CN101550083B - 一种烟草中的苯丙素类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了烟草中一种结构式(I)的苯丙素类化合物，及其制备方法和应用。系将烟草样品粉碎后以70％的丙酮分4次用超声提取，合并提取液，过滤，减压浓缩提取液至小体积，静置后滤除沉淀物，滤液用乙酸乙酯分3次萃取，获得乙酸乙酯部分萃取液；将萃取液浓缩成浸膏，浸膏用硅胶柱层析初分，然后采用高效液相半制备色谱进一步分离，即得到所需化合物。对该化合物进行了抗氧化活性筛选，实验结果显示化合物显示出较强的抗氧化活性，并对卷烟烟气中自由基具有清除效果。

Description

一种烟草中的苯丙素类化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于烟草化学领域，更具体地说，本发明涉及烟草中一种新的化合物，其制备方法和在卷烟加工中的应用。 

背景技术

苯丙素类(phenylpropanoids)是指基本母核具有一个或几个C6-C3单元的天然有机化合物类群，是一类广泛存在于植物中的天然产物。广义而言，苯丙素类化合物包括了简单苯丙素类、香豆素类、木脂素和木质素类、黄酮类，涵盖了多数的天然芳香族化合物。狭义而言，苯丙素类化合物是指简单苯丙素类，包括苯丙烯、苯丙醇、苯丙醛、苯并酮、苯丙酸等。多年研究表明苯丙素类化合物具有抗菌消炎、抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、保肝护肝和碱基修复等作用，对于糖尿病及相关疾病，以及对由于身心压力所致的性功能障碍，学习、记忆能力低下等都具有明显的改善作用。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的苯并素类化合物。 

本发明的另一个目的是提供一种从烟草中提取所述化合物的方法。 

本发明进一步的目的是提供所述化合物在卷烟加工中，尤其是在抗氧化活性和清除卷烟烟气自由基中的应用。 

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。 

除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。 

A.本发明从烟草中分离出一种新的苯并素类化合物，该化合物具有的生物活性是现有的苯并素类化合物所不具备的。 

本发明的新的苯并素类化合物具有下述结构式： 

该化合物的命名为：当归酸-3-(3，4，5-三甲氧基苯)-3-丙酮脂3-(3，4，5-triomethoxyphenyl)-3-acetone angelica)。 

B.本发明提供了一种所述化合物的制备方法，该方法采用以下步骤： 

1.烟草样品粉碎后以70％的丙酮分4次用超声提取，合并提取液； 

2.减压浓缩提取液至小体积，静置后滤除沉淀物； 

3.滤液用乙酸乙酯分3次萃取，获得乙酸乙酯部分萃取液； 

4.将萃取液浓缩成浸膏，浸膏用硅胶柱层析初分，然后采用高效液相半制备色谱进一步分离，即得到所需的该新化合物。 

C.本发明对所述的新化合物进行了抗氧化活性检测和清除卷烟主流烟气中自由基的效果试验，化合物显示出良好的抗氧化活性和清除自由基效果，揭示了在卷烟加工中广阔的应用前景。 

附图说明

图1为化合物的高分辨质谱(HRESIMS)； 

图2为化合物的核磁共振氢谱(¹H NMR)； 

图3为化合物的核磁共振炭谱(¹³C NMR)； 

图4为化合物主要HBMC相关(→)。 

具体实施方式

通过下面给出的具体实施例和典型应用实施例，可以进一步清楚地了解本发明。但它们并不是对本发明保护范围的限定。 

实施例1 

--化合物的制备 

烟草样品采于云南玉溪，品种为K326。将烟草样品取样2.5kg粉碎到30目，以70％的丙酮用超声提取4次，提取液合并，过滤，减压浓缩提取液至小体积，静置后滤除沉淀物，滤液用乙酸乙酯分3次萃取，合并乙酸乙酯萃取液并浓缩成浸膏，得浸膏58.4g。浸膏用适量氯仿溶解后用80g粗硅胶(80 100目)拌样，1.5kg硅胶(160 200目)装柱进行硅胶柱层析，氯仿∶丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脱，TLC监测合并相同的部分，得到8个部分(纯氯仿、氯仿-丙酮20∶1、氯仿-丙 酮9∶1、氯仿-丙酮8∶2、氯仿-丙酮3∶2、氯仿-丙酮1∶1、氯仿-丙酮20∶1、纯丙酮)，其中氯仿-丙酮(9∶1)洗脱部分5.26g用安捷仑1100半制备高效液相色谱分离，以65％的甲醇为流动相，Zorbax SB-C₁₈ column(9.4×250mm，5μm)半制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为300nm，每次进样50μL，收集18.6min的色谱峰，多次累加后蒸干，再次用纯甲醇溶解，再以甲醇为流动相，用Sephadex LH-20凝胶柱层析分离，可得该新化合物。 

实施例2 

--化合物的鉴定 

所述的化合物为白色无定形粉末；紫外光谱(溶剂为甲醇)，λ_max(logε)278(3.47)，210(4.52)；红外光谱(溴化钾压片)ν_max3424，2874，1742，1638，1608，1508，1456，1405，1318，1254，1125，1036，942，872cm^-1；HRESIMS(附图-1)显示其准分子离子峰m/z 301.1056[M+Na]⁺(calcd 301.1052)，结合NMR谱确定其分子式为C₁₅H₁₈O₅，不饱和度为7。 ¹H和¹³C NMR谱(附图-2和附图-3，数据归属见表-1)显示分子中有1个苯环(苯环上有3个次甲基双键炭)，1个甲氧基(δ_C55.9)，1个羰基(δ_C198.0)，1个亚甲基(δ_N40.0)，1个氧化亚甲基(δ_C62.6)，1个当归酰基(δ_C166.4，128.9，138.2，20.1，15.8)；结合对比文献数据可证实该化合物为当归酰基取代的苯丙素；进一步经HMBC相关(附图-4)证实C-4位为羟基取代、C-5位为甲氧基取代，C-7位为羰基，而当归酰基取代在C-9位，化合物的结构最终得到确认。通过SCIFINDER数据库检索和文献查询证实该化合物为新化合物。 

    表-1 化合物的¹H和¹³C NMR数据 

实施例3 

--化合物抗氧化活性检测 

抗氧化活性以清除DPPH自由基能力的大小表示；以50μg/mL为初筛浓度，测定其清除脂性自由基DPPH的活性。取一块costar 96孔板，加入新鲜配制的DPPH乙醇溶液(6.5×10⁵mol/L)190μL/孔，加入待测样品10μL/孔，空白孔加10μL生理盐水，充分混匀，用封板膜封板后室温下避光静置30分钟，于UV2401分光光度计上测定仪上测定各孔吸光度值，测定波长为517nm；样品对脂性自由基DPPH清除率按下式计算： 

DPPH清除率(％)＝(A_空白-A_样品)/A_空白×100％ 

A_空白：空白对照组吸光度值；A_样品：加样品组吸光度值。 

实施例4 

--用该化合物的清除卷烟烟气中的自由基 

1.卷烟参数 

卷烟的叶组为云南某品牌卷烟的叶组(上部烟叶为30％，中部烟叶为40％，下部烟叶为20％，膨胀梗丝5％，烟草薄片5％)。采用醋酸纤维嘴棒，嘴棒成型纸透气度为3500CU；卷烟纸克重为60g/m²、透气度为60CU的，水松纸透气度为250CU。成品卷烟烟支的重量为0.93+0.02g，圆周为24.5mm，长度为84mm(其中嘴棒长度为25mm)。 

2.清除烟气自由基效果实验 

试验化合物用手工添加到卷烟过滤嘴丝束中，每支卷烟添加量为0.55.0mg，并以未添加试验化合物的卷烟为对照。 

卷烟用RM200型20孔道自动吸烟机在标准条件下吸烟，主流烟气粒 相物用44mm剑桥滤片捕集，气相部分用采样管捕集；粒相自由基用含0.05mol/L N-特丁基-α-苯基氮硐的苯溶液为萃取剂从剑桥滤片溶出，并洗涤剑桥滤片，定容得粒相自由基测试液。气相自由基用自由基采样管，以0.05mol/L N-特丁基-α-苯基氮硐的苯溶液为吸收剂采集，卷烟抽吸完后取出气相自由基采样管，同时用少量吸收剂分3次冲洗通气内管外部和采样管内壁，合并吸收液和洗涤液，得气相自由基样品液。 

用顺磁共振仪测定自由基，ESR分析实验条件：中心磁场＝3.385T，扫宽＝0.500T，微波频率＝1.5GHz，扫描时间＝2min，扫描次数＝5，放大倍数＝10³～10⁵(根据峰高进行调整)，样品用量20μL；根据ESR图谱中峰面积计算气相及粒相自由基数量的变化。 

3.实验结果 

实验结果表明：进行5次实验，和对照样相比，添加该化合物的卷烟气相自由基降低率为18-22.6％，粒相自由基降低率在15-24.2％之间，该化合物具有良好的自由基清除效果。 

Claims (4)

1.一种具有下述结构式的化合物：

2.权利要求1所述化合物的制备方法，该方法采用以下步骤：

(1)烟草样品粉碎后以70％的丙酮分4次用超声提取，合并提取液；

(2)减压浓缩提取液至小体积，静置后滤除沉淀物；

(3)滤液用乙酸乙酯分3次萃取，获得乙酸乙酯部分萃取液；

(4)将萃取液浓缩成浸膏，浸膏用硅胶柱层析初分，然后采用高效液相半制备色谱进一步分离，即得到所需的化合物。

3.权利要求1所述的化合物在制备抗氧化剂中的应用。

4.权利要求1所述的化合物用于清除卷烟主流烟气中的自由基的应用。

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