CN101508716B - 一种毛发干裂解液 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种毛发干裂解液，成份及配比为Tris-Cl(pH8.0)10mmol/L、NaCl 100mmol/L、CaCl2 1mmol/L、DTT 20～200mmol/L、SDS质量浓度0.5％～5.0％、Triton X-100体积浓度0.5％～4％，蛋白酶K 0.2～2mg/ml，溶剂为无菌双蒸水。与现有的毛发消化液相比，消化时间大大缩短，消化效率大大提高，为法医鉴定与临床诊断提供新的途径。

Description

一种毛发干裂解液
技术领域
本发明涉及生化试剂，尤其涉及一种毛发裂解液。
背景技术
在犯罪现场证物收集过程中，毛发是最为常见的犯罪现场证物之一。此外，因毛发干具有特殊的分子机构而使其具有不易腐烂特点，所以比其它现场犯罪证物如血迹、唾液、指纹、脚印、肌肉等更易被收集到，特别是在犯罪时间比较久远的现场。目前，法医鉴定过程中是从现场证物中获取犯罪嫌疑人的遗传信息，通过分子比对来判定犯罪嫌疑人的是否参与作案。在以毛发干作为样品抽提遗传信息的过程中，工作者常常发现，毛发干不易被消化。目前最快的消化方法仍需要3个小时甚至更长，这种不易消溶的特性不仅限制了其在法医鉴定过程中成为非首选检测证物，而且严重影响了其尽管作为最易获得且对人伤害度最低的临床标本却常常不被选取的困境。因而，在不破坏毛发遗传分子的结构的前提下，提高人体毛发消化效率，缩短毛发的溶解时间是解决上述困境的有效途径。
发明内容
本发明的目的在于解决现有毛发消化时间长效率低的问题，提供一种在不破坏毛发干遗传分子的结构的前提下能快速溶解消化毛发干的裂解液。
本发明的快速消化毛发干的裂解液成份为：Tris-Cl(pH8.0)10mmol/L、NaCl 100mmol/L、CaCl2 1mmol/L、DTT 20～200mmol/L、SDS质量浓度0.5％～5.0％、Triton X-100体积浓度0.5％～4％、蛋白酶K 0.2～2mg/ml，溶剂为无菌双蒸水。
毛发干裂解液的配制及使用是：常温常压下，按上述配方取Tris-Cl(pH8.0)、NaCl、CaCl2、SDS、DTT、Triton X-100溶入无菌双蒸水，充分搅拌制成A液，4℃保存；使用时在预处理后的样品中先加入A液后，再按0.2～2mg/ml加入相应量蛋白酶K。溶液的配制遵循现配现用原则。
本发明通过正交实验设计，充分考虑了常用还原剂DTT、去污剂及蛋白质变性剂SDS、破膜剂Triton X-100与蛋白酶K之间的匹配，开发出一种能快速高效消化头发干的裂解液。与现有的毛发消化液相比，消化时间大大缩短，消化效率大大提高，为法医鉴定与临床诊断提供新的途径。
具体实施方式：
实施例1
将pH为8.0的Tris-Cl、NaCl、CaCl2、SDS、DTT、Triton X-100按表1浓度溶于无菌双蒸水，4℃保存备用；使用时，再按表1浓度加入相应量蛋白酶K，制备成本发明的毛发干裂解液。
表1本发明发干裂解液各组分含量及消化耗时
Figure G2009100429355D00021
取长40cm的新鲜头发干，先用洗涤精充分洗涤，除尽头发上的杂质，用无菌蒸馏水多次漂洗，随后用无菌的2％的NaOH洗涤15分钟，接着用无菌的2％的HCl洗涤15分钟，之后用无菌蒸馏水多次漂洗后依次用75％、100％的乙醇洗涤一次，晾干后备用。
在无菌条件下剪成长约0.5-3mm的片段，并置于4个编号为C1～C4且体积均为2ml的无菌EP管中，每个EP管中头发干长度均为10cm。
在C1～C4EP管中按表1分别加入温度为56℃的消化液400μl，充分混匀，56℃水浴直至EP管内看不到明显的毛发碎片，期间每15分钟轻轻颠倒EP管数次，观察并记录消化用时。4种配比的消化耗时见表1。
对比例
根据现有技术中文献公开的组织消化液种类及配方，配制如表2所示的消化液，与本发明的消化液作毛发干消化对比试验。其中D1号消化液参照高林林等的配方(参见文献：高林林等.染色毛干mtDNA不同提取方法的研究.中国法医学杂志，2006，21(5)：284-286)，D2号消化液参照S.Amory等配方(参见文献：S.Amory，C.Keyser，E.Crube′zy，B.Ludes.STR typing of ancient DNAextracted from hair shafts of Siberian mummies.Forensic ScienceInternational，2007，166：218-229)；D3号消化液参照Hellmann等配方(参见文献：A.Hellmann，U.Rohleder，H.Schmitter，M.Wittig.STR typing of human telogenhairs-a new approach.Int J Legal Med，2001，114：269-273)；D4号消化液参照M.Thomas P.Gilbert等配方(参见文献：M.Thomas P.Gilbert，Lynn P.Tomsho，Snjezana Rendulic，Michael Packard，et al.Whole-Genome Shotgun Sequencing ofMitochondria fromAncient Hair Shafts.Science，2007，317：1927)；C3号消化液是本发明实施例1中第3种配方。
取长约50cm的新鲜头发干，先用洗涤精充分洗涤，除尽头发上的杂质，用无菌蒸馏水多次漂洗，随后用无菌的2％的NaOH洗涤15分钟，接着用无菌的2％的HCl洗涤15分钟，之后用无菌蒸馏水多次漂洗后依次用75％、100％的乙醇洗涤一次，晾干后备用。
在无菌条件下剪成长约0.5-3mm的片段，分别置于5个编号为D1、D2、D3、D4、C3的无菌EP管中。
在D1～D4号EP管中依次加入如表2中所示的D1～D4号消化液400μl，充分混匀，56℃水浴，期间每15分钟轻轻颠倒EP管数次，直至EP管内看不到明显的毛发碎片，观察并记录消化用时。消化耗时结果见表2。从消化用时来看，本发明的消化时间比其它配方大大缩短。
表2现有的4种消化液配方成分及消化时间与本发明的比较
Figure G2009100429355D00031
注：符号“-”代表不含有该种物质。

Claims (2)

1.一种毛发干裂解液，成份及配比为：pH为8.0的Tris-Cl 10mmol/L、NaCl100mmol/L、CaCl2 1mmol/L、DTT 20～200mmol/L、SDS质量浓度0.5％～5.0％、Triton X-100体积浓度0.5％～4％，蛋白酶K 0.2～2mg/ml，溶剂为无菌双蒸水。
2.如权利要求1所述的毛发干裂解液，其特征在于：DTT浓度为80mmol/L、SDS质量浓度为2％、Triton X-100体积浓度为2％、蛋白酶K浓度为0.5mg/ml。
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