CN101548947A - 多西他赛纳米脂质注射液、其制备方法及用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种多西他赛纳米脂质注射液。本发明还涉及一种本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液的制备方法。本发明还涉及本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。本发明的纳米制剂能够延长药物作用时间，靶向输送药物，保证药物作用前提下减少给药剂量，减轻或避免药物毒副作用，提高药物作用稳定性，利于药物储存，故能够实现药物向高产、自动化、大规模、低成本、携带储存方便、服用方便、小剂量和低副作用方面的发展。

Description

多西他赛纳米脂质注射液、其制备方法及用途

技术领域

本发明涉及一种多西他赛纳米脂质注射液、一种本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液的制备方法以及本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。本发明属于医药技术领域。

背景技术

据世界卫生组织报告，1996年全球58亿人口中，因癌症死亡的有600余万人，占总死亡人数的近12％。另有新诊癌患者1000余万，估计现癌症患者数约4000万人。我国“八五”期间的全国恶性肿瘤死亡抽样调查结果也显示，我国肿瘤死亡率(世界调整标化率)为124.46/10万占总死亡原因的17.94％，属第二大死因。另据卫生部1995年的数据，我国目前每年新诊癌症患者约160万人，年死亡130万人，现存癌症患者总数在200万人以上。这些数字表明，肿瘤无论是在国外、国内，都仍然还是一种严重威胁人们生命和生活质量的主要病种之一。也正是基于这一认识，各国政府、研究机构和制药公司均对癌症研究和抗肿瘤药物开发高度重视和巨额投资。从《Pharmaprojects》数据库统计分析，全球1995年和1996年研究与开发的抗肿瘤药物数量分别为1125和1196个，按治疗类别计仅次于中枢神经系统用药(1195和1265)而居第二位。抗肿瘤药物对癌症患者治疗肿瘤，延长他们的寿命和提高其生活质量都具有肯定的和不可替代的作用。而这种作用的持续提高，鉴于癌症的病理，生理和生物学特性，又往往有赖于新颖化学结构和独特作用机制化合物的发现。第2个紫杉烷类微管解聚抑制剂多西他赛就是近年来发现具有独特结构和作用机制的抗肿瘤药。

多西他赛是由法国罗纳普朗克·乐安公司开发的一种半合成的紫杉醇类。其作用机制是能够加快微管蛋白装配成微管的速率和延长微管的长度。总的作用是加强微管蛋白聚合和抑制微管解聚，导致形成稳定的非功能性微管束，因而破坏有丝分裂和细胞增殖。对乳癌、肺癌、卵巢癌有效，对胰腺癌、胃癌、头颈癌等也有显著疗效。多西他赛属脂溶性药物，易溶于吐温-80与无水乙醇的混合溶媒中，在含水溶液中易发生降解。目前国内外临床上使用的制剂主要是注射用多西他赛，制剂中大量使用增溶剂吐温-80作溶剂，使用前需使用专用的注射用溶剂稀释，对操作人员的要求极其严格且使用方法繁琐；制剂中含有的大量吐温易引起溶血及过敏等不良反应。

与多西他赛有关的专利文献有US4,814,470(1988，1989)，EP253738。

发明内容

本发明的一个目的在于，提供一种多西他赛纳米脂质注射液。本发明的另一个目的在于，提供一种本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液的制备方法。本发明的再一个目的在于，提供本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一方面，本发明提供一种多西他赛纳米脂质注射液，所述纳米粒注射液包含以下成分：

1)活性成分：多西他赛；

2)自乳化药物释放体系：由酯类共聚物和磷脂衍生物形成，优选地，所述酯类共聚物选自硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、本棕榈酸甘油酯、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸甘油酯、硬脂酸酯及其混合物，所述磷脂衍生物选自胆酸钠，脱氧胆酸钠，甲壳素，合成磷脂，卵磷脂，大豆磷脂及其混合物；

所述多西他赛纳米脂质为水包油型(O/W)微粒，优选地，其微粒粒径为10～200nm。

优选地，所述纳米粒注射液中还包含稳定剂和/或抗氧剂，所述稳定剂选自油酸、甘胆酸钠、丙三醇、丙二醇中的一种或几种，所述抗氧剂为维生素E、枸椽酸钠、枸椽酸中的一种或几种。

优选地，所述纳米粒注射液中还包含用于溶解活性成分多西他赛的有机溶剂，优选地，所述有机溶剂选自乙醚、乙醇和乙酸乙酯中的一种或几种。

优选地，所述纳米粒的微粒粒径为10～200nm。

另一方面，本发明提供一种本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液的制备方法，所述方法包括以下步骤：

1)将酯类共聚物和磷脂衍生物配制成自乳化药物释放体系，优选地，所述酯类共聚物选自硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、本棕榈酸甘油酯、聚乙二醇-12-羟基硬脂酸甘油酯、硬脂酸酯及其混合物，所述磷脂衍生物选自胆酸钠，脱氧胆酸钠，甲壳素，合成磷脂，卵磷脂，大豆磷脂及其混合物；和

2)通过物理方法与活性成分多西他赛混合制备而成。

优选地，所述方法还包括以下步骤：3)加入稳定剂和/或抗氧剂，所述稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和胆固醇、丙二醇、丙三醇中的一种或几种，所述抗氧剂为维生素E、枸椽酸钠、枸椽酸中的一种或几种。

优选地，所述方法还包括以下步骤：

4)将经过步骤1)和2)所制备的混合物进行无菌过滤，所述无菌滤膜的孔径优选为0.22μm膜；和/或

5)将经过步骤1)和2)所制备的混合物进行搅拌混匀操作。

再一方面，本发明提供本发明所述的多西他赛纳米脂质注射液在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

优选地，在本发明所述的应用中，所述肿瘤选自：乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌和头颈癌中的一种或几种。

更优选地，在本发明所述的应用中，所述肺癌为非小细胞肺癌。

以下，将根据本发明的优选实施方案，对于本发明的技术反感作进一步的详细说明：

1、活性成分：

正式品名：多西他赛

汉语拼音：DuoxiTaSai

英文名：Docetaxel

商品名：泰索帝Taxotere

化学名：

[2aR-(2aα，4β，4aβ，6β，9α，(aR*，βS*)，11α，12α，12aα，12bα)]-β-[[(1，1二甲基乙氧基)羰基]氨基]-α-羟基苯丙酸[12b-乙酰氧-12-苯甲酰氧-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-十二氢-4，6，11-三羟基-4a，8，13，13-四甲基-5-氧代-7，11-亚甲基-1H-环癸五烯并[3，4]苯并[1，2-b]氧杂丁环-9-基]酯三水合物。

[2aR-(2aα，4β，4aβ，6β，9α，(aR*，βS*)，11α，12α，12aα，12bα]-β-[[(1，1-dimethylethoxy)carbonyl]amino]-α-hydroxybenzenepropanoic acid12b-(acetyloxy)-12-(benzoyloxy)-2a，3，4，4a，5，6，9，10，11，12，12a，12b-dodecahydro-4，6，11trihydroxy-4a，8，13，13-tetramethyl-5-oxo-7，11-methano-1H-cyclodeca

[3，4]benz[1，2-b]oxet-9-yl ester，Trihydrate.

结构式、分子式、分子量：

C43H53NO14·3H2O  861.94

CAS-148408-66-6，114977-28-5(无水多西他赛)

多西他赛(Docetaxel)是由罗纳普朗克·乐安(Rhone-Poulenc Rorer)公司开发的一个半合成紫杉醇衍生物，属微管解聚抑制剂，本品通过促进小管聚合成稳定的微管并抑制其解聚从而使游离小管的数量显著减少。本品已于1995年4月在墨西哥首次上市，并随即在英、美、法、意、德、日等主要国家上市，目前批准的适应症有经蒽环类抗肿瘤药物治疗无效或仍复发的晚期和转移性乳腺癌及曾经治疗无效的非小细胞肺癌。推荐给药方案为每3周1次，1小时静脉输注100mg/m²。多西他赛为白色或类白色粉末，具亲脂性，几乎不溶于水。其注射液为黄色或棕黄色粘稠液体，规格有20mg，80mg。每瓶20mg注射液为将无水多西他赛20mg溶于吐温80 0.5ml中制成；每瓶80mg注射液为将无水多西他赛80mg溶于吐温80 2ml中制成。溶剂为13％w/w的注射用乙醇水溶液。

多西他赛的细胞毒性作用与紫杉醇相似，但在相同的毒性剂量时抗微管解聚的能力较紫杉醇高约1倍，体内实验对所有移植瘤株的抑瘤活性亦优于紫杉醇。多西他赛的抗瘤谱也较紫杉醇更广。已知紫杉醇对肾、前列腺、胰腺、胃、结肠直肠等癌和黑素瘤无效，而本品在常见实体瘤中仅对肾和结肠直肠癌无效。本品对晚期乳腺癌的疗效似较紫杉醇更佳。临床试验表明，它对耐蒽环类抗肿瘤药物的转移性乳腺癌患者的总有效率高达56％，其中完全缓解率8％，部分缓解率48％，达到完全或部分缓解的平均时间为12周，缓解持续时间为7～9个月。英国进行的另一项临床试验也得到了类似的结果，其中除8％完全缓解和33％部分缓解之外，另有47％的患者病情稳定，病情恶化者仅占11％。多西他赛对铂类抗肿瘤药物治疗无效或仍复发的晚期或转移性非小细胞肺癌的部分缓解率为21％(9/42)，达到部分缓解时间约6周，缓解持续时间为17周，中位存活期延至45周。除此之外，还有8例患者的瘤体有所缩小，16例患者病情稳定，恶化的仅9例。

多西他赛的剂量限制性毒性是嗜中性白细胞减少。与紫杉醇相比，其发生率和严重程度似更高。但这种副作用现通过用G-CSF类药物已变得易于处理与预防。本品的其它毒副作用主要有体液潴留、过敏、水肿、皮疹、和脱发、粘膜炎、胃肠道不适等，它们均是可逆的，其中前者在临床上是以预先给予皮质激素来降低其发生率和严重程度的。本品未见心脏毒性。

多西他赛抗瘤谱广，抗肿瘤作用强，对难治性的乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、头颈部肿瘤等的疗效均较突出，临床应用潜力深厚。乳腺癌和肺癌是国内最为常见的两类肿瘤，且其发病率还有上升趋向。Goldman公司估计多西他赛1998年的全球销售额可达3亿美元。

本发明的多西他赛纳米脂质注射液，是通过物理方法制备而成，先用硬脂酸，单硬脂酸甘油脂，本棕榈酸甘油酯，聚乙二醇硬脂酸酯等共聚物，胆酸钠，脱氧胆酸钠，甲壳素，合成磷脂，卵磷脂，大豆磷脂等磷脂衍生物通过一定配比形成自乳化释药系统，稳定剂采用油酸，甘胆酸钠或胆固醇，维生素E、枸椽酸钠、枸椽酸中的一种或几种作为抗氧剂。通过高压乳匀质机处理，形成胶束型微粒，微粒粒径在10～200nm，通过0.22μm膜无菌过滤，得到澄清稳定溶液型注射液。本发明解决了多西他赛在水中溶解度低且易水解的现有技术不足，采用新的制备方法，通过调节pH值和筛选适当的辅料，使多西他赛分散在液体脂质中制成纳米粒，大大减少了药物渗漏，提高了药物的稳定性。与原剂型相比，药物在体内的生物利用度显著提高，从而提高疗效，增强药物靶向性，显著降低药物不良反应，使更适于临床应用，提高患者耐受性。

2、本发明产品的生产技术路线：

多西他赛原辅料预处理→配料→混匀→配液→无菌压滤→灌装→压塞→轧盖→贴签→灯检→包装→检验合格后入库。

3、本发明产品的优选适应症：

1).多西他赛适于先期化疗失败的晚期或转移性乳腺癌的治疗。除非属于临床禁忌，先期治疗应包括蒽环类抗癌药。

2).多西他赛适于使用以顺铂为主的化疗失败的晚期或转移性非小细胞肺癌的治疗。

与现有技术相比，本发明具有如下的明显优点：

多西他赛为难溶于水的药物，本发明人研制的本发明的多西他赛纳米脂质注射液，在保持多西他赛原有结构的前题下，利用纳米载体，通过物理方法制备具有肿瘤靶向的制剂，多西他赛通过与辅料形成的纳米粒载体结合，在体内依靠被动运输作用机制，通过肿瘤组织的毛细血管作用于肿瘤细胞。先将多西他赛原料溶解乙醚、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂中，再用硬脂酸，单硬脂酸甘油脂，本棕榈酸甘油酯，聚乙二醇硬脂酸酯等共聚物，胆酸钠，脱氧胆酸钠，甲壳素，合成磷脂，卵磷脂，大豆磷脂等磷脂衍生物通过一定配比形成自乳化释药系统，稳定剂采用油酸，甘胆酸钠或胆固醇，维生素E、枸椽酸钠、枸椽酸中的一种或几种作为抗氧剂。通过匀速搅拌处理，形成胶束微粒，微粒粒径在10～200nm。

多西他赛纳米制剂是一种新型给药系统---载药纳米粒在生物医药领域的应用，是注射用抗肿瘤的纳米制剂产品，可以显著提高药物在体内的生物利用度，增加了药物制剂现代化。

纳米技术的应用包括以下优势：

(1)可延长一些药性剧烈而药效时间较短的药物作用时间，使其在人体内缓释，达到作用和缓持久、副作用较少的效果；

(2)应用载药微粒携带药物，将其定向输送到病变的靶器官及肿瘤细胞，以维持病变器官的有效血药浓度，从而增强药效，杀死肿瘤细胞；

(3)将载药微粒经过适应修饰，输送药物通过血脑屏障，到达中枢神经系统而起到更好的治疗效果。纳米药物具有缓释特性，能够延长药物作用时间，靶向输送药物，保证药物作用前提下减少给药剂量，减轻或避免药物毒副作用，提高药物作用稳定性，利于药物储存。能够建立一些新的给药途径，通过修饰实现药物的智能化。而且能够实现药物向高产、自动化、大规模、低成本、携带储存方便、使用方便、小剂量和低副作用方面发展。

目前的多西他赛传统制剂是以吐温-80为溶剂，已有报告指出，使用含吐温-80的制剂后除有溶血作用外，还会引起其他的毒副作用如红肿热痛等炎症反应。本发明的多西他赛纳米脂质注射液的研制，将改善其主药的水溶性，完全替代原有溶媒，大大提高产品的科技含量，实现现有产品的更新换代，目标是获得靶向选择性更高，药代动力学更佳，给药更为方便，肿瘤治疗效果更好而毒副作用更小的多西他赛新剂型。本发明的纳米制剂能够延长药物作用时间，靶向输送药物，保证药物作用前提下减少给药剂量，减轻或避免药物毒副作用，提高药物作用稳定性，利于药物储存，故能够实现药物向高产、自动化、大规模、低成本、携带储存方便、服用方便、小剂量和低副作用方面发展，该产品的成功研制将在很大程度上提高申请人抗肿瘤产品的市场竞争力和市场占有率，为企业带来良好的经济效益和社会效益。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。但这些实施例仅限于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体实验条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。

实施例1、本发明多西他赛纳米脂质制剂的配方和制备方法

以下表1是依据本发明的多西他赛纳米脂质制剂的一个典型处方实例：

表1：本发明的多西他赛纳米脂质制剂的典型处方

组分名称     重量份数比    在制剂处方中的作用

多西他赛     1             主药

磷脂         10-20         乳化剂

1，2-丙二醇  10-20         稳定剂，助表面活性剂

聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯   40～60乳化剂，助稳定剂

无水乙醇     10-30         溶剂

丙三醇(甘油) 10-30         稳定剂，助表面活性剂

将上述处方中的各组分进行原辅料预处理→按照上述处方中的配比进行配料→高速搅拌→过滤→辅料配液→无菌压滤→灌装→压塞→轧盖→贴签→灯检→包装→检验合格后入库。

实施例2、实施例1的多西他赛纳米脂质制剂的性能检测试验

本发明实施例1的多西他赛纳米脂质制剂为淡黄色透明溶液，其与注射用水可以任意比例混合，形成的混合液有乳光。利用透射电镜及激光粒径仪对其形态学进行研究，表明本品粒度分布较窄，10～200nm粒度的纳米粒大于90％，粒度圆整，分散性好；采用HPLC法对游离多西他赛进行测定，纳米粒载药量大于98％；本品在阴凉干燥处放置6个月，含量变化小于2％，有关物质小于1％，初步显示本品稳定性较好；本品与输液配伍后，溶液在12小时内稳定，说明本品适合于注射给药。

实施例3、实施例1的多西他赛纳米脂质制剂的临床前初步药代动力学研究

本实施例提供了有关实施例1的注射用多西他赛纳米脂质制剂的药代动力学的初步评价试验及其结果。

(1)犬初步测定(间隔清除期7天)试验：

分别检测本发明的纳米制剂及市场上的现有制剂在犬体内(Beagle犬，购自山东省医学科学院药物研究所)的药物代谢特性；给药采用静脉点滴(40分钟)，LC-MS/MS测定给药后不同时间血药浓度，分别计算每只犬的药代动力学参数(AUC、T1/2、CL)根据上述参数作出评价，主要药代动力学实验结果如下表2所示。结果表明，纳米制剂AUC高于普通上市注射液，最大达峰浓度是上市制剂的50％体内停留时间是上市制剂的2倍，其它PK参数(对比药代动力学参数)基本接近。

色谱条件：使用Ultimate XB C ₈ 柱，50mm×4.6mm，5μm，购自美国 WELCH MATERIALS公司；流动相为甲醇-0.1％甲酸水溶液(90∶10，V∶V)；流速为0.3mL·min^-1；进样量为20μL；柱温25℃；

质谱条件：电喷雾离子源，正离子扫描；毛细管电压30V；氮气为干燥气，温度320℃，1.4×10⁵Pa；雾化气为氮气，温度50℃，3.7×105Pa；碰撞能量均为-26V；碰撞气为氮气，0.24Pa；检测器电压1650V；扫描方式为选择反应监测(selected reaction monitor，SRM)；用于定量的离子通道分别为m/z830.0→549.0(多西他赛)和m/z876.0→591.0(紫杉醇)。

表2：Beagle犬静脉推注注射用多西他赛纳米脂质制剂和多西他赛注射液后主要药代动力学参数

(2)靶向性试验：

采用H22肝癌细胞(购自四川抗菌素工业研究所药理室)来制备30只荷瘤小鼠，具体方法为：将第二代荷瘤S180小鼠(购自山东省医学科学院药物研究所)的右侧腹部消毒，用5ml的注射器抽取腹水约3ml，取生理盐水21ml，按比例配制、混匀、接种实验用小鼠。在接种肿瘤后约8天，肿瘤实体长至重约500mg左右的荷瘤小鼠为建立好的模型小鼠，连续给药(取0.5ml(含3mg紫杉醇)注射液溶于14.5ml生理盐水中，摇匀。0.2ml/10g)4次，于给第4次药后2小时、4小时各处死一半，剖出主要脏器(心、肝、脾、肺、肾、肌肉、脂肪、卵巢及骨髓)及肿瘤并称重，HPLC测定瘤体内主要脏器的组织分布，结果显示本发明的注射用多西他赛纳米脂质制剂在荷瘤小鼠组织中的分布是市售制剂的4～6倍，对肿瘤的抑制率(78.4％)明显高于市售注射剂组(36.8％)。本试验说明多西他赛纳米脂质制剂在动物体内具有较好的肿瘤靶项性，抗肿瘤效果好毒副作用降低。

Claims (10)

1.一种多西他赛纳米脂质注射液，其特征在于，所述纳米脂质注射液包含以下成分：

1)活性成分：多西他赛；

2)自乳化药物释放体系：由酯类共聚物和磷脂衍生物形成；优选地，所述酯类共聚物选自硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、本棕榈酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸酯及其混合物，所述磷脂衍生物选自胆酸钠，脱氧胆酸钠，甲壳素，合成磷脂，卵磷脂，大豆磷脂及其混合物；

所述多西他赛纳米脂质为胶束型微粒，优选地，其微粒粒径为10～200nm。

2.权利要求1的多西他赛纳米脂质注射液，其特征在于，所述纳米脂质注射液中还包含稳定剂和/或抗氧剂；优选地，所述稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和胆固醇、枸椽酸中的一种或几种，所述抗氧剂为维生素E。

3.权利要求1或2的多西他赛纳米脂质注射液，其特征在于，所述纳米脂质注射液中还包含用于溶解活性成分多西他赛的有机溶剂，优选地，所述有机溶剂选自乙醚、乙醇和乙酸乙酯中的一种或几种。

4.权利要求1或2的多西他赛纳米脂质注射液，其特征在于，所述纳米脂质微粒的粒径为10～200nm。

5.一种权利要求1-4中任一项的多西他赛纳米脂质注射液的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)将酯类共聚物和磷脂衍生物配制成自乳化药物释放体系，优选地，所述酯类共聚物选自硬脂酸、单硬脂酸甘油脂、本棕榈酸甘油酯、聚乙二醇硬脂酸酯及其混合物，所述磷脂衍生物选自胆酸钠，脱氧胆酸钠，甲壳素，合成磷脂，卵磷脂，大豆磷脂及其混合物；和

2)通过物理方法与活性成分多西他赛混合制备而成。

6.权利要求5的制备方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：3)加入稳定剂和/或抗氧剂；优选地，所述稳定剂选自油酸、甘胆酸钠和胆固醇中的一种或几种，所述抗氧剂为维生素E、枸椽酸、枸椽酸钠中的一种或几种。

7.权利要求5或6的制备方法，其特征在于，所述方法还包括以下步骤：

4)将经过步骤1)和2)所制备的混合物进行无菌过滤，所述无菌滤膜的孔径优选为0.22μm膜；和/或

5)将经过步骤1)和2)所制备的混合物进行研匀操作。

8.权利要求1-4中任一项的多西他赛纳米脂质注射液在制备用于治疗肿瘤的药物中的应用。

9.权利要求8的应用，其特征在于，所述肿瘤选自：乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌和头颈癌中的一种或几种。

10.权利要求9的应用，其特征在于，所述肺癌为非小细胞肺癌。