CN101565422A

CN101565422A - 桑根酮c的提取精制方法及其应用

Info

Publication number: CN101565422A
Application number: CNA2008101049734A
Authority: CN
Inventors: 袁其朋; 吴爽
Original assignee: Beijing University of Chemical Technology
Current assignee: Beijing University of Chemical Technology
Priority date: 2008-04-25
Filing date: 2008-04-25
Publication date: 2009-10-28

Abstract

桑根酮C的提取精制方法及其应用属于药物化学和生物化学领域。现有酪氨酸酶抑制剂存在刺激性大、有副作用、化学性质不稳定、皮肤不易吸收，价格高等问题。本发明通过将桑白皮用50～80％的乙醇，于40～70℃回流提取2～3次，得到的浸膏，再用乙酸乙酯萃取浸膏2～4次；萃取物用体积比为8∶92～15∶85的甲醇和二氯甲烷混合液，作为洗脱剂进行硅胶柱层析分离，再经制备色谱精制得到具有抑制酪氨酸活性的，纯度为90％以上的桑根酮C。本发明确定了桑白皮中抑制酪氨酸最有效的成分桑根酮C，通过本发明方法提取精制的桑根酮C纯度为90％以上，具有显著的酪氨酸酶抑制活性，运用于化妆品行业具有非常广阔的发展前景。

Description

桑根酮C的提取精制方法及其应用

技术领域

本发明属于药物化学和生物化学领域，具体涉及桑根酮C(sanggenon C)的新活性，尤其涉及从桑白皮中提取和精制具有高效酪氨酸酶抑制活性的有效成分，及其在化妆品中的应用。

背景技术

在人和动植物体内，黑色素的生物合成都是发生在含有酪氨酸酶的一系列黑色素细胞中。酪氨酸酶(tyrosinase)是黑色素生物合成中必不可少的关键酶，黑色素细胞中的酪氨酸在酪氨酸酶的催化下，逐步生产多巴、多巴醌，最终形成黑色素(Robb，D.A.，1984.CopperProteins and Copper Enzymes.CRC Press，Bora raton，FL，pp.207-241)。当酪氨酸酶的合成量和催化活力升高，体内黑色素合成增多时，将导致皮肤色斑及黑色素瘤的形成。而通过抑制酪氨酸酶活性可以限制黑色素的形成，改善皮肤的色素沉着。

为治疗和预防黑色素过多而引发的皮肤病，各种各样的酪氨酸酶抑制剂应运而生。目前使用的酪氨酸酶抑制剂主要有对苯二酚(氢醌)、L-抗坏血酸(维生素C)、曲酸、超氧化物歧化酶(SOD)和熊果苷等化合物。对苯二酚(氢醌)及其衍生物刺激性大，易引起皮肤过敏和引发皮肤色素异常症等副作用；L-抗坏血酸(维生素C)、曲酸及其衍生物存在着化学性质不稳定，易变色，难于被皮肤吸收等缺陷；熊果苷作为一种天然的美白剂，得到了广泛的应用，但其对酪氨酸酶抑制作用效果不明显，而且价格高。因此寻找有效且对人体无毒副作用的酪氨酸酶抑制剂已成为药学和化妆品行业研究的趋向，具有良好的发展前景。

桑白皮，别名桑根皮、白桑皮、根皮，系桑科植物Morus alba L.除去外皮的根皮。桑白皮性寒味甘，入肺、脾二经，历来具有降血压、利尿利泻、杀菌消炎、止咳、抗浮肿、镇静抗惊厥、降血糖、抗病毒、抗癌、抗氧化等作用。而在1996年，韩国学者发表了对近100种植物萃取物对酪氨酸酶的抑制作用的研究证实了桑科植物的有效性(K.T.LEE.Biological screening of 100 plant extracts forcosmetic use(I)：inhibitory activities of tyrosinase and DOPAauto-oxidation.International Journal of Cosmetic Science，1997，19：291-298.0)，此后国内外也进行了研究探讨，但是都只局限于验证酪氨酸酶抑制作用效果，关于桑白皮中主要的酪氨酸酶抑制效果最好的化合物还没有确定和制备出来。

发明内容

本发明的目的是在于提供一种桑根酮C的提取精制方法与应用。

本发明所提供的桑根酮C的提取精致方法，包括以下步骤：

1)将桑白皮用50～80％的乙醇，于40～70℃回流提取2～3次，得到的浸膏；

2)用乙酸乙酯萃取浸膏2～4次，得到乙酸乙酯萃取物；

3)将酸乙酯萃取物用体积比为8∶92～15∶85的甲醇和二氯甲烷混合液，作为洗脱剂进行硅胶柱层析分离，再经制备色谱精制得到桑根酮C，具有如下化学结构式，经高效液相色谱分析其纯度在90％以上。

本发明所提供的桑根酮C具有显著的酪氨酸酶抑制活性，应用于化妆品中。

本发明确定了桑白皮中抑制酪氨酸最有效的成分桑根酮C；本发明提供的提取精制方法流程简单，桑根酮C的纯度达90％以上，具有显著的酪氨酸酶抑制活性，运用于化妆品行业具有非常广阔的发展前景。

以下结合具体实施方式对本发明作进一步描述。

具体实施方式

实施例

I桑根酮C的提取和精制

1)将5kg桑白皮用65％的乙醇在50℃回流提取2次，得到1.2kg浸膏；

2)浸膏加水后用乙酸乙酯萃取两次，得到38.5g乙酸乙酯萃取物；

3)乙酸乙酯萃取物再用甲醇和二氯甲烷混合液作为洗脱剂进行硅胶柱层析分离，层析条件为甲醇和二氯甲烷(配比为8∶92～15∶85)进行梯度洗脱，得到7.23g高效酪氨酸酶抑制剂，经制备色谱精制得到6.53g淡黄色粉末状化合物，与FeCl₃-EtOH显紫红色。

红外光谱(KBr压片)显示有羟基(3421.8cm^-1)，共轭羰基(1629.4cm^-1)，环氧键(1261.1cm^-1，799.1cm^-1)，双键(1680～1620cm^-1处的吸收被羰基吸收峰掩盖，838.7cm^-1)等特征吸收峰。紫外光谱显示在220，230，280，305nm处有最大吸收。质谱结果显示分子离子峰m/z为708(M⁺)。以上数据和化合物¹³C-NMR、¹H-NMR所示数据与已发表的文献数据一致(Nomura T，Fukai T，Hano Y，et al.Structure ofSanggenon C，A natural hypotensive diels-alder adduct fromChinese crude drug“SANG-BAI-PI”(morus root barks)[J].Heterocycles，1981，16(12)：2141-2148.)，鉴定其为桑根酮C。

II桑根酮C对酪氨酸酶抑制活性的测定

L-酪氨酸和酪氨酸酶为Sigma化学公司产品。

试验方法：

1)将桑根酮C用蒸馏水溶解，制成浓度为0.3mg/mL的溶液；

2)按表1准确吸取桑根酮C溶液、磷酸盐缓冲溶液(0.05M，pH＝6.8)和浓度为0.1mg/ml的L-酪氨酸溶液(L-酪氨酸作为底物)，充分混合，加入酪氨酸酶溶液(70U/mL)，于37℃水浴中保持10min后，在475nm处测定吸光度，共进行4组试验；

3)利用4组反应液的吸光度，按下式计算酪氨酸酶的相对抑制率I(％)，结果如表2所示。I(％)＝1-(C-D)/(A-B)，(A、B、C、D为各对应溶液体系在475nm下的吸光度值)。

以熊果苷对酪氨酸酶抑制活性为对比：熊果苷对酪氨酸酶抑制活性的测定同步骤1)、2)和3)，其对酪氨酸酶的相对抑制率I(％)如表2所示。

表1溶液体系组成表

抑制剂	相对抑制率(％)
抑制剂	相对抑制率(％)	桑根酮C	96.23
熊果苷	94.14	桑根酮C	96.23

表2酪氨酸酶抑制活性

III桑根酮C的新活性在化妆品中的应用

美白护肤霜

1)按处方进行备料：

桑根酮C：0.15g(纯度大于90％)

硬脂酸：15g

鲸蜡醇：6.5g

羊毛酯：1.5g

丙二醇：20g

三乙醇胺：1g

十二烷基硫酸钠：0.8g

对羟基苯甲酸乙酯：0.15g

蒸馏水：100ml

2)取羊毛酯、鲸蜡醇和硬脂酸混合，置于烧杯中加热熔化，得到油相；

3)取桑根酮C、丙二醇、三乙醇胺、十二烷基硫酸钠、对羟基苯甲酸乙酯和蒸馏水混合，置于烧杯中加热溶解，得到水相；

4)在70℃左右，边搅拌边将油相加到水相中，搅拌至冷凝，即得美白护肤霜。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明而并非限制本发明所描述的技术方案；因此，尽管本说明书参照上述的实施例对本发明已进行了详细的说明，但是，本领域的普通技术人员应当理解，仍然可以对本发明进行修改或等同替换；而一切不脱离发明的精神和范围的技术方案及其改进，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims

1、一种桑根酮C的提取精致方法，其特征在于，包括以下步骤：

2)用乙酸乙酯萃取浸膏2～4次，得到乙酸乙酯萃取物；

3)将酸乙酯萃取物用体积比为8∶92～15∶85的甲醇和二氯甲烷混合液，作为洗脱剂进行硅胶柱层析分离，再经制备色谱精制得到纯度为90％以上的桑根酮C。

2、根据权利要求1所述的桑根酮C的应用，其特征在于，桑根酮C作为酪氨酸酶抑制剂应用于化妆品中。