CN101558765A - 一种防治烟草粉螟的生防菌剂 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种防治烟草粉螟的生防菌剂，属生物技术领域。该生防菌剂由如下工序制备：a.生产菌株为苏云金杆菌菌侏5，CGMCC NO.2895；b.将菌株5接种到牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，琼脂2.0％，氯化钠0.5％，pH8.0的试管斜面培养基上，30℃恒温培养2天，获得试管种子；c.将种子接种到装有玉米粉0.5％、黄豆粉2.0％、酵母粉0.15％、鱼粉0.25％、蛋白胨0.05％、磷酸二氢钾0.25％、碳酸钙0.05％和硫酸镁0.035％，消泡剂0.025％，pH7.5，其余为水的发酵罐中，在发酵温度30℃，通气量15％，搅拌速度150r/min的条件下发酵36h；d.培养液5℃下用离心机5000g离心20分钟，沉淀物室温冻干，粉碎即得生防菌剂。本发明的生物制剂具有使用安全、烟叶及环境污染低的优点，能够用于烟叶贮存中烟草粉螟的生物防治。
Description
技术领域：
本发明涉及一种防治烟草粉螟的生防菌剂。属微生物技术领域。
背景技术：
烟草粉螟Ephestia elutella(Hübner)，属鳞翅目螟蛾科。在烟叶仓库害虫中是仅次于烟草甲的仓贮害虫。烟草粉螟广泛分布于世界热带及温带地区，国内分布于辽宁、甘肃、云南、贵州、四川、湖南、湖北、河南及江苏等地。在云南，烟叶仓库害虫以烟草粉螟为害最重，资料统计表明，每年因这种害虫造成的贮烟量损失占总贮量的0.5％～1％。烟草粉螟以幼虫危害烟叶，成虫不吃食物。幼虫喜吃含糖高、尼古丁低的烤烟和香料烟。
目前，防治烟叶仓库害虫主要应用熏蒸剂(如磷化铝)薰蒸。但是近年来，国内外对环境保护日益重视，要求减少和禁止使用剧毒薰蒸剂的呼声高涨，氰化氢、溴甲烷、磷化铝等已相继被禁用。在烟叶仓库中使用磷化铝，由于操作不当易造成火灾，且仓库需要良好的密封性能。由于人类对环境保护及自身健康意识的增强，生物防治已成为人们研究的热点。
发明内容：
本发明的主要目的在于克服现有技术之不足，而提供一种使用安全、烟叶及环境污染低的防治烟草粉螟的生防菌剂，为烟叶的贮存提供技术支持。
本发明采用的是苏云金杆菌科尔默亚种Bacillus thuringiensis subsp.colmer菌株5，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院；保藏日期：2009年2月6日；保藏登记入册的编号CGMCCNO.2895。菌株5属于苏云金杆菌，系本发明人从大量复烤烟叶里分离出的苏云金杆菌中筛选出来的，对烟草粉螟具有较好防治效果。本发明人通过13项生理生化试验结果与已知的29个苏云金杆菌亚种的生理生化指标比较，鉴定为科尔默亚种colmer，血清型H21。
本发明的生物菌剂经如下工艺制成：
试管种子培养：将菌株5接种到试管斜面培养基上，试管斜面培养基(重量百分比)配方为：牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，琼脂2.0％，氯化钠0.5％，pH8.0；30℃恒温培养2天，获得试管种子。
液体发酵：采用试管培养的苏云金杆菌菌株5原种，按三角摇瓶→种子罐→发酵罐的三级工艺培养。在30L发酵罐中，装入20L液体发酵培养液，液体培养基(重量百分比)配方为：玉米粉0.5％、黄豆粉2.0％、酵母粉0.15％、鱼粉0.25％、蛋白胨0.05％、磷酸二氢钾0.25％、碳酸钙0.05％和硫酸镁0.035％、0.025％植物油作消泡剂，初始pH值为7.5。经0.05mpa灭菌30分钟，冷却至室温接入1.8L菌株5液体种子，接种量为9％(体积比)，发酵温度为30℃，通气量为15％(体积比)，搅拌速度为150r/min，发酵时间为36h。
制备生防菌剂：将经液体发酵后的培养液在5℃温度下，用高速离心机5000g离心20分钟，去除上清液→离心后的沉淀物用冻干超滤仪在室温下冻干→粉碎成粉得到生防菌剂，生防菌剂(粉剂)的活芽孢数为4.76×1010个/ml。
本发明的生防菌剂具有使用安全、烟叶及环境污染低的优点，能广泛用于烟叶贮存中烟草粉螟的生物防治。
具体实施方式：
一、生防菌剂的制备
本发明的生物菌剂经如下工艺制成：
试管种培养：将菌株5接种到试管斜面培养基上，试管斜面培养基(重量百分比)配方为：牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，琼脂2.0％，氯化钠0.5％，pH8.0；30℃恒温培养2天，获得试管种。
液体发酵：采用试管培养的苏云金杆菌菌株5原种，按三角摇瓶→种子罐→发酵罐的三级工艺培养。在30L发酵罐中，装入20L液体发酵培养液，液体培养基(重量百分比)配方为：玉米粉0.5％、黄豆粉2.0％、酵母粉0.15％、鱼粉0.25％、蛋白胨0.05％、磷酸二氢钾0.25％、碳酸钙0.05％和硫酸镁0.035％，0.025％植物油作消泡剂，初始pH值为7.5。经0.05mpa灭菌30分钟，冷却至室温接入1.8L菌株5液体种子(接种量为9％)，发酵温度为30℃，通气量为15％，搅拌速度为150r/min，发酵时间为36h。
制备生防菌剂：将经液体发酵后的培养液在5℃温度下，用高速离心机5000g离心20分钟，去除上清液→离心后的沉淀物用冻干超滤仪在室温下冻干→粉碎成粉得到生防菌剂，生防菌剂(粉剂)的活芽孢数为4.76×1010个/ml。
二、本发明生防菌剂防治烟草粉螟的功能试验
1、菌株5对幼虫生长发育的影响
设100、200、300倍三个浓度。以喷无菌水为对照。喷(菌)液量为20μl/g菌剂处理烟叶后置于养虫室，温湿度为自然温湿度。每试验浓度接虫15头，三次重复。试验处理后7天调查烟草粉螟的死亡情况。
从表1可知：菌株5的100、200、300倍对一至五龄烟草粉螟幼虫的防治效果均均为100％。
表1菌株5对烟草粉螟的防治效果
2、菌株5小批量防治烟草粉螟试验
2.1材料与方法
无虫复烤烟叶等级为云南玉溪中部桔黄二级C2F烟叶；有虫复烤烟叶为云南昭通中部桔黄二级C2F烟叶。设100、200、300倍三个浓度，三次重复。以喷无菌水为对照。试验重复设置如表2。每小区4kg烟叶，喷(菌)液量为20ml/kg菌剂处理后置于玉溪烟厂第一烟叶库区11号试验仓库，温湿度为自然温湿度。试验处理后20天调查虫情。
防治效果计算公式：
无虫复烤烟叶组：
有虫复烤烟叶组：
表2试验重复设置
2.2结果与分析
2.2.1菌株5对无虫复烤烟叶组的防治效果
由表3可知：菌株5对无虫复烤烟叶组的防治效果100是88.94％；200倍是68.14％；300倍是65.04％。
表3菌株5对无虫复烤烟叶组的防治效果
2.2.2菌株5对有虫复烤烟叶组的防治效果
由表4可知：菌株5对有虫复烤烟叶组的防治效果100倍是88.57％；200倍是77.14％；300倍分别是65.71％。
表4菌株5对有虫复烤烟叶组的防治效果
3菌株5在烟叶仓库中的防治效果试验
3.1材料与方法
试验地点为云南玉溪、楚雄烟厂烟叶仓库；烟叶等级为上部桔黄二级B2F；菌剂施用方法：(1)、烟叶均匀喷雾，菌剂0.1g/1kg烟叶+无菌水5ml/1kg烟叶；(2)、烟包表面喷雾，0.2g/1kg烟叶+无菌水5ml/1kg。烟叶喷菌剂后按常规打包烟叶仓库存贮。施药后3、6、12个月定期调查虫害发生情况。
3.2结果与分析
从表5中可知：喷菌剂后3个月玉溪、楚雄两个试验点各处理均未遭到虫害。6个月后两个试验点烟叶均匀喷雾的各处理防治效果较好；烟包表面喷雾处理均发生虫害；12个月后两个试验点烟叶均匀喷雾的各处理防治效果较好；烟包表面喷雾处理均发生虫害，但与对照比虫害轻。总之，两个试验点烟叶均匀喷雾菌剂处理对烟草粉螟的防治效果好于烟包表面喷雾菌剂处理；烟叶均匀喷雾菌剂处理与对照比，防治草粉螟的效果较好。
表5菌株5在烟叶仓库中使用效果评价
“-”表示无虫害发生；“+”表示有虫害发生，“+”号越多表示虫害越严重。
4施用菌剂后对烟叶化学成分的影响
喷菌株5菌剂后3、6、9、12个月取样对烟叶进行化学常规成分分析，各处理总糖、还原糖、总氮、烟碱、蛋白质含量与同期CK相比，无明显影响。说明使用菌株5防治烟草粉螟后对烟叶化学成分影响不大。(表6)
表6喷施菌株5菌剂对烟叶化学常规成分的影响
注：数据由云南省烟草科学研究所分析测试中心分析.
5施用菌剂对单体烟评吸结果的影响
喷菌剂后12个月取烟样进行单体烟评吸，结果见表7。经云南烟草研究院产品开发研究室评吸认为：1#(菌株5)样烟在香气质、香气量、杂气方面的品质均优于4#(CK)样烟。在刺激性、劲头、余味方面4支烟较为接近。
表7均匀喷雾处理喷菌剂后12个月的单体烟评吸结果
注：由云南烟草研究院产品开发研究室评吸.
Claims (1)
1、一种防治烟草粉螟的生防菌剂，该生物菌剂由生产菌株经试管种子培养、液体发酵及制备生防菌剂工序得到，其特征在于：
a.生产菌株为苏云金杆菌科尔默亚种(Bacillus thuringiensis subsp.colmer)菌株5，CGMCC NO.2895；
b.试管种子培养：将菌株5接种到试管斜面培养基上，试管斜面培养基配方为牛肉膏5％，蛋白胨1.0％，琼脂2.0％，氯化钠0.5％，pH8.0，配方的比例为重量百分比，30℃恒温培养2天，获得试管种子；
c.液体发酵：将菌株5种子接种到发酵罐液体培养基中，液体培养基配方为玉米粉0.5％、黄豆粉2.0％、酵母粉0.15％、鱼粉0.25％、蛋白胨0.05％、磷酸二氢钾0.25％、碳酸钙0.05％和硫酸镁0.035％，0.025％植物油作消泡剂，初始pH值为7.5，配方的比例为重量百分比，在发酵温度30℃，通气量15％，搅拌速度150r/min的条件下发酵36h；
d.制备生防菌剂：将经液体发酵后的培养液在5℃温度下，用高速离心机5000g离心20分钟，离心后的沉淀物用冻干超滤仪在室温下冻干，粉碎成粉得到生防菌剂。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN106489997A (zh) * | 2016-01-13 | 2017-03-15 | 中弘新缘生物科技（天津）有限公司 | 一种微生物杀虫剂的制备方法 |
| CN110292042A (zh) * | 2019-07-22 | 2019-10-01 | 华环国际烟草有限公司 | 一种防治烟草粉螟的厚壁型微胶囊剂的制备及防治方法 |
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2009
- 2009-02-27 CN CNA2009100941362A patent/CN101558765A/zh active Pending
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