BRPI0612407A2 - preparação de conjugados poliméricos de compostos terapêuticos, agrìcolas e aditivos alimentìcios - Google Patents

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BRPI0612407A2
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Andrei W Konradi
Jenifer L Smith
Michael S Dappen
Christopher M Semko
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Elan Pharm Inc
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Abstract

PREPARAçãO DE CONJUGADOS POLIMéRICOS DE COMPOSTOS TERAPêUTICOS, AGRìCOLAS E ADITIVOS ALIMENTìCIOS. A presente invenção refere-se a um processo para preparação de conjugados poliméricos de compostos agrícolas, terapêuticos e aditivos alimentícios usando condições de Mitsunobu.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "PREPARA-ÇÃO DE CONJUGADOS POLIMÉRICOS DE COMPOSTOS TERAPÊUTICOS, AGRÍCOLAS E ADITIVOS ALIMENTÍCIOS".
Antecedentes da Invenção
Campo da Invenção
A presente invenção refere-se aos processos para preparar con-jugados de polímero de compostos aditivos de alimentação, terapêuticos ede agricultura. Mais especificamente, a invenção refere-se aos processos deempregar condições de reação Mitsunobu para preparar conjugados para oemprego no tratamento de vários mamíferos, particularmente ser humano,doenças e distúrbios bem como na agricultura e como aditivos de alimenta-ção. Em certos aspectos, a invenção refere-se empregar as condiçõesMitsunobu com um álcool, particularmente um polímero contendo álcool, euma amina para formar o conjugado desejado.
Estado da Técnica
O ligamento de compostos biologicamente ativos aos polímerosrecebeu atenção significante e tornou-se um método comum para controlarvárias características, por exemplo, a biodistribuição, os farmacocinéticos ea toxicidade, de tais compostos. Uma escolha freqüente de polímero para oemprego na preparação de conjugados de polímero de compostos biologi-camente ativos é polietileno glicol (PEG). É amplamente empregado comoum modificador covalente de ambas moléculas biologicamente ativas pe-quenas e grandes. Para discussões de tais conjugados, ver, Eur. Polym. J.19, N2 12, páginas 1177-1183 (Zaplinsky e outros, 1983) e outros, Journal ofControlled Release 10 (1989) 145-154 (Veronese e outros, 1989), e Advan-ced Drug Delivery Reviews, 16, 157-182 (Zaplinsky, 1995).
Foi descoberto recentemente que os conjugados de polímerode,por exemplo, antagonistas de ο^βι (VLA-4) possuem meia vida de soromuito melhorada. Estes compostos de polímero podem ser preparados em-pregando-se vários métodos sintéticos, incluindo formação de carboxamidareagindo-se um éster da molécula ativa com uma amina de polímero, forma-ção de carbamato entre uma amina da molécula ativa e um cloroformiato depolímero, ou formação de carbamato entre um isocianato da molécula ativae um álcool de polímero. Os rendimentos totais destes métodos são tipica-mente menores do que o desejável, freqüentemente envolvendo múltiplasetapas e meios de purificação. É portanto necessário planejar um processoque isole um conjugado de um inibidor de VLA-4 em rendimentos quantitati-vos ou próximos de quantitativo.
A importância de tais conjugados de polímero indicam que existeuma necessidade para sínteses eficientes e convenientes de tais materiais.
Sumário da Invenção
Esta invenção fornece uma síntese melhorada de conjugados depolímero de compostos aditivos de alimentação, de agricultura e terapêuti-cos. O processo desta invenção produz os produtos de conjugado final emexcelentes rendimentos. Em um aspecto preferido, a invenção fornece umprocesso para a preparação de conjugados condensando-se álcoois polimé-ricos com aminas empregando-se condições de reação Mitsunobu. Em outroaspecto preferido, a invenção fornece um processo para a preparação deconjugados condensando-se aminas poliméricas com álcoois empregando-se Condições de reação Mitsunobu.
Em um aspecto, a invenção fornece um processo para a prepa-ração de conjugados de compostos ativos, compreendendo as etapa de: a)reagir um álcool polimérico com um nucleófilo na presença de uma trivalen-tefosfina e um composto de azodicarbonila apropriado, por exemplo, dietila-zodicarboxilato ou azodicarbonildipiperidida, para formar o conjugado; e b)isolar o conjugado.
Em um aspecto específico, os compostos ativos e os conjugadosresultantes exibem propriedades antagonísticas de VLA-4.
Em outro aspecto, a invenção fornece um processo para a pre-paração de conjugados da fórmula I abaixo:
<formula>formula see original document page 3</formula>
B é uma porção de polímero biocompatível;q é de cerca de 1 a cerca de 100;
A em cada ocorrência é independentemente um composto tendo atividadebiológica ou de agricultura ou A é um composto aditivo de alimentação.
com um nucleófilo da fórmula H-Nu
na presença de uma trivalentefosfina e um composto de azodicarbonila a-propriadamente substituído para formar o composto da fórmula I, onde Nu éum radical correspondente à fórmula A acima e o H é um hidrogênio acídicosobre Nu; e
b) Isolar o composto da fórmula I.
Descrição Detalhada da Invenção
Como acima mencionado, esta invenção fornece processos paraa preparação de conjugados dos compostos aditivos de alimentação, de a-gricultura e terapêuticos (posteriormente "compostos ativos"). Os conjugadoscompreendem uma ou mais porções de polímero covalentemente ligadas aum ou mais compostos ativos onde os conjugados resultantes possuem omesmo tipo de atividade como o composto ativo. Em um aspecto, os com-postos ativos e os conjugados resultantes são compostos que inibem a ade-são de leucócito e, em particular, adesão de leucócito mediada, pelo menosem parte, por integrinas de O4.
Em um aspecto preferido, o grupo A nos conjugados da FórmulaI pode ser representado pela fórmula II
<formula>formula see original document page 4</formula>
Este processo compreende
Reagir álcool polimérico da fórmula Ia
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que
J é selecionado de:
a) um grupo da fórmula (a):<formula>formula see original document page 5</formula>
em que R31 é uma ligação covalente à porção de polímero que opcionalmen-te compreende um Iigante1 ou R31 é -H1 R31', -NH2, -NHR31'ou -N(R3r)2,-NC3-C6cíclico, -OR31, -SR31, em que cada R31 é independentemente CrCealquila reta ou ramificada opcionalmente substituída, C3-C6Cidoalquila op-cionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, heteroarila opcio-nalmente substituída,
e R32 é uma ligação covalente à porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante, ou R32 é -H, -NO2, haloalquila ou o grupo-N(MR41)R42 em que M é uma ligação covalente, -C(O)- ou -SO2-, R41 é R41',N(R4r)2, ou -OR41',
em que cada R41 é independentemente hidrogênio, uma Ci-Cealquila reta ouramificada opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substituída,arila opcionalmente substituída, heterocíclico opcionalmente substituído ouuma heteroarila opcionalmente substituída, em que substituições opcionaissão haleto, Ci-C-6alquila, ou -OCi-C6alquila,e R42 é hidrogênio ou R41; e
b) um grupo da fórmula (b):
<formula>formula see original document page 5</formula>
em que R é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente àporção de polímero, amino, amino substituído, alquila e alquila substituídaem que cada amino, amino substituído, alquila e alquila substituída é opcio-nalmente covalentemente ligada à porção de polímero em que, em cada ca-so, a porção de polímero opcionalmente compreende um ligante que cova-lentemente liga-se à porção de polímero;Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada à porção depolímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende um Iigan-te que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar1;
Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada à porção depolímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende um Iigan-te que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar2;
X é selecionado do grupo consistindo em -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -SO2 eopcionalmente -CH2- substituído onde R1 é selecionado do grupo consistindoem hidrogênio e alquila;
T é selecionado de:
a) um grupo da fórmula (c)
<formula>formula see original document page 6</formula>
em que Y é selecionado do grupo consistindo em -O- e -NR1- em que R1 éselecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila;
W é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente a uma por-ção de polímero que opcionalmente compreende um Iigante e -NR2R3 emque R2 e R3 são independentemente selecionados do grupo consistindo emhidrogênio, alquila, alquila substituída, e onde R2 e R3, juntos com o átomode nitrogênio ligado a eles, formam um anel heterocíclico ou um anel hetero-cíclico substituído em que cada alquila, alquila substituída, heterocíclico eheterocíclico substituído é opcionalmente covalentemente ligado a uma por-ção de polímero que também opcionalmente compreende um ligante;
m é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2;
η é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2; e
b) um grupo da fórmula (d)<formula>formula see original document page 7</formula>
em que G é uma arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmen-te substituída por 5 ou 6 membros de anel contendo de 0 a 3 nitrogênios, emque a referida arila ou heteroarila opcionalmente também compreende umaligação covalente a uma porção de polímero que opcionalmente compreendeum ligante;
R6 é uma ligação covalente a uma porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante, ou R6 é -H;
R55 é selecionado do grupo consistindo em alcóxi, alcóxi substituído, cicloal-cóxi, cicloalcóxi substituído, arilóxi e arilóxi substituído, e -OH;contanto que:
A. pelo menos um de J, Ar1, Ar2, e T contenha uma ligação cova-lente à porção de polímero;
B. quando J for covalentemente ligado à porção de polímero, η éum e X não é -O-, -S-, -S0-, ou -SO2-; e
C. quando X for -O-, então m é dois.
O composto H-Nu empregado na reação de conjugação é umcomposto contendo um hidrogênio acídico covalentemente ligado a Nu. Oscompostos preferidos da fórmula H-Nu podem ser representados pela fórmula II.1.
<formula>formula see original document page 7</formula>
em que
J e Ar2 carregam as mesmas definições como apresentado para a Fórmula II;
T é um grupo carregando um hidrogênio acídico; e
R55 é um grupo de proteção de ácido.Os grupos T adequados incluem grupos heterocíclicos, imidas,fenóis, mono- e diésteres fosfóricos, ácidos carboxílicos, hidroxamatos, tióis,tioamidas, ésteres β-ceto, e 1,3-dicetonas,
Um grupo T preferido é um grupo da fórmula (c)
<formula>formula see original document page 8</formula>
em que Y é selecionado do grupo consistindo em -O- e -NR1- em que R1 éselecionado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila;W é um grupo contendo um hidrogênio acídico, preferivelmente sobre umátomo de nitrogênio adjacente a carbonila, onde o grupo W opcionalmenteconectado a Y(CO) por um ligante.
Outro grupo T preferido é um grupo da fórmula (d)em que G é uma arila opcionalmente substituída ou opcionalmente heteroari-la substituída por 5 ou 6 membros de anel contendo de O a 3 nitrogênios; e
R6 é hidrogênio.
Deve ser entendido que o valor para q é calculado com base narelação do número de porções de polímero e o número de porções de A. Emoutras palavras, quando q é 1,5, isto contempla, por exemplo, a seguintefórmula I1:
<formula>formula see original document page 8</formula>
Conjugador preferidos da formula I preparados pela invençãoincluem aqueles da fórmula Ia abaixo:
<formula>formula see original document page 8</formula>
e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, em queB é uma porção de polímero opcionalmente covalentemente ligado a umveículo;
q é de cerca de 1 a cerca de 100;
A em cada ocorrência é independentemente um composto da fórmula IIa
<formula>formula see original document page 9</formula>
em que
R é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente à porção depolímero, amino, amino substituído, alquila e alquila substituída onde cadaamino, amino substituído, alquila e alquila substituída é opcionalmente cova-lentemente ligada à porção de polímero onde, em cada caso, a porção depolímero opcionalmente compreende um Iigante que covalentemente liga-seà porção de polímero;
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada à porção depolímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende um Iigan-te que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar1;
Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada à porção depolímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende um Iigan-te que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar2;
X é selecionado do grupo consistindo em -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -SO2 e op-cionalmente substituído -CH2- onde R1 é selecionado do grupo consistindoem hidrogênio e alquila;Y é selecionado do grupo consistindo em -O- e -NR1- em que R1 é selecio-nado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila;
W é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente a uma por-ção de polímero que opcionalmente compreende um Iigante e -NR2R3 emque R2 e R3 são independentemente selecionados do grupo consistindo emhidrogênio, alquila, alquila substituída, e onde R2 e R3, juntos com o átomode nitrogênio ligado a eles, formam um anel heterocíclico ou um anel hetero-cíclico substituído em que cada alquila, alquila substituída, heterocíclico eheterocíclico substituído é opcionalmente covalentemente ligada a uma por-ção de polímero que também opcionalmente compreende um ligante;
m é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2;
η é um número inteiro igual a 0,1 ou 2; e
sais farmaceuticamente aceitáveis destes;contanto que:
A. pelo menos um de R1 Ar1, Ar2, W e -NR2R3Contenha uma ligaçãocovalente à porção de polímero;
B. quando R for covalentemente ligado à porção de polímero, η éum e X não é -O-, -S-, -SO-, ou -SO2-;
C. quando X é -O- ou -NR1-, então m é dois; e
D. o conjugado da formula Ia possui um peso molecular de nãomais do que 100,000.
Os conjugadores preferidos da formula I preparados pela inven-ção incluem aqueles da fórmula Ib abaixo:
<formula>formula see original document page 10</formula>
em que cada A é independentemente um composto da fórmulaIIb abaixo:<formula>formula see original document page 11</formula>
e em que q é cerca de 1 a cerca de 100;
B é uma porção de polímero opcionalmente covalentemente li-gada a um veículo;
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de PEG opcionalmente compreende um Iigan-te que covalentemente liga a porção de PEG ao Ar1;
Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umIigante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar2;
Y é selecionado do grupo consistindo em -O- e -NR1- em que R1 é selecio-nado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila;
W é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente a uma por-ção de polímero que opcionalmente compreende um Iigante e -NR2R3 ondeR2 e R3 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hi-drogênio, alquila, alquila substituída, e onde R2 e R3, juntos com o átomo denitrogênio ligado a eles, formam um anel heterocíclico ou um anel heterocí-clico substituído em que cada alquila, alquila substituída, heterocíclico e he-terocíclico substituído seja opcionalmente covalentemente ligado à porçãode polímero que também opcionalmente compreende um ligante;
contanto que pelo menos um de Ar1, Ar2, W e -NR2R3 é covalentemente Iiga-do a uma porção de polímero que opcionalmente compreende um ligante;θ também contanto que o coryugado da fórmula Ib possua um peso molecu-lar de não mais do que 100,000.
Os conjugados preferidos da formula I formados pelo processoda invenção incluem aqueles da fórmula Ic abaixo:
<formula>formula see original document page 12</formula>
em que cada A é independentemente um composto da fórmula Ilc abaixo:
<formula>formula see original document page 12</formula>
e em que q é de cerca de 1 a cerca de 100;
B é uma porção de polímero opcionalmente covalentemente li-gada a um veículo;
R é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente a uma por-ção de polímero, amino" amino substituído, alquila e alquila substituída emque cada amino, amino substituído, alquila e alquila substituída é opcional-mente covalentemente ligada à porção de polímero onde, em cada caso, aporção de polímero opcionalmente compreende um Iigante que covalente-mente liga-se a uma porção de polímero;
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umIigante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar1;
Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umIigante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar2;
Y é selecionado do grupo consistindo em -O- e -NR1- em que R1 é selecio-nado do grupo consistindo em hidrogênio e alquila;
W é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente a uma por-ção de polímero que opcionalmente compreende um Iigante e -NR2R3 ondeR2 e R31 juntos com o átomo de nitrogênio ligado a eles, formam um anelheterocíclico ou um anel heterocíclico substituído em que cada alquila, alqui-Ia substituída, heterocíclico e heterocíclico substituído é opcionalmente cova-lentemente ligado a uma porção de polímero que também opcionalmentecompreende um ligante;
η é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2; e
sais farmaceuticamente aceitáveis destes;
contanto que pelo menos um de R, Ar1, Ar2, W e -NR2R3Seja covalentemen-te ligado a uma porção de polímero que opcionalmente compreende um ligante;
e também contanto que o conjugado da fórmula Ic possui um peso molecularde não mais do que 100,000.
Os conjugador preferidos da fórmula I incluem aqueles da fórmula Id abaixo:
<formula>formula see original document page 13</formula>
em que cada A é independentemente um composto da fórmula Ild abaixo:<formula>formula see original document page 14</formula>
e em que q é de cerca de 1 a cerca de 100;
B é uma porção de polímero opcionalmente covalentemente li-gada a um veículo;
R é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente a uma por-ção de polímero, amino, amino substituído, alquila e alquila substituída emque cada amino, amino substituído, alquila e alquila substituída é opcional-mente covalentemente ligado a uma porção de polímero onde, em cada ca-so, a porção de polímero opcionalmente compreende um Iigante que cova-lentemente liga-se à porção de polímero;
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umIigante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar1;
Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umIigante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar2;
R2 e R3 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hi-drogênio, alquila, alquila substituída, e onde R2 e R3, juntos com o átomo denitrogênio ligado a eles, formam um anel heterocíclico ou um anel heterocí-clico substituído em que cada alquila, alquila substituída, heterocíclico e he-terocíclico substituído é opcionalmente covalentemente ligado a uma porçãode polímero que também opcionalmente compreende um ligante;
η é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2; esais farmaceuticamente aceitáveis destes;
contanto que pelo menos um de R, Ar1, Ar2, e -NR2R3Seja covalentementeligado a um polímero que opcionalmente compreende um ligante;e também contanto que o conjugado da fórmula Id possua um peso molecu-lar de não mais do que 100,000.
Os conjugadores preferidos da fórmula I incluem aqueles da fórmula Ie abaixo:
<formula>formula see original document page 15</formula>
em que cada A é independentemente a composto da fórmula Ile abaixo:
<formula>formula see original document page 15</formula>
e em que q seja de cerca de 1 a cerca de 100;
B é uma porção de polímero opcionalmente covalentemente li-gada a um veículo;
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umligante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar1;
Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, heteroarila eheteroarila substituída é opcionalmente covalentemente ligada a uma porçãode polímero em que a porção de polímero opcionalmente compreende umligante que covalentemente liga a porção de polímero ao Ar2;
R2 e R3 são independentemente selecionados do grupo consistindo em hi-drogênio, alquila, alquila substituída, e onde R2 e R3, juntos com o átomo denitrogênio ligado a eles, formam um anel heterocíclico ou um anel heterocí-clico substituído em que cada alquila, alquila substituída, heterocíclico e he-terocíclico substituído é opcionalmente covalentemente ligado a uma porçãode polímero que também opcionalmente compreende um ligante; e
sais farmaceuticamente aceitáveis destes;
contanto que pelo menos um de Ar1, Ar2 e -NR2R3Seja covalentemente liga-do a uma porção de polímero que opcionalmente compreende um ligante;e também contanto que o conjugado da fórmula Ie possua um peso molecu-lar de não mais do que 100,000.
Os conjugadores preferidos da fórmula I incluem aqueles da fór-mula If abaixo:
<formula>formula see original document page 16</formula>
em que cada A é independentemente um composto da fórmula Ilf abaixo:
<formula>formula see original document page 16</formula>
e em que q é de cerca de 1 a cerca de 100;
B é uma porção de polímero opcionalmente covalentemente li-gada a um veículo;
R4 é covalentemente ligado a uma porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante;
R5 é selecionado do grupo consistindo em alquila e alquila substituída;
Ar3 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída;X é selecionado do grupo consistindo em -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -SO2 eopcionalmente substituído -CH2- onde R1 é selecionado do grupo consistindoem hidrogênio e alquila;
m é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2;
η é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2; e
sais farmaceuticamente aceitáveis destes;contanto que:
A. quando R for covalentemente ligado à porção de polímero, η se-ja um e X não seja -O-, -S-, -SO-, ou -SO2-;
B. quando X for -O- ou -NR1-, então m seja dois;.e
C. o conjugado da fórmula If possui um peso molecular de nãomais do que 100,000.
Os conjugadores preferidos da fórmula I incluem aqueles dafórmula Ig abaixo:
<formula>formula see original document page 17</formula>
em que cada A é independentemente um composto da fórmula Ilg abaixo:
<formula>formula see original document page 17</formula>
e em que q e de cerca de 1 a cerca de 100;
B e uma porcao de poliero opcionamente li-gada a um veículo;
R4 é covalentemente ligado a uma porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante;
R5 é selecionado do grupo consistindo em alquila e alquila substituída;Ar3 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída;
η é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2; e
sais farmaceuticamente aceitáveis destes;
contanto que o conjugado da fórmula Ig possua um peso molecular de nãomais do que 100,000.
Os conjugador preferidos da fórmula I incluem aqueles da fórmu-la Ih abaixo:
<formula>formula see original document page 18</formula>
em que cada A é independentemente a composto da fórmula Ilh abaixo:
<formula>formula see original document page 18</formula>
e em que q é de cerca de 1 a cerca de 100;
R4 é covalêntemente ligado a uma porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante;
Ar3 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroarilae heteroarila substituída;
sais farmaceuticamente aceitáveis destes;
contanto que o conjugado da fórmula Ih possua um peso molecular de nãomais do que 100,000.
Os conjugadores preferidos da fórmula I incluem aqueles dafórmula Ii abaixo:
<formula>formula see original document page 18</formula>
em que cada A é independentemente a composto da fórmula Iii abaixo:<formula>formula see original document page 19</formula>
ou um sal farmaceuticamente aceitável destes,
e contanto que o conjugado da fórmula Ii possua um peso molecular de nãomais do que 100,000.
Preferivelmente1 quando Ar1 não for ligado a uma porção de polímero, Ar1nas fórmulas Ila -IIe e Ar3 nas fórmulas Ilf-Ilh é selecionado do grupo consis-tindo em:
fenila,
4-metilfenila,
4-í-butilfenila,
2,4,6-trimetilfenila,
2-fluorofenila,
3-fluorofenila,
4-fluorofenila,
2,4-difluorofenila,
3.4-difluorofenila,
3.5-difluorofenila,
2-clorofenila,
3-clorofenila,
4-clorofenila,
3.4-diclorofenila,
3.5-diclorofenila,
3-cloro-4-fluorofenila,
4-bromofenila,
2-metoxifenila,3-metoxifenila,
4-metoxifenila,
3.4-dimetoxifenila,
4-í-butoxifenila,
4-(3'-dimetilamino-n-propóxi)-fenila,
2-carboxifenila,
2-(metoxicarbonil)fenila,
4-(H2NC(0)-)fenila,
4-(H2NC.(S)-)fenila,
4-cianofenila,
4-trifluorometilfenila,
4-trifluorometoxifenila,
3.5-di-(trifluorometil)fenila,
4-nitrofenila,
4-aminofenila,
4-(CH3C(0)NH-)fenila,
4-(fenilNHC(0)NH-)fenila,
4-amidinofenila,
4-metilamidinofenila,
4-[CH3SC(=NH)-]fenila,
4-cloro-3-[H2NS(0)2-]fenila1
1-naftila,
2-naftila,
piridin-2-ila,
piridin-3-ila,
piridin-4-ila,
pirimidin-2-ila,
quinolin-8-ila,
2-(trifluoroacetil)-1,2,3,4-tetraidroisoquinolin-7-ila,
2-tienila,
5-cloro-2-tienila,
2,5-dicloro-4-tienila,1-/V-metilimidazol-4-ila,
1-A/-metilpirazol-3-ila,
1-/V-metilpirazol-4-ila,
1 -A/-butilpirazol-4-ila,
1-A/-metil-3-metil-5-cloropirazol-4-ila,
1-A/-metil-5-metil-3-cloropirazol-4-ila,
2-tiazolila e
5-metil-1,3,4-tiadiazol-2-ila.
Preferivelmente, quando A for das fórmulas lia, llb, llc, lld, e lie,e Ar1 for ligado a uma porção de polímero, então Ar1 é da fórmula:
-Ar1-Z-(CH2CHR7O)pR8
em que
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, heteroari-la, e heteroarila substituída,
Z é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente, um grupode ligação de 1 a 40 átomos, -O-, e -NR9-, onde R9 é selecionado do grupoconsistindo em hidrogênio e alquila,
R7 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila;
R8 é selecionado do grupo consistindo em A, veículo de -(L)w-polímero, hi-drogênio, alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, e -Ch2ChR7NR10R11 onde R7 é como acima definido, R10 e R11 são indepen-dentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila, A érepresentado por qualquer uma das fórmulas Ila até Ilh acima, L é um grupode ligação de 1 a 40 átomos e wé zero ou um: e
ρ é um número inteiro de cerca de 100 a 2200, preferivelmente de cerca de200-1360.
Quando A for da Fórmula Ila ou llf, e R não for ligado a umaporção de polímero, o substituinte da seguinte fórmula:<formula>formula see original document page 22</formula>
onde R5, X, m e η são como acima definidos, é preferivelmente selecionadodo grupo consistindo em azetidinila, tiazolidinila, piperidinila, piperazinila,morfolino, tiomorfolinila, pirrolidinila, 4-hidroxipirrolidinila, 4-oxopirrolidinila,4-fiuoropirrolidinila, 4,4-difluoropirrolidinila, 4-(tiomorfolin-4-ilC(0)0-)pirroli-dinila, 4-[CH3S(0)20-]pirrolidinila, 3-fenilpirrolidinila, 3-tiofenilpirrolidinila,4-amino-pirrolidinila, 3-metoxipirrolidiníla, 4,4-dimetilpirrolidinila, 4-N-Cbz-piperazinila, 4-[CH3S(0)2-]piperazinila, 5,5-dimetiltiazolindin-4-ila, 1,1-dioxo-tiazolidinila, 1,1-dioxo-5,5-dimetiltiazolidin-2-ila e 1,1-dioxotiomorfolinila.
Preferivelmente, quando A for da fórmula Ila e o substituinte dafórmula:
<formula>formula see original document page 22</formula>
for ligado à porção de PEG1 então preferivelmente o substituinte é da fórmula:
<formula>formula see original document page 22</formula>
em que
m é um número inteiro igual a zero, um ou dois;
Zé selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente, um grupode ligação de 1 a 40 átomos, -O-, e -NR9-, onde R9 é selecionado do grupoconsistindo em hidrogênio e alquila,
R7 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila;
R8 é selecionado do grupo consistindo em A, veículo de -(L)w-polímero, hi-drogênio, alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, e -Ch2ChR7NR10R11 onde R7 é como acima definido, R10 e R11 são indepen-dentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila, A érepresentado por qualquer uma das fórmulas Ila até Ilh acima, L é um grupode ligação de 1 a 40 átomos e wé zero ou um: e
ρ é um número inteiro de cerca de 100 a 2200, preferivelmente de cerca de200-1360.
Quando A for da fórmula lia, llb, Ho, Md, Ile e quando Ar2 não forligado a uma porção de polímero, então preferivelmente Ar2 é selecionadodo grupo consistindo em fenila, fenila substituída, 2-piridinila, 3-piridinila, 4-piridinila, e 4-piridin-2-onila.
Quando A for da fórmula lia, llb, llc, Md, Ile e quando Ar2 for liga-do a uma porção de polímero, então Ar2 é preferivelmente representado pelafórmula:
<formula>formula see original document page 23</formula>
onde Ar2 é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, hete-roarila e heteroarila substituída;
Z é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente, um grupode ligação de 1 a 40 átomos, -O-, e -NR9-, onde R9 é selecionado do grupoconsistindo em hidrogênio e alquila,
R7 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila;
R8 é selecionado do grupo consistindo em A, veículo de -(L)w-polímero, hi-drogênio, alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, e -CH2CHR7NR10R11 onde R7 é como acima definido, R10 e R11 são indepen-dentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila, A érepresentado por qualquer uma das fórmulas Ila até Ilh acima, L é um grupode ligação de 1 a 40 átomos e wé zero ou um: e
ρ é um número inteiro de cerca de 100 a 2200, preferivelmente de cerca de200-1360.
Em uma modalidade preferida de conjugados preparados peloprocesso inventivo, -YC(O)W é -OC(O)NR2R3.Quando A for das fórmulas lia, llb, ou lio, -YC(O)W é-OC(O)NR2R3 e nem R2 nem R3 não são ligados a uma porção de polímero,então preferivelmente -OC(O)NR2R3 é selecionado do grupo consistindo em:(CH3)2NC(O)O-,
(piperidin-1 -il)-C(0)0-,
(piperidin-4-il)-C(0)0-,
(1 -metilpiperidin-4-il)-C(0)0-,
(4-hidroxipiperidin-1 -il)-C(0)0-,
(4-formiloxipiperidin-1 -il)-C(0)0-,
(4-etoxicarbonilpiperidin-1 -il)-C(0)0-,
(4-carboxilpiperidin-1-il)-C(0)0-,
(3-hidroximetilpiperidin-1-il)-C(0)0-,
(4-hidroximetilpiperidin-1-il)-C(0)0-,
(4-fenil-1-Boc-piperidin-4-il)-C(0)0-,
(cetal etileno de 4-piperidon-1-ila)-C(0)0-,
(piperazin-4-il)-C(0)0-,
(1 -Boc-piperazin-4-il)-C(0)0-,
(4-metilpiperazin-1 -il)-C(0)0-,
(4-metilhomopiperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-(2-hidroxietil)piperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-fenilpiperazin-1 -il)-C(0)0-,
(4-(piridin-2-il)piperazin-1 ]-il)-C(0)0-,
(4-(4-trifluorometilpiridin-2-il)piperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-(pirimidin-2-il)piperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-acetilpiperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-(fenil-C(0)-)piperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-(piridin-4'-il-C(0)-)piperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-(fenil-NHC(0)-)piperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-(fenil-NHC(S)-)piperazin-1 -il)-C(0)0-,
(4-metanossulfonilpiperazin-1-il)-C(0)0-,
(4-trifluorometanossulfonilpiperazin-1-il)-C(0)0-,
(morfolin-4-il)-C(0)0-,(tiomorfolin-4-il)-C(0)0-,(tiomorfolin-4-il sulfona)-C(0)0-,(pirrolidin-1 -il)-C(0)0-,(2-metilpirrolidin-1 -il)-C(0)0-,
(2-(metoxicarbonil)pirrolidin-1-il)-C(0)0-,
(2-(hidroximetil)pirrolidin-1 -il)-C(0)0-,(2-(N,N-dimetilamino)etil)(CH3)NC(0)0-,(2-(N-metil-N-tolueno-4-sulfonilamino)etil)(CH3)N-C(0)0-,(2-(morfolin-4-il)etil)(CH3)NC(0)0-,
(2-(hidróxi)etil)(CH3)NC(0)0-,bis(2-(hidróxi)etil)NC(0)0-,
(2-(formilóxi)etil)(CH3)NC(0)0-,(CH3OC(O)CH2)HNC(O)O-, e
2-(fenilNHC(0)0-)etil-]HNC(0)0-.
Quando A for das fórmulas lia, llb, ou Mc, -YC(O)W é-OC(O)NR2R3 e R2 e/ou R3 são/é ligado à porção de PEG1 a porção de PEGpreferivelmente representada pela fórmula:
<formula>formula see original document page 25</formula>
Z' é selecionado do grupo consistindo em uma ligação covalente e um grupode ligação de 1 a 40 átomos;
R7 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio e metila;
R8 é selecionado do grupo consistindo em A, veículo de -(L)w-polímero, hi-drogênio, alquila, alquila substituída, arila, arila substituída, e-CH2CHR7NR10R11 onde R7 é como acima definido, R10 e R11 são indepen-dentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio e alquila, A érepresentado pela fórmula Il acima, L é um grupo de ligação de 1 a 40 áto-mos e w é zero ou um: e
pé um número inteiro de cerca de 100 a 2200.
Grupos T preferidos na fórmula 11.1 possuem a fórmula (d) abaixo.<formula>formula see original document page 26</formula>
onde R6 é hidrogênio.
Os grupos (d) preferidos incluem aqueles mostrados abaixo na Tabela D.
Tabela D
<formula>formula see original document page 26</formula>
em que
R66 é uma ligação covalente a uma porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante, ou
R66 é hidrogênio ou CrC6alquila reta ou ramificada;
R77 é uma ligação covalente a uma porção de polímero que opcionalmentecompreende um ligante, ou
R77 é hidrogênio, halogênio ou CrC6alcóxi reto ou ramificado;R88 é hidrogênio.
Outros grupos (d) úteis na invenção incluem aqueles mostradosna Tabela D1.Tabela D1
<table>table see original document page 27</column></row><table>
Outros compostos preferidos da fórmula 11.1 para o emprego nosprocesso da invenção possuem a fórmula 11.1 -a:
<table>table see original document page 27</column></row><table>
e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, em que
R55 é um grupo de proteção de ácido, preferivelmente CrC6 alcóxi, mais pre-ferivelmente C2-C4 alcóxi;
Ar1 é selecionado do grupo consistindo em alquila, alquila substituída, arila,arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heterocíclico, heterocí-clico substituído, heteroarila e heteroarila substituída; e
R6 é hidrogênio.Os compostos preferidos da Fórmula 11.1-a incluem aqueles emque Ar1 é fenila ou um grupo de heteroarila de 5 ou 6 membros tendo pelomenos um átomo de nitrogênio, cada um dos quais é opcionalmente substi-tuído com halogênio, hidróxi, C1-C6 alcóxi, C1-C6 alquila, nitro, trifluorometila,amino, mono- ou di(Ci-C6)alquilamino, amino(Ci-C6)alquila, C2-C6 acila, C2-Ce acilamino, ou amino(C-i-C6)acila. Ar1 é piridila opcionalmente substituídacom halogênio, hidróxi, CrC6 alquila, Ci-C6 alcóxi, nitro, trifluorometila, ami-no, mono- ou di(CrC6)alquilamino, amino(CrC6)alquila, C2-C6 acila, C2-C6acilamino, ou amino(CrC6)acila. Os compostos particularmente preferidosda Fórmula 11.1-a incluem aqueles onde Ar1 é piridila opcionalmente substitu-ída com CrC6 alquila, hidróxi, halogênio, CrC6 alcóxi, nitro, trifluorometila,amino, ou mono- ou di(CrC6)alquilamino.
Outros compostos ainda preferidos da fórmula 11.1 são tambémaqueles da fórmula ll.2-a:
<formula>formula see original document page 28</formula>
e sais farmaceuticamente aceitáveis destes, em que
R55 é um grupo de proteção de ácido, preferivelmente CrC6 alcóxi, mais pre-ferivelmente C2-C4 alcóxi;
R6 é hidrogênio.
Compostos preferidos da Fórmula ll.2-a incluem aqueles ondeR31 é amino ou mono- ou di(CrC6)alquilamino; e R32 é -H, -NO2 ou haloal-quila, mais preferivelmente trifluorometilmetila.
Ainda em outros compostos preferidos da Fórmula ll.2-a estãoaqueles onde
R31 é amino ou mono- ou di(CrC6)alquilamino; e
R32 é -N(MR41)R42; onde M é -SO2- ou -CO-;R41 é C1-C6 alquila opcionalmente substituída com halogênio, hidróxi, C1-C6alcóxi, amino, ou mono- ou di(Ci-C6)alquilamino; ou
fenila ou uma heteroarila de 5 ou 6 membros contendo pelo menos um nitro-gênio, cada um dos quais é opcionalmente substituído com halogênio, hidró-xi, C1-C6 alquila, C1-C6 alcóxi, C3-C7 cicloalquila, amino, nitro, trifluorometila,ou mono- ou di(CrC6)alquilamino; e
R42 é hidrogênio, CrCeaIquiIa, ou C3-C7cicloalquila.
Outros compostos preferidos da fórmula ll.2-a incluem aquelesonde
grupos de R41 dentro da Fórmula ll.2-a são C1-C4 alquila opcionalmentesubstituída com halogênio, hidróxi, C1-Ce alcóxi, amino, ou mono- ou di(CrC6)alquilamino; ou
piridila ou pirimidinila, cada um dos quais é opcionalmente substituído comhalogênio, hidróxi, C1-C3 alquila, C1-C3 alcóxi, amino, ou mono- ou di(C1-C4)alquilamino; e
R42 é hidrogênio, CrC4alquila, ou C3-C7cicloalquila.
Em um exemplo, os conjugados desta invenção são divalentes esão representados pela fórmula III:
<formula>formula see original document page 29</formula>
onde cada A é independentemente como definido acima e B1 é -Z-(CH2CHR7O)p-Z'- onde cada Z1 é independentemente uma ligação covalenteou um grupo de ligação, R7 é hidrogênio ou metila e ρ é um número inteirode cerca de 100 a 1360.
Em outro exemplo, os conjugados desta invenção são trivalentesa decavalentes e são preferivelmente representados pela fórmula IV:
<formula>formula see original document page 29</formula>
onde cada A é independentemente como acima definido e t é um númerointeiro de 3 a 10.O processo da presente invenção emprega a reação Mitsunobu,uma reação de condensação de álcoois na presença de triaril- ou trialquilfos-fina e um azodicarboxilato apropriado. Nas reações preferidas, álcoois depolímero, por exemplo, polietileno glicol, são reagidos com nucleófilos napresença de triaril- ou trialquilfosfina e o reagente de diazo para fornecer osconjugados. Os nucleófilos são compostos tendo um hidrogênio acídico, istoé, uma porção adequada para doar elétrons. A ligação formada reagindo-seum álcool polimérico com um nucleófilo pode ser diversa, tal como, por e-xemplo, formação de ligação de carbono-oxigênio, formação de ligação decarbono-nitrogênio, formação de ligação carbono-enxofre, formação de liga-ção de carbono-halogênio, e formação de ligação de carbono-carbono.
Desse modo, os compostos ativos não derivatizados podempossuir uma ampla variedade de grupos funcionais que podem reagir com osálcoois de polímero. Exemplos incluem ácidos carboxílicos, álcoois, β-cetoésteres, aminas, tióis, haletos de alquila, haletos de acila, β-dicetonas esimilares. Outros exemplos de nucleófilos que podem ser utilizados no pro-cesso da presente invenção podem ser encontrados em Organic Reactions,1992, 42, 335-656, que é incorporado aqui por referência em sua totalidade.
Exemplos de triaril- ou trialquilfosfinas são descritos em Synthe-s/s, 2003, 3, 317-334; Tetrahedron Lett., 1998, 39, 7787; Chem. Commun.1997, 759; e Nucleosides Nucleotides, 1999, 18, 727, todos incorporadosaqui por referência e incluem trifenilfosfina, trimetilfosfina, trietilfosfina, tribu-tilfosfina, e 1,2-bis-(difenilfosfino)etano. As fosfinas podem também ser sus-tentadas por polímero ou solúveis em água. Uma triarilfosfina preferida étrifenilfosfina.
Os reagentes de diazo são geralmente ésteres ou amidas deácidos azodicarboxílicos, e incluem aqueles encontrados em Synthesis,2003, 3, 317-334; Tetrahedron Lett., 1999, 40, 7359; e Buli. Chem. Soe.Jpn., 1984, 57, 2675. Exemplos específicos de tais compostos de diazo sãodietildiazocarboxilato, diisopropilazodicarboxilato, 4-metil-1,2,4-triazolidina-3,5-diona, Ν,ΝΧ,Ν'-tetrametilazodicarboxamida, dipiperidida de ácidoazodicarboxílico, bis(N-4-metilpiperazin-1 -il)azodicarboxamida, dimorfolino-azodicarboxamida e azodicarboxilato de di-terc-butila.
Conjugados representativos preparados pelo processo da pre-sente invenção, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis destes, sãoapresentados na seguinte tabela:
TABELA I
<table>table see original document page 31</column></row><table><table>table see original document page 32</column></row><table>
onde em cada uma da§ estruturas a soma de todos os p's é de 100 a 2200,preferivelmente de cerca de 200 - 1360.
Definições
Como empregado aqui, "alquila" refere-se a grupos hidrocarbilaalifáticos monovalentes saturados tendo de 1 a 5 átomos de carbono e maispreferivelmente de 1 a 3 átomos de carbono. Este termo é exemplificadopelos grupos tais como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, n-pentila e similares.
"Alquila substituída" refere-se a um grupo alquila tendo de 1 a 3,e preferivelmente de 1 a 2, substituintes selecionados do grupo consistindoem alcóxi, alcóxi substituído, acila, acilamino, acilóxi, amino, amino substitu-ído, aminoacila, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, ciano, halo-gênio, hidroxila, nitro, carboxila, ésteres de carboxila, cicloalquila, cicloalquilasubstituída, espirocicloalquila, heteroarila, heteroarila substituída, heterocí-clico, e heterocíclico substituído.
"Alquileno" refere-se a grupos hidrocarbila alifáticos divalentessaturados preferivelmente tendo de 1 a 5 e mais preferivelmente de 1 a 3átomos de carbono que são de cadeia reta ou ramificada. Este termo é e-xemplificado pelos grupos tais como metileno (-CH2-), etileno (-CH2CH2-), n-propileno (-CH2CH2CH2-), isopropileno (-CH2CH(CH3)-) e similares.
"Alcóxi" refere-se ao grupo "alquil-O-" que inclui, por forma deexemplo, metóxi, etóxi, n-propóxi, isopropóxi, n-butóxi, t-butóxi, sec-butóxi,n-pentóxi e similares.
"Alcóxi substituído" refere-se ao grupo "alquil-O- substituído"."Acila" refere-se aos grupos H-C(O)-, alquil-C(O)-, alquil-C(O)-substituído, alquenil-C(O)-, alquenil-C(O)- substituído, alquinil-C(O)-, alqui-nil-C(O)- substituído cicloalquil-C(O)-, cicloalquil-C(O)- substituído, aril-C(O)-,aril-C(O)- substituído, heteroaril-C(O)-, heteroaril-C(0)-substituído, heterocí-clico-C(O)-, e heterocíclico-C(O)- substituído, em que aíquila, alquila substi-tuída, alquenila, alqueniia substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloal-quila, cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarilasubstituída, heterocíclico e heterocíclico substituído são como definidos aqui.
"Aminoacila" refere-se ao grupo -C(O)NR10R10 onde cada R10 éindependentemente selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alqui-la, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinilasubstituída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, hete-roarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído e ondecada R10 é ligado para formar junto com o átomo de nitrogênio um heterocí-clico ou anel de heterocíclico substituído em que alquila, alquila substituída,alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila,cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substi-tuída, heterocíclico e heterocíclico substituído são como definidos aqui.
"Acilóxi" refere-se aos grupos alquil-C(0)0-, alquil-C(0)0- subs-tituído, alquenil-C(0)0-, alquenil-C(0)0- substituído, alquinil-C(0)0-, alqui-nil-C(0)0- substituído, aril-C(0)0-, aril-C(0)0- "substituído, cicloal-quil-C(0)0-, CiCloaIquiI-C(O)O- substituído, heteroaril-C(0)0-, heteroa-ril-C(0)0-substituído, heterocíclico-C(0)0-, e heterocíclico substituí-do-C(0)0- em que alquila, alquila substituída, alquenila, alquenila substituí-da, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, arila,arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico e heterocí-clico substituído são como definidos aqui.
"Alquenila" refere-se aos grupos alquenila tendo de 2 a 6 átomosde carbono e preferivelmente de 2 a 4 átomos de carbono e tendo pelo me-nos 1 e preferivelmente de 1 a 2 sítios de insaturação de alquenila. Tais gru-pos são exemplificados por vinila, alila, but-3-en-1-ila, e similares."Alquenila substituída" refere-se aos grupos alquenila tendo de 1a 3 substituintes, e preferivelmente dei a 2 substituintes, selecionados dogrupo consistindo em alcóxi, alcóxi substituído, acila, acilamino, acilóxi, ami-no, amino substituído, aminoacila, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi subs-tituído, ciano, halogênio, hidroxila, nitro, carboxila, ésteres de carboxila, ci-cloalquila, cicloalquila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, hete-rocíclico, e heterocíclico substituído com a condição de que qualquer substi-tuição de hidroxila não seja ligada a um átomo de carbono de vinila (insaturado).
"Alquinila" refere-se aos grupos alquinila tendo de 2 a 6 átomosde carbono e preferivelmente de 2 a 3 átomos de carbono e tendo pelo me-nos 1 e preferivelmente de 1 a 2 sítios de insaturação de alquinila.
"Alquinila substituída" refere-se aos grupos alquinila tendo de 1 a3 substituintes, e preferivelmente de 1 a 2 substituintes, selecionados dogrupo consistindo em alcóxi, alcóxi substituído, acila, acilamino, acilóxi, ami-no, amino substituído, aminoacila, arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi subs-tituído, ciano, halogênio, hidroxila, nitro, carboxila, ésteres de carboxila, ci-cloalquila, cicloalquila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, hete-rocíclico, e heterocíclico substituído.
"Amino" refere-se ao grupo -NH2.
"Ciano" refere-se ao grupo -CN.
"Amino substituído" refere-se ao grupo -NR'R" onde R' e R" sãoindependentemente selecionados do grupo consistindo em hidrogênio, alqui-la, alquila substituída, alquenila, alquenila substituída, alquinila, alquinilasubstituída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, hete-roarila, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído e ondeR' e R" são ligados, juntos com o nitrogênio ligado a eles para formar umgrupo heterocíclico ou heterocíclico substituído contanto que R' e R" não se-jam ambos hidrogênio. Quando R' é hidrogênio e R" é alquila, o grupo aminosubstituído é algumas vezes referido aqui como alquilamino. Quando R' e R"são alquila, o grupo amino substituído é algumas vezes referido aqui comodialquilamino. Quando referindo-se a um monoamino substituído, é pretendi-do que R' ou R" seja hidrogênio porém não ambos. Quando referindo-se aum diamino substituído, é pretendido que nem R' nem R" sejam hidrogênio.
"Aminoacila" refere-se aos grupos -NR11C(0)alquila,-NR11C(0)alquila substituída, -NR11C(0)cicloalquila, -NR11C(0)cicloalquilasubstituída, -NR11C(0)alquenila, alquenila -NR11C(0)substituída,-NR11C(0)alquiníla, alquinila -NR11C(0)substituída, -NR11C(0)arila,-NR11C(0)arila substituída, -NR11C(0)heteroarila, -NR11C(0)heteroarilasubstituída, -NR11C(0)heterocíclico, e -NR11C(0)heterocíclico substituídoonde R11 é hidrogênio ou alquila e em que alquila, alquila substituída, alque-nila, alquenila substituída, alquinila, alquinila substituída, cicloalquila, cicloal-quila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída,heterocíclico e heterocíclico substituído são como definidos aqui.
"Nitro" refere-se ao grupo -NO2.
"Arila" ou "Ar" refere-se a um grupo carbocíclico aromático mo-novalente de 6 a 14 átomos de carbono tendo um anel único (por exemplo,fenila) ou anéis condensados múltiplos (por exemplo, naftila ou antrila) osquais anéis condensados podem ou não ser aromáticos (por exemplo, 2-benzoxazolinona, 2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-ona-7-ila, e similares) contantoque o ponto de Iigamento seja em um átomo de carbono aromático. Arilaspreferidas incluem fenila e naftila.
"Arila substituída" refere-se aos grupos arila os quais são substi-tuídos com de 1 a 3 substituintes, e preferivelmente de 1 a 2 substituintes,selecionados do grupo consistindo em hidróxi, acila, acilamino, acilóxi, alqui-la, alquila substituída, alcóxi, alcóxi substituído, alquenila, alquenila substitu-ida, alquinila, alquinila substituída, amino, amino substituído, aminoacila,arila, arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, carboxila, ésteres de carbo-xila, ciano, tiol, tioalquila, tioalquila substituída, tioarila, tioarila substituída,tioeteroarila, tioeteroarila substituída, tiocicloalquila, tiocicloalquila substituí-da, tioeterocíclico substituído, tioeterocíclico substituído, cicloalquila, cicloal-quila substituída, halo, nitro, heteroarila, heteroarila substituída, heterocícli-co, heterocíclico substituído, heteroarilóxi, heteroarilóxi substituído, heteroci-clilóxi, heterociclilóxi substituído, amino sulfonila (NH2-SO2-), e amino sulfoni-Ia substituída.
"Arilóxi" refere-se ao grupo aril-O- que inclui, por meio de exem-plo, fenóxi, naftóxi, e similares.
"Arilóxi substituído" refere-se aos grupos aril-O- substituídos.
"Carboxila" refere-se a -COOH ou sais deste.
"Éster de carboxila" refere-se aos grupos -C(0)0-alquila,-C(0)0-alquila substituída, -C(0)-arila, e arila -C(0)0-substituída em quealquila, alquila substituída, arila e arila substituída são como definidos aqui.
"Cicloalquila" refere-se aos grupos alquila cíclicos de 3 a 10átomos de carbono tendo anéis cíclicos únicos ou múltiplos incluindo, pormeio de exemplo, adamantila, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclooctilae similares.
"Cicloalquenila" refere-se aos grupos alquenila cíclicos de 4 a 10átomos de carbono tendo anéis cíclicos únicos ou múltiplos e também tendopelo menos 1 e preferivelmente de 1 a 2 sítios internos de insaturação vinila(>C=C<) ou etilênica.
"Cicloalquila substituída" e "cicloalquenila substituída" refere-sea um grupo cicloalquila ou cicloalquenila, tendo de 1 a 5 substituintes sele-cionados do grupo consistindo em oxo (=0), tioxo (=S), alcóxi, alcóxi substi-tuído, acila, acilamino, acilóxi, amino, amino substituído, aminoacila, arila,arila substituída, arilóxi, arilóxi substituído, ciano, halogênio, hidroxila, nitro,carboxila, ésteres de carboxila, cicloalquila, cicloalquila substituída, heteroa-rila, heteroarila substituída, heterocíclico, e heterocíclico substituído.
"Cicloalcóxi" refere-se aos grupos -O-cicloalquila.
"Cicloalcóxi substituído" refere-se aos grupos cicloalquila substi-tuídos por O.
"Halo" ou "halogênio" refere-se a flúor, cloro, bromo e iodo e pre-ferivelmente é flúor ou cloro.
"Hidróxi" refere-se ao grupo -OH.
"Heteroarila" refere-se a um grupo aromático de 1 a 10 átomosde carbono e 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consistindo em oxi-gênio, nitrogênio e enxofre dentro do anel. Tais grupos heteroarila podempossuir um anel único (por exemplo, piridinila ou furila) ou anéis condensa-dos múltiplos (por exemplo, indolizinila ou benzotienila) em que os anéiscondensados podem ou não ser aromáticos e/ou conter um heteroátomocontanto que o ponto de Iigamento seja através de um átomo do grupo hete-roarila aromático. Heteroarilas preferidas incluem piridinila, pirrolila, indolila,tiofenila, e furanila.
"Heteroarila substituída" refere-se a grupos heteroarila que sãosubstituídos com de 1 a 3 substituintes selecionados do mesmo grupo desubstituintes definidos por arila substituída.
"Heteroarilóxi" refere-se ao grupo -O-heteroarila e "heteroarilóxisubstituído" refere-se ao grupo -O-heteroarila substituída.
"Heterociclo" ou "heterocíclico" ou "heterocicloalquila" ou "hete-rociclila" refere-se a um grupo saturado ou insaturado tendo um anel únicoou anéis condensados múltiplos, de 1 a 10 átomos de carbono e de 1 a 4heteroátomos selecionados do grupo consistindo em nitrogênio, enxofre ouoxigênio dentro do anel em que, nos sistemas de anel fundido, um ou maisanéis podem ser cicloalquila, arila ou heteroarila contanto que o ponto deIigamento seja através do anel heterocíclico.
"Heterocíclico substituído" ou "heterocicloalquila substituída" ou"heterociclila substituída" refere-se aos grupos heterociclila que são substitu-ídos com de 1 a 3 dos mesmos substituintes como definidos para cicloalquilasubstituída.
Exemplos de heterociclilas e heteroarilas incluem, porém nãosão limitados a, azetidina, pirrol, imidazol, pirazol, piridina, pirazina, pirimidi-na, piridazina, indolizina, isoindol, indol, diidroindol, indazol, purina, quinolizi-na, isoquinolina, quinolina, ftalazina, naftilpiridina, quinoxalina, quinazolina,cinolina, pteridina, carbazol, carbolina, fenantridina, acridina, fenantrolina,isotiazol, fenazina, isoxazol, fenoxazina, fenotiazina, imidazolidina, imidazoli-na, piperidina, piperazina, indolina, ftalimida, 1,2,3,4-tetraidro-isoquinolina,4,5,6,7-tetraidrobenzo[b]tiofeno, tiazol, tiazolidina, tiofeno, benzo[b]tiofeno,morfolinila, tiomorfolinila (também referido como tiamorfolinila), piperidinila,pirrolidina, tetraidrofuranila, e similares.
"Tiol" refere-se ao grupo -SH.
"Tioalquila" ou "alquiltioéter" ou "tioalcóxi" refere-se ao grupo -S-alquila.
"Tioalquila substituída" ou "alquiltioéter substituído" ou "tioalcóxisubstituído" refere-se ao grupo -S-substituída alquila.
"Tioarila" refere-se ao grupo -S-arila, onde arila é definida acima.
"Tioarila substituída" refere-se ao grupo -S-arila substituída, on-de a arila substituída é acima definida.
"Tioeteroarila" refere-se ao grupo -S-heteroarila, onde a hetero-arila é como acima definida.
"Tioeteroarila substituída" refere-se ao grupo -S-heteroarilasubstituída, onde tioeteroarila substituída é acima definida.
"Tioeterocíclico" refere-se ao grupo -S-heterocíclico e "tioetero-cíclico substituído" refere-se ao grupo -S-heterocíclico substituído, onde he-terocíclico e heterocíclico substituído.
"Heterociclilóxi" refere-se ao grupo heterociclil-O- e "heterociclil-O- substituído refere-se ao grupo substituído heterociclil-O- onde heterocicli-Ia e heterociclila substituída são como acima definidos.
"Tiocicloalquila" refere-se ao grupo -S-cicloalquila e "tiocicloal-quila substituída" refere-se ao grupo -S-cicloalquila substituída, onde ciclo-alquila e cicloalquila substituída são como acima definidos.
Os termos "composto" e "composto ativo" são empregados parareferir-se à porção de antagonista de VLA-4 de um conjugado da invençãoou a um antagonista de VLA-4 quando ele existe antes da conjugação a umpolímero.
Os termos "Ligante", "grupo de ligação" ou "ligante de 1 a 40átomos" referem-se a um grupo ou grupos que (1) covalentemente ligam-seao polímero do composto ativo e/ou (2) covalentemente ligam as porções deoxido de polialquileno de um polímero uma a outra. Dentro de qualquer con-jugado particular, o ligante conectando as porções de óxido de polialquilenode um polímero conjuntamente, porções de óxido de um polímero conjunta-mente, e o Iigante ligando um polímero a um composto ativo podem ser i-guais ou diferentes (isto é, podem possuir as mesmas ou diferentes estrutu-ras químicas). As ligações de grupo funcional representativas, do qual umgrupo de ligação pode ter um ou mais, são amidas, éteres, carbamatos, tio-carbamatos, uréias, tiouréias, grupos amino, grupos carbonila, grupos alcóxi,etc. O Iigante pode ser homogêneo ou heterogêneo em seu conteúdo deátomo (por exemplo, Iigantes contendo apenas átomos de carbono ou Iigan-tes contendo átomos de carbono bem como um ou mais heteroátomos pre-sentes no ligante. Preferivelmente, o Iigante contém de 1 a 25 átomos decarbono e 0 a 15 heteroátomos selecionados de oxigênio, NR22, enxofre, -S(O)- e -S(O)2-, onde R22 é como acima definido. O ligante pode também serquiral ou aquiral, linear, ramificado ou cíclico.
Intermediário entre as ligações de grupo funcional ou ligaçõesdentro do ligante, o ligante pode também conter grupos espaçadores incluin-do, porém não limitado a, espaçadores selecionados de alquila, alquila subs-tituída, arila, arila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída, heteroari-la, heteroarila substituída, heterocíclico, heterocíclico substituído, e combi-nações destes. O espaçador pode ser homogêneo ou heterogêneo em seuconteúdo de átomo (por exemplo, espaçadores contendo apenas átomos decarbono ou espaçadores contendo átomos de carbono bem como um ou maisheteroátomos presentes no espaçador. Preferivelmente, o espaçador contémde 1 a 25 átomos de carbono e de 0 a 15 heteroátomos selecionados de oxi-gênio, NR22, enxofre, -S(O)- e -S(O)2-, onde R22 é como acima definido. O es-paçador pode também ser quiral ou aquiral, linear, ramificado ou cíclico.
Exemplos não Iimitantes de espaçadores são cadeias de alqui-Ieno retas ou ramificadas, fenileno, bifenileno, etc. anéis, todos dos quaissão capazes de carregar um ou mais do que um grupo funcional capaz deformar uma ligação com o composto ativo e uma ou mais porções de óxidode polialquileno. Um exemplo particular de um grupo ligante-espaçador poli-funcional é lisina, o qual pode ligar qualquer um dos compostos ativos a du-as porções de polímero por meio de dois grupos amino substituídos em umacadeia de C4 alquileno. Outros exemplos não Iimitantes incluem ácido p-aminobenzóico e ácido 3,5-diaminobenzóico o qual possui 2 e 3 grupos fun-cionais respectivamente disponíveis para formação de ligação. Outra tal li-gação polifuncional mais grupos espaçadores podem ser facilmente conside-rados por alguém versado na técnica.
O termo "polímero" refere-se a polímeros biocompatíveis, solú-veis em água, substancialmente não imunogênicos, os quais são capazes deser acoplados a mais do que um antagonista de VLA-4 da fórmula II. Preferi-velmente o polímero é não iônico e biocompatível como avaliado por falta detoxicidade nas doses empregadas. Inclusive de tais polímeros são cópiasmúltiplas de polímeros acoplados a um veículo.
Exemplos de polímeros adequados incluem, porém não são limi-tados a: polímeros de polioxialquileno tais como polietileno glicol (PEG), po-Iivinilpirrolidona (PVP), poliacrilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDA-Am), álcool polivinílico (PVA), dextrano, poli (ácido L-glutâmico) (PGA), ani-drido maléico de estireno (SMA), poli-N-(2-hidroxipropil) metacrilamida (HP-MA), anidrido maléico de polidiviniléter (DIVEMA) (Kameda, Y. e outros, Bi-omaterials 25: 3259-3266, 2004; Thanou, M. e outros, Current Opinion inInvestigational Drugs 4(6): 701-709, 2003; Veronese, F.M., e outros, Il Far-maco 54: 497-516, 1999).
Polímeros preferidos são polioxialquilenos. Por "polioxialquile-nos" é destinado a macromoléculas que incluem pelo menos uma porção deóxido de polialquileno que é opcionalmente covalentemente ligada a um oumais óxidos de polialquileno adicionais, em que os óxidos de polialquilenosão iguais ou diferentes. Exemplos não Iimitantes incluem polietileno glicol(PEG), polipropileno glicol (PPG), poliisopropileno glicol (PIPG), PEG-PEG,PEG-PPG, PPG-PIPG, e similares. Também incluído dentro da definição depolioxialquilenos são macromoléculas em que as porções de óxido de polial-quileno são opcionalmente conectadas uma a outra por um ligante. Exem-pios ilustrativos são PEG-Iigante-PEG, PEG-ligante-PIPG, e similares. E-xemplos mais específicos incluem os comercialmente disponíveis po-li[di(etileno glicol)adipatos, poli{di(etileno glicol)ftalato dióis, e similares. Ou-tros exemplos são copolímeros de bloqueio de oxialquileno, polietileno glicol,polipropileno glicol, e unidades de poliol polioxietilenado.
Pelo menos um de seus terminais, o polímero é covalentementeligado ao composto da fórmula Il substituído por não polímero opcionalmenteatravés de um Iigante empregando-se o processo da presente invenção for-necendo para ligação covalente do polímero ao composto da fórmula Il subs-tituído por não polímero.
Quando um Iigante é empregado, o Iigante é covalentementeligado a pelo menos um dos terminais de polímero que, sucessivamente, écovalentemente ligado de outra maneira, composto da fórmula Il substituídopor não polímero. É entendido, claro, que se os substituintes apropriadossão encontrados no composto da fórmula Il substituído por não polímero en-tão o Iigante opcional pode não ser necessário como pode ser a ligação dire-ta do polímero ao composto da fórmula Il substituído por não polímero.
Os Iigantes preferidos incluem, por meio de exemplo, o seguinte-O-, -NR22-, -NR22C(O)O-, -OC(O)NR22-, -NR22C(O)-, -C(O)NR22-, -NR22C(O)NR22-,-alquileno-NR22C(0)0-, -alquileno-NR22C(0)NR22-, -alquileno-OC(O) NR22-,-alquileno-NR22-, -alquileno-O-, -alquileno-NR22C(0)-, -alquileno-C(0)NR22-,-NR3C(O)OaIquiIeno-, -NR22C(0)NR22-alquileno-, -OC(O) NR22-alquileno,-NR22-alquileno-, -O-alquileno-, -NR22C(0)-alquileno-, -C(0)NR22-alquileno-,-alquileno-NR22C(0)0-alquileno-, -alquileno-NR3C(0)NR22-alquileno-, -alqui-leno-OC(0)NR22-alquileno-, -alquileno-NR22-alquileno-, alquileno-O-alquileno-, -alquileno-NR22C(0)-alquileno-, -C(0)NR22-alquileno-, e
<formula>formula see original document page 41</formula>
onde
<formula>formula see original document page 41</formula>
é selecionado do grupo consistindo em arila, arila substituída, cicloalquila,cicloalquila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, heterocíclico eheterocíclico substituído, e D e E são independentemente selecionados dogrupo consistindo em uma ligação, -O-, CO, -NR22-, -NR22C(0)0-,-0C(0)NR22-, -NR22C(0)-, -C(0)NR22-, -NR22C(0)NR22-, -alquileno-NR22C(O)O-, -alquileno-NR22C(0)NR22-, -alquileno-OC(O) NR22-, -alquileno-NR22-, -alquileno-O-, -alquileno-NR22C(0)-, alquileno-C(0)NR22-,-NR22C(0)0-alquileno-, -NR22C(0)NR22-alquileno-, -OC(O) NR22-alquileno-,-NR22-alquileno-, -O-alquileno-, -NR22C(0)-alquileno-, -C(0)NR22-alquileno-,-alquileno-NR22C(0)0-alquileno-, -alquileno-NR22C(0)NR22-alquileno-,-alquileno-OC(O) NR22-alquileno-, -alquileno-NR22-alquileno-, alquileno-O-alquileno-, -alquileno-NR22C(0)-alquileno-, e -C(0)NR22-alquileno-, onde R22é como acima definido.
Grupos de alquileno preferidos nos Iigantes acima incluem gru-pos de C1-C15 alquileno, mais preferivelmente grupos de CrC6 alquileno, emais preferivelmente grupos de CrC3 alquileno. Grupos heterocíclicos prefe-ridos incluem piperazinila, piperidinila, homopiperazinila, homopiperidinila,pirrolidinila, e imidazolidinila.
Os conjugados da invenção podem ser incorporados em um veí-culo que pode possuir de 1 a 19 conjugados adicionais ligados a ele. O ter-mo "veículo" refere-se a um componente adicional ou andaime ao qual múl-tiplos conjugados podem ser ligados e que quando incorporados nos conju-gados desta invenção não transmitem imunogenicidade substancial ou toxi-cidade. Tais veículos são preferivelmente materiais mono- a decavalentescontendo funcionalidades múltiplas para Iigamento de polímero. As funciona-lidades podem ser homogêneas ou heterogêneas; embora as funcionalida-des homogêneas sejam preferidas.
Exemplos de veículos comercialmente disponíveis compreenden-do funcionalidades homogêneas incluem, por meio de exemplo apenas, cate-col, resorcinol, 1,2-fenilenodiamina, 1,3-fenilenodiamina, 1,4-fenilenodiamina;ácido ftálico, ácido isoftálico, 1,3-propanodiol, glicerol, 1,2,4-benzenotriol, pen^taeritritol, glicose (em sua forma de piranose), diisocianato de 1,3-fenileno,diisocianato de 1,4-fenileno, isoftalaldeído, ftalaldeído, 1,3-ciclopentanodiol,etileno diamina, ácido tetraacético de etilenodiamina, e similares.
As estruturas representativas úteis como veículos ou andaimesincluem o seguinte (onde PEG é empregado apenas para propósitos repre-sentativos):<formula>formula see original document page 43</formula>
tri-PEG-glicerol
<formula>formula see original document page 43</formula>
tetra-PEG-pentaeritritol
<formula>formula see original document page 43</formula>
di-PEG resorcinol
Exemplos de veículos comercialmente disponíveis compreen-dendo funcionalidades heterogêneas incluem, como forma de Exemplo ape-nas, ácido 6-hidroxicapróico, aminoácidos, ácido salicílico, ácido 3- ou 4-aminossalicílico, 1,3-diamino-2-hidroxipropano, 2-aminoetanol, 3-aminopropanol, glucosamina, ácido siálico, aminoácidos, e similares.
As estruturas representativas que originam-se de Iigamento depolímero empregando-se tais veículos ou andaimes incluem o seguinte (on-de PEG é empregado apenas para propósitos representativos):
<formula>formula see original document page 43</formula>
tri-PEG-1,3-diamino-2-hidroxipropano
<formula>formula see original document page 43</formula>
di-PEG 3-aminofenolO veículo pode opcionalmente conter uma ou mais cópias de Aligadas ao veículo opcionalmente através de um Iigante contanto que existapelo menos um outro grupo funcional o qual pode ligar-se a uma outra cópiade A. Por exemplo, cada uma das seguintes estruturas é considerada umveículo ou andaime por que existe pelo menos um grupo funcional adicionalpara ligação de um substituinte de A adicional:
<formula>formula see original document page 44</formula>
onde L, we A são como acima definidos.
O termo "oxialquileno" refere-se a -OCH2CHRd- onde Rd é alqui-la. Oxialquilenos polimerizados são referidos como polioxialquilenos, óxidosde polialquileno ou polialquileno glicóis, exemplos não Iimitantes dos quaisincluem PEG1 poli propileno glicol, polibutileno glicol, poliisopropileno glicol, esimilares.
Tais polímeros são opcionalmente monotamponado com umsubstituinte preferivelmente selecionado de alquila, arila, alquila substituída,arila substituída e um veículo como acima descrito. Incluindo tais polímerosestão aqueles polímeros de polioxialquileno tamponados por diamino osquais são conhecidos na técnica como Jeffaminaes®. Também ainda, taispolímeros podem opcionalmente conter uma ou mais unidades de não oxial-quileno tais como os comercialmente disponíveis poli{di(etileno gli-col)adipatos, poli[di(etileno glicol)ftalato dióis, e similares. Também incluídosestão os copolímeros de bloqueio de oxialquileno, polietileno glicol, polipropi-Ieno glicol, e unidades de poliol polioxietilenadas.
Polioxialquilenos, tais como PEG, são normalmente fornecidoscomo um sólido ceroso solúvel em água. Geralmente, quando o peso mole-cular de polímero aumenta, sua viscosidade e ponto de congelamento tam-bém aumentam. As preparações comerciais são normalmente caracteriza-das pelo "peso molecular médio" dos polímeros constituintes.
Tipicamente, o peso molecular médio da quantidade total de po-límero origina-se das porções de polímero único ou múltiplos nos conjuga-dos da invenção entre cerca de 100 a 100.000; preferivelmente de cerca de10.000 a 80.000; mais preferivelmente de cerca de 20.000 a cerca de70.000.
Similarmente, outros polímeros adequados tal polivinilpirrolidona(PVP), poliacrilamida (PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm), álcool e poli-vinílico (PVA), dextrano, poli (ácido L-glutâmico) (PGA), anidrido maléico deestireno (SMA), poli-N-(2-hidroxipropil) metacrilamida (HPMA), anidrido ma-léico de polidiviniléter (DIVEMA) são bem-conhecidos na técnica e possuempesos moleculares de cerca de 100 a 100.000; preferivelmente de cerca de10.000 a 80.000; mais preferivelmente de cerca de 20.000 a cerca de 70.000.
"Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais que retêma eficácia biológica e propriedades dos compostos desta invenção e que nãosão biologicamente ou de outra maneira indesejável. Em muitos casos, oscompostos desta invenção são capazes de formar sais de base e/ou ácidoem virtude da presença de grupos amino e/ou carboxila ou grupos similaresa eles.
Os sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis podemser preparados de bases orgânicas e inorgânicas. Os sais derivados de ba-ses inorgânicas incluem por meio de exemplo apenas, sais de sódio, potás-sio, lítio, amônio, cálcio e magnésio. Os sais derivados de bases orgânicasincluem, porém não são limitados a, sais de aminas primárias, secundárias eterciárias, tais como alquil aminas, dialquil aminas, trialquil aminas, alquilaminas substituídas, di(alquila substituída) aminas, tri(alquila substituída)aminas, alquenil aminas, dialquenil aminas, trialquenil aminas, alquenil ami-nas substituídas, di(alquenila substituída) aminas, tri(alquenila substituída)aminas, cicloalquil aminas, di(cicloalquil) aminas, tri(cicloalquil) aminas, ci-cloalquil aminas substituídas, cicloalquil amina dissubstituída, cicloalquil a-minas trissubstituídas, cicloalquenil aminas, di(cicloalquenil) aminas,tri(cicloalquenil) aminas, cicloalquenil aminas substituídas, cicloalquenil ami-na dissubstituída, cicloalquenil aminas trissubstituída, aril aminas, diaril ami-nas, triaril aminas, heteroaril aminas, dieteroaril aminas, trieteroaril aminas,aminas heterocíclicas, aminas dieterocíclicas, aminas trieterocíclicas, di- etriaminas misturadas onde pelo menos dois dos substituintes na amina sãodiferentes e são selecionados do grupo consistindo em alquila, alquila substi-tuída, alquenila, alquenila substituída, cicloalquila, cicloalquila substituída,cicloalquenila, cicloalquenila substituída, arila, heteroarila, heterocíclico, esimilares. Também incluídos estão as aminas onde os dois ou três substitu-intes, juntos com o amino nitrogênio, formam um grupo heterocíclico ou he-teroarila.
Exemplos de aminas adequadas incluem, por meio de exemploapenas, isopropilamina, trimetil amina, dietil amina, tri(isopropil) amina, tri(n-propil) amina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, trometamina, lisina, argini-na, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaína, etilenodiamina,glucosamina, N-alquilglucaminas, teobromo, purinas, piperazina, piperidina,morfolina, N-etilpiperidina, e similares. Deve também ser entendido que ou-tros derivados de ácido carboxílico seriam úteis na prática desta invenção,por exemplo, amidas de ácido carboxílico, incluindo carboxamidas, carbo-xamidas de alquila inferior, carboxamidas de dialquila, e similares.
Os sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis podemser preparados de ácidos orgânicos e inorgânicos. Os sais derivados de áci-dos inorgânicos incluem ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico,ácido nítrico, ácido fosfórico, e similares. Os sais derivados de ácidos orgâ-nicos incluem ácido acético, ácido propiônico, ácido glicólico, ácido pirúvico,ácido oxálico, ácido málico, ácido malônico, ácido succínico, ácido maléico,ácido fumárico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico,ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-tolueno-sulfônico, ácido salicílico, e similares.
O termo "cátion farmaceuticamente aceitável" refere-se ao cátionde um sal farmaceuticamente aceitável.
É entendido que em todos os grupos substituídos definidos aqui,os polímeros obtidos definindo-se os substituintes com outros substituintespor si próprios (por exemplo, arila substituída tendo um grupo arila substituí-do como um substituinte que é ele mesmo substituído com um grupo arilasubstituído, etc.) não são destinados para inclusão aqui. Em tais casos, onúmero máximo de tais substituintes é três. Quer dizer que cada uma dasdefinições acima é constrangida por uma limitação que, por exemplo, osgrupos arila substituídos são limitados a -arila substituída-(arila substituída)-(arila substituída).
Similarmente, é entendido que as definições acima não são des-tinadas incluir padrões de substituição não permissíveis (por exemplo, metilasubstituída com 5 grupos flúor ou um grupo hidroxila alfa para insaturaçãoetenílica ou acetilênica). Tais padrões de substituição não permissíveis sãobem-conhecidos pelo técnico versado.
Preparação de Composto
Os compostos de partida ativos empregados no processo destainvenção podem ser preparados de materiais de partida facilmente disponí-veis empregando-se procedimentos conhecidos e materiais de partida facil-mente disponíveis ou, onde o material de partida não é conhecido ou comer-cialmente disponível, tais materiais podem facilmente ser preparados em-pregando-se os procedimentos da literatura. Será apreciado que onde ascondições de processo preferidas ou típicas (isto é, temperaturas de reação,tempos, relações mole de reagentes, solventes, pressões, etc.) são preferi-das, outras condições de processo podem também ser empregadas a nãoser que de outro modo estabelecido. As condições de reação ideais podemvariar com os reagentes particulares ou solvente empregado, porém taiscondições podem ser determinadas por alguém versado na técnica por pro-cedimentos de otimização de rotina.
Adicionalmente, como será evidente para aqueles versados natécnica, os grupos de proteção convencionais podem ser necessários paraprevenir certos grupos funcionais de passarem por reações indesejadas. Osgrupos de proteção adequados para vários grupos funcionais bem comocondições adequadas para grupos funcionais particulares de desproteção eproteção são bem-conhecidos na técnica. Por exemplo, numerosos gruposde proteção são descritos em T. W. Greene e G. M. Wuts, Protecting Groupsin Organic Synthesis, Segunda Edição, Wiley, Nova York, 1991, e as refe-rências citadas nele.
Além disso, os compostos desta invenção tipicamente contêmum ou mais centros quirais. Conseqüentemente, se desejado, tais compos-tos podem ser preparados ou isolados como estereoisômeros puros, isto é,como enantiômeros individuais ou diastereômeros, ou como misturas enri-quecidas por estereoisômero. Todos tais estereoisômeros (e misturas enri-quecidas) são incluídos dentro do escopo desta invenção, a não ser que deoutro modo indicado. Estereoisômeros puros (ou misturas enriquecidas) po-dem ser preparados empregando-se, por exemplo, materiais de partida opti-camente ativos ou reagentes estereosseletivos bem-conhecidos na técnica.
Alternativamente, as misturas racêmicas de tais compostos podem ser sepa-radas empregando-se, por exemplo, cromatografia de coluna quiral, reagen-tes de resolução quiral e similares.
Os conjugados preferidos preparados de acordo com esta in-venção compreendem uma porção de polímero/veículo opcional contendocerca de 1 a cerca de 100 substituintes da Fórmula II:
<formula>formula see original document page 48</formula>Especificamente, a porção de polímero pode ser ligada atravésde uma ligação covalente ao substituinte Ar1, o substituinte R, o substituinteAr2 e/ou no substituinte T em que a porção de polímero seja diretamente li-gada ou seja ligada através de um ligante. Sucessivamente, a porção depolímero pode opcionalmente ser ligada a um veículo tendo cópias múltiplasdo polímero ligado a ela.
Os compostos da Fórmula Il podem ser preparados primeiro a-coplando-se um aminoácido heterocíclico, 1, com um cloreto de aril sulfonilaapropriado como ilustrado no Esquema 1 abaixo:
<formula>formula see original document page 49</formula>
Esquema 1
onde R1 Ar1, X, m e η são como acima definidos.
Especificamente, no Esquema 1 acima, aminoácido heterocícli-co, 1, é combinado com um equivalente estoiquiométrico ou quantidade emexcesso (preferivelmente de cerca de 1,1 a cerca de 2 equivalentes) de hale-to de arilsulfonila, 2, em um diluente inerte adequado tal como diclorometanoe similares. Geralmente, a reação é conduzida em uma temperatura varian-do de cerca de -70°C a cerca de 40°C até a reação ser substancialmenteconcluída, a qual tipicamente ocorre dentro de 1 a 24 horas. Preferivelmente,a reação é conduzida na presença de uma base adequada para recuperar oácido gerado durante a reação. As bases adequadas incluem, por meio deexemplo, aminas terciárias, tais como trietilamina, diisopropiletilamina, N-metil-morfolina e similares. Alternativamente, a reação pode ser conduzidasob condições tipo Schotten-Baumann empregando-se uma solução de álca-Ii aquosa tal como uma solução aquosa de hidróxido de sódio, uma soluçãode fosfato aquosa tamponada a pH 7,4, e similares. O produto resultante, 3,pode ser recuperado por métodos convencionais, tal como cromatografia,filtragem, evaporação, cristalização, e similares ou, alternativamente, em-pregado na etapa seguinte sem purificação e/ou isolação.
Os aminoácidos heterocíclicos, 1, empregados na reação acimasão compostos conhecidos ou compostos que podem ser preparados decompostos conhecidos por procedimentos sintéticos convencionais. Exem-plos de aminoácidos adequados para emprego nesta reação incluem, porémnão são limitados a, L-prolina, fraA7s-4-hidroxil-L-prolina, c/s-4-hidroxil-L-prolina, frans-3-fenil-L-prolina, c/s-3-fenil-L-prolina, L-(2-metil)prolina, ácidoL-pipecolínico, ácido L-azetidina-2-carboxílico, ácido L-tiazolidina-4-carboxílico, ácido L-(5,5-dimetil)tiazolidina-4-carboxílico, ácido L-tiamorfolina-3-carboxílico. Se desejado, os ésteres de ácido carboxílico correspondentesdos aminoácidos, 1, tais como os ésteres de metila, ésteres de etila, ésteresde f-butila, e similares, podem ser empregados na reação acima com o clo-reto de arilsulfonila. A hidrólise subseqüente do grupo de éster ao ácido car-boxílico empregando-se condições e reagentes convencionais, isto é, trata-mento com um hidróxido de metal de álcali em um diluente inerte tal comometanol/água, em seguida fornece o aminoácido N-sulfonila, 3.
Similarmente, os cloretos de arilsulfonila, 2, empregados na rea-ção acima são compostos conhecidos ou compostos que podem ser prepa-rados de compostos conhecidos por procedimentos sintéticos convencionais.
Tais compostos são tipicamente preparados do ácido sulfônico correspon-dente, isto é, de compostos da fórmula Ar1SOsH onde Ar1 é como acima de-finido, empregando-se tricloreto de fósforo e pentacloreto de fósforo. Estareação é geralmente conduzida contactando-se o ácido sulfônico com cercade 2 a 5 equivalentes molares de tricloreto de fósforo e pentacloreto de fós-foro, puro ou em um solvente inerte, tal como diclorometano, em temperatu-ra na faixa de cerca de O0C a cerca de 80°C durante cerca de 1 a cerca de48 horas para fornecer o cloreto de sulfonila. Alternativamente, os cloretosde arilsulfonila, 2, podem ser preparados do composto de tiol corresponden-te, isto é, de compostos da Ar1-SH onde Ar1 é como definido aqui, tratando-se o tiol com cloro (CI2) e água sob condições de reação convencional.Alternativamente, os cloretos de arilsulfonila, 2, empregados nareação acima podem ser preparados por clorossulfonilação de benzenosubstituído ou grupo heterocicloalquila empregando-se CI-SO3H.
Exemplos de cloretos de arilsulfonila adequados para o empregonesta invenção incluem, porém não são limitados a, cloreto de benzenossul-fonila, cloreto de 1-naftalenossulfonila, cloreto de 2-naftalenossulfonila, clore-to de p-toluenossulfonila, cloreto de o-toluenossulfonila, cloreto de 4-acetamidobenzenossulfonila, cloreto de 4-íerc-butilbenzenossulfonila, cloretode 4-bromobenzenossulfonila, cloreto de 2-carboxibenzenossulfonila, cloretode 4-ciânobenzenossulfonila, cloreto de 3,4-diclorobenzenossulfonila, cloretode 3,5-diclorobenzenossulfonila, cloreto de 3,4-dimetoxibenzenossulfonila,cloreto de 3,5-ditrifluorometilbenzenossulfonila, cloreto de 4-fluorobenzenossulfonila, cloreto de 4-metoxibenzenossulfonila, cloreto de 2-metoxicarbonilbenzenossulfonila, cloreto de 4-metilamido-benzenossulfonila,cloreto de 4-nitrobenzenossulfonila, cloreto de 4-trifluorometil-benzenossulfonila, cloreto de 4-trifluorometoxibenzenossulfonila, cloreto de2,4,6-trimetilbenzenossulfonila, cloreto de 2-tiofenossulfonila, cloreto de 5-cloro-2-tiofenossulfonila, cloreto de 2,5-dicloro-4-tiofenossulfonila, cloreto de2-tiazolsulfonila, cloreto de 2-metil-4-tiazolsulfonila, cloreto de 1-metil-4-imidazolsulfonila, cloreto de 1-metil-4-pirazolsulfonila, cloreto de 5-cloro-1,3-dimetil-4-pirazolsulfonila, cloreto de 3-piridinassulfonila, cloreto de 2-pirimidinassulfonila e similares. Se desejado, um fluoreto de sulfonila, brome-to de sulfonila ou anidrido de ácido sulfônico pode ser empregado no lugardo cloreto de sulfonila na reação acima para formar o aminoácido N-sulfonila, 3.
O aminoácido N-arilsulfonila, 3, é em seguida acoplado aos éste-res de tirosina comercialmente disponíveis como mostrado no Esquema 2abaixo:<formula>formula see original document page 52</formula>
Esquema 2
onde R, Ar1, X, m e η são como acima definidos, Ra é hidrogênio ou alquilaporém, preferivelmente é um grupo alquila tal como f-butila, Z representasubstituição opcional no anel arila e o é zero, um ou dois.
Esta reação de acoplamento é tipicamente conduzida empre-gando-se reagentes de acoplamento bem-conhecidos tais como carbodiimi-das, reagente BOP (hexafluorofosfonato de benzotriazol-1-ilóxi-tris(dimetil-amino)-fosfônio) e similares. As carbodiimidas adequadas incluem, por meiode exemplo, dicicloexilcarbodiimida (DCC), 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC) e similares. Se desejado, as formas sustentadas porpolímero de reagentes de acoplamento de carbodiimida podem também serempregadas incluindo, por exemplo, aquelas descritas em Tetrahedron Let-ters, 34(48), 7685 (1993). Adicionalmente, os promotores de acoplamentobem-conhecidos, tal como N-hidroxissuccinimida, 1-hidroxibenzotriazol esimilares, podem ser empregados para facilitar a reação de acoplamento.
Esta reação de acoplamento é tipicamente conduzida contac-tando-se o ácido N-sulfonilamino, 3, com cerca de 1 a cerca de 2 equivalen-tes do reagente de acoplamento e pelo menos um equivalente, preferivel-mente cerca de 1 a cerca de 1,2 equivalente, de derivado de tirosina, 4, emum diluente inerte, tal como diclorometano, clorofórmio, acetonitrila, tetrai-drofurano, Ν,Ν-dimetilformamida e similares. Geralmente, esta reação éconduzida em uma temperatura variando de cerca de O0C a cerca de 37°Cdurante cerca de 12 a cerca de 24 horas. Na conclusão da reação, o com-posto 5 é recuperado por métodos convencionais incluindo neutralização,evaporação, extração, precipitação, cromatografia, filtração, e similares.Alternativamente, o aminoácido N-sulfonila, 3, pode ser converti-do em um haleto de ácido que é em seguida acoplado com o composto, 4,para fornecer o composto 5. O haleto de ácido pode ser preparado contac-tando-se o composto 3 com um haleto de ácido inorgânico, tal como cloretode tionila, tricloreto de fósforo, tribrometo de fósforo ou pentacloreto de fósfo-ro, ou preferível mente, com cloreto de oxalila sob condições convencionais.Geralmente, esta reação é conduzida empregando-se cerca de 1 a 5 equiva-lentes molares do haleto de ácido inorgânico ou cloreto de oxalila, puro ouem um solvente inerte, tal como diclorometano ou tetracloreto de carbono,em temperatura na faixa de cerca de O0C a cerca de 80°C durante cerca de1 a cerca de 48 horas. Um catalisador, tal como DMF, pode também ser em-pregado nesta reação.
O haleto de ácido de aminoácido N-sulfonila, 3, é em seguidacontactado com pelo menos um equivalente, preferivelmente cerca de 1,1 acerca de 1,5 equivalente, do derivado de tirosina, 4, em um diluente inerte,tal como diclorometano, em uma temperatura variando de cerca de -70°C acerca de 40°C durante cerca de 1 a cerca de 24 horas. Preferivelmente, estareação é conduzida na presença de uma base adequada para recuperar oácido gerado durante a reação. As bases adequadas incluem, por meio deexemplo, aminas terciárias, tal como trietilamina, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina e similares. Alternativamente, a reação pode ser conduzidasob condições tipo Schotten-Baumann empregando-se álcali aquoso, talcomo hidróxido de sódio e similares. Na conclusão da reação, o composto 5é recuperado por métodos convencionais incluindo neutralização, evapora-ção, extração, precipitação, cromatografia, filtragem, e similares.
Alternativamente, o composto 5 pode ser preparado primeiroformando-se um derivado de ácido diamino e em seguida acoplando-se oácido diamino ao haleto de arilsulfonila, 2, como mostrado no esquema 3abaixo:<formula>formula see original document page 54</formula>
Esquema 3
onde R, Ra1 Ar1, X, Z, m, ne o são como acima definidos.
O ácido diamino, 6, pode ser facilmente preparado acoplando-seo aminoácido, 1, com o aminoácido, 4, empregando-se técnicas de acopla-mento de aminoácido convencionais e reagentes, tais carbodiimidas, rea-gente de BOP e similares, como acima descrito. O ácido diamino, 6, podeem seguida ser sulfonado empregando-se cloreto de sulfonila, 2, e empre-gando-se os procedimentos sintéticos acima descritos para fornecer o com-posto 7.
Os derivados de tirosina, 4, empregados nas reações acima sãocompostos conhecidos ou compostos que podem ser preparados de com-postos conhecidos por procedimentos sintéticos convencionais. Por exem-plo, os derivados de tirosina, 4, adequados para o emprego nas reações a-cima incluem, porém não são limitados a, éster de metila de L-tirosina, ésterde t-butila de L-tirosina, éster de metila de L-3,5-diiodotirosina, éster de meti-la de L-3-iodotirosina, éster de metila de p-(4-hidróxi-naft-1-il)-L-alanina, és-ter de metila de p-(6-hidróxi-naft-2-il)-L-alanina, e similares. Se desejado,claro, outros ésteres ou amidas dos compostos acima descritos podem tam-bém ser empregados.
O derivado de aminoácido-tirosina de N-arilsulfonil-heterocíclico,7, pode ser empregado como um ponto de partida para ligar-se a uma por-ção de polímero no grupo Ar2 empregando-se o processo da invenção.
As porções de amina localizadas em outras porções da moléculapodem ser empregadas da maneira descrita acima para covalentemente Ii-gar um grupo de polímero à molécula. Por exemplo, as aminas localizadasem Ar1, no aminoácido heterocíclico ou em Ar2 podem ser similarmente deri-vatizadas para prover a substituição de PEG empregando-se o processo dainvenção. As porções de amina podem ser incluídas nestes substituintesdurante a síntese e apropriadamente protegidas quando necessário. Alterna-tivamente, os precursores de amina podem ser empregados.
Também, a substituição de amino pode ser incorporada na fun-cionalidade de aminoácido heterocíclico e em seguida derivatizada para in-cluir uma porção de polímero. Por exemplo, a funcionalidade de aminoácidoheterocíclico pode ser 2-carboxilpiperazina descrita na Patente dos EstadosUnidos n- 6.489.300. Alternativamente, o comercialmente disponível 3- ou 4-hidroxiprolina pode ser oxidado à cetona correspondente e em seguida redu-tivamente aminado com amônia na presença de cianoboroidreto de sódiopara formar a porção de amina correspondente. Também ainda, 4-cianoprolina pode ser reduzido para fornecer para um grupo alquila substitu-ída da fórmula -CH2NH2 que pode ser derivatizado através da amina.
Também ainda, a porção de amina pode ser incorporada na fun-cionalidade de Ar2. Preferivelmente, a porção de amina está presente comoum precursor de amina tal como um grupo nitro ou ciano ligado a Ar2.
Os compostos não derivatizados da Fórmula Ila-Ilh são subse-qüentemente acoplados a um polímero empregando-se o processo da in-venção. O Esquema 4 descreve uma modalidade da invenção:<formula>formula see original document page 56</formula>
Esquema 4
No Esquema 9, um álcool PEG 100 é tratado com um nucleófilo105 na presença de uma fosfina, aqui PPh3, e um diazodicarboxilato, porexemplo, diisopropilazodicarboxilato, para formar o éster protegido 110. Oéster é em seguida hidrolizado para formar o conjugado desejado 115.
A reação ocorre sob condições brandas e essencialmente neu-tras. A reação é preferivelmente realizada em pelo menos um solvente ade-quado. Exemplos incluem solventes halogenados tais como cloreto de meti-leno, solventes aromáticos tal como benzeno ou tolueno, ou outros solventestais como tetraidrofurano e dietiléter. Outros solventes adequados incluemetilacetato, acetonitrilo, e DMF. Mais preferivelmente, um solvente clorinadoou um solvente de éter é empregado. Em uma modalidade mais preferida, osolvente é cloreto de metileno ou tetraidrof urano.A temperatura de reação é tipicamente na faixa de cerca de -100a 100°C, preferivelmente na faixa de cerca de -20 a 50°C, em ainda maispreferivelmente de cerca de Oe a cerca de temperatura ambiente. Em umamodalidade particularmente preferida, as temperaturas de reação são entrecerca de -10 a 10°C.
O tempo de reação é na faixa de cerca de 5 minutos a cerca de100 horas, preferivelmente ma faixa entre cerca de 30 minutos a cerca de 50horas. Mais preferivelmente, a reação prossegue até a conclusão entre cer-ca de 45 minutos a cerca de 10 horas.
Como acima mencionado, os exemplos de triaril- ou trialquilfosfi-nas incluem trifenilfosfina, trimetilfosfina, trietilfosfina, tributilfosfina, e 1,2-bis-(difenilfosfino)etano. As fosfinas podem também ser polímero sustentado ousolúvel em água. Uma triarilfosfina preferida é trifenilfosfina.
Os Exemplos de compostos diazo são dietildiazocarboxilato, dii-sopropilazodicarboxilato, 4-metil-1,2,4-triazolidina-3,5-diona, Ν,Ν,Ν',Ν1-tetrametilazodicarboxamida, dipiperidida de ácido azodicarboxílico,bis(N-4 -metilpiperazin-1 -il)azodicarboxamida, dimorfolinoazodicarboxamidae azodicarboxilato de di-terc-butila.
É entendido que outros álcoois poliméricos adequados podemser empregados no lugar de PEG e que alguém versado na técnica facilmen-te será capaz de modificar os esquemas de reação abaixo para incorporaroutros polímeros semelhantes. Em alguns casos, a porção de PEG pode serdiretamente introduzida no grupo Ar2 e, em outros casos, a porção de PEGpode ser introduzida por ligação através de uma porção ligante.
Outros polímeros adequados para conjugação a um compostoda fórmula Il incluem, sem limitação, polivinilpirrolidona (PVP), poliacrilamida(PAAm), polidimetilacrilamida (PDAAm), álcool polivinílico (PVA), dextrano,poli (ácido L-glutâmico) (PGA), anidrido maléico de estireno (SMA), poli-N-(2-hidroxipropil) metacrilamida (HPMA), anidrido maléico de polidiviniléter(DIVEMA). Por meio de exemplo, PVP, PAAm e PDAAm podem ser funcio-nalizados pela introdução de co-monômeros durante a polimerização de ra-dical. O PVA e o dextrano cada um contém grupos hidroxila primários (OH)adequados para conjugação. Os métodos para a síntese destes biopolíme-ros e para conjugá-los aos materiais biológicos são bem-conhecidos na téc-nica (ver, por exemplo, o Pedido de Patente dos Estados Unidos publicado20040043030; Patente dos Estados Unidos 5.177.059; Patente dos EstadosUnidos 6.716.821; Patente dos Estados Unidos 5.824.701; Patente dos Es-tados Unidos 6.664.331; Patente dos Estados Unidos 5.880.131; Kameda, Y.e outros, Biomaterials 25: 3259-3266, 2004; Thanou, M. e outros, CurrentOpinion in Investigational Drugs 4(6): 701-709, 2003; Veronese, F.M., e ou-tros, Il Farmaco 54: 497-516, 1999, todos os quais são incorporados aqui emsuas totalidades).
Polímeros representativos adequados para o emprego na inven-ção incluem:
<table>table see original document page 58</column></row><table>
onde pp e alquileno são como definidos aqui e Rbb é preferivelmente sele-cionado do grupo consistindo em alquila, alquila substituída, arila e arilasubstituída.
Outros polímeros adequados são mostrados abaixo:
<formula>formula see original document page 58</formula>
monohidróxi monotamponado PEG
<formula>formula see original document page 58</formula>
monoamina monotamponada PEG
<formula>formula see original document page 58</formula>
dihidróxi não tamponado PEGPEGs ramificados:
Reagentes PEG disponíveis de NOF (20 kDa 4-braços)
<formula>formula see original document page 59</formula>
20 kDa 4-bracos PEG tetraamina
Núcleo de diglicerina
Cat Nq Sunbright DG-200PA
Reagentes PEG disponíveis de Nektar (40 kDa 8-braços)
<formula>formula see original document page 59</formula>
40 kDa 8-bracos PEG
Núcleo de Hexaglicerina
Cat Ns 0J000T08PEGs dendriméricos:
Reagentes PEG disponíveis de NOF (40 kDa 4-braços)
<formula>formula see original document page 60</formula>
40 kDa 4-bracos PEG álcool 40 kDa 4-bracos PEG tetraamina
Núcleo de pentaeritritol Núcleo de pentaeritritol
Cat N9 Sunbright PTE-40000 Cat Nq Sunbright PTE-400PA
Reagentes PEG disponíveis de NOF (40 kDa 3-braços)
<formula>formula see original document page 60</formula>
40 kDa 3-bracos PEG 40 kDa 3-bracos PEG triamina
Núcleo de glicerina Núcleo de glicerina
Cat N9 Sunbright GL-40000 Cat N9 Sunbright GL-400PA
Reagentes PEG disponíveis de SunBio (40 e 20 kDa)Séries Y-PEG (Núcleo de ácido aspártico)
<formula>formula see original document page 60</formula>
Y-PEG amina (40 kDa)
Cat Nq PYAM-40
Y-PEG carbamato de nitrofenila (40 kDa)
Cat Nq PYNPC-40Séries de 6 braços (Núcleo Sorbitol)
<formula>formula see original document page 61</formula>
Pesos moleculares menores disponíveis nas séries de6-braços do sorbitol incluem 10,15 e 20 kDa. Derivadosalém de álcool incluem a amina de 6-braços.
Por exemplo, a amina de 6-braços de 10 kDA (Cat N0 P6AM-10)poderia ser convertida a uma hexamina de 6-braçosde 40 kDa {com éster Nektars 5 kDa BocNH-PEG-NHS)e depois conjugada a uma pequena molécula.
Produto customizado
PEG de 6 braços de 40 kDa
Estes polímeros de PEG podem ser também modificados exten-dendo-se as cadeias com diaminas de PEG através de uma Iigante apropri-ado, por exemplo, um carbamato (uretano) ou uma uréia.
<formula>formula see original document page 61</formula>
Uma variedade de compostos nucleofílicos tendo uma hidrogê-nio acídico pode ser empregada no processo da invenção. Tais compostospodem ser compostos biologicamente ativos, isto é, compostos terapêuticos(farmacêuticos) e químicos de agricultural (pesticidas, herbicidas, e estimu-ladores de crescimento de planta tais como fertilizantes), ou compostos adi-tivos de alimentação. Exemplos de grupos tendo um nitrogênio acídico quepodem ser incorporados em tais compostos são mostrados acima; ver asestruturas apresentadas nas Tabelas D e D1.
Formulações Farmacêuticas
Quando empregados como farmacêuticos, os conjugados destainvenção são normalmente administrados na forma de composições farma-cêuticas. Estes conjugados podem ser administrados por uma variedade derotinas incluindo oral, retal, transdérmica, subcutânea, intravenosa, intra-muscular, sublingüal, oftálmica, ou inalação incluindo administração por ina-lação nasal ou oral. As rotinas de administração preferidas incluem subcutâ-nea, intravenosa e inalação. Tais composições são preparadas de uma ma-neira bem conhecida na técnica farmacêutica e compreendem pelo menosum conjugado.
A invenção também fornece composições farmacêuticas com-preendendo um conjugado de acordo com a invenção, por exemplo, um con-jugado da Fórmula I, em combinação com um composto separado o qual éum inibidor de 0467. Tais composições também compreendem um excipienteou veículo farmacêuticamente aceitável e podem ser administradas comodiscutido aqui em outro lugar.
Esta invenção também inclui composições farmacêuticas quecontêm, como o ingrediente ativo, um ou mais do conjugado da fórmula Ijuntamente com veículos farmaceuticamente aceitáveis. Na preparação dascomposições desta invenção, o ingrediente ativo é normalmente misturadocom um excipiente, diluído por um excipiente ou inserido em um tal veículoque pode estar em, soluções injetáveis estéreis, e pós embalados estéreis.
Para administração subcutânea, um veículo simples pode compreender umasolução estéril de água, Na2HP04, NaH2P04, e NaCI, em proporções quefornecem um pH isotônico e fisiologicamente aceitável, também conhecidocomo PBS ou salina tamponada por fosfato. Outras opções são conhecidaspor aqueles versados na técnica e incluem sistemas de solvente misturadosque podem afetar a taxa de absorção e exposição total. Estas opções inclu-em sistemas de solvente misturados contendo glicerina, Polietileno glicol400, e óleo de semente de algodão. Também de emprego potencial são eta-nol, Ν,Ν'-dimetilacetamida, propileno glicol e álcool de benzila todos os quaispodem ser empregados para manipular o realce da permeabilidade e hiper-tonicidade.
Na preparação de uma formulação, pode ser necessário moer ocomposto ativo para fornecer o tamanho de partícula apropriado antes dacombinação com outros ingredientes. Se o composto ativo é substanciai-mente insolúvel, ordinariamente ele é moído a um tamanho de partícula me-nor do que 200 malhas. Se o composto ativo é substancialmente solúvel emágua, o tamanho de partícula é normalmente ajustado moendo-se para for-necer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por exem-pio, cerca de 40 malhas.
Alguns exemplos de excipientes adequados incluem lactose,dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma acácia, fosfato de cálcio,alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina,polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope, e metil celulose. As formulaçõespodem adicionalmente incluir: agentes lubrificantes tais como talco, esteara-to de magnésio, e óleo mineral; agentes umectantes; agentes emulsificantese de suspensão; agentes conservantes tais como metil- e propilhidróxi-benzoatos; agentes adoçantes; e agentes aromatizantes. As composiçõesda invenção podem ser formuladas a fim de fornecer liberação rápida, sus-tentada ou retardada do ingrediente ativo após a administração ao pacienteempregando-se os procedimentos conhecidos na técnica.
A administração dos agentes terapêuticos por formulação subcu-tânea ou intravenosa é bem conhecida na indústria farmacêutica. Uma for-mulação subcutânea ou intravenosa deve possuir certas qualidades comexceção justamente de uma composição na qual o agente terapêutico sejasolúvel. Por exemplo, a formulação deve promover a estabilidade total do(s)ingrediente(s) ativo(s), também, a fabricação da formulação deve ser de bai-xo custo. Todos estes fatores finalmente determinam o sucesso total e a uti-lidade de uma formulação intravenosa.
Outros aditivos adicionais que podem ser incluídos nas formula-ções farmacêuticas dos compostos da presente invenção seguem: solven-tes: etanol, glicerol, propileno glicol; estabilizantes: EDTA (ácido tetraacéticode etileno diamina), ácido cítrico; preservativos antimicrobianos: álcool debenzila, metil parabeno, propil parabeno; agentes de tamponamento: ácidocítrico/citrato de sódio, tartarato de hidrogênio de potássio, tartarato de hi-drogênio de sódio, ácido acético/acetato de sódio, ácido maléico/maleato desódio, ftaiato de hidrogênio de sódio, ácido íosfó rico/fosfato de diiarogèniode potássio, ácido fosfórico/fosfato de hidrogênio de dissódio; e modificado-res de tonicidade: cloreto de sódio, manitol, dextrose.
A presença de um tampão é necessária para manter o pH aquo-so na faixa de cerca de 4 a cerca de 8 e mais preferivelmente em uma faixade cerca de 4 a cerca de 6. O sistema de tampão é geralmente uma misturade um ácido fraco e um sal solúvel deste, por exemplo, citrato de sódio/ácidocítrico; ou sal de monocátion ou dicátion de um ácido dibásico, por exemplo,tartarato de hidrogênio de potássio; tartarato de hidrogênio de sódio, ácidofosfórico/fosfato de diidrogênio de potássio, e ácido fosfórico/fosfato de hi-drogênio de dissódio.
A quantidade de sistema de tampão empregada é dependentede (1) pH desejado; e (2) a quantidade de fármaco. Geralmente, a quantida-de de tampão empregada está em uma relação mole de 0,5:1 a 50:1 detampão:alendronato (onde os moles de tampão são considerados como osmoles combinados dos ingredientes de tampão, por exemplo, citrato de só-dio e ácido cítrico) da formulação para manter um pH na faixa de 4 a 8 e ge-ralmente, uma relação de mole 1:1 a 10:1 de tampão (combinado) paro fár-maco presente é empregada.
Um tampão útil na invenção é citrato de sódio/ácido cítrico nafaixa de 5 a 50 mg por ml de citrato de sódio para de 1 a 15 mg por ml deácido cítrico, suficiente para manter um pH aquoso de 4-6 da composição.
O agente de tampão pode também estar presente para prevenira precipitação do fármaco através da formação de complexo de metal solú-vel com íons de metal dissolvidos, por exemplo, Ca, Mg, Fe, Al, Ba, os quaispodem ser Iixiviados dos recipientes de vidro ou tampões de borracha ouestar presentes na água da bica usual. O agente pode agir como um agentede complexação competitivo com o fármaco e produzir um complexo de me-tal solúvel induzindo a presença de particulados indesejados.
Além disso, a presença de um agente, por exemplo, cloreto desódio em uma quantidade de cerca de 1 - 8 mg/ml, para ajustar a tonicidadeao mesmo valor do sangue humano pode ser requerida para evitar a dilata-çâo ou o encolhimento de eritrócitos na administração da íormuiação intra-venosa induzindo efeitos colaterais indesejados tal como náusea ou diarréiae possivelmente aos distúrbios sangüíneos associados. Em geral, a tonici-dade da formulação compara-se ao sangue humano que é na faixa de 282 a288 mOsm/kg, e em geral é 285 mOsm/kg, que é equivalente à pressão os-mótica correspondente a 0,9% de solução de cloreto de sódio.
A formulação intravenosa pode ser administrada por injeção in-travenosa direta, bolus i.v., ou pode ser administrada por infusão pela adiçãoa uma solução de infusão apropriada tal como 0,9% de injeção de cioreto desódio ou outra solução de infusão compatível.
As composições são preferivelmente formuladas em uma formade dosagem unitária, cada dosagem contendo de cerca de 5 a cerca de 100mg, mais normalmente cerca de 10 a cerca de 30 mg, do ingrediente ativo.
O termo "formas de dosagem unitárias" refere-se a unidades fisicamentediscretas adequadas como dosagens unitárias para indivíduos humanos eoutros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminadade material ativo calculado para produzir o efeito terapêutico desejado, emassociação com um excipiente farmacêutico adequado.
O conjugado é eficaz em uma faixa de dosagem ampla e é ge-ralmente administrada em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. Seráentendido, entretanto, que a quantidade do conjugado realmente administra-da será determinada por um médico, considerando as circunstâncias rele-vantes, incluindo a condição a ser tratada, a rotina escolhida de administra-ção, o composto real administrado, a idade, peso, e a resposta do pacienteindividual, a severidade dos sintomas do paciente, e similares.
Para preparar composições sólidas tais como comprimidos, oprincipal ingrediente ativo é misturado com um excipiente farmacêutico paraformar uma composição de preformulação sólida contendo uma mistura ho-mogênea de um composto da presente invenção. Quando referindo-se aestas composições de preformulação como homogêneas, significa que oingrediente ativo está disperso uniformemente através da composição paraque a composição possa ser facilmente subdividida em formas de dosagemunitária igualmente eficazes tais como comprimidos, píiuias e cápsuias. Esiapreformulação sólida é em seguida subdividida em formas de dosagem uni-tária do tipo acima descrito contendo de, por exemplo, 0,1 a cerca de 500mg do ingrediente ativo da presente invenção.
Os comprimidos ou pílulas da presente invenção podem ser re-vestidos ou de outra forma compostos para fornecer uma forma de dosagemfornecendo a vantagem de ação prolongada. Por exemplo, o comprimido oupílula pode compreender um componente de dosagem interno e um compo-nente de dosagem externo, o último sendo na forma de um envelope sobre oprimeiro. Os dois componentes podem ser separados por uma camada enté-rica que serve para resistir a desintegração no estômago e permitir o com-ponente interno passar intacto no duodeno ou ser retardado na liberação.Uma variedade de materiais pode ser empregada para tais camadas entéri-cas ou revestimentos, tais materiais incluindo diversos ácidos poliméricos emisturas de ácidos poliméricos com tais materiais como goma-laca, álcool decetila, e acetato de celulose.
As formas líquidas nas quais as novas composições da presenteinvenção podem ser incorporadas para administração oralmente ou por inje-ção incluem soluções aquosas xaropes adequadamente aromatizados, sus-pensões aquosas ou oleosas, e emulsões aromatizadas com óleos comestí-veis tais como óleo de semente de algodão, óleo de sésamo, óleo de coco,ou óleo de amendoim, bem como elixires e veículos farmacêuticos similares.
As composições para inalação ou insuflação incluem soluções esuspensões em solventes orgânicos ou aquosos farmaceuticamente aceitá-veis ou misturas destes, e pós. As composições líquidas ou sólidas podemconter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados como descritosupra. Preferivelmente as composições são administradas pela rotina respi-ratória oral ou nasal para efeito sistêmico ou local. As composições em sol-ventes farmaceuticamente aceitáveis preferivelmente podem ser nebulizadaspelo emprego de gases inertes. As soluções nebulizadas podem ser respira-das diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositivo de nebuliza-ção pode ser ligado a tenda de máscaras de face, ou máquina de respiraçãode pressão positiva intermitente. Solução, suspensão ou composições em pópodem ser administradas, preferivelmente oral ou nasalmente, a partir dedispositivos que liberam a formulação de uma maneira apropriada. Para ad-ministração em inalação ou insuflação, é preferido que o peso molecular to-tal do conjugado esteja entre cerca de 10.000 Dáltons e 70.000 Dáltons,mais preferivelmente entre cerca de 20.000 Dáltons e 45.000 Dáltons.
Conjugados de Polímero
Os compostos desta invenção quando formulados e administra-dos são conjugados de polímero. Os conjugados de polímero são antecipa-dos para fornecer benefícios sobre os polímeros não conjugados, tais comosolubilidade melhorada e estabilidade in vivo.
Como tal, a molécula de polímero única pode ser empregadapara conjugação com os compostos da presente invenção, embora sejatambém contemplado que mais do que uma molécula de polímero possa serligada também, tipicamente através de um veículo. Os compostos conjuga-dos da presente invenção podem encontrar utilidade em ambas aplicaçõesin vivo bem como não in vivo. Adicionalmente, será reconhecido que o polí-mero de conjugação pode utilizar quaisquer outros grupos, porções, ou ou-tras espécies de conjugado, quando apropriado à aplicação de uso final.
Como um exemplo, pode ser vantajoso em algumas aplicações funcionalizaro polímero para torná-lo reativo e permiti-lo conjugar um composto da fórmu-la Il e realçar várias propriedades ou características do material conjugadototal. Conseqüentemente, o polímero pode conter qualquer funcionalidade,grupos de repetição, ligações, ou outras estruturas constituintes que nãoimpeçam a eficácia dos compostos conjugados da presente invenção paraseu propósito pretendido.
Os polímeros ilustrativos que são vantajosamente empregadospara obter estas características desejáveis são supra descritos, bem comoem PCT WO 01/54690 (por Zheng e outros) incorporado por referência aquiem sua totalidade. O polímero pode ser acoplado aos compostos da presen-te invenção (preferivelmente por meio de uma porção ligadora) para formarligações estáveis que não são significantemente cliváveis por enzimas hu-manas. Gerairnenifci, para uma iiyaçãü não ser 'signiíiuaniemenie' ciiváveirequer que não mais do que cerca de 20% das ligações conectando o polí-mero e os compostos da presente invenção aos quais o polímero é ligado,sejam clivadas dentro de um período de 24 horas, como avaliado por técni-cas padrão na técnica incluindo, porém não limitado a, cromatografia líquidade pressão elevada (HPLC).
Geralmente, os compostos desta invenção contêm pelo menoscerca de 2 compostos da fórmula Il ligados a um polímero. A quantidade finalé um equilíbrio entre a maximização da extensão da reação ao mesmo tempoque minimizando as modificações não específicas do produto e, ao mesmotempo, definindo as químicas que manterão a atividade ideal, enquanto aomesmo tempo otimizando a meia-vida dos compostos da presente invenção.Preferivelmente, pelo menos cerca de 50% da atividade biológica dos com-postos da presente invenção é retida, e mais preferivelmente 100% é retida.
Como acima mencionado na prática preferida da presente in-venção, os resíduos de polialquileno glicol de C2-C4 alquil polialquileno gli-cóis, preferivelmente polietileno glicol (PEG)1 ou resíduos de po-li(óxi)alquileno glicol tais glicóis são vantajosamente incorporados nos siste-mas de polímero de interesse. Desse modo, o polímero ao qual os compos-tos da presente invenção são ligados pode ser um homopolímero de polieti-leno glicol (PEG) ou é um poliol polioxietilado, fornecido em todos os casosque o polímero é solúvel em água em temperatura ambiente. Exemplos nãoIimitantes de tais polímeros incluem homopolímeros de óxido de polialquile-no tais como PEG ou polipropileno glicóis, glicóis polioxietilenados, copolí-meros destes e copolímeros de bloqueio destes, contanto que a solubilidadeem água do copolímero de bloqueio seja mantida.
Exemplos de polióis polioxietilados incluem, porém não são limi-tados a, glicerol polioxietilado, sorbitol polioxietilado, glicose polioxietilado ousimilares. Á cadeia principal de glicerol de glicerol polioxietilado é a mesmacadeia principal de ocorrência natural em, por exemplo, animais e humanosem mono-, di-, e triglicerídeos. Portanto, esta ramificação não seria necessa-riamente vista como um agente estranho no corpo.Aqueles versados na técnica reconhecerão que a lista anterior émeramente ilustrativa e que todos os materiais de polímero tendo as quali-dades descritas aqui são contemplados. O polímero não precisa ter qualquerpeso molecular particular, porém é preferido que o peso molecular seja entrecerca de 100 e 100.000, preferivelmente de cerca de 10.000 a 80.000; maispreferivelmente de cerca de 20.000 a cerca de 70.000. Em particular, tama-nhos de 20.000 ou mais são mais eficazes na prevenção da perda do produ-to devido a filtração nos rins.
Por derivado de PEG é pretendido um polímero de polietilenoglicol no qual um ou ambos dos grupos hidroxila terminais encontrados nopróprio polietileno glicol foi modificado. Exemplos de modificações adequa-das incluem substituir um ou ambos grupos hidroxila com grupos funcionaisalternativos, os quais podem ser protegidos ou não protegidos, com Iigandosde peso molecular baixo, ou com outra macromolécula ou polímero. A modi-ficação dos grupos hidroxila terminais no polietileno glicol pode ser obtidareagindo-se o polietileno glicol com compostos compreendendo grupos fun-cionais reativos complementares, incluindo grupos funcionais que são capa-zes de passar por uma reação com os grupos hidroxila em polietileno glicol.
Os derivados de PEG dos compostos desta invenção podem conter um oumais substituintes de polietileno glicol (PEG) covalentemente ligados a elespor um grupo de ligação.
Os seguintes exemplos de formulação ilustram as composiçõesfarmacêuticas da presente invenção.
Exemplo de Formulação 1
Cápsulas de gelatina duras contendo os seguintes ingredientessão preparadas:
<table>table see original document page 69</column></row><table>
Os ingredientes acima são misturados e carregados em cápsu-las de gelatin duras em quantidades de 340 mg.Exemplo de Formulação 2
Uma fórmula de comprimido é preparada empregando-se os in-gredientes abaixo:
<table>table see original document page 70</column></row><table>
Os componentes são misturados e comprimidos para formarcomprimidos, cada um pesando 240 mg.
Exemplo de Formulação 3
Uma formulação inaladora em pó seca é preparada contendo osseguintes componentes:
<table>table see original document page 70</column></row><table>
O Ingrediente ativo é misturado com a Iactose e a mistura é adi-cionada a um instrumento de inalação em pó seco.
Exemplo de Formulação 4
Comprimidos, cada um contendo 30 mg de ingrediente ativo, sãopreparados como segue:
<table>table see original document page 70</column></row><table>O ingrediente ativo, amido e celulose são passados através deuma peneira US malha 20 e misturados cuidadosamente. A solução de poli-vinilpirrolidona é misturada com os pós resultantes, os quais são em seguidapassados através de uma peneira Ü.S. malha 16. Os grânulos assim produzi-dos são secos a 50°C a 60°C e passados através de uma peneira U. S. malha16. O carboximetil amido de sódio, estearato de magnésio, e talco, previa-mente passados através de uma peneira U. S. malha 30, são em seguida adi-cionados aos grânulos que, após misturar, são comprimidos em uma máquinade comprimido para produzir comprimidos cada um pesando 120 mg.
Exemplo de Formulação 5
Cápsulas, cada uma contendo 40 mg de medicamento são pro-duzidos como segue:
<table>table see original document page 71</column></row><table>
O ingrediente ativo, amido e estearato de magnésio são mistu-rados, passados através de uma peneira U. S. malha 20, e carregados emcápsulas de gelatina duras em quantidades de 150 mg.
Exemplo de Formulação 6
<table>table see original document page 71</column></row><table>
O ingrediente ativo é passado através de uma peneira U. S. ma-lha 60 e suspenso nos glicerídeos de ácido graxo saturado previamente fun-dido empregando-se o mínimo de calor necessário. A mistura é em seguidaderramada em um molde de supositório de capacidade nominal 2,0 g e dei-xada resíriar.Exemplo de Formulação 7
Suspensões, cada uma contendo 50 mg de medicamento por5,0 ml de dose são produzidas como segue:
<table>table see original document page 72</column></row><table>
O ingrediente ativo, sacarose e goma xantana são misturados,passados através de uma peneira U. S. malha 10, e em seguida misturadoscom uma solução previamente produzida da celulose microcristalina e car-boximetil celulose de sódio em água. O benzoato de sódio, sabor, e corantesão diluídos com um pouco de água e adicionados com agitação. Água sufi-ciente é em seguida adicionado para produzir o volume requerido.
Exemplo de Formulação 8
<table>table see original document page 72</column></row><table>
O ingrediente ativo, amido, e estearato de magnésio são mistu-rados, passados através de uma peneira U. S. malha 20, e carregados emcápsulas de gelatina duras em quantidades de 425,0 mg.
Exemplo de Formulação 9
Uma formulação subcutânea pode ser preparada como segue:
<table>table see original document page 72</column></row><table>Exemplo de Formulação 10
Uma formulação tópica pode ser preparada como segue:
<table>table see original document page 73</column></row><table>
A parafina macia branca é aquecida até derreter-se. A parafinalíquida e a cera emulsificante são incorporados e agitados até dissolver. Oingrediente ativo é adicionado e a agitação continuada até dispersar. A mis-tura é em seguida resfriada até solidificar.
Exemplo de Formulação 11
Uma formulação intravenosa pode ser preparada como segue:
<table>table see original document page 73</column></row><table>
Outra formulação preferida empregada nos métodos da presenteinvenção emprega dispositivos de liberação transdérmica ("emplastros").
Tais emplastros transdérmicos podem ser empregados para fornecer infusãocontínua ou descontínua dos compostos da presente invenção em quantida-des controladas. A construção e o emprego de emplastros transdérmicospara a liberação de agentes farmacêuticos são bem-conhecidos na técnica.
Ver, por exemplo, Patente dos Estados Unidos 5.023.252, emitida em 11 dejunho de 1991, aqui incorporada por referência. Tais emplastros podem serconstruídos por liberação contínua, pulsátil ou em demanda de agentes far-macêuticos.
Freqüentemente, será desejável ou necessário introduzir a com-posição farmacêutica ao cérebro, diretamente ou indiretamente. As técnicasdiretas normalmente envolvem a colocação de um cateter de liberação defármaco no sistema de ventricular do hospedeiro para desviar a barreira he-matoencefálica. Um tal sistema de liberação implantável empregado para oiransporte ae fatores biológicos para regiões anatômicas específicas ao cor-po é descrito na Patente dos Estados Unidos ne 5.011.472 que é incorpora-da aqui por referência.
Técnicas indiretas, que são geralmente preferidas, normalmenteenvolvem formular as composições para fornecer durante a latentiação defármaco pela conversão de fármacos hidrofílicos em fármacos solúveis emlipídeo. A latentiação é geralmente alcançada através do bloqueio do hidróxi,carbonila, sulfato, e grupos amina primária presentes no fármaco para tornaro fármaco mais solúvel em lipídeo e receptível ao transporte através da bar-reira hematoencefálica. Alternativamente, a distribuição de fármacos hidrofí-licos pode ser alcançada por infusão intra-arterial de soluções hipertônicasque podem transitoriamente abrir a barreira hematoencefálica.
Outras formulações adequadas para o emprego na presente in-venção podem ser encontradas em Remington's Pharmaceutical Sciences,Mace Publishing Company, Filadélfia, PA, 17ã edição (1985).
Como acima mencionado, os compostos descritos aqui são ade-quados para o emprego em uma variedade de sistemas de distribuição defármaco acima descritos. Adicionalmente, a fim de realçar a meia-vida desoro in vivo do composto administrado, os compostos podem ser encapsula-dos, introduzidos lúmen de lipossomas, preparados como um colóide, ououtras técnicas convencionais podem ser empregadas, as quais fornecemuma meia-vida.de soro extendida dos compostos. Uma variedade de méto-dos está disponível para preparar lipossomas, como descrito em, por exem-plo, Szoka, e outros, Patentes dos Estados Unidos nos 4.235.871, 4.501.728e 4.837.028 cada uma é incorporada aqui por referência.
Utilidade
Os conjugados desta invenção são antagonistas de VLA-4. Al-guns também possuem pelo menos uma afinidade parcial para intergrinas dealfa4 beta7. Os conjugados fornecem retenção in vivo realçada quandocomparados aos compostos não conjugados. A retenção melhorada do con-jugado dentro do corpo resulta em dosagens inferiores requeridas do fárma-co, as quais sucessivamente resultam em efeitos colaterais menores e pos-sibilidade reduzida de toxicidade. Aiém disso, a formulação ae fármaco podeser administrada menos freqüentemente ao paciente ao mesmo tempo queobtendo um efeito terapêutico melhorado ou similar.
Os conjugados desta invenção possuem inibição melhorada, invivo, de adesão de leucócitos às células endoteliais mediada pela inibição daligação de alfa4 betai ou alfa4 beta7 aos receptores celulares tal comoVCAM-1. Fibronectina e MadCAM. Preferivelmente, os conjugados destainvenção podem ser empregados, por exemplo, por irnfusão, ou por injeçãosubcutânea ou administração oral, para o tratamento de doenças mediadaspor alfa4 betai ou alfa4 beta7 ou, em termos gerais, adesão de leucócito. Osconjugados da invenção podem ser empregados para tratar uma variedadede distúrbios cerebrais inflamatórios, especialmente distúrbios do sistemanervoso central nos quais o mecanismo de adesão de endotélio/leucócitoresulta na destruição de tecido cerebral de outro modo saudável. Desse mo-do, os conjugados da invenção podem ser empregados para, por exemplo, otratamento de encefalomielite autoimune experimental (EAE)1 esclerose múl-tipla (MS), meningite, e encefalite.
Os conjugados da invenção podem também ser empregadospara tratar distúrbios e doenças devido ao dano ao tecido em outros siste-mas de órgão, isto é, onde o dano ao tecido também ocorre por meio de ummecanismo de adesão resultando na migração ou ativação de leucócitos.Exemplos de tais doenças em pacientes mamíferos são doenças inflamató-rias tais como asma, doença de Alzheimer, aterosclerose, demência deAIDS, diabetes (incluindo diabetes de início juvenil aguda), doença do intes-tino inflamatória (incluindo colite ulcerativa e doença de Crohn), artrite reu-matóide, rejeição de transplante de tecido, metastase de tumor, acidentevascular cerebral e outros traumas cerebrais, nefrite, retinite, dermatite ató-pica, psoríase, isquemia do miocárdio e dano de pulmão mediado por leucó-cito tal como aquele que ocorre na síndrome de dificuldade respiratória deadulto.
Ainda outras condições de doença que podem ser tratadas em-pregando-se os conjugados da invenção incluem eritema nodoso, conjuntivi-te alérgica, neurite óptica, uveíte, riniíe alérgica, espondiiite anciíosanie, arlri-te psoriática, vasculite, síndrome de Reiter, Iupus eritematoso sistêmico, es-clerose sistêmica progressiva, polimiosite, dermatomiosite, granulomatosede Wegner, aortite, sarcoidose, linfocitopênia, arterite temporal, pericardite,miocardite, insuficiência cardíaca congestiva, poliarterite nodosa, síndromesde hipersensibilidade, alergia, síndromes hipereosinofílica, síndrome deChurg-Strauss1 doença pulmonar obstrutiva crônica, pneumonite de hiper-sensibilidade, hepatite ativa crônica, cistite intersticial, insuficiência endócri-na autoimune, cirrose biliar primária, anemia aplástica autoimune, tiroidite ehepatite persistente crônica.
A invenção também fornece métodos para tratar um estado cau-sado ou exacerbado pelo menos em parte pela ligação de leucócito mediadapor alfa 4 integrina em um paciente, os quais métodos compreendem a co-administração de uma quantidade eficaz de um conjugado da invenção, porexemplo, um conjugado da Fórmula I, e uma quantidade eficaz de um com-posto separado que é um inibidor de OS7. A co-administração pode ser rea-lizada simultaneamente ou seqüencialmente. Por exemplo, a administraçãodo conjugado da invenção pode preceder a administração do inibidor deOc4B7 por minutos ou horas. Alternativamente, o inibidor de α &7 pode seradministrado antes do conjugado da invenção.
Nos modelos apropriados in vivo para demonstrar a eficácia notratamento de respostas inflamatórias incluem EAE (encefalomielite autoi-mune experimental) em camundongos, ratos, porquinhos-da-índia ou prima-tas, bem como outros modelos inflamatórios dependentes de a4 integrinas.
Doença do intestino inflamatória é um termo coletivo para duas doenças si-milares referidas como doença de Crohn e colite ulcerativa. Doença deCrohn é uma doença inflamatória ulceroconstritiva crônica, idiopática carac-terizada pelo envolvimento transmural tipicamente e agudamente delimitadode todas as camadas da parede do intestino por uma reação inflamatóriagranulomatosa. Qualquer segmento do trato gastrointestinal, da boca ao â-nus, pode estar envolvido, embora a doença mais comumente afete o íleoterminal e/ou cólon. Colite ulcerativa é uma resposta inflamatória largamentelimitada à submuccsa e a mucosa colônica. Os iiníócitos e ou macróíagossão numerosos nas lesões da doença do intestino inflamatória e podem con-tribuir ao dano inflamatório.
A asma é uma doença caracterizada pela sensibilidade aumen-tada da árvore traqueobronquial para constrição paroxísmica de potenciali-zação de vários estímulos das vias aéreas bronquiais. Os estímulos causama liberação de vários mediadores de inflamação de mastócitos revestidos porIgE incluindo histamina, fatores quimiotáticos neutrofílicos e eosinofílicos,leucotrinas, prostaglandina e fator de ativação de plaqueta. A liberação des-tes fatores restabelece os basófilos, eosinófilos e neutrófilos, os quais cau-sam dano inflamatório.
Aterosclerose é uma doença das artérias (por exemplo, coroná-ria, carótida, aorta e ilíaco). A lesão básica, o ateroma, consiste de uma pla-ca focai aumentada dentro da íntima, tendo um núcleo de lipídeo e um re-vestimento de estrutura fibrosa. Ateromas comprometem o fluxo sangüíneoarterial e enfraquecem as artérias afetadas. Infartos cerebrais e do miocárdiosão a maior conseqüência desta doença. Os macrófagos e os leucócitos sãorecrutados para ateromas e contribuem para lesão inflamatória.
A artrite reumatóide é uma doença inflamatória reincidente crô-nica que primariamente causa o comprometimento e a destruição de juntas.Artrite reumatóide normalmente primeiro afeta as juntas pequenas das mãose pés porém, em seguida pode envolver os pulsos, cotovelos, tornozelos ejoelhos. A artrite resulta da interação de células sinoviais com os leucócitosque infiltram-se da circulação para dentro do revestimento sinovial das jun-tas. Ver, por exemplo, Paul, Immunology (3ã edição, Raven Press, 1993).
Outra indicação para os conjugados desta invenção está no tra-tamento de rejeição de enxerto ou órgão mediada por VLA-4. Durante osúltimos anos houve uma considerável melhora na eficiência das técnicascirúrgicas para os órgãos e tecidos de transplante tais como pele, rim, fíga-do, coração, pulmão, pâncreas e medula óssea. Talvez o principal problemaem destaque é a falta de agentes satisfatórios para induzir a imunotolerânciano recipiente para o órgão ou aloenxerto transplantado. Quando os órgãosou células aiogênicas sao transplantados em um hospedeiro (isto é, o doa-dor e o donatário são diferentes indivíduos da mesma espécie), o sistemaimune do hospedeiro é provavelmente para aumentar uma resposta imunepara os antígenos estranhos no transplante (doença hopedeiro-versus-enxerto) induzindo a destruição do tecido transplantado. As células CD8+,células CD4 e os monócitos estão todos envolvidos na rejeição dos tecidosde transplante. Os conjugados desta invenção os quais ligam-se à integrinaalfa-4 são úteis, entre outras coisas, para bloquear as respostas imune indu-zidas por aloantígeno no donatário desse modo impedindo tais células departicipar na destruição do órgão ou tecido transplantado. Ver, por exemplo,Paul e outros, Transplant International 9, 420-425 (1996); Georczynski e ou-tros, Immunology 87, 573-580 (1996); Georcyznski e outros, Transplant. Im-munol. 3, 55-61 (1995); Yang e outros, Transplantation 60, 71-76 (1995);Anderson e outros, APMIS 102, 23-27 (1994).
Um emprego relatado para os conjugados desta invenção queligam-se a VLA-4 é na modulação de resposta imune envolvida na doençaenxerto versus hospedeiro (GVHD). Ver, por exemplo, Schlegel e outros, J.Immunol. 155, 3856-3865 (1995). GVHD é uma doença potencialmente fatalque ocorre quando as células imunologicamente competentes são transferi-das a um recipiente alogenéico. Nesta situação, as células imunocompeten-tes de doador podem atacar os tecidos no receptor. Os tecidos da pele, epi-télios do intestino e fígado são alvos freqüentes e podem ser destruídos du-rante o curso de GVHD. A doença apresenta um problema especialmentesevero quando o tecido imune está sendo transplantado, tal como no trans-plante de medula óssea; porém GVHD menos severo também foi reportadoem outros casos também, incluindo transplantes de coração e fígado. Osagentes terapêuticos da presente invenção são empregados, entre outros,para bloquear a ativação das células T de doador desse modo interferindocom sua capacidade de Iisar as células-alvo no hospedeiro.
As formulações da presente invenção são especialmente úteisno tratamento de esclerose múltipla, artrite reumatóide e asma.
Um outro emprego dos conjugados desta invenção é inibir a me-tastase. Várias células de tumor foram reportadas expressar VLA-4 e com-postos que ligam-se a VLA-4 para bloquear a adesão de tais células às célu-las endoteliais. Steinback e outros, Urol. Res. 23, 175-83 (1995); Orosz eoutros, Int. J. Câncer 60, 867-71 (1995); Freedman e outros, Leuk. Lympho-ma 13, 47-52 (1994); Okahara e outros, Câncer Res. 54, 3233-6 (1994).
Os compostos tendo a atividade biológica desejada podem sermodificados quando necessário para fornecer as propriedades desejadastais como propriedades farmacológicas melhoradas (por exemplo, estabili-dade in vivo, biodisponibilidade), ou a capacidade de ser detectados nas a-plicações de diagnóstico. A estabilidade pode ser ensaiada em uma varieda-de de formas tais como avaliando-se a meia-vida das proteínas durante aincubação com peptidases ou soro ou plasma humano. Diversos de tais en-saios de estabilidade de proteína foram descritos (ver, por exemplo, Verhoefe outros, Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet., 1990, 15(2):83-93).
Um outro emprego dos conjugados desta invenção é no trata-mento de esclerose múltipla. A esclerose múltipla é uma doença autoimuneneurológica progressiva que afeta uma estimativa de 250.000 a 350.000pessoas nos Estados Unidos. A esclerose múltipla é suposta ser o resultadode uma reação autoimune específica na qual certos leucócitos atacam e ini-ciam a destruição de mielina, fibras de nervo de revestimento de bainha deisolamento. Em um modelo animal para esclerose múltipla, os anticorposmonoclonais de murino direcionados contra VLA-4 mostraram bloquear aadesão dos leucócitos ao endotélio, e desse modo prevenir a inflamação dosistema nervoso central e subseqüente paralisia nos animais16.
As composições farmacêuticas da invenção são adequadas parao emprego em uma variedade de sistemas de liberação de fármaco. As for-mulações adequadas para o emprego na presente invenção são encontra-das em Remington1S Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Company,Filadélfia, PA, 17ã edição (1985).
A quantidade administrada ao paciente variará dependendo doque está sendo administrado, o propósito da administração, tal como profila-xia ou terapia, o estado do paciente, a maneira de administração, e simila-res. Nos aplicações terapêuticas, as composições são administradas & umpaciente já sofrendo de uma doença em uma quantidade suficiente para cu-rar ou pelo menos parcialmente controlar os sintomas da doença e suascomplicações. Uma quantidade adequada para realizar isto é definida como"dose terapeuticamente eficaz". As quantidades eficazes para este empregodependerá na condição da doença sendo tratada bem como o julgamento doatendente clínico dependendo dos fatores tais como a severidade da infla-mação, a idade, o peso e a condição geral do paciente, e similares.
As composições administradas a um paciente são na forma decomposições farmacêuticas descritas acima. Estas composições podem seresterilizadas por técnicas de esterilização convencionais, ou podem ser fil-tradas estéreis. As soluções aquosas resultantes podem ser embaladas parao emprego como são, ou liofilizadas, a preparação Iiofilizada sendo combi-nada com um veículo aquoso estéril antes da administração.
A dosagem terapêutica dos conjugados da presente invençãovariará de acordo com, por exemplo, o emprego particular para o que o tra-tamento é feito, a maneira de administração do conjugado, a saúde e a con-dição do paciente, e o julgamento do médico prescrevente. Por exemplo,para administração intravenosa, a dose tipicamente será na faixa de cercade 20 pg a cerca de 2000 pg por quilograma de peso corporal, preferivel-mente de cerca de 20 pg a cerca de 500 pg, mais preferivelmente de cercade 100 pg a cerca de 300 pg por quilograma de peso corporal. As faixas dedosagem adequadas para administração intranasal são geralmente de cercade 0,1 pg a 1 mg por quilograma de peso corporal. As doses eficazes podemser extrapoladas das curvas de resposta de dose derivadas dos sistemas deteste de modelo animal ou in vitro.
Os conjugados desta invenção são também capazes de ligar-seou antagonizar as ações das integrinas α6βι, α9β-ι, α4β7, αΰβ2, αββ7 (emboraα4βι e C^1 são preferidas nesta invenção). Conseqüentemente, os conjuga-dos desta invenção são também úteis para prevenir ou reverter os sintomas,distúrbios ou doenças induzidas pela ligação destas integrinas aos seus res-pectivos ligandos.Por exemplo, o Número de Publicação Internacional WO98/53817, publicado em 3 de dezembro de 1998 (a descrição do qual é in-corporada aqui por referência em sua totalidade) e as referências citadasaqui descrevem distúrbios mediados por α4β7. Esta referência também des-creve um ensaio para determinar antagonismo de ligação dependente deα4β7 à proteína de fusão VCAM-lg.
Adicionalmente, os compostos que ligam-ise as integrinas adP2 eαββ7 são particularmente úteis no tratamento de asma e doenças de pulmãorelacionadas. Ver, por exemplo, Μ. H. Grayson e outros, J. Exp. Med. 1998,708(11) 2187-2191. Os compostos que ligam-se à integrina αββ7 são tam-bém úteis para o tratamento de Iupus eritematoso sistêmico (ver, por exem-plo, M. Pang e outros, Arthritis Rheum. 1998, 41(8), 1456-1463); doença deCrohn, colite ulcerativa e doença do intestino inflamatória (IBD) (ver, por e-xemplo, D. Elewaut e outros, Scand J. Gastroenterol 1998, 33(7) 743-748);síndrome de Sjogren (ver, por exemplo, U. Kroneld e outros, Scand J. Gas-troenterol 1998, 27(3), 215-218); e artrite reumatóide (ver, por exemplo,Scand J. Gastroenterol 1996, 44(3), 293-298). E os compostos que ligam-sea α6βι podem ser úteis na prevenção da fertilização (ver, por exemplo, H.Chen e outros, Chem. Biol. 1999, 6, 1-10).
Em outro aspecto da invenção, os conjugados e as composiçõesdescritas aqui podem ser empregadas para inibir a migração celular imuneda corrente sangüínea ao sistema nervoso central no caso de, por exemplo,esclerose múltipla, ou para áreas que resultam na destruição induzida infla-matória da mielina. Preferivelmente1 estes reagentes inibem a migração ce-lular imune de uma manéira que inibe a desmielinação e que também podempromover a remielinação. Os reagentes podem também prevenir a desmieli-nação e promover a remielinação do sistema nervoso central para distúrbiosmetabólicos congênitos nos quais a infiltração de células imune afetam odesenvolvimento da bainha de mielina, principalmente no CNS. Os reagen-tes preferivelmente também reduzem a paralisia quando administrados a umindivíduo com paralisia induzida por uma condição ou doença de desmieli-nação.As doenças inflamatórias que são incluídas para o tratamentopelas composições, conjugados e métodos descritos aqui incluem geralmen-te condições relacionadas à desmielinação. Histologicamente, as anormali-dades de mielina são desmielinação ou dismielinação. A desmielinação im-plica na destruição de mielina. A dismielinação refere-se a formação defeitu-osa ou a manutenção de mielina resultante da disfunção dos oligodendróci-tos. Preferivelmente, as composições e os métodos descritos aqui são con-templados para tratar doenças e condições relacionadas a desmielinação eajudar com remielinação. As condições ou doenças adicionais contempladaspara o tratamento incluem meningite, encefalite, e lesões na medula espi-nhal e as condições geralmente que induzem a desmielinação como um re-sultado de uma resposta inflamatória. Os conjugados, composições e méto-dos descritos aqui não são direcionados para doenças e condições ondeexista, por exemplo, um defeito genético induzindo a formação de mielinainadequada, por exemplo, dismielinação.
As composições, conjugados e coquetéis descritos aqui são con-templados para o emprego no tratamento das condições e doenças associa-das com desmielinação. As doenças e condições envolvendo a desmielina-ção incluem, porém não são limitadas a, esclerose múltipla, distúrbios meta-bólicos congênitos (por exemplo, fenilcetonúria, doença de Tay-Sachs, do-ença de Niemann-Pick, doença de Gaucher, síndrome de Hurler, doença deKrabbe e outras leucodistrofias), neuropatias com mielinaçãó anormal (porexemplo, Guillain Barré, polineuropatia de desmielinação imune crônica(CIDP), CIDP multifocal, síndrome anti-MAG, síndrome de GALOP, síndro-me de anticorpo anti-sulfatídeo, síndrome de anticorpo anti-GM2, síndromede POEMS, perineurite, síndrome de anticorpo IgM anti-GD1b), desmielina-ção relacionada a fármaco (por exemplo, causada pela administração decloroquina, FK506, perhexilina, procainamida, e zimeldina), outras condiçõesde desmielinação hereditária (por exemplo, glicoproteína deficiente de car-boidrato, síndrome de Cockayne, hipomielinação congênita, distrofia muscu-lar congênita, doença de Farber, síndrome de Marinesco-Sjõgren, Ieucodis-trofis rnetacrornatica, doença de Pclizaeus-Merzbacher, doença de Reísum,condições relacionadas a priônio, e doença de Salla) e outras condições dedesmielinação (por exemplo, meningite, encefalite ou lesão de medula espi-nhal) ou doenças.
Existem vários modelos de doença que podem ser empregados para estudarestas doenças in vivo. Por exemplo, modelos de animal incluem porém nãosão limitados a:
Tabela Ill
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Esclerose múltipla
A doença de desmielinação mais comum é esclerose múltipla,mas muitos outros distúrbios metabólicos e inflamatórios resultam na mieli-nação deficiente ou anormal. MS é um distúrbio neurológico crônico, queaparece na maioridade precoce e progride para uma inaptidão significantena maioria dos casos. Há aproximadamente 350.000 casos de MS só nosEstados Unidos. Fora do trauma, MS é a causa mais freqüente de inaptidãoneurológica na maioridade precoce a mediana.
A causa de MS ainda será determinada. MS é caracterizada porinflamação crônica, desmielinação e gliose (cicatrização). A desmielinaçãopode resultar em efeitos negativos ou positivos sobre a condução axonal.
Anormalidades de condução positivas incluem condução axonal reduzida,bloco de condução variável que ocorre na presença de séries de freqüêncianão baixa porém impulsos ou bloco de condução completo. Anormalidadesde condução positivas incluem geração de impulso ectópico, espontanea-mente ou depois de tensão mecânica e "interferências" anormais entre é-xons de desmielinação.
Céiuias T reativas contra proteínas de mieiina, proteína básicade mielina (MBP) ou proteína de proteolípidio de mielina (PLP) foram obser-vadas para mediar a inflamação de CNS em encefalomielite alérgica experi-mental. Pacientes também foram observados como tendo níveis elevados deimunoglobulina (Ig) de de CNS. É também possível que algum dano ao teci-do observado na MS seja mediado por produtos de citocina de células T ati-vadas, macrófagos ou astrócitos.
Hoje, 80% de pacientes diagnosticados com MS vivem 20 anosdo início da doença. Terapias para administrar a MS incluem: (1) tratamentodirecionado na modificação do curso da doença, incluindo tratamento de e-xacerbação aguda e direcionado à supressão à longo prazo da doença; (2)tratamento dos sintomas de MS; (3) prevenção e tratamento de complica-ções médicas; e (4) administração de problemas sociais e pessoais secun-dários.
O início da MS pode ser dramático ou tão moderado quanto paranão fazer com que o paciente busque atenção médica. Os sintomas maiscomuns incluem fraqueza em um ou mais membros, obscurecimento visualdevido à neurite ótica, perturbações sensórias, diplopia e ataxia. O curso dadoença pode ser estratificado em três categorias gerais: (1) MS reincidente,(2) MS progressiva crônica e (3) MS inativa. MS reincidente é caracterizadapor ataques periódicos de disfunção neurológica. Ataques de MS geralmenteevoluem durante dias a semanas e podem ser seguidos por nenhuma recu-peração, parcial ou complete. Recuperação de ataques geralmente ocorredentro de semanas a vários meses a partir do pico de sintomas, embora ra-ramente alguma recuperação possa continuar durante 2 ou mais anos.
MS progressiva crônica resulta no agrávamento gradualmenteprogressivo sem períodos de estabilização ou remissão. Esta forma desen-volve em pacientes com uma história anterior de MS reincidente, embora em20% de pacientes, nenhuma recaída pode ser registrada. Recaídas agudaspodem da mesma forma ocorrer durante o curso progressivo.
Uma terceira forma é MS inativa. MS inativa é caracterizada pordéficits neurológicos de magnitude variável. A maioria dos pacientes comMS inativa tern uma história rnais precoce de MS reincidente.Curso da doença é da mesma forma dependente da idade dopaciente. Por exemplo, fatores prognósticos favoráveis incluem início maisprecoce (excluindo infância), um curso reincidente e pouca inaptidão residualanos depois do início. Ao contrário, prognóstico pobre está associado comuma idade tardia do início (isto é, 40 anos de idade ou mais velho) e um cur-so progressivo. Estas variáveis são interdependentes, desde que MS pro-gressiva crônica tenda a começar em uma idade posterior que a MS reinci-dente. Inaptidão de MS progressiva crônica normalmente é devido a para-plegia progressiva ou quadriplegia (paralisia) em pacientes. Em um aspectoda invenção, pacientes serão preferivelmente tratados quando o pacienteestá em remissão em vez de um estágio reincidente da doença.
Uso a curto prazo de hormônio adrenocorticotrópico ou corticos-teróides orais (por exemplo, prednisona oral ou metilprednisolona intraveno-sa) é a única medida terapêutica específica para tratar os pacientes comexacerbação aguda de MS.
Terapias mais novas para MS incluem o tratamento do pacientecom interferon beta-1b, interferon beta-1a e Copaxone® (antigamente co-nhecido como copolímero 1). Estes três fármacos foram mostrados reduzirsignificativamente a taxa de recaída da doença. Estes fármacos são auto-administrados intramuscularmente ou subcutaneamente.
Porém, nenhuma das modalidades de tratamento atuais inibe adesmielinação, muito menos promove ou permite a remielinação espontâneaou reduz a paralisia. Um aspecto da invenção considera o tratamento de MScom agentes descritos aqui sozinhos ou em combinação com outras modali-dades de tratamento padrões.
Distúrbios Metabólicos Congênitos
Distúrbios metabólicos congênitos incluem fenilcetonúria (PKU)e outras aminoacidúrias, doença de Tay-Sachs, doença de Niemann-Pick,doença de Gaucher, síndrome de Hurler, doença de Krabbe e outras Ieuco-distrofias que impactam a bainha em desenvolvimento como descrito maiscompletamente abaixo.
PKU é um erro herdado du metabolismo causado por uma defi-ciência na enzima fenilalanina hidroxilase. Perda desta enzima resulta emretardo mental, dano ao órgão, postura incomum e pode, em casos de PKUmaterno, comprometer severamente a gravidez. Um modelo para estudarPKU foi descoberto em camundongos. Preferivelmente crianças identificadascom PKU são sustentadas em uma dieta com baixo teor ou sem fenilalanina.
Um aspecto da invenção seria combinar tais dietas com os conjugados ecomposições descritos aqui para prevenir a desmielinação e células remieli-nadas danificadas devido ao PKU.
Doença de Tay-Sachs clássica aparece no indivíduo em torno de6 meses de idade e resultará eventualmente na morte do indivíduo de 5 a-nos de idade. A doença é devido à falta da enzima, hexoaminidase A (hexA), que é necessário para degradar certas substâncias gordurosas no cére-bro e células nervosas. As substâncias na ausência da enzima acumulam elevam à destruição de células nervosas. Outra forma de deficiência de enzi-ma hex A ocorre depois em vida e é referida como formas de início em jo-vens, crônicas e adultos de deficiência em hex A. Sintomas são similaresàqueles que caracteriza a doença de Tay-Sachs clássica. Há da mesmaforma uma forma de início em adulto da deficiência da enzima. Atualmentenão há nenhuma cura ou tratamento para á doença/deficiência, apenas amedida preventiva de em teste in utero do feto para a doença. Desse modo,os conjugados e composições descritos aqui podem ser úteis na melhora ouprevenção da destruição de células nervosas em tais pacientes.
Doença de Niemann-Pick entra em três categorias: a forma in-fantil aguda, Tipo B é uma forma menos comum, forma não neurológica,crônica, e Tipo G é uma forma bioquimícamente e geneticamente distinta dadoença. Em um indivíduo normal, colesterol celular é importado em Iisosso-mas para processar, depois que é libertado. Células tiradas de indivíduoscom Niemann-Pick mostraram ser defeituosas na liberação do colesterol apartir de lisossomas. Isto leva a uma formação excessiva de colesterol den-tro de lisossomas, causando erros de processo. NPC1 foi constatado ter re-giões sensíveis ao esterol conhecidas similares àquelas em outras proteí-nas, que sugerem que desempenhe um papei no regulamento do iráíego decolesterol. Nenhuma terapia bem-sucedida foi identificada para formas deTipo A e C de Neumann-Pick. Para Tipo C, pacientes são recomendadosseguir uma dieta com baixo teor de colesterol. Desse modo, os conjugados ecomposições descritos aqui podem ser úteis na melhora ou prevenção dadestruição das células.
A doença de Gaucher é uma doença herdada causada por umamutação de gene. Normalmente, este gene é responjsável por uma enzimachamada glicocerebrosidase em que o corpo necessita decompor a gordura,glicocerebrosídeo. Em pacientes com a doença de Gaucher, o corpo não écapaz de corretamente produzir esta enzima e a gordura não pode ser de-composta. Doença como Tay-Sachs, doença de Gaucher é consideravel-mente mais comum nos descendentes de pessoas judias da Europa Oriental(Ashkenazi), embora os indivíduos de qualquer grupo étnico possam ser afe-tados. Entre a população judia de Ashkenazi, a doença de Gaucher é o dis-túrbio genético mais comum, com uma incidência de aproximadamente 1entre 450 pessoas. No público geral, a doença de Gaucher afeta aproxima-damente 1 entre 100.000 pessoas.
Em 1991, a terapia de substituição de enzima tornou-se disponí-vel como o primeiro tratamento eficaz para a doença de Gaucher. O trata-mento consiste em uma forma modificada da enzima glicocerebrosidase de-terminada intravenosamente. É considerado que as composições e conjuga-dos descritos aqui podem ser empregados sozinhos ou mais preferivelmentede mais em combinação com administração de glicocerebrosidase para tra-tar a doença em um indivíduo afligido.
Síndrome de Hurler, da mesma forma conhecida como mucopo-Iissacaridose tipo I, é uma classe de sobreposição de doenças. Estas doen-ças genéticas em comum o acúmulo celular de mucopolissacarídeos em fi-broblastos. As doenças são geneticamente distinguíveis. Transplante de me-dula óssea e fibroblasto não parece ser útil, desse modo, conjugados e com-posições úteis na melhora do progresso e severidade da doença são neces-sários. Os conjugados e composições descritos aqui podem ser administra-dos a um indivíduo para melhorar o pioyiesso e/uu severidade a doença.A doença de Krabbe (da mesma forma conhecida como Ieuco-distrofia de célula Globoid) é uma condição recessiva autossômica que re-sulta da deficiência de galactosilceramidase (ou galactocerebrosidase), umaenzima lisossômica que catabolisa um componente de lipídio principal demielina. Incidência na França é 1:150.000 nascimentos estimados. A doençaleva à desmielinação do sistema nervoso central e periférico. Início geral-mente ocorre durante o primeiro ano de vida e a condição é rapidamenteprogressiva, mas formas com início em jovem, adolescente ou adulto foramda mesma forma relatadas, com uma taxa mais variável de progresso. Diag-nóstico é estabelecido a partir de ensaio de enzima (deficiência de galacto-silceramidase). Há vários modelos animais naturais (camundongo, cachorro,macaco). A doença de Krabbe, como todas as leucodistrofias, não tem curaconhecida ou tratamentos eficazes. Uma modalidade da presente invenção éusar as composições e conjugados descritos aqui para tratar ou melhorar adoença de Krabbe e outras leucodistrofias.
Leucodistrofias são um grupo de distúrbios progressivos geneti-camente determinados que afetam o cérebro, medula espinhal e nervos peri-féricos. Elas incluem adrenoleucodistrofia (ALD), adrenomieloneuropatia(AMN), síndrome de Aicardi-Goutiers, doença de Alexander, CACH (isto é,ataxia da infância com hipomielinação de sistema nervoso central ou doençade substância branca evanescente ), CADASIL (isto é, arteriopatia dominan-te autossômica cerebral com infartos subcorticais e leucoencèfalopátia), do-ença de Canavan (degeneração esponjosa), Xantomatose Cerebrotendinosa(CTX), doença de Krabbe (discutida acima), Ieucodistrofia metacromática(MLD), adrenoleucodistrofia neonatal, síndrome de ovarioleucodistrofia, dõ-ença de Pelizaeus-Merzbacher (paraglegia espástica ligada a X), doença deRefsum, síndrome de van der Knaap (leucodistrofia de vacuolação com cis-tos subcorticais) e síndrome de Zellweger.
Nenhuma das doenças tem tratamentos eficazes que permitamsozinhos curas. Por conseguinte, meios de tratar ou melhorar os sintomasda doença, tal como empregando-se as composições e conjugados descritosaqui, são necessários.Neuropatias com Mielinacão Anormal
Uma variedade de polineuropatias imunes crônicas existe queresultam em desmielinação no paciente. A idade do início para as condiçõesvaria por condição. Tratamentos padrões para estas doenças existem e po-dem ser combinados com as composições e conjugados descritos aqui. Al-ternativamente, as composições e conjugados descritos podem ser empre-gados sozinhos. Terapias padrões existentes incluem as seguintes:
Tabela IV
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Desmielinação Induzida por Fármaco e Radiação
Certos fármacos e radiação podem induzir a desmielinação emindivíduos. Fármacos que são responsáveis por desmielinação incluem po-rém não são limitados a cloroquina, FK506, perexilina, procainamida e zi-meldina.
Radiação da mesma forma pode induzir a desmielinação. Acre-dita-se que a toxicidade do sistema nervoso central (CNS) devido à radiaçãoseja a causa por (1) dano às estruturas do vaso, (2) deleção de progenitoresde astrócito de oligodendrócito-2 e oligodendrócitos maduros, (3) deleção depopulações de célula tronco neurais no hipocampo, cerebelo e córtex, e alte-rações generalizadas de expressão de citocina. A maioria do dano de radia-ção resulta de radioterapias administradas durante o tratamento de certoscânceres. Veja para revisão Belka e outros, 2001 Br. J. Câncer 85: 1233-9.
Porém, exposição à radiação pode da mesma forma ser uma questão paraastronautas (Hopewell, 1994 Adv. Space Res. 14: 433-42) como também nocaso de exposição à substâncias radioativas.
Pacientes que receberam fármacos ou foram acidentalmente ouintencionalmente expostos à radiação podem experimentar um benefício poradministração de um dos conjugados ou composições descritos aqui paraprevenir a desmielinação ou promover a remielinação.
Condições que Envolvem Desmielinacão
Síndromes/doenças herdadas adicionais que resultam na des-mielinação incluem a síndrome de Cockayne, hipomielinação congênita, do-ença de Farber, Ieucodistrofia metacromática, dQença de Peliszaeus-Merzbacher, Refsum, condições relacionada a priônio e doença de Salla.
A síndrome de Cockayne (CS) é um distúrbio herdado raro noqual as pessoas são sensíveis à luz solar, têm estatura curta e têm o apare-cimento de envelhecimento prematuro. Na forma clássica da síndrome deCockayne (Tipo I), os sintomas são progressivos e tipicamente ficam eviden-tes depois da idade de um ano. Um início- mais precoce ou forma congênitada síndrome de Cockayne (Tipo II) é evidente no nascimento. De forma inte-ressante, ao contrário de outras doenças de reparo ao DNA, a síndrome deCockayne não está ligado ao câncer. CS é um distúrbio de múltiplos siste-mas que causam igualmente falha no crescimento profunda da soma e ca-quexia progressiva e cerebral, degeneração neurológica, coclear e retinal,com uma Ieucodistrofia e neuropatia de desmielinação sem um aumento nocâncer. Depois da exposição ao UV (por exemplo, luz solar), indivíduos coma síndrome de Cockayne não podem mais realizar o reparo acoplado àtranscrição. Dois genes defeituoso na síndrome de Cockayne, CSA e CSB,foram identificados até aqui. O gene de CSA é encontrado no cromossomo5. Ambos os genes codificam para proteínas que interagem com componen-tes do mecanismo transcricional e com proteínas de reparo de DNA.
Até hoje, nenhuma cura ou tratamentos eficazes para pacientescom esta doença foram identificados. Assim, um aspecto da invenção é otratamento desta doença com os conjugados e composições descritas aqui.
Hipomielinação congênita tem vários nomes que incluem neuro-patia de desmielinação congênito, polineuropatia de hipomielinação congêni-ta, polineuropatia de hipomielinação congênita (Bulbo de Cebola), neuropatiade hipomielinação congênita, neuropatia congênita causado por nipomieiina-ção, neuropatia de hipomielinação e CHN. Neuropatias periféricas hereditá-rias, entre os distúrbios genéticos mais comuns em humanos, são um grupoclinicamente e geneticamente heterogêneo, complexo de distúrbios que pro-duzem deterioração progressiva dos nervos periféricos. Hipomielinação con-gênita é um do grupo de distúrbios. Este grupo inclui neuropatia hereditáriacom risco de paralisias , doença de Charcot-Marie-Tooth, síndrome de Deje-rine-Sottas, e neuropatia de hipomielinação congênito. Não há nenhuma cu-ra conhecida ou tratamentos eficazes para quaisquer destes distúrbios.
A doença de Farber tem vários nomes que incluem: Iipogranu-lomatose de Farber, deficiência de ceremidase, deficiência de ceramidaseácida, deficiência de AC, deficiência de N-Iaurilesfingosina desacilase, e N-acilesfingosina amidoidrolase. Como certos nomes revelam, a doença ocorredevido a uma deficiência de ceramidase ácida (da mesma forma conhecidacomo N-acilesfingosina amidoidrolase, ASAH). A falta da enzima resulta emum acúmulo de ácido de mucopolissacarídeo não sulfonado nos neurônios ecélulas gliais. Pacientes com a doença normalmente morrem antes de 2 a-nos de idade.
Leucodistrofia metacromática (MLD) é um distúrbio genéticocausado por uma deficiência da enzima arilsulfatase A. É um dentre um gru-po de distúrbios genéticos chamados as Ieucodistrofias que afetam o cres-cimento da bainha de mielina. Há três formas de MLD: infantil tardia, juvenil,e adulto. Na forma infantil tardia, que é o mais comum, o início de sintomascomeça entre as idades de 6 meses e 2 anos. A criança é normalmentenormal no nascimento, mas eventualmente perde previamente as habilida-des ganhas. Sintomas incluem hipotonia (tônus muscular baixo), anormali-dades na linguagem, perda de capacidades mentais, cegueira, rigidez (istoé, tensão muscular descontrolada), convulsões, deglutição prejudicada, pa-ralisia e demência. Sintomas da forma juvenil começam entre 4 e 14 anos deidade, e incluem desempenho escolar prejudicado, deterioração mental, ata-xia, crises apilépticas e demência. Na forma de adulto, sintomas que come-çam depois de 16 anos de idade, podem incluir concentração prejudicada,depressão, perturbações psiquiátricas, ataxia, tremor e demência. Crisesepilépticas podem ocorrer na forma de adulto, mas são menos comuns quenas outras formas. Em todas as três formas, a deterioração mental é nor-malmente o primeiro sinal.
Doença de Peliszaeus-Merzbacher (da mesma forma conhecidacomo Ieucodistrofia sudanofílica perinatal) é um distúrbio genético ligado a Xque causa uma anormalidade de uma proteína de proteolipídeo. A anormali-dade resulta na morte de uma criança tipicamente antes da idade de um a-no. Não há nenhum tratamento conhecido ou curas para a doença.
Doença de Refsum (da mesma forma referido como deficiênciade ácido fitânico oxidase, polineuriteforme atática de heredopatia ou motorahereditária e neuropatia sensória IV, HMSN IV) é causada por mutações nogene, que codifica fitanoil-CoA hidroxilase (PAHX ou PHYH). Os aspectosclínicos principais são retinite pigmentosa, polineuropatia crônica e sinaiscerebelares. Ácido fitânico, um ácido graxo de cadeia ramificada usual (áci-do 3,7,11,15-tetrametil-hexadecanóico) acumula nos tecidos e fluidos corpo-rais de pacientes com a doença e não pode ser metabolizado devido à faltade PAHX. Plasmaferese realizada uma vez ou duas vezes mensalmente re-move eficazmente o ácido do corpo e permite a liberalização de restriçõesdietéticas que limitam a entrada de ácido fitânico.
Condições relacionadas ao priônio incluem doença de Gerst-mann-StraussIer (GSD), doença de Creutzfeldt-Jakob (CJD), insônia fatalfamiliar e isoformas aberrantes da proteína de priônio podem agir como a-gentes infecciosos nestes distúrbios bem como em kuru e scrapie (uma do-ença encontrada em ovelha). O termo priônio deriva de " agente infecciosode proteína" (Prusiner, Science 216: 136-44, 1982). Há uma clivagem pro-teolítica da proteína relacionada ao priônio (PRP) que resulta em um peptí-deo amiloidogênico que polimerisa em fibrilas insolúveis.
Doença de Salla e outros tipos de sialurias são doenças que en-volvem problemas com armazenamento de ácido siálico. Eles são distúrbiosneurodegenerativos recessivos autossômicos que podem apresentar-se co-mo uma forma infantil severa (isto é, ISSD) ou como uma forma de adultolentamente progressiva que é prevaiecenie na Finlândia (isto é, doença deSalla). Os sintomas principais são hipotonia, ataxia cerebelar e retardamentomental. Estas condições e doenças são da mesma forma consideradas paratratamentos paliativos ou de melhora.
Outras condições que resultam na desmielinação incluem ence-falitas pós-infecciosas (da mesma forma conhecidas como encefalomielitedisseminada agudo, ADEM), meningite e danos à medula espinhal. As com-posições e conjugados descritos aqui são da mesma forma consideradospara uso no tratamento destas outras condições de desmielinação.
O seguinte Exemplos sintéticos e biológicos são oferecidos parailustrar esta invenção e não devem ser interpretados de qualquer forma co-mo Iimitantes desta invenção. A menos que de outra maneira declarado, to-das as temperaturas são em graus Célsius.
Exemplos
Nos exemplos abaixo, as seguintes abreviações possuem os seguintessignificados. Se uma abreviação não for definida, ela geralmente possui sig-nificado admitido.
ACN = acetonitrilo
bs = singleto amplo
d = Dupleto
dd = Dupletodedupletos
Et3N = trietilamina
g = Gramas
h and hr = Hora
HPLC = Cromatografia líquida de alto desempenho (ou
pressão)
kg = quilograma
kDa = quilodálton
L = Litro
m = Multipleto
M = Molar
mg = miligrama
min = Minuto<table>table see original document page 95</column></row><table>
Método Geral: Espectros de ressonância magnética nuclear (RMN) de pró-ton (1H) e carbono (13C) foram obtidos empregando-se um espectrômetroGemini 2000 ou Bruker Avance 300. A presença dos prótons de polietilenoglicol (PEG) podem ser detectados por um grande, singleto amplo a 3,6ppm. A integração deste sinal pode variar dependendo do tamanho da por-ção de PEG. A presença do antagonista de VLA-4 conjugado pode tambémser detectada nos espectros de 1H RMN de conjugados. A cromatografia decamada fina foi realizada em folhas pré-revestidas de sílica 60 F254 (EMD15341-1) ou MKC18F sílica 60 Á pré-revestida (Whatman 4803-110). A es-pectrometria de massa foi realizada em um espectrômetro de massa Agilent(LC/MSD VL) no modo quad único de íon positivo.
Métodos de HPLC para produtos PEG e conjugados PEG:
A HPLC de fase reversa preparativa foi realizada empregando-se um módulo Varian Prep Star (Modelo SD-1) com um detector de UV Vari-an ajustado a 210 nm. Método A: As amostras dos produtos PEG e conjuga-dos PEG foram purificadas empregando-se HPLC de fase reversa em umVydac C18, coluna de tamanho de poro 300 Á (250 mm χ 21,2 mm), tipica-mente empregando-se um gradiente de 35 - 50% de ACN + 0,1% de TFAem 100 minutos a 20 mL/rninulo. íviéiodo B: As amostras de conjugados eprodutos PEG foram purificadas empregando-se HPLC de fase reversa emum Vydac C18, coluna de tamanho de poro 300 Â (250 mm χ 50 mm), tipi-camente empregando-se um gradiente de 35 - 50% de ACN + 0,1% de TFAem 100 minutos a 60 mL/minuto.
Método C: A pureza dos conjugados e produtos PEG foi confir-mado por meio de HPLC analítica de fase reversa empregando-se um sis-tema quaternário Agilent Série 1100 equipado com Waters Symmetry tama-nho de poro 300 Á, 3,5 μ coluna C18 (150 mm χ 4,6 mm), empregando-seum gradiente de 40 - 50% de ACN w/ 0,1 % de TFA em uma taxa de fluxo de1,5 mL/minuto e acoplado a um detector de comprimento de onda variávelAgilent 1100 ajustado a 210 nm e um detector de dispersão de luz evapora-tivo Sedex 75 (40°C, ganho = 5)
Reagentes PEG: Os materiais de partida de PEG foram adquiri-dos através da Corporação NOF (Yebisu Garden Place Tower, 20-3 Ebisu 4-chome, Shibuya-ku, Tokyo 150-6019) ou Nektar Therapeutics (150 IndustrialRoad, San Carlos, CA 94070) como segue: 40 kDa 4-braços PEG álcool(NOF Cat. Sunbright PTE-40000); 40 kDa 3-braços PEG álcool (NOF Cat.Sunbright GL-400).
Exemplo 1
Hidróxido de sódio (10 g, 0,25 m) é dissolvido em água (300 ml).A esta solução 4-nitrofenilalanina (50,3 g, 0,22 m) é adicionado e agitado atécompletar a dissolução. A esta solução resultante o carbonato de sódio (28,8g, 0,26 m) é adicionado e a suspensão agitada é resfriada em um banho frioa +8°C. Cloroformiato de benzila (44,7 g, 0,26 m) é adicionado em gotascom agitação vigorosa, mantendo a temperatura interna em uma faixa de+6° a +9°C. A mistura é agitada a +6°C durante mais uma hora, transferidaao funil separatório e lavada com éter (2 χ 150 ml). A fase aquosa é coloca-da em um grande frasco Erlenmeyer (2L) e é cautelosamente acidificadacom dil. aq, HCI a. pH=2 e extraída com acetato de etila (4 χ 500 ml). Os ex-tratos combinados são lavados com água e secos com MgS04. A solução éfiltrada e o filtrado evaporado, o resíduo é dissolvido em acetato de etila (150ml) e diluído com hexano (500 ml). O material cristalino é filtrado e enxagüa-do com solvente frio, seco por ar para fornecer Cbz-4-nitrofenilalanina, 75 g(99,5% de rendimento). 1H-RMN, DMSO-d6, (δ): 12,85 (bs, 1H), 8,12 (d, 2H,J=9Hz), 7,52 (d, 2H, J=9Hz), 7,30 (m, 5H), 4,95 (s, 2H), 4,28 (m, 1H), 3,32(bs, 1H), 3,10 (m, 2H),13C-RMN (δ): 173,1, 156,3, 146,6, 137,3, 130,8, 128,5,128,0, 127,8, 123,5, 65,6, 55,1, 36,6. MS (m/z): 367,1 [M+23].
A Cbz-4-nitrofenilalanina (75 g, 0,22 m) é dissolvido em dioxano(300 ml). A solução agitada resultante é resfriada em banho de gelo seco a -20°C (interno). O isobutileno liqüefeito (aproximadamente 290 ml) é adicio-nado seguido por ácido sulfúrico concentrado (35 ml) adicionado em trêsporções iguais, 30 minutos separadamente. A adição do ácido é um proces-so muito exotérmico, acompanhado por um grau substancial de polimeriza-ção. A agitação mecânica eficiente é essencial neste estágio. A mistura re-sultante é agitada durante 20 horas, permitindo aquecer até a temperaturaambiente em seguida é cautelosamente derramada em solução de carbona-to de sódio aquosa saturada (2L) e diluída com acetato de etila (600 ml). Acamada orgânica é separada e a camada aquosa é extraída com acetato deetila (2 χ 200 ml). Os extratos combinados são lavados com água e secoscom sulfato de sódio. A solução é filtrada e evaporada à secura. O resíduo éabsorvido em mistura de acetato de etila/hexano (500 ml; 1:1) e filtrado atra-vés de um tampão de sílica-gel (aproximadamente 5,08 cm χ 5,0 cm). A síli-ca é enxagüada com uma quantidade adicional do mesmo solvente (2 L to-tal) e os filtrados são evaporados para fornecer 4-nitrofenilalanina protegidacomo um óleo viscoso, 73 g (83% após duas etapas). 1H-RMN, CDCI3, (δ):8,12 (d, 2H, J=8,4Hz), 7,36 (m, 7H), 5,35 (m, 1H), 5,10 (m, 2H), 4,57 (m,1H), 3,31 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 13C-RMN, CDCI3, (δ): 169,7, 155,3, 146,9,143,9, 136,0, 130,2, 128,4, 128,2, 128,0, 123,3, 82,9, 66,9, 54,7, 38,2, 31,4,27,8, 13,9. MS (m/z): 423,1 [M+23].
A 4-nitrofenilalanina protegida (73 g, 0,18 m) é dissolvida emetano! (500 ml) e catalisador de óxido de platina (1,5 y) é adicionado. A solu-ção resultante é vigorosamente agitada em atmosfera de hidrogênio (3,51 -4,21 kg/cm2) em temperatura ambiente até outra adsorção de hidrogênio tercessado (3 horas). O catalisador é filtrado e o filtrado é evaporado à secura,o resíduo é absorvido em acetato de etila (200 ml) e filtrado através de umtampão de sílica-gel (2x2 in) empregando-se mistura de acetato de etila -hexano (3:2, 2L) para enxagüar a sílica. O filtrado é concentrado a aproxi-madamente 200 ml e hexano (500 ml) é adicionado. O produto cristalino éfiltrado, enxagüado com solvente frio e seco por ar. Produção - 56 g, 84%.1H-RMN, CDCI3, (δ): 7,30 (bs, 5H), 6,92 (d, 2H, J=8,1Hz), 6,58 (d, 2H,J=8,1 Hz), 5,21 (m, 1H), 5,10 (d, 2H, J=2,1Hz), 4,46 (m, 1H), 3,59 (bs, 2H),2,97 (s, 2H, J=5,4Hz), 1,42 (s, 9H). 13C-RMN, CDCI3, (δ): 170,6, 145,1,136,3, 130,2, 128,3, 127,9, 125,6, 115,0, 81,9, 66,6, 55,2, 37,4, 27,8 MS(m/z): 393,1 [M+23].
Exemplo 2
<formula>formula see original document page 98</formula>
O produto do Exemplo 1, 4-aminofenilalanina, (20 g, 0,054 m) foidissolvido em etanol (200 ml) e tratado com base de Hunig (21 g, 0,162 m, 3eq) e 2-cloro-3-nitropiridina (10,3 g, 0,65 m, 1,2 eq). A solução resultante foiagitada sob atmosfera de nitrogênio e aquecida ao refluxo durante 24 horas.
A análise de LC indicou a presença de uma quantidade pequena de aminanão reagida. A pequena quantidade adicional de cloronitropiridina (1,1 g,0,13 eq) foi adicionada e o refluxo continuou durante outras<24 horas. A mis-tura de reação foi resfriada e evaporada à secura. O resíduo foi dissolvidoem acetato de etila (600 ml) e a solução obtida foi lavada com água (1 χ 200ml), ácido cítrico dil. aq. (0,2 N, 2 χ 200 ml), salmoura (1 χ 200 ml) e secacom sulfato de sódio. Os sólidos foram filtrados e o filtrado evaporado parafornecer 37 g de óleo vermelho intenso, contendo o produto esperado con-tamido com excesso de cloronitropiridina. O produto impuro foi purificado porcromatografia instantânea (sistema Biotage 75L) eluindo com mistura de a-cetato de etila:hexano (3:17). As frações contendo o produto puro foramcombinadas e evaporadas para fornecer o óleo viscoso vermelho intenso, 26g (99%). 1H-RMN, CDCI3, (δ): 10,10 (s, 1H), 8,49 (m, 2H), 7,57 (d, 2H,J=9Hz), 7,35 (bs, 5H), 7,19 (d, 2H, J=9Hz), 6,84 (m, 1H), 5,30 (m, 1H), 5,13(d, 2H, J=3Hz), 4,57 (m, 1H), 3,11 (m, 2H), 1,45 (s, 9H). 13C-RMN, CDCI3,(δ): 170,4, 155,5, 155,1, 150,0, 136,7, 136,3, 135,4, 132,4, 129,9, 128,5,128,3, 128,0, 127,9, 122,2, 113,7, 82,2, 66,7, 55,1,137,7, 27,8, 20,9, MS(m/z): 493,1 [M+1], 515,1 [M+23].
O composto de nitro vermelho (26 g, 0,054 m) foi dissolvido emTHF (350 ml) e o catalisador de oxido de platina (1,35 g) foi adicionado. Amistura resultante foi vigorosamente agitada sob atmosfera de hidrogênio(3,51 - 4,21 kg/cm2) até a adsorção de hidrogênio ter cessado (2 horas). Ocatalisador foi filtrado e o filtrado evaporado à secura. O resíduo foi dissolvi-do em acetato de etila (100 ml) e diluído com hexano (50 ml) até que inicie acristalização. A mistura foi também diluída com mistura de acetato de etila/hexano (1:1) (300 ml) e foi deixada descansar no refrigerador durante 3 ho-ras. Os sólidos cristalinos foram filtrados, enxagüados com solvente frio esecos por ar para fornecer o produto, 23 g, 94%. 1H-RMN, CDCI3, (δ): 7,81(dd, 1H, J1=1,5Hz, J2=4,8Hz), 7,33 (bs, 5H), 7,17 (d, 2H, J=8,4Hz), 7,03 (d,2H, J=8,4Hz), 6,96 (dd, 1H, J1=1,5Hz, J2=7,5Hz), 6,75 (dd, 1H, J1=5,0Hz,J2=7,7Hz), 6,22 (s, 1H), 5,31 (m, 1H), 5,09 (bs, 2H), 4,50 (m, 1H), 3,41 (bs,2H), 3,02 (m, 2H), 1,43 (s, 9H). 13C-RMN, CDCI3, (δ): 170,6, 155,6, 145,5,140,21, 138,8, 136,3, 130,8, 129,9, 128,5, 128,3, 127,9, 123,4, 118,2, 117,0,82,0, 66,6, 55,2, 37,4, 27,9. MS (m/z): 407,1 [M-56], 463,1 [M+1], 485,1[M+23].
A aminopiridina (19 g, 0,041 m) foi suspensa em diclorometano(200 ml) e CDI (12 g, 0,074 m, 1,8 eq) foi adicionado. A mistura resultante foiagitada em temperatura ambiente durante 20 horas. A mistura de reação foilavada com bicarbonato aquoso saturado (2 χ 100 ml), salmoura (1 χ 100 ml)e seca com sulfato de sódio. Os sólidos foram filtrados e o filtrado evaporadoà secura. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila (quente, 300 ml) e pos-to para cristalizar. O produto cristalino foi filtrado, enxayüauo com acetato ueetila frio e seco por ar para fornecer 19,9 g, 81% da imidazolona. 1H-RMN,CDCI3, (δ) 10,63 (s, 1H), 8,06 (d, 1H, J=3Hz), 7,66 (d, 2H, J=9Hz), 7,32 (m,8H), 7,05 (m, 1H), 5,36 (m, 1Η), 5,13 (s, 2H), 4,59 (m, 1H), 3,17 (m, 2H),1,45 (S, 9H). 13C-RMN, CDCI3, (δ) 170,4, 155,6, 154,3, 143,8, 141,0, 136,2,135,8, 131,8, 130,2, 128,3, 128,0, 125,9, 122,2, 118,3, 116,0, 82,4, 66,8,55,0, 37,7, 27,8. MS (m/z): 433,1 [M-56], 489,2 [M+1], 511,2 [M+23].
Exemplo 3
<formula>formula see original document page 100</formula>
O ácido piridina-3-sulfônico (125 g, 0,78 m) foi colocado em umfrasco de 1L de 3 gargalos equipado com um agitador mecânico, condensa-dor de refluxo, termômetro e entrada de nitrogênio. A seguir, o pentacloretode fósforo (250 g, 1,19 m, 1,5 eq) foi adicionado, seguido imediatamente pe-lo oxicloreto de fósforo (330 ml, 3,8 m, 4,5 eq). Os conteúdos do frasco fo-ram inicialmente agitados em temperatura ambiente durante 30 minutos, emseguida levados vagarosamente ao refluxo suave (temperatura interna deaproximadamente 1100C) durante a hora seguinte, deixados nesta tempera-tura durante aproximadamente 3,5 horas em seguida deixados durante aspróximas 12 horas para resfriar novamente à temperatura ambiente. A evo-lução do gás foi observada durante este tempo. Os voláteis foram extraídossob pressão reduzida (a 12 mmHg/40°C) e o resíduo semi-sólido amarelo foidiluído com DCM (1L). A suspensão foi vagarosamente derramada no bicar-bonato aquoso saturado gelado agitado, mantendo pH=7. A evolução do gásfoi observada. A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi no-vamente extraída com DCM. Os extratos combinados foram lavados combicarbonato aquoso saturado frio, salmoura e secos com sulfato de magné-sio. Os sólidos foram filtrados e o filtrado evaporado, deixando cloreto depiridina-3-suiíuriiÍa como urn líquido oieoso amareio-ciaro, 123 g (93% puro;88% de teoria). 1H-RMN1 CDCI3, (δ) 9,26 (d, 1H), 8,98 (dd, 1H), 8,34 (m, 1H),7,62 (m, 1H), 13C-RMN, CDCI3, (δ) 155,3, 147,4, 140,9, 134,6, 124,2.MS (m/z): 178,0 [M+1].
L-penicilamina (150 g, 1,0 m) foi dissolvido com agitação em á-gua Dl (1500 ml), resfriado em banho gelado a +8°C e tratado com formalina(150 ml, 37% aq.). A mistura de reação foi agitada a +8°C durante duas ho-ras, em seguida o banho de resfriamento foi removido e a agitação continu-ada durante 12 horas. A solução clara foi concentrada sob pressão reduzida(14mmHg/50μ) deixando o resíduo branco. Os sólidos foram ressuspensos,em seguida dissolvidos em MeOH quente (2500 ml) e deixados descansarem temperatura ambiente durante 12 horas. O precipitado macio branco foifiltrado e enxagüado com metanol frio. O filtrado foi concentrado e deixadocristalizar novamente. O precipitado coletado foi combinado com a primeirasafra e seco em um forno a vácuo durante 24 horas a 55°C a 45 mmHg. Aprodução de ácido (R)-5,5-dimetiltiazolidina-4-carboxílico foi de 138 g (>99%puro; 86% de teoria). 1H-RMN, DMSO-d6, (δ) 4,25 (d, 1H), 4,05 (d, 1H), 3,33(s, 1H), 1,57 (s, 3H), 1,19 (s, 3H), 13C-RMN, DMSO-d6, (δ) 170,8, 74,4, 57,6,51,8, 28,9, 27,9. MS (m/z): 162,3 [M+1 ].
Em um reator de 4L equipado com agitador mecânico e termô-metro, uma solução de tampão foi preparada de fosfato monobásico de po-tássio (43 g, 0,31 m) e fosfato dibásico de potássio (188,7 g, 1,08 m) em Dlágua (2L). O ácido (R)-5,5-dimetiltiazolidina-4-carboxílico (107 g, 0,675 m)foi adicionado e agitado até a dissolução ser concluída. A solução foi resfria-da em um banho frio a +8°C. Uma solução separadamente preparada decloreto de piridina-3-sulfonila (124 g, 0,695 m) em DCM (125 ml) foi adicio-nada em gotas ao reator com agitação vigorosa durante uma hora. O pH damistura de reação foi monitorado e após 4 horas, descoberto ser pH = 5 eajustado a pH=6 pela adição de bicarbonato sólido. A mistura foi deixadaaquecer até a temperatura ambiente durante 18 horas. O pH foi ajustado a 2com ácido sulfúrico dil. aq., agitado durante uma hora e os sólidos precipita-dos amarelos foram filtrados, enxagüados com água para neutralizar. Amassa sólida foi transferida em um frasco de 2L Erlenrr.ayer, suspensa emDCM (500 ml) com redemoinho ocasional durante 5 minutos e filtrada nova-mente. A massa filtrante foi lavada com DCM e seca por ar. O rendimento docomposto do título, ácido (R)-5,5-dimetil-3-(piridin-3-ilsulfonil)tiazolidina-4-carboxílico foi de 148,9 g (98% puro; 73% de teoria). 1H-RMN1 DMSO-d6, (δ)9,05 (d, 1H), 8,89 (m, 1H), 8,32 (m, 1H), 7,69 (m, 1H), 4,68 (q, 2H), 4,14 (s,1H), 1,35 (s, 3H), 1,29 (s, 3H). 13C-RMN, DMSO-d6, (δ) 170,0, 154,3, 147,9,135,8, 134,1, 124,8, 72,6, 54,3, 50,2, 29,4, 25,0. MS (m/z): 303,2 [M+1].
Exemplo 4
<formula>formula see original document page 102</formula>
O produto do Exemplo 2 (52 g, 0,106 m) foi suspenso em MeOH(450 ml), o catalisador de hidrogenação (8,7 g, 5% de Pd/C, Degussa) foiadicionado e a mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogênio 4,21 kg/cm2(60 psi) até outra absorção ter cessado (aproximadamente duas horas). OTHF (150 ml) foi adicionado para dissolver os sólidos precipitados e a solu-ção foi filtrada através de um tampão de Celite, empregando-se DCM enxa-güar o filtro. O filtrado foi evaporado à secura, redissolvido em DCM (300 ml)e novamente retirado. Esta operação foi repetida duas vezes. Os sólidosespumosos foram mantidos sob vácuo elevado durante 3 horas. O rendi-mento do composto do título foi de 38,3 g (101% de teoria). 1H-RMN, CDCI3,(δ) 8,08 (m, 1H), 7,56 (AB q, 4H), 7,37 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 3,68 (m, 1H),2,03 (m, 2H), 1,49 (s, 9H). 13C-RMN, CDCI3, (δ) 173,8, 154,6, 143,9, 141,0,137,4, 131,5, 130,2, 126,1, 122,3, 118,0, 116,1, 81,4, 56,0, 40,6, 27,9. MS(m/z): 299,3 [M-56], 355,4 [M+1], 377,4 [M+23].Exemplo 5
<formula>formula see original document page 103</formula>
O produto do Exemplo 4 (38,3 g, assume 0,106 m) foi dissolvidoem DCM (500 ml) e tratado sucessivamente com: N-metilmorfolina (27 g, 30ml, 0,266 m; 2,5 eq), HOBt (17,3 g, 0,128 m; 1,2 eq), e o produto do Exem-plo 3 (33,8 g, 0,112 m; 1,06 eq). A solução não homogênea resultante foiresfriada em um banho de gelo a +4°C e tratado com EDC (22,5 g, 0,117 m;1,1 eq) em uma porção. A mistura de reação foi agitada, deixando-a aqueceraté a temperatura ambiente durante as próximas 4 horas e em seguida du-rante mais 18 horas. O solvente foi retirado e o resíduo dissolvido em aceta-to de etila (1,2 L), lavado com bicarbonato aquoso saturado (2 χ 250 ml),água (250 ml), salmoura (300 ml) e seco com sulfato de magnésio. A solu-ção foi filtrada e evaporada à secura, deixando um óleo viscoso alaranjadoclaro, 76 g (»100%). O produto bruto foi purificado por cromatografia instan-tânea sobre sílica-gel (Biotage 75L, em mistura de acetato de etila/metanol(3%). As frações contendo o produto puro foram combinadas e evaporadaspara fornecer 54 g do composto do título (produção de 83%). 1H-RMN, CD-Cl3, (δ): 10,37 (s, 1H), 9,11 (s, 1H), 8,87 (m, 1H), 8,19 (m, 1H), 8,05 (m, 1H),7,56 (AB q, 4H), 7,52 (m, 1H), 7,36 (m, 1H), 7,06 (m, 2H), 4,83 (m, 1H), 4,58(AB a, 2H), 3,96 (s, 1H), 3,19 (m, 2H), 1,49 (s, 9H), 1,22 (s, 3H), 1,18 (s, 3H).13C-RMN1 CDCI3, (δ)169,7, 167,6, .153,9, 148,4, 143,8, 140,9, 135,8, 135,6,132,9, 131,9, 130,2, 125,9, 123,8, 122,1, 118,0, 115,9, 82,8, 73,6, 60,3, 54,8,53,7, 50,6, 37,8, 29,1, 27,8, 23,9, 14,1. MS (m/z): 583,3 [M-56], 639,4 [M+1],661,3 [M+23].Exemplo 6
<formula>formula see original document page 104</formula>
A uma solução gelada de trifluorobutirato de etila (15 g, 89mmols) e formiato de etila (36 mL, 444 mmols) em THF (200 mL) sob N2 foiresfriada a uma solução de 1 M de KOtBu em THF (107 mmols, 107 mL)durante um período de 25 minutos. Após 15 minutos o banho gelado foi re-movido e a mistura de reação foi agitada durante uma hora em temperaturaambiente. Mais formiato de etila (18 mL, 222 mmols) foi em seguida adicio-nado e a mistura de reação foi agitada durante a noite. A mistura de reaçãofoi concentrada e o resíduo dividido entre éter frio (100 mL) e água fria (300mL). O pH da fase aquosa foi ajustado a 2 com HCI concentrado. O produtofoi extraído com diclorometano (1 χ 100 mL, 45 χ 75 mL) e os extratos orgâ-nicos combinados foram lavados com salmoura (1 χ 100 mL), secos (Mg-SO4), filtrados, e concentrados para produzir o composto do título como óleodenso o qual solidificou em descanso, 10,2 g (58,5%). MS (m/z) = 198 (M + H)+.
Exemplo 7
<formula>formula see original document page 104</formula>
A uma solução do produto do Exemplo 6 (10 g, 51 mmols) e sul-fato de dietilguanidina (8,3 g, 25,2 mmols) em EtOH (60 mL) sob N2, foi adi-cionado NaOEt1 21% de solução em EtOH (20,7 mL, 55,5 mmols) duranteum período dé 10 minutos. A mistura de reação foi em seguida aquecida aorefluxo durante 5 horas. A solução heterogênea foi resfriada e derramada emágua fria (100 mL) para fornecer uma solução homogênea. O pH da soluçãofoi ajustado a aproximadamente 3,5 com HCI conc. e 1 N de HCI. Um sólidoprecipitou da solução, o qual foi coletado por filtragem. O sólido acastanhadoclaro foi lavado com água e seco por ar, produzindo 2,9 g, (23%) do compos-to do título. MS (m/z) = 250 (M + H)+. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) δ 7,65 (brs, 1H), 3,55 (q, 4H), 3,30 (q, 2H), 1,25 (t, 6H).
Exemplo 8
<formula>formula see original document page 105</formula>
Um frasco foi carregado com o produto do Exemplo 7 (2,0 g,8,02 mmols), DIEA (1,5 mL, 8,83 mmols), DMAP (.98 g, 0,8 mmol), e diclo-rometano (30 mL). A mistura foi resfriada até O0C e anidrido trifluoroacético(1,5 mL, 8,83 mmols) foi adicionado. A reação tornou-se homogênea e foiagitada a O0C durante 3 horas. A mistura foi extinta com NaHCO3 saturado eextraída com diclorormetano. A fase orgânica foi lavada com 0,2 N de ácidocítrico, seca sobre NaaSO4, filtrada e concentrada em vácuo para produzir2,87 g (94%) do composto do título como um sólido marrom. 1H RMN (300MHz, CDCI3) δ 8,28 (s, 1H), 3,65-3,52 (m, 4H), 3,29-3,19 (q, 2H), 1,22-1,17(t, 6H).
Exemplo 9
<formula>formula see original document page 105</formula>
Uma solução do produto do Exemplo 8 (1,3 g, 3,5 mmosl), H-Phe(P-NO2)OtBu (1,1 g, 4,2 mmols), e DIEA (0,9 mL, 5,3 mmols) em CH3CN(14 mL) sob N2 foi aquecida ao refluxo durante a noite. No dia seguinte maisH-Phe(P-NO2)OtBu (0,8 g, 3 mmols foi adicionado e o refluxo foi continuadodurante 3 dias. A mistura de reação foi em seguida resfriada e concentrada.O resíduo absorvido em EtOAc (50 mL) e a porção orgânica lavada com 0,5N de KHSO4 (3 χ 50 mL), água (1 χ 50 mL), salmoura (1x10 mL), seca(MgSO4), filtrada e concentrada para uma goma acastanhada. O materialbruto foi purificado por cromatografia instantânea (5:1 hexanos/EtOAc) paraproduzir 640 mg (38%) do composto do título como uma goma dourada.TLC: 3:1 hexanos/EtOAc, R, = 0,30, MS (m/z) = 498 (M+H)+, 1H RMN, (300MHz, CDCI3) δ 8,19 (d, 2H), 7,80 (s, 1H), 7,25 (d, 2H), 5,19 (br d, 1H), 4,95(q, 1H), 3,70-3,50 (m, 4 H), 3,45-3,25 (m, 2 H), 3,10 (q, 2H), 1,40 (s, 9 H),1,05 (t, 6 H).
Exemplo 10
<formula>formula see original document page 106</formula>
O produto do Exemplo 9 (635 mg, 1,27 mmol) foi dissolvido emEtOH absoluto (5 mL) ao qual foi adicionado 35 mg de Pd/C, 10 % em peso.A reação foi submetida a hidrogenação (3,16 kg/cm2 de H2) durante 2,5 ho-ras tempo no qual 50 mgs de Pd/C, 10% em peso foi adicionado e a misturade reação novamente submetida a hidrogenação (3,16 kg/cm2 de H2) duran-te a noite. A mistura de reação foi filtrada através de uma almofada de Celitee o filtrado foi concentrado para fornecer 452 mg (76%) do composto do títu-lo. MS (m/z) = 468 (M+H)+, 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 7,75 (s, 1 H), 6,90(d, 2 H), 6,60 (d, 2 H), 5,05 (br d, 1 H), 4,80 (q, 1 H), 3,70 - 3,45 (m, 6 H),3,10 - 2,90 (m, 4 H), 1,40 (s, 9 H), 1,15 (t, 6H).
Exemplo 11
Uma solução do produto do Exemplo 10 (598 mg, 1,28 mmol), 2-cloro-3-nitropiridina (243 mg, 1,53 mmol), e DIEA (0,67 mL, 3,83 mmols) emEtOH (5 mL) sob N2 foi aquecida ao refluxo. No dia seguinte a reação foi res-friada e mais 2-cloro-3-nitropiridina (40 mg, 0,25 mmol) e DIEA (0,11 mL,0,60 mmol) foi adicionado e a reação foi aquecida ao refluxo durante um dia.A mistura de reação foi em seguida concentrada e o resíduo absorvido emEtOAc (20 mL). A fase orgânica foi lavada com água (2 χ 20 mL). As lava-gens aquosas combinadas foram novamente extraídas com EtOAc (2x10mL). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com 0,2 N de ácidocítrico (3 χ 20 mL), água (1x10 mL), NaHC03 saturado (3 χ 20 mL), sal-moura (1x10 mL), secos (MgS04), filtrados e retirados para uma goma ala-ranjada. O produto bruto foi purificado por cromatografia instantânea eluindocom 4:1 hexanos/EtOAc (Rf = 0,14) para produzir 610 ;mg (81%) do compos-to do título como um óleo vermelho. MS (m/z) = 590 (M+H)+, 1H RMN (300MHz , CDCI3) δ 10,10 (s, 1H), 8,55 (d, 1H), 8,50 (m, 1H), 7,79 (s, 1 H), 7,75(d, 2H), 7,15 (d, 2H), 6,80 (q, 1H), 5,10 (br d, 1 H), 4,90 (m, 1 H), 3,70-3,45(m, 4 H), 3,25 (m, 2H), 3,10 (q, 2 H), 1,40 (s, 9H), 1,10 (t, 6 H).
Exemplo 12
<formula>formula see original document page 107</formula>
A uma solução doproduto do Exemplo 11 (610 mg, 1,03 mmol)em EtOH absoluto (5 mL) foi adicionado 60 mg de Pd/C, 10 % em peso. Amistura foi submetido a hidrogenação (3,16 kg/cm2 (45 psi) de H2) durante anoite. No dia seguinte a mistura de reação foi filtrada através de Celite e ofiltrado concentrado para fornecer 500 mg (87%) do composto do título. MS(m/z) = 560 (M+H)+, 1H RMN (300 MHz , CDCI3) δ 7,85 (d, 2H), 7,80 (s, 1H),7,20 (d, 2H), 7,05 (d, 2H), 7,00 (d, 1 H), 7,75 (m, 1 H), 6,20 (br-s 1 H), 5,15(br s, 1H), 4,85 (m, 1H), 3,75-3,45 (m, 4 H), 3,40 (br s, 2H), 3,15 (m, 2H),3,05 (q, 2H), 1,40 (s, 9H), 1,15 (t, 6 H).Exemplo 13
<formula>formula see original document page 108</formula>
Uma solução do produto do Exemplo 12 (141 mg, 0,250 mmol) eCDI (62 mg, 0,378 mmol) em CH2CI2 (3 mL) foi agitada durante a noite. Nodia seguinte mais CDI (30 mg, 0,185 mmol) foi adicionado e a reação foi agi-tada outro dia. A mistura de reação foi em seguida concentrada e absorvidaem EtOAc (10 mL) e a porção orgânica lavada com 0,2 N de ácido cítrico (3χ 5 mL), água (1x5 mL), NaHCO3 saturado (3x5 mL), salmoura (1x5 mL),seca (MgSO4)1 filtrada e concentrada para produzir 69 mg (47%) o compostodo título como uma espuma que foi empregada sem outra purificação. MS(m/z) = 586 (M+H)+, 1H RMN (300 MHz , CDCI3) δ 8,20 (br s, 1 H), 8,05 (d,1H), 7,80 (s, 1H), 7,65 (d, 2 H), 7,90 (m, 3 H), 7,05 (m, 1 H), 5,15 (br d, 1H),4,95 (m, 1H), 3,70 - 3,45 (m, 4 H), 3,25 (app d, 2 H), 3,10 (q, 2H), 1,40 (s,9H), 1,15 (t, 6 H).
Exemplo 14
<formula>formula see original document page 108</formula>
A uma solução de 4,6-dicloro-5-aminopirimidina (5,0 g, 30,7mmols) em DMSO (30 mL) foi adicionado Na2SOH2O (7,4 g, 30,8 mmols). Amistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Água (40 mL)foi em seguida adicionado à mistura e a solução evaporada sob pressão re-duzida a aproximadamente 6 mL. A esta solução foi adicionado HCI conc.(0,5 mL) e água para precipitar o produto. A solução foi filtrada e o sólidoalaranjado foi lavado com água e seca para fornecer 4,3 g (86%) do com-posto do título. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 5,84 (2 Η, s), 7,79 (1 Η, s),14,37 (1 Η, br s); MS(m/z): MH+= 162.Exemplo 15
<formula>formula see original document page 109</formula>
Ao produto do Exemplo 14 (4,3 g , 26 mmols) dissolvido emNH4OH conc. (4 mL) foi adicionado EtOH (40 mL). A esta solução, níquelRaney (excesso) foi adicionado em porções. A reaçãolfoi agitada em tempe-ratura ambiente durante a noite e em seguida aquecida a 80°C durante duashoras. A mistura foi filtrada através de Celite e o filtrado concentrado. O pro-duto bruto foi purificado por cromatografia instantânea sobre sílica empre-gando-se EtOAc/hexanos para fornecer 1,6 g (47%) do composto do títulocomo um sólido amarelo. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ 5,90 (2 Η, s), 8,20(2 Η, s); MS(m/z) MH+= 130.
Exemplo 16
<formula>formula see original document page 109</formula>
Ao produto do Exemplo 15 (0,51 g, 3,9 mmols) em MeOH (20mL) e HOAc (0,5 mL) foi adicionado CH3CHO (0,52 mL, 9,2 mmols). Em se-guida NaBH3CN (590 mg, 9,2 mmols) foi adicionado em uma porção. A rea-ção foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e mais HOAc,CH3CHO, e NaBH3CN foram adicionados. A reação foi agitada durante anoite, concentrada, e o resíduo foi absorvido em EtOAc e NaHCO3 saturado.
A camada aquosa separada foi novamente extraída com EtOAc. A camadaorgânica combinada foi seca e concentrada para um resíduo. O resíduo foidissolvido em MeOH e tratado com HOAc, CH3CHO e NaBH3CN como aci-ma descrito. Seguindo-se o procedimento de preparação acima descrito oproduto bruto foi purificado por cromatografia instantânea em sílica empre-gando-se EtOAc/hexanos, para fornecer 0,35 g (57%) do composto do títulocomo um óleo amarelo. 1H RMN (300 MHz1 CDCI3) δ 1,35 (3 Η, q,J = 12Hz), 3,29 (2 Η, m), 4,21 (1 Hf bs), 8,04 (1 Η, s), 8,36 (1Η, s); MS(m/z): MH+ = 158.
Exemplo 17
<formula>formula see original document page 110</formula>
Ao produto do Exemplo 16 (70 mg, 0,45 mmol) dissolvido emDMF (1 mL) foi adicionado TEA (93 μΙ_) e cloreto de isonicotinoila (0,12 g,0,67 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente du-rante 2 dias e em seguida dividida entre EtOAc e NaHCO3 saturado. A ca-mada aquosa separada foi novamente extraída com EtOAc. A camada orgâ-nica combinada foi seca e concentrada para fornecer 67 mg (57%) do com-posto do título que foi empregado sem outra purificação. 1H RMN (300 MHz,CDCI3) δ 1,26 (3 Η), 3,65-3,69 (1 Η), 4,21 (1H), 7,17 (2 Η), 8,43 (1Η), 8,54 (2Η), 8,86 (1 Η) Nota: 1H RMN exibe evidência de rotâmeros como demons-trado nas amplitudes de todos os picos; MS(m/z): MH+ = 263.
Exemplo 18
<formula>formula see original document page 110</formula>
A uma solução do produto do Exemplo 17 (0,11 g, 0,42 mmol) eo produto do Exemplo 8 (0,135 g, 0,38 mmol) em IPA (2,5 ml) foi adicionadoDIEA (0,35 ml, 1,9 mmol). A mistura de reação foi agitada em um tubo sela-do a 130°C durante 2 dias. A mistura bruta foi concentrada e o óleo foi purifi-cado por cromatografia de coluna instantânea com um gradiente de solventede 0 - 10% de MeOH em CH2CI2 para produzir o composto do título comoum óleo. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,16 (1,2 Η, m), 1,26-1,31 (1,8 Η, m),1,50-1,53 (9 Η, d, J = 9 Hz), 3,0 (1 Η, m), 3,2 (0,8 Η, m), 3,36 (1,2 Η, m),4,12-4,18 (1,2 Η, m), 4,96-5,10 (,8 Η, m), 5,80-5,95 (1 Η, m), 6,93-6,96 (1 Η,m), 7,07 (1 Η, m), 7,31-7,45 (5 Η, m), 7,66-7,75 (3 Η, m), 8,06 (1 Η, m), 8,44-8,51 (2 Η, m); HPLC/MS: pico único a 1,29 minuto, MH+ = 581.
Exemplo 19
<formula>formula see original document page 111</formula>
Ao 2,4-dicloro-5-nitropirimidina (2,0 g, 10,3 mmold) em MeOH (7mL) a O0C sob N2 foi adicionado NaOMe (0,5 M em MeOH, 25 ml_) em gotas.Após a adição ser concluída, a mistura de reação foi agitada a 0°C durante15 min. Em seguida dietilamina (5 mL) foi adicionado e a mistura foi agitadaem temperatura ambiente durante a noite. A mistura de reação foi concen-trada e o resíduo foi dividido entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi secae concentrada para um resíduo que foi purificado por cromatografia instantâ-nea em sílica empregando-se EtOAc/Hexanos, para fornecer os compostosdo título como um sólido esbranquiçado (1,1 g, 4,9 mmols, 47% de produ-ção). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,26 (6H, t,J = 6,6 Hz), 3,70 (4 H, m),4.08 (3 H1 s), 9,01 (1H, s); HPLC/MS: MH+ = 227.
Exemplo 20
<formula>formula see original document page 111</formula>
O produto do Exemplo 19 (1,1 g, 4,9 mmols) em MeOH/EtOAc(1:1, 20 mL) foi reduzido com Pd/C (5% de degussa, 0,5 g) e H2 (3,51 kg/cm2(50 psi)) em um agitador Parr durante a noite. A mistura de reação foi filtradae o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o compostodo título como um sólido (0,85 g, 4,3 mmols, 88,5% de produção). 1H RMN(300 MHz, CDCI3) δ 1,18 (6H, t, J = 6,9 Hz), 3,03 (2 H, br), 3,57 (6H, t,J =6.9Hz), 3,96 (3H, s), 7,71 (1H, s); HPLC/MS: MH+ = 197.Exemplo 21
<formula>formula see original document page 112</formula>
Ao produto do Exemplo 20 (0,85 g, 4,3 mmols) em CH2CI2 (15mL) e TEA (1,4 mL, 10 mmols) foi adicionado cloreto de isonicotinila sal deHCI (1,13 g, 6,3 mmols). Após 15 minutos, TLC não exibiu nenhum materialde partida. A mistura foi extraída entre EtOAc e NaHCOs saturado. A cama-da aquosa foi lavada com EtOAc duas vezes. As camadas orgânicas combi-nadas foram lavadas com NaHCO3 saturado e salmoura. Elas foram secassobre MgS04 e filtradas. O filtrado foi concentrado para fornecer o compostodo título como um sólido marrom (1,3 g, 4,3 mmols, 100% de produção). 1HRMN (300 MHz, CDCI3) δ 1,20 (6H, t, J = 6,9 Hz), 3,60 (4 H, q, J = 6,9 Hz),3,96 (3 H, s), 7,72 (2H, d, J= 6,0 Hz), 7,75 (1H, bs), 8,80 (2H, d, J= 6,0 Hz),8,89 (1H, s); HPLC/MS: MH+ = 302.
Exemplo 22
<formula>formula see original document page 112</formula>
Ao produto do Exemplo 21 (100 mg, 0,33 mmol) em THF (1 mL)foi adicionado KOtBu (1M em THF, 0,5 mL) vagarosamente seguido por Etl(40 dL, 0,5 mmol). A mistura de reação foi agitada em temperatura ambientedurante a noite. TLC exibiu o desaparecimento do material de partida. A mis-tura foi dividida entre EtOAc e H2O. A camada aquosa foi lavada com EtOAc.
As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com NaHCO3 saturado esalmoura. Elas foram secas e concentradas para fornecer o composto dotítulo (90 mg, 0,27 mmol, 83%) que foi empregado sem outra purificação. 1HRMN (300 MHz1 CDCI3) δ 1,10 (9H, m), 3,47 (5 H, m), 3,92 (1 H, m), 7,14(2Η, d, J = 6,0 Hz), 7,78 (1H, bs), 8,44 (2H, d, J= 6,0 Hz); HPLC/MS: MH+ =330.
Exemplo 23
<formula>formula see original document page 113</formula>
Ao produto do Exemplo 22 (200 mg, 0,61 mmol) em DMF (4 mL)foi adicionado EtSNa (66 mg, 0,79 mmol) e a mistura de reação foi aquecidaa 100°C durante uma hora. LC/MS exibiu o material de partida ainda presen-te. Outra porção de NaSEt (66 mg, 0,79 mmol) foi adicionado e a reação a-quecida durante outras 2 horas. LC/MS exibiu o produto apenas. DMF foiremovido sob pressão reduzida e H2O (10 mL) foi adicionado seguido porHCl conc. (0,132 mL). A evaporação do solvente deixou um resíduo. Ele foidissolvido em EtOH e filtrado. O filtrado foi concentrado para produzir o com-posto do título (190 mg, 100%) que foi empregado sem outra purificação. 1HRMN (300 MHz, CD3OD) δ 1,24 (9H, m), 3,60 (4 H, m), 3,60-4,00 (2 H, br),8,12 (3H, d, J = 5,7 Hz), 8,92 (2H, d, J= 5,7 Hz); HPLC/MS: MH+ = 316.
Exemplo 24
<formula>formula see original document page 113</formula>
Ao produto do Exemplo 23 (70 mg, 0,22 mmol) em POCI3 (3 mL)em temperatura ambiente foi adicionado dietilanilina (30 μί). A mistura dereação foi aquecida a 100°C durante 30 minutos. Em seguida ela foi concen-trada. O resíduo foi dividido entre EtOAc e H2O. A camada orgânica foi Iava-da com H2O duas vezes. Em seguida ela foi seca e concentrada para forne-cer o composto do título (50 mg, 0,15 mmol, 68%) e empregada durante apróxima reação sem outra purificação. HPLC/MS: MH+ = 334Exemplo 25
<formula>formula see original document page 114</formula>
A uma solução do produto do Exemplo 24 (50 mg, 0,15 mmol) edo produto do Exemplo 8 (60 mg, 0,17 mmol) em IPA (0,75 mL) foi adiciona-do DIEA (0,15 mL, 0,8 mmol). A mistura de reação foi agitada em um tuboselado a 130°C durante 7 dias. A mistura bruta foi concentrada e o resíduofoi purificado por HPLC preparativa e cromatografia instantânea em sílica-gelpara produzir um sólido esbranquiçado (10 mg). 1H RMN (300 MHz, CDCI3)δ 1,10-1,30 (9H, m), 1,48 (4,5H, s), 1,51 (4,5H, s), 2,80-3,38 (3H, m), 3,53(4H, m), 4,05-4,30 (1H, m), 4,83 (0,5H, m), 4,96 (0,5H, m), 5,15-5,50 (1 Hjm), 6,95-7,10 (2H, m), 7,25-7,50 (5H, m), 7,69 (0,5H, d,J = 8,4 Hz), 7,76(0,5H, d, J= 8,4 Hz), 8,08 (1H, d, J= 5,1 Hz), 8,51 (2H, m), 8,83 (0,5H, br),8,95 (0,5H, br);
HPLC/MS: MH+ = 652.Exemplo 26
Procedimento A
<formula>formula see original document page 115</formula>
Álcool PEG de 3 braços de 40 kDa Corporação NOF
<formula>formula see original document page 115</formula>
Exemplo 26A
<formula>formula see original document page 115</formula>
Exemplo 26B
Exemplo.
Exemplo 26A O álcool PEG 40 kDa 3-braços (0,25 g, 0,00625mmol), o produto do Exemplo 5 (0,04 g, 0,056 mmol), e trifenilfosfina (0,025g, 0,094 mmol) foram secos por destilação azeotrópica de tolueno (5 mL).Metade do volume foi destilado sobre (2,5 mL), e a mistura foi resfriada àtemperatura ambiente. CH2Cfe (0,5 mL) foi adicionado para tornar a reaçãohomogênea. Dietilazodicarboxilato (0,015 mL, 0,094 mmol) foi adicionadoem gotas e a reação agitada durante 48 horas. HPLC Método C exibiu ocompleto desaparecimento do álcool PEG de partida. A reação foi concen-trada em vácuo para produzir o éster de t-butila Exemplo 26A como um sóli-do branco.
Exemplo 26B
Exemplo 26A (0,2 g, 0,005 mmol) foi dissolvido em ácido fórmico(3 mL) e aquecido a 40°C durante 24 horas. A reação foi concentrada emvácuo e foi purificado de acordo com o Método A de HPLC para produzir 0,1g (48%) do Exemplo 26B como um sólido branco. O Método C de HPLC de-terminou o conjugado ser >99% puro (tempo de retenção = 8,1 minutos). 1HRMN (CDCI3) δ 9,08 (bs, 3H), 8,84 (bs, 3H), 8,18-8,16 (d, 3H), 8,02-8,00 (d,3H), 7,67-7,61 (m, 6H), 7,47-7,38 (m, 9H), 7,08-7,04 (m, 3H), 6,91 (m, 3H),4,88 (m, 3H), 4,62-4,49 (dd, 6H), 4,13 (m, 6H), 3,64 (bs, 5919H PEG), 3,23(m, 6H), 1,25-1,24 (d, 18H).
Procedimento B
Uma mistura de GL400 Sunbright PEG (50,0 g, NOF Iot N9M4N594), o produto do Exemplo 5 (7,19 g, 9 eq vs. GL400, 3 eq/hidroxila), etrifenilfosfina (2,95 g, 9 eq) foi absorvida em tolueno (300 mL) e e destiladapara azeotropicamente remover água. A mistura foi resfriada à temperaturaambiente e uma quantidade adicional do toluene remanescente foi removidapor meio de evaporação giratória. A mistura foi redissolvida em diclorometa-no seco (180 mL) e resfriada em um banho gelado. Diisopropilazodicarboxi-Iato (DIAD, 2,27 g, 2,17 mL, 9 eq) foi adicionado por meio de uma seringadurante uma hora. A mistura foi agitada na batelada gelada 1,5 hora depoisdisso a análise de HPLC indicou a conversão completa ao Exemplo 26A.
A mistura de reação viscosa foi vagarosamente adicionada pormeio de um funil de gargalo estreito com agitação a uma mistura de 75:25ΜΤΒΕ/ΊΡΑ (4,0 L) e deixada agitar durante uma nora. O precipitado foi coie-tado por meio de filtragem a vácuo, lavado com MTBE (200 mL), e seco sobvácuo para fornecer o Exemplo 26A purificado (51,5 g.).
Exemplo 26A (51,4 g) foi absorvido no ácido fórmico (250 mL) eaquecido próximo ao refluxo durante 1,0 hora depois disso a análise de H-PLC indicou que a desproteção foi concluída. A mistura foi resfriada à tem-peratura ambiente e uma porção do ácido fórmico (-100 mL) foi removida porevaporação giratória. A mistura foi diluída com cloreto de metileno (50 mL).
A mistura de reação viscosa foi em seguida adicionada com agitação a umamistura de 75:25 MTBE/IPA (4,0 L) e deixada agitar durante 45 minutos (No-ta 4). O precipitado foi coletado por meio de filtragem a vácuo, lavado comMTBE (300 ml) e seco sob vácuo (< 1 Torr, 24 horas) para produzir o Exem-plo 26B (50,0 g).
Este material foi absorvido em cloreto de metileno (400 mL) efiltrado através de um funil Buchner de vidro sinterizado ("filtração de poli-mento"). O filtrado foi concentrado por meio de evaporação giratória a umvolume de ~ 200 mL e vagarosamente adicionado com agitação a uma mis-tura de 75:25 de MTBE/IPA (4,0 L). O precipitado foi coletado por meio defiltragem a vácuo, lavado com MTBE (300 ml) e seco sob vácuo (< 1 Torr,3d) para produzir o Exemplo 26B (48,8 g, -94%).
Métodos similares foram empregados para sintetizar os seguintes conjugados:
Exemplo 27
<formula>formula see original document page 117</formula><formula>formula see original document page 118</formula>
Exemplo 27
Álcool PEG 40 kDa 4-braços foi acoplado ao produto do Exem-plo 5 e desprotegido para o produto final empregando-se métodos similarescomo no Exemplo 26. O produto foi purificado de acordo com o Método A deHPLC. O método C de HPLC determinou o conjugado ser >95% puro (tempode retenção = 7,5 - 8,1 minutos). 1H RMN (CDCI3) δ 9,08 (bs, 4H), 8,84 (bs,4H), 8,18-8,16 (d, 4H), 8,02-8,00 (d, 4H), 7,67-7,61 (m, 8H), 7,47-7,38 (m,12H), 7,08-7,04 (m, 4H), 6,91 (m, 4H), 4,88 (m, 4H), 4,62-4,49 (dd, 8H), 4,13(m, 8H), 3,64 (bs, 10101H PEG), 3,23 (m, 8H), 1,25-1,24 (d, 24H).
Exemplo 28
<formula>formula see original document page 118</formula>
Álcool PEG 40 kDa 3-braços foi acoplado ao produto de ester det-butila do Exemplo 18 (abaixo mostrado) e desprotegido ao produto finalempregando-se métodos similares àqueles do Exemplo 26. O produto foipurificado de acordo com o Método A de HPLC. O Método C de HPLC de-terminou o conjugado ser >95% puro (tempo de retenção = 7,3 minutos). 1HRMN (CDCI3) δ 8,66 (bs, 3H), 8,44 (bs, 3H), 8,04-8,02 (d, 3H), 7,75- 7,30 (m,24H), 7,10-7,06 (m, 3H), 6,93 (s, 3H), 5,60-5,50 (m, 3H), 4,15 (m, 6H), 3,66(bs, 4270H PEG), 3,00 (m, 3H), 3,40-3,20 (m, 6H), 1,27 (d, 9H).Exemplo 29
<formula>formula see original document page 119</formula>
Álcool PEG de 3 braços de 40 kDa Corporação NOF
<formula>formula see original document page 119</formula>
O álcool PEG 40 kDa 3-braços (0,00625 mmol), o produto doExemplo 13 (0,056 mmol), e trifenilfosfina (0,094 mmol) são secos por desti-lação azeotrópica de tolueno (5 mL). Metade do volume é destilado durante(2,5 mL), e a mistura é resfriada à temperatura ambiente. CH2CI2 (0,5 mL) éadicionado para tornar a reação homogênea. Dietilazodicarboxilato (0,094mmol) é adicionado em gotas e a reação agitada durante 48 horas. A reaçãoé concentrada em vácuo para produzir o éster de t-butila Exemplo 29A.
Exemplo 29B
Exemplo 29A (0,005 mmol) é dissolvido em ácido fórmico (3 mL)e aquecido a 40°C durante 24 horas. A reação é concentrada em vácuo e épurificada de acordo com o Método A de HPLC para produzir o Exemplo 29B.
Exemplo 30
<formula>formula see original document page 120</formula>
O álcool PEG 40 kDa 3-braços é acoplado ao produto de ésterde t-butila do Exemplo 25 e desprotegido para o produto final empregando-se métodos similares como no Exemplo 26. O produto é purificado de acordocom o Método A de HPLC.
Listagem de Referências
As seguintes publicações, patentes e pedidos de patentes sãocitados neste pedido de patente como números sobre-escritos:
1 Hemler and Takada, Publicação de Pedido de Patente Européia nQ330.506, publicado em 30 de agosto de 1989
2 Elices1 e outros, Cell, 60:577-584 (1990)3 Springer, Nature, 346:425-434 (1990)
4 Osborn, Cell1 62:3-6 (1990)
5 Vedder, e outros, Surgery, 106:509 (1989)
6 Pretolani, e outros, J. Exp. Med., 180:795 (1994)
7 Abraham, e outros, J. Clin. Invest., 93:776 (1994)
8 Mulligan1 e outros, J. Immunology, 150:2407 (1993)
9 Cybulsky, e outros, Science, 251:788 (1991) ;
10 Li, e outros, Arterioscler. Thromb., 13:197 (1993)
11 Sasseville, e outros, Am. J. Path., 144:27 (1994)
12 Yang, e outros, Proc. Nat. Acad. Science (USA), 90:10494 (1993)
13 Burkly1 e outros, Diabetes, 43:529 (1994)
14 Baron1 e outros, J. Clin. Invest., 93:1700 (1994)
15 Hamann1 e outros, J. Immunology, 152:3238 (1994)
16 Yednock, e outros, Nature1 356:63 (1992)
17 Baron1 e outros, J. Exp. Med., 177:57 (1993)
18 van Dinther-Janssen, e outros, J. Immunology, 147:4207 (1991)
19 van Dinther-Janssen, e outros, Annals. Rheumatic Dis., 52:672 (1993)
20 Elices1 e outros, J. Clin. Invest., 93:405 (1994)
21 Postigo1 e outros, J. Clin. Invest., 89:1445 (1991)
22 Paul, e outros, Transpl. Proceed., 25:813 (1993)
23 Okarhara, e outros, Can. Res., 54:3233 (1994)
24 Paavonen, e outros, Int. J. Can., 58:298 (1994)
25 Schadendorf1 e outros, J. Path., 170:429 (1993)
26 Bao, e outros, Diff., 52:239 (1993)
27 Lauri, e outros, British J. Câncer, 68:862 (Í993)
28 Kawaguchi, e outros, Japanese J. Câncer Res., 83:1304 (1992)
29 Kogan, e outros, Patente dos Estados Unidos nQ 5.510.332, publicado em 23 de abril de 1996
30 Publicação de Pedido de Patente Internacional nQ WO 96/01644
31 Thorsett1 e outros, Patente dos Estados Unidos n9 6.489.300, publicado em3 de dezembro de 2002 e Konradi, e outros, Patente dos Estados Unidosη2 66.492.372, publicado em 10 de dezembro de 2002.Todas as publicações acima, patentes e pedidos de patentes sãoincorporados aqui por referência em sua totalidade do mesmo modo comose cada publicação individual, patente ou pedido de patente fosse específicae individualmente indicado para ser incorporado por referência em suatotalidade.

Claims (28)

1. Processo para a preparação de conjugados de compostosativos compreendendo:a) reagir um álcool polimérico com um composto ativo nucleofíli-co apresentando um hidrogênio ácido sob condições Mitsunobu; eb) isolar o conjugado.
2. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que as condi-ções compreendem uma fosfina trivalente e um composto azodicarbonila.
3. Processo para a preparação de um conjugado da fórmula I: <formula>formula see original document page 123</formula> na qual:B é uma porção polimérica biocompatível opcionalmente ligada covalente-mente à uma molécula central com braço ramificado;q é de cerca de 1 a cerca de 100;A em cada ocorrência é independentemente um composto da fórmula II: <formula>formula see original document page 123</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, na qual:J é selecionado a partir de:a) um grupo da fórmula (a): <formula>formula see original document page 123</formula> no qual R31 é uma ligação covalente à porção polimérica que opcionalmentecompreende um ligante, ou R31 é -H1 R31', -NH2, -NHR31' ou -N(R31)2,-NC3-C6-cíclico, -OR31, -SR31', em que cada R31' é independentemente umaCrC6-alquila de cadeia reta ou ramificada opcionalmente substituída, C3-C6-ciclòalquila opcionalmente substituída, arila opcionalmente substituída, hete-roarila opcionalmente substituída, eR32 é uma ligação covalente à porção polimérica que compreende opcio-nalmente um ligante, ou R32 é -H, -NO2, haloalquila ou o grupo-N(MR41)R42 em que M é uma ligação covalente, -C(O)- ou -SO2-, R41 é R41',N(R41)2, OU -OR41',em que cada R41 é independentemente hidrogênio, uma CrC6-alquila decadeia reta ou ramificada opcionalmente substituída, cicloalquila opcional-mente substituída, arila opcionalmente substituída, heterociclila opcional-mente substituída ou uma heteroarila opcionalmente substituída, em quesubstituições opcionais são haleto, Ci-C6-alquila, ou -OCi-C6-alquila,e R42 é hidrogênio ou R41; eb) um grupo de fórmula (b):<formula>formula see original document page 124</formula>em que R é selecionado a partir do grupo consistindo em uma ligação cova-lente à porção polimérica, amino, hidroxila, amino substituído, alquila, alqui-lóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heterociclilóxi, tiol, ariltio, heteroariltio, heterocicliltioe alquila substituída em que cada amino, amino substituído, alquila e alquilasubstituída é opcionalmente ligado covalentemente à porção polimérica emque, em cada caso, a porção polimérica opcionalmente compreende um li-gante que liga covalentemente a porção polimérica;Ar1 é selecionado a partir do grupo consistindo em arila, arila substituída,heteroarila e heteroarila substituída em que cada arila, arila substituída, he-teroarila e heteroarila substituída é opcionalmente ligada covalentemente àporção polimérica, em que a porção polimérica compreende opcionalmenteum ligante que liga covalentemente a porção polimérica a Ar1;Ar2 é selecionado a partir do grupo consistindo em arila, arila substituída,heteroarila e heteroarila substituída, em que cada arila, arila substituída, he-teroarila e heteroarila substituída é opcionalmente ligada covalentemente àporção polimérica, em que a porção polimérica compreende opcionalmenteum ligante que liga covalentemente a porção polimérica a Ar2;X é selecionado a partir do grupo consistindo em -NR1-, -O-, -S-, -SO-, -SO2e -CH2- opcionalmente substituída, em que R1 é selecionado a partir do gru-po consistindo em hidrogênio e alquila;T é selecionado a partir de:a) um grupo da fórmula (c) <formula>formula see original document page 125</formula> em que Y é selecionado a partir do grupo consistindb em -O- e -NR1-, emque R1 é selecionado a partir do grupo consistindo em hidrogênio e alquila;W é selecionado a partir do grupo consistindo em uma ligação covalente àporção polimérica que opcionalmente compreende um Iigante e -NR2R3, emque R2 e R3 são independentemente selecionados a partir do grupo consis-tindo em hidrogênio, alquila, alquila substituída, e em que R2 e R3, junta-mente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, formam um anelheterocíclico ou um anel heterocíclico substituído, em que cada alquila, al-quila substituída, heterociclila e heterociclila substituída é opcionalmente li-gada covalentemente à uma porção polimérica que opcionalmente compre-ende ainda um ligante;m é um número inteiro igual a 0,1 ou 2;η é um número inteiro igual a 0, 1 ou 2; eb) um grupo de fórmula (d) <formula>formula see original document page 125</formula> no qual G é uma arila opcionalmente substituída ou heteroarila opcionalmen-te substituída com 5 ou 6 membros no anel contendo 0 a 3 nitrogênios, emque a referida arila ou heteroarila opcionalmente compreende ainda umaligação covalente à porção polimérica que opcionalmente compreende umligante;R6 é a ligação covalente a porção polimérica que opcionalmente compreen-de um ligante, ou R6 é -H1 alquila, alquila substituída, ou -CH2C(O)R17, emque R17 é -OK -OR18, ou - NHR18, em que R18 é alquila, alquila substituída,ariia ou arila substituída;R55 é selecionado a partir do grupo consistindo em amino, amino substituído,alcóxi, alcóxi substituído, cicloalcóxi, cicloalcóxi substituído, ariloxi e ariloxisubstituído, e -OH;com a condição de que:A. pelo menos um de R, Ar1, Ar2, e T contenha uma ligação covalente à por-ção polimérica;B. quando R é covalentemente ligado à porção polimérica, η é um e X não é-O-, -S-, -SO-, ou -SO2-;C. quando X é -O- ou -NR1-, então m é dois; eD. o conjugado da fórmula I apresenta um peso molecular de não mais doque 100.000;compreendendo as etapas de:c) adicionar um álcool polimérico da fórmula Ia:<formula>formula see original document page 126</formula>na qual B é como definido acima, à um nucleófilo da fórmula H-Nu na pre-sença de uma fosfina trivalente da fórmula PR3 e um azodicarboxilato dedialquila para formar o composto de fórmula I, em que Nu é um radical dafórmula A como definido acima; e isolar o composto da fórmula I.
4. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que somenteum dentre J, Ar2 e T contém uma ligação covalente à porção polimérica.
5. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que q é umnúmero inteiro de 1 a cerca de 20.
6. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que q é umnúmero inteiro de 1 a cerca de 8.
7. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que A em cadaocorrência é independentemente um composto de fórmula lia:<formula>formula see original document page 127</formula>
8. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que A em cadaocorrência é independentemente um composto de fórmula llb:<formula>formula see original document page 127</formula>
9. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que A em cadaocorrência é independentemente um composto de fórmula llc:<formula>formula see original document page 127</formula>
10. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o com-posto ativo nucleofílico é um composto de fórmula:<formula>formula see original document page 127</formula>na qualJ é selecionado de:a) um grupo de fórmula (a):<formula>formula see original document page 128</formula>em que R31 é uma ligação covalente à porção polimérica que opcionalmentecompreende um ligante, ouR31 é -H1 R3r1 -NH2, -NHR31' or -N(R31)2, -NC3-C6 cíclico, -OR31', -SR31', emque cada R31 é independentemente uma CrC6 alquila linear ou ramificadaopcionalmente substituída, C3-C6Cidoalquila opcionalmente substituída, arilaopcionalmente substituída, heteroarila opcionalmente substituída,e R32 é uma ligação covalente à porção polimérica que opcionalmente com-preende um ligante, ouR32 é -H1-NO2, haloalquila ou o grupo -N(MR41)R42, em que M é uma ligaçãocovalente, -C(O)- ou -SO2-, R41 é R41', N(R41)2, ou -OR41',em que cada R41 é independentemente hidrogênio, uma C1-C6 alquila linearou ramificada opcionalmente substituída, cicloalquila opcionalmente substitu-ída, arila opcionalmente substituída, heterocíclico opcionalmente substituídoou uma heteroarila opcionalmente substituída, em que substituições opcio-nais são haleto, CrC6 alquila ou-OCi-Cealquila,e R42 é hidrogênio ou R41; eb) um grupo de fórmula (b):<formula>formula see original document page 128</formula>no qual R é selecionado a partir do grupo consistindo em uma ligação cova-lente à porção polimérica, amino, hidroxila, amino substituído, alquila, alqui-lóxi, arilóxi, heteroarilóxi, heterociclilóxi, tiol, ariltio, heteroariltio, heterocicliltioe alquila substituída, em que cada amino, amino substituído, alquila e alquilasubstituída é opcionalmente ligada covalentemente à porção polimérica, emque, em cada caso, a porção polimérica opcionalmente compreende um li-gante que covalentemente liga a porção polimérica;Ar1 é selecionado a partir do grupo consistindo em arila, ariia substituída,heteroarila e heteroarila substituída, em que cada arila, arila substituída, he-teroarila e heteroarila substituída é opcionalmente ligada covalentemente àporção polimérica, em que a porção polimérica opcionalmente compreendeum Iigante que covalentemente liga a porção polimérica ao Ar1;Ar2 é selecionado a partir do grupo consistindo em arila, arila substituída,heteroarila e heteroarila substituída, em que cada arila, arila substituída, he-teroarila e heteroarila substituída é opcionalmente ligada covalentemente àporção polimérica, em que a porção polimérica opcionalmente compreendeum ligante que covalentemente liga a porção polimérica ao Ar2;X é selecionado a partir do grupo que consiste em -NR1-, -O-, -S-, -SO-,-SO2 e -CH2- opcionalmente substituído, em que R1 é selecionado a partir dogrupo que consiste em hidrogênio e alquila;T é um grupo que apresenta um hidrogênio ácido; eR55 é um grupo protetor ácido.
11. Processo de acordo com a reivindicação 10, em que o com-posto ativo nucleofílico apresenta a fórmula:<formula>formula see original document page 129</formula>na qual R55 é um grupo protetor ácido.
12. Processo de acordo com a reivindicação 11 , em que R55 éC1-C6-alcóxi.
13. Processo de acordo com a reivindicação 11, em que m é 1,X é S, e R em cada ocorrência é independentemente selecionado a partir dehidroxila, alquilóxi, alquila, ou uma ligação covalente à porção polimérica.
14. Processo de acordo com a reivindicação 12, em que η é 2, eR em ambas ocorrências é metila.
15. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o com-posto ativo nucleofílico apresenta fórmula:<formula>formula see original document page 130</formula>na qual R55 é um grupo protetor ácido.
16. Processo de acordo com a reivindicação 15, em que R55 éCrC6-alcóxi.
17. Processo de acordo com a reivindicação 15, em que G é pi-ridinila, R31 é hidrogênio ou dialquilamino, e R32 é sulfonamida, amida, ouuréia.
18. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o com-posto nucleofílico ativo é:ou<formula>formula see original document page 130</formula>
19. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o álcoolpolimérico é:(peso molecular total do conjugado é cerca de 41.500),<formula>formula see original document page 131</formula>(peso molecular total do conjugado é cerca de 42.000), ou<formula>formula see original document page 131</formula>(peso molecular total do conjugado é cerca de 41.500).
20. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o álcoolpolimérico é selecionado a partir do grupo que consiste na coluna A e umcomposto ativo nucleofílico é selecionado a partir do grupo que consiste nacoluna B:<formula>formula see original document page 131</formula>(Mw total do conjugado é cerca de 41.500)<formula>formula see original document page 131</formula>(Mw total do conjugado é cerca de 42.000)<formula>formula see original document page 131</formula>(Mw total do conjugado é cerca de 41.500)<formula>formula see original document page 131</formula>
21. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o álcoolpolimérico é adicionado ao nucleófilo de fórmula H-Nu na presença da fosfi-na trivalente e do azodicarboxilato de dialquila em pelo menos um solvente.
22. Processo de acordo com a reivindicação 21, em que o azo-dicarboxilato de dialquila é selecionado a partir do grupo que consiste emdietildiazocarboxilato, diisopropilazodicarboxilato, 4-metil-1,2,4-triazolidina-3,5-diona, Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilazodicarboxamida, dipiperideto de ácido azo-dicarboxílico, bis(N-4-metilpiperazin-1 -il)azodicarboxamida, dimorfolinoazo-dicarboxiamida e azodicarboxilato de di-terc-butila.
23. Processo de acordo com a reivindicação 22, em que o azo-dicarboxilato de dialquila é selecionado a partir do grupo que consiste emdietildiazocarboxilato, diisopropilazodicarboxilato, 4-metil-1,2,4-triazolidina-3,5-diona, Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilazodicarboxamida, dipiperideto de ácido azo-dicarboxílico e azodicarboxilato de di-terc-butila.
24. Processo de acordo com a reivindicação 21, em que o sol-vente é um solvente clorado ou um solvente de éter.
25. Processo de acordo com a reivindicação 24, em que o sol-vente é um díclorometano ou tetrahidrofurano.
26. Processo de acordo com a reivindicação 21, em que a fosfi-na trivalente é selecionada a partir do grupo que consiste em trifenilfosfina,trimetilfosfina, trietilfosfina, tributilfosfina, 1,2-bis-(difenilfosfino)etano, umafosfina ligada a polímero e uma fosfina solúvel em água.
27. Processo de acordo com a reivindicação 26, em que a fosfi-na trivalente é trifenilfosfina.
28. Processo de acordo com a reivindicação 1, em que o conju-gado é preparado usando a combinação 1, 2 ou 3 de álcool poliméri-co/composto ativo nucleofílico:<formula>formula see original document page 133</formula>Composto Ativo Nucleofílico<formula>formula see original document page 133</formula>(Mwtotal do conjugado é cerca de 41.500)<formula>formula see original document page 133</formula>(Mw total do conjugado é cerca de 42.000)<formula>formula see original document page 133</formula>(Mw total do conjugado é cerca de 41.500)
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