CN101564011A - 一种欧亚种无核葡萄高效育种技术 - Google Patents
一种欧亚种无核葡萄高效育种技术 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101564011A CN101564011A CNA2009101367977A CN200910136797A CN101564011A CN 101564011 A CN101564011 A CN 101564011A CN A2009101367977 A CNA2009101367977 A CN A2009101367977A CN 200910136797 A CN200910136797 A CN 200910136797A CN 101564011 A CN101564011 A CN 101564011A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- embryo
- medium
- mother liquor
- preparation
- eurasian
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 238000009395 breeding Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 claims abstract description 102
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 claims abstract description 32
- SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N indole-3-acetic acid Chemical compound C1=CC=C2C(CC(=O)O)=CNC2=C1 SEOVTRFCIGRIMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000005648 plant growth regulator Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 52
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 44
- 235000001537 Ribes X gardonianum Nutrition 0.000 claims description 36
- 235000001535 Ribes X utile Nutrition 0.000 claims description 36
- 235000016919 Ribes petraeum Nutrition 0.000 claims description 36
- 244000281247 Ribes rubrum Species 0.000 claims description 36
- 235000002355 Ribes spicatum Nutrition 0.000 claims description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 31
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 claims description 29
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- CGIDKJRJBMFXKV-UHFFFAOYSA-N 6-n'-benzylpurine-6,6-diamine Chemical compound N1=CN=C2N=CN=C2C1(N)NCC1=CC=CC=C1 CGIDKJRJBMFXKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 25
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 23
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 23
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 239000012869 germination medium Substances 0.000 claims description 19
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 19
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 claims description 15
- JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N indole-3-butyric acid Chemical compound C1=CC=C2C(CCCC(=O)O)=CNC2=C1 JTEDVYBZBROSJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 11
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 11
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 10
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 10
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 10
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 10
- 210000003323 beak Anatomy 0.000 claims description 9
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000037666 field crops Species 0.000 claims description 9
- 229960002523 mercuric chloride Drugs 0.000 claims description 9
- LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L mercury dichloride Chemical compound Cl[Hg]Cl LWJROJCJINYWOX-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 9
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 claims description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 6
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 6
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 6
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 6
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 6
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 6
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 claims description 6
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 229960000344 thiamine hydrochloride Drugs 0.000 claims description 6
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 claims description 6
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 6
- 229930191978 Gibberellin Natural products 0.000 claims description 5
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 5
- IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N gibberellic acid GA3 Natural products OC(=O)C1C2(C3)CC(=C)C3(O)CCC2C2(C=CC3O)C1C3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 239000003448 gibberellin Substances 0.000 claims description 5
- 230000004720 fertilization Effects 0.000 claims description 3
- 230000010152 pollination Effects 0.000 claims description 3
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 abstract description 10
- 235000009754 Vitis X bourquina Nutrition 0.000 abstract description 9
- 235000012333 Vitis X labruscana Nutrition 0.000 abstract description 9
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 abstract description 8
- 230000035784 germination Effects 0.000 abstract description 8
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 4
- 238000009402 cross-breeding Methods 0.000 abstract description 3
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 2
- 239000003617 indole-3-acetic acid Substances 0.000 abstract 2
- 241000219095 Vitis Species 0.000 abstract 1
- IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N gibberellin A3 Chemical compound C([C@@]1(O)C(=C)C[C@@]2(C1)[C@H]1C(O)=O)C[C@H]2[C@]2(C=C[C@@H]3O)[C@H]1[C@]3(C)C(=O)O2 IXORZMNAPKEEDV-OBDJNFEBSA-N 0.000 abstract 1
- 241000894007 species Species 0.000 abstract 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 17
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 17
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 17
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 8
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 6
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 6
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 4
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 3
- 239000010979 ruby Substances 0.000 description 3
- 229910001750 ruby Inorganic materials 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 239000005974 Chlormequat Substances 0.000 description 2
- 241000913821 Macolor niger Species 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 2
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 240000000560 Citrus x paradisi Species 0.000 description 1
- 235000007926 Craterellus fallax Nutrition 0.000 description 1
- 240000007175 Datura inoxia Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- JUZXDNPBRPUIOR-UHFFFAOYSA-N chlormequat Chemical compound C[N+](C)(C)CCCl JUZXDNPBRPUIOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000008775 paternal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002373 plant growth inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 1
- 230000014284 seed dormancy process Effects 0.000 description 1
- 230000007226 seed germination Effects 0.000 description 1
- 230000035040 seed growth Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Abstract
本发明涉及式一种欧亚种无核葡萄高效育种技术，它是在无核葡萄在开花后30～50d，摘取葡萄幼果，在无菌条件下取出胚珠，胚接种在含有不同水平植物生长调节剂赤霉素酸(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、6－苄氨基腺嘌呤(6－BA)的MS培养基上进行胚挽救。使用本发明的平均胚发育率由背景技术公布的专利的8.3～11.9％提高到84％，萌发率达到75.33％，成苗率达到74.17％，并且本申请得到的无核葡萄的胚挽救技术通过提高无核葡萄的胚发育率与萌发率，增加后代的成苗率，能够较容易得到更多的杂交后代，增大无核葡萄杂交育种的亲本选择范围，加速无核葡萄新品种育种进程，提高无核葡萄育种效率。
Description
技术领域
本发明涉及式一种欧亚种无核葡萄高效育种技术，属于植物育种技术领域。
背景技术
1、公开号CN 101238791 A、名称“一种提高无核葡萄育种效率的技术”，它是将一种植物生长抑制剂类物质矮壮素，或细胞分裂素类物质6-BA溶解配制成的药剂，在花前10～20天喷施到花穗上，在花后40～50天摘取葡萄果粒，取出胚珠进行胚挽救，使用本发明的胚发育率无核白由0～4.4％提高至8.3～11.9％；森田尼无核由0.5～2.5％提高到1.8～21.9％；火焰无核由7.1～17.1％提高到14.1～25.4％。
2、无核葡萄的合子胚在发育过程中败育而不能发育成正常的种子，因而常规育种只能以无核品种作父本杂交选育无核葡萄品种，但后代中无核几率低(0～15.9％)，育种效率低下。在亲本选择方面，不同父本胚萌发及成苗率差异显著。在胚珠接种时期方面，由于不同品种、不同年份、不同生态条件及部位，胚珠的败育期存在较大差异，使胚培养的适宜接种时期也因品种而异。在幼胚的取材时间上，采取过早，幼胚太小，难以成活；采取时间过晚，幼胚已经夭折，也不能达到培养目的。
发明内容
设计目的：提供一种技术操作相对简便、成本较低、并且无核葡萄育种效率较高的一种欧亚种无核葡萄高效育种技术。
设计方案：本申请使用植物生长调节剂调控植物生殖器官的生长发育进程，利用胚挽救技术，成功地克服无核葡萄做为母本进行有性杂交得不到种子的困难。通过假单性结实类型的欧亚种无核品种，在其合子胚败育之前进行人工离体培养，阻止幼胚的败育，最终形成完整的植株，是一种高效的无核葡萄育种技术。
影响无核葡萄胚发育率的原因主要有两方面：一方面是基因型的影响，不同基因型形成合子胚的能力以及胚发育的大小、数目有很大差异；另一方面是胚珠离体培养下的条件，包括培养基的种类、激素种类及浓度、接种时期、培养方式等等。
满足幼胚离体培养的营养极为重要，选择适宜的培养基是胚培养的基础。果树组织培养中应用的基本培养基很多，大致可以分为三种类型：高盐型(如MS培养基)、中盐型(如Nitsch+Nitsch培养基)和低盐型(如White培养基)。不同的器官及不同的分化时期要求用不同的培养基。每种培养基都包括矿质营养和有机营养，使用时常添加激素。人们根据自己不同的培养目的和需要，进行培养基的选择并加以改进。
在种子的发育过程中经常受到激素的调节。大量实验表明，在未成熟种子中含有各种激素。并且在不同的发育阶段，有的激素产生而有的激素消失，有的浓度或存在型态发生变化。各种激素的消长变化，其功能大致有以下四个方面：(1)控制果实的生长与发育；(2)控制干物质在果实中的积累；(3)控制种子本身的发育；(4)控制种子萌发与幼苗生长。不同的无核葡萄品种对激素的敏感程度有显著的差异，并且这种敏感程度随胚的发育程度不同而变化，胚的发育程度越高，对激素的要求越不严格。由于不同品种对激素的敏感性不同而附加不同的激素。这些激素同时还能抑制和打破种子休眠，削弱和清除种皮障碍，显著缩短胚的萌发时间，提高胚的成苗率。进行胚培养时认为在培养基中附加0.5mg·ml-1的GA3、IAA以及6-BA对本发明的成功起了决定性的作用。
无核葡萄胚培养技术，无疑使无核葡萄有性杂交组合方式更为丰富，从而大大提高了无核葡萄品种的选育效果。然而，胚培养无论在技术和费用要求都很高，从胚珠培养到出苗，需时较长，而且在此期间严格要求无菌操作及培养，这就需要很高的专业技术水平的人进行这项工作，因而在普及上受到一定的限制。
技术方案：一种欧亚种无核葡萄高效育种技术，(1)花期常规授粉受精，花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.09～0.11％升汞浸泡8～12min，然后无菌水漂洗4～5次；(2)在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种在含有不同水平植物生长调节剂赤霉素酸(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)的胚培养培养基上进行胚挽救；(3)胚挽救的条件：将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，再转入培养室中培养30d，经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍；(4)无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发，萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗，将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗，每月更换一次新鲜培养基；(5)试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田。
本发明与背景技术相比，一是操作简单，成本降低，显著提高了无核葡萄胚挽救的幼胚发育率、萌发率以及成苗率，能得到更多的杂交后代；二是以无核葡萄品种做母本，后代无核性状出现的比率大幅度增高，大大增加了无核葡萄杂交育种的亲本选择范围，增加亲本选配的成功率，加速无核葡萄新品种的选育进程，是一种高效无核葡萄育种技术；三是对6个欧亚种无核葡萄品种进行胚培养时试验了不同培养基和激素的配方，在胚培养、胚萌发以及成苗培养基都使用MS培养基，效果最好，而且母液配制与储存方便，节约药品与材料；三是不需要花前10～20d用50～500mg·ml-1的矮壮素或者10～100mg·ml-1的6-BA溶液处理，既节约了价格昂贵的外源激素类药品的使用，减少用工成本，同时避免了外源激素对葡萄植株以及果品质量的影响，减小污染，尤其避免对人类健康的潜在或者不明影响。
具体实施方式
实施例1：一种欧亚种无核葡萄高效育种技术技术，具体包括下列步骤：(1)花期常规授粉受精，花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次，(2)在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种在含有不同水平植物生长调节剂赤霉素酸(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)的胚培养培养基上进行胚挽救。(3)胚挽救的条件：将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，再转入培养室中培养30d。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。(4)无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。(5)试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田。
所述胚挽救培养基是：大量元素为：KNO3 1900mg·L-1，NH4NO3 1650mg·L-1，KH2PO4 170mg·L-1，MgSO4·7H2O 370mg·L-1，CaCl2·2H2O 440mg·L-1；微量元素为：KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1；铁盐为：Na2·EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1；有机物为：肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg·L-1，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg·L-1，烟酸(VB5或VPP)0.5mg·L-1。附加植物生长调节剂：赤霉素酸(GA3)0.5mg·L-1，吲哚乙酸(IAA)1.0mg·L-1，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg·L-1，蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，pH＝5.8。
所述胚萌发培养基是：大量元素为：KNO3 950mg·L-1，NH4NO3 825mg·L-1，KH2PO485mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，CaCl2·2H2O 220mg·L-1；微量元素为：KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1；铁盐为：Na2·EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1；有机物为：肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg L-1，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg·L-1，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg·L-1，烟酸(VB5或VPP)0.5mg·L-1。附加植物生长调节剂：α-萘乙酸(NAA)0.4mg·L-1，吲哚乙酸(IAA)0.4mg·L-1，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.6mg·L-1，蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，pH＝5.8。
所述成苗培养基是：大量元素为：KNO3 950mg·L-1，NH4NO3 825mg·L-1，KH2PO4 85mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，CaCl2·2H2O 220mg·L-1；微量元素为：KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1；铁盐为：Na2·EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1；有机物为：肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg·L-1，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg·L-1，烟酸(VB5或VPP)0.5mg·L-1。附加植物生长调节剂：吲哚丁酸(IBA)0.2mg·L-1，蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，pH＝5.8。
所述的欧亚种无核葡萄品种是无核白葡萄、优无核葡萄(超级无核、黄提)、奇妙无核葡萄(黑美人)、红宝石无核(鲁贝)葡萄、克瑞森无核(绯红无核、淑女红)葡萄、皇家秋天(无核皇后)葡萄。
所述的6-BA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 6-BA母液。称取50mg6-BA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 6-BA母液，4℃冷藏保存。配制1L胚挽救培养基时，用移液管或移液枪量取1ml母液即可；配制1L胚萌发培养基时，用移液管或移液枪量取1.2ml母液即可.
所述的GA3溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 GA3母液。称取50mgGA3，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 GA3母液，4℃冷藏保存。配制1L胚挽救培养基时，用移液管或移液枪量取1ml母液即可。
所述的IAA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 IAA母液。称取50mgIAA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 IAA母液，4℃冷藏保存。配制1L胚挽救培养基时，用移液管或移液枪量取2ml母液即可；配制1L胚萌发培养基时，用移液管或移液枪量取800μl母液即可。
所述的NAA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 NAA母液。称取50mgNAA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 NAA母液，4℃冷藏保存。配制1L胚萌发培养基时，用移液管或移液枪量取800μl NAA母液即可。
所述的IBA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 IBA母液。称取50mgIBA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 IBA母液，4℃冷藏保存。配制1L成苗培养基时，用移液枪量取400μl IBA母液即可。
所述的胚珠在MS培养基中低温处理的条件为：温度5～8℃，时间为60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
所述的发育胚在萌发培养基中以及幼苗在成苗培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
根据无核葡萄胚发育特点以及无核葡萄离体培养下的有关激素、培养方式、接种时期、成苗途径等多方面内容，采用MS固体或液体培养基附加不同激素配比，于花后30～50d接种，使无核葡萄品种胚发育率平均达到84％，胚萌发率占发育胚的60％～92％，成苗率占萌发胚的50％～98％，从而使无核葡萄胚培养技术更接近于实用化。
例1：无核白葡萄进入始花期前三天去雄套袋。选择气温在20～30℃，无风的晴朗早晨(6:00~7:00开始)。去雄时用尖头小镊子将花冠及雄蕊一起除去。既要将雄蕊除净，又要避免碰伤柱头。为防止去雄时花粉落到柱头上造成自交，每次去雄后都用清水冲洗柱头，十后立即套袋。每穗100粒以上。每个品种去雄100穗。每个品种至少要选20株生长健壮的植株做母本。杂交后用常规技术管理。
花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上无菌条件下，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次。
在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种胚培养培养基上进行胚挽救。
将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
再转入培养室中培养30d，温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。
无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光照强度2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田。
例2：优无核葡萄(超级无核、黄提)进入始花期前三天去雄套袋。选择气温在20～30℃，无风的晴朗早晨(6:00～7:00开始)。去雄时用尖头小镊子将花冠及雄蕊一起除去。既要将雄蕊除净，又要避免碰伤柱头。为防止去雄时花粉落到柱头上造成自交，每次去雄后都用清水冲洗柱头，干后立即套袋。每穗100粒以上。每个品种去雄100穗。每个品种至少要选20株生长健壮的植株做母本。杂交后用常规技术管理。
花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上无菌条件下，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次，
在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种胚培养培养基上进行胚挽救。
将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
再转入培养室中培养30d，温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。
无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田
例3：奇妙无核葡萄(黑美人)进入始花期前三天去雄套袋。选择气温在20～30℃，无风的晴朗早晨(6:00~7:00开始)。去雄时用尖头小镊子将花冠及雄蕊一起除去。既要将雄蕊除净，又要避免碰伤柱头。为防止去雄时花粉落到柱头上造成自交，每次去雄后都用清水冲洗柱头，干后立即套袋。每穗100粒以上。每个品种去雄100穗。每个品种至少要选20株生长健壮的植株做母本。杂交后用常规技术管理。
花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上无菌条件下，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次。
在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种胚培养培养基上进行胚挽救。
将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
再转入培养室中培养30d，温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。
无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光照强度2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田
例4：克瑞森无核(绯红无核、淑女红)葡萄进入始花期前三天去雄套袋。选择气温在20～30℃，无风的晴朗早晨(6:00~7:00开始)。去雄时用尖头小镊子将花冠及雄蕊一起除去。既要将雄蕊除净，又要避免碰伤柱头。为防止去雄时花粉落到柱头上造成自交，每次去雄后都用清水冲洗柱头，干后立即套袋。每穗100粒以上。每个品种去雄100穗。每个品种至少要选20株生长健壮的植株做母本。杂交后用常规技术管理。
花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上无菌条件下，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次。
在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种胚培养培养基上进行胚挽救。
将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
再转入培养室中培养30d，温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。
无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光照强度2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田
例5：红宝石无核(鲁贝)葡萄进入始花期前三天去雄套袋。选择气温在20～30℃，无风的晴朗早晨(6:00～7:00开始)。去雄时用尖头小镊子将花冠及雄蕊一起除去。既要将雄蕊除净，又要避免碰伤柱头。为防止去雄时花粉落到柱头上造成自交，每次去雄后都用清水冲洗柱头，干后立即套袋。每穗100粒以上。每个品种去雄100穗。每个品种至少要选20株生长健壮的植株做母本。杂交后用常规技术管理。
花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上无菌条件下，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次，
在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种胚培养培养基上进行胚挽救。
将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
再转入培养室中培养30d，温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。
无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光照强度2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田
例6：皇家秋天(无核皇后)葡萄进入始花期前三天去雄套袋。选择气温在20～30℃，无风的晴朗早晨(6:00~7:00开始)。去雄时用尖头小镊子将花冠及雄蕊一起除去。既要将雄蕊除净，又要避免碰伤柱头。为防止去雄时花粉落到柱头上造成自交，每次去雄后都用清水冲洗柱头，干后立即套袋。每穗100粒以上。每个品种去雄100穗。每个品种至少要选20株生长健壮的植株做母本。杂交后用常规技术管理。
花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上无菌条件下，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.1％升汞浸泡10min，然后无菌水漂洗4～5次。
在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种胚培养培养基上进行胚挽救。
将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，空气湿度为60％左右，暗培养。
再转入培养室中培养30d，温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。。经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍。
无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发。萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗。将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗。每月更换一次新鲜培养基。培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光照强度2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田
以下是采用本发明的技术取得的结果，以进一步说明本发明在无核葡萄育种上的高效性。
| 品种 | 发育率 | 萌发率 | 成苗率 |
| 无核白 | 96.0±8.9 | 92.0±10.9 | 88.0±10.9 |
| 优无核葡萄 | 84.0±8.9 | 80.0±14.1 | 98.0±10.9 |
| 奇妙无核葡萄 | 88.0±10.9 | 76.0±16.7 | 76.0±8.9 |
| 克瑞森无核 | 92.0±10.9 | 76.7±9.1 | 72.0±10.9 |
| 红宝石无核 | 80.0±14.1 | 68.0±10.9 | 66.7±17.7 |
| 皇家秋天 | 64.0±8.9 | 60.0±14.1 | 50.0±16.7 |
| 平均 | 84 | 75.33 | 74.17 |
本申请得到的无核葡萄的胚挽救技术通过提高无核葡萄的胚发育率与萌发率，增加后代的成苗率，能够较容易得到更多的杂交后代，增大无核葡萄杂交育种的亲本选择范围，增加亲本选配的成功率，加速无核葡萄新品种育种进程，提高无核葡萄育种效率；操作简单，成本低，无健康安全隐患；而且以无核葡萄品种做母本，后代无核性状出现的比率大幅度增高，是一种高效无核葡萄育种技术。
需要理解到的是：上述实施例虽然对本发明作了比较详细的文字描述，但是这些文字描述，只是对本发明设计思路的简单文字描述，而不是对本发明设计思路的限制，任何不超出本发明设计思路的组合、增加或修改，均落入本发明的保护范围内。
Claims (10)
1、一种欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：
(1)花期常规授粉受精，花后30～50天摘取幼果，自来水下流水冲洗1hr，超净工作台上，将幼果用70％酒精浸泡1分钟，无菌水冲洗3次；再用0.09～0.11％升汞浸泡8～12min，然后无菌水漂洗4～5次；
(2)在无菌条件下切开果粒从浆果中取出胚珠，接种在含有不同水平植物生长调节剂赤霉素酸(GA3)、吲哚乙酸(IAA)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)的胚培养培养基上进行胚挽救；
(3)胚挽救的条件：将接种好的三角瓶，置于5～8℃培养箱中低温处理60d，再转入培养室中培养30d，经胚挽救发育的胚体积增大至2～5倍；
(4)无菌条件下将胚珠横切解剖，在胚珠的喙部，取出白色的发育胚，并转接入胚萌发培养基中，两周内即可萌发，萌发后的幼苗立即转入成苗培养基中进行培养，就得到完整的无核葡萄胚挽救试管苗，将其试管苗用成苗培养基分别进行继代扩繁至一定数量，得到不同株系的杂交苗，每月更换一次新鲜培养基；
(5)试管苗长出4～5片叶，将至三角瓶瓶口时，即可炼苗移栽，成活后定植到大田。
2、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述胚挽救培养基是：大量元素为：KNO3 1900mg·L-1，NH4NO3 1650mg·L-1，KH2PO4 170mg·L-1，MgSO4·7H2O 370mg·L-1，CaCl2·2H2O 440mg·L-1；微量元素为：KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2 H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1；铁盐为：Na2·EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1；有机物为：肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg·L-1，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg·L-1，烟酸(VB5或VPP)0.5mg·L-1。附加植物生长调节剂：赤霉素酸(GA3)0.5mg·L-1，吲哚乙酸(IAA)1.0mg·L-1，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.5mg·L-1，蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，pH＝5.8。
3、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述胚萌发培养基是：大量元素为：KNO3 950mg·L-1，NH4NO3 825mg·L-1，KH2PO4 85mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，CaCl2·2H2O 220mg·L-1；微量元素为：KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1；铁盐为：Na2·EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1；有机物为：肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg·L-1，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg·L-1，烟酸(VB5或VPP)0.5mg·L-1。附加植物生长调节剂：α-萘乙酸(NAA)0.4mg·L-1，吲哚乙酸(IAA)0.4mg·L-1，6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)0.6mg·L-1，蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，pH＝5.8。
4、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述成苗培养基是：大量元素为：KNO3 950mg·L-1，NH4NO3 825mg·L-1，KH2PO4 85mg·L-1，MgSO4·7H2O 185mg·L-1，CaCl2·2H2O 220mg·L-1；微量元素为：KI 0.83mg·L-1，H3BO3 6.2mg·L-1，MnSO4·4H2O 22.3mg·L-1，ZnSO4·7H2O 8.6mg·L-1，Na2MoO4·2H2O 0.25mg·L-1，CuSO4·5H2O 0.025mg·L-1，CoCl2·6H2O 0.025mg·L-1；铁盐为：Na2·EDTA 37.3mg·L-1，FeSO4·7H2O 27.8mg·L-1；有机物为：肌醇100mg·L-1，甘氨酸2mg·L-1，盐酸硫胺素(VB1)0.1mg·L-1，盐酸吡哆醇(VB6)0.5mg·L-1，烟酸(VB5或VPP)0.5mg·L-1。附加植物生长调节剂：吲哚丁酸(IBA)0.2mg·L-1，蔗糖30g·L-1，琼脂5g·L-1，pH＝5.8。
5、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述的6-BA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 6-BA母液，称取50mg 6-BA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 6-BA母液，4℃冷藏保存，配制1L胚挽救培养基时，用移液管或移液枪量取1ml母液即可；配制1L胚萌发培养基时，用移液管或移液枪量取1.2ml母液即可。
6、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述的GA3溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1GA3母液，称取50mg GA3，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 GA3母液，4℃冷藏保存，配制1L胚挽救培养基时，用移液管或移液枪量取1ml母液即可。
7、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述的IAA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 IAA母液，称取50mg IAA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 IAA母液，4℃冷藏保存，配制1L胚挽救培养基时，用移液管或移液枪量取2ml母液即可；配制1L胚萌发培养基时，用移液管或移液枪量取800μl母液即可。
8、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述的NAA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1NAA母液，称取50mg NAA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 NAA母液，4℃冷藏保存，配制1L胚萌发培养基时，用移液管或移液枪量取800μl NAA母液即可。
9、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述的IBA溶液时按照下列技术配制：先配制0.5mg·ml-1 IBA母液，称取50mg IBA，用2ml稀盐酸或95％乙醇溶液溶解，缓缓加入蒸馏水，不断搅拌，以免产生沉淀，定容至100ml，即为0.5mg·ml-1 IBA母液，4℃冷藏保存，配制1L成苗培养基时，用移液枪量取400μl IBA母液即可。
10、根据权利要求1所述的欧亚种无核葡萄高效育种技术，其特征是：所述的胚珠在培养基中低温处理的条件为：温度5～8℃，时间为60d，空气湿度为55～65％左右，暗培养；所述的发育胚在萌发培养基中以及幼苗在成苗培养基中培养，培养条件为：温度25±1℃，湿度50％～60％，光强2000～3000Lx，光照/黑暗为16h/8h。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101367977A CN101564011B (zh) | 2009-05-18 | 2009-05-18 | 一种欧亚种无核葡萄高效育种方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2009101367977A CN101564011B (zh) | 2009-05-18 | 2009-05-18 | 一种欧亚种无核葡萄高效育种方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101564011A true CN101564011A (zh) | 2009-10-28 |
| CN101564011B CN101564011B (zh) | 2011-12-14 |
Family
ID=41280509
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2009101367977A Active CN101564011B (zh) | 2009-05-18 | 2009-05-18 | 一种欧亚种无核葡萄高效育种方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101564011B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102349447A (zh) * | 2011-08-30 | 2012-02-15 | 新疆农业科学院园艺作物研究所 | 葡萄幼果两刀取胚法 |
| CN102577904A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-18 | 江苏沿海地区农业科学研究所 | 一种欧亚种葡萄嫁接苗在里下河粘土地定植方法 |
| CN104782474A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-07-22 | 浙江省农业科学院 | 一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法 |
| CN104988179A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-10-21 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 一种获得抗病毒无核葡萄的生物技术育种方法 |
| CN105850710A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-08-17 | 山东省葡萄研究院 | 无核葡萄快速育种方法 |
| CN106982736A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-07-28 | 李茂兰 | 一种葡萄组培苗的培育方法 |
| CN108029552A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-05-15 | 马鞍山市心洲葡萄专业合作社 | 一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法 |
| CN110402753A (zh) * | 2019-04-03 | 2019-11-05 | 新疆农业科学院园艺作物研究所 | 一种葡萄新品种快速培育的方法 |
| CN111149592A (zh) * | 2018-11-08 | 2020-05-15 | 甘肃盛世牡丹生物科技有限公司 | 一种紫斑牡丹的育种方法 |
-
2009
- 2009-05-18 CN CN2009101367977A patent/CN101564011B/zh active Active
Cited By (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102349447A (zh) * | 2011-08-30 | 2012-02-15 | 新疆农业科学院园艺作物研究所 | 葡萄幼果两刀取胚法 |
| CN102577904A (zh) * | 2012-01-18 | 2012-07-18 | 江苏沿海地区农业科学研究所 | 一种欧亚种葡萄嫁接苗在里下河粘土地定植方法 |
| CN102577904B (zh) * | 2012-01-18 | 2013-07-10 | 江苏沿海地区农业科学研究所 | 一种欧亚种葡萄嫁接苗在里下河粘土地定植方法 |
| CN104782474A (zh) * | 2015-03-27 | 2015-07-22 | 浙江省农业科学院 | 一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法 |
| CN104782474B (zh) * | 2015-03-27 | 2017-05-31 | 浙江省农业科学院 | 一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法 |
| CN104988179A (zh) * | 2015-06-30 | 2015-10-21 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 一种获得抗病毒无核葡萄的生物技术育种方法 |
| WO2017000089A1 (zh) * | 2015-06-30 | 2017-01-05 | 中国农业科学院郑州果树研究所 | 一种获得抗病毒无核葡萄的生物技术育种方法 |
| CN105850710A (zh) * | 2016-03-30 | 2016-08-17 | 山东省葡萄研究院 | 无核葡萄快速育种方法 |
| CN106982736A (zh) * | 2017-04-28 | 2017-07-28 | 李茂兰 | 一种葡萄组培苗的培育方法 |
| CN108029552A (zh) * | 2017-11-10 | 2018-05-15 | 马鞍山市心洲葡萄专业合作社 | 一种合理控制外源型添加物提高胚挽救无核葡萄育种的方法 |
| CN111149592A (zh) * | 2018-11-08 | 2020-05-15 | 甘肃盛世牡丹生物科技有限公司 | 一种紫斑牡丹的育种方法 |
| CN110402753A (zh) * | 2019-04-03 | 2019-11-05 | 新疆农业科学院园艺作物研究所 | 一种葡萄新品种快速培育的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101564011B (zh) | 2011-12-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101564011B (zh) | 一种欧亚种无核葡萄高效育种方法 | |
| CN105284620B (zh) | 一种特早熟桃杂交胚挽救成苗的方法 | |
| CN104273028B (zh) | 一种景天科植物快速离体繁殖的方法 | |
| CN102550405B (zh) | 一种杨树单倍体培育方法 | |
| CN101690461B (zh) | 一种制备植物三倍体植株的方法 | |
| CN110402753A (zh) | 一种葡萄新品种快速培育的方法 | |
| JP6050234B2 (ja) | ホップの雌雄性の制御法 | |
| CN102870681B (zh) | 月季试管苗试管内开花及雌蕊单性开花的方法及其培养基 | |
| CN106258956A (zh) | 一种铁皮石斛纯种繁育和野外移植方法 | |
| CN106417014B (zh) | 一种大花型兜兰育种与栽培方法 | |
| CN113475384B (zh) | 一种种间杂交培育玫瑰的方法 | |
| CN102239801A (zh) | 一种兰科植物试管内授粉及结实的方法 | |
| CN102986534A (zh) | 草莓防褐变专用初代培养基及其生产组培草莓苗的方法 | |
| CN101238791A (zh) | 一种提高无核葡萄育种效率的方法 | |
| CN105104182A (zh) | 一种玉米单倍体幼胚加倍的方法 | |
| CN100361569C (zh) | 制备植物单倍体胚和单倍体植株的方法 | |
| CN101946704A (zh) | 以未成熟种子为外植体的月季再生植株的方法 | |
| CN103392600A (zh) | 一种促进羽衣甘蓝顽固基因型小孢子胚胎发生的方法 | |
| CN109197423A (zh) | 一种甜瓜白粉病抗性的扦插育苗鉴定方法 | |
| CN104642107A (zh) | 一种霍山石斛组织培养繁殖方法 | |
| CN108207955A (zh) | 一种水稻开颖促进剂及其制备方法和应用 | |
| CN104871965A (zh) | 一种利用野生稻同时培育粳稻和籼稻的方法 | |
| CN102550406A (zh) | 一种诱导杨树愈伤组织分化的方法及分化培养基 | |
| CN105075852A (zh) | 水芹杂交育种方法 | |
| CN101347093B (zh) | 一种快速培育蓖麻温敏型隐性核不育单雌系的方法及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: HANGZHOU BLUE SKY LANDSCAPE CONSTRUCTION CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: HANGZHOU LANTIAN LANDSCAPE CONSTRUCTION GROUP CO., LTD., YUHANG BRANCH Effective date: 20140312 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: ADDRESS; FROM: 311121 HANGZHOU, ZHEJIANG PROVINCE TO: 310012 HANGZHOU, ZHEJIANG PROVINCE |
|
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20140312 Address after: Hangzhou City, Zhejiang province 310012 No. 535 Wensanlu Road laiyinda building 10 floor Patentee after: HANGZHOU BLUESKY LANDSCAPE CONSTRUCTION CO.,LTD. Address before: 311121, Yuhang Hangzhou District of Zhejiang City Zhongtai Township blue sky garden flowers and trees ecological garden Patentee before: Hangzhou Lantian Landscape Construction Group Co.,Ltd. Yuhang Branch |
|
| CP02 | Change in the address of a patent holder | ||
| CP02 | Change in the address of a patent holder |
Address after: Room 301-37, building 1, Nanhu building, Zhongtai street, Yuhang District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee after: HANGZHOU BLUESKY LANDSCAPE CONSTRUCTION CO.,LTD. Address before: Hangzhou City, Zhejiang province 310012 No. 535 Wensanlu Road laiyinda building 10 floor Patentee before: HANGZHOU BLUESKY LANDSCAPE CONSTRUCTION CO.,LTD. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |
Address after: 311121 room 301-37, building 1, Nanhu building, Zhongtai street, Yuhang District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee after: Hangzhou Lantian Garden Design and Construction Co.,Ltd. Address before: 311121 room 301-37, building 1, Nanhu building, Zhongtai street, Yuhang District, Hangzhou City, Zhejiang Province Patentee before: HANGZHOU BLUESKY LANDSCAPE CONSTRUCTION CO.,LTD. |
|
| CP01 | Change in the name or title of a patent holder |