CN101505800A

CN101505800A - 经由Mitsunobu反应制备VLA-4拮抗剂的聚乙二醇化共轭物

Info

Publication number: CN101505800A
Application number: CNA2006800319025A
Authority: CN
Inventors: A·W·康拉迪; J·L·史密斯; M·S·达彭; C·M·谢姆科
Original assignee: Elan Pharmaceuticals LLC
Current assignee: Elan Pharmaceuticals LLC
Priority date: 2005-07-08
Filing date: 2006-07-07
Publication date: 2009-08-12
Also published as: IL188194A0; AU2006269382A1; IL188194A; NZ564836A; CA2614200A1; JP2009501246A; US8569426B2; SG196786A1; US20070021555A1; SG163565A1; EP1901778A2; AU2006269382B2; ZA200711116B; US20140073788A1; WO2007008563A2; KR20080031053A; MX2008000291A; WO2007008563A3; BRPI0612407A2; US20130018187A1

Abstract

本发明公开了使用Mitsunobu条件制备农业用、治疗用和食品添加剂化合物的聚合共轭物的方法。

Description

经由Mitsunobu反应制备VLA-4拮抗剂的聚乙二醇化共轭物

技术领域

本发明涉及制备治疗用、农业用和食品添加剂化合物的聚合共轭物的方法。更具体来说，本发明涉及采用Mitsunobu反应条件来制备用于治疗各种哺乳动物、尤其是人类的疾病和功能紊乱以及用于农业和用作食品添加剂的共轭物的方法。在某些方面，本发明涉及使用Mitsunobu条件与醇(尤其是含醇聚合物)以及胺一起形成所需的共轭物。

背景技术

生物学活性化合物与聚合物的结合已经受到了极大地关注，并已经成为了控制多种特性的通用方法，例如，这些化合物的生物分布、药代动力学、和毒性。经常选择用于制备生物学活性化合物的聚合共轭物的聚合物是聚乙二醇(PEG)。小和大的生物学活性分子都广泛地用作共价修饰剂。对于这些共轭物的讨论，参见Eur.Polym.J.19，No.12，第1177-1183页(Zaplinsky等人，1983)等，Journal of Controlled Release10(1989)145-154(Veronese等人，1989)，和Advanced Drug DeliveryReviews，16，157-182(Zaplinsky，1995)。

近来已经发现例如α₄β₁(VLA-4)拮抗剂的聚合共轭物已经极大地提高了血清半衰期。这些聚合化合物可使用多种合成方法来制备，包括通过将活性分子的酯与聚合物胺反应形成羧酰胺、活性分子的胺与聚合物氯甲酸酯之间形成氨基甲酸酯、或活性分子的异氰酸酯与聚合物醇之间形成氨基甲酸酯。这些方法的总产率一般不能满足需要，经常涉及多个步骤和纯化手段。因此需要设计一种方法，该方法能以定量或接近定量的产率分离VLA-4抑制剂的共轭物。

这些聚合共轭物的重要性表明需要方便和有效地合成这些物质。

发明内容

本发明提供了农业用、治疗用和食品添加剂化合物的聚合共轭物的改进合成方法。本发明的方法以优异的产率产生最终的共轭产物。在一个优选的方面，本发明提供了通过使用Mitsunobu反应条件缩合聚合醇与胺而制备共轭物的方法。在另一个优选的方面，本发明提供了通过使用Mitsunobu反应条件缩合聚合胺与醇而制备共轭物的方法。

在一个方面，本发明提供了一种用于制备活性化合物的共轭物的方法，该方法包括：a)将聚合醇与亲核试剂在三价膦和合适的偶氮二甲酰化合物，例如偶氮二羧酸二乙酯或偶氮二甲酰二哌啶的存在下反应形成共轭物；和b)分离该共轭物。

在一个具体的方面，活性化合物和生成的共轭物显示VLA-4拮抗剂特性。

在另一个方面，本发明提供了用于制备下面式I的共轭物的方法：

B是生物相容性聚合物部分；

q为从大约1至大约100；

在每种情况下A都独立地是具有生物学或农业活性的化合物或A是食品添加剂化合物。

该方法包括

a)将式Ia的聚合醇

在三价膦和适当取代的偶氮二甲酰化合物的存在下，与式H-Nu的亲核试剂反应以形成式I的化合物，其中Nu是对应于上述式A的基团，且H是Nu上的酸性氢；和

b)分离式I的化合物。

具体实施方式

如上所述，本发明提供了用于制备农业用、治疗用和食品添加剂化合物(以后称为“活性化合物”)的共轭物的方法。该共轭物包括与一个或多个活性化合物共价连接的一个或多个聚合物部分，其中生成的共轭物与该活性化合物具有相同类型的活性。在一个方面，该活性化合物和生成的共轭物是能抑制白细胞粘附、尤其是至少部分由α₄整合素所介导的白细胞粘附的化合物。

在一个优选的方面，式I的共轭物中的A基团可由式II代表

其中

J选自：

a)式(a)的基团：

其中R³¹是与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键，或者R³¹是-H、R^31′、-NH₂、-NHR^31′或-N(R^31′)₂、-NC₃-C₆环基、-OR^31′、-SR^31′，其中每个R^31′独立地是任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基、任选取代的C₃-C₆环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基，

且R³²是与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键，或者R³²是-H、-NO₂、卤代烷基或基团-N(MR⁴¹)R⁴²，其中M是共价键、-C(O)-或-SO₂-，R⁴¹是R^41′、N(R^41′)₂或-OR^41′，其中每个R^41′独立地是氢、任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环或任选取代的杂芳基，其中任选的取代基是卤化物、C₁-C₆烷基、或-OC₁-C₆烷基，

且R⁴²是氢或R^41′；和

b)式(b)的基团：

其中R选自与聚合物部分连接的共价键、氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基，其中每个氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基任选地与聚合物部分共价连接，其中，在每种情况下，聚合物部分任选地包括连接基团，所述连接基团与聚合物部分共价连接；

Ar¹选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中每个芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基任选地与聚合物部分共价连接，其中聚合物部分任选地包括连接基团，所述连接基团将聚合物部分与Ar¹共价连接；

Ar²选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中每个芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基任选地与聚合物部分共价连接，其中所述聚合物部分任选地包括连接基团，所述连接基团将聚合物部分与Ar²共价连接；

X选自-NR¹-、-O-、-S-、-SO-、-SO₂和任选取代的-CH₂-，其中R¹选自氢和烷基；

T选自；

a)式(c)的基团

其中Y选自-O-和-NR¹-，其中R¹选自氢和烷基；

W选自与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键、和-NR²R³，其中R²和R³独立地选自氢、烷基、取代的烷基、以及其中R²和R³与其结合的氮原子一起形成杂环或取代的杂环，其中每个烷基、取代的烷基、杂环和取代的杂环任选地与聚合物部分共价结合，所述聚合物部分进一步任选地包括连接基团；

m是等于0、1或2的整数；

n是等于0、1或2的整数；和

b)式(d)的基团

其中G是任选取代的芳基或任选取代的含有0至3个氮的杂芳基5或6元环，其中所述的芳基或杂芳基任选地进一步包括与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键；

R⁶是与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键，或者R⁶是-H；

R⁵⁵选自烷氧基、取代的烷氧基、环烷氧基、取代的环烷氧基、芳氧基和取代的芳氧基、和-OH；

条件是：

A.J、Ar¹、Ar²和T的至少一个含有与聚合物部分连接的共价键；

B.当J与聚合物部分共价连接时，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-SO₂-；和

C.当X是-O时，则m是2。

在一个优选的实施方式中，仅J、Ar¹、Ar²和T中的一个含有与聚合物部分结合的共价键。

在共轭反应中使用的化合物H-Nu是含有与Nu共价连接的酸性氢的化合物。式H-Nu的优选化合物可以由式II.1代表

其中

J和Ar²的定义与式II的定义相同；

T是带有酸性氢的基团；且

R⁵⁵是酸性保护基团。

合适的T基团包括杂环基团、酰亚胺、苯酚、磷酸单酯和二酯、羧酸、异羟肟酸酯、硫醇、硫代酰胺、β-酮酯和1，3-二酮。

优选的T基团是式(c)的基团

其中Y选自-O-和-NR¹-，其中R¹选自氢和烷基；

W是含有酸性氢的基团，氢优选在邻近羰基的氮原子上，其中W基团任选地与Y(CO)通过连接基团连接。

另一个优选的T基团是式(d)的基团

其中G是任选取代的芳基或任选取代的含有0至3个氮的杂芳基5或6元环；且

R⁶是氢。

应该理解的是，q的数值是根据聚合物部分的数目与A-部分的数目的比例计算而来的。换句话说，当q是1.5时，则预计是例如下式I′：

优选的由本发明制备的式I的共轭物包括下式Ia的那些化合物：

和其药学上可接受的盐类，其中

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

q为从大约1至大约100；

在每种情况下A都独立地是式IIa的化合物、及其药学上可接受的盐类

其中

R选自与聚合物部分结合的共价键、氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基，其中每个氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基任选地与聚合物部分共价连接，其中，在每种情况下，聚合物部分任选地包括与聚合物部分共价连接的连接基团；

Y选自-O-和-NR¹-，其中R¹选自氢和烷基；

m是等于0、1或2的整数；

n是等于0、1或2的整数；

条件是：

A.R、Ar¹、Ar²、W和-NR²R³的至少一个含有与聚合物部分结合的共价键；

B.当R与聚合物部分共价连接时，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-SO₂-；

C.当X是-O-或-NR¹-时，则m是2；和

D.式Ia的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的由本发明制备的式I的共轭物包括下面式Ib的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIb的化合物：

且其中q为大约1至大约100；

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

Ar¹选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中每个芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基任选地与聚合物部分共价连接，其中PEG部分任选地包括连接基团，所述连接基团将PEG部分与Ar¹共价连接；

Y选自-O-和-NR¹-，其中R¹选自氢和烷基；

条件是Ar¹、Ar²、W和-NR²R³的至少一个与任选地包括连接基团的聚合物部分共价结合；

且进一步的条件是式Ib的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的由本发明的方法制备的式I的共轭物包括下面式Ic的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIc的化合物、及其药学上可接受的盐类：

且其中q为大约1至大约100；

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

Y选自-O-和-NR¹-，其中R¹选自氢和烷基；

W选自与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键、以及-NR²R³，其中R²和R³与其结合的氮原子一起形成杂环或取代的杂环，其中每个烷基、取代的烷基、杂环和取代的杂环任选地与聚合物部分共价结合，所述聚合物部分进一步任选地包括连接基团；

n是等于0、1或2的整数；

条件是R、Ar¹、Ar²、W和-NR²R³的至少一个与聚合物部分共价结合，该聚合物部分任选地包括连接基团；

且进一步的条件是式Ic的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的式I的共轭物包括下面式Id的那些化合物。

其中每个A独立地是下面式IId化合物、及其药学上可接受的盐类：

且其中q为大约1至大约100；

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

R²和R³独立地选自氢、烷基、取代的烷基、以及其中R²和R³与其结合的氮原子一起形成杂环或取代的杂环，其中每个烷基、取代的烷基、杂环和取代的杂环任选地与聚合物部分共价结合，所述聚合物部分进一步任选地包括连接基团；

n是等于0、1或2的整数；

条件是R、Ar¹、Ar²、和-NR²R³的至少一个与任选地包括连接基团的聚合物共价结合；

且进一步的条件是式Id的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的式I的共轭物包括下面式Ie的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIe的化合物、及其药学上可接受的盐类：

且其中q为大约1至大约100；

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

Ar¹选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，其中每个芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基任选地与聚合物部分共价连接，其中所述聚合物部分任选地包括连接基团，所述连接基团将聚合物部分与Ar¹共价连接；

条件是Ar¹、Ar²和-NR²R³的至少一个与聚合物部分共价结合，该聚合物部分任选地包括连接基团；

且进一步的条件是式Ie的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的式I共轭物包括下面式If的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIf的化合物、及其药学上可接受的盐类：

且其中q为大约1至大约100；

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

R⁴与任选地包括连接基团的聚合物部分共价连接；

R⁵选自烷基和取代的烷基；

Ar³选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；

m是等于0、1或2的整数；

n是等于0、1或2的整数；

条件是：

A.当R与聚合物部分共价连接时，n是1且X不是-O-、-S-、-SO-或-SO₂-；

B.当X是-O-或-NR¹-时，则m是2；和

C.式If的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的式I的共轭物包括下面式Ig的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIg的化合物、及其药学上可接受的盐类：

和其中q为大约1至大约100；

B是任选地与载体共价结合的聚合物部分；

R⁴与任选地包括连接基团的聚合物部分共价连接；

R⁵选自烷基和取代的烷基；

Ar³选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；

n是等于0、1或2的整数；

条件是式Ig的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的式I的共轭物包括下面式Ih的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIh化合物、及其药学上可接受的盐类：

且其中q为大约1至大约100；

R⁴与聚合物部分共价连接，该聚合物部分任选地包括连接基团；

Ar³选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；

条件是式Ih的共轭物的分子量不超过100,000。

优选的式I的共轭物包括下面式Ii的那些化合物：

其中每个A独立地是下面式IIi化合物：

或其药学上可接受的盐，

且条件是式Ii的共轭物的分子量不超过100,000。

优选地，当Ar¹不与聚合物部分结合时，式IIa-IIe中的Ar¹和式IIf-IIh中的Ar³选自：

苯基，

4-甲基苯基，

4-叔丁基苯基，

2，4，6-三甲基苯基，

2-氟苯基，

3-氟苯基，

4-氟苯基，

2，4-二氟苯基，

3，4-二氟苯基，

3，5-二氟苯基，

2-氯苯基，

3-氯苯基，

4-氯苯基，

3，4-二氯苯基，

3，5-二氯苯基，

3-氯-4-氟苯基，

4-溴苯基，

2-甲氧基苯基，

3-甲氧基苯基，

4-甲氧基苯基，

3，4-二甲氧基苯基，

4-叔丁氧基苯基，

4-(3′-二甲基氨基-正丙氧基)-苯基，

2-羧基苯基，

2-(甲氧基羰基)苯基，

4-(H₂NC(O)-)苯基，

4-(H₂NC(S)-)苯基，

4-氰基苯基，

4-三氟甲基苯基，

4-三氟甲氧基苯基，

3，5-二-(三氟甲基)苯基，

4-硝基苯基，

4-氨基苯基，

4-(CH₃C(O)NH-)苯基，

4-(苯基NHC(O)NH-)苯基，

4-脒基苯基，

4-甲基脒基苯基，

4-[CH₃SC(＝NH)-]苯基，

4-氯-3-[H₂NS(O)₂-]苯基，

1-萘基，

2-萘基，

吡啶-2-基，

吡啶-3-基，

吡啶-4-基，

嘧啶-2-基，

喹啉-8-基，

2-(三氟乙酰基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-7-基，

2-噻吩基，

5-氯-2-噻吩基，

2，5-二氯-4-噻吩基，

1-N-甲基咪唑-4-基，

1-N-甲基吡唑-3-基，

1-N-甲基吡唑-4-基，

1-N-丁基吡唑-4-基，

1-N-甲基-3-甲基-5-氯吡唑-4-基，

1-N-甲基-5-甲基-3-氯吡唑-4-基，

2-噻唑基和

5-甲基-1，3，4-噻二唑-2-基。

优选地，当A是式IIa、IIb、IIc、IId和IIe，且Ar¹与聚合物部分结合时，则Ar¹具有下式：

-Ar¹-Z-(CH₂CHR⁷O)_PR⁸

其中

Ar¹选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基，

Z选自共价键、从1至40个原子的连接基团、-O-和-NR⁹-，其中R⁹选自氢和烷基，

R⁷选自氢和甲基；

R⁸选自A、-(L)_w-聚合物载体、氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和-CH₂CHR⁷NR¹⁰R¹¹，其中R⁷如上所定义，R¹⁰和R¹¹独立地选自氢和烷基，A由上面的式IIa至IIh的任意一个所表示，L是1至40个原子的连接基团，且w是0或1；且

p是从大约100至2200的整数，优选大约200-1360。

当A是式IIa或IIf，且R不与聚合物部分结合时，具有下式的取代基：

其中R⁵、X、m和n如上所定义，优选地选自氮杂环丁烷基、噻唑烷基、哌啶基、哌嗪基、吗啉代、硫代吗啉基、吡咯烷基、4-羟基吡咯烷基、4-氧代吡咯烷基、4-氟代吡咯烷基、4，4-二氟代吡咯烷基、4-(硫代吗啉-4-基C(O)O-)吡咯烷基、4-[CH₃S(O)₂O-]吡咯烷基、3-苯基吡咯烷基、3-硫代苯基吡咯烷基、4-氨基-吡咯烷基、3-甲氧基吡咯烷基、4，4-二甲基吡咯烷基、4-N-Cbz-哌嗪基、4-[CH₃S(O)₂-]哌嗪基、5，5-二甲基噻唑烷-4-基、1，1-二氧代-噻唑烷基、1，1-二氧代-5，5-二甲基噻唑烷-2-基和1，1-二氧硫代吗啉基。

优选地，当A是式IIa，且下式的取代基：

与PEG部分结合时，则优选取代基是下式：

其中

m是等于0、1或2的整数；

Z选自共价键、1至40个原子的连接基团、-O-和-NR⁹-，其中R⁹选自氢和烷基，

R⁷选自氢和甲基；

p是从大约100至2200的整数，优选大约200-1360。

当A是式IIa、IIb、IIc、IId、IIe，且Ar²不与聚合物部分结合时，则优选Ar²选自苯基、取代的苯基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和4-吡啶-2-酮基。

当A是式IIa、IIb、IIc、IId、IIe，且当Ar²与聚合物部分结合时，则Ar²优选由下式所示：

其中Ar²选自芳基、取代的芳基、杂芳基和取代的杂芳基；

R⁷选自氢和甲基；

p是从大约100至2200的整数，优选大约200-1360。

在由本发明的方法制备的共轭物的一个优选实施方式中，-YC(O)W是-OC(O)NR²R³。

当A是式IIa、IIb或IIc，-YC(O)W是-OC(O)NR²R³，且R²和R³都不与聚合物部分结合时，则优选-OC(O)NR²R³选自：

(CH₃)₂NC(O)O-，

(哌啶-1-基)-C(O)O-，

(哌啶-4-基)-C(O)O-，

(1-甲基哌啶-4-基)-C(O)O-，

(4-羟基哌啶-1-基)-C(O)O-，

(4-甲酰氧基哌啶-1-基)-C(O)O-，

(4-乙氧基羰基哌啶-1-基)-C(O)O-，

(4-羧基哌啶-1-基)-C(O)O-，

(3-羟基甲基哌啶-1-基)-C(O)O-，

(4-羟基甲基哌啶-1-基)-C(O)O-，

(4-苯基-1-Boc-哌啶-4-基)-C(O)O-，

(4-哌啶酮-1-基乙二醇缩酮)-C(O)O-，

(哌嗪-4-基)-C(O)O-，

(1-Boc-哌嗪-4-基)-C(O)O-，

(4-甲基哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-甲基高哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-苯基哌嗪-1-基)-C(O)O，

(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1]-基)-C(O)O-，

(4-(4-三氟甲基吡啶-2-基)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-(嘧啶-2-基)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-乙酰基哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-(苯基-C(O)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-(吡啶-4′-基-C(O)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-(苯基-NHC(O)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-(苯基-NHC(S)-)哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-甲磺酰基哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(4-三氟甲磺酰基哌嗪-1-基)-C(O)O-，

(吗啉-4-基)-C(O)O-，

(硫代吗啉-4-基)-C(O)O-，

(硫代吗啉-4′-基砜)-C(O)O-，

(吡咯烷-1-基)-C(O)O-，

(2-甲基吡咯烷-1-基)-C(O)O-，

(2-(甲氧基羰基)吡咯烷-1-基)-C(O)O-，

(2-(羟基甲基)吡咯烷-1-基)-C(O)O-，

(2-(N，N-二甲基氨基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，

(2-(N-甲基-N-甲苯-4-磺酰基氨基)乙基)(CH₃)N-C(O)O-，

(2-(吗啉-4-基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，

(2-(羟基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，

双(2-(羟基)乙基)NC(O)O-，

(2-(甲酰氧基)乙基)(CH₃)NC(O)O-，

(CH₃OC(O)CH₂)HNC(O)O-，和

2-(苯基NHC(O)O-)乙基-]HNC(O)O-。

当A是式IIa、IIb或IIc，-YC(O)W是-OC(O)NR²R³，且R²和/或R³与PEG部分结合时，则PEG部分优选由下式表示：

-Z′-(CH₂CHR⁷O)_pR⁸

Z′选自共价键和1至40个原子的连接基团；

R⁷选自氢和甲基；

R⁸选自A、-(L)_w-聚合物载体、氢、烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基和-CH₂CHR⁷NR¹⁰R¹¹，其中R⁷如上所定义，R¹⁰和R¹¹独立地选自氢和烷基，A由上面的式II所表示，L是1至40个原子的连接基团，且w是0或1；且

p是从大约100至2200的整数。

优选式II.1中的T基团具有下面的式(d)。

其中R⁶是氢。

优选(d)基团包括下面表D中所示的那些基团。

表D

其中

R⁶⁶是与任选地包括连接基团的聚合物部分结合的共价键，或R⁶⁶是氢或直链或支链的C₁-C₆烷基；

R⁷⁷是与任选地包括连接基团的聚合物部分结合的共价键，或

R⁷⁷是氢、卤素或直链或支链的C₁-C₆烷氧基；且

R⁸⁸是氢。

用于本发明中的其他(d)基团包括表D1中所示的那些基团。

表D1

用于本发明的方法中的其它优选的式II.1化合物具有式II.1-a：

和其药学上可接受的盐类，其中

R⁵⁵是酸保护基团，优选C₁-C₆烷氧基，更优选C₂-C₄烷氧基；

Ar¹选自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、杂环、取代的杂环、杂芳基和取代的杂芳基；且

R⁶是氢。

式11.1-a的优选化合物包括下面的那些化合物：其中Ar¹是苯基或具有至少一个氮原子的5-或6-元杂芳基，每个都任选地用卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷基、硝基、三氟甲基、氨基、单或二(C₁-C₆)烷基氨基、氨基(C₁-C₆)烷基、C₂-C₆酰基、C₂-C₆酰基氨基、或氨基(C₁-C₆)酰基取代。Ar¹是任选地用卤素、羟基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基，硝基、三氟甲基、氨基、单或二(C₁-C₆)烷基氨基、氨基(C₁-C₆)烷基、C₂-C₆酰基、C₂-C₆酰基氨基、或氨基(C₁-C₆)酰基取代的吡啶基。式11.1-a的特别优选的化合物包括下面的那些化合物：其中Ar¹是任选地用C₁-C₆烷基、卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基，硝基、三氟甲基、氨基、或单或二(C₁-C₆)烷基氨基取代的吡啶基。

式11.1的其他优选的化合物也是式11.2-a的那些化合物：

和其药学上可接受的盐类，其中

R⁶是氢。

式11.2-a的优选化合物包括下列的那些化合物：其中R³¹是氨基或单或二(C₁-C₆)烷基氨基；且R³²是-H、-NO₂或卤代烷基，更优选三氟甲基甲基。

式11.2-a的其他优选的化合物是下面的那些化合物，其中

R³¹是氨基或单或二(C₁-C₆)烷基氨基；且

R³²是-N(MR⁴¹)R⁴²；其中M是-SO₂-或-CO-；

R⁴¹是任选地用下列基团取代的C₁-C₆烷基：卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、或单或二(C₁-C₆)烷基氨基；或苯基或含有至少一个氮的5-或6-元杂芳基，每个都任选地用卤素、羟基、C₁-C₆烷基、C₁-C₆烷氧基、C₃-C₇环烷基、氨基、硝基、三氟甲基、或单或二(C₁-C₆)烷基氨基取代；且

R⁴²是氢、C₁-C₆烷基或C₃-C₇环烷基。

式11.2-a的进一步优选的化合物包括下列的那些化合物，其中

在式11.2-a中的R⁴¹基团是任选地用下列基团取代的C₁-C₄烷基：卤素、羟基、C₁-C₆烷氧基、氨基、或单或二(C₁-C₆)烷基氨基；或吡啶基或嘧啶基，每个都任选地用卤素、羟基、C₁-C₃烷基、C₁-C₃烷氧基、氨基、或单或二(C₁-C₄)烷基氨基取代；且

R⁴²是氢、C₁-C₄烷基或C₃-C₇环烷基。

在一个实施例中，本发明的共轭物是二价的且由式III所示：

其中每个A独立地如上所规定，且B′是-Z′-(CH₂CHR⁷O)_p-Z′-，其中每个Z′独立地是共价键或连接基团，R⁷是氢或甲基，且p为大约100至1360的整数。

在另一个实施例中，本发明的共轭物是三价至十价的，且优选由式IV所示：

其中每个A独立地如上所规定，且t为3至10的整数。

本发明的方法采用了Mitsunobu反应，即在三芳基膦或三烷基膦和合适的偶氮二羧酸酯存在下的醇缩合反应。在优选的反应中，聚合醇，例如聚乙二醇，与亲核试剂在三芳基-或三烷基膦和重氮化试剂的存在下反应生成共轭物。亲核试剂是具有酸性氢(即，适合贡献电子的部分)的化合物。通过聚合醇与亲核试剂反应形成的键可以是各种各样的，例如，碳-氧键形成、碳-氮键形成、碳-硫键形成，碳-卤素键形成和碳-碳键形成。

因此，非衍生的活性化合物可具有各种能与聚合醇反应的官能团。实例包括羧酸、醇、β-酮酯、胺、硫醇、卤代烷、酰卤、β-二酮和类似物。可在本发明的方法中使用的亲核试剂的其他实例可见OrganicReactions，1992，42，335-656，该文全部引入本文作为参考。

关于三芳基-或三烷基膦的实例的描述见，Synthesis，2003，3，317-334；Tetrahedron Lett.，1998，39，7787；Chem.Commun.1997，759；和Nucleosides Nucleotides，1999，18，727，所有文献都引入本文作为参考，且包括三苯基膦、三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦和1，2-双-(二苯基膦基)乙烷。膦类也可以是聚合物负载的或水溶性的。优选的三芳基膦是三苯基膦。

重氮化试剂通常是偶氮二羧酸的酯类或酰胺类，且包括Synthesis，2003，3，317-334；Tetrahedron Lett.，1999，40，7359；和Bull.Chem.Soc.Jpn.，1984，57，2675中提到的那些化合物。这些重氮化合物的具体实例是偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二异丙酯、4-甲基-1，2，4-三唑烷-3，5-二酮、N，N，N′，N′-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶、双(N-4-甲基哌嗪-1-基)偶氮二羧酰胺、二吗啉代偶氮二羧酰胺和偶氮二羧酸二叔丁酯。

由本发明的方法制备的代表性共轭物，包括其药学上可接受的盐类，显示在下表中：

表I

其中，每个结构中，所有p′的总和为100-2200，优选大约200-1360。

定义

如在此所使用的“烷基”是指具有1至5个碳原子，更优选1至3个碳原子的单价饱和脂肪族烃基。该术语的实例基团如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、正戊基和类似物。

“取代的烷基”是指具有1至3个，优选1至2个取代基的烷基，上述的取代基选自烷氧基、取代的烷氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、羧基、羧基酯、环烷基、取代的环烷基、螺环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环。

“亚烷基”是指优选具有1至5个，更优选1至3个碳原子的二价饱和脂肪族烃基，其是直链或支链的基团。该术语的实例基团如亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、亚正丙基(-CH₂CH₂CH₂-)、亚异丙基(-CH₂CH(CH₃)-)和类似基团。

“烷氧基”是指“烷基-O-”基团，该基团的实例包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、叔丁氧基、仲丁氧基、正戊氧基和类似基团。

“取代的烷氧基”是指“取代的烷基-O-”基团。

“酰基”是指基团H-C(O)-、烷基-C(O)-、取代的烷基-C(O)-、烯基-C(O)-、取代的烯基-C(O)-、炔基-C(O)-、取代的炔基-C(O)-、环烷基-C(O)-、取代的环烷基-C(O)-、芳基-C(O)-、取代的芳基-C(O)-、杂芳基-C(O)-、取代的杂芳基-C(O)-、杂环-C(O)-和取代的杂环-C(O)-、其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环如本文所定义。

“氨基酰基”是指基团-C(O)NR¹⁰R¹⁰，其中每个R¹⁰均单独选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环，以及其中每个R¹⁰与氮原子连接在一起形成杂环或取代的杂环，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环如本文所定义。

“酰氧基”是指基团烷基-C(O)O-、取代的烷基-C(O)O-、烯基-C(O)O-、取代的烯基-C(O)O-、炔基-C(O)O-、取代的炔基-C(O)O-、芳基-C(O)O-、取代的芳基-C(O)O-、环烷基-C(O)O-、取代的环烷基-C(O)O-、杂芳基-C(O)O-、取代的杂芳基-C(O)O-、杂环-C(O)O-和取代的杂环-C(O)O-，其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环如本文所定义。

“烯基”是指具有2至6个碳原子、优选2至4个碳原子，具有至少1个、优选1至2个烯基不饱和位点的烯基基团。这些基团的实例是乙烯基、烯丙基、丁-3-烯-1-基和类似基团。

“取代的烯基”是指具有1至3个取代基、优选1至2个取代基的烯基，上述取代基选自烷氧基、取代的烷氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、羧基、羧基酯、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环，其条件是任何羟基取代不与乙烯基(不饱和)碳原子连接。

“炔基”是指具有2至6个碳原子、优选2至3个碳原子，并具有至少1个、优选1至2个炔基不饱和位点的炔基。

“取代的炔基”是指具有1至3个取代基、优选1至2个取代基的炔基，上述的取代基选自烷氧基、取代的烷氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、羧基、羧基酯、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环。

“氨基”是指-NH₂基团。

“氰基”是指-CN基团。

“取代的氨基”是指-NR′R＂基团，其中R′和R＂均独立地选自氢、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环，以及其中R′和R＂与它们连接的氮连接在一起形成杂环或取代的杂环，条件是R′和R＂都不是氢。当R′是氢，R＂是烷基时，本文中取代的氨基有时是指烷基氨基。当R′和R＂是烷基时，本文中取代的氨基有时是指烷基氨基。当提到单取代的氨基时，它是指R′或R＂是氢但不同时是氢。当提到双取代的氨基时，它是指R′或R＂都不是氢。

“氨基酰基”是指基团-NR¹¹C(O)烷基、-NR¹¹C(O)取代的烷基、-NR¹¹C(O)环烷基、-NR¹¹C(O)取代的环烷基、-NR¹¹C(O)烯基、-NR¹¹C(O)取代的烯基、-NR¹¹C(O)炔基、-NR¹¹C(O)取代的炔基、-NR¹¹C(O)芳基、-NR¹¹C(O)取代的芳基、-NR¹¹C(O)杂芳基、-NR¹¹C(O)取代的杂芳基、-NR¹¹C(O)杂环和-NR¹¹C(O)取代的杂环，其中R¹¹是氢或烷基，且其中烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、环烷基、取代的环烷基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环如本文所定义。

“硝基”是指-NO₂基团。

“芳基”或“Ar”是指单价的具有6至14个碳原子的芳香族碳环基团，其具有单环(例如，苯基)或多元稠环(例如，萘基或蒽基)，稠环可以是或不是芳香族的(例如，2-苯并噁唑啉酮、2H-1，4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基和类似物)，条件是连接处在一个芳香族碳原子处。优选的芳基包括苯基和萘基。

“取代的芳基”是指具有1至3个取代基、优选1至2个取代基的芳基，上述的取代基选自羟基、酰基、酰氨基、酰氧基、烷基、取代的烷基、烷氧基、取代的烷氧基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、羧基、羧基酯、氰基、硫醇、硫代烷基、取代的硫代烷基、硫代芳基、取代的硫代芳基、硫代杂芳基、取代的硫代杂芳基、硫代环烷基、取代的硫代环烷基、硫代杂环、取代的硫代杂环、环烷基、取代的环烷基、卤素、硝基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环、杂芳氧基、取代的杂芳氧基、杂环氧基、取代的杂环氧基、氨基磺酰基(NH₂-SO₂-)和取代的氨基磺酰基。

“芳氧基”是指芳基-O-基团，其实例包括苯氧基、萘氧基和类似基团。

“取代的芳氧基”是指取代的芳基-O-基团。

“羧基”是指-COOH或其盐类。

“羧基酯”是指基团-C(O)O-烷基、-C(O)O-取代的烷基、-C(O)-芳基和-C(O)O-取代的芳基，其中烷基、取代的烷基、芳基和取代的芳基如本文所定义。

“环烷基”是指3至10个碳原子的具有单环或多环的环状烷基，其实例包括金刚烷基、环丙基、环丁基、环戊基、环辛基和类似基团。

“环烯基”是指4至10个碳原子的具有单环或多环，并进一步具有至少1个、优选1至2个烯键或乙烯基(>C＝C<)不饱和内部位点的环状烯基。

“取代的环烷基”和“取代的环烯基”是指具有1至5个取代基的环烷基或环烯基，上述取代基选自氧基(＝O)、硫代(＝S)、烷氧基、取代的烷氧基、酰基、酰氨基、酰氧基、氨基、取代的氨基、氨基酰基、芳基、取代的芳基、芳氧基、取代的芳氧基、氰基、卤素、羟基、硝基、羧基、羧基酯、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环。

“环烷氧基”是指-O-环烷基基团。

“取代的环烷氧基”是指-O-取代的环烷基基团。

“卤代”或“卤素”是指氟、氯、溴和碘，优选氟或氯。

“羟基”是指-OH基团。

“杂芳基”是指在环内由1至10个碳原子和1至4个选自氧、氮和硫的杂原子组成的芳香基团。这种杂芳基可具有单环(例如，吡啶基或呋喃基)或多元稠环(例如，吲嗪基或苯并噻吩基)，其中稠环可以是或不是芳香族的和/或含有杂原子的，条件是连接点在芳香族杂芳基基团的原子上。优选的杂芳基包括吡啶基、吡咯基、吲哚基、苯硫基和呋喃基。

“取代的杂芳基”是指被1至3个取代基取代的杂芳基，上述的取代基选自与取代的芳基所定义的取代基相同的基团。

“杂芳氧基”是指-O-杂芳基基团，“取代的杂芳氧基”是指-O-取代的杂芳基基团。

“杂环”或“杂环的”或“杂环烷基”或“杂环基”是指具有单环或多元稠环的饱和或不饱和基团，在环中具有1至10个碳原子和1至4个选自氮、硫或氧的杂原子，其中在稠环系中，一个或多个环可以是环烷基、芳基或杂芳基，条件是连接点在杂环上。

“取代的杂环”或“取代的杂环烷基”或“取代的杂环基”是指被1至3个与取代的环烷基所定义的相同取代基取代的杂环基基团。

杂环基和杂芳基的实例包括但不限于，氮杂环丁烷、吡咯、咪唑、吡唑、吡啶、吡嗪、嘧啶、哒嗪、吲嗪、异吲哚、吲哚、二氢吲哚、吲唑、嘌呤、喹嗪、异喹啉、喹啉、酞嗪、萘基吡啶、喹喔啉、喹唑啉、噌啉、蝶啶、咔唑、咔啉、菲啶、氮蒽、菲咯啉、异噻唑、吩嗪、异噁唑、吩噁嗪、吩噻嗪、咪唑烷、咪唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚啉、邻苯二甲酰亚胺、1，2，3，4-四氢-异喹啉、4，5，6，7-四氢苯并[b]噻吩、噻唑、噻唑烷、噻吩、苯并[b]噻吩、吗啉基、硫代吗啉基(也称为硫吗啉基(thiamorpholinyl))、哌啶基、吡咯烷、四氢呋喃基和类似物。

“硫醇”是指-SH基团。

“硫代烷基”或“烷基硫醚”或“硫代烷氧基”是指-S-烷基基团。

“取代的硫代烷基”或“取代的烷基硫醚”或“取代的硫代烷氧基”是指-S-取代的烷基基团。

“硫代芳基”是指-S-芳基基团，其中芳基如上所定义。

“取代的硫代芳基”是指-S-取代的芳基基团，其中取代的芳基如上所定义。

“硫代杂芳基”是指-S-杂芳基基团，其中杂芳基如上所定义。

“取代的硫代杂芳基”是指-S-取代的杂芳基基团，其中取代的硫代杂芳基如上所定义。

“硫代杂环”是指-S-杂环基团，“取代的硫代杂环”是指-S-取代的杂环基团，其中杂环和取代的杂环如上所定义。

“杂环氧基”是指杂环基-O-基团，“取代的杂环基-O-”是指取代的杂环基-O-基团，其中杂环基和取代的杂环基如上所规定。

“硫代环烷基”是指-S-环烷基基团，“取代的硫代环烷基”是指-S-取代的环烷基基团，其中环烷基和取代的环烷基如上所定义。

术语“化合物”和“活性化合物”用来指本发明的共轭物的VLA-4拮抗剂部分或在与聚合物结合之前存在的VLA-4拮抗剂。

术语“连接基”、“连接基团”或“1至40个原子的连接基”是指如下基团：(1)将聚合物与活性化合物共价连接和/或(2)将聚合物的聚烷撑氧部分彼此共价连接。在任何特定的共轭物内，将聚合物的聚烷撑氧部分连接在一起的连接基团，和将聚合物与活性化合物键合的连接基团可以是相同或不同的(即，可具有相同或不同的化学结构)。代表性的官能基连接(其中可具有一个或多个连接基团)是酰胺、醚、氨基甲酸酯、硫代氨基甲酸酯、脲、硫脲、氨基基团、羰基基团、烷氧基基团等。连接基团在其原子内容方面可以是同源的或异源的(例如，仅含有碳原子的连接基团或含有碳原子以及在连接基团上存在的一个或多个杂原子的连接基团)。优选地，连接基团含有1至25个碳原子和0至15个选自氧、NR²²、硫、-S(O)-和-S(O)₂-的杂原子，其中R²²如上所定义。连接基团也可以是手性的或无手性的、线性的、分支的或环状的。

为了插入进连接基团内的官能基连接或键之间，连接基团可进一步包含间隔基团，该基团包括但不限于，选自烷基、取代的烷基、芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环、取代的杂环、和其组合的间隔基。间隔基在其原子内容方面可以是同源的或异源的(例如，间隔基仅含有碳原子或间隔基含有碳原子以及在间隔基上存在的一个或多个杂原子)。优选地，间隔基含有1至25个碳原子和0至15个选自氧、NR²²、硫、-S(O)-和-S(O)₂-的杂原子，其中R²²如上所定义。间隔基也可以是手性的或无手性的、线性的、分支的或环状的。

间隔基的非限制性实例是直链或支链的亚烷基链、苯撑、联苯撑等、环，它们都能携带一个或一个以上的能与活性化合物和一个或多个聚烷撑氧部分形成连接的官能基。多官能性连接基团-间隔基的一个特殊实例是赖氨酸，它可经C₄亚烷基链上取代的两个氨基将任何活性化合物与两个聚合物部分连接。其他的非限制性实例包括对氨基苯甲酸和3，5-二氨基苯甲酸，它们分别具有2和3个用于形成连接的官能基。本领域专业技术人员很容易想到其他这样的多官能性连接加间隔基。

术语“聚合物”是指生物相容的、水溶性的、基本上无免疫原性的聚合物，该聚合物能与一个以上的具有式II的VLA-4拮抗剂偶联。优选聚合物是非离子的和生物相容的，在所使用的剂量下据测定是没有毒性的。这些聚合物也包括多个拷贝的与载体连接的聚合物。

合适的聚合物的实例包括但不限于：聚氧化烯聚合物，如聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯马来酸酐(SMA)、聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚马来酸酐(DIVEMA)(Kameda，Y.等人，Biomaterials 25：3259-3266，2004；Thanou，M.等人，Current Opinion in InvestigationalDrugs4(6)：701-709，2003；Veronese，F.M.等人，II Farmaco 54：497-516，1999)。

优选的聚合物是聚氧化烯。“聚氧化烯”是指包括至少一个聚烷撑氧部分的大分子，该聚烷撑氧部分任选地与另外一个或多个聚烷撑氧共价连接，其中聚烷撑氧是相同或不同的。非限制性实例包括聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇(PPG)、聚异丙二醇(PIPG)、PEG-PEG、PEG-PPG、PPG-PIPG和类似物。也包括在聚氧化烯定义中的聚合物是其中聚烷撑氧部分任选地通过连接基团相互连接的大分子。说明性的实例是PEG-连接基团-PEG、PEG-连接基团-PIPG和类似物。更具体的实例包括市售的聚[二(乙二醇)己二酸酯、聚[二(乙二醇)邻苯二甲酸酯二醇和类似物。其他实例是氧化烯、聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧乙烯化多元醇单元的嵌段共聚物。

通过其至少一个末端，聚合物与非聚合物取代的式II化合物任选地通过连接基团采用本发明的方法进行共价连接，为聚合物与非聚合物取代的式II化合物提供了共价连接。

当采用连接基团时，连接基团与至少一个聚合物末端共价连接，要不然该末端则共价连接于非聚合物取代的式II化合物。当然要理解的是，如果在非聚合物取代的式II化合物上发现有合适的取代基，则可不需要任选的连接基团，因为聚合物可与非聚合物取代的式II化合物直接连接。

连接基团的优选实例包括下列的-O-、-NR²²-、-NR²²C(O)O-、-OC(O)NR²²-、-NR²²C(O)-、-C(O)NR²²-、-NR²²C(O)NR²²-、-亚烷基-NR²²C(O)O-、-亚烷基-NR²²C(O)NR²²-、-亚烷基-OC(O)NR²²-、-亚烷基-NR²²-、-亚烷基-O-、-亚烷基-NR²²C(O)-、-亚烷基-C(O)NR²²-、-NR³C(O)O-亚烷基-、-NR²²C(O)NR²²-亚烷基-、-OC(O)NR²²-亚烷基、-NR²²-亚烷基-、-O-亚烷基-、-NR²²C(O)-亚烷基-、-C(O)NR²²-亚烷基-、-亚烷基-NR²²C(O)O-亚烷基-、-亚烷基-NR³C(O)NR²²-亚烷基-、-亚烷基-OC(O)NR²²-亚烷基-、-亚烷基-NR²²-亚烷基-、亚烷基-O-亚烷基-、-亚烷基-NR²²C(O)-亚烷基-、-C(O)NR²²-亚烷基-、和

其中

选自芳基、取代的芳基、环烷基、取代的环烷基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环和取代的杂环，且D和E独立地选自化学键、-O-、CO、-NR²²-、-NR²²C(O)O-、-OC(O)NR²²-、-NR²²C(O)-、-C(O)NR²²-、-NR²²C(O)NR²²-、-亚烷基-NR²²C(O)O-、-亚烷基-NR²²C(O)NR²²-、-亚烷基-OC(O)NR²²-、-亚烷基-NR²²-、-亚烷基-O-、-亚烷基-NR²²C(O)-、亚烷基-C(O)NR²²-、-NR²²C(O)O-亚烷基-、-NR²²C(O)NR²²-亚烷基-、-OC(O)NR²²-亚烷基-、-NR²²-亚烷基-、-O-亚烷基-、-NR²²C(O)-亚烷基-、-C(O)NR²²-亚烷基-、-亚烷基-NR²²C(O)O-亚烷基-、-亚烷基-NR²²C(O)NR²²-亚烷基-、-亚烷基-OC(O)NR²²-亚烷基-、-亚烷基-NR²²-亚烷基-、亚烷基-O-亚烷基-、-亚烷基-NR²²C(O)-亚烷基-、和-C(O)NR²²-亚烷基-，其中R²²如上所定义。

在上述连接基团中优选的亚烷基基团包括C₁-C₁₅亚烷基，更优选C₁-C₆亚烷基，且最优选C₁-C₃亚烷基。优选的杂环基团包括哌嗪基、哌啶基、高哌嗪基、高哌啶基、吡咯烷基和咪唑烷基。

本发明的共轭物可被加入至载体中，该载体上可结合1-19个额外的共轭物。术语“载体”是指一种任选的成分或支架，多个共轭物可结合于其上，且当加入至本发明的共轭物中时不会影响基本的免疫原性或毒性。这种载体优选是含有用于连接聚合物的多官能团的单至十价物质。这些官能团可以是同种的或异种的；但优选同种的官能团。

包括同种官能团的市售载体的实例包括，仅作为实例的邻苯二酚、间苯二酚、1，2-苯二胺、1，3-苯二胺、1，4-苯二胺；邻苯二甲酸、间苯二甲酸、1，3-丙二醇、甘油、1，2，4-苯三酚、季戊四醇、葡萄糖(以其吡喃糖形式)、二异氰酸1，3-苯酯、二异氰酸1，4-苯酯、间苯二甲醛、苯二甲醛、1，3-环戊二醇、乙二胺、乙二胺四乙酸和类似物。

用作载体或支架的代表性结构包括下列的结构(其中PEG仅用于举例的目的)：

三-PEG-甘油

四-PEG-季戊四醇

二-PEG间苯二酚

包括异种官能团的市售载体的实例包括，仅作为实例的6-羟基己酸、氨基酸、水杨酸、3-或4-氨基水杨酸、1，3-二氨基-2-羟基丙烷、2-氨基乙醇、3-氨基丙醇、葡糖胺、唾液酸、氨基酸和类似物。

使用这些载体或支架通过结合聚合物产生的代表性结构包括下列结构(其中PEG仅用于举例的目的)：

三-PEG-1，3-二氨基-2-羟基丙烷

二-PEG3-氨基苯酚

载体可任选地含有任选地通过连接基团与载体连接的一个或多个A的拷贝，条件是至少还有一个官能基可与另外一个A的拷贝结合。例如，下面的每个结构都被认为是载体或支架，因为还有至少一个额外的官能基来结合额外的A取代基：

其中L、w和A如上所定义。

术语“氧化烯”是指-OCH₂CHR^d-，其中R^d是烷基。聚合的氧化烯是指聚氧化烯、聚烷撑氧或聚烷撑二醇，其非限制性的实例包括PEG、聚丙二醇、聚丁二醇、聚异丙二醇和类似物。

这些聚合物任选地用取代基单封端，该取代基优选选自烷基、芳基、取代的烷基、取代的芳基和如上所述的载体。包括在这些聚合物中的还有二氨基封端的聚氧化烯聚合物，这些聚合物在本领域已知为

。这些聚合物仍然进一步可任选地含有一个或多个非氧化烯单元，如市售的聚[二(乙二醇)己二酸酯、聚[二(乙二醇)邻苯二甲酸酯二醇和类似物。也包括氧化烯、聚乙二醇、聚丙二醇和聚氧乙烯化多元醇单元的嵌段共聚物。

聚氧化烯，如PEG，通常以水溶性的蜡状固体提供。一般当聚合物的分子量增加时，其粘度和凝固点也增加。市售的制剂通常以聚合物组分的“平均分子量”来表征。

来自本发明共轭物中的单一或多个聚合物部分的聚合物总量的平均分子量一般在大约100至100,000之间；优选大约10,000至80,000；更优选大约20,000至大约70,000。

同样，其他合适的聚合物，如聚乙烯吡咯酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯马来酸酐(SMA)、聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚马来酸酐(DIVEMA)在本领域中是公知的，其分子量为大约100至100,000；优选从大约10,000至80,000；更优选从大约20,000至大约70,000。

“药学可接受的盐”是指保留了本发明化合物的生物学作用和特性，且没有生物学或其他方面不希望出现的特性的盐类。在许多情况下，本发明的化合物由于存在氨基和/或羧基或与其类似的基团，能形成酸性和/或碱性盐。

药学可接受的碱性加成盐可从无机碱和有机碱制备。来自无机碱的盐类包括(仅作为实例)：钠、钾、锂、铵、钙和镁盐。来自有机碱的盐类包括但不限于伯胺、仲胺和叔胺的盐，如烷基胺、二烷基胺、三烷基胺、取代的烷基胺、二(取代的烷基)胺、三(取代的烷基)胺、烯基胺、二烯基胺、三烯基胺、取代的烯基胺、二(取代的烯基)胺、三(取代的烯基)胺、环烷基胺、二(环烷基)胺、三(环烷基)胺、取代的环烷基胺、双取代的环烷基胺、三取代的环烷基胺、环烯基胺、二(环烯基)胺、三(环烯基)胺、取代的环烯基胺、双取代的环烯基胺、三取代的环烯基胺、芳基胺、二芳基胺、三芳基胺、杂芳基胺、二杂芳基胺、三杂芳基胺、杂环胺、二杂环胺、三杂环胺、混合的二和三胺，其中胺上的取代基中至少两个是不同的，所述取代基选自烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、环烷基、取代的环烷基、环烯基、取代的环烯基、芳基、杂芳基、杂环和类似物。也包括其中两个或三个取代基与氨基氮一起形成杂环或杂芳基的胺。

合适的胺的实例包括(仅作为实例)，异丙胺、三甲胺、二乙胺、三(异丙基)胺、三(正丙基)胺、乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、氨基丁三醇、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、N-烷基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、吗啉、N-乙基哌啶和类似物。还要理解的是在实施本发明过程中也可使用其他的羧酸衍生物，例如羧酸酰胺类，包括羧酰胺、低级烷基羧酰胺、二烷基羧酰胺和类似物。

药学可接受的酸性加成盐可从无机酸和有机酸制备。来自无机酸的盐包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸和类似物。来自有机酸的盐包括乙酸、丙酸、羟基乙酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、延胡索酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸和类似物。

术语“药学可接受的阳离子”是指药学可接受的盐的阳离子。

要理解的是在本文所定义的所有取代基中，本文并不要包括用本身进一步取代的取代基定义的取代基(例如，用具有取代的芳基基团的取代芳基作为取代基，即其本身用取代的芳基取代，等等)获得的聚合物。在这种情况下，这种取代基的最大数目为3。即，上述的每个定义都受一定的限制，例如，取代的芳基被限定为-取代的芳基-(取代的芳基)-(取代的芳基)。

同样要理解的是，上述的定义并不要包括不允许的取代方式(例如，甲基用5个氟基取代或羟基α连接烯属或炔属不饱和烃)。这种不允许的取代方式对于本领域技术人员是公知的。

化合物制备

采用公知的步骤和很容易获得的起始原料可从很容易获得的初始原料制备本发明的方法中所使用的起始活性化合物，或当起始原料不是公知或不能从商业渠道获得时，这些原料可使用文献中所述的步骤很容易地制备而成。要理解的是，其中指定了典型或优选工艺条件(即，反应温度、时间、反应物的摩尔比例、溶剂、压力等)时，除非另外说明，也可使用其他的工艺条件。最佳的反应条件可根据所使用的特殊反应物或溶剂进行变化，但这些条件可由本领域的技术人员通过常规的优化步骤来确定。

另外，对于本领域技术人员显而易见的是，可能需要一些常规的保护基团以保护某些官能基以免发生不希望的反应。对于多种官能基的合适保护基团以及对特殊官能基保护和去保护的合适条件，在本领域中是公知的。例如，大量的保护基团描述在T.W.Greene和G.M.Wuts，有机合成中的保护基团(Protecting Groups in Organic Synthesis)，第二版，Wiley，New York，1991和本文所引用的参考文献中。

而且，本发明的化合物典型地含有一个或多个手性中心。因此，如果需要，这些化合物可制备或分离为纯的立体异构体，即，单独的对映体或非对映体，或富集立体异构体的混合物。除非另外说明，所有这些立体异构体(和富集的混合物)都包括在本发明的范围内。纯的立体异构体(或富集的混合物)可采用，例如本领域公知的光学活性起始原料或立体选择性试剂进行制备。或者，这些化合物的消旋混合物可采用，例如手性柱色谱、手性溶解溶剂和类似物进行分离。

根据本发明制备的共轭物优选包括含有大约1至大约100个式II取代基的聚合物部分/任选的载体：

具体来说，聚合物部分可通过共价键与Ar¹取代基、R取代基、Ar²取代基连接和/或连接在T取代基内，其中该聚合物部分可直接连接或经连接基团连接。依次，聚合物部分可任选地与其上连接有多个聚合物拷贝的载体结合。

式II化合物可首先用适当的芳基磺酰氯连接杂环氨基酸1来进行制备，如下面的示意图I所示：

示意图1

其中R、Ar¹、X、m和n如上所规定。

具体来说，在上面的示意图1中，杂环氨基酸1与化学量等量或过量(优选大约1.1至大约2当量)的芳基磺酰卤2，在合适的惰性稀释剂(如二氯甲烷和类似物)中进行混合。通常反应是在大约-70℃至大约40℃的范围内进行，直至反应基本上完成，一般在1至24小时内。优选地，在合适的碱存在下进行反应以清除反应中产生的酸。合适的碱包括作为实例的叔胺，如三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基-吗啉和类似物。或者，反应在Schotten-Baumann-型条件下使用碱性水溶液(如氢氧化钠水溶液、缓冲至pH7.4的磷酸盐水溶液和类似物)进行。得到的产物3，可通过常规的方法回收，如色谱、过滤、蒸发、结晶和类似方法或，另外可选的是不纯化和/或分离就用于下一步骤中。

在上面的反应中使用的杂环氨基酸1，是已知的化合物或是可通过常规的合成步骤从已知化合物制备而成的化合物。用于此反应中的合适的氨基酸的实例包括但不限于，L-脯氨酸、反式-4-羟基-L-脯氨酸、顺式-4-羟基-L-脯氨酸、反式-3-苯基-L-脯氨酸、顺式-3-苯基-L-脯氨酸、L-(2-甲基)脯氨酸、L-哌啶酸、L-氮杂环丁烷-2-羧酸、L-噻唑烷-4-羧酸、L-(5，5-二甲基)噻唑烷-4-羧酸、L-硫吗啉-3-羧酸。如果需要，氨基酸1的相应羧酸酯，例如甲基酯、乙基酯、叔丁基酯和类似物，可与芳基磺酰氯用于上述的反应中。随后使用常规的试剂和条件将酯基水解为羧酸，即用碱金属氢氧化物在惰性稀释剂(如甲醇/水)中进行处理，然后得到N-磺酰氨基酸3。

同样，在上述反应中使用的芳基磺酰氯2是已知的化合物或可通过常规合成步骤从已知化合物制备而成的化合物。这种化合物一般是从相应的磺酸，即从具有结构式Ar¹SO₃H的化合物(其中Ar¹如上所定义)使用三氯化磷和五氯化磷制备而成的。该反应一般是通过将磺酸与大约2至5摩尔当量的三氯化磷和五氯化磷，在无溶剂或惰性溶剂(如二氯甲烷)中，在大约0℃至大约80℃的范围内接触大约1至大约48小时而得到磺酰氯。或者，芳基磺酰氯2可从相应的硫醇化合物，即Ar¹-SH化合物(其中Ar¹如在此所定义)通过用氯(Cl₂)和水在常规反应条件下处理硫醇而制备而成的。

或者，在上述反应中使用的芳基磺酰氯2，可通过使用Cl-SO₃H将取代的苯或杂环烷基氯磺酰化制备而成。

适合用于本发明中的芳基磺酰氯的实例包括但不限于，苯磺酰氯、1-萘磺酰氯、2-萘磺酰氯、对甲苯磺酰氯、邻甲苯磺酰氯、4-乙酰氨基苯磺酰氯、4-叔丁基苯磺酰氯、4-溴苯磺酰氯、2-羧基苯磺酰氯、4-氰基苯磺酰氯、3，4-二氯苯磺酰氯、3，5-二氯苯磺酰氯、3，4-二甲氧基苯磺酰氯、3，5-二三氟甲基苯磺酰氯、4-氟苯磺酰氯、4-甲氧基苯磺酰氯、2-甲氧羰基苯磺酰氯、4-甲氨基-苯磺酰氯、4-硝基苯磺酰氯、4-三氟甲基-苯磺酰氯、4-三氟甲氧基苯磺酰氯、2，4，6-三甲基苯磺酰氯、2-噻吩磺酰氯、5-氯-2-噻吩磺酰氯、2，5-二氯-4-噻吩磺酰氯、2-噻唑磺酰氯、2-甲基-4-噻唑磺酰氯、1-甲基-4-咪唑磺酰氯、1-甲基-4-吡唑磺酰氯、5-氯-1，3-二甲基-4-吡唑磺酰氯、3-吡啶磺酰氯、2-嘧啶磺酰氯和类似物。如果需要，磺酰氟、磺酰溴或磺酸酐可替代磺酰氯用于上面的反应中以形成N-磺酰氨基酸3。

然后如下面的示意图2所示，N-芳基磺酰氨基酸3与市售的酪氨酸酯偶联：

示意图2

其中R、Ar¹、X、m和n如上所定义，R^a是氢或烷基，但优选例如叔丁基的烷基，Z代表芳环上的任选取代基，o是0、1或2。

这种偶联反应一般采用公知的偶联剂进行，所述的偶联剂如碳化二亚胺、BOP试剂(苯并三唑-1-基氧基-三(二甲氨基)-膦六氟膦酸酯)和类似物。合适的碳化二亚胺的实例包括二环己基碳二亚胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺(EDC)和类似物。如果需要，也可使用碳化二亚胺偶联剂的聚合物负载形式，例如包括在TetrahedronLetters，34(48)，7685(1993)中所描述的那些。另外，可使用公知的偶联助催化剂，如N-羟基琥珀酰亚胺、1-羟基苯并三唑和类似物，来加速偶联反应。

这种偶联反应一般是通过将N-磺酰氨基酸3与大约1至大约2当量的偶联剂和至少1当量、优选大约1至大约1.2当量的酪氨酸衍生物4，在惰性稀释剂(如二氯甲烷、氯仿、乙腈、四氢呋喃、N，N-二甲基甲酰胺和类似物)中接触而进行的。一般，这种反应是在大约0℃至大约37℃的范围内进行大约12至大约24小时。在反应完成后，通过常规的方法，包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤和类似方法回收化合物5。

或者，N-磺酰氨基酸3可转变为酸性卤化物，其然后与化合物4偶联得到化合物5。酸性卤化物可通过将化合物3与无机酸性卤化物，如亚硫酰氯、三氯化磷、三溴化磷或五氯化磷，或优选与草酰氯，在常规条件下接触制备而成。这种反应一般是使用大约1至5摩尔当量的无机酸性卤化物或草酰氯在无溶剂或在惰性溶剂(如二氯甲烷或四氯化碳)中，在大约0℃至大约80℃的温度范围内进行大约1至大约48小时。在该反应中也可使用催化剂，如DMF。

然后N-磺酰氨基酸3的酸性卤化物与至少1当量、优选大约1.1至大约1.5当量的酪氨酸衍生物4，在惰性稀释剂(如二氯甲烷)中，在大约-70℃至大约40℃的温度范围内接触大约1至大约24小时。优选地，该反应在合适的碱的存在下进行以清除反应过程中产生的酸。合适的碱的实例包括叔胺，如三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉和类似物。或者，反应可在Schotten-Baumann型条件下使用碱性水溶液(如氢氧化钠和类似物)进行。在反应完成后，通过常规的方法，包括中和、蒸发、萃取、沉淀、色谱、过滤和类似方法回收化合物5。

或者，可通过首先形成二氨基酸衍生物，然后将二氨基酸与芳基磺酰卤化物2偶联制备化合物5，如下面示意图3所示；

示意图3

其中R、R^a、Ar¹、X、Z、m、n和o如上所定义。

二氨基酸6很容易通过将氨基酸1与氨基酸4使用如上所述的常规氨基酸偶联技术和试剂(如碳化二亚胺、BOP试剂和类似物)偶联制备而成。然后可使用磺酰氯2磺化二氨基酸6，并采用上述的合成步骤得到化合物7。

在上述反应中使用的酪氨酸衍生物4是已知的化合物或可通过常规的合成步骤从已知化合物制备而成的化合物。例如，适合用于上述反应中的酪氨酸衍生物4包括但不限于，L-酪氨酸甲酯、L-酪氨酸叔丁酯、L-3，5-二碘酪氨酸甲酯、L-3-碘酪氨酸甲酯、β-(4-羟基-萘-1-基)-L-丙氨酸甲酯、β-(6-羟基-萘-2-基)-L-丙氨酸甲酯和类似物。如果需要，当然也可使用上述化合物的其他酯或酰胺。

N-芳基磺酰基-杂环氨基酸-酪氨酸衍生物7可用作起始点，通过使用本发明的方法将聚合物部分连接在Ar²基团上。

能够以上述的方式使用位于分子其他部分上的胺部分来将聚合物基团与分子共价连接。例如，位于Ar¹上、杂环氨基酸上或Ar²上的胺，同样可被衍生用于使用本发明的方法进行PEG取代。在合成中胺部分可包含在这些取代基中，如需要适当地进行保护。或者，可使用胺前体。

此外，氨基取代基可被加入进杂环氨基酸官能团中，然后被衍生以包含聚合物部分。例如，在美国专利第6,489,300中描述了杂环氨基酸官能团可以是2-羧基哌嗪。或者，市售的3-或4-羟脯氨酸可被氧化为相应的酮，然后在氰基硼氢化钠的存在下用氨水还原氨化形成相应的胺部分。仍更进一步地，4-氰基脯氨酸可被还原得到结构式-CH₂NH₂的取代烷基，它可通过胺被衍生。

仍进一步地，胺部分可被加入进Ar²官能团中。优选地，胺部分以胺前体存在，如与Ar²连接的硝基或氰基。

式IIa-IIh的非衍生化合物随后通过使用本发明的方法与聚合物偶联。示意图4描绘了本发明的实施方式：

示意图4

在示意图9中，在膦(在此是PPh₃)和偶氮二羧酸酯(例如偶氮二羧酸二异丙酯)的存在下，PEG醇100用亲核试剂105处理以形成受保护的酯110。然后该酯被水解以形成所需的共轭物115。

该反应在缓和且基本上中性的条件下发生。该反应优选在至少一种合适的溶剂中进行。实例包括例如二氯甲烷的卤化溶剂、例如苯或甲苯的芳烃溶剂、或例如四氢呋喃和二乙醚的醚溶剂。其他合适的溶剂包括乙酸乙酯、乙腈和DMF。最优选使用氯化溶剂或醚溶剂。在最优选的实施方式中，该溶剂是二氯甲烷或四氢呋喃。

反应温度一般在大约-100至100℃的范围内，优选在大约-20至50℃的范围内，甚至更优选从大约0°至大约室温的范围内。在特别优选的实施方式中，反应温度在大约-10至10℃之间。

反应时间的范围是大约5分钟至大约100小时，优选大约30分钟至大约50小时之间。更优选该反应在大约45分钟至大约10小时之间进行至反应完成。

如上所述，三芳基-或三烷基膦的实例包括三苯基膦、三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦和1，2-双-(二苯基膦基)乙烷。膦也可以是聚合物负载的或水溶性的。优选的三芳基膦是三苯基膦。

偶氮化合物的实例是偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二异丙酯、4-甲基-1，2，4-三唑烷-3，5-二酮、N，N，N′，N′-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶、双(N-4-甲基哌嗪-1-基)偶氮二羧酰胺、二吗啉代偶氮二羧酰胺和偶氮二羧酸二叔丁酯。

要理解的是其他合适的聚合醇可用来代替PEG，且本领域普通技术人员将能够很容易地修改下面的反应示意图以加入这些其他的聚合物。在一些情况下，PEG部分可直接引入至Ar²基团上，且在其他情况下，PEG部分可通过连接基团部分的连接被引入。

适合与式II化合物共轭的其他聚合物包括但不限于，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、聚丙烯酰胺(PAAm)、聚二甲基丙烯酰胺(PDAAm)、聚乙烯醇(PVA)、右旋糖、聚(L-谷氨酸)(PGA)、苯乙烯马来酸酐(SMA)、聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺(HPMA)、聚二乙烯醚马来酸酐(DIVEMA)。作为实例，在自由基聚合过程中，通过引入共聚单体，PVP、PAAm和PDAAm可被官能化。PVA和右旋糖都含有适合共轭的一级羟基(OH)。这些生物聚合物的合成方法和将其与生物物质共轭的方法在本领域中是公知的(参见，例如已公开的美国专利申请第20040043030号；美国专利第5,177,059号；美国专利第6,716,821号；美国专利第5,824,701号；美国专利第6,664,331号；美国专利第5,880,131号；Kameda，Y.等人，Biomaterials 25：3259-3266，2004；Thanou，M.等人，Current Opinion in Investigational Drugs 4(6)：701-709，2003；Veronese，F.M.等人，II Farmaco 54：497-516，1999，所有文献均全部引入本文作为参考)。

适合用于本发明中的代表性聚合物包括：

HO(亚烷基-O)_ppR^bb	单封端的单羟基PEG(mPEG)
HO(亚烷基-O)_ppR^bb	单封端的单羟基PEG(mPEG)	H₂N(亚烷基-O)_ppR^bb	单封端的单氨基PEG

HO(亚烷基-O)_ppR-OH	不封端的二羟基PEG
HO(亚烷基-O)_ppR-OH	不封端的二羟基PEG	H₂N(亚烷基-O)_ppR-OH	不封端的单氨基PEG
HO(亚烷基-O)_ppR^bb	分支的单羟基PEG	H₂N(亚烷基-O)_ppR-OH	不封端的单氨基PEG
HO(亚烷基-O)_ppR^bb	分支的单羟基PEG	HO(亚烷基-O)_ppR^bb	树枝状的单羟基PEG

其中pp和亚烷基如本文中的定义，R^bb优选选自烷基、取代的烷基、芳基和取代的芳基。

其他合适的聚合物显示如下：

单封端的单羟基PEG(mPEG)

单封端的单氨基PEG

不封端的二羟基PEG

分支的PEG：

购自NOF的PEG试剂(20kDa 4-臂)

20kDa4-臂PEG四胺

双甘油核心

Cat#Sunbright DG-200PA

购自Nektar的PEG试剂(40kDa 8-臂)

40kDa 8-臂PEG

六甘油核心

Cat#0 J000T08

树枝状PEG：

购自NOF的PEG试剂(40kDa 4-臂)

40kDa 4-臂PEG醇 40kDa 4-臂PEG四胺

季戊四醇核心季戊四醇核心

cat.#Sunbright PTE-40000 cat.#Sunbright PTE-400PA

购自NOF的PEG试剂(40kDa 3-臂)

40kDa 3-臂PEG 40kDa 3-臂PEG三胺

甘油核心甘油核心

cat#Sunbright GL-40000 cat#Sunbright GL-400PA

购自SunBio的PEG试剂(40和20kDa)

Y-PEG系列(天冬氨酸核心)

Y-PEG胺(40kDa) Y-PEG硝基苯基醇氨基甲酸酯(40kDa)

Cat# PYAM-40 Cat# PYNPC-40

6-臂系列(山梨醇核心)

在山梨醇6-臂系列中可得到的较低分子

量包括10、15和20kDa。醇之外的衍生

分子进行共轭。

40kDa 6-臂PEG

定制产品

这些PEG聚合物可进一步被修饰，用PEG二胺通过适当的连接基团，例如氨基甲酸酯(氨基甲酸乙酯)或脲将链延伸。

PEG二胺

各种具有酸性氢的亲核化合物可用于本发明的方法中。这些化合物可以是生物学活性的化合物，即，治疗用化合物(药物)和农业用化学品(杀虫剂、除草剂、和植物生长刺激剂，如肥料)或食物添加剂化合物。可加入至这些化合物中的具有酸性氮的基团的实例显示在上面；见表D和D1中所列的结构。

药学制剂

当用作药物时，本发明的共轭物通常以药学组合物的形式给药。这些共轭物可通过多种途径给药，包括经口、经直肠、透皮、皮下、静脉内、肌内、舌下、经眼或吸入(包括通过鼻或口吸入给药)。优选的给药途径包括皮下、静脉内和吸入。这些组合物可以以制药领域中公知的方式进行制备，并包括至少一种共轭物。

本发明也提供了包括根据本发明的共轭物，例如式I的共轭物，与作为α₄β₇抑制剂的单独的化合物组合在一起的药学组合物。这些组合物也包括药学上可接受的载体或赋形剂，且可如本文其他地方所描述给药。

本发明也包括含有一种或多种式I的共轭物作为活性成分以及药学上可接受的载体的药学组合物。在制备本发明的组合物的过程中，活性成分通常与赋形剂混合，用赋形剂稀释或包封在载体内，该载体可以是无菌注射溶液和无菌包装的粉末的形式。对于皮下给药，简单的载体可包括水、Na₂HPO₄、NaH₂PO₄和NaCl的无菌溶液，其比例可提供等渗的和生理学可接受的pH，已知的有PBS或磷酸盐缓冲盐水。其他选择对于本领域技术人员是公知的，包括混合的溶剂系统，它可影响吸收速率和接触总量。这些选择包括含有甘油、聚乙二醇400和棉籽油的混合溶剂系统。有可能使用的还有乙醇、N，N′-二甲基乙酰胺、丙二醇和苯甲醇，它们都可被用来操纵通透性的提高和高渗性。

在制备制剂过程中，可能需要将活性化合物磨碎以便在与其他成分混合之前得到合适的粒度。如果活性化合物基本上是不溶的，通常被磨碎至小于200目的粒度。如果活性化合物基本上是水溶性的，一般通过磨碎将粒度调节至例如大约40目，使其在制剂中基本上均匀分布。

合适的赋形剂的一些实例包括乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨醇、甘露醇、淀粉、阿拉伯胶、磷酸钙、藻酸盐、黄蓍胶、明胶、硅酸钙、微晶纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素、水、糖浆和甲基纤维素。制剂可另外包括：润滑剂，如滑石、硬脂酸镁和矿物油；湿润剂；乳化剂及悬浮剂；防腐剂，如甲基-和丙基羟基-苯甲酸酯；甜味剂；和调味剂。本发明的组合物可被制成为采用本领域已知的方法给予患者后，活性成分能快速、持久或延迟释放的剂型。

通过皮下或静脉内制剂给予治疗药物在制药工业中是公知的。皮下或静脉内制剂除了组合物中的治疗药物可溶以外，还应该具有某些特性。例如，该剂型应该能促进活性成分的总体稳定性，制剂的制造还应该在成本上是经济的。所有这些因素最终决定了静脉制剂总体上的成功和实用性。

可包含在本发明化合物的药学制剂中的其他辅助添加剂如下：溶剂：乙醇、甘油、丙二醇；稳定剂：EDTA(乙二胺四乙酸)、柠檬酸；抗菌性防腐剂：苯甲醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯；缓冲剂：柠檬酸/柠檬酸钠、酒石酸氢钾、酒石酸氢钠、乙酸/乙酸钠、马来酸/马来酸钠、磷苯二甲酸氢钠、磷酸/磷酸二氢钾、磷酸/磷酸氢二钠；和张力调节剂：氯化钠、甘露醇、右旋糖。

需要缓冲液的存在以保持水溶液pH在大约4至大约8的范围内，更优选在大约4至大约6的范围内。缓冲系统通常是弱酸及其可溶性盐的混合物，例如柠檬酸钠/柠檬酸；或二元酸的单阳离子或双阳离子盐，例如，酒石酸氢钾；酒石酸氢钠、磷酸/磷酸二氢钾、和磷酸/磷酸氢二钠。

所使用的缓冲系统的量取决于(1)所需的pH；和(2)药物的量。通常使用的缓冲液量为制剂中缓冲液：阿伦膦酸盐(其中缓冲液的摩尔数取自缓冲液成分的合并摩尔数，例如柠檬酸钠和柠檬酸)0.5:1至50:1的摩尔比例，以保持pH在4至8的范围内，通常使用缓冲液(合并的)与存在的药物的摩尔比例为1:1至10:1。

在本发明中一种有用的缓冲液是柠檬酸钠/柠檬酸，其范围为每ml5至50mg柠檬酸比每ml1至15mg柠檬酸，足以将组合物水溶液的pH保持在4-6。

也可存在缓冲剂以防止药物通过与溶解的金属离子(例如Ca、Mg、Fe、Al、Ba)形成可溶性金属复合体而发生沉淀，这些离子可能是从玻璃容器中或橡皮塞中析出来的或存在于普通的自来水中。这种试剂的作用可以是药物的竞争性络合剂，并产生可溶性金属复合体，生成不需要的微粒。

另外，可能需要试剂(例如，大约1-8mg/ml的氯化钠)的存在来将张力调整至与人血液相同的数值，以避免在静脉制剂给药过程中发生红细胞肿胀或收缩所产生的不良副反应，如恶心或腹泻以及可能的相关血液疾病。通常，制剂的张力要与人血液相匹配，其范围是282至288mOsm/kg，通常为285mOsm/kg，其相当于0.9％氯化钠溶液的渗透压。

静脉制剂可通过直接静脉内注射、静脉快速滴注给药，或可通过加入合适的输注溶液(如0.9％氯化钠注射液或其他相容的输注溶液)中输注给药。

组合物优选以单位剂量的形式进行配制，每剂量含有大约5至大约100mg，更普遍的是大约10至大约30mg活性成分。术语“单位剂量形式”是指适合用作人类受试者和其他哺乳动物的单位剂量的物理独立单位，每单位含有预定数量的计算能产生所需治疗效应的活性原料以及合适的药学赋形剂。

共轭物在很宽的剂量范围内都是有效的，通常以药学有效量给药。然而要理解的是，实际给予的共轭物的数量将由医生根据有关的情况进行确定，这些情况包括被治疗的病情、选择的给药途径、给予的实际化合物、每个患者的年龄、重量和反应、患者症状的严重性和类似情况。

为了制备固体组合物，如片剂，主要的活性成分与药学赋形剂混合形成固体预制剂组合物，该组合物含有本发明化合物的均质混合物。当提到这些预制剂组合物是均质时，其含义是活性成分均匀地分散在组合物中，这样组合物很容易被再分为同样有效的单位剂量形式，如片剂、丸剂和胶囊。然后该固体预制剂被再分成上面所述类型的单位剂量形式，该剂型含有，例如0.1至大约500mg的本发明的活性成分。

本发明的片剂或丸剂可被覆以包衣或制成复方药物以提供长效优势的剂型。例如，片剂或丸剂可包括内用剂型和外用剂型组分，后者的形式是在前者上有包衣。两种组分可由肠溶层(enteric layer)分隔，该肠溶层的作用是抵抗胃内的崩解，使内组分不受损害的进入十二指肠或延缓释放。多种材料可用作这种肠溶层或包衣，这些材料包括许多类聚合酸，以及聚合酸与例如虫胶、鲸蜡醇和乙酸纤维素的材料的混合物。

可加入本发明的新组合物用于口服给药或注射给药的液体剂型包括，具有合适口味的糖浆水溶液、水性或油性悬液、和具有食用油(如棉籽油、芝麻油、椰子油或花生油)的调味乳剂、以及酏剂和类似的药学载体。

用于吸入或吹入的组合物包括在药学可接受的水性或有机溶剂、或其混合物中的溶液和悬液，和粉末。液体或固体组合物可含有如前所述的合适的药学可接受的赋形剂。优选的，组合物经口或鼻吸入途径给药以发挥局部或全身效应。在优选的药学可接受的溶剂中的组合物可通过使用惰性气体喷雾给药。喷雾的溶液可从喷雾装置直接吸入，或喷雾装置可被接在面罩通气口或间歇正压呼吸机上。溶液、悬液或粉末组合物可从装置给药，优选经口或经鼻，所述装置以适当的方式对制剂进行递送。对于吸入或吹入给药，优选共轭物的总分子量在大约10,000道尔顿至70,000道尔顿之间，更优选大约20,000道尔顿至45,000道尔顿之间。

聚合物共轭物

如上配制和给药的本发明化合物是聚合物共轭物。聚合物共轭物预计相对非共轭的聚合物可提供许多益处，如溶解性和体内稳定性提高。

正是如此，可使用单个聚合物分子与本发明的化合物共轭，尽管也考虑到也可以连接一个以上的聚合物分子，一般是通过载体。本发明的共轭化合物发现可在体内以及非体内应用中都具有可应用性。另外，要认识到共轭聚合物可根据最终的应用使用其他的基团、部分或其他共轭物种。其实例是，在一些应用中使聚合物官能化使其具有反应性，且使其能够与式II的化合物共轭，以增强总共轭物质的各种特性或特征，这样是有益处的。因此，聚合物可含有任何官能基、重复基团、连接或其他组成性结构，它们不会妨碍本发明的共轭化合物的目的用途。

用于达到这些所需特征的说明性聚合物如前所述，以及PCT WO01/54690(Zheng等人)中所述，该申请全部引入本文作为参考。聚合物可与本发明的化合物连接(优选经连接基团部分)形成稳定的键，该键不会被人类的酶显著切断。通过本领域中标准的技术测定，通常对于不被“显著”切断的键需要连接聚合物和与聚合物连接的本发明化合物的键在24小时内被切断的比例不超过20％，这些技术包括但不限于高压液相色谱(HPLC)。

通常，本发明的化合物含有至少大约两种与聚合物连接的式II的化合物。最终的用量是在反应程度最大、而产物的非特异性修饰最小之间达到平衡，同时规定化学实体要保持最佳的活性，而同时优化了本发明的化合物的半衰期。优选地，保留了本发明化合物至少大约50％的生物学活性，更优选保留100％。

如上所述在本发明的优选实践中，在目标聚合物系统中有利地加入C₂-C₄烷基聚烷撑二醇的聚烷撑二醇残基，优选聚乙二醇(PEG)或这些乙二醇的聚(氧)烷撑二醇残基。因此，与本发明化合物连接的聚合物可以是聚乙二醇(PEG)的均聚物或是聚氧乙烯化的多元醇，条件是在所有情况下聚合物在室温下都可溶解在水中。这些聚合物的非限制性实例包括聚烷撑氧均聚物，如PEG或聚丙二醇、聚氧乙烯化的乙二醇、其共聚物和其嵌段共聚物，条件是要保留嵌段共聚物的水溶性。

聚氧乙烯化的多元醇的实例包括但不限于，聚氧乙烯化的丙三醇、聚氧乙烯化的山梨醇、聚氧乙烯化的葡萄糖或类似物。聚氧乙烯化的丙三醇的丙三醇主链与天然的主链是相同的，例如动物和人类甘油单-、双-和三酯中的主链。因此，这种分支在体内不一定会被认为是外源物质。

本领域普通技术人员要理解的是，前面的列举仅是说明性的，可考虑具有本文所述性质的所有聚合物材料。聚合物不需要具有特殊的分子量，但优选分子量在大约100至100,000之间，优选大约10,000至80,000；更优选大约20,000至大约70,000。尤其是大小为20,000或更大的聚合物能最有效地防止由于肾脏过滤引起的产物丢失。

PEG衍生物是指其中在聚乙二醇本身上的一个或两个末端羟基已经被修饰的聚乙二醇聚合物。合适的修饰作用实例包括用另外的官能基替换一个或两个羟基，该官能基可用低分子量的配基或其他大分子或聚合物保护或不保护。通过将聚乙二醇与包括互补反应性官能基的化合物反应可完成聚乙二醇末端羟基的修饰作用，所述互补反应性官能基包括能与聚乙二醇中的羟基发生反应的官能基。本发明化合物的PEG衍生物可含有通过连接基团与其共价连接的一个或多个聚乙二醇(PEG)取代基。

下面的制剂实施例举例说明了本发明的药学组合物。

制剂实施例1

制备含有下列成分的硬明胶胶囊：

质量

成分 (mg/胶囊)

活性成分 30.0

淀粉 305.0

硬脂酸镁 5.0

上述成分混合在一起，以340mg的质量装入硬明胶胶囊中。

制剂实施例2

使用下面的成分制备片剂：

质量

成分 (mg/片)

活性成分 25.0

纤维素、微晶 200.0

胶体二氧化硅 10.0

硬脂酸 5.0

这些成分混合、压片成为片剂，每片重240mg。

制剂实施例3

制备含有下列成分的干粉吸入制剂：

成分重量％

活性成分 5

乳糖 95

将活性成分与乳糖混合，混合物加入至干粉吸入装置中。

制剂实施例4

如下制备每片含有30mg活性成分的片剂：

质量

成分 (mg/片)

活性成分 30.0mg

淀粉 45.0mg

微晶纤维素 35.0mg

聚乙烯吡咯烷酮 4.0mg

(在无菌水中的10％溶液)

羧甲基淀粉钠 4.5mg

硬脂酸镁 0.5mg

滑石 1.0mg

总计 120mg

活性成分、淀粉和纤维素通过20目U.S.筛并充分混合。聚乙烯吡咯烷酮的溶液与得到的粉末混合，然后通过16目U.S.筛。得到的颗粒在50℃至60℃进行干燥，并通过16目U.S.筛。然后前面已通过30目U.S.筛的羧甲基淀粉钠、硬脂酸镁和滑石加入至颗粒中，混合后，在压片机上进行压片得到每片重120mg的片剂。

制剂实施例5

如下制备每粒含有40mg药物的胶囊：

质量

成分 (mg/胶囊)

活性成分 40.0mg

淀粉 109.0mg

硬脂酸镁 1.0mg

总计 150.0mg

将活性成分、淀粉和硬脂酸镁混合，通过20目U.S.筛，以150mg的质量装入硬明胶胶囊中。

制剂实施例6

如下制备每粒含25mg活性成分的栓剂：

成分用量

活性成分 25mg

饱和的脂肪酸甘油酯达到 2,000mg

活性成分通过60目U.S.筛，悬浮在饱和的脂肪酸甘油酯(之前需要少量的热量将其融化)中。然后混合物倒入至标称2.0g容量的栓剂模中，并进行冷却。

制剂实施例7

如下制备每剂含有50mg药物/5.0ml剂量的悬液：

成分用量

活性成分 50.0mg

黄原胶 4.0mg

羧甲基纤维素钠(11％)

微晶纤维素(89％) 50.0mg

蔗糖 1.75g

苯甲酸钠 10.0mg

调味剂和颜料适量(q.v.)

纯水达到 5.0ml

将活性成分、蔗糖和黄原胶混合，通过10目U.S.筛，然后与之前在水中制备的微晶纤维素和羧甲基纤维素钠的溶液混合。苯甲酸钠、调味剂和颜料用一些水稀释，加入并进行搅拌。然后加入足够的水得到需要的容量。

制剂实施例8

质量

成分 (mg/胶囊)

活性成分 15.0mg

淀粉 407.0mg

硬脂酸镁 3.0mg

总计 425.0mg

将活性成分、淀粉和硬脂酸镁混合，通过20目U.S.筛，以425.0mg的质量装入硬明胶胶囊中。

制剂实施例9

如下制备皮下制剂：

成分质量

活性成分 50mg.mL mg

磷酸盐缓冲盐水 1.0ml

制剂实施例10

如下制备局部制剂：

成分质量

活性成分 1-10g

乳化蜡 30g

液体石蜡 20g

白凡士林达到 100g

将白凡士林加热至熔化。加入液体石蜡和乳化蜡，搅拌至溶解。加入活性成分并继续搅拌直至分散。然后混合物冷却至成为固体。

制剂实施例11

如下制备静脉内制剂：

成分质量

活性成分 250mg

等渗盐水 100ml

在本发明的方法中使用的另一种优选制剂采用了透皮给药装置(“贴片”)。这种透皮贴片可用来以可控的用量连续或非连续的输注本发明的化合物。用于递送药剂的透皮贴片的构造和应用在本领域中是公知的。参见，例如于1991年6月11日授权的美国专利第5,023,252号，该专利引入本文作为参考。这种贴片可被制成连续、脉冲式或根据需要的递送药剂。

经常需要或必须将药物组合物直接或间接地导入进脑中。直接技术通常涉及将药物递送导管放置进宿主的心室系统中以绕过血脑屏障。一种用于将生物学因子运输至机体的特殊解剖部位的这种可植入递送系统，在美国专利第5,011,472号中描述，该专利引入本文作为参考。

间接技术，通常是优选的，其经常涉及通过将亲水性药物转化为脂溶性药物对组合物进行配制从而提供药物潜伏化。潜伏化通常是通过下面的方法来达到的：封闭药物上存在的羟基、羰基、硫酸根和伯胺基团，从而使药物具有更大的脂溶性，使其能够通过血脑屏障进行转运。或者，可通过动脉内输注高渗溶液来增强亲水性药物的递送，这种方法可暂时地使血脑屏障开放。

适合用于本发明中的其他剂型可见“雷明顿药物科学(Remington′sPharmaceutical Sciences)”，Mace Publishing Company，Philadelphia，PA，第17版(1985)。

如上所述，本文所述的化合物适合用于上述的各种药物递送系统中。另外，为了增强给药的化合物在体内的血清半衰期，化合物可被包封，导入进脂质体腔内，制备成为胶体，或可使用其他的常规技术，使化合物的血清半衰期延长。有多种方法可以制备脂质体，如Szoka等人的美国专利第4,235,871号、第4,501,728号和第4,837,028号中所述，这些专利的每一篇都引入本文作为参考。

应用

本发明的共轭物是VLA-4拮抗剂。一些共轭物也至少对α₄β₇整合素具有部分亲和性。与非共轭的化合物相比，该共轭物在体内的滞留时间延长。共轭物在体内滞留时间的延长使需要的药物用量降低，因此导致不良反应更少，发生毒性的可能性更小。另外，药物制剂可以以较少的次数对患者给药，而达到相似或更大的治疗效应。

通过抑制α₄β₁或α₄β₇与细胞受体(如VCAM-1、纤维连接蛋白和MadCAM)的结合的介导，本发明的共轭物能增强对体内白细胞与内皮细胞的粘附的抑制。优选地，本发明的共轭物可，例如通过输注或通过皮下注射或口服用药，用于治疗由α₄β₁和/或α₄β₇(通常称为白细胞粘附)介导的疾病。本发明的共轭物可用来治疗多种炎性脑疾病，尤其是其中内皮细胞/白细胞粘附机制引起健康脑组织破坏的中枢神经系统疾病。因此，本发明的共轭物可用于，例如治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)、多发性硬化症(MS)、脑膜炎和脑炎。

本发明的共轭物也可用于治疗其他器官系统中组织损伤引起的功能障碍和疾病，即，其中组织损伤也是经粘附机制导致白细胞迁移或活化而发生的。在哺乳动物患者中，这些疾病的实例是炎性疾病，如哮喘、阿耳茨海姆氏病、动脉粥样硬化、AIDS痴呆症、糖尿病(包括急性青少年型糖尿病)、炎性肠病(包括溃疡性结肠炎和克罗恩氏病)、类风湿性关节炎、组织移植排斥、肿瘤转移、中风、和其他脑外伤、肾炎、视网膜炎、异位性皮炎、银屑病、心肌缺血和白细胞介导的急性肺损伤，如发生在成人呼吸窘迫综合征中的急性肺损伤。

使用本发明的共轭物可治疗的其他疾病还包括结节性红斑、变应性结膜炎、视神经炎、眼葡萄膜炎、变应性鼻炎、强制性脊柱炎、银屑病性关节炎、血管炎、莱特尔综合征、系统性红斑狼疮、进行性全身性硬化症、多发性肌炎、皮肌炎、韦格内氏肉芽肿、主动脉炎、类肉瘤病、淋巴细胞减少症、颞动脉炎、心包炎、心肌炎、充血性心力衰竭、结节性多动脉炎、高敏反应综合征、变态反应、嗜酸细胞过多综合征、变应性肉芽肿性血管炎(Churg-Strauss syndrome)、慢性阻塞性肺病、过敏性肺炎、慢性活动性肝炎、间质性膀胱炎、自身免疫性内分泌功能障碍、原发性胆汁性肝硬化、自身免疫性再生障碍性贫血、慢性迁延性肝炎和甲状腺炎。

本发明也提供了治疗患者至少部分由α₄整合素介导的白细胞结合引起或加重的疾病的方法，该方法包括共同给予有效量的本发明的共轭物，例如式I的共轭物，和有效量的作为α₄β₇抑制剂的单独化合物。共同给药可同时进行或依次进行。例如，本发明共轭物的给药可提前α₄β₇抑制剂的给药几分钟或几小时。或者，α₄β₇抑制剂可在本发明的共轭物之前给药。

证明治疗炎性反应功效的合适体内模型包括，EAE(实验性自身免疫性脑脊髓炎)小鼠、大鼠、豚鼠或灵长类动物、以及其他依赖于α₄整合素的炎症模型。

炎性肠病是两种称为克罗恩氏病和溃疡性结肠炎的类似疾病的总称。克罗恩氏病是一种原发性、慢性溃疡性炎性疾病，其特征是边界非常明确，一般累及肠壁所有层次的透壁肉芽肿性炎性反应。从口至肛门的胃肠道的任何节段都可被累及，尽管该病最常见的是影响回肠和/或结肠的末端。溃疡性结肠炎是主要局限在结肠粘膜和粘膜下层的炎性反应。在炎性肠病病变内有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，这些细胞可引起炎性损伤。

哮喘的特征是气管支气管树对多种刺激物的反应性增加，引起支气管气道的发作性收缩。刺激物引起多种炎症介质从IgE包被的肥大细胞中释放，这些介质包括组胺、嗜曙红的和嗜中性的趋化因子、白三烯、前列腺素和血小板活化因子。这些因子的释放募集了嗜碱性粒细胞、嗜曙红细胞和嗜中性白细胞，引起炎性损伤。

动脉粥样硬化是一种动脉疾病(例如，冠状动脉、颈动脉、主动脉和髂动脉)。其基本病变是粥样斑，由内膜内隆起的局灶斑块(focalplaque)组成，该斑块具有脂质核心和外被的纤维帽。粥样斑会补偿动脉血流，使受累的动脉变弱。心肌和脑梗塞是这种疾病的主要结局。巨噬细胞和白细胞被募集至粥样斑，并引起炎性损伤。

类风湿性关节炎是一种慢性、复发性炎性疾病，主要引起关节损害和关节破坏。类风湿性关节炎通常首先影响四肢的小关节，但然后可累及腕、肘、踝和膝。关节炎是由滑膜细胞与从循环中浸润至关节滑膜衬里(synovial lining)中的白细胞相互作用引起的。参见，例如Paul，“免疫学(Immunology)”(3d ed.，Raven Press，1993)。

本发明的共轭物的另一适应症是治疗由VLA-4介导的器官或移植物排斥反应。最近几年，对于组织和器官(如皮肤、肾脏、肝脏、心脏、肺、胰腺和骨髓)移植的外科技术的效率已经得到了相当大的提高。可能主要的突出问题是缺少满意的药物以诱导受者对移植的同种异体移植物或器官的免疫耐受性。当同种异体细胞或器官被移植进宿主体内(即，供体和受体是相同种属的不同个体)时，宿主免疫系统可能会对移植物中的外来抗原发动免疫反应(宿主抗移植物病)，从而引起移植组织的破坏。CD8⁺细胞、CD4细胞和单核细胞都参与了移植组织的排斥反应。本发明的共轭物能与α₄整合素结合，尤其可用于阻断同种异体抗原诱发的受体体内的免疫反应，因而阻止了这些细胞参与破坏移植组织或器官。参见，例如Paul等人，Transplant International9，420-425(1996)；Georczynski等人，Immunology 87，573-580(1996)；Georcyznski等人，Transplant.Immunol.3，55-61(1995)；Yang等人，Transplantation 60，71-76(1995)；Anderson等人，APMIS 102，23-27(1994)。

本发明的可与VLA-4结合的共轭物的一种相关用途是调节参与“移植物抗宿主”病(GVHD)的免疫反应。参见，例如Schlegel等人，J.Immunol.155，3856-3865(1995)。GVHD是一种当免疫活性细胞转移至同种异体的受体体内时发生的有可能致死的疾病。在这种情况下，供体的免疫活性细胞可攻击受体内的组织。皮肤、肠上皮和肝脏的组织都是经常的靶标，在GVHD过程中可被破坏。当免疫组织被移植时，如骨髓移植中，该疾病表现出尤其严重的问题；但也有报道在其他情况下，包括心脏和肝脏移植物中，GVHD不太严重。本发明的治疗药物尤其可用于阻断供体T细胞的活化，因而干扰了它们溶解宿主体内靶细胞的能力。

本发明的制剂尤其可用于治疗多发性硬化症、类风湿性关节炎和哮喘。

本发明的共轭物的进一步用途是抑制肿瘤转移。已有报道几种肿瘤细胞表达VLA-4，与VLA-4结合的化合物可阻断这些细胞与内皮细胞的粘附。Steinback等人，Urol.Res.23，175-83(1995)；Orosz等人，Int.J.Cancer 60，867-71(1995)；Freedman等人，Leuk.Lymphoma 13，47-52(1994)；Okahara等人，Cancer Res.54，3233-6(1994)。

具有所需生物学活性的化合物可根据需要被修饰以提供所需的特性，如药理学特性(例如，体内稳定性、生物利用度)提高，或在诊断学应用中被检测到的能力。稳定性可以以多种方式进行测定，如通过测定在与肽酶或人血浆或血清孵育过程中蛋白的半衰期。许多这种蛋白稳定性测定法都已有描述(参见，例如Verhoef等人，Eur.J.DrugMetab.Pharmacokinet，1990，15(2)：83-93)。

本发明的共轭物的进一步用途是治疗多发性硬化症。多发性硬化症是一种进行性的神经自身免疫性疾病，估计在美国有250,000至350,000个患者。多发性硬化症被认为是特异性自身免疫反应的结果，其中某些白细胞攻击和引起髓鞘质(覆盖神经纤维的绝缘鞘)的破坏。在多发性硬化症的动物模型中，针对VLA-4的鼠单克隆抗体已经显示能阻断白细胞与内皮细胞的粘附，并因此阻止中枢神经系统的炎症和随后动物的瘫痪¹⁶。

本发明的药学组合物适合用于多种药物递送系统中。用于本发明中的合适剂型可见“雷明顿药物科学(Remington′s PharmaceuticalSciences)”，Mace Publishing Company，Philadelphia，PA，第17版，(1985)。

给予患者的用量将取决于给药的物质、给药的目的(如预防或治疗)、患者的状态、给药的方式和类似情况。在治疗性应用中，组合物可以以如下量给予已经患有疾病的患者，其量足以治愈或至少部分解除疾病及其并发症的症状。足以达到此目的的用量称为“治疗有效剂量”。有效用于此用途的用量取决于被治疗的病情以及主治医生根据一些因素所做的判断，这些因素如炎症的严重性、患者的年龄、体重和一般状况、和类似因素。

给予患者的组合物可以为上述的药学组合物的形式。这些组合物可通过常规的灭菌技术进行灭菌，或可被无菌过滤。得到的水溶液可被包装备用，或被冻干，在给药之前该冻干制剂与无菌水性载体混合。

本发明的共轭物的治疗剂量将根据，例如进行治疗的特殊用途、共轭物的给药方式、患者的健康状况和病情、以及处方医生的判断进行变化。例如，对于静脉内给药，剂量的范围一般在大约20μg至大约2000μg/kg体重，优选大约20μg至大约500μg，更优选大约100μg至大约300μg/kg体重。鼻内给药的合适剂量范围通常在大约0.1pg至1mg/kg体重。有效剂量可从来自体外或动物模型检测系统的剂量反应曲线中推知。

本发明的共轭物也能结合或拮抗α₆β₁、α₉β₁、α₄β₇、α_dβ₂、α_eβ₇整合素的作用(尽管α₄β₁和α₉β₁在本发明中是优选的)。因此，本发明的共轭物也可用于预防或逆转由这些整合素与其各自配体结合所诱发的症状、功能紊乱或疾病。

例如，于1998年12月3日公开的国际申请WO 98/53817(该申请的公开内容全部引入本文作为参考)和其引用的参考文献描述了由α₄β₇介导的疾病。该参考文献也描述了测定拮抗α₄β₇依赖性结合VCAM-Ig融合蛋白的化验。

另外，与α_dβ₂和α_eβ₇整合素结合的化合物可特别用于治疗哮喘和相关的肺部疾病。参见，例如M.H.Grayson等人，J.Exp.Med.1998，188(11)2187-2191。与α_eβ₇整合素结合的化合物也可用于治疗系统性红斑狼疮(参见，例如，M.Pang等人，Arthritis Rheum.1998，41(8)，1456-1463)；克罗恩氏病、溃疡性结肠炎和炎性肠病(IBD)(参见，例如，D.Elewaut等人，Scand J.Gastroenterol 1998，33(7)743-748)；干燥综合征(Sjogren’s syndrome)(参见，例如U.Kroneld等人，Scand J.Gastroenterol 1998，27(3)，215-218)；和类风湿性关节炎(参见，例如Scand J.Gastroenterol 1996，44(3)，293-298)。并且与α₆β₁结合的化合物可用于防止受精(参见，例如H.Chen等人，Chem.Biol.1999，6，1-10)。

在本发明的另一个方面，在例如多发性硬化症的情况下，本文所述的共轭物和组合物可用于抑制免疫细胞从血流中迁移至中枢神经系统，或迁移至引起炎症诱发的破坏髓鞘质的区域。优选这些试剂抑制免疫细胞迁移的方式是抑制脱髓鞘作用，并可进一步促进髓鞘再生。对于先天性代谢疾病，这些试剂也可防止中枢神经系统的脱髓鞘和促进髓鞘再生，在这些疾病中，浸润的免疫细胞主要在CNS中影响髓鞘质的发展。当这些试剂给予由脱髓鞘疾病或病症诱发麻痹的受试者时，还优选减少麻痹。

包括在由本文所公开的组合物、共轭物和方法所治疗的炎性疾病，通常包括与脱髓鞘相关的疾病。在组织学上，髓鞘质异常是脱髓鞘或髓鞘形成障碍。脱髓鞘表示髓鞘质的破坏。髓鞘形成障碍是指由于少突胶质细胞功能障碍引起的髓鞘质的形成或维持缺陷。优选本文公开的组合物和方法被考虑用来治疗与脱髓鞘有关的疾病和病症，并辅助髓鞘再生。考虑治疗的其他疾病或病症包括脑膜炎、脑炎和脊髓损伤、以及通常由于炎性反应诱发脱髓鞘的病症。本文公开的共轭物、组合物和方法并不针对如下疾病和病症，其中，例如是遗传缺陷引起的不正常的髓鞘质形成，例如髓鞘形成障碍。

本文公开的组合物、共轭物和混合物(cocktail)可考虑用于治疗与脱髓鞘有关的病症和疾病。涉及脱髓鞘的疾病和病症包括但不限于，多发性硬化症、先天性代谢性疾病(例如，苯丙酮尿症、泰-萨二氏病(Tay-Sachs disease)、尼-匹二氏病(Niemann-Pick disease)、高歇氏病(Gaucher′s disease)、赫尔勒氏综合征(Hurler′s syndrome)、克腊比氏病(Krabbe′s disease)和其他的脑白质营养不良)、具有异常髓鞘形成的神经病变(例如，格林-巴利综合征(Guillain Barré)、慢性免疫性脱髓鞘性多神经病(CIDP)、多灶性CIDP、抗-MAG综合征、GALOP综合征、抗硫脂抗体综合征、抗-GM2抗体综合征、POEMS综合征、神经束膜炎、IgM抗-GD1b抗体综合征)、药物相关性脱髓鞘(例如，由氯喹、FK506、哌克昔林、普鲁卡因胺和齐美定(zimeldine)给药引起的)、其他遗传性脱髓鞘疾病(例如，糖类缺陷性糖蛋白、科凯恩综合征(Cockayne′s syndrome)、先天性髓鞘发育不良、先天性肌营养不良症、法勃氏病(Farber′s disease)、Marinesco-Sj

gren综合征、异染性脑白质营养不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacherdisease)、雷夫叙姆病(Refsum disease)、朊病毒相关疾病和Salla病)和其他的脱髓鞘病症(例如，脑膜炎、脑炎或脊髓损伤)或疾病。

有许多疾病模型可用来在体内研究这些疾病。例如，动物模型包括但不限于：

表III

疾病模型	种属
疾病模型	种属	EAE	小鼠、大鼠、豚鼠
髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导的EAE	大鼠	EAE	小鼠、大鼠、豚鼠
髓鞘质少突胶质细胞糖蛋白(MOG)诱导的EAE	大鼠	脱髓鞘的TNF-α转基因模型	小鼠

多发性硬化症

最常见的脱髓鞘疾病是多发性硬化症，但许多其他的代谢性和炎性疾病能引起缺陷性或异常的髓鞘形成。MS是一种慢性神经疾病，出现在早期成年期，大多数病例会进展成为明显的残疾。单在美国就有大约350,000个MS病例。除了创伤以外，MS是成人早期至中期神经残疾的最常见病因。

MS的原因仍然需要进一步确定。MS的特征是慢性炎症、脱髓鞘和神经胶质增生(瘢痕形成)。脱髓鞘可引起轴突传导的负性或正性作用。正性传导异常包括轴突传导延缓、可变的传导阻滞(在有高频但非低频冲动序列(trains of impulses)存在时出现)或完全传导阻滞。正性传导异常包括自发性或在机械应激后产生异位性冲动和在脱髓鞘的凸瘤(exon)之间产生异常的“干扰(cross-talk)”。

已经观察到T细胞对髓鞘质蛋白(髓鞘质碱性蛋白(MBP)或髓鞘质蛋白脂蛋白(PLP))的反应性介导了实验性变应性脑脊髓炎中的CNS炎症。也已经观察到患者CNS免疫球蛋白(Ig)的水平升高。在MS中观察到的一些组织损伤还有可能是由活化T细胞、巨噬细胞或星形胶质细胞的细胞因子产物介导的。

目前，诊断有MS的患者80％在疾病发作后可生存20年。MS的治疗包括：(1)针对疾病病程的变化进行治疗，包括治疗急性恶化和针对疾病的长期抑制；(2)治疗MS的症状；(3)预防和治疗医学并发症；和(4)处理继发的人际和社会问题，

MS的发作可能很剧烈或很缓和以至于不引起患者注意去看医生。最常见的症状包括一个或多个肢体虚弱、由于视神经炎引起的视力模糊、感觉障碍、复视和共济失调。疾病的病程可分成三大类：(1)复发性MS、(2)慢性进行性MS、和(3)不活动性MS。复发性MS的特征是神经功能障碍反复发作。MS的发作通常进行几天至几周，紧接着可能完全、部分或不复原。发作后从症状的高峰期复原通常在几周至几月内发生，尽管持续2年或2年以上的复原很少见。

慢性进行性MS可引起逐渐地进行性恶化，没有稳定期或缓解期。这种形式发生在有复发性MS既往史的患者中，尽管20％的患者回忆没有复发。在进行性过程中也可发生急性复发。

第三种形式是不活动性MS。不活动性MS的特征是不同程度的固定的神经缺陷。大多数不活动性MS患者都有较早的复发性MS既往史。

疾病的病程也取决于患者的年龄。例如，较佳的预后因素包括早发(儿童期除外)、复发和发作后5年很少的残疾。相反，不良预后与发作年龄较晚(即40岁的年龄或更老)和进行性病程有关。这些变量是相互依赖的，因为慢性进行性MS开始的年龄有比复发性MS晚的趋势。患者中慢性进行性MS的残疾通常是进行性截瘫或四肢瘫痪(瘫痪)引起的。在本发明的一个方面，优选当患者在缓解期时而不是在疾病的复发阶段进行治疗。

短期使用促肾上腺皮质激素或口服皮质类固醇(例如，口服的强的松或静脉给药的甲基强的松龙)是仅有的治疗MS急性恶化患者的特殊治疗措施。

对于MS较新的治疗方法包括用干扰素β-1b、干扰素β-1a和

(以前称为共聚物1)对患者进行治疗。这三种药物已经显示能显著地降低疾病的复发率。这些药物可经肌肉内或皮下自行给药。

但目前没有一种治疗方式能抑制脱髓鞘，能单独促进或使自发髓鞘再生发生或减少瘫痪。本发明的一个方面考虑了用本文公开的药剂单独或与其他标准的治疗方式联合治疗MS。

先天性代谢性疾病

先天性代谢性疾病包括苯丙酮尿症和其他的氨基酸尿症、泰-萨二氏病、尼-匹二氏病、高歇氏病、赫尔勒氏综合征、克腊比氏病和其他的脑白质营养不良，这些疾病可影响髓鞘的发育，下面将详细进行描述。

PKU是由苯丙氨酸羟化酶缺陷引起的一种遗传性代谢错误。该酶的缺失引起智力迟钝、器官损害、不正常的姿势，在孕妇发生PKU时，严重者可危及妊娠。已经发现了研究PKU的小鼠模型。被鉴定有PKU的婴儿优选要保持无或低苯丙氨酸饮食。本发明的一个方面将这种饮食与本文公开的共轭物和组合物结合在一起应用，以防止脱髓鞘和由于PKU而损害髓鞘再生细胞。

典型的泰-萨二氏病出现在大约6月龄的受试者中，最后将引起受试者在5岁前死亡。该疾病是由于缺少己糖胺酶A(hexoaminidase A，hex A)，该酶是在脑和神经细胞中降解某种脂肪物质所必需的。在缺少该酶时，这些物质积累，引起神经细胞破坏。另一种形式的hex A酶缺陷在生命中发生的较晚，被称为青少年、慢性和成人发作型hex A缺陷。症状类似于典型的泰-萨二氏病的特征。也有酶缺陷的成人发作形式。目前对于该疾病/缺陷没有治愈的病例或治疗方法，仅有检测胎儿疾病的子宫内预防性检测。因此，本文公开的共轭物和组合物可用于改善或阻止这种患者中神经细胞的破坏。

尼-匹二氏病分为三种类型：急性婴儿型、B型是一种较少见的慢性、非神经型，C型是该疾病的一种生物化学和遗传独特型。在正常的个体中，细胞胆固醇输送至溶酶体进行加工，之后被释放。从患尼-匹二氏病受试者采集的细胞显示在从溶酶体中释放胆固醇的过程是有缺陷的。这引起胆固醇在溶酶体内部的过量积聚，引起加工障碍。NPC1发现具有与其他蛋白中类似的已知的甾醇敏感区，该区被认为在调节胆固醇运输中具有重要地位。对于尼-匹二氏病的A型和C型还没有建立成功的治疗方法。对于C型，推荐患者进低胆固醇饮食。因此，本文公开的共轭物和组合物可用于改善或防止细胞的破坏。

高歇氏病是一种由于基因突变引起的遗传性疾病。通常，该基因是负责一种称为葡萄糖脑苷脂酶的酶，机体需要该酶来分解脂肪、葡萄糖脑苷脂。在患有高歇氏病的患者中，身体不能正常地产生该酶，脂肪不能被分解。象泰-萨二氏病一样，高歇氏病在来自东欧犹太人(德系犹太人)的后代中非常常见，尽管任何种属的个体均可能被累及。在德系犹太人群体中，高歇氏病是最常见的遗传病，发生率大约为1/450人。在公众当中，高歇氏病影响大约1/100,000人。

1991年，酶替代治疗成为高歇氏病的首种有效治疗方法。该治疗方法包括静脉给予葡萄糖脑苷脂酶的修饰形式。要理解的是，本文公开的组合物和共轭物可单独使用或更优选地与葡萄糖脑苷脂酶联合使用以治疗患病的受试者。

赫尔勒氏综合征也称为I型粘多糖增多症，是一种重叠性疾病。这些遗传疾病的共同点是在粘多糖细胞积聚在成纤维细胞中。这些疾病从遗传学上是可区分的。成纤维细胞和骨髓移植似乎没有什么帮助，因此需要可用于改善疾病严重程度和进展的共轭物和组合物。在此公开的共轭物和组合物可给予受试者以改善疾病的进展和/或严重性。

克腊比氏病(也称为球形细胞脑白质不良)是一种由半乳糖神经酰胺酶(或半乳糖脑苷脂酶)缺陷引起的常染色体隐性疾病，该溶酶体酶能分解代谢髓鞘质的主要脂质成分。在法国的发病率估计为1:150,000出生儿。该病引起中枢和外周神经系统的脱髓鞘。通常该病在出生的第一年内就可发生，并迅速进展，但也有报道少年、青年或成人发作型，其进展的速度变化更大。从酶化验(半乳糖神经酰胺酶缺陷)来建立诊断。有几种天然的动物模型(鼠、狗、猴)。克腊比氏病，象所有脑白质营养不良一样，尚没有治愈的病例或有效的治疗方法。本发明的一个实施方式是使用本文公开的组合物和共轭物来治疗或改善克腊比氏病和其他的脑白质营养不良。

脑白质营养不良是一组遗传上确定的进行性疾病，其累及脑、脊髓和外周神经。这些疾病包括脑白质肾上腺萎缩症(ALD)、肾上腺髓质神经病变(AMN)、Aicardi-Goutiers综合征、亚历山大病(Alexander′sdisease)、CACH(即，伴有中枢神经系统髓鞘质形成减少或白质消失疾病的婴幼儿共济失调)、CADASIL(即，伴皮质下梗死及脑白质病的常染色体显性脑动脉病)、Canavan病(海绵状退行性变)、脑腱性黄瘤病(CTX)、克腊比氏病(如上所述)、异染性脑白质营养不良(MLD)、新生儿脑白质肾上腺萎缩症、卵巢脑白质营养不良综合征(ovarioleukodystrophy syndrome)、佩-梅病(Pelizaeus-Merzbacherdisease)(X-连锁的痉挛性截瘫)、雷夫叙姆病(Refsum disease)、van derKnaap综合征(伴皮层下囊肿的空泡脑白质营养不良)和泽尔韦格氏综合征(Zellweger syndrome)。这些疾病没有有效的治疗方法，更不用说治愈的病例了。因此，需要治疗或改善这些疾病症状的方法，如通过使用本文公开的组合物和共轭物。

伴有异常髓鞘形成的神经病

有多种慢性免疫多发性神经病变可引起患者的脱髓鞘。这些疾病的发作年龄根据病情而变化。这些疾病有标准的治疗方法，且可与本文公开的组合物和共轭物联合使用。或者，本文公开的组合物和共轭物可单独使用。现有的标准治疗方法包括下列方法：

表IV

神经病变	临床特点	治疗方法
神经病变	临床特点	治疗方法	慢性免疫脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)	在1-80岁之间发作，特征是虚弱无力、感觉缺失和神经过度增生。	用强的松、环孢霉素A或氨甲喋呤、HIG、血浆置换进行T-细胞免疫抑制
多灶性CIDP	在28至58岁之间发作，特征是非对称性虚弱无力、感觉缺失，病程是缓慢进行性或复发-缓解型的。	用强的松、人免疫球蛋白(HIG)进行T细胞免疫抑制	慢性免疫脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)	在1-80岁之间发作，特征是虚弱无力、感觉缺失和神经过度增生。	用强的松、环孢霉素A或氨甲喋呤、HIG、血浆置换进行T-细胞免疫抑制

多灶性运动神经病(MMN)	发作的年龄范围从25至70岁，男性为女性的两倍。特点包括虚弱无力、肌肉萎缩、肌束颤动和抽筋，在1-30年期间是进行性的。	HIG用血浆置换、环磷酰胺、Rituxan进行B细胞免疫抑制
多灶性运动神经病(MMN)		HIG用血浆置换、环磷酰胺、Rituxan进行B细胞免疫抑制	伴有IgM与髓鞘质相关糖蛋白(MAG)结合的神经病	通常在50岁以上发作，特征是感觉缺失(100％)、虚弱无力、体重增加紊乱、震颤，都是缓慢进行性的。	B细胞免疫抑制血浆置换环磷酰胺Rituxanα-干扰素克拉屈滨(cladribine)或氟达拉滨(fludarabine)强的松
GALOP综合征(步态异常、自身抗体、较大的年龄、发作型、多发性神经病)	伴有多发性神经病的步态异常	HIG血浆置换环磷酰胺	伴有IgM与髓鞘质相关糖蛋白(MAG)结合的神经病	通常在50岁以上发作，特征是感觉缺失(100％)、虚弱无力、体重增加紊乱、震颤，都是缓慢进行性的。
GALOP综合征(步态异常、自身抗体、较大的年龄、发作型、多发性神经病)	伴有多发性神经病的步态异常	HIG血浆置换环磷酰胺	POEMS综合征(多发性神经病、脏器肿大、内分泌病、M-蛋白和皮肤改变)也称为Crow-Fukase综合征和Takatsuki病	在27至80岁之间发作，伴有虚弱无力、感觉缺失、腱反射减弱或缺失、皮肤疾病和其他表现。	骨硬化病变使用放疗。广泛(widespread)病变使用化疗(苯丙氨酸氮芥和强的松)。

药物和放射线诱发的脱髓鞘

某些药物和放射线可诱发受试者发生脱髓鞘作用。引起脱髓鞘的药物包括但不限于氯喹、FK506、哌克西林、普鲁卡因胺和齐美定。

放射线也可诱发脱髓鞘。由放射线引起的中枢神经系统(CNS)毒性被认为是由下列原因引起的：(1)对血管结构的损害，(2)去除了少突胶质细胞-2星形胶质细胞的祖细胞和成熟的少突胶质细胞，(3)去除了海马、小脑和皮质中的神经干细胞群，广泛地改变细胞因子的表达。大多数放射线损害是由在治疗某些癌症中进行的放疗所引起的。参见Belka等人的综述，2001 Br.J.Cancer 85：1233-9。但对于航天员，接触放射线可能也是病因之一(Hopewell，1994 Adv.Space Res.14：433-42)，在接触放射性物质的情况下也是如此。

对于已经接受了药物或偶尔接触或有意接触放射线的患者，通过给予本文公开的共轭物或组合物之一可能对于防止脱髓鞘或促进髓鞘再生是有益处的。

涉及脱髓鞘的疾病

其他引起脱髓鞘的遗传性综合征/疾病包括科凯恩综合征(Cockayne′s syndrome)、先天性髓鞘发育不良、法勃氏病(Farber′sdisease)、异染性脑白质不良、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Peliszaeus-Merzbacher disease)、雷夫叙姆病(Refsum)、朊病毒相关疾病和Salla病。

科凯恩综合征(CS)是一种很少见的遗传性疾病，此病症者对阳光很敏感，身材矮小，外表过早衰老。在典型形式的科凯恩综合征(I型)中，症状是进行性的，通常在1岁后出现明显的症状。科凯恩综合征的早期发作型或先天型(II型)在出生时就很明显。有意思的是，不象其他DNA修复疾病，科凯恩综合征与癌症没有关系。CS是一种多系统的疾病，该病引起躯体和脑深刻的生长障碍，以及进行性的恶病质，视网膜、耳蜗和神经变性，伴有脑白质营养不良和脱髓鞘性神经病，但不增加癌症发生率。在与UV(例如，阳光)接触后，科凯恩综合征患者不再发生转录耦合修复。现在已经鉴定出来在科凯恩综合征中有两种基因缺陷，CSA和CSB。CSA基因在第5号染色体上发现。两种基因都编码与转录结构组件和DNA修复蛋白相互作用的蛋白。

目前，还没有发现治愈病例或对该病症者的有效治疗方法。因此，本发明的一个方面是用本文公开的共轭物和组合物治疗该病。

先天性髓鞘发育不良有几种名称，包括先天性髓鞘形成障碍性神经病、先天性髓鞘发育不良性多发性神经病、先天性髓鞘发育不良(洋葱球样)多发性神经病、先天性髓鞘发育不良神经病、由髓鞘发育不良引起的先天性神经病、髓鞘发育不良神经病和CHN。在人类最常见的遗传性疾病中，遗传性外周神经病是一组复杂的、临床上和遗传学上不同类的疾病，可产生外周神经的进行性恶化。先天性髓鞘发育不良是该组疾病中之一。该组疾病包括易发生压迫性麻痹的遗传性神经病、夏科-马里-图思病(Charcot-Marie-Tooth disease)、代-索二氏综合征(Dejerine-Sottas syndrome)和先天性髓鞘发育不良性神经病。对于这些疾病还没有已知的治愈病例或有效的治疗方法。

法勃氏病有几种名称，包括：法勃脂肪肉芽肿病、神经酰胺酶缺陷、酸性神经酰胺酶缺陷、AC缺陷、N-月桂基鞘氨醇脱酰基酶缺陷、和N-酰基鞘氨醇氨基水解酶。如某些名称所揭示的那样，该疾病是由于酸性神经酰胺酶(也称为N-酰基鞘氨醇氨基水解酶，ASAH)缺陷引起的。酶缺乏引起未磺化的酸性粘多糖在神经元和神经胶质细胞中积聚。患有该疾病的患者通常在2岁之前死亡。

异染性脑白质营养不良(MLD)是由芳基硫酸脂酶A缺陷引起的遗传性疾病。它是影响髓鞘生长的称为脑白质营养不良的一组遗传性疾病中的一种。MLD有三种形式：晚期婴儿型、青少年型、和成人型。在最常见的晚期婴儿型中，在6个月至2年之间症状开始发作。婴儿通常在出生时是正常的，但最终丧失以前获得的能力。症状包括张力减退(肌紧张性低)、说话异常、心智能力丧失、失明、强直(即，不受控制的肌紧张)、痉挛、吞咽损害、瘫痪和痴呆。青少年型的症状从4至14岁之间开始出现，包括学校表现不佳、精神颓废、共济失调、癫痫发作(seizure)和痴呆。在成人型中，症状在16岁以后开始发生，症状可包括注意力不集中、抑郁、精神病学紊乱、共济失调、震颤和痴呆。癫痫发作可出现在成人型中，但不如其他型多见。在所有三种形式中，精神颓废通常是首先出现的体征。

佩利措伊斯-梅茨巴赫病(也称为围产期嗜苏丹性脑白质营养不良)是一种引起蛋白脂质蛋白异常的X连锁遗传疾病。该异常通常在1岁前引起婴儿死亡。对该疾病尚没有已知的治疗方法或治愈病例。

雷夫叙姆病(也称为植烷酸氧化酶缺陷、多神经炎型遗传性运动失调或IV型遗传性运动与感觉神经病，HMSN IV)是由于基因突变引起的，该基因编码植烷酰辅酶A羟化酶(PAHX或PHYH)。主要的临床表现是色素性视网膜炎、慢性多发性神经病和小脑体征。植烷酸，一种罕见的支链脂肪酸(3，7，11，15-四甲基-十六烷酸)，积累在该种疾病患者的组织液和体液中，由于缺乏PAHX不能被代谢。每月进行一次或两次血浆除去法能有效地从体内将该酸去除，并允许放宽对限制植烷酸摄取的饮食限制。

朊病毒相关疾病包括Gerstmann-Straussler病(GSD)、克洛伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease，CJD)、家族性致命性失眠，朊病毒蛋白异常亚型在这些疾病以及库鲁病和绵羊瘙痒病(在绵羊中发现的疾病)可作为传染原。术语朊病毒来自“蛋白传染原”(Prusiner，Science216：136-44，1982)。朊病毒相关蛋白(PRP)的蛋白水解裂解生成淀粉样肽(amyloidogenic peptide)，该肽聚合成为不溶解的纤维。

Salla病和其他类型的唾液酸尿症(sialurias)是涉及唾液酸贮存问题的疾病。它们是常染色体隐性的神经变性疾病，可以以严重的婴儿型(即，ISSD)或缓慢进行性的成人型(在芬兰较常见)存在(即，Salla病)。主要的症状是张力减退、小脑性共济失调和智力迟钝。这些病症和疾病也要考虑姑息性或改善性治疗方法。

引起脱髓鞘的其他病症包括传染后脑炎(也称为急性播散性脑脊髓炎，ADEM)、脑膜炎和对脊髓的损伤。本文公开的组合物和共轭物也考虑用于治疗这些其他的脱髓鞘疾患。

下面提供了合成和生物学实施例来说明本发明，但这些实施例并不能被解释为以任何方式限制本发明的范围。除非另外说明，所有温度均是摄氏度。

实施例

在下面的实施例中，下面的缩写具有下面的含义。如果缩写没有定义，则它具有普遍接受的含义。

ACN ＝乙腈

bs ＝宽单峰

d ＝双重峰

dd ＝双组双重峰

Et3N ＝三乙胺

g ＝克

h和hr ＝小时

HPLC ＝高效(或压)液相色谱

kg ＝千克

kDa ＝千道尔顿

L ＝升

m ＝多重峰

M ＝摩尔

mg ＝毫克

min ＝分钟

mL ＝毫升

mm ＝毫米

mM ＝毫摩尔

mmol ＝毫摩尔

s ＝单峰

sat. ＝饱和的

t ＝三重峰

TFA ＝三氟乙酸

TLC或tic ＝薄层色谱

Ts ＝甲苯磺酰基

μL ＝微升

μg ＝微克

μm ＝微米

一般方法：使用Gemini 2000或Bruker Avance 300光谱仪获得质子(¹H)和碳(¹³C)核磁共振谱(NMR)。通过在3.6ppm处大的、宽单峰可检测到聚乙二醇(PEG)的存在。该信号的积分可根据PEG部分的大小而变化。共轭VLA-4拮抗剂的存在也可在共轭物的¹H NMR谱上检测到。在二氧化硅60F₂₅₄(EMD15341-1)预包被板或预包被的MKC18F二氧化硅60(Whatman 4803-110)上进行薄层色谱。在Agilent质谱仪(LC/MSD VL)上以阳离子单四级模式(single quad mode)进行质谱。

PEG产物和PEG共轭物的HPLC方法：

使用带有Varian UV检测器的Varian Prep Star(SD-1型)组件设定在210nm进行制备性反相HPLC。方法A：在Vydac C18，300孔径柱(250mm x 21.2mm)上使用反相HPLC纯化PEG产物和PEG共轭物的样品，一般使用35-50％ ACN+0.1％ TFA的梯度，在100min内以20mL/min的速度进行。方法B：在Vydac C18，300孔径柱(250mm x 50mm)上使用反相HPLC纯化PEG产物和PEG共轭物的样品，一般使用35-50％ ACN+0.1％ TFA的梯度，在100min内以60mL/min的速度进行。方法C：经反相分析性HPLC确认PEG产物和共轭物的纯度，使用装有Waters Symmetry 300孔径，3.5μ C18柱(150mm x4.6mm)的Agilent Series 1100四元系统，使用40-50％ ACN w/0.1％TFA的梯度，以1.5mL/min的流速进行，该系统与设定在210nm的Agilent 1100可变波长检测器和Sedex 75蒸发光散射检测器(40℃，增益＝5)连接。

PEG试剂：通过NOF Corporation(Yebisu Garden Place Tower，20-3Ebisu 4-chome，Shibuya-ku，Tokyo 150-6019)或Nektar Therapeutics(150Industrial Road，San C arlos，CA 94070)获得如下的PEG起始物质：40kDa 4-臂PEG醇(NOF Cat.Sunbright PTE-40000)；40kDa 3-臂PEG醇(NOF Cat.Sunbright GL-400)。

实施例1

氢氧化钠(10g，0.25m)溶解在水中(300ml)。向此溶液中加入4-硝基苯丙氨酸(50.3g，0.22m)，搅拌至完全溶解。向得到的溶液中加入碳酸钠(28.8g，0.26m)，在冰浴中将搅拌的悬液冷却至+8℃。逐滴加入氯甲酸苄基酯(44.7g，0.26m)，剧烈搅拌，将内部温度保持在+6℃至+9℃的范围内。混合物在+6℃另外搅拌1hr，并转移至分液漏斗，用醚冲洗(2 x 150ml)。水相置于大的锥形瓶(2L)中，小心地用稀释的HCl水溶液酸化至pH＝2，用乙酸乙酯萃取(4 x 500ml)。合并的萃取物用水冲洗，用MgSO₄干燥。过滤溶液，蒸发滤液，残渣溶解在乙酸乙酯(150ml)中，并用己烷稀释(500ml)。滤出晶体物质，用冷的溶剂漂洗，空气中干燥得到Cbz-4-硝基苯丙氨酸，75g(99.5％产率)。¹H-NMR，DMSO-d6，(δ)：12.85(bs，1H)，8.12(d，2H，J＝9Hz)，7.52(d，2H，J＝9Hz)，7.30(m，5H)，4.95(s，2H)，4.28(m，1H)，3.32(bs，1H)，3.10(m，2H).¹³C-NMR(δ)：173.1，156.3，146.6，137.3，130.8，128.5，128.0，127.8，123.5，65.6，55.1，36.6.MS(m/z)：367.1[M+23].

Cbz-4-硝基苯丙氨酸(75g，0.22m)溶解在二噁烷(300ml)中。得到的搅拌溶液在干冰浴中冷却至-20℃(内部)。加入液化的异丁烯(大约290ml)，然后分别间隔30min加入三等分的浓硫酸(35ml)。酸的加入是一个很强烈的放热过程，伴随着主要的聚合作用。在此阶段有效的机械搅拌是很重要的。得到的混合物搅拌20hr，然后升温至室温，小心地倒入进饱和的碳酸钠水溶液(2L)中，并用乙酸乙酯(600ml)稀释。分离有机层，用乙酸乙酯萃取水层(2 x 200ml)。合并的萃取物用水冲洗，用硫酸钠干燥。过滤溶液，蒸发至干燥。残渣投入进乙酸乙酯/己烷混合物(500ml；1:1)中，通过硅胶填料(ca.2 x 2in)进行过滤。另外用一定量的相同溶剂(总计2L)漂洗二氧化硅，蒸发滤液得到粘稠油状的完全保护的4-硝基苯丙氨酸，73g(两步后为83％)。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：8.12(d，2H，J＝8.4Hz)，7.36(m，7H)，5.35(m，1H)，5.10(m，2H)，4.57(m，1H)，3.31(m，2H)，1.43(s，9H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：169.7，155.3，146.9，143.9，136.0，130.2，128.4，128.2，128.0，123.3，82.9，66.9，54.7，38.2，31.4，27.8，13.9.MS(m/z)：423.1[M+23].

保护的4-硝基苯丙氨酸(73g，0.18m)溶解在乙醇(500ml)中，加入氧化铂催化剂(1.5g)。得到的溶液在氢气(50-60psi)中在室温下剧烈搅拌直至氢吸附停止(3hr)。将催化剂过滤出，滤液蒸发至干燥，残渣投入进乙酸乙酯(200ml)中，通过硅胶填料(2 x 2in)过滤，使用乙酸乙酯-己烷混合物(3:2，2L)漂洗二氧化硅。滤液浓缩至大约200ml，加入己烷(500ml)。过滤出结晶产物，用冷溶剂漂洗，并风干。产量-56g，84％。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：7.30(bs，5H)，6.92(d，2H，J＝8.1Hz)，6.58(d，2H，J＝8.1Hz)，5.21(m，1H)，5.10(d，2H，J＝2.1Hz)，4.46(m，1H)，3.59(bs，2H)，2.97(s，2H，J＝5.4Hz)，1.42(s，9H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：170.6，145.1，136.3，130.2，128.3，127.9，125.6，115.0，81.9，66.6，55.2，37.4，27.8MS(m/z)：393.1[M+23].

实施例2

实施例1 产物，4-氨基苯丙氨酸(20g，0.054m)溶解在乙醇(200ml)中，用Hunig碱(21g，0.162m，3当量)和2-氯-3-硝基吡啶(10.3g，0.65m，1.2当量)处理。得到的溶液在氮气气氛中搅拌，并加热回流24hr。LC分析表明有小量未反应的胺存在。另外加入小量的氯硝基吡啶(1.1g，0.13当量)并继续回流24hr。冷却反应混合物，并蒸发至干燥。残渣溶解在乙酸乙酯(600ml)中，获得的溶液用水(1 x 200ml)、稀释的柠檬酸水溶液(0.2N，2 x 200ml)、盐水(1 x 200ml)冲洗，用硫酸钠干燥。滤出固体，蒸发滤液得到37g深红色油状、含有预期产物，该产物中含有过量的氯硝基吡啶。不纯的产物通过快速色谱(Biotage 75L系统)纯化，用乙酸乙酯:己烷(3:17)混合物洗脱。合并含有纯产物的馏分，蒸发得到深红色，粘稠油状的产物，26g(99％)。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：10.10(s，1H)，8.49(m，2H)，7.57(d，2H，J＝9Hz)，7.35(bs，5H)，7.19(d，2H，J＝9Hz)，6.84(m，1H)，5.30(m，1H)，5.13(d，2H，J＝3Hz)，4.57(m，1H)，3.11(m，2H)，1.45(s，9H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：170.4，155.5，155.1，150.0，136.7，136.3，135.4，132.4，129.9，128.5，128.3，128.0，127.9，122.2，113.7，82.2，66.7，55.1，37.7，27.8，20.9.MS(m/z)：493.1[M+1]，515.1[M+23].

红色的硝基化合物(26g，0.054m)溶解在THF(350ml)中，加入氧化铂催化剂(1.35g)。得到的混合物在氢气气氛(50-60psi)下剧烈搅拌直至氢吸附停止(2hr)。滤出催化剂，滤液蒸发至干燥。残渣溶解在乙酸乙酯(100ml)中，用己烷(50ml)稀释直至开始结晶。混合物进一步用乙酸乙酯/己烷(1:1)混合物(300ml)稀释，在冰箱中静置3hr。滤出结晶固体，用冷的溶剂漂洗，风干得到产物，23g，94％。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：7.81(dd，1H，J1＝1.5Hz，J2＝4.8Hz)，7.33(bs，5H)，7.17(d，2H，J＝8.4Hz)，7.03(d，2H，J＝8.4Hz)，6.96(dd，1H，J1＝1.5Hz，J2＝7.5Hz)，6.75(dd，1H，J1＝5.0Hz，J2＝7.7Hz)，6.22(s，1H)，5.31(m，1H)，5.09(bs，2H)，4.50(m，1H)，3.41(bs，2H)，3.02(m，2H)，1.43(s，9H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：170.6，155.6，145.5，140.21，138.8，136.3，130.8，129.9，128.5，128.3，127.9，123.4，118.2，117.0，82.0，66.6，55.2，37.4，27.9.MS(m/z)：407.1[M-56]，463.1[M+1]，485.1[M+23].

氨基吡啶(19g，0.041m)悬浮在二氯甲烷(200ml)中并加入CDI(12g，0.074m，1.8当量)。得到的混合物在室温下搅拌20hr。反应混合物用饱和的碳酸氢盐水溶液(2 x 100ml)、盐水(1 x 100ml)冲洗，用硫酸钠干燥。滤出固体，滤液蒸发至干燥。残渣溶解在乙酸乙酯(热，300ml)中，并进行结晶。滤出结晶产物，用冷的乙酸乙酯漂洗，风干得到19.9g，81％的咪唑酮。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：10.63(s，1H)，8.06(d，1H，J＝3Hz)，7.66(d，2H，J＝9Hz)，7.32(m，8H)，7.05(m，1H)，5.36(m，1H)，5.13(s，2H)，4.59(m，1H)，3.17(m，2H)，1.45(s，9H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：170.4，155.6，154.3，143.8，141.0，136.2，135.8，131.8，130.2，128.3，128.0，125.9，122.2，118.3，116.0，82.4，66.8，55.0，37.7，27.8.MS(m/z)：433.1[M-56]，489.2[M+1]，511.2[M+23].

实施例3

吡啶-3-磺酸(125g，0.78m)置于1L装有机械搅拌器、回流冷凝器、温度计和氮气进气口的3颈烧瓶中。下一步，加入五氯化磷(250g，1.19m，1.5当量)，然后立即加入三氯氧磷(330ml，3.8m，4.5当量)。开始烧瓶的内容物在室温下搅拌30min，然后将其缓慢地进行温和回流(内部温度大约为110℃)1小时，在此温度保持大约3.5hr，然后在后面的12hr冷却至室温。在此期间观察到有气体放出。在减压条件(12mmHg/40℃)下脱除挥发物，黄色的半固体残渣用DCM(1L)稀释。浆料缓慢地倒入搅拌的冰冷却的饱和碳酸氢盐水溶液中，保持pH＝7。观察到有气体放出。分离有机层，水层用DCM反萃取。合并的萃取物用冷的饱和碳酸氢盐水溶液、盐水冲洗，用硫酸镁干燥。滤出固体，蒸发滤液，得到淡黄色油状液体，吡啶-3-磺酰氯，123g(93％纯度；理论值88％)。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：9.26(d，1H)，8.98(dd，1H)，8.34(m，1H)，7.62(m，1H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：155.3，147.4，140.9，134.6，124.2.

MS(m/z)：178.0[M+1].

L-青霉胺(150g，1.0m)溶解在DI水(1500ml)中并搅拌，在冰浴中冷却至+8℃，用福尔马林(150ml，37％水溶液)处理。反应混合物在+8℃搅拌2hr，然后去掉冷却浴，继续搅拌12hr。在减压条件(14mmHg/50°)下将清亮的溶液浓缩得到白色的残渣。重新悬浮固体，然后溶解在热的MeOH(2500ml)中，并在室温下静置12hr。滤出白色的蓬松沉淀物，用冷的甲醇漂洗。浓缩滤液，再次进行结晶。收集的沉淀物与首次收获的产物合并，在真空箱中在55℃，45mmHg下干燥24hr。(R)-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸的产量为138g(>99％纯度；理论值86％)。¹H-NMR，DMSO-d6，(δ)：4.25(d，1H)，4.05(d，1H)，3.33(s，1H)，1.57(s，3H)，1.19(s，3H).¹³C-NMR，DMSO-d6，(δ)：170.8，74.4，57.6，51.8，28.9，27.9.MS(m/z)：162.3[M+1].

在装有机械搅拌器和温度计的4L反应器中，用磷酸二氢钾(43g，0.31m)和磷酸氢二钾(188.7g，1.08m)在DI水(2L)中制备缓冲溶液。加入(R)-5，5-二甲基噻唑烷-4-羧酸(107g，0.675m)，搅拌至完全溶解。在冰浴中溶液冷却至+8℃。单独制备的吡啶-3-磺酰氯(124g，0.695m)/DCM(125ml)溶液逐滴加入至反应器中，剧烈搅拌1hr。监测反应混合物的pH，4hr后发现pH＝5，加入固体碳酸氢盐调整至pH＝6。混合物经过18hr升温至室温。用稀释的硫酸水溶液将pH调整至2，搅拌1hr，将沉淀的黄色固体滤出，用水漂洗至中性。固体滤饼转移至2L锥形瓶中，悬浮在DCM(500ml)中，偶尔回荡5min，再次过滤。滤饼用DCM冲洗并风干。标题化合物(R)-5，5-二甲基-3-(吡啶-3-基磺酰基)噻唑烷-4-羧酸的产量为148.9g(98％纯度；理论值73％)。¹H-NMR，DMSO-d6，(δ)：9.05(d，1H)，8.89(m，1H)，8.32(m，1H)，7.69(m，1H)，4.68(q，2H)，4.14(s，1H)，1.35(s，3H)，1.29(s，3H).¹³C-NMR，DMSO-d6，(δ)：170.0，154.3，147.9，135.8，134.1，124.8，72.6，54.3，50.2，29.4，25.0.MS(m/z)：303.2[M+1].

实施例4

实施例2 产物(52g，0.106m)在MeOH(450ml)中混合成浆，加入氢化催化剂(8.7g，5％Pd/C，Degussa)，混合物在氢气(60psi)中搅拌直至不再进一步吸附(大约2hr)。加入THF(150ml)溶解沉淀的固体，溶液通过Celite填料过滤，使用DCM清洗滤器。滤液蒸发至干燥，再次溶解在DCM(300ml)中，并再次汽提(stripped)。该操作重复2次。泡沫状的固体在高度真空中保持3hr。标题化合物的产量为38.3g(理论值101％)。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：8.08(m，1H)，7.56(AB q，4H)，7.37(m，1H)，7.06(m，1H)，3.68(m，1H)，2.03(m，2H)，1.49(s，9H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：173.8，154.6，143.9，141.0，137.4，131.5，130.2，126.1，122.3，118.0，116.1，81.4，56.0，40.6，27.9.MS(m/z)：299.3[M-56]，355.4[M+1]，377.4[M+23].

实施例5

实施例4 产物(38.3g，假设0.106m)溶解在DCM(500ml)中，并依次用下列的化合物处理：N-甲基吗啉(27g，30ml，0.266m；2.5当量)、HOBt(17.3g，0.128m；1.2当量)、和实施例3的产物(33.8g，0.112m；1.06当量)。得到的不均匀溶液在冰浴中冷却至+4℃，一次性加入EDC(22.5g，0.117m；1.1当量)进行处理。搅拌反应混合物，使其在其后的4hr内升温至室温，然后继续保持18hr。将溶剂汽提，残渣溶解在乙酸乙酯(1.2L)中，用饱和的碳酸氢盐水溶液(2 x 250ml)、水(250ml)、盐水(300ml)冲洗，用硫酸镁干燥。溶液过滤，蒸发至干燥，得到淡橙黄色、粘稠油状产物，76g(>>100％)。粗产物通过快速色谱在硅胶(Biotage 75L，在乙酸乙酯/甲醇(3％)混合物中)上进行纯化。含有纯产物的馏分合并，蒸发得到54g标题化合物(产率83％)。¹H-NMR，CDCl₃，(δ)：10.37(s，1H)，9.11(s，1H)，8.87(m，1H)，8.19(m，1H)，8.05(m，1H)，7.56(AB q，4H)，7.52(m，1H)，7.36(m，1H)，7.06(m，2H)，4.83(m，1H)，4.58(AB a，2H)，3.96(s，1H)，3.19(m，2H)，1.49(s，9H)，1.22(s，3H)，1.18(s，3H).¹³C-NMR，CDCl₃，(δ)：169.7，167.6，153.9，148.4，143.8，140.9，135.8，135.6，132.9，131.9，130.2，125.9，123.8，122.1，118.0，115.9，82.8，73.6，60.3，54.8，53.7，50.6，37.8，29.1，27.8，23.9，14.1.MS(m/z)：583.3[M-56]，639.4[M+1]，661.3[M+23].

实施例6

向冰冷却的三氟丁酸乙酯(15g，89mmol)和甲酸乙酯(36mL，444mmol)的THF(200mL)溶液中，在N₂中在25分钟内加入1MKOtBu/THF(107mmol，107mL)。15分钟后，去除冰浴，反应混合物在室温下搅拌1小时。然后另外加入甲酸乙酯(18mL，222mmol)，反应混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物，残渣在冷乙醚(100mL)和冷水(300mL)之间萃取。水相的pH用浓HCl调整至2。产物用二氯甲烷(1 x 100mL，45 x 75mL)萃取，合并的有机萃取物用盐水(1 x 100mL)冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩得到稠厚的油状标题化合物，静置固化，10.2g(58.5％)。MS(m/z)＝198(M+H)⁺。

实施例7

向实施例6产物(10g，51mmol)和二乙基胍硫酸盐(8.3g，25.2mmol)的EtOH(60mL)溶液中，在N₂中在10分钟内加入NaOEt的21％EtOH(20.7mL，55.5mmol)溶液。然后反应混合物加热回流5小时。将不均匀的溶液冷却，倒入冷水(100mL)中得到均匀的溶液。溶液的pH用浓HCl和1N HCl调整至大约3.5。从溶液中沉淀的固体通过过滤收集。淡褐色固体用水冲洗，风干，得到2.9g，(23％)标题化合物。MS(m/z)＝250(M+H)⁺.¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ 7.65(br s，1H)，3.55(q，4H)，3.30(q，2H)，1.25(t，6H).

实施例8

实施例7的产物(2.0g，8.02mmol)、DIEA(1.5mL，8.83mmol)、DMAP(.98g，0.8mmol)和二氯甲烷(30mL)投入烧瓶中。混合物冷却至0℃，加入三氟乙酸酐(1.5mL，8.83mmol)。反应变成均相，在0℃搅拌3小时。混合物用饱和的NaHCO₃淬灭，用二氯甲烷萃取。有机相用0.2N柠檬酸冲洗，经Na₂SO₄干燥，过滤，真空浓缩得到2.87g(94％)褐色固体的标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 8.28(s，1H)，3.65-3.52(m，4H)，3.29-3.19(q，2H)，1.22-1.17(t，6H).

实施例9

实施例8的产物(1.3g，3.5mmol)、H-Phe(p-NO₂)OtBu(1.1g，4.2mmol)和DIEA(0.9mL，5.3mmol)的CH₃CN(14mL)溶液在N₂中加热回流过夜。第二天另外加入H-Phe(p-NO₂)OtBu(0.8g，3mmol)，继续回流3天。然后反应混合物冷却和浓缩。残渣投入至EtOAc(50mL)中，有机部分用0.5N KHSO₄(3 x 50mL)、水(1 x 50mL)、盐水(1 x 10mL)冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩为褐色的胶。粗物质通过快速色谱(5:1己烷/EtOAc)纯化得到640mg(38％)金色胶状的标题化合物。TLC:3:1己烷/EtOAc，R_f＝0.30，MS(m/z)＝498(M+H)⁺，¹H NMR，(300MHz，CDCl₃)δ 8.19(d，2H)，7.80(s，1H)，7.25(d，2H)，5.19(br d，1H)，4.95(q，1H)，3.70-3.50(m，4H)，3.45-3.25(m，2H)，3.10(q，2H)，1.40(s，9H)，1.05(t，6H).

实施例10

实施例9的产物(635mg，1.27mmol)溶解在纯EtOH(5mL)中，向其中加入35mg Pd/C，10wt％。反应氢化(45psi H₂)2.5小时，期间加入50mg Pd/C，10wt％，反应混合物再次氢化(45psi H₂)过夜。反应混合物通过硅藻土垫过滤，浓缩滤液得到452mg(76％)标题化合物。MS(m/z)＝468(M+H)⁺，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 7.75(s，1H)，6.90(d，2H)，6.60(d，2H)，5.05(br d，1H)，4.80(q，1H)，3.70-3.45(m，6H)，3.10-2.90(m，4H)，1.40(s，9H)，1.15(t，6H).

实施例11

实施例10产物(598mg，1.28mmol)、2-氯-3-硝基吡啶(243mg，1.53mmol)和DIEA(0.67mL，3.83mmol)的EtOH(5mL)溶液在N₂中加热回流。第二天，反应冷却，另外加入2-氯-3-硝基吡啶(40mg，0.25mmol)和DIEA(0.11mL，0.60mmol)，反应加热回流1天。然后浓缩反应混合物，残渣投入至EtOAc(20mL)中。有机相用水(2 x 20mL)冲洗。合并的洗涤水溶液用EtOAc(2 x 10mL)反萃取。合并的有机萃取物用0.2N柠檬酸(3 x 20mL)、水(1 x 10mL)、饱和的NaHCO₃(3 x 20mL)、盐水(1 x 10mL)冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤，汽提为橙黄色的胶。粗产物通过快速色谱纯化，用4:1己烷/EtOAc(R_f＝0.14)洗脱得到610mg(81％)红色油状的标题化合物。MS(m/z)＝590(M+H)⁺，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 10.10(s，1H)，8.55(d，1H)，8.50(m，1H)，7.79(s，1H)，7.75(d，2H)，7.15(d，2H)，6.80(q，1H)，5.10(br d，1H)，4.90(m，1H)，3.70-3.45(m，4H)，3.25(m，2H)，3.10(q，2H)，1.40(s，9H)，1.10(t，6H).

实施例12

向实施例11产物(610mg，1.03mmol)/纯EtOH(5mL)溶液中加入60mg Pd/C，10wt％。混合物氢化(45psi H₂)过夜。第二天，反应混合物通过硅藻土过滤，滤液浓缩得到500mg(87％)标题化合物。MS(m/z)＝560(M+H)⁺，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 7.85(d，2H)，7.80(s，1H)，7.20(d，2H)，7.05(d，2H)，7.00(d，1H)，7.75(m，1H)，6.20(br s 1 H)，5.15(br s，1H)，4.85(m，1H)，3.75-3.45(m，4H)，3.40(br s，2H)，3.15(m，2H)，3.05(q，2H)，1.40(s，9H)，1.15(t，6H).

实施例13

实施例12产物(141mg，0.250mmol)和CDI(62mg，0.378mmol)的CH₂Cl₂(3mL)溶液搅拌过夜。第二天，另外加入CDI(30mg，0.185mmol)，反应另外搅拌1天。然后将反应混合物浓缩，投入至EtOAc(10mL)中，有机部分用0.2N柠檬酸(3 x 5mL)、水(1 x 5mL)、饱和NaHCO₃(3 x 5mL)、盐水(1 x 5mL)冲洗，干燥(MgSO₄)，过滤，浓缩得到69mg(47％)泡沫状的标题化合物，该化合物不需进一步纯化就可使用。MS(m/z)＝586(M+H)⁺，¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 8.20(br s，1H)，8.05(d，1H)，7.80(s，1H)，7.65(d，2H)，7.90(m，3H)，7.05(m，1H)，5.15(br d，1H)，4.95(m，1H)，3.70-3.45(m，4H)，3.25(app d，2H)，3.10(q，2H)，1.40(s，9H)，1.15(t，6H).

实施例14

向4，6-二氯-5-氨基嘧啶(5.0g，30.7mmol)/DMSO(30mL)溶液中加入Na₂S·9H₂O(7.4g，30.8mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。然后向混合物中加入水(40mL)，溶液减压蒸发至大约6mL。向此溶液中加入浓HCl(0.5mL)和水以沉淀产物。过滤溶液，用水冲洗橙黄色固体，干燥得到4.3g(86％)标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 5.84(2H，s)，7.79(1H，s)，14.37(1H，br s)；MS(m/z)：MH⁺＝162.

实施例15

向溶解在浓NH₄OH(4mL)中的实施例14产物(4.3g，26mmol)中加入EtOH(40mL)。向此溶液中分批加入雷内镍(过量)。反应在室温下搅拌过夜，然后在80℃加热2hr。混合物通过硅藻土过滤，浓缩滤液。粗产物通过快速色谱在二氧化硅上使用EtOAc/己烷进行纯化，得到1.6g(47％)的黄色固体标题化合物。¹H NMR(300MHz，DMSO-d₆)δ 5.90(2H，s)，8.20(2H，s)；MS(m/z)MH⁺＝130.

实施例16

向MeOH(20mL)和HOAc(0.5mL)中的实施例15产物(0.51g，3.9mmol)中加入CH₃CHO(0.52mL，9.2mmol)。然后一次性加入NaBH₃CN(590mg，9.2mmol)。反应在室温下搅拌过夜，另外加入HOAc、CH₃CHO和NaBH₃CN。反应搅拌过夜，浓缩，残渣投入进EtOAc和饱和NaHCO₃中。分离的水层用EtOAc反萃取。合并的有机层干燥，浓缩成残渣。残渣溶解在MeOH中，如上所述用HOAc、CH₃CHO和NaBH₃CN处理。在上述处理步骤之后，粗产物通过快速色谱在二氧化硅上使用EtOAc/己烷进行纯化，得到0.35g(57％)黄色油状的标题化合物。¹HNMR(300MHz，CDCl₃)δ 1.35(3H，q，J＝12Hz)，3.29(2H，m)，4.21(1H，bs)，8.04(1H，s)，8.36(1H，s)；MS(m/z)：MH⁺＝158.

实施例17

向溶解在DMF(1mL)中的实施例16产物(70mg，0.45mmol)中加入TEA(93μL)和异烟酰氯(0.12g，0.67mmol)。反应混合物在室温下搅拌2天，然后在EtOAc和饱和的NaHCO₃之间萃取。分离的水层用EtOAc反萃取。合并的有机层干燥，浓缩得到67mg(57％)的标题化合物，该化合物不需进一步纯化就可使用。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ1.26(3H)，3.65-3.69(1H)，4.21(1H)，7.17(2H)，8.43(1H)，8.54(2H)，8.86(1H)注意：¹H NMR显示，所有峰都很宽大证明有旋转异构体存在；MS(m/z)：MH⁺＝263。

实施例18

向含有实施例17产物(0.11g，0.42mmol)和实施例8产物(0.135g，0.38mmol)的IPA(2.5ml)溶液中加入DIEA(0.35ml，1.9mmol)。反应混合物在密封管中在130℃下搅拌2天。粗混合物浓缩，油通过快速柱色谱使用0-10％ MeOH/CH₂Cl₂溶剂梯度进行纯化，得到油状的标题化合物。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 1.16(1.2H，m)，1.26-1.31(1.8H，m)，1.50-1.53(9H，d，J＝9Hz)，3.0(1H，m)，3.2(0.8H，m)，3.36(1.2H，m)，4.12-4.18(1.2H，m)，4.96-5.10(.8H，m)，5.80-5.95(1H，m)，6.93-6.96(1H，m)，7.07(1H，m)，7.31-7.45(5H，m)，7.66-7.75(3H，m)，8.06(1H，m)，8.44-8.51(2H，m)；HPLC/MS：1.29min的单峰，MH⁺＝581.

实施例19

在0℃下在N₂中向2，4-二氯-5-硝基嘧啶(2.0g，10.3mmol)/MeOH(7mL)中逐滴加入NaOMe(0.5M，于MeOH中，25mL)。添加结束后，反应混合物在0℃搅拌15min。然后加入二乙胺(5mL)，混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物浓缩，残渣在EtOAc和H₂O之间萃取。干燥有机层，并浓缩成残渣，通过快速色谱在二氧化硅上使用EtOAc/己烷纯化，得到米白色固体的标题化合物(1.1g，4.9mmol，47％产率)。¹HNMR(300MHz，CDCl3)δ 1.26(6H，t，J＝6.6Hz)，3.70(4H，m)，4.08(3H，s)，9.01(1H，s)；HPLC/MS：MH⁺＝227.

实施例20

实施例19产物(1.1g，4.9mmol)于MeOH/EtOAc(1:1，20mL)中用Pd/C(5％ degussa，0.5g)和H₂(50psi)在Parr振荡器中还原过夜。过滤反应混合物，滤液减压浓缩得到固体的标题化合物(0.85g，4.3mmol，88.5％产率)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 1.18(6H，t，J＝6.9Hz)，3.03(2H，br)，3.57(6H，t，J＝6.9Hz)，3.96(3H，s)，7.71(1H，s)；HPLC/MS：MH⁺＝197.

实施例21

向含有实施例20产物(0.85g，4.3mmol)的CH₂Cl₂(15mL)和TEA(1.4mL，10mmol)中加入异烟酰氯盐酸盐(1.13g，6.3mmol)。15min后，TLC显示没有初始原料。混合物在EtOAc和饱和的NaHCO₃之间进行萃取。水层用EtOAc冲洗两次。合并的有机层用饱和NaHCO₃和盐水冲洗。在MgSO₄上干燥并过滤。滤液浓缩得到褐色固体的标题化合物(1.3g，4.3mmol，100％产率)。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 1.20(6H，t，J＝6.9Hz)，3.60(4H，q，J＝6.9Hz)，3.96(3H，s)，7.72(2H，d，J＝6.0Hz)，7.75(1H，bs)，8.80(2H，d，J＝6.0Hz)，8.89(1H，s)；HPLC/MS：MH⁺＝302.

实施例22

向实施例21产物(100mg，0.33mmol)/THF(1mL)中加入KOtBu(1M，在THF中，0.5mL)，然后缓慢地加入EtI(40μL，0.5mmol)。反应混合物在室温下搅拌过夜。TLC显示初始原料消失。混合物在EtOAc和H₂O之间进行萃取。水层用EtOAc冲洗。合并的有机层用饱和NaHCO₃和盐水冲洗。干燥浓缩得到标题化合物(90mg，0.27mmol，83％)，该化合物不需进一步纯化就可使用。¹H NMR(300MHz，CDCl₃)δ 1.10(9H，m)，3.47(5H，m)，3.92(1H，m)，7.14(2H，d，J＝6.0Hz)，7.78(1H，bs)，8.44(2H，d，J＝6.0Hz)；HPLC/MS：MH⁺＝330.

实施例23

向实施例22产物(200mg，0.61mmol)/DMF(4mL)中加入EtSNa(66mg，0.79mmol)，反应混合物在100℃加热1hr。LC/MS显示仍有初始原料存在。加入另一部分NaSEt(66mg，0.79mmol)，反应另外加热2hr。LC/MS显示仅有产物。减压去除DMF，加入水(10mL)，然后加入浓HCl(0.132mL)。蒸发溶剂得到残渣。该残渣溶解在EtOH中，并过滤。浓缩滤液得到标题化合物(190mg，100％)，该化合物不需进一步纯化就可使用。¹H NMR(300MHz，CD₃OD)δ 1.24(9H，m)，3.60(4H，m)，3.60-4.00(2H，br)，8.12(3H，d，J＝5.7Hz)，8.92(2H，d，J＝5.7Hz)；HPLC/MS：MH⁺＝316.

实施例24

向实施例23产物(70mg，0.22mmol)/POCl₃(3mL)中在室温下加入二乙基苯胺(30μL)。反应混合物加热至100℃30min。然后浓缩。残渣在EtOAc和H₂O之间进行萃取。有机层用H₂O冲洗两次。然后干燥，浓缩得到标题化合物(50mg，0.15mmol，68％)，该化合物不需进一步纯化就可用于下一反应中。HPLC/MS：MH⁺＝334。

实施例25

向含有实施例24产物(50mg，0.15mmol)和实施例8产物(60mg，0.17mmol)的IPA(0.75mL)溶液中加入DIEA(0.15mL，0.8mmol)。反应混合物在密封管中在130度搅拌7天。粗混合物浓缩，残渣通过制备性HPLC和硅胶快速色谱进行纯化，得到米白色的固体(10mg)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.10-1.30(9H，m)，1.48(4.5H，s)，1.51(4.5H，s)，2.80-3.38(3H，m)，3.53(4H，m)，4.05-4.30(1H，m)，4.83(0.5H，m)，4.96(0.5H，m)，5.15-5.50(1H，m)，6.95-7.10(2H，m)，7.25-7.50(5H，m)，7.69(0.5H，d，J＝8.4Hz)，7.76(0.5H，d，J＝8.4Hz)，8.08(1H，d，J＝5.1Hz)，8.51(2H，m)，8.83(0.5H，br)，8.95(0.5H，br)；

HPLC/MS：MH+＝652.

实施例26

步骤A

实施例26A

40kDa 3-臂PEG醇(0.25g，0.00625mmol)、实施例5的产物(0.04g，0.056mmol)和三苯基膦(0.025g，0.094mmol)通过共沸蒸馏从甲苯(5mL)中进行干燥。一半的体积被蒸馏掉(2.5mL)，混合物冷却至室温。加入CH₂Cl₂(0.5mL)使反应物成为均相。逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(0.015mL，0.094mmol)，反应搅拌48小时。HPLC方法C显示初始的PEG醇完全消失。反应物真空浓缩得到白色固体的实施例26A的叔丁酯。

实施例26B

实施例26A(0.2g，0.005mmol)溶解在甲酸(3mL)中，在40℃加热24小时。反应物真空浓缩，根据HPLC方法A纯化得到0.1g(48％)白色固体的实施例26B。HPLC方法C测定共轭物>99％纯度(滞留时间＝8.1分钟)。¹H NMR(CDCl₃)δ 9.08(bs，3H)，8.84(bs，3H)，8.18-8.16(d，3H)，8.02-8.00(d，3H)，7.67-7.61(m，6H)，7.47-7.38(m，9H)，7.08-7.04(m，3H)，6.91(m，3H)，4.88(m，3H)，4.62-4.49(dd，6H)，4.13(m，6H)，3.64(bs，5919H PEG)，3.23(m，6H)，1.25-1.24(d，18H).

步骤B

GL400 Sunbright PEG(50.0g，NOF lot# M4N594)、实施例5的产物(7.19g，与GL400相比9当量，3当量/羟基)和三苯基膦(2.95g，9当量)的混合物投入至甲苯(300mL)中，并共沸蒸馏去除水。混合物冷却至室温，并经旋转蒸发另外去除一定量的剩余甲苯。混合物再次溶解在无水二氯甲烷(180mL)中，并在冰浴中冷却。经注射驱动装置经1小时加入偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD，2.27g，2.17mL，9当量)。混合物在冰浴中搅拌1.5h，期间HPLC分析指示完全转变为实施例26A。

粘性反应混合物缓慢并同时搅拌地经细颈漏斗加入至75∶25MTBE/IPA(4.0L)混合物中，并搅拌1小时。经真空过滤收集沉淀物，用MTBE(200mL)洗涤，真空干燥得到纯化的实施例26A(51.5g)。

实施例26A(51.4g)投入至甲酸(250mL)中，并加热接近回流1.0h，期间HPLC分析指示完成了去保护。混合物冷却至室温，通过旋转蒸发去除一部分甲酸(～100mL)。混合物用二氯甲烷(50mL)稀释。然后粘性反应混合物加入至75:25MTBE/IPA(4.0L)的混合物中并同时搅拌，且搅拌45min(Note4)。经真空过滤收集沉淀物，用MTBE(300ml)洗涤，并真空干燥(<1Torr，24h)得到实施例26B(50.0g)。

该物质投入至二氯甲烷(400mL)中，并经烧结玻璃布氏漏斗(“抛光过滤(polish filtration)”)过滤。滤液经旋转蒸发浓缩至～200mL的体积，缓慢地并同时搅拌地加入至MTBE/IPA(4.0L)的75:25混合物中。经真空过滤收集沉淀物，用MTBE(300ml)洗涤，并真空干燥(<1Torr，3天)，得到实施例26B(48.8g，～94％)。

使用类似的方法合成下列共轭物：

实施例27

实施例27

40kDa4-臂PEG醇与实施例5的产物偶联，并使用与实施例26类似的方法去保护成为终产物。根据HPLC方法A纯化该产物。HPLC方法C测定共轭物>95％纯度(滞留时间＝7.5-8.1分钟)。¹H NMR(CDCl₃)δ 9.08(bs，4H)，8.84(bs，4H)，8.18-8.16(d，4H)，8.02-8.00(d，4H)，7.67-7.61(m，8H)，7.47-7.38(m，12H)，7.08-7.04(m，4H)，6.91(m，4H)，4.88(m，4H)，4.62-4.49(dd，8H)，4.13(m，8H)，3.64(bs，10101H PEG)，3.23(m，8H)，1.25-1.24(d，24H).

实施例28

40kDa3-臂PEG醇与来自实施例18的叔丁酯产物偶联(下面显示)，使用与实施例26类似的方法去保护成为终产物。根据HPLC方法A纯化产物。HPLC方法C测定共轭物>95％纯度(滞留时间＝7.3分钟)。¹H NMR(CDCl₃)δ 8.66(bs，3H)，8.44(bs，3H)，8.04-8.02(d，3H)，7.75-7.30(m，24H)，7.10-7.06(m，3H)，6.93(s，3H)，5.60-5.50(m，3H)，4.15(m，6H)，3.66(bs，4270H PEG)，3.00(m，3H)，3.40-3.20(m，6H)，1.27(d，9H).

实施例29

实施例29A

40kDa 3-臂PEG醇(0.00625mmol)、来自实施例13的产物(0.056mmol)和三苯基膦(0.094mmol)通过共沸蒸馏从甲苯(5mL)中干燥。一半的体积被蒸馏掉(2.5mL)，该混合物冷却至室温。加入CH₂Cl₂(0.5mL)使反应物成为均相。逐滴加入偶氮二羧酸二乙酯(0.094mmol)，反应搅拌48小时。反应物真空浓缩得到实施例29A的叔丁酯。

实施例29B

实施例29A(0.005mmol)溶解在甲酸(3mL)中，在40℃加热24小时。反应物真空浓缩，根据HPLC方法A纯化得到实施例29B。

实施例30

实施例30

40kDa 3-臂PEG醇与来自实施例25的叔丁酯产物偶联，使用与实施例26类似的方法去保护形成终产物。根据HPLC方法A纯化该产物。

参考文献

下面的出版物、专利和专利申请以上标数字在本申请中引用：

1 Hemler和Takada，欧洲专利申请公开第330,506号，于1989年8月30日公开

2 Elices等人，Cell，60：577-584(1990)

3 Springer，Nature，346：425-434(1990)

4 Osborn，Cell，62：3-6(1990)

5 Vedder等人，Surgery，106：509(1989)

6 Pretolani等人，J.Exp.Med.，180：795(1994)

7 Abraham等人，J.Clin.Invest.，93：776(1994)

8 Mulligan等人，J.Immunology，150：2407(1993)

9 Cybulsky等人，Science，251：788(1991)

10 Li等人，Arterioscler.Thromb.，13：197(1993)

11 Sasseville等人，Am.J.Path.，144：27(1994)

12 Yang等人，Proc.Nat.Acad.Science(USA)，90：10494(1993)

13 Burkly等人，Diabetes，43：529(1994)

14 Baron等人，J.Clin.Invest.，93：1700(1994)

15 Hamann等人，J.Immunology，152：3238(1994)

16 Yednock等人，Nature，356：63(1992)

17 Baron等人，J.Exp.Med.，177：57(1993)

18 van Dinther-Janssen等人，J.Immunology，147：4207(1991)

19 van Dinther-Janssen等人，Annals.Rheumatic Dis.，52：672(1993)

20 Elices等人，J.Clin.Invest.，93：405(1994)

21 Postigo等人，J.Clin.Invest.，89：1445(1991)

22 Paul等人，Transpl.Proceed.，25：813(1993)

23 Okarhara等人，Can.Res.，54：3233(1994)

24 Paavonen等人，Int.J.Can.，58：298(1994)

25 Schadendorf等人，J.Path.，170：429(1993)

26 Bao等人，Diff.，52：239(1993)

27 Lauri等人，British J.Cancer，68：862(1993)

28 Kawaguchi等人，Japanese J.Cancer Res.，83：1304(1992)

29 Kogan等人，美国专利第5,510,332号，于1996年4月23日授权

30 国际专利申请公开WO 96/01644

31 Thorsett等人，美国专利第6,489,300号，于2002年12月3日授权和Konradi等人，美国专利第66,492,372号，于2002年12月10日授权。

上面的所有出版物、专利和专利申请以其全部内容作为参考引入本文，引用的程度与各个独立的出版物、专利或专利申请具体地和个别地指出以其全部内容作为参考引入的程度相同。

Claims

1.一种制备活性化合物的共轭物的方法，其包括：

a)将聚合醇与具有酸性氢的亲核活性化合物在Mitsunobu条件下反应；和

b)分离共轭物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述的条件包括三价膦和偶氮二甲酰化合物。

3.一种制备式I的共轭物的方法：

B是任选地共价结合于有分支臂的主干分子的生物相容性聚合物部分；

q为大约1至大约100；

在每种情况下A都独立地是式II化合物

或其药学上可接受的盐，其中

J选自：

a)式(a)的基团：

其中R³¹是与任选地包括连接基团的聚合物部分结合的共价键，或R³¹是-H、R^31′、-NH₂、-NHR^31′或-N(R^31′)₂、-NC₃-C₆环基、-OR^31′、-SR^31′，其中每个R^31′独立地是任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基、任选取代的C₃-C₆环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基，

且R³²是与任选地包括连接基团的聚合物部分结合的共价键，或R³²是-H、-NO₂、卤代烷基或基团-N(MR⁴¹)R⁴²，其中M是共价键、-C(O)-或-SO₂-，R⁴¹是R^41′、N(R^41′)₂或-OR^41′，

其中每个R^41′独立地是氢、任选取代的直链或支链的C₁-C₆烷基、任选取代的环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂环或任选取代的杂芳基，其中任选的取代基是卤素、C₁-C₆烷基、或-OC₁-C₆烷基，

且R⁴²是氢或R^41′；和

b)式(b)的基团：

其中R选自与聚合物部分结合的共价键、氨基、羟基、取代的氨基、烷基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、杂环氧基、硫醇、芳硫基、杂芳硫基、杂环硫基和取代的烷基，其中每个氨基、取代的氨基、烷基和取代的烷基任选地与聚合物部分共价连接，其中，在每种情况下，聚合物部分任选地包括与聚合物部分共价连接的连接基团；

T选自；

a)式(c)的基团

其中Y选自-O-和-NR¹-，其中R¹选自氢和烷基；

W选自与任选地包括连接基团的聚合物部分连接的共价键、和-NR²R³，其中R²和R³独立地选自氢、烷基、取代的烷基、以及其中R²和R³与其结合的氮原子一起形成杂环或取代的杂环，其中每个烷基、取代的烷基、杂环和取代的杂环任选地与聚合物部分共价结合，所述聚合物部分任选地进一步包括连接基团；

m是等于0、1或2的整数；

n是等于0、1或2的整数；和

b)式(d)的基团

其中G是任选取代的芳基或任选取代的含有0至3个氮的杂芳基5或6元环，其中所述的芳基或杂芳基任选地进一步包括与任选地包括连接基团的聚合物部分结合的共价键；

R⁶是与任选地包括连接基团的聚合物部分结合的共价键，或R⁶是-H、烷基、取代的烷基或-CH₂C(O)R¹⁷，其中R¹⁷是-OH、-OR¹⁸或-NHR¹⁸，其中R¹⁸是烷基、取代的烷基、芳基或取代的芳基；

R⁵⁵选自氨基、取代的氨基、烷氧基、取代的烷氧基、环烷氧基、取代的环烷氧基、芳氧基和取代的芳氧基、和-OH；

条件是：

A.R、Ar¹、Ar²和T的至少一个含有与聚合物部分结合的共价键；

C.当X是-O-或-NR¹-时，则m是2；且

D.式I的共轭物的分子量不超过100,000；

所述方法包括下列的步骤：

c)将式Ia的聚合醇

其中B如上所述，在式PR₃的三价膦和偶氮二羧酸二烷基酯的存在下加入至式H-Nu的亲核试剂，以形成式I的化合物，其中Nu是上述式A的基团；并分离式I的化合物。

4.根据权利要求1所述的方法，其中J、Ar²和T中只有一个含有与聚合物部分结合的共价键。

5.根据权利要求1所述的方法，其中q是从1至大约20的整数。

6.根据权利要求1所述的方法，其中q是从1至大约8的整数。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在每种情况下A独立地是式IIa的化合物

8.根据权利要求1所述的方法，其中在每种情况下A独立地是式IIb的化合物：

9.根据权利要求1所述的方法，其中在每种情况下A独立地是式IIc的化合物：

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述的亲核活性化合物是下式的化合物

其中

J选自：

a)式(a)的基团：

且R⁴²是氢或R^41′；和

b)式(b)的基团：

T是带有酸性氢的基团；且

R⁵⁵是酸保护基团。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述的亲核活性化合物具有下式：

其中R⁵⁵是酸保护基团。

12.根据权利要求11所述的方法，其中R⁵⁵是C₁-C₆烷氧基。

13.根据权利要求11所述的方法，其中m是1，X是S，且R在每种情况下都独立地选自羟基、烷氧基、烷基或与聚合物部分连接的共价键。

14.根据权利要求12所述的方法，其中n是2，且R在两种情况下都是甲基。

15.根据权利要求1所述的方法，其中所述的亲核活性化合物具有下式：

其中R⁵⁵是酸保护基团。

16.根据权利要求15所述的方法，其中R⁵⁵是C₁-C₆烷氧基。

17.根据权利要求15所述的方法，其中G是吡啶基，R³¹是氢或二烷基氨基，且R³²是磺酰胺、酰胺或脲。

18.根据权利要求1所述的方法，其中所述的亲核活性化合物是：

或

19.根据权利要求1所述的方法，其中所述的聚合醇是

(共轭物的总Mw为大约41,500)、(共轭物的总Mw为大约42,000)、或

(共轭物的总Mw为大约41,500)。

20.根据权利要求1所述的方法，其中所述的聚合醇选自A列中的基团，且亲核活性化合物选自B列中的基团：

(共轭物的总Mw为大约41,500)

(共轭物的总Mw为大约42,000)

(共轭物的总Mw为大约41,500)

21.根据权利要求1所述的方法，其中所述的聚合醇在三价膦和偶氮二羧酸二烷基酯的存在下，在至少一种溶剂中加入至式H-Nu的亲核试剂。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述的偶氮二羧酸二烷基酯选自偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二异丙酯、4-甲基-1，2，4-三唑烷-3，5-二酮、N，N，N′，N′-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶、二(N-4-甲基哌嗪-1-基)偶氮二羧酰胺、二吗啉代偶氮二羧酰胺和偶氮二羧酸二叔丁酯。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述的偶氮二羧酸二烷基酯选自偶氮二羧酸二乙酯、偶氮二羧酸二异丙酯、4-甲基-1，2，4-三唑烷-3，5-二酮、N，N，N′，N′-四甲基偶氮二羧酰胺、偶氮二羧酸二哌啶和偶氮二羧酸二叔丁酯。

24.根据权利要求21所述的方法，其中所述溶剂是氯化溶剂或醚溶剂。

25.根据权利要求24所述的方法，其中所述的溶剂是二氯甲烷或四氢呋喃。

26.根据权利要求21所述的方法，其中所述的三价膦选自三苯基膦、三甲基膦、三乙基膦、三丁基膦、1，2-双-(二苯基膦基)乙烷、聚合物结合的膦和水溶性膦。

27.根据权利要求26所述的方法，其中所述的三价膦是三苯基膦。

28.根据权利要求1所述的方法，其中所述的共轭物是使用聚合醇/亲核活性化合物组合1、2或3制备的：

组合聚合醇亲核活性化合物

(共轭物的总Mw为大约41,500)

(共轭物的总Mw为大约42,000)