CN101538612A - 一体化血液核酸筛查平台 - Google Patents
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Abstract
本发明属于血液筛查技术领域,具体为一种一体化血液核酸筛查平台。该筛查平台的桌面规划分为5个功能区,依次为耗材区、试剂区、热磁操作区、样本区和废弃物区,其中热磁操作区设有专用热磁旋转装置Agowa7200,或者由分立元件深孔板磁力架、深孔板载架、温控模块、振荡模块组成的热磁装置。筛查试剂包括同步提取RNA、DNA的磁珠法核酸提取试剂和同步扩增HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的一步法RT-PCRTaqMan荧光探针试剂。由程序控制标本扫描、混样汇集、核酸提取,以及PCR反应液配制、分装加样等专用功能。本筛查平台操作方便,设计了操作流程,使筛查效率大大提高,非常适合于国内外血液中心,血制品企业中的检测部门日常使用。
Description
技术领域
本发明属于血液筛查技术领域,具体涉及一种高通量、自动化、一体化的血液核酸筛查平台。
背景技术
与输血相关的传染病的预防和控制已成为全社会关注的焦点。新技术的引进是进一步提高血液安全性的重要手段。核酸扩增检测技术是迄今为止最灵敏最先进的病毒检测技术之一,可以明显缩短“窗口期”,降低血源性病毒的传播危险,是传统免疫学检测手段重要和有效的补充。欧美日自1999年起在新药审查程序指导下对血浆进行核酸检测,2001年9月至2002年12月,FDA批准HCV、HIV RNA的筛查试剂;2005年4月至12月,FDA批准HBV DNA、WNV RNA的筛查试剂;2007年8月,FDA批准了当今核酸检测领域技术领先的cobas TaqScreen WNV Test(Roche公司)。目前,核酸检测已经成为欧美血液制品生产企业进行筛查原料血浆病毒的必要手段,并已推广应用到献血检测,市场潜力巨大。例如Chiron公司的核酸血筛产品销售从1999年的700万美元猛增到2003年的2亿美元。
根据官方统计数字,由于我国人口众多,目前乙肝、丙肝及艾滋病毒携带者分别达到1.5亿、4000万和80万。血液传播是其致病与再次传播的重要途径之一,因此,采用先进的检测技术保证输血安全、血制品安全势在必行。2007年3月,SFDA制订下发了《血液制品疫苗生产整顿实施方案(2007年)》,要求血站对原料血浆适时开展核酸检测工作,我国将在最近全面展开原料血浆的核酸筛查,此后稍晚即将普及至献血筛检。纵观发达国家与发展中国家的实践经验,对血液制品、血站血浆及献血员强制性进行乙肝、丙肝和艾滋病病毒核酸检测是必然趋势,只是个时间问题,取决于各国政府的政策性引导。
目前,FDA批准的Chiron与Roche的核酸血筛试剂均为封闭式应用体系,即关键的检测仪器自行设计生产,且只能匹配其专用试剂,不能采用其它厂家的试剂。互不兼容,以谋取垄断优势技术及商业利益。例如2006年3月Roche获得CE认可、FDA于2007年3月同意受理审查的cobas201 TaqScreen MPX Test平台,由自动混样的Hamiton MicrolabStar(哈米尔顿-斯达尔)、自动化核酸提取的COBAS AmpliPrep、自动PCR扩增检测的COBAS TaqMan Analyzer、配套的数据管理软件AmpliLink、PDM服务器及专用的即用型试剂包组成;Roche计划于2008年推出一体化程度更高、检测通量更大的cobas401平台,将在日本红十字会首先使用,其封闭性也更高。同样,2006年10月-2007年3月,FDA批准Chiron的Procleix Ultrio Assay(HBV/HCV/HIV联合定性检测,但目前FDA仅批准其HCV/HIV可用于血筛用途)采用全封闭的Procleix TIGRIS系统,仅需专用软件及专用试剂的支持。由此可见,仿制国外同类产品必须包括系列复杂仪器在内的仿制,而该类仪器涉及光学、热学、磁学、自动控制、机械手、软件等多个领域并对液体处理精度有较高要求,短期内很难实现。其次,照搬欧美日的实践方案不符合中国的国情。一是病毒流行株具有地域性,如中国主要流行的血液病毒与欧美就不同,流行的亚型也不尽相同;二是日检测标本量及混样数未经当地实践的问题。经济因素决定了处于发展中国家的检测中心不太可能采用近年来国外流行的单份血检测,而进口试剂尚未在华做过大规模的筛查试验,缺乏当地的一手研究资料,混样数又取决于筛查体系的灵敏度及筛查人群的阳性率、“窗口期”标本的病毒载量、日筛查量;三是未充分考虑检测人员的工作时间问题,全流程时间过长,缺乏人性化设计。如Procleix TIGRIS系统一次检测500个标本仅仪器运行时间约9个小时,1000个标本则需14小时左右;cobas201 TaqScreen MPX Test全流程时间则更长。二者均为初筛的工作时间,一旦初筛阳性,需要复核具体哪个项目为阳性或者拆分,时间更长,当天根本不能出具检验报告。然而,国内多数血液中心需要当天检验当天出具报告。另外,国内较大的检测中心需要日处理1500-3000份标本。
综上所述,本领域迫切需要一种适合国情的核酸筛查体系,并且不能仿制国际上的同类产品。
发明内容
本发明的目的提出一种操作方便、筛查效率高的一体化血液核酸筛查平台。
本发明人在长期调研、评估诊断仪器试剂自动化、一体化的过程后,认为:当前生物医药行业内,全球知名的半自动、自动化液体处理机器人(移液工作站)制造商有Hamilton(哈米尔顿)、Tecan(帝肯)、Beckman Coulter(贝克曼库尔特)、Perkin Elmer(帕金埃尔默)、Eppendorf(艾本德)、Thermo Labsystems(热电)等为数不多的中性企业,和Qiagen(凯杰公司)、Roche(罗氏公司)、Chiron(凯荣公司,现为诺华制药收购,称为诺华诊断,是其合作伙伴Gen-Probe开发的仪器与试剂)、Chemogen(凯墨杰公司)等致力于封闭式应用的专业性企业。中性制造商的仪器尽管只提供可程控的移液功能及机械移板功能,无热磁等功能模块,也不明确工作站的具体应用领域,但其灵活性高,可拓展性好、模块化、易于兼容、便于用户自己开发新功能。其中业内知名度最高、同样最适合本发明实施的为Hamilton、Tecan、Beckman Coulter三个品牌的全自动移液工作站。本发明以该类液体处理工作站为基础,整合入磁操作模块、温控模块,并可选配振荡模块、机械抓手、磁力架等元件,其中有些元件中性制造商本身可以配置,如机械手,有些元件不能配置,如磁力架、热磁一体化装置如Agowa7200/2400/9600等,需要另外购置并且设法与之匹配。一般说来,根据试剂的操作要求增加必要的元件,并程序化整合,从而形成一体化的筛查平台与技术流程,是本发明的指导思想之一。用于血液核酸筛查的此类工作平台尚无报道。
本发明提供一种一体化血液核酸筛查平台,以目前已有的自动移液处理工作站为基础,增加、修饰、改造、调节、组合工作站中可以接受的任意的标准化元件,按照规划的结构合理定位,使各元件可控、有序、既独立又协作,通过主程序自动控制,任意调节与调用,成为功能明确、目标清楚、特点鲜明的有机整合体。一般来说,本发明的工作站结构可分成5个功能区,从左到右依此(但不限于此)为:耗材区(附图中标号1的位置),放置实验所需要的耗材如吸头,因此,也称为吸头载架,可加载专用吸头,可占用1-12轨道。试剂区(附图中标号2、3、4的位置),放置实验所需要的试剂,根据各种试剂在实验中消耗量的不同可选择大、中、小的容器与固定载架,如附图中4为较大体积容器,是一个试剂槽,2为中体积容器,也是一个试剂槽模块,3为较小体积容器,是一个离心管模块,这些窗口都位于多功能载架上。磁热操作区{附图1中标号5的位置},放置实验关键的Agowa7200,或采用热磁分开独立元件如附图3中①、②、③、④的位置,分别放置深孔板磁力架模块、深孔板载架、温控模块、振荡模块,这些模块都位于多功能载架上。样本区(附图中8的位置),放置标本管。废弃物区(附图中6与7的位置),分别用来放置实验的液废与固废。5个功能区按照洁净程度的不同顺序,由洁净区到污染区合理排列,在工作站的X轴与Y轴组成的平面上固定,在Z轴方向上即平面的上方,为工作站自身的机械臂或(及)机械手,机械臂上带有移液装置(如加样器)可对平面上的元件进行移液操作,可在XY、Z轴上运动;而机械手可对标准元件中的标准耗材(如96孔板)进行移动操作,可在XY、Z轴上运动。通过主程序对各元件的子程序的控制与调用,以及本身对移液加样器的运动控制和吸液、放液、液面探测、流程监控等工作站固有程序控制的整合,使XY平面上的各元件按时序配合Z轴上的机械运动开启各自功能,完成复杂的标本扫描、混样汇集及核酸提取,PCR反应液配制、分装加样等系列专用功能。
本发明的核心是采用整合有热磁模块的自动移液工作站,集标本扫描、混样、核酸提取、PCR反应液的配制与分装、核酸模板加样等功能于一体,该阶段应用磁珠法核酸提取试剂可以使本发明很好地实施。后续的荧光PCR扩增检测采用多通道荧光PCR仪如ABI7300/7500等自动完成。
本发明中,汇集池样品的核酸提取则围绕磁珠法核酸纯化试剂的具体操作要求来进行。主要步骤如下:样品中加入裂解液后的室温孵育、磁珠吸附核酸、三步洗涤、加热条件下洗脱。自动化液体处理工作站则按照要求,桌面规划包含五个相对独立的功能区。最重要的磁热主操作区可以有两种方式选择。一种是采用热磁一体化的组件如AgowaMaxiSep 7200等,该组件既可磁操作又可升温降温操作;另一种是采用96孔深孔板的磁力架(Promega等)、独立加热模块(可自制或外购)、振荡模块(用于混合功能)、机械抓手(用于移板)的组合形式。
PCR Setup则视实验室的具体条件及基因扩增实验室的操作守则而定。可由移液工作站自动完成,也可通过功能设置,将提取到的核酸模板转移出工作站,例如由人工转移到其它工作区内完成。工作站自动完成的,需要设置PCR主反应液的配制与分装,模板的转移等移液操作。人工只需封板(PCR 96孔板),上机扩增检测即可完成全检测流程。
本发明所述的试剂为一种磁珠式血浆病毒核酸提取试剂和TaqMan PCR核酸扩增检测试剂及含内对照的质控试剂。提取试剂由含有胍盐的裂解液、硅胶基质的磁珠悬液、不同浓度盐基质的洗涤液A、B、C、缓冲液基质的洗脱液等组成,均为即用型试剂,无需添加乙醇或异丙醇等有机挥发性试剂。操作简单:标本(体积为V)中加入(1.2-1.5)V的裂解液后混匀,同时或稍后(2-10分钟)加入(0.1-2)mg磁珠悬液,放置20-30分钟,中间混匀几次或持续低速振荡混合。磁场开启将吸附有核酸的磁珠侧吸至管壁;移液针或移液枪开始吸弃裂解废液至液废处。移入初始反应总体积或以上的洗涤液A,视力度大小混匀数秒至数分后开启磁场,磁珠侧吸至管壁;移去废液,加入等体积的洗涤液B,同样操作直到移去洗涤液体C,加入少量体积(50-200μl)的洗脱液,温控元件对其加热,升温至55-80℃并维持温度3-15分钟,使核酸充分洗脱下来。趁热或冷至室温后将核酸模板转移到一块96孔PCR中转板或直接加样到PCR主反应液中。含内对照的质控试剂主要为竞争性内标,内标通常加在裂解液中起到核酸提取、扩增检测等全程监控的作用,从而实施对每个测试有效性的监测。另外还匹配了每批试验的质控:阴性对照和阳性对照(基因工程技术构建的绿色安全的质控品),参与核酸提取与扩增检测全流程,主要起到污染和灵敏度的批操作质控。当然也可以使用真实的阴、阳性标本(灵敏度标本)替代本发明中的阴性对照和阳性对照。
TaqMan PCR核酸扩增检测试剂则由HBV反应液A(含PCR缓冲液、热启动酶、dATP/d CTP/d GTP/d UTP、UNG、保护剂等),HBV反应液B(Mg等),HBV反应液C(HBV引物、探针等);HCV/HIV反应液A(含PCR缓冲液、Mg、d ATP/d CTP/d GTP/d UTP、保护剂等),HCV/HIV反应液B(含逆转录酶、热启动的耐热聚合酶、RNA酶抑制剂、保护剂并可选加热不稳定的UNG等),HCV反应液C(HCV引物、探针等),HIV反应液C(HIV引物、探针等)。扩增主反应液的配制按照A∶B∶C=8∶6∶1的比例,每测试分装15μl,移入等体积(15μl)核酸模板后,贴膜密封,即可上荧光PCR仪,按固定的程序扩增检测同步在线监测,完成PCR热循环后分析数据即可。PCR程序为室温-37℃1-3分钟(UNG),50-60℃15-30分钟(逆转录),95℃2-10分钟(热变性),5个严谨度低的三步法PCR预循环后,开始40-50个标准的TaqMan PCR:95℃5-10秒,60℃30-60秒。
本发明设计的一体化血液筛查平台,操作十分方便,同时结合筛查试剂的使用,设计了具体操作流程,非常适合于国内血液中心、血制品企业中的检测部门日常使用。
附图说明
图1为核酸提取的桌面规划图(Microlab STAR-Agowa7200)之一。
图2为标本汇集的桌面规划图(Microlab STAR-Agowa7200)之一。
图3为核酸提取的桌面规划图(Microlab STAR-96DW Plate)之二。
图4为标本汇集的桌面规划图(Microlab STAR-96DW Plate)之二。
图中标号:
1.吸头载架(Tips Carrier),可加载专用吸头,可占用12个轨道;
2.试剂槽模块,位于多功能载架上,可为50mL×8;
3.离心管模块,位于多功能载架上,可为1.5mL×8;
4.试剂槽,可占用1个轨道;可为120mL×3;
6.废液槽,可占用2个轨道;
7.废物区,装有一次性废物袋,主要用于放置废弃吸头;
8.试管架区,放置采血试管,每条试管架可占用1个轨道;
9.96孔PCR中转板,可以预先冷却,位于多功能载架上;
10.汇集池区,为96孔深孔板,位于多功能载架上;
①.深孔板磁力架模块,位于多功能载架上;
②.深孔板载架,位于多功能载架上;
③.温控模块,适用于深孔板,位于多功能载架上;
④.振荡模块,适用于深孔板,位于多功能载架上。
具体实施方式
实施例1 HAMILTON Microlab STAR PLUS/STAR/STARLET(全自动移液工作站)-Agowa7200(程控磁热处理器)作为标本扫描、混样汇集及自动化核酸提取的平台,多通道荧光PCR仪ABI7300/7500作为扩增检测设备。
以HAMILTON Microlab STARLET为例,加载AGOWA Maxisep7200热磁一体化元件,建立桌面规划如附图1及附图2所示。标本汇集时采用24份混样模式,一次标本架可容纳576份标本(18条×32个/条=576)可混合成24个汇集池(576=24×24),重复3次即完成72个汇集池,采集的标本数达到1728份。每份标本取样30-100μl以保证可控的取样精度,最后将汇集池混匀后取固定体积如360-500μl样品到核酸提取操作区(磁热操作区),剩余的样品留做可溯源的档案管,该部分的时间可控制在1.5小时内(视标本堵塞感应吸头的频繁程度而定,如果未发生堵塞情况则于30-45分种内完成)。
汇集一旦结束,启动核酸提取程序,移液装置将500-600μl裂解液(预先混有适量的内标)加入样品管并混匀,5分钟后,移入50-70μl磁珠悬液(可混有蛋白酶类物质),混匀后室温反应20-30分钟,AGOWA磁振荡功能开启并使磁珠侧吸于管壁,移去液体后使磁珠移向管底,移取900-1000μl的洗涤液A,以较高的流速腾空打入样品管,使磁珠于弱磁力控制下充分悬浮并大致混匀,达到清洗的目的;同样开启磁振荡功能,使磁珠侧吸于管壁,移走洗涤液A,加入洗涤液B及C,最后移去洗涤液C,确保无残余液体后,加入50-200μl的洗脱液,开启温控升温至56-80℃(软件的标示温度,管内液体的实际温度低于该温度)持续5-10分钟,停止温控,开启磁振荡并使磁珠侧吸于管壁,移取洗脱有核酸模板的液体到一新的96孔PCR板(中转板)中,该中转板可预冷至2-8℃。提取满负荷汇集池核酸约需3-4.5小时,视仪器的加样通道数和机械臂数而定。
PCR Setup可通过移液装置配制分装,并加入提取到的模板。用户仅需要取出96孔PCR板,贴膜上机进行荧光PCR检测即可。但是考虑到经济性,可采用取出中转板,到规定的分隔室内,使用排枪将模板加入到人工预先配制分装好的PCR主反应液中,封膜上机检测。本步骤约需1.8-2.4小时。
实施例2 HAMILTON Microlab STAR PLUS/STAR/STARLET(全自动移液工作站)-深孔板磁力架-加热模块-振荡模块作为标本扫描、混样汇集及自动化核酸提取的平台,多通道荧光PCR仪ABI7300/7500作为扩增检测的(移液平台必须带有移板功能的机械手)
采用96孔板作为血液筛查的通用耗材拥有诸多优势,为本发明思想之最佳体现。首先,标本汇集到96孔深孔板(Thermo公司或Greiner公司),由于96孔深孔板的可移动性,故混样可以持续性进行,灵活机动。每次的最高标本处理数达2304份(96x24),因而检测通量更高。同时96个汇集池的操作模式与后续的96孔PCR更加匹配,不象采用AGOWA7200那样每次扩增检测有24孔的浪费。其次,深孔板作为标准的通用耗材其孔间差别小均一性能好,每孔容纳体积可以到2.2ml,所以标本上样量还可以提高。再次,AGOWA7200热磁一体元件始终存在向下的磁力作用(即磁远离设置时仍有弱的向下的磁力),使混匀效率有所降低,而采用磁、热、振荡分离的独立元件,可以随心所欲地调节混合效果,易于混匀而不趋于沉淀,高效实现磁珠与核酸的充分吸附,高效实现磁珠的洗涤与洗脱。最后,独立的致热元件可以避免交叉的气溶胶污染,例如可以采用将洗脱液预先加热到指定温度后,移入到深孔板中,快速洗脱下磁珠上可能结合的核酸。而不必采用底部加热磁珠洗脱的模式,强阳性标本的病毒核酸容易形成气溶胶污染。
本方案以HAMILTON Microlab STAR为例的桌面规划如附图3、附图4所示。标本汇集如前所述,主要变化为桌面上可容纳的标本架更多,汇集池的位置位于多功能载架的深孔板。核酸提取的变化较大,详述如下:图示的多功能载架区域纵向设置深孔板磁力架模块①、深孔板位②、加热模块③(深孔板)、振荡模块④(深孔板)等四块固定区。
技术流程:
1)深孔板放在模块②上,移液装置依次移入汇集池样品360-500μl、裂解液540-750μl混匀1-5分钟,再加入去抑制剂磁珠混合物65-100μl,并充分混匀。机械手将该反应板抓至振荡模块④上,选择合适的速度振荡30分钟。
2)将深孔板转移到磁力架模块①上,侧吸足够时间,直到磁珠吸附完全(可选浅表液体混匀一次),吸去废液。
3)将深孔板转移到模块②上,加入洗涤液A 950-1350μl。机械手将该反应板抓至振荡模块④上,选择合适的速度振荡1-2分钟。
4)将深孔板转移到磁力架模块①上,侧吸足够时间,直到磁珠吸附完全。弃去废液。
5)同样重复步骤3-4,依次采用洗涤液B及C,加洗涤液体C的量比前述液体略多,用来清洗深孔板壁沿可能残留的前述液体;同时需要注意洗涤液C要尽量吸弃干净,避免残留液体对下游操作有负面的影响。
6)将深孔板转移到模块②上,加入预热的洗脱液100-200μl(洗脱液于加热模块上预先加热至设定温度如56-80℃),转移到振荡模块④上充分混匀3-5分钟,再转移回模块②上静置2-5分钟,最后转移到磁力架模块①上,侧吸1-3分钟,磁珠贴壁完全,吸取洗脱下来核酸模板到96孔PCR板中,弃去含废磁珠的深孔板。
实施例3应用实例:采用上述一体化筛查平台对国际标准品(一级参考品)及基因型血清盘进行检测来自NIBSC(WHO指定的核酸参考品生产分发者)的国际定量标准品:
HBV(NIBSC CODE 97/750),冻干粉,5×105IU/vial,以0.5ml纯化水复溶后,浓度为:1.0+E06IU/ml,以阴性血浆稀释到10IU/ML、20IU/ML、50IU/ML。
HCV(NIBSC CODE 96/798),冻干粉,5×104IU/vial以0.5ml纯化水复溶后,浓度为:1.0+E05IU/ml,以阴性血浆稀释到50IU/ML、100IU/ML、200IU/ML。
HIV(NIBSC CODE 97/650),冻干粉,5.56log10IU/vial,以0.5ml纯化水复溶后,浓度为:7.26+E05IU/ml,以阴性血浆稀释到50IU/ML、100IU/ML、200IU/ML。
HCV RNA Genotype Panel(NAT,基因型血清盘;NIBSC CODE 02/202),0.5ml/支,共6支,分别由基因型1(02/190)、2(02/192)、3(02/194)、4(02/196)、5(02/198)、6(02/200)组成,浓度均为1000IU/ml。
HIV-1RNA Genotype Reference Panel(NAT,基因亚型血清盘;NIBSC CODE 01/466),1.1ml/支,共11支,分别由A、B、C、D、E(AE)、F、G、H(AG-GH)等亚型及O族、N族和阴性对照组成。
采用单份重复检测(重复次数N≥24),结果显示一体化平台的检测灵敏度达到HBV20IU/ML(检出率≥95%)、HCV 100IU/ML(检出率≥95%)、HIV 100IU/ML(检出率≥95%),而低拷贝的病毒浓度仍有较高的检出率,如HBV 10IU/ML(检出率≥80%)、HCV 50IU/ML(检出率≥80%)、HIV 50IU/ML(检出率≥75%),稀释血浆及阴阳性对照均正常,内标均为阳性。
基因型或亚型血清盘检测结果为HCV基因型1-6均检出,HIV-1的A、B、C、D、E(AE)、F、G、H(AG-GH)等亚型及O族、N族均检出,阴性对照结果为阴性;内标均为阳性。
本应用实例说明,本发明建立的检测平台性能卓越,灵敏度已经满足常规核酸筛查的要求,与FDA批准的试剂如COBAS AmpliScreen HBV/HCV/HIV及Chiron(Gen-Probe)的Procleix HCV/HIV Assay试剂接近或相当。
根据本发明的公开内容,本领域的熟练技术人员无需过多实验即可对本发明的血液筛查技术平台成功得以实施,达到预期效果。本发明公开的实施例仅是对本发明进行描述,但并不构成对本发明的限制。本领域的熟练技术人员用显而易见的相似替代物或改造,或用某些在化学上或生物上结构功能相关的制剂替代在此描述的制剂,或对本发明的有关内容进行变动,但不超出本发明的精神、范围和思想,均落入本发明要求保护的范围。
Claims (2)
1、一种一体化血液核酸筛查平台,以现有的移液处理工作站为基础,在多功能载架上融合、配置标准化元件构成,其特征在于该平台结构的桌面规划分为但不限于以下五个功能区,从左到右可以是但不限于以下顺序:
(1)耗材区放置实验所需的耗材,包括有吸头载架(1),供放置专用吸头;
(2)试剂区放置实验所需的筛查试剂,其中包括一个试剂槽模块(2)、一个离心管模块(3)和一个试剂槽架(4);
(3)热磁操作区放置实验用Agowa7200,或者放置由分立元件组成的实验热磁装置,这些分立元件包括:深孔板磁力架模块、深孔板载体、温控模块、振荡模块;
(4)样本区放置标本管;
(5)废弃物区放置实验的液废与固废;
在桌面规划的上方有工作站自身具备的机械臂和/或机械手,机械臂上带有移液装置,实施对平面上的元件进行移液操作,机械手实施对标准元件进行移动操作。
2、根据权利要求1所述一体化血液核酸筛查平台,,其特征在于筛查试剂包括同步提取DNA、RNA的磁珠法核酸提取试剂和同步扩增检测HBV DNA、HCV RNA、HIV RNA的一步法RT-PCRTaqMan荧光探针试剂;其中,所述TaqMan荧光探针检测试剂包括:由PCR缓冲液、热启动酶、d ATP/d CTP/d GTP/d UTP、UNG、保护剂组成,并由此为基础配制稳定储存的PCR/RT-PCR反应液组分A,由含逆转录酶、热启动的耐热聚合酶、RNA酶抑制剂、保护剂并可选加热不稳定的UNG组成的混合酶系,并可由此为基础配制稳定储存的PCR/RT-PCR反应液组分B;所述的磁珠法核酸提取纯化试剂组成如下:含有胍盐的裂解液、硅胶基质的磁珠悬液、不同浓度盐基质的洗涤液A、B、C、缓冲液基质的洗脱液。
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C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20090923 |