特征性结构：3363cm-1峰是O-H的伸缩振动，3000-2700cm-1峰是饱和C-H的伸缩振动，1724cm-1是C＝O的伸缩振动峰，1627cm-1，1515cm-1峰是苯环的骨架振动，1264cm-1是缩醛C-O-C的振动吸收峰，其余1000cm-1以下的峰是C-H的变形振动峰，本产品的红外光谱图与药典光谱集中葛根素红外光谱图基本一致。

Claims (4)

1、一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法，其特征在于包括以下步骤：
①把采集来的新鲜葛根切片后放入60℃烘箱中烘干，粉碎过60目筛得葛根粉；
②将葛根粉按原料与石油醚之质量体积比为1∶3，投料浸提脱脂，浸提温度70℃，处理2h，然后抽滤，滤饼再加入相同体积的石油醚进行第二次脱脂，滤饼自然挥干石油醚后得脱脂葛根粉；
③将脱脂葛根粉按料液质量比1∶25加入水，于95℃中水浴2h，冷却后离心得上清液，再对滤渣按上述条件进行第二次提取得上清液，合并前后两次上清液；
④将上清液于65℃下进行真空旋转蒸发，浓缩后按体积比1∶3加入95％乙醇低温静置过夜，得静置液；
⑤将静置液按10000r/min离心，沉淀物即葛根多糖；上清液于45℃进行减压浓缩，得浓缩液即葛根黄酮；
⑥将葛根多糖和葛根黄酮分别冷冻干燥后储存；
⑦根据标准曲线计算出多糖和黄酮的含量。
2、按权利要求1所述的一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法，其特征在于步骤②：
所述的萃取剂石油醚的沸程为60-90℃。
3、按权利要求1所述的一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法，其特征在于步骤⑥：
所述的冷冻干燥的方法为真空冷冻干燥。
4、按权利要求1所述的一种综合提取葛根多糖和黄酮的方法，其特征在于步骤⑦：
所述的多糖标准曲线由不同浓度的葡萄糖溶液在490nm处不同的吸光度绘制而成；葛根素标准曲线由不同浓度的葛根素溶液在250nm处测得的不同吸光度绘制而成。
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