CN101556286A - 基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于生物工程技术领域，特别是指一种基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法。其中动物免疫、分离脾细胞、细胞融合、筛选杂交瘤细胞、单克隆抗体特异性筛选、单克隆抗体纯化保存、乙肝疫苗的标记、单克隆抗体的矩阵点样、芯片的杂交等工艺步骤，解决了传统技术存在的费时、费力、结果重复性差等技术问题。此芯片可直接应用于一线基因工程药物生产企业进行检测和质控研究，在基因工程药物研究领域中具有极高的应用价值，单克隆抗体的均一性和生物活性单一性使抗原抗体反应结果便于质量控制，利于标准化和规范化。目前国外几乎所有的主要制药公司都不同程度地采用了生物芯片技术来寻找药物靶标，检查药物的毒性或副作用及进行药物产品的定量和定性。用芯片技术进行大规模的药物筛选可以省略大量的动物试验，缩短药物筛选所用时间，从而带动创新药物的研究和开发。
Description
技术领域
本发明属于生物工程技术领域，特别是指一种基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法
背景技术
本项目主要在基因工程药物领域创立抗体芯片检测技术平台，自主研发抗乙肝疫苗抗体芯片检测试剂盒(抗体芯片)完全是由中国人自主开发，应用这一芯片，可通过多种方式、多种渠道、多测面检测乙肝疫苗制品的效价和含量，将检测灵敏度由ug提高到ng级，从而达到更准确、更全面的效果，其检测结果即可定性也可定量。抗乙肝疫苗抗体芯片检测试剂盒(抗体芯片)对促进我国生物高技术前沿领域的发展具有重大鼓舞作用，对提升我国生物芯片技术、产品和市场的国际竞争力具有重大意义，此方法完全符合分子免疫学原理。目前国外几乎所有的主要制药公司都不同程度地采用了生物芯片技术来寻找药物靶标，查检药物的毒性或副作用及进行药物产品的定量和定性。用芯片技术进行大规模的药物筛选可以省略大量的动物试验，缩短药物筛选所用时间，从而带动创新药物的研究和开发。
发明内容
本发明的目的在于提供一种基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法。
本发明的整体技术构思是：利用细胞融合、亚克隆及酶联免疫吸附实验进行特异性筛选技术，获得高效价、高特异性抗人基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体，由于此单抗效价高、特异性好，可直接应用于芯片的点样，结合CY3标记的基因工程药物乙肝疫苗与被检产品建立抗体芯片竞争抑制法检测基因工程乙肝疫苗含量的方法。抗体芯片竞争抑制法检测基因工程乙肝疫苗含量具有灵敏度高，特异性好、操作简单、高通量等优点，可用于生产线的监测和质控。
基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，它包括如下工艺步骤：
(1)动物免疫：将高纯度的人基因工程药物乙肝疫苗1ml充分乳化，免疫与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，每只腹腔注射乳化后的高纯度人神经巢蛋白，用酶联免疫吸附实验方法测定其抗血清；
(2)分离脾细胞：取未免疫的BALB/c健康小鼠腹腔巨噬细胞，铺植96孔培养板，将换液后的Sp2/0细胞调整为细胞悬液，分离免疫的小鼠脾细胞并制成细胞悬液；
(3)细胞融合：将具有较高活性Sp2/0骨髓瘤细胞与脾细胞悬液按1∶10比例混合，30秒内逐渐加入45％PEG(分子量：4000)，静止90秒，使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中滴加培养液，以HAT选择培养基进行细胞培养；
(4)筛选杂交瘤细胞：待融合的细胞培养至第七天时，吸取96孔培养板的孔中出现克隆细胞簇的培养上清用酶联免疫吸附实验方法检测抗体含量，经有限稀释进行三次亚克隆筛选，依抗体的分泌情况筛选出高效价的抗体分泌孔，将孔中细胞扩大培养，选高效价，高特异性的细胞株再扩大培养并冻存；
(5)单克隆抗体纯化保存：选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中，一周后收集小鼠的腹水，使用AKTA-FPLC蛋白纯化仪将小鼠IgG单克隆抗体腹水溶液在A280nm时收集，1.44(吸光单位)浓度为1mg/ml。
(6)将基因工程乙肝疫苗进行CY3标记
(7)基因工程药物乙肝疫苗微阵列点样：一张芯片点100个点，检测线性范围0.01～10ng/ml。
本发明的具体工艺步骤和各步骤中的工艺参数是：
步骤(1)将基因工程药物乙肝疫苗1ml加等量的完全福氏佐剂并经充分乳化，与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～12周，每只腹腔注射0.2ml，间隔2周注射一次；采用酶联免疫吸附实验方法测定抗血清。
步骤(2)中取未免疫的BALB/c健康小鼠腹腔巨噬细胞，铺植96孔培养板，将换液后15小时的Sp2/0细胞调整为9×105/ml细胞悬液，分离免疫的小鼠脾细胞。
步骤(3)中具有高活性的Sp2/0骨髓瘤细胞与脾细胞的比值按1∶10的比例混合，加入PEG使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中，第1分钟滴加4.5ml培养液；间隔2分钟滴加5ml培养液，然后加培养液50ml，以HAT选择培养基按36％的孔为1个细胞/孔进行细胞培养。
步骤(4)中是将细胞培养至覆盖0％～20％孔底时，吸取培养上清用酶联免疫吸附实验方法检测抗体含量，依抗体的分泌情况筛选出高效价的抗体分泌孔，将孔中细胞再行克隆化，选高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存。
步骤(5)中选用的BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将5×105杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去，在接种一周后有明显的腹水产生，每只小鼠可收集15ml的腹水，使用AKTA蛋白纯化仪FPLC将小鼠IgG单克隆抗体腹水溶液在A280nm时收集，吸光单位＝1.44时浓度为1mg/ml。
步骤(6)中选用的是CY3对基因工程药物乙肝疫苗的标记
步骤(7)中选用基因工程药物乙肝疫苗微阵列点样：一张芯片点100个点，检测线性范围0.01～10ng/ml。
本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于：所获得的抗人基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体经AKTA蛋白纯化仪FPLC纯化，其效价高、特异性非常好，可直接将有限稀释的抗体点于芯片上，与标记的乙肝疫苗和制品进行杂交，借助目前先进的芯片检测仪器进行检测。此技术与传统的检测方法比较，具有快速、操作便捷、高通量检测的特点；并可快速、准确地进行定性和定量检测。
本发明所公开的方法是将高纯度基因工程药物乙肝疫苗经免疫动物、细胞融合、克隆化培养、以及大量的组织细胞原位特异性筛选从而获得高效价、高特异性的抗人基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体，此抗体可直接应用于临床检测和基础研究。单克隆抗体在生物学和医学研究领域中具有极大的应用价值，是亲和层析中重要的配体，是免疫组化中主要的抗体，是免疫检验中的新型试剂，是生物治疗的导向武器。作为基因工程药物乙肝疫苗的检测试剂，抗人基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体可以充分发挥其优势。单克隆抗体的特异性强，可将抗原抗体反应的特异性大大提高，减少了可能的交叉反应，使试验结果可信度更大。单克隆抗体的均一性和生物活性单一性使抗原抗体反应结果便于质量控制，利于标准化和规范化。
其各项指标如下：
1、免疫BLAB/C鼠的抗血清酶联免疫吸附实验效价大于1∶5000
2、阳性克隆孔酶联免疫吸附实验效价大于1∶10000
3、阳性克隆孔腹水酶联免疫吸附实验效价大于1∶50000
4、阳性克隆孔特异性表达：与基因工程药物乙肝疫苗制品呈阳性表达。与其它基因工程药物人胰岛素、人生长激素、干扰素、人促红细胞生成素(Epo)、GM-集落刺激因子(GM-CSF)、白细胞介素-2(IL-2)、白介素-11(IL-11)、肿瘤坏死因子(TNF)、表皮生长因子(EGF)呈阴性表达如下：
| 基因药物种类 | 人胰岛素 | 人生长激素 | 干扰素 | EPO | GM-CSF | IL-2 | IL-11 | TNF | EGF |
| 阳性数/批号量 | 0/30 | 0/32 | 0/30 | 0/30 | 0/26 | 0/33 | 0/22 | 0/30 | 0/12 |
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述：
基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于它包括如下工艺步骤：
(1)动物免疫：将高纯度的人基因工程药物乙肝疫苗1ml充分乳化，免疫与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，每只腹腔注射乳化后的高纯度人基因工程药物乙肝疫苗，用酶联免疫吸附实验方法测定其抗血清；
(2)分离脾细胞：取未免疫的BALB/c健康小鼠腹腔巨噬细胞，铺植96孔培养板，将换液后的Sp2/0细胞调整为细胞悬液，分离免疫的小鼠脾细胞并制成细胞悬液；
(3)细胞融合：将具有较高活性Sp2/0骨髓瘤细胞与脾细胞悬液按1∶10比例混合，加入PEG使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中滴加培养液，以HAT选择培养基进行细胞培养；
(4)筛选杂交瘤细胞：待融合的细胞培养至第七天时，吸取96孔培养板的孔中出现克隆细胞簇的培养上清用酶联免疫吸附实验方法检测抗体含量，经有限稀释进行三次亚克隆筛选，依抗体的分泌情况筛选出高效价的抗体分泌孔，将孔中细胞扩大培养，然后进行抗原特异性免疫组织化学原位测定，选高效价，高特异性的细胞株再扩大培养并冻存；
(5)单克隆抗体特异性筛选：选经酶联免疫吸附实验检测抗体效价大于1∶10000的阳性孔的上清，与多种其它基因工程药物进行特异性筛选。
(6)单克隆抗体纯化保存：选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中，一周后收集小鼠的腹水，使用AKTA蛋白纯化仪FPLC将小鼠IgG单克隆抗体腹水溶液在A280nm时收集，1.44(吸光单位)浓度为1mg/ml。
步骤(1)将高效价、高特异性抗人基因工程药物乙肝疫苗1ml加等量的完全福氏佐剂并经充分乳化，与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在9周，每只腹腔注射0.2ml，间隔2周注射一次；测定抗血清。
步骤(2)进行完毕后采用酶联免疫吸附实验方法测定抗血清，该方法由如下操作步骤组成：
a、包被：
以50mmol/L、pH＝9的碳酸盐缓冲液将步骤(1)中的高纯度基因工程乙肝疫苗1∶500稀释，包被96孔聚乙烯板，真空抽干，密封4℃保存备用。
b、封闭：
每孔加入pH为7.4的磷酸盐缓冲液200μl洗涤、内含1％山羊血清；
c、加样：
每孔加入第三次免疫后3天的小鼠外周血清50μl(1∶5000稀释)，每板设一正常对照、阳性对照及空白(磷酸盐缓冲液)，洗涤；
d、加入酶标二抗每孔100μl，洗涤；
e、显色：
每孔加入底物100μl；
f、比色：
以空白调零，405nm波长测定光密度(O.D)；
g、结果判断：P/N＝测定标本O.D均值/阴性血清O.D均值，P/N≥2.1为阳性。
步骤a中的聚乙烯板规格为200μl/孔、真空抽干温度为4℃，洗涤采用0.05％的Tween-20磷酸盐缓冲液洗涤3次。
步骤b中的工艺参数为每孔加入pH＝7.4、含1％山羊血清磷酸盐缓冲液200μl，温度为37℃、时间1小时，洗涤3次。
步骤c中的工艺条件为每孔加入1∶5000稀释后的第三次免疫后3天的小鼠外周血清50μl，每板设一正常对照、阳性对照及空白(磷酸盐缓冲液)，温度为37℃、时间为1小时，洗涤3次。
步骤d中的工艺条件加入酶标二抗每孔100μl，温度为37℃、时间为1小时，洗涤3次。
步骤e中的工艺条件为室温、时间为10分钟，然后使用终止液终止反应，经酶标仪在波长450nm处读取光密度值。
步骤(3)中取未免疫的BALB/c健康小鼠腹腔巨噬细胞，铺植96孔培养板，将换液后15小时的Sp2/0细胞调整为9×105/ml细胞悬液，分离免疫的小鼠脾细胞。
步骤(4)中具有高活性的Sp2/0骨髓瘤细胞与脾细胞的比值按1∶10的比例混合，加入PEG使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中，第1分钟滴加4.5ml培养液；间隔2分钟滴加5ml培养液，然后加培养液50ml，以HAT选择培养基按36％的孔为1个细胞/孔进行细胞培养。
步骤(5)中是将细胞培养至覆盖10％孔底时，吸取培养上清用酶联免疫吸附实验方法检测抗体含量，依抗体的分泌情况筛选出高效价的抗体分泌孔，将孔中细胞再行克隆化，与多批次基因工程乙肝疫苗经ELISA筛选呈阳性表达。然后确定高分泌、高特异性细胞株扩大培养或冻存。
步骤(6)中选用的BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将5×105杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去，在接种一周后有明显的腹水产生，每只小鼠可收集15ml的腹水，使用AKTA蛋白纯化仪FPLC将小鼠IgG单克隆抗体腹水溶液在A280nm时收集，吸光单位＝1.44时浓度为1mg/ml。
步骤(7)中选用的CY3标记基因工程药物乙肝疫苗
步骤(8)中选用的基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体微阵列点样：一张芯片点100个点，从第一个点至第100个点每一个点的含量以10pg/ml递增，检测线性范围0.01～10ng/ml。
步骤(9)中选用的与其它基因工程药物进行特异性筛选。
此基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片经30批次的基因工程药物乙肝疫苗产品的特异性筛选表达均为阳性，与9种251批次的其它基因工程药物进行特异性筛选阳性表达为0。表明此芯片特异性很高，适合提供给基因工程药物企业进行基因工程药物乙肝疫苗的鉴定和质控评价，此抗体还可制成免疫组化或酶联免疫吸附实验试剂盒开展医学基础研究。
Claims (12)
1、基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于它包括如下工艺步骤：
(1)动物免疫：将高纯度的人基因工程药物乙肝疫苗1-10ml充分乳化，免疫与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，每只腹腔注射乳化后的高纯度人基因工程药物乙肝疫苗，用酶联免疫吸附实验方法测定其抗血清；
(2)分离脾细胞：取未免疫的BALB/c健康小鼠腹腔巨噬细胞，铺植96孔培养板，将换液后的Sp2/0细胞调整为细胞悬液，分离免疫的小鼠脾细胞并制成细胞悬液；
(3)细胞融合：将具有较高活性Sp2/0骨髓瘤细胞与脾细胞悬液按1∶10-100比例混合，加入聚乙二醇(美国Sigma公司出品)使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中滴加培养液，以HAT选择性培养基(美国海克隆公司出品)进行细胞培养；
(4)筛选杂交瘤细胞：待融合的细胞培养至第5-10天时，吸取96孔培养板的孔中出现克隆细胞簇的培养上清用酶联免疫吸附实验方法检测抗体含量，经有限稀释进行三次亚克隆筛选，依抗体的分泌情况筛选出高效价的抗体分泌孔，将孔中细胞扩大培养，然后进行抗原特异性免疫组织化学原位测定，选高效价，高特异性的细胞株再扩大培养并冻存；
(5)单克隆抗体特异性筛选：选经酶联免疫吸附实验检测抗体效价大于1∶10000的阳性孔的上清，与多厂家、多批次的基因工程药物乙肝疫苗进行特异性和效价筛选。
(6)单克隆抗体纯化保存：选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中，一周后收集小鼠的腹水，使用AKTA-FPLC蛋白纯化仪(美国通用公司制造)将小鼠IgG单克隆抗体腹水溶液在A280nm时收集，1.44(吸光单位)浓度为1-10mg/ml。
(7)CY3标记基因工程药物乙肝疫苗：用CyDye DIGE Fluor，Cy3 minimaldye系统采用标准方法将基因工程药物乙肝疫苗标记上CY3。
(8)基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体微阵列点样：一张芯片点100个点，从第一个点至第100个点每一个点的含量以10pg/ml递增，检测线性范围0.01～10ng/ml。
(9)与其它基因工程药物进行特异性筛选。
2、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(1)将高效价、高特异性基因工程药物乙肝疫苗1-10ml加等量的完全福氏佐剂并经充分乳化，与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～22周，每只腹腔注射0.2-0.5ml，隔周免疫一次，第三次免疫后第三天抽取外周血；测定抗血清。(8)基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体微阵列点样：一张芯片点100个点，检测线性范围0.01～10ng/ml。
3、根据权利要求1或2所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(1)进行完毕后采用酶联免疫吸附实验方法测定抗血清，该方法由如下操作步骤组成：
a、包被：
以50mmol/L、pH＝9的碳酸盐缓冲液将步骤(1)中的高纯度基因工程药物乙肝疫苗1∶500稀释，包被96孔聚乙烯板，真空抽干，密封4℃保存备用。
b、封闭：
每孔加入pH为7.4的磷酸盐缓冲液200μl洗涤、内含1％山羊血清；
c、加样：
每孔加入第三次免疫后3天的小鼠外周血清50-100μl(1∶5000-10000稀释)，每板设一正常对照、阳性对照及空白(磷酸盐缓冲液)，洗涤；
d、加入酶标二抗每孔100-200μl，洗涤；
e、显色：
每孔加入底物50-100μl；
f、比色：
以空白调零，405nm波长测定光密度(O.D)；
g、结果判断：P/N＝测定标本O.D均值/阴性血清O.D均值，P/N≥2.1为阳性。
4、根据权利要求3所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤c中的工艺条件为每孔加入1∶5000-10000稀释后的第三次免疫后3天的小鼠外周血清50-100μl，每板设一正常对照、阳性对照及空白(磷酸盐缓冲液)，温度为37℃、时间为1小时，洗涤3次。
5、根据权利要求3所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤e中的工艺条件为室温、时间为10分钟，然后使用终止液终止反应，经酶标仪在波长450nm处读取光密度值。
6、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(2)中取未免疫的BALB/c健康小鼠腹腔巨噬细胞，铺植96孔培养板，将换液后15小时的Sp2/0细胞调整为1-9×105/ml细胞悬液，分离免疫的小鼠脾细胞1-9×105-6/ml。
7、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(3)中具有高活性的Sp2/0骨髓瘤细胞与脾细胞的比值按1∶10-100的比例混合，30-60秒内逐渐加入45％PEG(分子量：4000)，静止90-120秒，使细胞彼此融合，在两种细胞的混合细胞悬液中，第1分钟滴加4.5ml1640培养液；间隔2分钟滴加5ml1640培养液，然后加1640培养液至50ml，1500rpm/分钟离心10分钟，以HAT选择性培养基(美国海克隆公司出品)按20-50％的孔为1个细胞/孔进行细胞培养。
8、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(4)中是将细胞培养至覆盖0％～20％孔底时，吸取培养上清用酶联免疫吸附实验方法检测抗体含量，依抗体的分泌情况筛选出高效价的抗体分泌孔，将孔中细胞再行克隆化，然后进行抗原特异的免疫组织化学测定，选高分泌特异性细胞株扩大培养或冻存。
9、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(5)中选用的多厂家30批次的基因工程药物乙肝疫苗与此单克隆抗体呈阳性表达。
10、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(6)中选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将5×105杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去，在接种一周后有明显的腹水产生，每只小鼠可收集10-15ml的腹水，使用AKTA-FPLC蛋白纯化仪将小鼠IgG单克隆抗体腹水溶液在A280nm时收集，吸光单位＝1.44时浓度为1-10mg/ml。
11、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(7)对其基因工程药物乙肝疫苗进行CY3标记。
12、根据权利要求1所述的基因工程药物乙肝疫苗抗体芯片的制备方法，其特征在于所述的步骤(8)基因工程药物乙肝疫苗单克隆抗体微阵列点样：一张芯片点100个点，检测线性范围0.01～10ng/ml。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102175874A (zh) * | 2011-01-14 | 2011-09-07 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种疫苗免疫效果评价蛋白芯片的制备及用途 |
| CN102827274A (zh) * | 2012-09-21 | 2012-12-19 | 李彬 | 一种乙肝疫苗抗体及含该抗体的芯片 |
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2008
- 2008-04-10 CN CNA200810088966XA patent/CN101556286A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102175874A (zh) * | 2011-01-14 | 2011-09-07 | 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 | 一种疫苗免疫效果评价蛋白芯片的制备及用途 |
| CN102827274A (zh) * | 2012-09-21 | 2012-12-19 | 李彬 | 一种乙肝疫苗抗体及含该抗体的芯片 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20091014 |