CN101503400B

CN101503400B - 一种从茶多酚或儿茶素混合体系中分离制备多种儿茶素单体的方法

Info

Publication number: CN101503400B
Application number: CN2009100428348A
Authority: CN
Inventors: 周春山; 张胜华; 周小芬
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2009-03-11
Filing date: 2009-03-11
Publication date: 2011-05-18
Anticipated expiration: 2029-03-11
Also published as: CN101503400A

Abstract

本发明公开了一种从茶多酚或儿茶素混合体系中分离制备多种儿茶素单体的方法，包括样品预处理、液相色谱分离、馏分截取、闪式蒸发浓缩、干燥结晶等过程。本方法中的蒸发、浓缩，大多采用闪式蒸发器进行，不仅可以显著节省因长时间加热蒸发浓缩的能源消耗，而且可以大大避免因此造成的儿茶素氧化、缩聚合等不利作用的发生，因而可以明显提高产品的产率和质量。同时不使用高压，可以延长仪器的使用寿命，减少或避免色谱柱填料的破碎损耗以及溶剂消耗。

Description

一种从茶多酚或儿茶素混合体系中分离制备多种儿茶素单体的方法

技术领域

本发明属于天然有机化学领域，涉及一种从茶多酚或儿茶素混合物体系中分离制备多种儿茶素单体的方法。

背景技术

儿茶素是绿茶中含有的一类具多酚类结构的重要药理活性成分，由于其具有优异的抗氧化、抗癌等药物功效，在国际上已经被普遍认为是“继紫杉醇之后从植物中提取的最为理想的抗癌新药”。

茶多酚或儿茶素混合物中的儿茶素包括表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)，没食子儿茶素没食食子酸酯(GCG)表儿茶素没食子酸酯(ECG)，表没食子儿茶素(EGC)及表儿茶素(EC)等。茶多酚(绿茶初提物产品)和儿茶素混合物中各儿茶素单体的分离制备，目前已见报道的方法有超临界流体萃取(SCF)法和HPLC法。前者分离度较低，难于实现各儿茶素单体的有效分离，且设备昂贵。后者已有授权发明专利(周春山、钟世安等，表没食子儿茶素没食子酸酯的分离制备工艺，ZL011068.9)，该法虽然能满足分离要求，但因使用高压(200～300bar有时甚至更高)，不仅缩短设备使用寿命，而且会增大色谱柱填充材料的破碎损耗及溶剂消耗。

发明内容

本发明的目的在于提供一种从茶多酚或儿茶素混合物体系中分离制备多种儿茶素单体的方法。

本方法采用中低压液相制备色谱，不使用高压泵，避免高压输液所致弊病，延长设备使用寿命，降低柱填料和溶剂材料消耗，从而节省生产成本，同时又不失色谱高效分离的特性。蒸发、浓缩，均采用闪式蒸发器进行，不仅可以显著节省因长时间加热蒸发浓缩的能源消耗，而且可以大大避免因此造成的儿茶素氧化、缩聚合等不利作用的发生，因而可以明显提高产品的产率和质量。

本发明的目的是通过以下方式实现的。

一种从茶多酚或儿茶素混合体系中分离制备多种儿茶素单体的方法，将茶多酚或儿茶素混合体系样品预处理、液相色谱分离、馏分截取、闪式蒸发浓缩、干燥结晶，即制备出儿茶素单体。茶多酚或儿茶素混合体系样品的预处理过程为：将所述样品的滤液在40～70℃浓缩至质量浓度为0.4～1.2mg/ml，调pH值至3.5～5.5，然后倾入大孔吸附树脂层析柱除咖啡因；所述的液相色谱分离过程为：将经过预处理的样品溶液以不含卤素的非矿物酸调节pH值至4～5.5，浓缩至(可闪式蒸发浓缩)质量浓度为1.2～1.8mg/ml注入液相制备色谱系统，色谱系统固定相为C18柱内径50～100mm，填料粒径20～60μm，流动相为：12％～18％低碳醇+0.5～3％弱酸+水87.5-79.0％(v/v)，10～60pa柱压下用所述流动相淋洗色谱柱，根据柱后流出曲线，收集各儿茶素单体馏分液；所述的闪式蒸发浓缩过程为：将馏分液注入闪式蒸发器，在维持收集液温度35-65℃的条件下进行蒸发浓缩。

所述的不含卤素的非矿物酸为甲酸或乙酸。

所述的干燥结晶过程为：取质量浓度不低于1.5mg/ml的单体儿茶素浓缩液注入内式旋转蒸发设备，使热水浴的温度恒定至50～60℃进行蒸发、干燥脱水，直到获得儿茶素单体结晶粉末固体。

与现有方法相比，本方法具有以下优点：

1、本发明的前处理过程效果显著，经过大孔吸附树脂层析柱除杂，可以有效的除去咖啡因等杂质，更有益于色谱分离效果。

2、因为不使用高压，可以延长仪器的使用寿命，减少或避免色谱柱填料的破碎损耗，减少溶剂消耗。

3、采用闪式蒸发浓缩方法，不仅可以显著节省因长时间加热蒸发浓缩的能源消耗，而且可以大大避免因此造成的儿茶素氧化、缩聚合等不利作用的发生，因而可以明显提高产品的产率和质量，采用本发明，产品的纯度可达到95％，产率一般为85％。用以前方法生产的产品纯度达95％，但用本发明方法纯度可达98％，在相同的得率下，成本降低20％。

具体实施方式

以下结合实施例进一步说明本发明。

茶多酚系绿茶的初提物产品，其中含有多种儿茶素，

实施例1.茶多酚的预处理

茶多酚为绿茶粗提物，含多种儿茶素，包括EGCG(表没食子儿茶素没食子酸酯)，(没食子儿茶素没食子酸酯)GCG没食子儿茶素没食子酸酯，(EGC表没食子儿茶素)，EC(表儿茶素)。茶多酚的提取物是本领域内众所周知的，且现已有商品出售茶多酚中除含有不同的儿茶素外，还含有较多的咖啡因等杂质，如不通过预处理将其除去，将给儿茶素单体的后续分离制备带来困难其预处理方法具体如下：

取适量茶多酚固体粉末料，以水溶解，过滤除去水不溶物。滤液在40～60℃温度下适当浓缩至约0.5～1mg/ml，调pH值至4～5，然后将溶液倾入能与样品溶液匹配，极性适当的的大孔吸附树脂层析柱中，经吸附截留除去大部分咖啡因；以甲醇水溶液淋洗层析柱，收集含咖啡因成份的流出液回收咖啡因。所得到的含儿茶素的流出液为分离制备儿茶素单体的贮备液。至咖啡因淋洗干净，该层析柱便得到再生。

实施例2.儿茶素淡单体液相色谱分离制备

取适当体积的实施例1中含儿茶素的层析柱流出液(贮备液)，以不含卤素的非矿物酸(甲酸或乙酸等)调节溶液的pH4.5～5.2，浓缩(可闪式蒸发浓缩)至质量浓度为1.5mg/ml，然后将其注入液相制备色谱系统，该色谱系统固定相为C18柱内径50～100mm填料粒径20～60μm，流动相为：14％～15％-低碳醇+1～2％弱酸+水84.5％(v/v)，10～50巴柱压下用该流动相淋洗色谱柱，用UV检测器，根据柱后流出曲线，收集各儿茶素单体馏份液。

实施例3.馏份蒸发、浓缩和产品的干燥、结晶

量取适当体积馏份液注入闪式蒸发器，在维持流出液(收集液)温度40～60℃的条件下进行蒸发浓缩，流出液(浓缩液)的浓度用带UV检测器的HPLC仪进行测定。当流出液浓度未达到预期值时，此蒸发-浓缩操作步骤可反复进行多次。取适量浓度大于1.5mg/mL的单体儿茶素浓缩注入内式旋转蒸发设备，使加热水浴的温度恒定至约50～60℃的条件下进行蒸发、干燥脱水，直到获得儿茶素单体结晶粉末固体。此粉末固体即为本工艺的目标产品。各儿茶素单体纯度用UV-HPLC测定。

Claims

1.一种从茶多酚混合体系中分离制备多种儿茶素单体的方法，将茶多酚混合体系样品经预处理、液相色谱分离、馏分截取、闪式蒸发浓缩、干燥结晶，即制备出儿茶素单体，其特征在于，取适量茶多酚固体粉末料，以水溶解，过滤除去水不溶物，滤液在40～60℃温度下适当浓缩至0.5～1mg/ml，调pH值至4～5，然后将溶液倾入能与样品溶液匹配、极性适当的大孔吸附树脂层析柱中，经吸附截留除去大部分咖啡因；以甲醇水溶液淋洗层析柱，收集含咖啡因成份的流出液回收咖啡因，所得到的含儿茶素的流出液为分离制备儿茶素单体的贮备液，取适当体积的上述贮备液，以甲酸或乙酸调节溶液的pH4.5～5.2，闪式蒸发浓缩至质量浓度为1.5mg/ml，然后将其注入液相制备色谱系统，该色谱系统固定相为C18柱内径50～100mm，填料粒径20～60μm，流动相为：14％～15％低碳醇+1～2％弱酸+水84.5％(v/v)，10～50巴柱压下用该流动相淋洗色谱柱，用UV检测器，根据柱后流出曲线，收集各儿茶素单体馏份液，量取适当体积馏份液注入闪式蒸发器，在维持流出液温度40～60℃的条件下进行蒸发浓缩，流出液的浓度用带UV检测器的HPLC仪进行测定，当流出液浓度未达到预期值时，此蒸发-浓缩操作步骤反复进行多次，取适量浓度大于1.5mg/mL的单体儿茶素浓缩注入闪式旋转蒸发设备，使加热水浴的温度恒定至50～60℃的条件下进行蒸发、干燥脱水，直到获得儿茶素单体结晶粉末固体。