KR20070114806A - 바이러스 감염 치료에의 티오포스포노포름산 및 ｎｒｔｉ의용도 - Google Patents

바이러스 감염 치료에의 티오포스포노포름산 및 ｎｒｔｉ의용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20070114806A
KR20070114806A KR1020077022775A KR20077022775A KR20070114806A KR 20070114806 A KR20070114806 A KR 20070114806A KR 1020077022775 A KR1020077022775 A KR 1020077022775A KR 20077022775 A KR20077022775 A KR 20077022775A KR 20070114806 A KR20070114806 A KR 20070114806A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
reverse transcriptase
nucleoside
thiophosphono
formic acid
virus
Prior art date
Application number
KR1020077022775A
Other languages
English (en)
Inventor
샤니 와닝거
조안 로빈스
실베스트리 라모스
Original Assignee
어드벤트륵스 파마슈티칼스, 인크.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 어드벤트륵스 파마슈티칼스, 인크. filed Critical 어드벤트륵스 파마슈티칼스, 인크.
Publication of KR20070114806A publication Critical patent/KR20070114806A/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/365—Lactones
    • A61K31/375—Ascorbic acid, i.e. vitamin C; Salts thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/662—Phosphorus acids or esters thereof having P—C bonds, e.g. foscarnet, trichlorfon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/662—Phosphorus acids or esters thereof having P—C bonds, e.g. foscarnet, trichlorfon
    • A61K31/663—Compounds having two or more phosphorus acid groups or esters thereof, e.g. clodronic acid, pamidronic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A61K31/7072—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid having two oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. uridine, uridylic acid, thymidine, zidovudine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 바이러스 감염된 환자에서 상승 작용으로 바이러스 개수를 감소시키는 방법을 제공한다. 상기 방법은 상승 작용의 조합으로 일정량의 티오포스포노포름산 및 일정량의 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제를 경구 공동투여하는 단계를 포함한다.
티오포스포노포름산, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제

Description

바이러스 감염 치료에의 티오포스포노포름산 및 ＮＲＴＩ의 용도{THE USE OF THIOPHOSPHONOFORMIC ACID AND NRTIs TO TREAT VIRAL INFECTIONS}
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 그 전체 내용이 참조로서 본 명세서에 결부된 2005년 3월 7일에 출원된 가출원 제60/659,136호에 우선권을 주장한다.
뉴클레오시드 역전사 효소 저해제(NsRTI) 및 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제(NtRTI)를 포함하는 NRTI는 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 및 헤르페스 바이러스(HBV, HCV)의 감염을 포함하는 바이러스 감염에 대한 치료제로 최근 투여된다. 불행히도, 이러한 종류의 약물에 대한 바이러스 내성이 흔히 생성된다. Daar and Richman, AIDS Res Hum Retroviruses, (2005) 21:343-57를 참조할 것. 또한, NRTI의 다양한 부작용은 환자에게 해롭고, 환자 순응도를 떨어뜨릴 수 있고, 이러한 종류의 약물의 효과를 감소시킬 수 있다. 예를 들어, Raines, et al, J Assoc Nurses AIDS Care (2005) 16:35; Cherry, et al, Sex Health (2005) 2:1; Abrescia, et al, Curr Pharm Des. (2005) 11:3697를 참조할 것.
티오포스포노포름산("티오비르TM(ThiovirTM)")은 효과가 큰, 독성 및 낮은 생 체이용률로 인해 제한된 용법을 갖는 광범위 항균성인, 포스카렛(foscaret)의 황 함유 경구 대체제이다. 본원 발명자들에 의해 개발된 티오포스포노포름산("티오비르TM")의 경구 제형은 개선된 효과 및 생체이용률을 제공하여 이를 매력적인 임상 후보로 만들어준다.
티오포스포노포름산과 지도부딘(AZT)과 같은 다른 항바이러스 화합물을 혼합하는 것이 제안되어 왔다. 미국 특허 제5,183,812호(컬럼 21) 참조할 것. 그러나, 활성 물질의 하나 또는 둘 모두의 유효량을 감소시킬 수 있는, 티오포스포노포름산과 하나 이상의 NRTI를 혼합함에 의해 달성되는 상승 작용의 항바이러스 효과는 알려지지 않았다. 환자 내에서 바이러스 개수(viral load)를 감소시키는 효과를 유지하면서 독성 및 원하지 않는 부작용을 감소시키기 위해, 바이러스 내성을 방지하거나 지연시킴으로써, 그리고 용량을 감소시킴으로써 티오포스포노포름산 및 NRTI의 효과를 개선할 필요가 존재한다.
본 발명은 이러한 요구 및 다른 요구에 초점을 맞춘다.
본 발명의 요약
본 발명은 티오포스포노포름산 및 NRTI의 조합으로 이를 필요로 하는 개체에 공동 전달하는 방법 및 조성물을 제공하고, 여기서 활성 물질은 이들의 혼합 항바이러스 활성이 상승 작용을 나타내는 비율 및 양으로 전달된다.
따라서, 첫번째 양상에서, 본 발명은 환자에게 일정량의 티오포스포노포름산 및 일정량의 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제, 또는 이의 혼합물을 경구 공동투여하는 단계를 포함하는 바이러스 감염된 환자에서 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 감소시키는 방법을 제공하고, 상기 공동투여되는 일정량은 상승 작용으로 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 낮추기에 충분한 양이고, 상기 티오포스포노포름산은 1일 2 mg/kg 내지 50 mg/kg의 용량 범위로 경구 투여된다.
다른 양상에서, 본 발명은 일정량의 티오포스포노포름산 및 일정량의 하나 이상의 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제, 또는 이의 혼합물을 환자에게 경구 공동투여하는 단계를 포함하는 NRTI에 대한 바이러스의 내성을 방지하거나 지연시키는 방법을 제공하고, 상기 공동투여되는 일정량은 상승 작용으로 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 낮추기에 충분한 양이고, 상기 티오포스포노포름산은 1일 2 mg/kg 내지 50 mg/kg의 용량 범위로 경구 투여된다.
티오포스포노포름산은 NRTI 없이 투여되는 경우의 티오포스포노포름산의 용량에 비해 약 10 배 내지 100 배 작은 용량으로 본 발명의 방법에 따라 그리고 본 발명의 조성물로 효과적으로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산은 NRTI 없이 투여되는 경우의 티오포스포노포름산의 용량에 비해 200 배 또는 300 배 작은 용량으로 본 발명에 따라 투여된다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산은 1일 2 mg/kg 내지 50 mg/kg의 용량 범위로 투여된다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산은 1일 15 mg/kg 내지 40 mg/kg 또는 20 mg/kg 내지 35 mg/kg의 용량 범위로 투여된다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산은 1일 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 mg/kg의 용량으로 투여된다.
티오포스포노포름산과 공동투여되는 경우, NRTI는 티오포스포노포름산 없이 투여되는 경우의 NRTI의 용량에 비해 약 2 배, 5 배, 10 배, 20 배, 50 배, 100 배 적은 용량으로 효과적으로 투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제가 공동투여된다. 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제는 예를 들어, 지도부딘, 디다노신, 스타부딘, 라미부딘, 아바카비르, 엠트리시타빈, 잘시타빈, 덱셀부시타빈, 알로부딘, 암독소비르, 엘부시타빈, AVX754, BCH-189, 포스파지드, 라시비르, SP 1093V, 스탐피딘, 또는 이의 혼합물일 수 있다. 일부 구체예에서, 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제는 지도부딘이다.
일부 구체예에서, 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 공동투여된다. 일부 구체예에서, 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 테노포비르, 아데포비르, 또는 이의 혼합물이다.
일부 구체예에서, 바이러스는 레트로바이러스이다. 레트로바이러스는 렌티바이러스일 수 있다. 렌티바이러스는 예를 들어, HIV (인간 면역결핍 바이러스), BIV (소 면역결핍 바이러스), CAEV (산양 뇌염-관절염 바이러스), EIAV (말 전염성 빈혈 바이러스), FIV (고양이 면역결핍 바이러스), GLV (염소 백질뇌염 바이러스), JDV (젬브라나), MVV (메디/비스나 바이러스), PPV (진행성 폐렴 바이러스), SIV (유인원 면역결핍 바이러스)일 수 있다. 일부 구체예에서, 렌티바이러스는 T 세포 림프친화성 바이러스, 예를 들어, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)이다. HIV는 타입 1(HIV-1) 또는 타입 2(HIV-2)일 수 있다. HIV는 예를 들어, HIV-1:ARV-2/SF-2; HIV-1:BRU (LAI); HIV-1:CAM1; HIV-1:ELI; HIV-1:HXB2; HIV-1:ⅢB; HIV-1:MAL; HIV-1:MN; HIV-1:NDK; HIV-1:PV22; HIV-1:RF; HIV-1:U455; HIV-1:Z2를 포함하는 임의의 HIV 클레이드(예를 들어, A-G), 종 또는 변이체로부터 유래될 수 있다.
일부 구체예에서, 바이러스는 헤르페스 바이러스이다. 헤르페스 바이러스는 알파헤르페스바이러스, 예를 들어, 심플렉스바이러스(예를 들어, 인간 헤르페스바이러스 1) 또는 바리셀로바이러스(예를 들어, 인간 헤르페스바이러스 3 또는 바리셀라-조스터 바이러스 1(VSVl))일 수 있다. 헤르페스 바이러스는 베타헤르페스바이러스, 예를 들어, 거대세포바이러스(예를 들어, 인간 헤르페스바이러스 5) 또는 로시오로바이러스(예를 들어, 인간 헤르페스바이러스 6)일 수 있다. 일부 구체예에서, 헤르페스 바이러스는 감마헤르페스바이러스, 예를 들어, 림포크립토바이러스(예를 들어, 인간 헤르페스바이러스 4 또는 엡스타인-바르 바이러스(EBV)) 또는 라디노바이러스(예를 들어, 아텔라인 헤르페스바이러스 2)이다.
적절히, 티오포스포노포름산 및 NRTI가 동시에 또는 연속적으로 공동투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 NRTI는 복합 제형으로 동시에 투여된다.
티오포스포노포름산 및 NRTI는 독립적으로 경구 또는 비경구로 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 티오포스포노포름산 및 NRTI는 경구로 투여된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 티오포스포노포름산 및 NRTI는 비경구로, 예를 들어, 정맥 내로 투여된다. 경구 제형은 고체(예를 들어, 정제, 캡슐, 분말) 또는 액상(예를 들어, 시럽)일 수 있다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 복합 경구 제형으로 동시에 투여된다.
본 발명은 바이러스 감염된 환자에서 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 낮추기 위한 경구 약제를 더욱 제공하고, 상기 약제는 일정량의 티오포스포노포름산 및 일정량의 NRTI를 포함하는 복합 제형이고, 상기 티오포스포노포름산 및 NRTI는 상승 작용으로 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 낮추기에 충분한 양으로 존재하고, 상기 약제는 복합 제형당 150 mg 내지 750 mg의 티오포스포노포름산을 함유한다.
본 발명은 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 치료용 약제 제조에서 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용도를 더욱 제공하고, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 상승 작용으로 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 낮추기에 충분한 양으로 존재하고, 상기 약제는 복합 제형당 150 mg 내지 750 mg의 티오포스포노포름산을 함유한다.
본 발명은 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 즉시 사용가능한 약물 제형의 항바이러스제 제조에서 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용도를 더욱 제공하고, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 상승 작용으로 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 낮추기에 충분한 양으로 존재하고, 상기 즉시 사용가능한 약물 제형은 제형당 150 mg 내지 750 mg의 티오포스포노포름산을 함유한다.
조성물 및 용도의 바람직한 구체예는 상기한 바와 같다.
도면의 간단한 설명
도 1은 NRTI 및 NNRTI 내성 HIV-1의 패널을 나타낸다. NRTI 및 NNRTI 감수성을 실시예에 기술한 바와 같은 페노센스TM 리포터 분석법(PhenoSenseTM reporter assay)으로 시험하였다. 약물 감수성의 배수 변화 (fold change) 범위를 나타내는 수는 하기와 같다: 1: >2.5배, 2: 2.5배 내지 10배, 3: 10배 내지 50배 및 4: >50배. 오른쪽 패널: NRTI 및 NNRTI에 대한 내성을 부여하는 각 변종 바이러스의 특정 돌연 변이.
도 2는 도 1의 NRTI 및 NNRTI 내성 HIV-1 바이러스의 패널이 포스카넷 및 티오비르TM에 민감성임을 나타낸다. 왼쪽 패널: 도 1과 동일함. 오른쪽 패널: 스타부딘, 지도부딘, 에파비렌즈, 포스카넷, 네비라핀 및 티오비르TM에 대한 내성 바이러스의 감수성. IC50는 페노센스TM 리포터 분석법으로 측정하였다. 배수 변화(FC)를 IC50환자/IC5O대조로 측정하였다. 대조 IC50는 야생형 표준 바이러스의 IC50이다. S/R은 바이러스가 약물에 대해 민감성(S)인지 또는 내성(R)인지 여부를 나타낸다. 임상적 컷오프, 실패 확률이 유의하게 증가하는 지점을 연한 회색으로 강조하고, 과민성을 진한 회색으로 강조하였다.
발명의 상세한 설명
1. 서론
티오포스포노포름산(TPFA)은 광범위 항바이러스 치료제인 포스카넷(포스포노포름산; PFA)의 황 유사체이다. 포스카넷, 비 뉴클레오시드 역전사 효소 억제제(NNRTI)는 NNRTI 약물 중에서 독특한 활성 모드를 갖는 피로인산 유사체이다. 포스카넷은 피로인산 효소 결합 부위에서의 경쟁적 결합을 통해 바이러스 DNA 폴리머라제에 의한 피로인산 교환을 저해한다. 포스카넷 및 이의 유사체, 예를 들어, 티오비르TM는 바이러스 DNA 폴리머라제에 의해 촉매되는 DNA 사슬 연장을 저해하여, HIV를 포함하는 DNA 및 RNA 바이러스 모두의 바이러스 복제 저해를 가져온다.
시험관 내 항 HIV 효과 연구는 티오비르TM가 포스카넷과 거의 동등한 항바이러스 활성을 가짐을 나타낸다. 또한, 티오비르TM는 몇몇 복합 NRTI 및 NNRTI 내성 종에 대한 항바이러스 활성을 갖는다. 조사된 모든 HIV-1 변이체는 티오비르TM 및 포스카넷에 대해 민감성이다. 대부분의 경우, HIV-1 변이체는 야생형 바이러스에 비해 티오비르TM에 대해 과민성이다.
티오비르TM와 NsRTI 또는 NtRTI 약물의 조합 요법을 조사한 효과 연구는 상승 작용의 항바이러스 활성을 나타낸다. 따라서, 티오비르TM의 용량이 감소되어, 티오비르TM와 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제를 혼합한 적절한 약물 투여 계획이 가능하다. 예를 들어, 포스카넷과 지도부딘의 조합이 단지 약한 상승 작용 내지 길항 작용 양상을 보이는데 반해, 지도부딘(AZT)과 혼합된 티오비르TM는 강력한 상승 작용 활성을 가져온다.
포스카넷과 유사한 티오비르TM의 내성 프로파일은 이러한 약물 종류의 구별된 활성 메커니즘을 반영하여 NNRTI 중에 독특하다. 시험관 내에서 티오비르TM에 대한 내성으로 선별된 바이러스는 AZT에 대해 과민성을 나타낸다. 따라서, 티오비르TM는 AZT 내성 환자에서 AZT의 사용을 다시 가능하게 해준다. 또한, 티오비르TM 및 AZT 모두에 공동 내성인 바이러스를 선별하기 위한 시도는 성공적이지 않았다. 이는 티오비르TM 및 AZT의 내성 프로파일이 상호 배타적임을(즉, 상호간에 경쟁적 저해제임을) 나타낸다. 또한, 이러한 데이터는 티오비르TM 및 AZT의 조합 치료에 대해 우호적 기반을 제공한다.
2. 정의
용어 "레트로바이러스"는 유전 물질을 RNA형태로 가지고, 숙주 세포 내에서 RNA에서 DNA로 번역하기 위해 역전사 효소를 사용하는 Retroviridae(분류 코드 61)과의 외피보유 바이러스 강을 나타낸다(Coffin, et ah, Retroviruses, (1997) Cold Spring Harbor Laboratory Press를 참조할 것). 레트로바이러스 속은 알파레트로바이러스, 베타레트로바이러스, 감마레트로바이러스, 델타레트로바이러스, 엡실론레트로바이러스 및 렌티바이러스를 포함한다. 바이러스 분류는 ncbi.nlm.nih.gov/ICTVdb/ICTVdB의 월드와이드 웹에 기술된다.
용어 "헤르페스 바이러스"는 Herpesviridae 바이러스과(바이러스 분류 코드 31) 내의 외피보유 DNA 바이러스를 나타낸다.
용어 "바이러스 개수" 또는 "바이러스 역가"는 감염된 개체로부터의 체액(예를 들어, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 소변) 샘플 내의 바이러스 입자의 개수를 교환적으로 나타낸다.
용어 "상승 작용의" 또는 "상승 작용"은 혼합 효과가 개별 효과의 합보다 더 큰 2 이상의 물질의 상호 작용을 교환적으로 나타낸다. 상승 작용의 약물 상호 작용은 중간 효과 원리(median effect principle)(Chou and Talalay (1984) Adv Enzyme Regul 22:27 and Synergism and Antagonism in Chemotherapy, Chou and Rideout, eds., 1996, Academic, pp. 61-102를 참조할 것)를 사용하여 측정가능하고, 컴퓨터 프로그램 Calcusyn(Chou and Hayball, 1996, Biosoft, Cambridge, MA)을 사용하여 조합 지수에 의해 정량적으로 측정된다. 또한, Reynolds and Maurer, Chapter 14 in Methods in Molecular in Medicine, vol. 110: Chemosensitivity, Vol. 1 : In Vitro Assays, Blumenthal, ed., 2005, Humana Press를 참조할 것. 조합 지수(CI)는 상승 작용, 상가 작용 및 길항 작용을 하기와 같이 정량화한다: CI＜l (상승 작용); CI=I (상가 작용); CI>1 (길항 작용). 0.7-0.9의 CI 값은 중간 내지 경미한 상승 작용을 나타낸다. 0.3-0.7의 CI 값은 상승 작용을 나타낸다. 0.1-0.3의 CI 값은 강한 상승 작용을 나타낸다. 0.1 미만의 CI 값은 매우 강한 상승 작용을 나타낸다.
어구 "바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 상승 작용으로 낮추기에 충분한"은 혼합 효과가 개별 활성 물질의 합보다 더 크게 바이러스 역가 또는 바이러스 개수를 낮추는 2 이상의 활성 물질의 양 및 비율을 나타낸다. 바이러스 개수에 있어 상승 작용의 효과는 본 명세서에 기술된 분석법을 포함하는 당업계에 공지된 분석법(예를 들어, MAGI 분석법, p24 분석법)을 사용하여 시험관 내에서 또는 생체 내에서 측정된다. 상승 작용으로 바이러스 양을 낮출 수 있는 2 이상의 활성 물질의 충분한 양 및 비율이 투여량 또는 체액(예를 들어, 혈액, 혈청, 혈장, 타액, 소변)내의 활성 물질의 농도에 의해 결정될 수 있다.
용어 "티오포르포노포름산" 또는 "TPFA" 또는 "티오비르TM"는 하기 화학식 (HO)2P(S)COOH를 갖는 포스포노포름산의 티오-유사체를 교환적으로 나타낸다.
Figure 112007071634866-PCT00001
용어 "뉴클레오시드 역전사 효소 저해제" 또는 "NsRTI"는 바이러스 역전사 효소 또는 폴리머라제 효소를 저해하여 바이러스가 숙주 세포를 감염시키는 능력을 저해하는 뉴클레오시드의 화학적 유사체인 약물의 종류의 멤버를 나타낸다. 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제는 리보뉴클레오시드 또는 디옥시리보뉴클레오시드의 화학적 유사체일 수 있다.
용어 "뉴클레오티드 역전사 효소 저해제" 또는 "NtRTI"는 바이러스 역전사 효소 또는 폴리머라제 효소를 저해하여 바이러스가 숙주 세포를 감염시키는 능력을 저해하는 뉴클레오티드(뉴클레오시드 5'-모노포스페이트)의 화학적 유사체인 약물의 종류의 멤버를 나타낸다. 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 리보뉴클레오티드 또는 디옥시리보뉴클레오티드의 화학적 유사체일 수 있다.
용어 "비 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제" 또는 "NNRTI"는 바이러스 역전사 효소 또는 폴리머라제 효소를 알로스테릭하게(allosterically) 저해하는 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드의 화학적 유사체가 아닌 약물의 종류의 멤버를 나타낸다. NNRTI는 NRTI의 결합 부위, 즉, 효소의 활성 부위와 구별되는 부위에서 역전사 효소 도는 폴리머라제에 결합한다.
용어 "공동투여"는 개체의 혈액 내에 2가지 활성 물질이 동시에 존재하는 것을 나타낸다. 공동투여되는 활성 물질은 동시에 또는 연속적으로 전달된다.
3. 조성물
본 발명은 유효량의 티오포스포노포름산 및 유효량의 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 혼합물을 포함하는 약학적 조성물을 제공하며, 상기 활성 물질의 양 및 비율은 개체 내의 바이러스 개수를 상승 작용으로 낮출 수 있다.
ⅰ. 활성 물질
1. 티오포스포노포름산
본 명세서에 사용된, 티오포스포노포름산 (TPFA) 또는 "티오비르TM"는 하기 화학식을 갖는 활성 물질을 나타낸다.
Figure 112007071634866-PCT00002
티오비르를 포함하는 티오포스포네이트 및 이의 합성 방법은 예를 들어, 그 전체 내용이 모든 목적으로 참조로서 본 명세서에 결부된 미국특허 제5,072,032호; 제5,183,812호; 제6,147,244호 및 제6,284,909호에 개시된다. 티오포스포노포름산은 상업적 서비스 제공자, 예를 들어, Natland International Corp., Morrisville, NC; Custom Synthesis Inc., Delray Beach, FL; D Pharm Innovative Biopharmaceuticals, Princeton, NJ and Chemshop, Weert, The Netherlands를 통해 합성될 수도 있다.
2. 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제
임의의 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제 (NsRTI), 또는 이의 혼합물이 본 발명의 방법 및 조성물에 사용된다. NsRTI의 예는 이에 한정되는 것은 아니지만, 지도부딘(AZT), 디다노신, 스타부딘, 라미부딘, 아바카비르, 엠트리시타빈, 잘시타빈, 데셀부시타빈, 알로부딘, 암독소비르, 엘부시타빈, AVX754, BCH-189, 포스파지드, 라시비르, SP 1093V, 스탬피딘, 포스포노비르, 및 이의 조합을 포함한다. 당업자는 아데노신, 구아노신, 시티딘, 티민 및 우리딘의 기타 유사체가 NsRTI로 기능할 수 있음을 인식할 것이다. 사용되는 추가적 NsRTI가 예를 들어, 그 전체 내용이 모든 목적으로 참조로서 본 명세서에 결부된 미국특허 제 6,514,979호; 제6,503,890호; 제6,995,283호; 및 미국특허 공개 제2004/0235869호 및 제2004/0127436호에 개시된다.
뉴클레오시드 역전사 효소 저해제는 역전사 효소(RT)의 효소 활성을 저해하는 기능에 의해 결정될 수 있다. 역전사 효소의 저해를 측정하기 위한 분석법은 당업계에 공지되었다. 예를 들어, 한 분석법에서, 역전사 효소 활성은 RT 저해제 후보의 존재 또는 비존재 하에서 이온 교환 여과지 디스크에 흡수되는 방사성으로 표지된 핵산 생성물의 형성을 모니터하여 측정된다(예를 들어, Canard, et al, (1999) 274:35768; Meyer, et al, (2000) EMBO J 19:3520; Selmi, et al, (2001) J Biol Chem 276:13965; 및 Deval, et al, (2004) J Biol Chem 279:25489를 참조할 것).
3. 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제
임의의 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 (NtRTI), 또는 이의 혼합물이 본 발명의 방법 및 조성물에 사용된다. NtRTI의 예는 이에 한정되는 것은 아니지만, 테노포비르, 아데포비르, 및 이의 조합을 포함한다. 당업자는 아데노신 5'-모노포스페이트 (AMP), 구아노신 5'-모노포스페이트 (GMP), 시티딘 5'-모노포스페이트 (CMP), 티민 5'-모노포스페이트 (dTMP) 및 우리딘 5'- 모노포스페이트 (UMP)의 기타 유사체가 NtRTI로 기능할 수 있음을 인식할 것이다. 또한, 상기 NsRTI가 뉴클레오티드 형태로 존재할 수도 있다. 사용되는 추가적 NtRTI가 예를 들어, 그 전체 내용이 모든 목적으로 참조로서 본 명세서에 결부된 미국특허 공개 제2004/0127436호에 개시된다.
뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 예를 들어, 상기 분석법을 사용하여, 역전사 효소(RT)의 효소 활성을 저해하는 기능에 의하여 결정될 수 있다.
4. 기타 활성 성분
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 바이러스 감염에 대한 치료에 사용되는 추가 활성 성분과 함께 투여될 수 있다. 예를 들어, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 HIV 치료에서 고활성 항레트로바이러스 요법(HAART)의 일부로서, 프로테아제 저해제, 또는 하나 이상의 추가 NNRTI와 공동투여될 수 있다.
일부 구체예에서, 약학적 조성물은 지도부딘(AZT), 디다노신, 스타부딘, 라미부딘, 아바카비르, 엠트리시타빈, 잘시타빈, 데셀부시타빈, 알로부딘, 암독소비르, 엘부시타빈, AVX754, BCH-189, 포스파지드, 라시비르, SP 1093V, 스탬피딘, 포스포노비르, 아이독스우리딘으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제를 포함한다. 일부 구체예에서, 약학적 조성물은 테노포비르 및 아데포비르로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제를 포함한다.
본 발명의 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합은 치료적 투여를 위한 다양한 제형에 혼입될 수 있다. 더욱 특히, 본 발명의 조합은 적절한 약학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제와 제형화함으로써, 함께 또는 개별적으로, 약학적 조성물 내에 제형화될 수 있고, 정제, 캡슐, 환, 분말, 과립, 당의정, 겔, 슬러리, 연고, 용액, 좌제, 주사제, 흡입제 및 에어로졸과 같은 고체, 반고체, 액체 또는 가스형 제제 내에 제형화될 수 있다. 이렇게 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합 투여는 경구, 구강, 비경구, 정맥내, 피부내(예를 들어, 피하, 근육내), 국소, 경피투여 등을 포함하는 다양한 방법으로 달성될 수 있다. 또한, 화합물은 예를 들어, 데포(depot) 제형 또는 서방 제형으로, 전신 양상보다는 국소적으로 투여될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 본 발명은 경구 전달용(예를 들어, 정제, 캡슐, 분말, 액체, 시럽 등) 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제로 구성된 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 사용되기에 적절한 제형은 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th and 21st Editions, supra에서 찾아볼 수 있다. 본 명세서에 개시된 약학적 조성물은 당업자에게 공지된 방식으로, 즉, 일반적 혼합, 용해, 과립화, 당의 형성(dragee-making), 동질 혼합화(levigating), 유화, 캡슐화, 포획화(entrapping) 또는 동결건조 방법에 의해 제조될 수 있다. 하기 방법 및 부형제는 단지 예이며, 한정하고자 하는 것은 아니다.
바람직한 한 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합은 서방성 방출, 제어 방출, 연장 방출, 시한 방출 또는 지연 방출 제형으로, 예를 들어, 치료제를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투막 매트릭스로 전달하기 위해 제조된다. 다양한 종류의 서방형 물질이 발견되었고, 당업자에게 공지되었다. 최근의 연장 방출 제형은 필름 코팅된 정제, 멀티입자 또는 펠렛 시스템, 친수성 또는 지방 친화성 물질을 사용하는 매트릭스 기법 및 포어 형성 부형제를 갖는 왁스계 정제를 포함한다(예를 들어, Huang, et al. DrugDev. Ind. Pharm. 29:79 (2003); Pearnchob, et al. DrugDev. Ind. Pharm. 29:925 (2003); Maggi, et al. Eur. J. Pharm. Biopharm. 55:99 (2003); Khanvilkar, et al, Drug Dev. Ind. Pharm. 228:601 (2002); 및 Schmidt, et al., Int. J. Pharm. 216:9 (2001)를 참조할 것). 서방형 전달 시스템은 디자인에 따라서 수시간에 걸쳐 또는 수일에 걸쳐, 예를 들어, 4, 6, 8, 10, 12, 16, 20, 24 시간 이상에 걸쳐 화합물을 방출할 수 있다. 예를 들어, 서방 제형은 자연 발생적 또는 합성 중합체, 예를 들어, 중합체 비닐 피롤리돈, 예를 들어, 폴리비닐 피롤리돈(PVP); 카복시비닐 친수성 중합체; 소수성 및/또는 친수성 하이드로콜로이드, 예를 들어, 메틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 및 히드록시프로필메틸셀룰로오스; 및 카복시폴리메틸렌을 사용하여 제조될 수 있다.
서방 또는 연장 방출 제형은 천연 성분, 예를 들어, 이산화티타늄, 이산화규소, 산화아연, 및 점토를 포함하는 미네랄을 사용하여 제조될 수도 있다(참조로 본 명세서에 결부된 미국특허 제6,638,521호를 참조할 것). 본 발명의 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합을 전달하는데 사용되는 서방 제형의 예는 각각이 참조로서 본 명세서에 결부된 미국특허 제6,635,680호; 제6,624,200호; 제6,613,361호; 제6,613,358호, 제6,596,308호; 제6,589,563호; 제6,562,375호; 제6,548,084호; 제6,541,020호; 제6,537,579호; 제6,528,080호 및 제6,524,621호에 개시된 것을 포함한다. 특히 유용한 제어 방출 제형은 각각이 참조로서 본 명세서에 결부된 미국특허 제6,607,751; 제6,599,529호; 제6,569,463호; 제6,565,883호; 제6,482,440호; 제6,403,597호; 제6,319,919호; 제6,150,354호; 제6,080,736호; 제5,672,356호; 제5,472,704호; 제5,445,829호; 제5,312,817호 및 제5,296,483호에 개시된 것을 포함한다. 당업자는 기타 적용가능한 서방 제형을 쉽게 인식할 것이다.
경구 투여를 위해, 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합은 당업계에 잘 알려진 약학적으로 허용가능한 담체와 혼합함으로써 쉽게 제형화될 수 있다. 이러한 담체는 치료할 환자의 경구 복용을 위해 화합물이 정제, 환, 당의정, 캡슐, 유제, 지방 친화성 및 친수성 현탁액, 액제, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액 등으로 제형화되도록 해준다. 경구 사용을 위한 약학적 제제는 화합물을 고체 부형제와 혼합하고, 필요에 따라 생성된 혼합물을 연마하고, 그리고 필요하다면 정제 또는 당의정 코어를 얻기 위해 적절한 보조제를 가한 후에 과립 혼합물을 가공함으로써 얻을 수 있다. 적절한 부형제는 특히, 충전제, 예를 들어, 락토오스, 수크로오스, 만니톨 또는 소르비톨을 포함하는 당; 셀룰로오스 제제, 예를 들어, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 고무 트라가칸타, 메틸 셀룰로오스, 히드록시프로필메틸-셀룰로오스, 소듐 카복시메틸셀룰로오스, 및/또는 폴리비닐피롤리돈 (PVP)이다. 필요하다면, 교차 결합된 폴리비닐 피롤리돈, 한천 도는 알긴산 또는 이의 염, 예를 들어, 소듐 알기네이트와 같은 붕해제가 첨가될 수 있다.
경구 사용가능한 약학적 제제는 젤라틴으로 구성된 푸시 피트(push-fit) 캡슐 뿐만 아니라, 젤라틴 및 가소제, 예를 들어, 글리세롤 또는 소르비톨로 구성된 연질, 밀봉 캡슐을 포함한다. 푸시 피트 캡슐은 활성 성분을 락토오스와 같은 충전재, 전분과 같은 결합제, 및/또는 탈크 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 광택제, 및 필요에 따라, 안정화제와 함께 함유할 수 있다. 연질 캡슐에서, 활성 화합물은 적절한 액체, 예를 들어, 지방유, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜에 용해되거나 현탁될 수 있다. 또한, 안정화제가 첨가될 수 있다. 경구 투여용 모든 제형은 이러한 투여에 적절한 용량이어야 한다.
당의정 코어는 적절한 코팅이 제공된다. 이러한 목적으로, 필요에 따라 아라비아고무, 탈크, 폴리비닐 피롤리돈, 카보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜, 및/또는 티타늄 디옥사이드, 래커 용액, 및 적절한 유기 용매 또는 용매 혼합물을 함유할 수 있는 농축된 당 용액이 사용될 수 있다. 염료 또는 색소가 식별을 위해 또는 활성 화합물 양의 다른 조합을 나타내기 위해 정제 또는 당의정 코팅에 첨가될 수 있다.
화합물은 주사, 예를 들어, 볼루스(bolus) 주사 또는 연속 주입에 의해 비경구적으로 투여하도록 제형화될 될 수 있다. 주사용으로, 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합을 수성 또는 비수성 용매, 예를 들어, 식물성 또는 기타 유사 오일, 합성 지방족 산 글리세라이드, 고 지방족 산의 에스테르 또는 프로필렌 글리콜 내에 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제제 내로 제형화할 수 있고; 필요에 따라, 일반적 첨가제, 예를 들어, 용해제, 등장화제, 현탁제, 유화제, 안정화제 및 보존제와 함께 제형화될 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 조합은 수성 용액, 바람직하게는 생리 적합성 버퍼, 예를 들어, 행크 용액(Hanks's solution), 링거 용액(Ringer's solution), 또는 생리 식염수 내에 제형화될 수 있다. 주사 제형은 1회량 형태, 예를 들어, 앰플 내에 또는 추가 보존제와 함께 수회량 용기 내에 존재할 수 있다. 조성물은 오일 또는 수성 비히클 내에서 현탁액, 용액 또는 유액의 제형일 수 있고, 현탁제, 안정화제 및/또는 분산제와 같은 제형제(formulatory agent)를 함유할 수 있다.
비경구적 투여를 위한 약학 제형은 수용성 제형 내의 활성 화합물의 수성 용액을 포함한다. 또한, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 오일 주사 현탁액으로 제조가능하다. 적절한 지방 친화성 용매 또는 비히클은 지방유, 예를 들어, 참기름, 또는 합성 지방산 에스테르, 예를 들어, 에틸 올레이트 또는 트리글리세라이드, 또는 리포솜을 포함한다. 수성 주사 현탁액은 현탁액의 점도를 증가시키는 물질, 예를 들어, 소듐 카복시메틸 셀룰로오스, 소르비톨, 또는 덱스트란을 함유할 수 있다. 필요에 따라, 현탁액은 적절한 안정화제 또는 화합물의 용해도를 증가시켜서 고농축된 용액의 제조를 가능하게 하는 물질을 함유할 수도 있다. 대안으로, 활성 성분은 사용전에 적절한 비히클, 예를 들어, 멸균된 발열물질을 함유하지 않은 물과 구성된 분말 제형 내에 존재할 수 있다.
국소 투여를 위해, 물질은 연고, 크림, 고약, 분말 및 겔 내로 제형화된다.
전신 투여는 경점막투여 또는 경피투여 방법에 의할 수도 있다. 경점막 또는 경피 투여를 위해, 투과해야 하는 장벽에 적절한 투과제가 제형 내에 사용된다. 한 구체예에서, 경피 전달제는 예를 들어, DMSO, 우레아, l-메틸-2-피롤리돈, 올레산, 또는 테르펜(예를 들어, 1-멘톨, d-리모넨, RS-(+/-)-베타-시트로넬롤, 제라니올)일 수 있다. 또한, 경피 투과 증강제는 예를 들어, Percutaneous Penetration Enhancers, Smith and Maibach, eds., 2nd edition, 2005, CRC Press에 개시된다. 경피 전달 시스템은 예를 들어, 패치를 포함할 수 있다. 경점막 투여를 위해, 투과해야 하는 장벽에 적절한 투과제가 제형 내에 사용된다. 이러한 투과제는 일반적으로 당업계에 공지되었다. 본 발명에 사용될 수 있는 경피 전달 제형의 예는 각각이 참조로서 본 명세서에 결부된 미국특허 제6,589,549호; 제6,544,548호; 제6,517,864호; 제6,512,010호; 제6,465,006호; 제6,379,696호; 제6,312,717호 및 제6,310,177호에 개시된 것을 포함한다.
구강 투여를 위해, 조성물은 일반적 방법으로 제형화된 정제 또는 로젠지(lozenge) 제형일 수 있다.
상기한 제형에 더하여, 본 발명의 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합은 데포(depot) 제제로 제형화 될 수 있다. 이러한 장기 작용 제형은 이식(예를 들어, 피부 내 또는 점막 내)에 의해 또는 근육 주사로 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 화합물은 적절한 중합성 또는 소수성 물질(예를 들어, 허용가능한 오일 내의 유제) 또는 이온 교환 수지와 제형화되거나, 또는 난용성 유도체, 예를 들어, 난용성염으로 제형화될 수 있다.
약학적 조성물은 적절한 고체상 또는 겔상 담체 또는 부형제를 포함할 수도 있다. 이러한 담체 또는 부형제의 예는 칼슘 카보네이트, 칼슘 포스페이트, 다양한 당, 전분, 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 및 중합체, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명에 사용하기에 적절한 약학적 조성물은 활성 성분이 치료적 유효량으로 함유되는 조성물을 포함한다. 투여되는 조성물의 양은 물론, 치료가 필요한 환자, 환자의 몸무게, 통증의 정도, 투여법 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 것이다. 유효량의 결정은 당업자의 능력 내이고, 특히 본 명세서에 제공되는 상세한 개시에 의한다. 일반적으로, 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합의 유효량은 하나 또는 둘 모두의 활성 성분의 낮은 양을 먼저 투여하고, 그 후 최소의 부작용으로 또는 독성 부작용 없이 바이러스 역가가 감소되는 목적하는 효과가 치료 환자에게서 관찰될 때까지 투여량 또는 용량을 점차 증가함으로써 결정된다. 본 발명의 조합을 투여하기 위한 적절한 용량 및 용량 스케쥴의 결정에 적용가능한 방법은 예를 들어, Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, 11th Edition., supra, 및 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th and 21st Editions, supra에 개시된다.
용량 및 간격을 각각 조절하여 치료 효과를 유지하기에 충분한 활성 화합물의 혈장 농도를 제공할 수 있다. 바람직하게는, 치료적 유효 혈청 농도는 1일 1회 용법으로 투여함으로써 달성될 것이나, 유효한 1일 다회 용법 스케쥴도 본 발명에 포함된다. 국소 투여 또는 선택적 섭취(uptake)의 경우에는, 약물의 유효 국소 농도가 혈장 농도와 관련되지 않을 수 있다. 당업자는 특별한 실험 없이도 치료적 유효 국소 용량을 최적화할 수 있을 것이다.
4. 방법
a. 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/ 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 공동투여
본 방법은 티오포스포노포름산(TPFA) 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제(NtRTI 및/또는 NsRTI)의 공동투여에 관한 것이다. 티오포스포노포름산(TPFA) 및 NtRTI 및/또는 NsRTI 모두가 혈액 내에 존재하기만 한다면, 티오포스포노포름산(TPFA) 및 NtRTI 및/또는 NsRTI는 동시에 또는 순차적으로 전달될 수 있다.
i. 투여 경로
상기한 바와 같이, 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 독립적으로 임의의 적절한 투여 경로에 의해 공동투여될 수 있다. 활성 성분은 필요에 따라 동일하거나 다른 투여 경로에 의해 투여될 수 있다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 활성 성분은 경구로 투여된다. 일부 구체예에서, 활성 성분의 조합은 동시에 경구 투여된다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 활성 성분은 비경구로, 예를 들어, 정맥내, 근육내, 점막, 국소, 질내, 항문, 비강내, 지주막하, 안구내에 투여된다.
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 환자, 예를 들어, 인간 환자, 가축(예를 들어, 고양이 또는 개), 농업용 동물(예를 들어, 말, 암소, 양, 또는 염소)에 치료적 유효량으로, 예를 들어, 바이러스 개수 또는 바이러스 역가를 목적대로 낮추는 상승 작용의 효과가 있는 양으로 이의 약학적으로 허용가능한 염의 형태로, 또는 약학적 조성물의 형태로 독립적으로 또는 함께 투여될 수 있고, 상기 화합물은 적절한 담체 또는 부형제와 혼합된다.
ii. 용량
상기한 바와 같이, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 적절한 양이 선택된 투여 경로, 나이, 몸무게 및 환자의 예후, 질병의 진행 등을 포함하나 이에 한정되지는 않는 여러 요인에 의존한다는 것을 당업자는 인식할 것이다. 각각의 또는 혼합된, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용법 및 제형에서 일반적으로 고려할 사항은 Goodman and Gilman's the Pharmacological Basis of Therapeutics, Goodman, et al., eds., 11th Edition, 2005, McGraw-Hill and Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th and 21st Editions, Gennaro and University of the Sciences in Philadelphia, Eds., Lippencott Williams & Wilkins (2003 및 2005)에서 찾을 수 있다.
용량이 투여 경로에 따라 증가하거나 감소할 수는 있지만, 티오포스포노포름산은 1일 약 2 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 양으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 용량은 TPFA가 정맥 내로 투여되는 경우 감소할 수 있다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산은 1일 약 20 mg/kg 내지 약 35 mg/kg의 양으로 투여된다. 일부 구체예에서, 티오포스포노포름산은 1일 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50 mg/kg의 양으로 투여되거나, 1일 2-50 mg/kg의 범위 내의 정수로 투여된다.
용량이 감소할 수는 있지만, 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 FDA에 의해 승인된 양에 따른 양으로 투여될 수 있다. 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 승인된 양은 예를 들어, fda.gov/cder/ob/default.htm의 월드와이드 웹에서 이용가능한 FDA Orange Book에서 찾을 수 있다. 예를 들어, 승인된 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 승인된 경구 용량은 하기 표와 같다. 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 정제 또는 캡슐은 필요에 따라 1일 1, 2, 3, 4 또는 5회 투여될 수 있다.
승인된 NsRTI/NtRTI의 경구 용량
NsRTI / NtRTI 정제/캡슐 용량( mg )
잘시타빈 0.375-0.75
스타부딘 15-40
라미부딘 150
엠트리시타빈 200
아바카비르 테노포비르 300
지도부딘 100-300
디다노신 25-400
일부 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 중 적어도 하나는 각각의 활성 성분의 치료용량 미만의 용량으로 투여된다. 치료용량 미만의 용량은 본 명세서에 개시된 분석법 중의 하나를 사용하여, 생체 내에서 또는 시험관 내에서 측정하는 경우, 항바이러스 효과를 나타내기에 충분하지 않은 각각의 활성 성분의 양을 나타낸다. 치료용량 미만의 용량은 또한 승인된 활성 성분의 최소 참고 용량의 80% 이하의 용량을 나타낸다. 참고 용량은 예를 들어, Goodman and Gilman's, supra 및 the Physician's Desk Reference, 2006, Thompson Publishing에서 당업자가 이용가능하다. 이론에 의해 한정되지 않고, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합의 상승 작용의 항바이러스 효과는 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 중 적어도 하나의 치료 용량 미만의 용량의 투여를 가능하게 해준다. 각각의 티오포스포노포름산 또는 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 치료량 미만의 용량의 투여는 유의한 항바이러스 효과를 나타내지 못한다. 그러나, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합 내의 활성 성분 중의 적어도 하나의 치료용량 미만의 용량은 부작용의 위험은 더 낮으면서도 항바이러스 효과를 나타낼 수 있다.
티오포스포노포름산 및/또는 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용량은 용량 감소 지수(DRI)라는 용어로도 나타낼 수 있다. 용량 감소 지수는 동일한 효과 정도를 달성하기 위해 필요한 단일 물질의 농도와 비교하여, 상승 작용의 조합으로 제공되는 경우의 각각의 약물에서 나타나는 배수 용량 감소로 측정된다. 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 NRTI 사이의 상승 작용의 항바이러스 효과는 티오포스포노포름산에서 적어도 약 10, 50, 100, 150, 200, 250, 300 이상의 DRI를 제공한다. 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 NRTI 사이의 상승 작용의 항바이러스 효과는 NRTI에서 적어도 약 2, 5, 10, 20, 50, 100 이상의 DRI를 제공한다.
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 상승 작용의 항바이러스 효과를 나타내는 활성 성분의 몰비의 양으로 투여된다. 티오포스포노포름산은 하나 이상의 NsRTI/NtRTI에 대해 동일한 몰 비(1:1 몰비)로 투여될 수 있다. 티오포스포노포름산은 하나 이상의 NsRTI/NtRTI에 대해 10배(10:1) 또는 100배(100:1) 이상의 몰비로, 또는 약 1:1 내지 약 100:1의 임의의 몰비(TPFA:NRTI), 예를 들어, 1:1, 5:1, 10:1, 20:1, 50:1, 100:1로 투여될 수 있다.
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 예를 들어, MAGI 분석법, 페노센스TM 분석법 또는 p24 항원 캡쳐 분석법(p24 antigen capture assay)으로 측정할 때 조합 지수값(CI)이 1.0 미만인 양으로 투여된다. 바람직하게는, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 조합 지수값이 약 0.9 미만인 양으로 투여된다. 더욱 바람직하게는, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합은 조합 지수값이 약 0.6 미만인 양으로 투여된다.
iii. 스케쥴링
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 필요에 따라 24 시간 내에 1, 2, 3, 4회 이상의 회수로 동시에 또는 독립적으로 투여될 수 있다. 한 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 동시에 투여된다. 한 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 예를 들어, 서방 또는 연장 방출 제형으로 하루 한 번 동시에 투여된다. 한 구체예에서, 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 하루에 수회, 예를 들어, 하루에 2, 3, 또는 4회 동시에 투여된다.
5. 상승 작용 활성 분석법
하기 분석법은 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합의 상승 작용의 항바이러스 활성을 측정하는데 사용될 수 있다.
a. 시험관 내
상승 작용으로 바이러스 역가를 감소시키는 티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제 조합의 양 및 비율은 시험관 내 분석법을 사용하여 측정할 수 있다.
i. MAGI 분석법
항바이러스 활성은 갈락토시다제 지표의 다핵 활성(MAGI) 분석법을 사용하여 정량적으로 측정가능하다. Kimpton and Emerman (1992) J Virol. 66:2232를 참조할 것. 표적 세포(예를 들어, 포유 세포, 예를 들어, HeLa 세포)는 표적 세포 표면 바이러스 수용체(예를 들어, CD4, 키모카인 수용체) 및 바이러스 전사 인자(예를 들어, HIV-1 LTR 및 HIV-1 Tat)의 제어하에 핵으로 위치하도록 변형된 베타-갈락토시다제 단백질을 발현하는 리포터 구조로 안정적으로 트랜스펙션된다. 변형된 베타-갈락토시다제 단백질의 발현을 나타내기 위해, 감염된 바이러스는 바이러스 전사 인자(예를 들어, HIV-1 Tat)를 생성해야만 한다. 감염되어 변형된 베타-갈락토시다제 단백질의 발현이 유도되는 표적 세포의 핵은 청색으로 염색될 것이고, 이는 쉽게 광학 현미경(예를 들어, 100 X 배율)을 사용하여 시각화될 수 있다. MAGI 분석법은 일반적으로 감염을 개시한 후 2일 또는 3일에 측정한다. 청색 세포의 수는 접종원 내의 감염된 바이러스 입자의 수를 나타낸다. 청색 핵은 광학 현미경을 사용하여 개수된다. 50% 저해 농도(IC50)는 그 후 저해 % 대 log10 약물 농도의 플롯으로부터 결정된다.
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오티드/뉴클레오시드 역전사 효소 저해제의 상승 작용의 효과는 중간 효과 원리(Chou and Talalay, 1984, supra, Chou and Rideout, 1996, supra, 및 Reynolds and Maurer, supra를 참조할 것)를 사용하여 측정될 수 있고, 조합 지수(CI)로 정량적으로 측정된다. 1.0 미만의 조합 지수값은 활성 성분들 사이의 상승 작용을 나타낸다. 조합 지수값은 하기와 같이 더욱 분류될 수 있다:
조합 지수값 상승 작용의 정도
0.9-1.0 경미
0.7-0.9 중간
0.3-0.7 평균
0.1-0.3 강함
<0.1 매우 강함
ii. 페노센스TM 분석법
항바이러스 효과는 또한 페노센스TM 분석법을 사용하여 정량적으로 측정될 수 있다. 페노센스TM 분석법은 핵산 증폭을 사용하여 혈장으로부터 역전사 효소 핵산 서열 및 HIV 프로테아제를 얻는다. 환자에서 얻은 서열은 바이러스 벡터 내로 혼입되어 내성 시험 벡터(RTV)를 구성한다. 바이러스 벡터는 또한 HIV 외피 유전자의 결실 부분 내에 삽입된 지표 또는 리포터 유전자(예를 들어, 녹색 형광 단백질, 루시퍼라제, 베타 갈락토시다제 등)를 함유한다. 리포터 유전자는 RTV 내의 강한 프로모터(예를 들어, CMV 프로모터)의 제어하에 있다.
페노센스TM 분석법은 RTV 핵산 서열을 숙주 세포 내로 도입하고, 트랜스펙션 후에 바이러스 입자를 수집하고, 그리고 바이러스 입자를 표적 세포를 감염시키는데 사용하여 수행된다. 약물 감수성은 약물의 존재 및 부재 하에 나타나는 리포터 유전자 활성을 비교하여 측정된다. 약물의 존재는 하나 이상의 다른 농도, 예를 들어, 수개의 적정 농도일 수 있다.
데이터는 환자의 바이러스(RTV 내) 및 약물 민감성 참고 바이러스에 있어, log10 약물 농도에 대해 리포터 유전자 활성으로 측정된 바이러스 복제의 저해 퍼센트를 플롯화하여 분석된다. 결과적 약물 감수성 커브는 50%로 바이러스 복제를 저해하는데 필요한 약물 농도(IC50)를 계산하는데 사용된다. 약물 감수성 참고 바이러스의 커브와 비교하여 더 높은 약물 농도로의 환자의 저해 커브의 이동은 약물 감수성이 감소된 것으로 해석된다. 약물 감수성 참고 바이러스의 커브와 비교하여 더 낮은 약물 농도로의 환자의 저해 커브의 이동은 약물 감수성이 증가한 것으로 해석된다. 페노센스TM는 상업적 서비스 제공자, 예를 들어, Monogram Biosciences, South San Francisco, CA에 의해 수행될 수 있다.
하나 이상의 활성 성분의 상승 작용은 상기한 바와 같은 조합 지수값을 사용하여 계산될 수 있다.
iii. p24 검출 분석법
바이러스 역가의 감소는 또한 바이러스 캡시드 단백질에 고유한 항체(예를 들어, HIV-1 p24)로 ELISA 캡쳐 분석법을 사용하여 측정될 수 있다. HIV-1 p24를 측정하기 위한 ELISA 키트는 예를 들어, Zeptometrix, Buffalo, NY; PerkinElmer, Wellesley, MA; 및 Aalto Bio Reagents, Dublin, Ireland에서 상업적으로 구입가능하다.
b. 생체 내
티오포스포노포름산 및 하나 이상의 뉴클레오시드/뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 조합에 의한 상승 작용의 바이러스 개수 감소는 생체 내에서 측정될 수도 있다. 바이러스 역가는 환자로부터의 샘플(예를 들어, 혈액, 혈청, 혈장)로부터 측정가능하고, 참고 샘플, 예를 들어, 동일한 환자로부터 예전에 얻은 샘플과 비교가능하다.
본 명세서에 개시된 실시예 및 구체예는 단지 설명을 위한 것이고, 이러한 관점에서 다양한 변형 및 변화가 당업자에 의해 제안될 수 있고, 본 발명의 진의 및 범위 및 첨부되는 청구항의 영역 내에 포함되는 것으로 이해하여야 한다. 본 명세서에 언급된 모든 문헌, 특허, 및 특허 출원은 모든 목적으로 그 전체가 참조로서 본 명세서에 결부된다.
하기 실시예는 설명을 위해 제공되며, 청구하는 발명을 제한하고자 하는 것이 아니다.
물질 및 방법
하기 물질 및 방법은 본 명세서에 제공된 실시예에 사용되었다.
세포 라인 및 바이러스
MAGI 세포를 10 % 우아혈청(fetal calf serum) 및 5 mM 글루타민을 함유하는 DMEM 배지에서 유지시켰다. H9 세포를 10 % 우아혈청을 함유하는 RPMI 1640 배지에서 유지시켰다. HIV-1ⅢB 및 HIV-1LAI를 AIDS Research and Reference Reagent Program, Division of AIDS, NIAID, NIH를 통해 얻었다. HIV-1LAI는 Dr. Jean-Marie Bechet and Dr. Luc Montagnier, courtesy of the MRC AIDS Directed Programme으로부터 처음 기증받았다. HTLV-ⅢB/H9은 Dr. Robert Gallo로부터 얻었다. HIV-1ⅢB, HIV-1HXB2, 및 HIV-1LAI 바이러스 스톡을 급성 감염된 H9 세포로부터 제조하였다.
약물
티오포스포노포름산(티오비르TM)을 deCODE genetics(Lemont, IL)에서 제조하였다. 포스카넷은 Sigma-Aldrch(St. Louis, MO)로부터 얻었다. 아지도티미 딘("AZT") 또는 지도부딘("레트로비르") I.V. 주입제를 Glaxo Welcome(Research Triangle Park, NC)로부터 얻었다. 네비라핀은 AIDS Research and Reference Reagent Program, NIAID, NIH: Nevirapine을 통해 얻었다.
IC50 측정
MAGI 분석법 또는 페노센스TM 분석법을 사용하여 야생형 및 항바이러스 약물 내성 HIV의 항바이러스 약물에 대한 민감성을 시험하였다. 50 % 저해 농도인 IC50를 그 후 저해 퍼센트 대 log10 약물 농도의 플롯으로부터 측정하였다.
MAGI 분석법
MAGI 세포를 10 % 우아혈청을 함유하는 DMEM에서 12웰 플레이트 내의 웰당 약 5 x 104세포로 심고, 5% CO2 내, 37℃에서 하룻밤 동안 배양하였다. 약물을 다양한 농도로 첨가하고, 약 30 내지 60 분간 배양하였다. 세포를 4 microg/ml 폴리브렌 또는 60 microg/ml의 덱스트란의 존재 하에 HIV-1 HXB2 또는 HIV-1ⅢB로 감염시켰다. 감염은 48시간 동안 계속되었고, 세포를 0.05% 글루타르알데히드를 사용하여 고정시켰다. 세포를 PBS로 3회 세척하고 4 mM 포타슘 페로시아나이드, 4 mM 포타슘 페리시아나이드, 2 mM MgCl2 및 0.8 mg/ml X-gal로 염색하였다. 청색 핵을 100 X 배율에서 현미경 하에서 개수하였다.
H9 감염 및 p24 항원 캡쳐 분석법
37℃, 5% CO2에서 2시간 동안 0.1의 감염 중복지수(MOI)로 바이러스를 흡착시키기 전에, H9 T-세포를 RPMI와 10% 우아혈청 내에서 4㎍/ml의 폴리브렌 및 나타낸 농도의 약물로 30분간 전처리하였다. 세포를 PBS로 3회 세척하고, 신선한 배지와 약물 내에 재현탁시켰다. 37℃, 5% CO2에서의 배양을 4-6 일간 계속하고, 세포를 1200 rpm에서 원심분리하였다. 상등액을 제거하고, p24를 정량적 항원 캡쳐 키트(Zeptometrix, Buffalo, NY)로 측정하였다.
페노센스TM 분석법
모든 페노센스TM 분석법을 Virologic, Inc as described (Petropoulos, et al. (2000) Antimicrob Agents Chemother 44:920)에서 수행하였다. 간략하게, 외피 유전자가 야생형 HIV-1으로부터 결실되고, 루시퍼라제 리포터는 강한 CMV 프로모터의 제어 하에서 삽입된다. 바이러스 스톡을 재조합 바이러스 DNA 및 암포트로픽 뮤린 루케미아 바이러스로부터 외피 단백질을 발현하는 벡터로 생산 세포를 공동 트랜스펙션함으로써 제조하였다. 의사형 바이러스 입자는 복제 결함이고, 1 순환 감염만을 겪는다. 표적 세포에서 루시퍼라제 유전자의 발현은 1 순환 감염에 의존한다.
약물 내성 변종의 선별
약물 내성 변종을 선별하기 위해, HIVⅢB 또는 HIVLAI의 0.1의 MOI에서 의 감염 전에, 1 x 106 H9 세포를 3가지 농도의 AZT(0.5, 1 및 2 μM), 네비라핀(0.5, 1 및 2 μM), 포스카넷 (25 및 50 μM) 및 티오비르TM (25 및 50 μM)에서 2시간 동안 전처리하였다. 높은 수치의 약물과의 배양은 감염 후 7일 후에 세포병리학적 효과 및 p24 수치의 100배 이상의 증가를 나타냈고, 수확하여 상등액을 약물 농도마다 2회씩 신선한 H9 세포의 감염에 사용하였다. 증가하는 약물 농도에서 바이러스를 계대배양하고, IC50 증가를 모니터하였다. T7 서열을 함유한 프라이머 881For'(AATTAACCCTCACTAAAGGGAGACAGAGCCAACAGCCCCACCA) 및 929T7Rev'(ATTTAATACGACTCACTATAGGGATTTCCCCACTAACTTCTGATGTCATTGACA)를 사용하여 내성 바이러스로 감염된 H9 세포로부터 역전사 효소 유전자를 PCR 증폭시켰다. 역전사 효소 유전자를 유니버설 T7 프라이머를 사용하여 정제 PCR 생성물로부터 시퀀싱하고, 약물의 부재하에 계대배양된 바이러스와 비교하고, 서열을 확립하였다.
실시예 1: NRTI 및 NNRTI 내성 바이러스에 대한 티오비르 TM 의 활성
일반적 NRTI 및 NNRTI 약물에 내성인 바이러스에 대한 티오비르TM의 활성을 페노센스TM 리포터 시스템(Petropoulos, supra)을 사용하여 측정하였다. NRTI 및 NNRTI에 다양한 내성을 부여하는 여러 돌연변이를 갖는 10개의 바이러스의 패널을 조사하였다(도 1). 또한, 2개의 야생형 바이러스를 바이러스 패널에 포함시켰다. 각 바이러스는 티오비르TM, 포스카넷, 2개의 NRTI (스타부딘 및 지도부딘), 및 2개의 NNRTI (에파비렌즈 및 네비라핀)에 대하여 시험하였다.
티오비르TM 및 포스카넷은 야생형 바이러스에 대해 유사한 IC50 값을 나타냈다(도 2). 내성 또는 민감성의 배수 변화를 측정하기 위해 변종 바이러스에서의 IC50 값을 야생형 바이러스의 IC50 값과 비교하였다. 임상적 컷오프 값(도 2, 연회색 강조 값)은 치료 실패 확률이 내성 환자에서 유의하게 증가되는 수치로 정의된다. 변종 바이러스의 약 반이 시험된 NRTI에 대해 내성이고, 거의 모두가 시험된 NNRTI에 대해 내성이다. 대부분의 내성 바이러스는 NRTI 및 NNRTI 모두에서 임상적 컷오프를 넘는다. 반대로, 모든 바이러스는 포스카넷 및 티오비르TM 모두에 민감성이고, 다수가 과민성이다(도 2, 진회색 강조 값). 상기 데이터는 티오비르TM가 NRTI 및 NNRTI 모두에 대해 내성인 바이러스에 대해 효과적이라는 결론과 일치한다.
실시예 2: 티오비르 TM 및 지도부딘(AZT)에 의한 HIV 의 상승 작용 적 저해- MAGI 분석법
이전의 연구는 1:300 내지 1:3000 범위의 비율에서 포스카넷 및 지도부딘 사이의 경미한 정도 내지 중간 정도의 상승 작용을 나타냈다(Hostetler, et al., (2000) Antivir Chem Chemother 11:213). 본 발명자는 MAGI 분석법에 의해 티오비르TM 또는 포스카넷 및 지도부딘의 조합을 조사하였다(Klimpton and Emerman, supra). 중간 효과 원리(Chou and Talalay (1984) Adv Enzyme Regul 22:27)를 사용하여 약물 상호작용을 측정하였다. 조합 지수(CI)는 하기와 같이 상승 작용, 상가 작용 및 길항 작용을 정량화한다: CI<1 (상승 작용); CI=1 (상가 작용); CI>1 (길항 작용). 티오비르TM 또는 포스카넷과 지도부딘과의 용량-효과 관계가 중간 효과 플롯과 평행하지 않기 때문에, 효과의 배타성이 정립될 수 없고, 상호 배타적(즉, 경쟁적 저해제) 가정 및 상호 비배타적(즉, 비경쟁적 저해제) 가정 모두에 대한 데이터를 나타낸다.
지도부딘과 티오비르TM가 1:1의 비로 혼합된 경우 평균 조합 지수는 강한 상승 작용을 나타내는 약 0.55이다(표 1). 반대로, 지도부딘과 포스카넷은 약 1.5의 평균 조합 지수로서 경미한 상승 작용 내지 길항 작용 범위의 지수이다. 지도부딘과 티오비르TM 사이의 강한 상승 작용은 약물 용량의 감소시에도 항바이러스 효과가 증가될 수 있어, NRTI와 티오비르TM를 조합한 적절한 약물 요법이 가능함을 나타낸다.
티오비르TM 또는 포스카넷과 혼합된 지도부딘의 조합 지수값(MAGI 분석법)
약물 조합 (몰비) 모델 조합 지수값 r2 값
IC50 IC75 IC90
지도부딘:티오비르TM (1:1) 상호 배타적 0.39 0.51 0.68 0.97
상호 비배타적 0.39 0.52 0.68
지도부딘:티오비르TM (1:10) 상호 배타적 0.57 0.5 0.44 0.96
상호 비배타적 0.60 0.53 0.47
지도부딘:티오비르TM (1:100) 상호 배타적 0.85 0.75 0.67 0.97
상호 비배타적 10.4 0.88 0.77
지도부딘:포스카넷 (1:1) 상호 배타적 1.65 1.49 1.55 0.97
상호 비배타적 1.70 1.55 1.42
지도부딘:포스카넷 (1:10) 상호 배타적 1.01 0.78 0.61 0.93
상호 비배타적 1.14 0.88 0.68
실시예 3: 티오비르 TM 및 지도부딘(AZT)에 의한 HIV 의 상승 작용 적 저해- p24 분석법
고정된 비율의 약물의 존재하에 H9 T-세포의 감염과 p24 분석법에 의한 분석에 의해 티오비르TM 및 지도부딘 사이의 상승 작용을 더욱 조사하였다(표 2). MAGI 분석법과 유사하게, 조합 지수는 1:1 내지 1:10의 비율로 지도부딘와 혼합된 티오비르TM의 강한 상승 작용을 나타낸다. 티오비르TM와 반대로, 포스카넷과 지도부딘의 조합은 1:1의 비에서 길항 작용을 나타내고, 1:10의 비에서 상승 작용을 나타낸다. 상기 데이터는 지도부딘과의 조합 치료에서 티오비르TM가 포스카넷보다 낮은 효과 용량을 갖는다는 결론과 일치한다.
티오비르TM 또는 포스카넷과 혼합된 지도부딘의 조합 지수값(p24 분석법)
약물 조합 (몰비) 모델 조합 지수값 r2 값
IC50 IC75 IC90
지도부딘:티오비르TM (1:1) 상호 배타적 0.55 0.85 0.92 0.83
상호 비배타적 0.56 0.86 0.89
지도부딘:티오비르TM (1:10) 상호 배타적 0.43 0.46 0.52 0.96
상호 비배타적 0.45 0.48 0.53
지도부딘:포스카넷 (1:1) 상호 배타적 1.63 2.58 4.10 0.90
상호 비배타적 1.65 2.63 4.19
지도부딘:포스카넷 (1:10) 상호 배타적 0.44 0.46 0.47 0.98
상호 비배타적 0.46 0.47 0.48
실시예 4: 티오비르 TM 및 테노포비르에 의한 HIV 의 상승 작용 적 저해- p24 분석법
테노포비르는 조합 HIV 치료에서 NRTI에 대한 대체제 또는 보충제로 널리 사용되는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제(NtRTI)의 비환식 포스포네이트 유사체이다. 티오비르 및 테노포비르 사이의 상승 작용을 p24 분석법으로 조사하였다. 티오비르는 테노포비르와 1:1의 비에서 상승 작용을 나타냈다. 반대로, 포스카넷은 테노포비르와 동일한 비로 혼합되는 경우 상가 작용 내지 길항 작용 양상을 나타냈다(표 3). 이러한 데이터는 테노포비르와의 조합 치료에서 티오비르가 포스카넷보다 낮은 효과 용량을 갖는다는 결론과 일치한다.
티오비르TM 또는 포스카넷과 혼합된 테노포비르의 조합 지수값(p24 분석법)
약물 조합 (몰비) 모델 조합 지수값 r2 값
IC50 IC75 IC90
테노포비르:티오비르TM (1:1) 상호 배타적 0.86 0.88 0.91 0.98
상호 비배타적 0.86 0.89 0.93
테노포비르:티오비르TM (1:10) 상호 배타적 1.04 0.97 0.92 0.97
상호 비배타적 1.10 1.05 1.01
테노포비르:포스카넷 (1:1) 상호 배타적 1.61 1.25 0.95 0.98
상호 비배타적 1.65 1.26 0.96
실시예 5- 티오비르에 대한 야생형 HIV 의 내성 프로파일
티오비르TM 및 포스카넷 내성 바이러스를 증가하는 농도의 약물하에서 H9 세포에서 HIVLAI의 시험관 내 계대배양에 의해 선별하였다. MAGI 분석법을 사용하여 IC50 를 측정함으로써 내성 바이러스의 표현형 변화를 평가하였다. 또한 유전적 변이를 측정하기 위해 바이러스 DNA를 시퀀싱하였다(표 4). 13 내지 15 순환 선별이 2회 독립적으로 수행되었다.
티오비르TM 및 포스카넷 내성 HIV의 약물 감수성 및 유전적 돌연 변이
약물 내성 바이러스 (선별 #) 감수성 지수(IC50 내성 바이러스/IC50 원 바이러스) 코돈 변화 아미노산 변화
티오비르TM 포스카넷 지도부딘 네비라핀
티오비르TM (1) 4.8 4.8 0.22 1.05 CTT→TTT L214F
AGA→AAA R172K
CAA→CGA Q174R
티오비르TM (2) 113 85 0.35 N/A CTT→TTT L214F
AUG→AUA M184I
포스카넷 (1) 6.3 4.1 0.87 1.06 CTT→TTT L214F
AGA→AAA R172K
포스카넷 (2) 100 103 0.58 N/A CTT→TTT L214F
AUG→AUA M184I
티오비르TM에 대해 4.8배 및 85배의 내성을 나타내는 2개의 내성 바이러스를 선별하였다. 티오비르TM에 내성인 바이러스는 포스카넷에 대해서도 유사한 내성을 보였으며, 이는 교차 내성을 의미한다. 또한, 포스카넷 내성으로 선별된 바이러스는 티오비르TM에 대해서도 유사한 내성을 갖으며, 이 또한 교차 내성을 나타낸다. 상기 데이터와 일치하게, 티오비르TM 및 포스카넷 모두로 선별된 바이러스는 네비라핀에 감수성이 있고, 지도부딘에 과민성이다. AZT와 티오비르TM, 또는 AZT와 포스카넷 조합을 가지고 야생형 또는 AZT-저항성 HIV-1 균주의 오랜 시험관 내 선별은 공동 내성 바이러스를 생성하지 못했고, 이는 티오비르TM 및 AZT 내성 프로파일이 상호 배타적임을 나타낸다.
티오비르TM 및 포스카넷 모두에 내성인 바이러스는 선별 1에서 L214F 및 R172K의 돌연 변이를 함유하였다. 추가적 돌연 변이, Q174R는 티오비르TM 내성 바이러스에서만 나타났다. 선별 2에서, 티오비르TM 및 포스카넷 모두에 내성인 바이러스는 L214F 및 Ml84I의 돌연 변이를 함유하였다. L214F 및 Ml84I는 포스카넷 및 포스카넷 프로드럭 내성과 관련되는 것으로 이미 알려졌다(Hammond, et al., (2001) Antimicrob Agents Chemother 45:1621). R172K 및 Q174R는 이전에 포스카넷 또는 포스카넷 유도체에 대한 내성과 연관이 알려지지 않은 신규 돌연 변이이다. 결과는 티오비르TM 내성 프로파일이 포스카넷과 유사하다는 결론과 일치한다. 티오비르TM 및 포스카넷 내성 바이러스의 돌연변이 프로파일은 지도부딘 내성 표현형의 억제와 일치한다.
결론적으로, 실시예는 하나 또는 둘 모두의 활성 성분의 용량을 감소시킬 수 있는, 티오포스포노포름산 및 NRTI의 조합의 상승 작용 활성을 나타낸다.

Claims (22)

  1. 환자에게 일정량의 티오포스포노포름산 및 일정량의 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제를 경구 공동투여하는 단계를 포함하는 바이러스 감염된 환자에서 바이러스 개수(viral load)를 감소시키는 방법으로서, 상기 공동투여되는 일정량은 상승 작용으로 바이러스 개수를 낮추기에 충분한 양이고, 상기 티오포스포노포름산은 1일 2 mg/kg 내지 50 mg/kg의 용량 범위로 경구 투여되는 것인 방법.
  2. 제1항에 있어서, 티오포스포노포름산의 용량이 1일 15 mg/kg 내지 40 mg/kg의 용량 범위로 투여되는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 티오포스포노포름산의 용량이 1일 20 mg/kg 내지 35 mg/kg의 용량 범위로 투여되는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용량이 티오포스포노포름산 없이 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 투여되는 경우에 비해 10배 이상 감소되는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제가 지도부딘, 디다노 신, 스타부딘, 라미부딘, 아바카비르 및 엠트리시타빈으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제가 지도부딘인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 테노포비르인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 상기 바이러스가 레트로바이러스인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 레트로바이러스가 인간 면역결핍 바이러스(HIV)인 방법.
  10. 제1항에 있어서, 상기 바이러스가 헤르페스 바이러스인 방법.
  11. 제1항에 있어서, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 복합 제형으로 동시에 투여되는 것인 방법.
  12. 제1항에 있어서, 상기 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 복합 제형 정제로 동시에 투여되는 것인 방법.
  13. 바이러스 감염된 환자에서 바이러스 개수를 낮추는 경구용 약제로서, 상기 약제는 일정량의 티오포스포노포름산 및 일정량의 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제를 포함하는 복합 제형이고, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 상승 작용으로 바이러스 개수를 낮추기에 충분한 양으로 존재하고, 상기 약제는 복합 제형당 150 mg 내지 750 mg의 티오포스포노포름산을 함유하는 것인 경구용 약제.
  14. 제13항에 있어서, 상기 뉴클레오시드 역전사 효소 저해제가 지도부딘인 약제.
  15. 제13항에 있어서, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 캡슐 내에 존재하는 것인 약제.
  16. 제13항에 있어서, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 정제 내에 존재하는 것인 약제.
  17. 제13항에 있어서, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제가 액제 내에 존재하는 것인 약제.
  18. 제13항에 있어서, 상기 바이러스가 레트로바이러스인 약제.
  19. 제18항에 있어서, 상기 레트로바이러스가 인간 면역결핍 바이러스(HIV)인 약제.
  20. 제13항에 있어서, 상기 바이러스가 헤르페스 바이러스인 약제.
  21. 바이러스 감염의 치료 및/또는 예방 치료용 약제 제조에서 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용도로서, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 상승 작용으로 바이러스 개수를 낮추기에 충분한 양으로 존재하고, 상기 약제는 복합 제형당 150 mg 내지 750 mg의 티오포스포노포름산을 함유하는 것인 용도.
  22. 바이러스 감염을 치료하거나 예방하기 위한 즉시 사용가능한 약물 제형의 항바이러스제 제조에서 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제의 용도로서, 상기 티오포스포노포름산 및 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 역전사 효소 저해제는 상승 작용으로 바이러스 개수를 낮추기에 충분한 양으로 존재하고, 상기 즉시 사용가능한 약물 제형은 제형당 500 mg 미만의 티오포스포노포름산을 함유하는 것인 용도.
KR1020077022775A 2005-03-07 2006-03-06 바이러스 감염 치료에의 티오포스포노포름산 및 ｎｒｔｉ의용도 KR20070114806A (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US65913605P 2005-03-07 2005-03-07
US60/659,136 2005-03-07

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20070114806A true KR20070114806A (ko) 2007-12-04

Family

ID=36954054

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020077022775A KR20070114806A (ko) 2005-03-07 2006-03-06 바이러스 감염 치료에의 티오포스포노포름산 및 ｎｒｔｉ의용도

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20090291908A1 (ko)
EP (1) EP1855691A4 (ko)
JP (1) JP2008533040A (ko)
KR (1) KR20070114806A (ko)
CN (1) CN101137385A (ko)
AU (1) AU2006220459A1 (ko)
CA (1) CA2600025A1 (ko)
IL (1) IL185616A0 (ko)
MX (1) MX2007010919A (ko)
RU (1) RU2007136996A (ko)
WO (1) WO2006096859A2 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019221414A1 (ko) * 2018-05-16 2019-11-21 (주) 에빅스젠 로다닌 유도체를 함유하는 aids 예방 또는 치료용 약학 조성물

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5072032A (en) * 1989-06-21 1991-12-10 Mckenna Charles E Preparation and use of thiophosphonates and thio-analogues of phosphonoformic acid
US5183812A (en) * 1989-06-21 1993-02-02 Mckenna Charles E Preparation and use of thiophosphonates and thio-analogues of phosphonoformic acid
AU5953696A (en) * 1995-06-06 1996-12-24 University Of Southern California Methods and compositions for inhibiting cytomegalovirus repl ication
AU4716299A (en) * 1998-06-24 2000-01-10 Emory University Use of 3'-azido-2',3'-dideoxyuridine in combination with further anti-hiv drugs for the manufacture of a medicament for the treatment of hiv
US6147244A (en) * 1999-05-03 2000-11-14 University Of Southern California Preparations of thiophosphites and thiophosphonates

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019221414A1 (ko) * 2018-05-16 2019-11-21 (주) 에빅스젠 로다닌 유도체를 함유하는 aids 예방 또는 치료용 약학 조성물
US10821101B2 (en) 2018-05-16 2020-11-03 Avixgen Inc. Pharmaceutical composition for preventing or treating AIDS comprising rhodanine derivative
US11141407B2 (en) 2018-05-16 2021-10-12 Avixgen Inc. Pharmaceutical composition for preventing or treating aids comprising rhodanine derivative

Also Published As

Publication number Publication date
US20090291908A1 (en) 2009-11-26
WO2006096859A2 (en) 2006-09-14
IL185616A0 (en) 2008-08-07
JP2008533040A (ja) 2008-08-21
EP1855691A2 (en) 2007-11-21
AU2006220459A1 (en) 2006-09-14
CA2600025A1 (en) 2006-09-14
CN101137385A (zh) 2008-03-05
MX2007010919A (es) 2008-02-21
WO2006096859A3 (en) 2007-03-29
EP1855691A4 (en) 2010-03-31
RU2007136996A (ru) 2009-04-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Lalezari et al. A randomized, double-blind, placebo-controlled trial of cidofovir gel for the treatment of acyclovir-unresponsive mucocutaneous herpes simplex virus infection in patients with AIDS
De Clercq Novel compounds in preclinical/early clinical development for the treatment of HIV infections
EP0876387B1 (en) Use of roxithromycin for the preparation of a medicament for improving the biological and antiviral activity of protease inhibitors
US20170216284A1 (en) Antiviral therapy
Pereira et al. Anti-HIV drug development-an overview
US20160095850A1 (en) Methods and compositions for treatment of hiv infection
WO2005102392A2 (en) Combinations for treating hiv infection
JP2007518815A (ja) 乳癌および原発性胆汁性肝硬変に関与するｍｍｔｖ様ウイルスを阻害するためのアデホビルまたはテノホビルの使用
Ravot et al. New uses for old drugs in HIV infection: the role of hydroxyurea, cyclosporin and thalidomide
US6479466B1 (en) Compositions for treating viral infections, and methods therefor
Frank et al. Activity, safety, and immunological effects of hydroxyurea added to didanosine in antiretroviral-naive and experienced HIV type 1-infected subjects: a randomized, placebo-controlled trial, ACTG 307
KR20070114806A (ko) 바이러스 감염 치료에의 티오포스포노포름산 및 ｎｒｔｉ의용도
Long et al. Pharmacologic aspects of new antiretroviral drugs
AU2017268621B2 (en) Antiviral therapy
US20200171039A1 (en) Combinations and uses and treatments
Ekmekyapar et al. Antiviral Drugs and Their Toxicities
Foggia et al. Tenofovir disoproxil fumarate in the clinical practice: an overview
Kahn The clinical use of didanosine
CA2374198A1 (en) Combination therapy for treatment of fiv infection
Horwitz The development of a Rational Antiretroviral Therapy for Aids
US20200246351A1 (en) Combinations and uses and treatments thereof
WO1998031375A1 (en) Enhanced suppression of hiv-1 by the combination of cytidine nucleoside analogues and ctp synthase inhibitors
US20120070489A1 (en) Combination therapy for treatment of fiv infection
KR20020073494A (ko) 약물내성 인체 면역결핍 바이러스 감염의 치료

Legal Events

Date Code Title Description
WITN Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid