CN101466392A

CN101466392A - 用于预防或治疗hiv感染的药用组合物及其应用

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Publication number: CN101466392A
Application number: CNA2007800218052A
Authority: CN
Inventors: 周根发; 梁青; 鞠丹
Original assignee: Tianjin Fusogen Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Tianjin Fusogen Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-06-12
Filing date: 2007-06-12
Publication date: 2009-06-24
Anticipated expiration: 2027-06-12
Also published as: US20090203600A1; US8603965B2; CN101088557A; CN101466392B; WO2007143934A1

Abstract

本发明涉及用于预防或治疗HIV感染的药用组合物及其应用，更具体地讲，本发明涉及含有抗病毒肽的药用组合物、所述药用组合物用于预防或治疗HIV感染和制备相应的药物的应用，以及使用所述含抗病毒肽的药用组合物预防或治疗HIV感染的方法。

Description

用于预防或治疗 HIV感染的药用组合物及其应用技术领域

本发明涉及含有抗病毒肽的药用组合物、所述药用组合物用于预防或治疗 HIV感染和制备相应的药物的应用，以及使用所述含抗病毒肽的药用组合物预防或治疗 HIV感染的方法。背景技术

1. 人免疫缺陷病毒和艾滋病的流行

人免疫缺陷病毒 (HIV)可引起致病性逆转录病毒感染，并引起获得性免疫缺陷综合征 (AIDS, 即艾滋病）（Barre-Sinossi, F.等， 1983, 科学 (Science) 220:868-870)。虽然巨噬细胞、神经细胞及各种其它细胞也可被 HIV感染 (Maddon等， 1986, 细胞 (Cdl)47:333-48), HIV对 CD4+细胞表面的 CD4 分子有亲和性，所以 CD4+ T淋巴细胞是 HIV的主要靶细胞 (Dalgleish， A. 等， 1984，自然 ( ature)312:767-8)。人被 HTV感染后， CD4+ T淋巴细胞被大量破坏，以至丧失机体免疫机能。所以艾滋病患者极易患机会性感染、神经系统功能紊乱、肿瘤等，最终百病丛生，衰竭而死 (Levy, J.A.编辑，《急性 HIV感染和易感细胞》，美国出版 2000年， 63-78页）。

艾滋病这一症状严重、死亡率极高的流行性传染病已成为威胁人类健康的主要死因之一。全球累计已有三千九百五十万人感染 H 。仅 2006年一年中，已有二百九十万人死于艾滋病，四百三十万人新感染 HTV。中国的 HIV感染蔓速， 2005年末，中国感染 HTV的生存人数约为六十五万，约有 50%的新感染者是由于无保护的性行为，并且 HIV的传播逐渐从高发病人群向普通人群扩散,女性感染者呈增长趋势（世界卫生组织报告 (WHO Report) 2006, UNAIDS and WHO ) 。

目前发现的 HIV类型至少有两种： HIV-l (Gallo, R. 等， 1984, 科学 (Science) 224:500-503)和 HIV-2 (Clavel , F.等， 1986，科学（Science) 223:343-346)。这两种类型病毒中的每一种又都存在着许多遗传异质性。仅 HIV-1就存在着至少 11种不同的序列基因型 (A-J和 0亚型) (Jonassen, T.O. 等， 1997,病毒学 (Virol.)231:43-47)。其中 HIV-1的 E亚型主要分布于中非、泰国、印度、越南、柬埔寨、马来西亚、缅甸、中国以及西半球 (世界卫生组织报告 (WHO Report) 1996) 在中国的 HIV亚型主要有 B、 E、 C亚型 (Yu, E.S.等， 1996，美国公共卫生杂志 (American J.Public Health) 86 (8 Ptl): 1116-22)。

HIV的繁殖周期包括以下重要步骤。首先，病毒外包膜的糖蛋白 gpl20 与 T₄淋巴细胞表面的 CD4分子发生特异性的结合，吸附于细胞膜上。在一组化学趋化因子受体的协助下，病毒包膜与宿主细胞膜融合 (Berger , E.A., 等， 1999, 免疫学年度综述 (Annu. Rev. Immunol.) 17: 657-700)。融合后，包装在核衣壳里的 mv毒粒进入细胞，脱去衣壳，棵露出病毒核酸。病毒逆转录酶催化由 HIV单股 R A转录成单股 DNA, 再在细胞聚合酶的催化下成为双股 DNA。 HIV的双股 DNA可以以自由形式存在于胞浆中 , 也可在病毒整合酶的催化下，以双股 DNA前病毒的形式整合于宿主染色体 DNA内，从而形成 HIV的潜伏感染 (Roe，T.等， 1997,病毒学杂志 (J. Virol.) 71(2):1334-40)。前病毒在宿主染色体中是稳定的，不会被切除。前病毒能随染色体的复制而遗传。在 HIV的 mRNA翻译出大的聚蛋白后，病毒蛋白酶切断并加工聚蛋白，形成成熟的病毒结构蛋白（Xiang， Y.和 Leis, J., 1997，病毒学杂志 (J. Virol.) 71(3): 2083-91)。最后， HIV核酸和这些结构蛋白结合，装配出新的病毒颗粒，并以出芽的方式释放到细胞外 (Kiss-Lazozlo, Hohn, T.， 1996, 微生物学新动向（Trends in Microbiology) 4(12): 480-5)。

从 HIV的复制周期可以看出： HIV复制的关键阶段是 1)病毒吸附并通过融合进入细胞； 2)逆转录与整合； 3)蛋白翻译与加工； 4)病毒的装配和释放。

2.对 HIV感染的治疗

多年来，为了设计有效的治疗药物和预防措施，医药界作出了许多尝试。但时至今日，还没有有效的预防疫苗和能够治愈艾滋病的药物。理想的疫苗应当是无毒的，能诱导中和抗体，并能在粘膜部位和血液中诱导持久的免疫应答 (Levy, J.A.和 Levy， J.A., 1988,医学动向综述 (Trens Med. Rev.) 2: 265-71)。目前，世界上研制出的多种 HIV疫苗大部分还在动物实验阶段。对抗 HIV膜蛋白 gpl60或 _gpl20的疫苗早已进入临床试验，但效果却令人失望。该疫苗仅对实验室里的 HIV有效，对绝大部分病人的 HIV无效 (McElrath, M丄等， 1996, 美国国家科学院学报 (Pro. Natl. Acad. Sci. USA)93 :3972-77)。 HIV疫苗的研究进展緩慢，主要原因是该病毒的遗传物质具有高度的复杂性和变异性 (Bloom, B.R. , 1996 , 科学 (Science) 272: 1888-1900)。

世界上已批准使用的艾滋病药物主要为两大类： HIV逆转录酶抑制剂 (Charles, C丄，等， 1996, 美国医学协会杂志 (JAMA)276:146)和 HIV蛋白酶抑制剂 (Miles, S.A.等，美国国际艾滋病协会 (International AIDS Society USA)4(3):15)₀ 这两类药都作用在 HIV感染宿主细胞的后期——转录及组合新病毒的过程。 "鸡尾酒疗法" 就是将此两类抑制剂的联合使用 (Lafeuillade, A.，等， 1997，传染病杂志 (J. Infect. Dis.)l 75: 1051-55)。

逆转录酶抑制剂包括 AZT、 ddl、 ddC、 3TC及 d4T等。用逆转录酶抑制剂治疗 HIV感染迟早会产生病毒对药物的耐受，即病毒对药物的敏感性降低，药物抑制病毒的有效浓度上升几倍甚至几十倍 (Vella, S.和 Floridia, M.， 1996, 美国国际艾滋病协会 (International AIDS Society USA) 4 (3):15)。抗药性与 HIV的高突变率有关。在人体内， HIV每天可产生 10⁸— 10^1Q个新颗粒，而突变率为每复制周期 3 x lO⁵核苷。调控基因和包膜蛋白中可能出现大量影响氨基酸表达的错意突变，一些毒株在某些基因的氨基酸序列能出现近 40%的突变 (Myers, G和 Montaner, J.G., 1992, 逆转录病毒 (The Retroviridae) vol, 1. Plenum Press , New York 51-105)。虽然逆转录峰抑制剂能抑制敏感病毒株，但却使原已存在的和变异后产生的耐受毒株大量繁殖，从而导致耐药性。

几种逆转录酶抑制剂都有与剂量相关的特异性毒性，包括骨髓抑制、呕吐、肝功能异常、外周神经疾病、肌无力及胰腺炎。许多病人不能忍受这些毒副作用，不得不中途停药 (Fischl, M.A., 等， 1987, 新英格兰医学杂志 (N. Engl. J. Med.) 317: 185-91; Lenderking, W.R., 等， 1994, 新英格兰医学杂志 (N. Engl. J. Med.) 330: 738-43)„

蛋白酶抑制剂也存在耐药性的问题。病毒蛋白酶基因的突变已使目前应用的所有蛋白酶抑制剂类药物都产生了耐药性 (Condra, J. H.等， 1995, 自然 (Nature) 374: 569-71)。蛋白酶抑制剂的毒副作用包括肝功能异常、胃肠不适、肾结石、口周围麻木、脂类异常及意识混乱 (Deeks, 等， 1997，美国医学协会杂志 (JAMA)277:145-53)。

综上所述，目前应用的大多数抗 HIV药物毒性高，又有耐药性。因此，治疗 HIV感染存在着很大问题。显而易见，高效、低毒的新药是治疗 HIV 感染的需要。

针对 HIV复制周期的不同阶段，可选择抗 HIV的新靶点来开发新药。近年来，基于对 HIV传播艾滋病的深入研究，医学界发现了一些新机理的抗艾滋病药，其中包括一些新的 mv逆转录酶抑制剂和 Hiv蛋白酶抑制剂，以及下列一些针对不同靶点的抗 HIV治疗剂 (De， C.E.， 2000, 医用病毒学综述 (Rev. Med. Virol.) 10(4): 255-77):

1. 利用多聚阴离子基团来干扰 HIV包膜的 gpl20与淋巴细胞结合的抗病毒吸附剂，如月桂; ¾^充酸钠、石 iJtt走糖或肝素等。其缺点是特异性差，毒性大，有的甚至增加病毒载量 (Baba, M., 等， 1988, 美国国家科学院学报 (Pro. Natl. Acad. Sci. USA.)85:6132-6);

2. 利用可溶性 CD4来抑制 HIV的 gpl20与细胞结合。一些重组可溶性 CD4 能在病毒颗粒遇到细胞膜上的 CD4分子之前与之结合，从而阻断 HIV的感染性。但重组可溶性 CD4对某些从病人分离出的 HIV-1毒株无明显抑制作用。临床试验也未发现可靠的抗病毒活性 (Gomatos, RJ.等， 1990, 免疫学杂志 (J. Immunol)144:4183-8);

CCR5结合的 RA TCS, ΜΙΡ-Ια及 ΜΠ β, 与 CXCR4结合的 SDF等。它们不仅竟争性地阻断 v的 gpi2o与细胞趋化因子受体嵌合，还降低该共受体在细胞上的表达，从而限制 HIV的入侵点。最新的趋化因子受体阻断剂还有带正电荷的小肽 ALX40-4C、 T22以及化合物 AMD3100、 TAK-779和天花粉蛋白；

4. 可溶性 CD4-IgG, 虽然它能够抑制体夕卜 HIV的复制，在临床试脸中却无可靠的抗病毒活性；

5. 通过与 NCp7 锌指区的作用来阻断病毒的安装及分解，如 2,2 ' -dithiobisbenzamides (DIB As)和 azadicarbonamide (ADA);

6. 用 gp41的片其类似物作为融合抑制剂，如 T-20可阻断病毒进入细胞 (Jiang, S.等， 1993, 自然 (Nature) 365:113;

7. 病毒 mRNA转录醻抑制剂，如 CGP64222、 fluoroquinolone K- 12、 EM2487;

8. 整合酶抑制剂：如 Carbonyl J [Ν,Ν'-二 (2-(5-羟基 -7- 酸)脲]衍生物在试管里能遏制 HIV将其基因组整合到淋巴细胞 (Maurer K, 等：， 2000, 生物有机化学 (Bioorg Chem) 28(3): 140-155)。

3. 阻断病毒进入细胞的融合抑制剂

许多生物学过程都涉及融合。在真核细胞中，连续不断地发生着细胞膜之间的融合，包括^ ^、分泌、膜成分的回收等 (White, J.M., 1992,科学 (Science) 258: 917-24)。在某些特殊细胞内发生融合的例子有：受调节的融合激素、酶、神经介质的分泌。较突出的细胞间融合的例子有：精子和卵子的融合及肌细胞的融合。

融合是包膜病毒攻击并穿透宿主细胞的关键过程 (Weissenhom, W.，等， 1997, 自然 (Nature)387:426-30)。 HIV包膜上的糖蛋白复合物控制病毒包膜与细胞膜的融合过程。最初，这些糖蛋白复合物为含多糖基的前体蛋白 gpl60。在病毒繁殖期间，一种宿主蛋白酶将 gpl60水解成两种糖蛋白亚基：包膜外表面的 gpl20和跨膜的 gp41。 7j解后的 gpl20和 gp41仍以非共价键结合，并以三聚体的方式聚合在病毒粒表面。外部呈高度螺旋结构的 gp41 穿膜区具有高效率的膜融合起始机制。由于直接参与和细胞膜的融合过程， gp41被称为 "打开细胞大门的关键分子" ( Ferrer, M.,等， 199⁹, 自然 -结构生物学 (Nat Struct. Biol.) 6(10): 953-60; Zhou, G.，等， 2000, 1:生物有机医用化学 (Bioorg. Med. Chem.) 8(9): 2219-27)。

晶体衍射分析已经证实：在病毒与细胞发生融合时， gp41的核心由 6条螺旋束组成，其中 N-端和 C-端的螺旋排列成 3个 "发针" ，将 HIV包膜与细胞膜别在一起。 gp41三聚体可能形成融合孔，使病毒^宿主细胞 (Chan, D.C., 等， 1997，细胞 (Cell)89: 263-73)。但是在刚从被感染细胞芽殖后的游离病毒粒表面， gp41 则以不稳定的天然非融合构象存在。由于 C-端螺旋包绕着 N-端螺旋， gp41的 N-端融合域被隐藏起来。在病毒表面的 gpl20与细胞膜上的 CD4 化因子受体结合后， gp41即发生受体激活的构象变化。 gp41的 N-端从病毒表面延伸出来，插入宿主细胞膜。此时， gp41从不稳定的天然非融合构象转变成 "发针前" 中间体构象。当 gp41的 C-端与 N-端两肽链区结合在一起时，三聚体结构的疏水 N-端核心暴露出来， "发针前" 中间体转变成能量上更稳定的 "发针，，状态，病毒包膜就与细胞膜融合在一起了 (Jones, P.L., 等， 1998, 生物化学杂志 (J. Biol. Chem.)273:404-09)。

在本发明中， "抗融合"和 "抗膜融合"指抑制或降低两个或两个以上 i 物体膜间的融合程度。上述两个或个以上的生物体可以是细胞或病毒结构，如细胞膜和病毒包膜等。 "抗融合剂" 或 "抗膜融合剂"指能够抑制病毒感染细胞，如抑制游离病毒与细胞融合或抑制细胞间融合的物质。

最早被发现的融合抑制剂是从 gp41 C-端 (127— 162)衍生而来的含 36个氨基酸的多肽一 T-20 , 它的结构为： X-YTSLfflSLIEESQNQQEK EQELLELDKWASLWNWF-Z。

与 gp41 C-端的结构类似性使 T-20能与 gp41的 C-端肽链竟争与 N-端融合域的结合。在 T-细胞上，极低浓度的 T-20就能阻断 HTV的 p41与宿主细胞膜的融合 (IC₅()在 nM范围内 )(Jiang, S 等， 1993, 自然 (Nature)365:113; Wild, C.T.等， 1994, 美国国家科学院学报 (Pro. Natl. Acad. Sci. USA) 91: 9770- 74)。在持续许多分钟的 "发针前"状态， T-20能有效地抑制 gp41的 C-端肽链与其 N- 端融合域相结合，使病毒包膜与细胞膜之间的 "发针，，无法形成 (Kliger, Y和 Shai, Y.， 2000, 分子生物学杂志 (J. Mol. Biol.) 295:163-8)。由于融合抑制剂的作用部位在细胞膜，所以它不必被释放到细胞内就能发挥作用。相比之下，现在临床所使用的抗 HT 药物都作用在病毒感染宿主细胞的后期，它们必须首先被释放到细胞内，然后才能对已侵入细胞的 HIV发挥其遏制繁殖的作用。而且，疏水性 gp41核心部位 ^酉列的高度守恒性提示：病夺不大可能对融合抑制剂产生耐药性。体外实 ^ 明 T-20 能特异性地阻断 HIV 细胞。一、二期临床试验表明 AIDS患者都能 4艮好地耐受 T-20。 T-20无骨髓毒性，常见的副作用均为轻度到中度。每天注射 200mg T-20能显著降低多数病人的 HIV载量；其中 30%病人的 HIV载量降低到不可检测的水平 (低于 400个 /ml)。而且， T-20对目前已产生耐药性的 HIV也仍然有效。一些病人的 CD4+细胞也有所增加 ( ilby, J.M.等， 1998, 自然 -医学 (Nat. Med.) 4:1302-1307)。原来，人们曾担心长期用 T-20可能使人体产生特异性的抗 T-20 抗体, 使艾滋病人对 T-20产生耐药性。然而在长达几十周的试验中 , T-20始终有抗病毒作用 (Pilcher, C.D.等， 1999, 艾滋病 (AIDS)13(15):2171-4)。

与目前临床上应用的 HTV逆转录酶抑制剂和 HTV蛋白酶抑制剂相比，融合抑制剂 T-20的优越性为高效、低毒、无耐药性。然而， T-20的临床用药量高达 200mg日，提示其稳定性较差，抗融合的效价还不够高。并且，由于剂量较大， T-20还在部分病人中产生一定的局部反应 ( ilby, J.M.等， 1998, 自然- 医学 (Nat. Med.)4:1302-1307)。

鉴于 T-20所存在的上述不足之处，人们进行了各种研究来开发新的、改善了的融合抑制剂。本发明的发明人之一在中国专利 CN01130985.7中公开了一种用于治疗 HTV感染的多肽，该多肽是从 HTV (E亚型）的跨膜蛋白 gp41 C 端列的周边区域 (从第 117到 151的列)衍生出的一段肽链，其序列为 X-SWETWEREIENY1XQIY [LEESQEQQDK EKDLLE-Z。据称在 HTV ^ ]起的融合实验中，该多肽抑制融合的浓度比 T-20低 20倍。

但是，仍需要新的、稳定性高、效价高且毒副作用低的抗病毒药物、尤其是 HIV融合抑制剂和更加安全有效的预防和治疗 HIV感染的药物和方法。发明概述

本发明的目的是提供一种新的用于预防或治疗 HIV 感染的药用组合物，其中所含的抗病毒多肽为一种膜融合抑制剂。由于在细胞外发挥作用，且以病毒蛋白为靶标，因此毒副作用比传统的抗病毒药物低。与上述 T-20 相比，由于本发明抗病毒肽效价高，半衰期长，因此给药量小，副作用更低，且给药间隔长，可以减轻患者经济负担，且使用更方便。

具体地讲，本发明的目的是 4是供一种新的用于预防或治疗 mv感染的药用组合物，该组合物包含有效量的作为 HIV融合抑制剂的抗病毒肽和药学可接受的载体、赋形剂和稀释剂，所述抗病毒肽包含下述氨基酸序列药用组合物可制备成用于通过注射、口服、粘膜、直肠和透皮的途径进行给药的形式，尤其是可以制成粉针制剂或冻干粉针制剂。该药用组合物还可以含有其它抗 HI V治疗剂。

一方面，本发明公开了一种含有有效量的包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 1 的多肽的药物组合物。另一方面，本发明公开了一种含有有效量的包含氨基酸序列 SEQ ID NO: 1的保守修饰变体的多肽的药物组合物。在一个实施方案中，所述多肽序列为：

X-SWETWEREIENYTRQIYIQLEESQEQQDRNERDLLE - Z

其中， X为氨基、疏水基团，包括（但不限于）苄氧羰基，丹酰基，或叔丁氧羰基，乙酰基， 9-芴基曱氧羰基（FMOC ), 共价键连结大分子载体基包括（但不限于）脂质-脂肪酸轭合物，聚乙二醇或碳水化物。 Z可代表羧基，酰氨基，叔丁氧談基，大分子载体基包括（但不限于）脂质 -脂肪酸轭合物，聚乙二醇或碳水化物。

本发明药用组合物除了有效量的上述本发明作为有效成分的抗病毒肽，另外还可含有其它抗病毒剂，例如作为辅助成分的选自逆转录酶抑制剂、病毒蛋白酶抑制剂、糖苷酶抑制剂、病毒 mRNA封端抑制剂、两性霉 B、具有抗 HTV 活性的酯键结合分子锥栗精胺、羟基脲、 ex干扰素、 β千抗素和 γ干扰素中的一种或多种。另一方面，本发明公开了制备药物组合物的方法，该方法包括向组合物中加入包含氨基酸序列 SEQ ID NO:l或其保守修饰的变体的肽。任何其他抗病毒药物，如上段所述的那些，也可以添加到本发明药物组合物中。

此外，本发明还提供了预防或治疗 HIV感染的方法，该方法包括向需要所述治疗的个体施用包含有效量的含有 SEQ ID ΝΟ:1的氨基酸序列或其保守修饰变体的抗病毒肽，或上述抗病毒肽的混合物，或上述抗病毒肽与其它抗 HIV治疗剂的组合的药用组合物。本发明药用组合物可以每天给药一次或以更长的时间间隔给药。另外的抗病毒治疗剂可选自逆转录酶抑制剂、病毒蛋白酶抑制剂、糖苷酶抑制剂、病毒 mRNA封端抑制剂，两性霉 B、具有抗 HIV活性的酯键结合分子锥栗精胺、羟基脲、 a干扰素、 β干抗素和 γ干扰素中的一种或多种。本发明所述治疗方法还包括选取血浆病毒载量处于非急性感染水平的患者的步骤。在一个实施方案中，接受治疗的患者的血浆病毒载量低于 30,000 c/mL 本发明抗病毒肽可以通过肌肉注射、静脉注射、皮下注射、口服、粘膜、直肠以及透皮的途径给药。附图说明

可从说明书、附图以及所附的权利要求中详实理解本发明的上述特点以及发明本身。附图供理解本发明原理提供，因此未对附图进行测量或强调。

图 1是猕猴单次皮下和静脉给予 FS-01 (1.2 mg kg)后的药时曲线。从图 1 可以看出 FS-01的半衰期为 T_1/2 = 8.13 ± 3.1 h, 生物利用度为 BA= 50%, 达峰时间为 T_max= 0.25 h-2 h, 达峰浓度为 C_max= 508.17士 167.30 ng ml(107.5士 35.4 nM), 24小时浓度 C₂₄>9.8 ng/ml(2.07 nM)。

图 2健康人体单次注射 FS-01药用组合物的药代动力学试验图谱。由图 2可以看出，单次皮下注射 FS-01的清除率 CLS不随剂量增加而减慢，药代动力学过程基本呈线性关系， T_1/2为 20.0±8.6h, 低、中、高剂量组达峰浓度 (C_max)分别为 104 ± 62ng/ml(22.0 ± 13.1nM), 213 士 62ng/ml(45.1 士 13.1nM)和 250士 197ng/ml (52,9 ± 41.7nM)，给药后 72小时血药浓度降至接近本底。图 3是 HIV感染者连续两周分别给予含 10mg和 20mg FS-01的药用组合物后，血浆病毒载量 (VL)log值的变化。由图 3可以看出，给药后各组感染者病毒载量均有下降。但在同一个剂量组下，病毒载量小于 10，000c/ml 的感染者治疗效果更好，其中 20mg组可以降低 1.2个 log。

图 4是连续四周给予含 10 mg和 20 mg 的 FS-01的药用组合物后 CD₄ ⁺ 细胞计数的变化，结果显示给予本发明药用组合物后，感染者的 CD₄+细胞计数明显增加，高剂量组增加更多。发明详述

如上所述，本发明提供 7一种用于预防或治疗 HIV感染的药用组合物，该组合物包含有效量的作为 HIV融合抑制剂的抗病毒肽和药学可接受的载体、赋形剂和稀释剂，所述抗病毒肽含有如下氨基酸序列：根据本发明所讲述的抗病毒多肽的作用机理，其发挥抗病毒活性的部分是 36个氨基酸组成的多肽序列（SEQ ID ΝΟ:1), 因此可以根据本领域熟知的方法对多肽进行不破坏其形成 α螺旋的修饰，如在多肽末端进行修饰 , 以增加多肽的稳定性，生物利用度或活性。

因此，本发明组合物还可以含有序列在 SEQ ID NO:l基础上进行保守修饰的多肽。该多肽的序列为：

X- SWETWEREIENYTRQIYRILEESQEQQDRNERDLLE -Z 其中， X为氨基；疏水基团，包括但不限于苄氧羰基，丹酰基或叔丁氧羰基；乙酰基； 9-芴基甲氧欺基（FMOC ); 大分子载体基，包括但不限于脂质-脂肪酸轭合物，聚乙二醇或碳水化物。 Z代表羧基；氨基；叔丁氧羰基; 大分子载体基，包括但不限于脂质-脂肪酸轭合物，聚乙二醇或碳水化物。

在一个实施方案中，本发明多肽为 CH₃CO-SWETWEREIENYTRQIYRILEESQEQQDR ERDLLE- H₂。（在下文中称为 FS-01) 本发明组合物除了含有抗病毒多肽全长（SEQ ID NO. l ) 的三十六肽外，还可以包含具有抗病毒活性的全长抗病毒多肽（SEQ ID ΝΟ: 1 ) 的截断部分。这种截断肽可包括含 4 ~ 36个氨基酸残基的肽（即从四肽至三十六肽）。

本发明组合物除了含有抗病毒多肽全长（SEQ ID ΝΟ:1 )或其截断部分以外，还包括（但不限于）氨基酸序列中含有 SEQ ID N0.1序列的多肽，含有一个或多个氨基酸取代物、插入物和 /或缺失物的肽。氨基酸序列中含有 SEQ ID ΝΟ:1序列的多肽可在 SEQ ID ΝΟ:1的末端增加 2 ~ 15个氨基酸。氨基酸插入物可由单个氨基酸残基或由 2 ~ 15 个氨基酸长度的残基段组成。氨基酸取代物具有保护或非保护性质。保护性氨基酸取代物由具有类似电荷、大小、和 /或疏水特性的氨基酸来取代。上述氨基酸可以是 D型氨基酸或 L型氨基酸，可以是天然的也可以是非天然的。

在本发明的药用组合物中，上述抗病毒肽的含量可以是 1-100 mg, 优选 3-90 mg、 5-80mg、 7-70 mg、 9-60 mg、 10-50 mg、 15-20 mg、 1-15 mg, 5-15 mg, 20-25 mg、 25-30 mg, 25-100 mg, 30-90 mg 35-80 mg, 40-70 mg, 45-60 mg,例如 3 mg、 5 mg、 10 mg、 15 mg、 20 mg、 25 mg、 30 mg、 35 mg、 40 mg、 45 mg、 50 mg、 55 mg、 60 mg、 65 mg、 70 mg、 75 mg、 80 mg、 90 mg或 100 mg。在一个特别优选的实施方案中，上述组合物中含有 20 mg 抗病毒肽。本发明的药用组合物可以含有 20 % -90 % (重量 /重量)的上述抗病毒肽。在一个实施方案中，本发明的药用组合物含有 20 % (重量 /重量)的上述抗病毒肽。在另外一个实施方案中，本发明的药用组合物含有 40 % (重量 /重量) 的上述抗病毒肽。在又一个实施方案中，本发明的药用組合物含有 60 % (重量 /重量)的上述抗病毒肽。

本发明的药用组合物可以通过本领域已知的任何常规方法进行制备并且可以通过注射、口服、粘膜、直肠和透皮的途径给药。

因此，本发明还涉及一种制备药物组合物的方法，该方法包括在组合物中添加含有氨基酸序列适当修饰的变体的肽。在一个具体的实施方案中，所述肽的含量为 1到 100 mg。在又一个实施方案中，所述肽的重量百分比为 20 % -90%。在另一个实施方案中，该方法还包括向组合物中添加其它抗病毒剂。在一个优选的实施方案中，所述的其它抗病毒剂选自逆转录酶抑制剂、病毒蛋白酶抑制剂、糖苷酶抑制剂、病毒 mRNA封端抑制剂、两性霉 B、具有抗 HIV活性的酯键结合分子锥栗精胺、羟基脲、 α干扰素、 β干抗素和 γ干扰素中的一种或多种。

本发明的上述药用组合物可用于预防或治疗 HI V感染以降低患者的病毒载量、升高患者的 CD₄ ⁺细胞计数。因此，本发明还提供了本发明的上述药用组合物在制备用于预防或治疗 HIV感染以降低患者的病毒载量、升高患者的 CD₄+细胞计数的药物中的用途。在一个实施方案中，使用上述药用组合物可以有效地降低病毒载量 0.5个 log值。在一个优选的实施方案中，降低病毒载量为> 0.7个 log值。另一个优选的实施方案中，降低病毒载量为〉 1个 log值。在一个更优选的实施方案中，降低病毒载量为> 2个 log 值。在一个实施方案中，患者的 CD₄+细胞计数升高到>200个 /mm³。在一个优选的实施方案中，患者的 CD₄+细胞计数升高到>350个 /mm³。在另一个优选的实施方案中，患者的 CD₄+细胞计数升高到>500个 /mm³。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗 fflV感染的早期患者。在优选的实施方案中，所述患者为病毒载量 <30,000 c/ml，优选 <20,000 c/ml，更优选 <10，000 c/ml的早期患者。在另一个实施方案中，所述药物用于治疗已使用过其他抗病毒治疗剂并将病毒载量控制在 <30,000 c/ml, 优选 <20,000 c/ml, 更优选<10,000 ^1111的患者。

此外，本发明还提供了预防或治疗 HIV感染的方法，该方法包括每次给予含 1-100 mg含有 SEQ ID N0:1的氨基酸序列的抗病毒肽的上述药用组合物。在优选的实施方案中，本发明的方法包括每次给予含 3-90 mg、 5-80 mg、 7-70 mg、 9-60 mg, 10-50 mg, 15-20 mg 1-15 mg, 5-15 mg、 20-25 mg, 25-30 mg, 25-100 mg, 30-90 mg, 35-80 mg、 40-70 mg、 45-60 mg, 例 mg、 5 mg、 10 mg> 15 mg> 20 mg、 25 mg、 30 mg、 35 mg、 40 mg、 45 mg、 50 mg、 55 mg、 60 mg、 65 mg、 70 mg、 75 mg、 80 mg、 90 mg或 lOO mg 的上述抗病毒肽的药用组合物。特别优选每次给予含 20 mg的上述抗病毒肽的药用组合物。

在本发明方法的一个实施方案中，将上述药用组合物以每天一次、两天一次、三天一次、四天一次、五天一次、六天一次或七天一次的时间间隔给予患者。在优选的实施方案中，每天一次或每七天一次给予上述药用组合物。在本发明方法的另一个实施方案中，给予患者有效量的上述组合物后，上述抗病毒肽的最大血浆浓度达到 1-250 nM。在优选的实施方案中，给予患者有效量的上述组合物后，抗病毒肽的最大血浆浓度达到 5-250 nM、 10-220 nM、 25-200 nM、 30-180 nM、 35-160 nM、 40-140 nM、 45-120 nM、 50-100 nM、 60-90 nM、 70-80 nM,例如达到 10 nM、 20 nM：、 30 nM、 40 nM、 50 nM、 60 nM、 70 nM, 80 nM, 90 nM、 100 nM, 120 nM、 140 nM、 160 nM, 180 nM, 200 nM, 220 nM, 250 nM。可以通过以上述时间间隔进行给药、通过给予含不同含量的抗病毒肽的上述药用组合物来达到上述的最大血浆浓度。

在本发明方法的另一个实施方案中，接受治疗的 HIV感染者为早期患者。在优选的实施方案中，所述患者为病毒载量 <30，000 c/ml, 优选 <20，000 c/ml, 更优选 <10,000 c/ml的早期患者。在本发明方法的另一个实施方案中，接受治疗的 HIV感染者是已使用过其他抗病毒治疗剂并将病毒载量控制在 <30，000 c/ml, 优选 <20,000 c/ml, 更优选 <10，000 c/ml的患者。根据本发明，将本发明的上述药用组合物按照本发明的方法给予 HIV 感染者后，可以降低患者的病毒载量。使用上述药用组合物可以有效地降低病毒载量 0.5个 log值。在一个优选的实施方案中，降低病毒载量为> 0.7 个 log值。另一个优选的实施方案中，降低病毒载量为> 1个 log值。在一个更优选的实施方案中，降低病毒载量为> 2个 log值。此外，使用上述药用组合物，还可以升高患者的 CD₄+细胞计数。在一个实施方案中，患者的 CD₄+细胞计数升高到>200个 /mm³。在一个优选的实施方案中，患者的 CD₄+ 细胞计数升高到>350个 /mm³。在另一个优选的实施方案中，患者的 CD₄+ 细胞计数升高到>500个 /mm³。

含有 SEQ ID ΝΟ:1的氨基酸序列的抗病毒肽可以和其它的抗病毒药物联合使用以产生更佳的治疗效果，例如产生协同作用和降低副作用。

因此，本发明还提供了包含含有 SEQ ID NO-.1的氨基酸序列的抗病毒肽和其它抗病毒剂的药用组合物、所述药用组合物在制备用于预防或治疗 HIV感染以降低患者的病毒载量、升高患者的 CD₄ ⁺细胞计数的药物中的用途以及通过同时、依次或交^ ί吏用含有 SEQ ID ΝΟ:1的氨基酸序列的抗病毒肽和其它抗病毒剂来预防或治疗 HIV感染的方法。在一个优选的实施方案中，所述的其它抗病毒剂选自逆转录酶抑制剂、病白酶抑制剂、糖苷酶抑制剂、病毒 mRNA封端抑制剂、两性霉 B、具有抗 HIV活性的酯键结合分子锥栗精胺、羟基脲、 a干扰素、 β干抗素和 γ干扰素中的一种或多种。

用于本申请中的抗病毒肽和各种术语的定义如下：

在本发明中使用的抗病毒肽为含有如下氨基酸序列（SEQ ID ΝΟ:1)或其保守修饰的变体的肽：其中，代表氨基酸残基的单字母符号具有本领域常规的含义，即：

A 丙氨酸， R-精氨酸， N=天门冬酸胺， D-天门冬氨酸， C=半胱氨酸， Q= 谷氨酸胺， E 谷氨酸， G=甘氨酸， H-組氨酸， 1=异亮氨酸， L=亮氨酸， K二赖氨酸， M-蛋氨酸， F=苯丙氨酸， P-脯氨酸， S-丝氨酸， T-苏氨酸， W-色氨酸， Y-酪氨酸， V-缬氨酸。

本发明中使用的含有上述氨基酸序列的抗病毒肽可用本领域熟知的技术和方法制得。例如，可在一种载体上或溶液中合成。或者，也可用重组 DNA的技术制备，或分几段合成后再连接在一起。

本申请中使用的术语 "保守修饰" 是指对氨基酸序列进行不明显影响其活性的结构修饰，例如氨基酸的替换、末端氨基酸的修饰，例如在肽的末端引入酰基、疏水性基团和大分子载体基团等。经保守修饰而产生的肽应保留母体肽的至少 60 %的活性，优选保留至少 80 % , 更优选至少 90% 母体肽的活性。

本申请使用的 "病毒性感染" 指病毒侵入细胞的一种疾病状态。病毒侵入健康细胞后，利用宿主细胞的生殖机制进行繁殖，导致该细胞的死亡。病毒颗粒从细胞芽植后，又通过新产生的子代病毒感染其它细胞。某些病毒基因也可能以前病毒的形式整合于宿主染色体 DNA内，形成潜伏感染。前病毒能不断地随染色体的复制而遗传，并随时可被体内外的各种因素激活而使感染者发病。

本申请使用的术语 "治疗或预防病毒性感染" 指抑制特定病毒的复制和传播，预防病毒在宿主中的自我安置，改善或减轻病毒感染引起的症状。治疗有效的标准包括：病毒负载的减轻、死亡率和 /或发病率的降低等。

本申请使用的术语 "衍生物" 指任何含有抗病毒肽序列、同系物、类似物或片断，含一个或多个氣基酸的取代物、插入物和 /或缺失物的肽。

本申请使用的术语 "治疗剂" 指有助于治疗病毒性感染或由此引起的疾病的任何分子、化合物或药物，尤指抗病毒剂。

本申请使用的术语 "协同作用" 是指当将两种或两种以上的治疗剂联合使用时，所产生的效果比单纯使用任何一种治疗剂进行的单一治疗所产生的加合作用更有效，或者可以在比单独使用时低的剂量下产生同样的治疗效果。因此，通过联合使用具有协同作用的两种或多种治疗剂，可以降低用药剂量，增强抗病毒药物的疗效，并避免或减轻病毒对任何单一疗法产生的耐药性。

HIV感染进程

一般认为 HIV病毒感染机体后，其疾病进展取决于病毒与机体免疫两方面因素，一方面是病毒在体内的复制水平，最直观的参数是血浆病毒载量 (VL)，另一方面是机体免疫系统的损坏程度，其中最为重要的免疫细胞是 CD₄+细胞。 T淋巴细胞是机体免疫系统内功能最重要的一群细胞，其主要由 CD₄+ 和 CD₈+二群细胞组成，在正常机体内这两群细胞亚群相互作用，保持一定平衡，从而维持着机体正常免疫功能。当不同淋巴细胞亚群的数量和功能发生异常时，可导致机体免疫功能紊乱并发生一系列病理变化 (全国艾滋病检测技术规范，中国疾病与预防控制中心， 2002):

1) CD₄+细胞数量减少

感染 mv后，体内 CD₄+细胞数量不断减少，急性感染期，以 CD₄+细胞数量的短期内一过性迅速减少为特点，大多数感染者未经特殊治疗， CD₄+ 细胞数量可自行恢复至正常水平或接近正常水平；无症状感染期，以 CD₄ ⁺ 细胞数量持续緩慢减少为特点， CD₄+细胞数多在 800 ~ 350个 /mm³之间，此期持续时间变化较大 (数月至十数年不等)，平均持续约 8年左右；进入有症状期后 CD₄+细胞再次较快速地减少，多数感染者 CD₄+细胞数量在 350/mm³ 以下，部分晚期病人 CD₄+细胞数量甚至降至 200个 /mm³以下，并快速减少。

CD₄+细胞数量的减少是多因素所致，可能由于 CD₄+细胞的破坏增加； CD₄+细胞的产生减少；淋巴组织扣留外周血的 CD₄+细胞等。随着病程进展，由于抗原特异性 T细胞克隆的枯竭，免疫系统已经不能对特定的抗原进行正常的免疫反应 (Sean Emery, et. al. Immune reconstitution in HIV infection. Current Opinion in immunology. 1997， 9: 568-572), 结果导致各种机会性感染和肿瘤的发生。

2) CD₄+细胞功能障碍

主要表现为 T辅助细胞 l(Thl)被 T辅助细胞 2(Th2)细胞代替、抗原递呈细胞功能受损、白细胞介素 -2产生减少和对抗原反应活化能力丧失，使 HIV 感染者或艾滋病病人易发生各种感染。

3)异常免疫激活 fflV感染后的另一免疫病理改变是免疫系统的异常激活， CD₄+和 CD₈+ 细胞表达 CD69、 CD38和 HLA-DR等免疫激活标志物水平异常的升高，且与 HIV血浆病毒载量有良好相关性，且随疾病进展，细胞激活水平也不断升高。因此，异常的免疫激活状况不仅可以衡量血浆病毒载量的变化，还可以预测 CD₄+细胞减少的速度 (艾滋病诊疗指南，中华医学会， 2005)。

HIV治疗中的重要指标

病毒载量反应了血浆中的病毒浓度，是病毒复制和机体免疫清除机制共同作用的结果，在判断疾病的进程中是一项很重要的指标 (姚均等，不同病期 HIV-1 感染者的病毒学和免疫学研究 [J]. 中国艾滋病性病， 2006， 12(1): 1-3)。另一个重要指标 CD₄+细胞被认为是 HIV感染后评判其疾病进展的最好指标。它们也可以单独或联合作为判断疾病进展、临床用药、疗效和预后的重要指标。

血浆病毒载量的检测技术一般有逆转录 PCR 系统 (RT-PCR)、核酸序列依赖性扩增 (NASBA NucliSens )技术、分枝 DNA信号放大系统 (bDNA)。病毒载量测定的临床意义包括预测疾病进程、提供开始抗病毒治疗依据、评估治疗效果、指导治疗方案调整，也可作为 HIV感染早期诊断的参考指标 (艾滋病诊疗指南，中华医学会, 2005)。

CD₄ ⁺细胞是 fflV感染分类系统的划分标准之一，如美国疾病与预防控制中心 (CDC)就是以此为基制订了 HIV感染者或艾滋病病人的诊断和分类标准，目前国内外仍被采纳应用。此外， CD₄+细胞绝对数变化监测，有助于了解患者的病情发展，决定正确的治疗方案，并观察患者对治疗的反应。如判断 HIV感染者的临床合并症（当 CD₄+细胞 < 200个 /mm³时，很容易发生卡氏肺孢子虫肺炎；当 CD₄+细胞 < 50个 /mm³时，易发生巨噬细胞病毒 (CMV)感染。 CD₄+细胞计数可以了解机体的免疫状态和病程进展、确定疾病分期和治疗时机、判断治疗效果和 HIV感染者的临床合并症，因此推荐对 HIV感染者和艾滋病病人定期进行 CD₄+细胞检测。 HIV感染后的病程

从初始感染 HIV到终末期是一个较为漫长复杂的过程，在这一过程的不同阶段，与 HIV相关的临床表现也是多种多样的，一般全过程分为急性期、无症状期和艾滋病期。

急性期通常发生在初次感染 HIV后 2-4周左右。部分感染者出现 HIV 病毒血症和免疫系统急性损伤所产生的临床症状。

无症状期可从急性期进入此期，或无明显的急性期症状而直接进入此期。此期的持续时间一般为 6-8年。其时间长短与感染病毒的数量、性别，感染途径，机体免疫状况的个体差异，营养条件及生活习惯等因素有关。在无症状期，由于 HIV在感染者体内不断复制，免疫系统受损， CD₄ ⁺细胞计数逐渐下降，同时具有传染性。病毒载量与 6 年发病率的关系为： < 500c/ml时 5.4%; 501-3,000c/ml时 16.6%; 3，001-10,000c/ml 时 31.7%; 10₅001-30,000c/ml时 55.2%; > 30,000c/ml时则为 80%。

当 HIV感染者 CD₄+细胞计数 < 200个 /mm³时，病毒载量与 3〜6个月发展至艾滋病的危险的关系为： < 10,000c/ml为 4.9%; 10,000-29,999c/ml 为 12.7%; 30,000-99,990c/ml为 17.7%; > 100,000c/ml为 22.4%。在 CD₄+ 细胞数相同的情况下，年纪大的患者比年轻患者发展为艾滋病的危险更大 (全国艾滋病检测技术规范 2004，中国疾病与预防控制中心）。

在 CD₄+细胞计数分别为 < 200个 /mm³ , 200-350个 /mm³以及〉 350个 /mm³三种情况下，对病毒载量在 < 10，000c/ml, 10，000-30，000 c/ml以及〉 30,000 c/ml的 HIV感染者 3年以上与 9年以上病情进展进行了评估，总的趋势是 CD₄+细胞计数越低，病毒载量越高，感染时间越长，患者的艾滋病发病率越高。例如：当 VL〉30,000c/ml时， CD₄+细胞值 < 200个 /mm³与 CD₄ ⁺细胞值 > 350个 /mm³ 的感染者， 3年后的发病率分别为 86%和 40%, 9年后的发病率分别为 100%和 85% (Mellors JW, Rinaldo CR, Gupta P, et al. Prognosis in HIV-1 infection predicted by the quantity of virus in plasma. Science, 1996, 272(5265): 1 167-70)。最终阶段是艾滋病期。病人的 CD₄+细胞计数明显下降，多数 < 200个 /mm³ , HIV血浆病毒载量明显升高。此期主要临床表现为 HIV相关症状、各种机会性感染及肿瘤 (艾滋病诊疗指南，中华医学会， 2005)。

不同的机构对 HIV感染阶段的分类略有不同。美国 CDC根据 CD 细胞计数与临床症状显示将所有的 HIV感染者分为 9类，其中 CD/细胞计数的分类界限分别为≥500个 /mm³、 200-499个 /mm³、 <200个 /mm³ , 在这三个范围内，又才艮据症状的不同分为急性感染期 (A)、无特殊症状期 (B)与艾滋病指征症状期 (C) , 凡是 CD₄+细胞计数 < 200个 /mm³的患者以及 C类感染者都属于艾滋病患者。美国卫生和人类服务部 (DHHS)2006年公布 HIV 感染的治疗受三个条件临床症状、 CD₄+细胞计数以及 VL的影响，具有艾滋病指征性疾病或具有严重 HIV感染症状者以及 CD₄ ⁺细胞 < 200个 /mm³的无症状者属 AI类，他们需要进行治疗； CD₄ ⁺细胞计数介于 201-350 个 /mm³范围内的无症状感染者属 BII类 , 建议治疗； CD₄+细胞 > 350个 /mm³且 VL〉 100,000c/ml的无症状感染者属 CII类，此类情况下，是否治疗暂时没有定论； CD₄+细胞〉 350个 /mm3以及 VL < 100,000c/ml的感染者属 DII类，建议延迟治疗。国际艾滋病协会 (IAS)对 VL > 30,000c/ml 以及 CD₄+胞 < 350个 /mm³的患者建议治疗； VL < 5000c/ml以及 CD₄+细胞 > 500 个 /mm³的患者建议延期治疗。中国 CDC推荐，在病毒载量达到一定水平后 (如 > 35,000-50，000c/ml),抗病毒治疗效果更好 (全国艾滋病检测技术规范 2004, CDC)。中华医学会推荐，急性感染期内无论 CD₄+细胞计数为多少均应考虑治疗；在无症状感染期， CD₄+细胞计数在 200-350个 /mm³时，当出现下列情况时需进行治疗： 1)CD₄+细胞计数 1年内下降大于 30%; 2)血浆病毒载量 > 100,000/ml; 3)患者迫切要求治疗，且保证有良好的依从性。

不同机构对开始进行抗病毒治疗的时机也有所不同，一般都认为病毒载量越高， CD₄+细胞计数越低，建议治疗的力度越大。而对于 CD₄+细胞计数较高，如>350个 /mm³时，或者病毒载量较低时，如<500(^/1111时，均建议推迟治疗。这是由于此时需要考虑很多影响因素，如患者的 CD₄+细胞计数，基线病毒载量，患者依从性，药物不良反应和长期毒性，以及治疗费用等 (Guidelines for the use of Antiretroviral Agents in HIV-1 -Infected Adults and Adolescents, aidsinfor.nih.gov, 2006)。本发明的一个实施例中，不同基础病毒载量的病人对本发明药用组合物的抗病毒效果有一定的差别，在病毒载量较低时，抗病毒效果好，如小于 10,000c/ml时，仅两周的持续给药就可使 HIV感染者体内的病毒载量降低 1个 log值以上。随着用药时间的延长，病毒载量可能会进一步降低。至少本实施例提示在临床上使用本发明药用组合物，在早期 HIV感染时或已使用其他药物控制病毒载量时使用本发明药用组合物抗病毒效果会更加显著。

HIV感染的治疗效果

一般认为在治疗后，通过病毒水平的检测可以确定治疗是否有效，通常在治疗前后病毒水平降低 0.51og以上才被认为临床有效 (全国艾滋病检测技术规范 2004, CDC)。对于血液中病毒载量为 10，000 c/ml至 30，000 c/ml, CD₄+细胞数少于 350至 500个 /mm³。一般用药 4-8周后病毒载量会下降 1- 2个 log值， 16-24周治疗后检测不到病毒 (<50c/ml)(Kievits T， Can Gemen B, et al. NASBA isothermal enzymatic in vitro nucleic acid amplification optimized for the diagnosis of HIV-1 infection[J], J Virol Methods 1991， 35: 273-86)。 Mellors等人 (Mellors JW, Munoz A, Giorgi JV, et al. Plasma viral load and CD4+ lymphocytes as prognostic markers of HIV-1 infection[J]. Ann Intern Med, 1997, 126: 946-54)研究发现 VL P 低 0.51og,临床危险降低 30%, CD₄+细胞计数提高 10%, 危险降低 15%。

抗病毒治疗后，病毒复制被抑制，外周 CD₄+细胞数量增加，并表现为两个阶段。在开始治疗的 8-12 周，被淋巴组织炎症捕获的淋巴细胞重新分布，导致外周淋巴细胞数量的增加，包括 CD₄ ⁺细胞。在感染一周内 CD₄+ 细胞的增加首先会表现为记忆细胞 CD45 RO+的增加，几周后，幼稚 T细胞 CD45 RA+会出现。在第二阶段， CD₄+细胞的增加变得缓慢，主要是产生 CD45 RA+ 62L+表型的幼稚 CD₄+细胞。（Christoph G. et.al. Immune reconstitution with antiretroviral therapies in chronic HIV-1 infection Journal of Antimicrobial Chemotherapy [J]. JAC, 2003, 51 : 1-4)。辅助刺激分子 CD28 在 CD₄+细胞上的表达增加，而 CD₄+和 CD₈+细胞上的免疫激活标志物 CD38 降低 (Sean Emery, et.al. Immune reconstitution in HIV infection[J]. Current Opinion in immunology. 1997,9: 568-572)。

治疗的最终目标除了病毒载量下降到无法检测的水平外，免疫系统的重建也是抗病毒治疗的目标之一，其反过来可以控制病毒载量。特别是对于那些已经服用多种抗病毒药物却仍能检测到病毒载量的患者，他们无法再增加新的药物来控制病情，因此，部分抑制病毒并恢复免疫功能已经成为治疗的主要的目标 (www.aidsmap.com)。

艾滋病病人免疫功能重建是指经抗病毒治疗后， mv引起的免疫异常改变能恢复至正常或接近正常水平，即： 1)减少的 CD₄+细胞恢复正常；

2)CD₄+细胞恢复对记忆抗原刺激的正常反应能力； 3)病人体内异常的免疫激活恢复正常。当然，免疫重建更包括抗病毒治疗后，与艾滋病相关的各种机会性感染和肿瘤的发生率下降，艾滋病病人的死亡率和发病率减少。但抗病毒治疗对艾滋病免疫功能重建也有其局限性： 1)不能使所有艾滋病病人的免疫功能重建； 2)不能重建抗 HIV 的 CD₄+细胞特异性免疫反应， CD₈+细胞特异性抗 HIV的能力也下降，这意味着病人需长期维持用药。（艾滋病诊疗指南，中华医学会， 2005)。

本发明对 HIV感染的早期患者从感染时间、病毒载量以及 CD₄+细胞计数三个方面进行定义。早期患者是指确诊 HIV感染后 15年以内的患者，进一步说，是感染后 10年以内的患者，再进一步说，是感染后 3到 9年的患者，再进一步说，是感染后 5到 8年的患者。从病毒载量方面，早期患者的病毒载量应该 <30，000c/ml, 进一步说，是< 20,000(；/1111, 本实施例中进行分析的是病毒载量应该 < 10,000c/ml的感染者。早期患者也可以定义为， CD₄ ⁺细胞计数为 200-500个 /mm³的患者，进一步说，是 CD₄+细胞计数为 350-500个 /mm³的患者。给药剂量

在治疗急性病毒感染的哺乳动物（包括人)时，须给予足以抑制病毒复制的有效量的抗病毒肽。给予抗病毒肽的有效剂量可用该领域内技术人员所周知的方法来确定，如设置生物半衰期，生物利用度等药代动力学参数。

给药剂量以抗病毒肽的血药浓度达到有效抑制病毒复制为目标，以改善病人症状或延长病人存活期的用量。这可按标准药学程序经细胞培养或动物实验来确定。在一个实施例中，给猕猴单次皮下和静脉注射 FS-01 , 其半衰期 T_1/2 = 8.13 ± 3.1h, 生物利用度 BA= 50%, 达峰时间 Tmax = 0.25 h 2 h，达峰浓度 C = 508.17±167.30 ng/ml (107.5±35.4 ηΜ), 24小时浓度 C₂₄>9.8 ng/ml (2.07 nM)。

在人体内的试验数据更为精确，为了使抗病毒肽的血浆浓度达到有效抑制体内病毒，特别是 HIV病毒的浓度，可以通过每次给予药学上可接受的有效剂量的抗病毒肽，如每次给予 1-100 mg抗病毒肽，优选 3-90 mg 5-80 mg, 7-70 mg 9-60 mg 10-50 mg 15-20 mg, 1-15 mg, 5-15 mg 20-25 mg 25-30 mg、 25-100 mg, 30-90 mg, 35-80 mg, 40-70 mg, 45-60 mg, 例如 3 mg、 5 mg 10 mg 15 mg 20 mg 25 mg、 30 mg 35 mg 40 mg 45 mg 50 mg、 55 mg 60 mg、 65 mg 70 mg、 75 mg、 80 mg 90 mg或 100 mg抗病毒肽来实现。一个实施例中介绍了给予 HIV感染者不同剂量的本发明抗病毒肽药用组合物，可有效降低其血浆中的 HIV病毒载量，升高 CD₄+细胞，并且在较低剂量，如 5 mg即能产生明显效果。

与抗病毒肽药用組合物联合使用的治疗剂（如抗病毒剂）的有效剂量的确定以该领域技术人员所熟知的各种抗病毒剂的推荐剂量为基础。联合用药的剂量优选比文献所推荐的单独应用的剂量约低 10-50 %。医护人员须注意出现毒性反应的剂量。当出现骨髓、肝、肾功能不全或严重药物相互作用时，医生应知道如何终止及何时终止、及时中断或调整药物至较低剂量。反之，如未达到临床治疗效果，医生也应知道如何提高剂量。给药间隔

预防或治疗病毒感染的给药间隔由药物的吸收、失活和排泄速率以领域内技术人员已知的其他因素。需要注意的是剂量的大小应随需要緩解疾病的严重程度而变化。另外需要理解：对于任一具体受治疗者，特定剂量方案应当根据个体需要和给予或监督，所述药物的给予依专业人员的判断而随时间调整，并且本文所述剂量范围仅是举例，而并非限制所要求保护药用组合物的范围或实施。所述活性成分可以一次性给予，或者可以分成更小剂量以不同时间间隔给予。

在一个实施例中，健康人体单次注射含 10 mg、 20 mg和 30 mg FS-01 的药用组合物前后检测血清样品内的抗病毒肽最大浓度分别为， 104±62 ng/ml (22.0±13.1 nM) , 213±62 ng/ml (45.1±13.1 nM)和 250±197 ng/ml (52.9±41.7 nM), 给药后 72小时血药浓度降至接近本底。因此可以根据本领域熟知的方法推测给药间隔，使得药物在体内能够维持在抑制病毒复制的浓度，如每天两次、每天一次到几天一次，如两天一次、三天一次、四天一次、五天一次、六天一次、七天一次或者更长的时间间隔给予上述剂量的抗病毒肽。

预防或治疗 HIV感染可以通过不同的给药剂量或不同的给药间隔，使血浆中的抗病毒肽维持在有效抑制病毒复制的浓度，如 1-250 nM, 优选 5-250 nM, 10-220 nM, 25-200 nM, 30-180 nM, 35-160 riM、 40-140 nM, 45-120 nM、 50-100 nM> 60-90 nM、 70-80 nM,例如 10 nM、 20 nM, 30 nM、 40 nM、 50 nM、 60 nM, 70 nM, 80 nM、 90 nM, 100 nM, 120 nM、 140 nM, 160 nM, 180 nM, 200 nM, 220 nM> 250 nM。药物制剂和给药途径

本发明给予抗病毒肽的最佳途径包括 (：但不限于)：注射 (：如静脉注射、腹膜注射、肌肉注射、皮下注射等)；上皮或粘膜内吸收 (如口腔粘膜，直肠和阴道上皮，鼻咽部粘膜，肠道粘膜等)；口服；透皮或任何其它药学领域可使用的给药途径。预防或治疗病毒感染可将抗病毒肽或其药用组合物直接给予病人，或将含有本发明肽或其生物的药用组合物与适宜的载体或赋形剂混合，以达到治疗病毒感染的目的。本申请的抗病毒肽制剂和给药技术为本领域技术人员所熟知。

本发明还包括使用药学上可接受的载体，将本文公开的抗病毒肽和 / 或药用组合物配制成适宜的制剂单位，通过不同途径给药。

注射剂是供注入体内的灭菌或无菌药物制剂，可分成溶液型、混悬型、乳剂型与无菌粉末 (粉针)等四种类型，注射剂是当前应用最广泛的剂型之一，它具有许多优点——药效迅速，作用可靠，适用于不宜口服的药物，适用于不能口服给药的病人，可以产生局部定位作用。其治疗途径根据医疗上的需要主要有静脉注射、脊推腔注射、肌内注射、皮下注射和皮内注射等。

注射用无菌粉末简称粉针。凡是在水溶液中不稳定的药物，如青霉素

G、先锋霉素类及一些医用酶制剂 (胰蛋白酶、辅酶 A)及血浆等生物制剂，均需制成注射用无菌粉末。根据生产工艺条件和药物性质不同，一般将冷冻干燥法制得的粉末，称为注射用冷冻干燥制品，而用其它方法如灭菌溶剂结晶法、喷雾干燥法制得的称为注射用无菌分装产品。

冷冻干燥是将需要干燥的药物溶液预先冻结成固体，然后在低温低压条件下，从冻结状态不经过液态而直接升华除去水分的一种千燥方法。凡是对热敏感在水溶液中不稳定的药物，可采用此法制备。冷冻干燥法的优点是：可避免药品如产品中的蛋白质因高热而分解变质；所得产品质地疏松，加水后迅速溶解恢复药液原有的特性；含水量低，一般在 1 ~ 3%范围内，同时干燥在真空中进行，故不易氧化，有利于产品长期贮存；产品中的微粒物质比用其它方法生产者少，因为污染机会相对减少；产品剂量准确，外观优良。

为确保药物粉末符合注射要求，在进行无菌分装粉末产品之前需要对物料的热稳定性，临界相对湿度、粉末的晶形和粉末松密度 (比容)等理化性质进行测定，将符合注射用要求的药物粉末在无菌操作条件下直接分装于洁净灭菌的小瓶或安瓿中，密封而成一个制剂单位，便于临床使用，通过冻干方法获得的制剂单位成为粉针制剂。

如注射剂中，为了提高注射剂的有效性、安全性与稳定性，注射剂中除活性成分外还可添加其它物质，这些物质统称为"附加剂"。常用的附加剂有增溶剂、緩冲剂、助悬剂、稳定剂、螯合剂、抗氧剂、抑菌剂、局麻剂、等渗调节剂、填充剂、保护剂等，如醋酸盐、磷酸盐、碳酸盐、甘氨酸、甘露醇、乳糖、人血白蛋白等。对于药物配制的过程，可以按照本领域技术人员熟知的方法实施，可将抗病毒肽配制成无菌无致热原的水溶液，如蒸馏水，或者更为合乎要求地，用盐水、磷酸盐緩沖盐水或 5 %葡萄糖溶液配制，并有选择地将酸碱度调至生理可耐受的 pH值，如微酸或生理性 pH，灭菌或进行无菌过滤，将所得的溶液罐装在单位容器中，如西林瓶，冻干后制成便于使用的制剂单位，该制剂单位的内包装和 /或外包装上表明该制剂单位的用药提示，如所含活性成分的重量或含量，以及使用频率。一个实施方案为每天皮下注射一次，另一个实施方案为每七天皮下注射一次。在使用前，将制剂单位用无菌水溶解，给予患者。本发明的一个实施方案中，根据抗病毒肽的不同剂量采用不同的 pH调节剂，如磷酸盐和碳酸盐，来制备适合注射的粉针制剂。

本发明中的抗病毒肽还可采用本领域熟知的并且药学上可接受的载体配成适宜于口服给药的剂型。这类载体能将本发明的化合物配制成片、丸、胶嚢、液体、凝胶、糖浆、淤浆和混悬等剂型。

给药途径可包括口腔、直肠、透膜或肠道给药；胃肠外给药包括肌内、皮下、髓内注射、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内或眼内注射；透皮、局部用药、阴道用药等。剂型包括 (但不限于)片剂、锭剂、散剂、悬浮剂、栓剂、溶液、胶嚢、霜剂、贴剂、微泵剂。

抗病毒药物的口服制剂可用固体赋形剂磨碎成均匀的混合物，再加工成颗粒，必要时加入适宜的辅助剂，制成片剂或糖衣片的片芯。适宜的赋形剂及填料如糖；包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨糖醇；纤维素制品剂如玉米淀粉、小麦淀粉、米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、西黄耆胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和 /或聚乙烯吡咯烷酮。如果必要，可以加入崩解剂，如交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，或藻酸或其盐类如藻酸钠。糖衣片芯应提供适当包衣。可釆用浓缩糖溶液，溶液中可含阿拉伯树胶、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、 carbopol凝胶、聚乙二醇、二氧化钛、硝基纤维素溶液及适当的有机溶剂或溶剂混合物。为了区别或标示活性化合物，可将不同组合的染料或食用色素加到片剂或糖衣片的包衣中。

用于口服的药用组合物包括由明胶制成的装填式胶嚢，以及由明胶和一种增塑剂如甘油或山梨醇制成的密封软胶嚢。装填式胶嚢含有填充剂如乳糖、粘合剂如淀粉，和 /或润滑剂如滑石或硬脂酸盐。也可用稳定剂来稳定活性成分。在软胶嚢中，活性化合物可溶解或悬浮于适当的液体中，如脂肪油、液体石蜡或液状聚乙二醇。此外，还可加入稳定剂。口服的所有制剂都应是方便病人服用的合适剂型。对于口腔给药而言，所述药用组合物可采用片剂或锭剂等方便的形式配制。

对于吸入给药，可通过高压包或喷雾器，或使用某种合适的抛射剂如二氯二氟甲烷，三氯氟代甲烷，二氯四氟乙烷，二氧化碳或其它适合的气体来实现。在高压气雾剂的情况下，剂量单位可通过一个阀的计量释放来确定。用作吸入器或吹气器的明胶胶嚢和药筒可制成含有所述的肽和一种合适的粉末基质 (如乳糖或淀粉)的混合物。

胃肠外给药的剂型，如注射，包括集合药团注射或连续静脉滴注。便于注射的制剂可包装成单位剂量形式，如安瓶。多剂量的制剂可包装成单位剂量形式，如安瓶或多剂量容器，并加入保存剂。所述药用组合物也可采用混悬液、溶液或以油或水为介质的乳剂形式，且可含有一定的配方剂如悬浮剂、稳定剂和 /或分散剂。

用于胃肠外给药的药用组合物包括活性物质的水溶液，即水溶形式。活性物质的悬浮液也可制成适宜的油状注射悬浮液。合适的亲油溶剂或载体包括脂肪油如芝麻油、或合成的脂肪酸酯，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体。水性注射悬浮液可含有增加悬浮液粘度的物质，如羧曱基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。所述悬浮液也可选择性地包含合适的稳定剂或增加化合物溶解度的物质，以制备高浓度的溶液。粉针剂的活性成分可与适当的溶媒，如无菌去热源注射用水配合，然后使用。

抗病毒肽的也可配制成直肠给药制剂如栓剂或滞留灌肠剂。可用常规基质如可可脂或其它甘油酯配制。

除了已描述过的制剂外，还可使用长效制剂。这种长效制剂可采用皮下或肌肉植入法或肌注给药。因此，抗病毒肽或药用组合物可用合适的聚合物或疏水物质 (如油乳剂）或离子交换树脂、或微溶的衍生物如微溶盐来配制。

可用的疏水化合物的药物载体为含苄醇，非极性表面活性剂，与水混溶的有机聚合物和水相的共溶体系。该共溶体系可为 VPD共溶体系。 VPD 是一种由 3 % (重量 /容量 W/V)苄醇溶液， 8 % (W/V)的非极性表面活性剂多乙氧基醚，及 65 % (W/V)的聚乙二醇 300在无水乙醇中组成的溶液。而 VPD 共溶体系（VPD: 5W)由 1 : 1稀释的 VPD与 5 %的葡萄糖在水溶液中配成。这种共溶体系能较好地溶解疏水性化合物，而体系本身对全身给药的毒性很低。在不破坏其溶解度和毒性的情况下，共溶体系的比例可有较大的变化。而且，共溶成份的同一性也可以变化，如可用其它低毒性的非极性表面活性剂来取代多乙氧基醚；聚乙二醇的所占比例也可改变；其它生物相容的聚合物也可取代聚乙二醇，如聚乙烯吡咯烷酮；其它糖或多糖可代替葡萄糖。

抗病毒肽也可包括适当的固相或凝胶相载体式赋形剂。这类载体或赋形剂包括 (但不限于)碳酸钩、磷酸 4弓、各种糖、淀粉、纤维素衍生物、明胶及聚合物如聚乙二醇。

适于本发明的药用组合物也包括为达到治疗目的所用的有效量的活性成分的药用组合物。有效量的确定方法为本领域技术人员所熟知。联合用药

本发明还涉及联合用药，即抗病毒肽与其它治疗剂，特别是至少一种其它抗病毒剂在联合用药中的合并使用，以治疗或预防人或其它哺乳动物的病毒性感染，尤其是 HIV感染。这些药物可以与病毒融合抑制剂有相同或不同的作用部位或作用机理。药物联合使用的结果可能产生协同作用或增效作用。

本发明的联合用药也适用于緩解或治疗与 HIV感染有关的免疫抑制疾病。例如，抗病毒肽与抗真菌剂、抗菌素或其它抗病毒剂合用，可抑制 HBV、 EBV、 CMV, 及其它机会性感染（包括 TB)。

因此，本发明提供了一种改进的抗病毒治疗方法，用于治疗广谱病毒 (包括 HIV)的感染。此外，本发明也提供了旨在增加疗效的联合用药。抗病毒肽和至少一种其它治疗剂或 /和一种药学上可接受的载体的联合使用，可能减轻药物毒性，提高治疗指数，并防止病毒对单一疗法产生耐药性。

更准确地说，本发明涉及下述联合用药，包括 (但不限于)：同时给药、按先后次序给药、周期性给药、周期疗法 (如在一段时间内给第一种抗病毒化合物， '然后再给第二种抗病毒化合物，然后重复此种给药顺序 (即周期)，以降低抗病毒疗法可能产生的耐药性。

本发明提供了一种新的治疗手段。它可以减少其它抗病毒治疗剂的有效剂量，从而降低毒性。更重要的是，药物组合可以通过多种机制遏止病毒对宿主细胞的感染，增强抗病毒的疗效，并防止病毒对单一疗法产生耐药性的手段，从而增加了治疗成功的可能性。

联合使用的治疗剂包括：各种已知的和正在实验的药物。但最好的组合是将抗病毒肽与另一种具有不同机理的治疗剂合用。这些治疗剂包括 (但不限于）：抗病毒剂，如细胞活素 (Cytokines)包括 rIFNo rIFN > rlFNy; 逆转录酶！⁷制剂，如 AZT、 3TC、 ddl、 ddC、 Nevimpine、 Atevirapine、 Delavirdine、 PMEA、 PMPA、 Loviride和其它双脱氧核苷或双脱氧氟代核苷；病毒蛋白酶 4 制剂 Saquinarir、 Ritonavir、 Indinavir > Nelfmavir、 VX-478; 幾基脲；病毒 mRNA封端 (capping)抑制剂如病毒唑；两性霉素 B; 有抗 HIV活性的酯键结合分子（castanospermine) , 糖蛋白加工抑制剂；糖苷酶抑制剂 SC-48334、 MDL-28574; 病毒吸附剂； CD₄受体阻断剂；趋化因子受体抑制剂；中和性抗体；整合酶抑制剂及其它融合抑制剂。本发明人相信 HIV及其它病毒从感染细胞之日起，就每天 24小时不停地复制。因此，有必要在病毒感染的不同阶段采用抗病毒剂治疗。本发明还涉及将抑制病毒与细胞融合及抑制病毒在细胞间传播的肽与另一种治疗剂的联合使用。

本发明中使用抗病毒肽与一种或多种有不同作用靶点的药物联合使用，可能提供相加作用或协同作用。联合用药不仅可减少所需的抗病毒药物的有效剂量，从而降低其毒性，而且还可以通过多种机制攻击病毒，以提高其抗病毒的疗效。最后，本发明的联合用药也可防止或减轻产生病毒耐药性的机会。

本发明涉及对人及其它哺乳动物 HIV感染的治疗手段，该手段包括给予有效量的抗病毒肽和至少一种其它治疗剂。这种治疗剂最好是另一种抗病毒剂。

本发明为治疗病毒性感染 (特别是 HIV感染)提供了一种方法。本发明还提供了一种治疗 HIV感染的协同组合，它包括有效量的抗病毒肽，和至少另一种抗病毒化合物。抗病毒肽最好与逆转录病毒抑制剂、病毒蛋白酶抑制剂、细胞活素或细胞活素抑制剂、或其它病毒融合抑制剂合用。本发明的联合用药将更有效地抑制病毒的复制和传播。

本发明所述的治疗 HIV感染的方法包括单独应用抗病毒肽，以及包括抗病毒肽在内的联合用药，即抗病毒肽和至少一种其它治疗剂，或同时使用（如作为混合物，或分开但却同时使用）；或者按先后次序使用（包括周期疗法)。周期疗法涉及在一段时间内给病人第一种抗病毒化合物，随后在另一段时间内给病人第二种抗病毒化合物，并重复这种给药次序（即周期），以減轻对所述疗法之一产生的毒副作用及耐药性。

本发明还涉及另一种周期疗法。该疗法包括给予本发明的肽之后，再给予另一种抗病毒剂，然后再给予本发明的肽或另一种病毒融合抑制剂等等，即把所述的病毒融合剂与其它抗病毒剂联合使用。 "联合用药"既包括两种或两种以上的治疗剂作为一种治疗混合物一起使用，也包括两种或两种以上治疗剂分开给予但同时使用，如经不同的静脉进入同一个体。 "联合用药"还包括按一定次序分开给药，即先给一种药物，再给第二种药物。

与抗病毒肽联合使用的优选治疗剂包括 (但不限于)下列不同的攻击病毒的模式：抑制逆转录酶，抑制病毒 mRNA封端，抑制 HIV蛋白酶，抑制蛋白糖基化，抑制整合酶，及抑制病毒融合。采用这些攻击模式的药物包括 (但不限于)：抗病毒剂，如细胞活素，如 rIFNo rIFNp rlFNy; 细胞活素抑制剂；逆转录酶抑制剂，如 AZT、 3TC、 ddl、 ddC；、 d4T、 Nevirapine, Atevirapine、 Delavirdine、 PMEA、 PMPA、 Loviride和其它双脱氧核苷或双脱氧氟代核苷；病毒蛋白醇 P制剂，口 Saquinavi Ritonavir^ Indinavir > Nelfmavir, VX-478;糖苷酶抑制剂，如 SC-48334、 MDL-28574;病毒 mRNA 封端 (capping)抑制剂如病毒唑；两性霉素 B; 有抗 HIV活性的酯键结合分子锥栗精胺 (castanospermine); 羟基脲；糖蛋白加工抑制剂；病毒吸附剂； CD4受体阻断剂; 趋化因子受体抑制剂; 中和性抗体; 整合酶抑制剂及其它融合抑制剂。

可与抗病毒肽一起使用的其它抗病毒剂包括 (但不限于)作用于病毒复制过程中不同靶点的药物，如逆转录酶抑制剂，病毒蛋白酶抑制剂，糖基化抑制剂等；作用于病毒传播过程中不同靶点的抗病毒剂；作用于同一分子不同位点的抗病毒剂；以及预防或降低病毒耐药性发生的抗病毒剂。本领域技术人员都了解上述各种抗病毒治疗剂的作用机理及联合应用的益处。

本发明所述的肽可与逆转录病毒抑制剂，包括 (但不限于)与核苷类化合物联合使用。核苷类化合物为嘌呤和嘧啶核苷的改良型化合物，其作用机理均为阻断 R A和 DNA的构成。这些新核苷类化合物缺乏能结合到核苷上的 3，取代基，抑制逆转录酶引起的 cDNA合成，从而终止病毒 DNA 的复制，成为抗 HIV治疗剂。如 AZT和 ddl在体内外均抑制 HIV-1的复制，早已被批准治疗 HIV感染和艾滋病。然而，用这类药治疗可导致耐药 HIV 株的大量繁殖，而且还有许多毒副作用。核苷类化合物包括 (但不限于) 2，， 3，-二脱氧腺苷 (ddA); 2，， 3，-二脱氧鸟苷 (ddG); 2，， 3，-二脱氧肌苷 (ddl); 2' , 3，-二脱氧胞苷 (ddC); 2，， 3，-二脱氧胸苷 (ddT); 2，， 3，-二脱氧 -二脱氧胸苷 (d4T)和 3，-叠氮基 2，， 3，-二脱氧胞苷 (AZT)。另外也可选择使用代核苷类化合物，优选 2，， 3，-二脱氧 -2，-氟代核苷类，包括 (但不限于)： 2，， 3，-二脱氧 -2，-氟代腺苷； 2，, 3，-二脱氧 -2，- 氟代肌苷； 2' , 3，-二脱氧 -2，-氟代胸苷； 2，， 3，-二脱氧 -2，-氟代胞苷；和 2，， 3，-二脱氧 -2，， 3，-二脱氢 -2，-氟代核苷类包括 (但不限于)： 2，， 3，-二脱氧 -2，， 3，-脱氢-2，氟代胸苷(？(141)。本发明优选 2，， 3，-二脱氧 -2，-氟代核苷为氟键在 β构型上的核苷类，包括 (但不限于)： 2，， 3，-二脱氧 -2: β-氟代腺苷 (F-ddA)， 2，， 3，-二脱氧 - ，β-氟代肌苷 (F-ddl),及 2，， 3，-二脱氧-2. 氟代胞苷 -(1(1 )。联合用药可降低所用的核苷类化合物的剂量，在不失去其抗病毒活性的基础上，降低其毒性，并且将降低或避免病毒产生耐药性。

可以将抗病毒肽与和核苷类化合物的优选组合同时或先后给予 HIV 患者：包括将效量抗病毒肽和有效量的 AZT、 ddC和 /或 d4T组合，更优选的药物组合 (但不限于）：使用有效量的抗病毒肽和有效量的 ddl; 和 /或有效量^ I 3TC、 Viramune、 Rescriptor、 Sustiva、 Loviride、 Nevirapine、 Atevirdine。

本发明方法中所使用的抗病毒肽也可与尿苷磷酸化酶抑制剂联合使用。这类抑制剂包括 (但不限于)无环尿苷化合物，包括苄基无环尿苷 (BAU); 苄氧基苄基无环尿苷 (BBAU); 氨甲基苄基无环尿苷 (AMBAU); 氨甲基苄氧基苄基无环尿苷 (AMB-BAU); 羟甲基苄基无环尿苷 (HMBAU); 及羟甲基苄氧基苄基无环尿苷 (HMBBAU)。

本发明方法中所使用的抗病毒肽也可与细胞活素或细胞活素抑制剂联合使用，包括 (但不限于）： rIFNc rIFNp, rIFNy; TNFa抑制剂， MNX-160, 人 rIFNo 人 rIFNp和 rIFNy。更优选的联合用药包括：有效量的抗病毒肽和有效量的 β干扰素。

蛋白酶抑制剂主要是在病毒装配期或装配后（即病毒芽生)起作用，以抑制病毒发育至成熟。蛋白酶抑制剂在体内体外都显示出抗病毒活性。艾滋病患者用蛋白酶抑制剂后，血浆 HIV-1水平呈指数下降， CD4+淋巴细胞计数升高 (Deeks等， 1997, 美国医学协会杂志 (JAMA)277: 145-53)。病毒蛋白酶抑制剂与抗病毒肽的联合使用可能产生协同作用并取得显著的临床效果。在治疗 HIV感染的方法中，联合用药包括使用有效量的抗病毒肽和一种有效量的蛋白酶抑制剂联合使用，包括 (但不限于）： Indinavir, Invirase, Norvir, Viracept, Agenerase。

此外，本发明方法中所使用的抗病毒肽可与两性霉素 B联合使用。两性霉素 B为一种多烯类抗真菌抗生素，它与醇相互作用并与其发生不可逆性结合。两性霉素 B及其曱酯对多种脂包膜病毒，包括 HIV有抑制作用。两性霉素 B对人体有严重毒性，但其曱酯对细胞的毒性较低。因此，两性霉素 B或其甲酯可与抗病毒肽联合使用。这种联合用药可能产生抗 HIV的协同作用，从而允许临床医生使用较低剂量的两性霉素 B或其甲酯，而又不必顾虑丧失其抗病毒活性。

本发明方法中所使用的抗病毒肽也可与糖蛋白加工抑制剂锥栗精胺联合使用。锥栗精胺为一种抑制糖蛋白加工的植物生物碱。 HIV包膜上含两个大糖基化蛋白 gpl20和 gp41 ,蛋白的糖基化在 gpl20与 CD₄的相互作用方面起重要作用。在锥栗精胺存在下合成的子代病毒的感染性减弱。抗病毒肽与其合用可能产生协同作用。

有关本发明方法中所使用的抗病毒肽与上述抗病毒治疗剂联合使用的治疗效果，可用本领域内普遍应用的方法来评价。例如，可用多种体外实验来测试抗病毒肽和 AZT联合使用的效果，如：抑制 HIV对细胞毒性，抑制合胞体形成，抑制逆转录酶活性，或抑制病毒 RNA或蛋白合成的能力，等等。

预防或治疗 HIV感染的方法包括，把抗病毒肽与至少一种其它抗病毒剂如逆转录酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、 mRNA加工的抑制剂、蛋白糖基化抑制剂、病毒吸附剂、 CD₄受体阻断剂、趋化因子受体抑制剂、中和性抗体、整合酶抑制剂及其它融合抑制剂联合使用。这类治疗剂包括 (但不限于) 核苷类似物或链终止剂；趋化因子受体抑制剂 AMD-3100 (Tremblay, C.L. 等， 2000，艾滋病杂志 (J. AIDS)l : 25(2)99-10)。

在本发明范围内 , 可与抗病毒肽联合使用的其它治疗剂包括 (但不限于)： 2-脱氧 -D-葡萄糖 (2dGlc)、脱氧野尻霉素、无环鸟苷、病毒唑 (virazole)、利福平 (rifadin), 金刚烷胺、利福布丁 (rifabutine), 更普洛韦（ganciclover、 DHPG)、法昔洛韦 (Famciclover)、布普洛韦（Buciclover、 DHBG)、氟化碘化阿糖胞嘧啶 (fluoroiodoaracytosine)、碘苷、三氟胸腺嘧啶核苷、阿糖腺苷 (am-A)、 ara-AMP,溴乙烯基去氧尿苷、溴乙烯阿糖尿嘧啶 (BV-arau)、 1-b-D- 阿糖呋喃糖苷 -E-5-0溴乙烯基]尿嘧啶、金刚乙胺，羟基脲，苯乙庚二酮、二芳基脒、（S)-(对硝基苄基) -6-硫代肌苷和膦酰基甲酸盐。本发明包括含使用抗病毒肽和任何上述其它化合物的药用组合物。

此外，所述的肽也可作为一种预防性措施 , 用于先前未曾感染但急性暴露于 HIV的个体。所述肽的这种预防性使用的实例包括 (但不限于：)：病毒经母婴传播的预防；其它可能传播 HIV的固定场所，如在医疗部门的意外事故中，医护人员不慎暴露于 HIV污染的血液、血制品及体液。在此情况下，抗病毒肽可起到预防性疫苗的作用。给药后，宿主将产生针对抗病毒肽的抗体，从而抑制 HIV的进一步感染并中和 HIV病毒。

本发明所述肽用作预防性疫苗的实施方案包括：给予宿主一定浓度的有效肽以产生足够中和 HIV的免疫应答，如抑制 HIV感染细胞的能力。可使用该领域内普通技术人员熟知的标准技术来测定免疫应答的产生。用作疫苗的肽通常肌注给药。

为增强免疫应答，所述的肽可和适当的添加剂配在一起。这类添加剂包括 (但不限于)矿物质凝胶如氢氧化铝；表面活性物质如溶血卵磷脂； Puronic多元醇，聚阴离子；其它肽类；油乳剂；以及其它潜在的人用添加剂如卡介苗 (BCG)和小棒状杆菌。给予所述疫苗制剂的途径包括 (但不限于) 口服、皮内、肌内、腹膜内、静脉、皮下和鼻内。

与本领域的同类现有技术相比，本发明提供了一种抗病毒药用组合物及其制备方法，该组合物可以用于预防或治疗 HIV感染，对病毒，特别是对 mv病毒感染者体内的病毒复制有很好的抑制作用，并且可以升高感染者体内的 CD₄+细胞，有利于免疫系统的重建，有利于感染者的预后。用以下实施例来说明本发明的药用组合物的制备以及使用效果。实施例 1一制备含抗病毒肽 FS-01的药用组合物

本实施例介绍了抗病毒肽 FS-01 的药用组合物，注射粉针制剂的制备方法，按照表 1中所示配比称取规定量的填充剂、 pH调节剂和抗病毒肽，加入适量注射用水使完全溶解，经过除菌过滤，膜滤，最终冻干获得含 FS-01的粉针制剂。

表 1. 注射用抗病毒肽组合物处方 (重量 /重量) 原辅料配方 A 配方 B 配方 C 作用

FS-01 (SEQ ID NO: 1) 20 % 36 % 90 % 活性成分甘露醇 20 % 62 % 4% 填充剂

NaH₂P0₄.2H₂0 4 % 0 0

pH 调节

Na₂HP0₄.12H₂0 56 % 2 % 0

剂

Na₂C0₃ 0 Q 8% 实施例 2 -猕猴单次皮下和静脉注射 FS-01的药代动力学实验

猕猴单次皮下、静脉给予 FS-01(1.2 mg/kg)的单次给药药代动力学试验结果 (图 1)显示， FS-01的半衰期1_1/2 = 8.13士 3.1 h, 生物利用度 BA= 50%，达峰时间 T_max = 0.25 h - 2 h , 达峰浓度 C_max= 508.17士 167.30 ng/ml (107.5±35.4 nM), 24小时浓度 C₂₄>9.8 ng/ml(2.07 nM)。

具体实验方法如下：猕猴 3只，采用交叉设计，清除期大于 2周。猕猴皮下注射或静脉 1.2 mg/kg FS-01给药，不同时间点取血 1 ml(0, 1 , 5, 15,

30 min, 1 , 2, 4, 6, 8, 12, 24和 48 h)。 LC\MS\MS的方法以碘化 FS-01 作为内标，进行血样分析，选用 C₁₈柱，用 0.1 %TFA的水溶液和乙腈溶液作为流动相，进行定量分析，得到不同时间的血药浓度，进行血浆 FS-01浓度的药代动力学分析，进行模型拟合及确定血浆半衰期 (T_1/2)和生物利用度等药动学参数 (图 1)。实施例 3 -健康人体单次注射含 FS-01的药用组合物的药代动力学试驗采用三向交叉拉丁方设计， 12名受试者随机进入 3个试验组，每组 4 名，先后腹部皮下注射含 10、 20、 30mg FS-01的药用组合物，剂量如表 2 所示，于给药前 30-5 min, 给药后 5 , 15 , 30min, lh， 2h, 4h, 6h, 8h, 12h, 24h, 36h, 48h和 72h留取药 ^动力学血样标本依照上面实施例中的 LC\MS\MS方法定量检测血清样品内的 FS-01进行检测。结果（图 2)显示，单次皮下注射 FS-01的清除率 CLS不随剂量增加而减慢，药代动力学过程基本呈线性关系，低、中、高剂量组达峰浓度 (C_max)分别为 104 ± 62 ng/ml(22.0±13.1 nM), 213 士 62 ng/ml(45.1±13.1 nM)和 250 士 197 ng/ml (52.9±41.7 nM), 给药后 72小时血药浓度降至接近本底。

表 2健康人体单次注射药用组合物的药代动力学试验设计随机分组第一次试验剂量第二次试验剂量第三次试验剂量第一组 10 mg 20 mg 30 mg

第二组 20 mg 30 mg 10 mg

第三组 30 mg 10 mg 20 mg

实施例 4 - HIV感染者连续皮下注射含 FS-01的药用组合物的试验

共 21名受试者，随机分为 5组，分别给与分别含 FS-01 1 mg, 5 mg, 10 mg, 20 mg, 30 mg的药用组合物每日一次皮下注射，共给药 14天。于给药前后测定病毒载量，试验结果 (表 3)表明治疗后各组病毒载量均有所下降，且在 5 mg组就可明显降低 HIV病毒载量。各个剂量组的 CD₄+细胞计数均有所增加。且未见明显的副作用。表 3 HIV感染者连续皮下注射药用组合物前后病毒载量 log平均值的变化组别 1 mg 5 mg 10 mg 20 mg 30 mg 例数 (21例) 4 4 6 4 3

VL平均变化值 (log) -0.07 -0.76 -0.47 -0.89 -0.3

CD₄ ⁺平均变化值 (个 /mm³) 30 102 29 46 73 实施例 5 - HIV感染者连续皮下注射含 FS-01的药用组合物的试验

19名 HIV感染者，随机分为两组，分别给予含 10 mg和 20 mg FS-01 的药用组合物，每日一次皮下注射，共给药 28天。与实施例 4中的数据一同分析。

试验结果表明本发明药用组合物的安全性良好。未发现明显的副作用。给药 14天后， 20 mg组中，治疗前病毒载量<10，000 (；/1111的 HIV感染者血浆中的病毒载量下降明显，降低 1.2个 log (图 3), 而对于用药前病毒载量 >10，000 c/ml的感染者，建议与其他抗病毒药物联合使用，如抗逆转录病毒抑制剂或蛋白酶抑制剂。 20 mg组的 HIV感染者中 FS-01的半衰期为 39 小时。

试验结果还表明，给药 28天后，感染者血浆 CD₄+细胞计数在 10 mg 和 20 mg两个剂量组中均有显著提高，且 20 mg组 CD₄+细胞计数增加更多 (图 4)。

综上所述，本发明的含有有效量抗病毒肽的药用组合物可有效抑制 HIV病毒的复制，从而降低感染者体内 HIV病毒载量，增加 CD₄+细胞数量。通过不同的给药剂量、给药间隔和给药途径使抗病毒肽在人体内维持一定的血药浓度，可实现预防或治疗 HIV感染的目的。

Claims

权利要求

1.一种用于预防或治疗 HIV感染的药用组合物，其中含有有效量的包含氨基酸序列 SWETWEREIENYTRQIYRILEESQEQQDRNERDLLE (SEQ ID ΝΟ:1)或其保守修饰变体的抗病毒肽。
2. 权利要求 1的药用组合物，其中所述的肽含有如下氨基酸序列： X-SWETWEREIENYTRQIYRILEESQEQQDRNERDLLE -Z

其中 X为氨基、乙酰基、疏水基团或大分子载体基， Z为羧基、氨基、叔丁氧羰基，疏水基团或大分子载体基。
3. 权利要求 2的药用组合物，其中疏水基团选自苄氧羰基、丹酰基、叔丁氧羰基和 9-芴基曱氧羰基，大分子载体基选自脂质-脂肪酸轭合物、聚乙二醇或碳水化物。
4. 权利要求 2的药用组合物，其中的多肽序列为：

CH₃CO-SWETWEREIENYTRQIYRILEESQEQQDRNERDLLE-蘭 ₂。
5. 权利要求 1 - 4中任意一项所述的药用组合物，其中所述抗病毒肽的含量为 1-100 mg,优选 3-90 mg、 5-80 mg、 7-70 mg、 9-60 mg, 10-50 mg、 15-20 mg、 1-15 mg, 5-15 mg, 20-25 mg、 25-30 mg, 25-100 mg, 30-90 mg, 35-80 mg、 40-70 mg、 45-60 mg, 例如 3 mg、 5 mg、 10 mg、 15 mg> 20 mg> 25 mg、 30 mg、 35 mg、 40 mg、 45 mg、 50 mg、 55 mg、 60 mg、 65 mg、 70 mg、 75 mg、 80 mg、 90 mg或 100 mg, 更优选所述抗病毒肽的含量为 20 mg。
6. 权利要求 1 - 5 中任意一项所述的药用组合物，其中所述抗病毒肽的含量为 20%-90% (重量 /重量)，优选 40% (重量 /重量)。
7.权利要求 1 - 6中任意一项所述的药用组合物，其是粉针制剂。
8.权利要求 1 - 6中任意一项所述的药用组合物，其是冻干粉针制剂。
9.权利要求 1 - 8中任意一项所述的药用组合物，其中还含有其它抗病毒剂。
10. 权利要求 1 - 9 中任意一项所述的药用组合物在制备用于预防或治疗 HIV感染以降低患者的病毒载量、升高患者的 CD<sub>4</sub>+细胞计数的药物中的应用。
11. 权利要求 10 所述的应用，其中所述药物用于病毒载量 <30，000 c/ml, 优选 <20,000 c/ml, 更优选 <10,000 c/ml的早期患者。
12. 一种预防或治疗 HIV感染的方法，其特征是，向需要所述治疗的患者施用权利要求 1 - 9中任意一项所述的药用组合物。
13. 权利要求 12所述的方法，其特征是，以每天两次、每天一次、两天一次、三天一次、四天一次、五天一次、六天一次或七天一次的时间间隔向需要所述治疗的患者施用权利要求 1 - 6 中任意一项所述的药用组合物。
14. 权利要求 12或 13所述的方法，其特征是，使抗病毒肽的血药浓度达到 1-250 nM, 优选 5-250 nM、 10-220 nM、 25-200 nM, 30-180 nM, 35-160 nM, 40-140 nM, 45-120 nM, 50-100 nM、 60-90 nM、 70-80 nM、 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM、 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 90 nM, 100 nM. 120 nM、 140 nM, 160 nM、 180 nM, 200 nM, 220 nM、 250 nM。
15. 权利要求 12 - 14任意一项所述的方法，其特征是所述患者是病毒载量 <30,000 c/ml, 优选 <20，000 c/ml，更优选 <10，000 c/ml的早期患者。
16. 权利要求 12 - 14任意一项所述的方法，其特征是所述患者是已使用过其他抗病毒治疗剂并将病毒载量控制在 <30,000 c/ml, 优选 <20,000 c/ml , 更优选 <10,000 c/ml的患者。
17. 权利要求 12 - 16任意一项所述的方法，其特征是通过注射、口服、粘膜、直肠和透皮的途径进行给药。
18. —种预防或治疗 HIV感染的方法，其特征是，将权利要求 1-8中任意一项的药用組合物与其他抗病毒剂联合或交替给药。