CN101454344A - 与白细胞介素-1受体1型结合的非竞争性域抗体形式 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及与IL－1R1结合，并抑制IL－1(如IL－1α和/或IL－1β)与受体结合，但不抑制IL－1ra与IL－1R1结合的dAb单体，以及含有此种dAb单体的配体。本发明涉及耐蛋白酶的dAb单体，和含有耐蛋白酶dAb单体的配体。本发明还涉及包括载体在内的编码所述dAb单体和配体的核酸，含有该核酸的宿主细胞，以及制备dAb单体或配体的方法。本发明还涉及含有所述dAb单体或配体的药物组合物，以及包含施用dAb单体或配体的治疗方法。

Description

与白细胞介素-1受体1型结合的非竞争性域抗体形式
相关申请
本申请要求2005年12月1号提交的美国临时申请No.60/742,062的利益。上述申请的全部教导在此引作参考。
背景技术
白细胞介素-1(IL-1)是一种重要的对几种类型的细胞有生物效应的免疫应答介质。白细胞介素-1与两种受体白细胞介素-1受体1型(IL-1R1、CD121a、p80)和白细胞介素-1受体2型(IL-1R1、CDw121b)相结合，白细胞介素-1受体1型与IL-1结合将信号向细胞内传递，白细胞介素-1受体2型与IL-1结合不传递信号，而是作为IL-1内源性调节剂。另一种调节IL-1与IL-1R1相互作用的内源性蛋白是白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)。IL-1ra与IL-1R1结合，但不激活IL-1R1以传递信号。
通过IL-1R1与IL-1(例如IL-1α或IL-1β)结合传递的信号诱导广谱的可致病的生物活性。例如通过IL-1R1与IL-1(例如IL-1α或IL-1β)结合传递的信号可导致局部及全身性炎症，产生另外的炎性介质(如IL-6、I1-8、TNF)，发烧，激活免疫细胞(如淋巴细胞、中性粒细胞)，食欲不振，低血压，白细胞减少症和血小板减少。通过IL-1R1与IL-1(例如IL-1α或IL-1β)结合传递的信号对非免疫细胞也有作用，如刺激软骨细胞释放胶原酶和其他降解软骨的酶，以及刺激破骨细胞祖细胞分化为成熟的可导致骨再吸收的破骨细胞。(参见例如Hallegua and Weisman，Ann.Theum.Dis.61：960-967(2002).)。因此，IL-1和IL-1R1的相互作用已牵涉几种疾病如关节炎(如类风湿关节炎、骨性关节炎)和炎症性肠病的发病机理。
某些与白细胞介素-1受体1型(IL-1R1)结合并使其无活性(如IL-1ra)的物质，已被证明是某些炎症疾病的有效治疗剂，如中度到严重的活动性类风湿关节炎。不过，其他与IL-1R1结合的物质如抗IL-1R1抗体AMG 108(Amgen公司)已不能满足临床研究中主要终点的要求。
存在着对拮抗IL-1R1的改进药物，以及施用此种药物治疗疾病的方法的需求。
发明概述
本发明涉及与IL-1R1结合，并抑制IL-1(如IL-1α和/或IL-1β)与受体的结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的域抗体(dAb)单体，以及包括此种dAb单体的配体。这种配体和dAb单体可用作治疗剂，治疗炎症、疾病或全部或部分由IL-1与IL-1R1结合所诱导的生物学功能所介导的其他疾病(如局部或全身性炎症，炎症介质的产生(如IL-6、I1-8、TNF)，发烧，免疫细胞的激活(如淋巴细胞、中性粒细胞)，厌食症，低血压，白细胞减少，血小板减少)。本发明的配体或dAb单体可与IL-1R1结合，并抑制IL-1R1的功能而不影响内源性IL-1R1抑制途径，如内源性IL-1ra和内源性IL-1R1的结合。因此，这种配体或dAb单体可施用于受试者，以补充抑制体内IL-1R1或IL-1活性的内源性调节途径。此外，与IL-1R1结合，不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的配体或dAb单体作为诊断试剂是有利的，因为它们可用于结合、检测、定量或测量样本中的IL-1R1，并且不会与样本中的IL-1ra竞争与IL-1R1的结合。因此，可以准确测定样本中是否有以及有多少IL-1R1。
与IL-1R1结合，抑制IL-1  (如IL-1α和/或IL-1β)与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的dAb单体，还可以用作研究工具。例如，这样的dAb单体可用于鉴别与IL-1R1结合，但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的物质(如其他dAb、小的有机分子)。在一个说明性的实施例中，在竞争性IL-1R1受体结合检测，例如本文所述的受体结合检测中，检测了一物质或物质集合抑制IL-1和IL-1R1结合的能力。随后在类似的竞争性IL-1R1受体结合检测中，研究了抑制IL-1与IL-1R1结合的物质，以明了其是否会和与IL-1R1结合但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的dAb单体竞争。这样一种检测中的竞争性结合表明，该物质与IL-1R1结合，抑制IL-1与受体结合，但不抑制IL-1ra与受体的结合。
一方面，本发明涉及一种dAb单体，该域抗体单体能特异性结合白细胞介素-1受体1型(IL-1R1)，并抑制白细胞介素-1(IL-1，如白细胞介素-1α(IL-1α)和/或白细胞介素-1β(IL-1β))与受体结合，但不抑制白细胞介素-1受体拮抗剂((IL-1ra)与IL-1R1的结合。
优选地，所述dAb单体抑制IL-1与IL-1R1结合，IC50≤1μM。在一些实施方案中，在体外检测中所述dAb单体抑制IL-1诱导的MRC-5细胞(ATCC检索号CCL-171)释放白细胞介素-8，ND50≤1μM，或优选≤1nM。在其他实施方案中，在全血检测中所述dAb单体抑制IL-1诱导的白细胞介素-6的释放，ND50≤1μM。在其他实施方案中，在全血检测中所述dAb单体抑制IL-1诱导的白细胞介素-6的释放，ND50≤1μM。
所述dAb单体内的一个或多个框架区(FR)可包括(a)人框架区的氨基酸序列，(b)人框架区氨基酸序列的至少8个毗连氨基酸，或(c)人种系抗体基因片段编码的氨基酸序列，其中所述框架区如Kabat所定义。
所述dAb单体中一个或多个框架区的氨基酸序列可以与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同，或相对于人种系抗体基因片段编码的相应框架区，一个或多个所述框架区的氨基酸序列总共含有最高达5个氨基酸的差异。
所述dAb单体中FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列可以与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同，或相对于人种系抗体基因片段编码的相应框架区，FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列总共含有最高达10个氨基酸的差异。
dAb单体可包括FR1、FR2和FR3区，所述FR1、FR2和FR3的氨基酸序列可以与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同。在一些实施方案中，人种系抗体基因片段是DPK9和JK1。
在一些实施方案中，所述dAb单体与选自下列的dAb竞争与IL-1R1的结合：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ IDNO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ IDNO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ ID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ IDNO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ ID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ ID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ IDNO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ ID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)、DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)、DOM4-1(SEQ ID NO：8)、DOM4-2(SEQ IDNO：9)、DOM4-3(SEQ ID NO：10)、DOM4-4(SEQ ID NO：11)、DOM4-5(SEQ ID NO：12)、DOM4-6(SEQ ID NO：13)、DOM4-7(SEQ ID NO：14)、DOM4-8(SEQ ID NO：15)、DOM4-9(SEQ IDNO：16)、DOM4-10(SEQ ID NO：17)、DOM4-11(SEQ IDNO：18)、DOM4-12(SEQ ID NO：19)、DOM4-13(SEQ ID NO：20)、DOM4-14(SEQ ID NO：21)、DOM4-15(SEQ ID NO：22)、DOM4-20(SEQ ID NO：23)、DOM4-21(SEQ ID NO：24)、DOM4-22(SEQ IDNO：25)、DOM4-23(SEQ ID NO：26)、DOM4-25(SEQ ID NO：27)、DOM4-26(SEQ ID NO：28)、DOM4-27(SEQ ID NO：29)、DOM4-28(SEQ ID NO：30)、DOM4-29(SEQ ID NO：31)、DOM4-31(SEQ IDNO：32)、DOM4-32(SEQ ID NO：33)、DOM4-33(SEQ ID NO：34)、DOM4-34(SEQ ID NO：35)、DOM4-36(SEQ ID NO：36)、DOM4-37(SEQ ID NO：37)、DOM4-38(SEQ ID NO：38)、DOM4-39(SEQ IDNO：39)、DOM4-40(SEQ ID NO：40)、DOM4-41(SEQ ID NO：41)、DOM4-42(SEQ ID NO：42)、DOM4-44(SEQ ID NO：43)、DOM4-45(SEQ ID NO：44)、DOM4-46(SEQ ID NO：45)、DOM4-49(SEQ IDNO：46)、DOM4-50(SEQ ID NO：47)、DOM4-74(SEQ ID NO：48)、DOM4-75(SEQ ID NO：49)、DOM4-76(SEQ ID NO：50)、DOM4-78(SEQ ID NO：51)、DOM4-79(SEQ ID NO：52)、DOM4-80(SEQ IDNO：53)、DOM4-81(SEQ ID NO：54)、DOM4-82(SEQ ID NO：55)、DOM4-83(SEQ ID NO：56)、DOM4-84(SEQ ID NO：57)、DOM4-85(SEQ ID NO：58)、DOM4-86(SEQ ID NO：59)、DOM4-87(SEQ IDNO：60)、DOM4-88(SEQ ID NO：61)、DOM4-89(SEQ ID NO：62)、DOM4-90(SEQ ID NO：63)、DOM4-91(SEQ ID NO：64)、DOM4-92(SEQ ID NO：65)、DOM4-93(SEQ ID NO：66)、DOM4-94(SEQ IDNO：67)、DOM4-95(SEQ ID NO：68)、DOM4-96(SEQ ID NO：69)、DOM4-97(SEQ ID NO：70)、DOM4-98(SEQ ID NO：71)、DOM4-99(SEQ ID NO：72)、DOM4-100(SEQ ID NO：73)、DOM4-101(SEQID NO：74)、DOM4-102(SEQ ID NO：75)、DOM4-103(SEQ IDNO：76)、DOM4-104(SEQ ID NO：77)、DOM4-105(SEQ IDNO：78)、DOM4-106(SEQ ID NO：79)、DOM4-107(SEQ IDNO：80)、DOM4-108(SEQ ID NO：81)、DOM4-109(SEQ IDNO：82)、DOM4-110(SEQ ID NO：83)、DOM4-111(SEQ IDNO：84)、DOM4-112(SEQ ID NO：85)、DOM4-113(SEQ IDNO：86)、DOM4-114(SEQ ID NO：87)、DOM4-115(SEQ IDNO：88)、DOM4-116(SEQ ID NO：89)、DOM4-117(SEQ IDNO：90)、DOM4-118(SEQ ID NO：91)、DOM4-119(SEQ IDNO：92)、DOM4-120(SEQ ID NO：93)、DOM4-121(SEQ IDNO：94)、DOM4-123(SEQ ID NO：166)、DOM4-124(SEQ IDNO：167)DOM4-125(SEQ ID NO：168)、DOM4-126(SEQ IDNO：169)、DOM4-127(SEQ ID NO：170)、DOM4-128(SEQ IDNO：171)、DOM4-129(SEQ ID NO：172)、DOM4-129-1(SEQ IDNO：173、)DOM4-129-2(SEQ ID NO：174)、DOM4-129-3(SEQ IDNO：175)、DOM4-129-4(SEQ ID NO：176)、DOM4-129-5(SEQ IDNO：177)、DOM4-129-6(SEQ ID NO：178)、DOM4-129-7(SEQ IDNO：179)、DOM4-129-8(SEQ ID NO：180)、DOM4-129-9(SEQ IDNO：181)、DOM4-129-10(SEQ ID NO：182)、DOM4-129-11(SEQID NO：183)、DOM4-129-12(SEQ ID NO：184)、DOM4-129-13(SEQ ID NO：185)、DOM4-129-14(SEQ ID NO：186)、DOM4-129-15(SEQ ID NO：187)、DOM4-129-16(SEQ ID NO：188)、DOM4-129-17(SEQ ID NO：189)、DOM4-129-18(SEQ ID NO：190)、DOM4-129-19(SEQ ID NO：191)、DOM4-129-20(SEQ IDNO：192)、DOM4-129-21(SEQ ID NO：193)、DOM4-129-22(SEQID NO：194)、DOM4-129-23(SEQ ID NO：195)、DOM4-129-24(SEQ ID NO：196)、DOM4-129-25(SEQ ID NO：197)、DOM4-129-26(SEQ ID NO：198)、DOM4-129-27(SEQ ID NO：199)、DOM4-129-28(SEQ ID NO：200)、DOM4-129-29(SEQ ID NO：201)、DOM4-129-31(SEQ ID NO：202)、DOM4-129-32(SEQ IDNO：203)、DOM4-129-33(SEQ ID NO：204)、DOM4-129-34(SEQID NO：205)、DOM4-129-35(SEQ ID NO：206)、DOM4-129-37(SEQ ID NO：207)、DOM4-129-38(SEQ ID NO：208)、DOM4-129-39(SEQ ID NO：209)、DOM4-129-40(SEQ ID NO：210)、DOM4-129-41(SEQ ID NO：211)、DOM4-129-42(SEQ ID NO：212)、DOM4-129-43(SEQ ID NO：213)、DOM4-129-44(SEQ IDNO：214)、DOM4-131(SEQ ID NO：347)、DOM4-132(SEQ IDNO：348)和DOM4-133(SEQ ID NO：349)。
优选地，所述dAb与选自下述的dAb竞争与IL-1R1的结合：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ IDNO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ IDNO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ IDNO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ IDNO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ ID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ IDNO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ ID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ ID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ IDNO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ ID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)和DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)。
在其他实施方案中，所述dAb单体包含氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下列的氨基酸序列具有至少约90％的氨基酸序列一致性：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ IDNO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ IDNO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ IDNO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ IDNO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ ID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ IDNO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ ID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ  ID  NO：158)、DOM4-122-67(SEQ IDNO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ ID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)、DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)、DOM4-1(SEQ ID NO：8)、DOM4-2(SEQ IDNO：9)、DOM4-3(SEQ ID NO：10)、DOM4-4(SEQ ID NO：11)、DOM4-5(SEQ ID NO：12)、DOM4-6(SEQ ID NO：13)、DOM4-7(SEQ ID NO：14)、DOM4-8(SEQ ID NO：15)、DOM4-9(SEQ IDNO：16)、DOM4-10(SEQ ID NO：17)、DOM4-11(SEQ IDNO：18)、DOM4-12(SEQ ID NO：19)、DOM4-13(SEQ ID NO：20)、DOM4-14(SEQ ID NO：21)、DOM4-15(SEQ ID NO：22)、DOM4-20(SEQ ID NO：23)、DOM4-21(SEQ ID NO：24)、DOM4-22(SEQ IDNO：25)、DOM4-23(SEQ ID NO：26)、DOM4-25(SEQ ID NO：27)、DOM4-26(SEQ ID NO：28)、DOM4-27(SEQ ID NO：29)、DOM4-28(SEQ ID NO：30)、DOM4-29(SEQ ID NO：31)、DOM4-31(SEQ IDNO：32)、DOM4-32(SEQ ID NO：33)、DOM4-33(SEQ ID NO：34)、DOM4-34(SEQ ID NO：35)、DOM4-36(SEQ ID NO：36)、DOM4-37(SEQ ID NO：37)、DOM4-38(SEQ ID NO：38)、DOM4-39(SEQ IDNO：39)、DOM4-40(SEQ ID NO：40)、DOM4-41(SEQ ID NO：41)、DOM4-42(SEQ ID NO：42)、DOM4-44(SEQ ID NO：43)、DOM4-45(SEQ ID NO：44)、DOM4-46(SEQ ID NO：45)、DOM4-49(SEQ IDNO：46)、DOM4-50(SEQ ID NO：47)、DOM4-74(SEQ ID NO：48)、DOM4-75(SEQ ID NO：49)、DOM4-76(SEQ ID NO：50)、DOM4-78(SEQ ID NO：51)、DOM4-79(SEQ ID NO：52)、DOM4-80(SEQ IDNO：53)、DOM4-81(SEQ ID NO：54)、DOM4-82(SEQ ID NO：55)、DOM4-83(SEQ ID NO：56)、DOM4-84(SEQ ID NO：57)、DOM4-85(SEQ ID NO：58)、DOM4-86(SEQ ID NO：59)、DOM4-87(SEQ IDNO：60)、DOM4-88(SEQ ID NO：61)、DOM4-89(SEQ ID NO：62)、DOM4-90(SEQ ID NO：63)、DOM4-91(SEQ ID NO：64)、DOM4-92(SEQ ID NO：65)、DOM4-93(SEQ ID NO：66)、DOM4-94(SEQ IDNO：67)、DOM4-95(SEQ ID NO：68)、DOM4-96(SEQ ID NO：69)、DOM4-97(SEQ ID NO：70)、DOM4-98(SEQ ID NO：71)、DOM4-99(SEQ ID NO：72)、DOM4-100(SEQ ID NO：73)、DOM4-101(SEQID NO：74)、DOM4-102(SEQ ID NO：75)、DOM4-103(SEQ IDNO：76)、DOM4-104(SEQ ID NO：77)、DOM4-105(SEQ IDNO：78)、DOM4-106(SEQ ID NO：79)、DOM4-107(SEQ IDNO：80)、DOM4-108(SEQ ID NO：81)、DOM4-109(SEQ IDNO：82)、DOM4-110(SEQ ID NO：83)、DOM4-111(SEQ IDNO：84)、DOM4-112(SEQ ID NO：85)、DOM4-113(SEQ IDNO：86)、DOM4-114(SEQ ID NO：87)、DOM4-115(SEQ IDNO：88)、DOM4-116(SEQ ID NO：89)、DOM4-117(SEQ IDNO：90)、DOM4-118(SEQ ID NO：91)、DOM4-119(SEQ IDNO：92)、DOM4-120(SEQ ID NO：93)、DOM4-121(SEQ IDNO：94)、DOM4-123(SEQ ID NO：166)、DOM4-124(SEQ IDNO：167)DOM4-125(SEQ ID NO：168)、DOM4-126(SEQ IDNO：169)、DOM4-127(SEQ ID NO：170)、DOM4-128(SEQ IDNO：171)、DOM4-129(SEQ ID NO：172)、DOM4-129-1(SEQ IDNO：173、)DOM4-129-2(SEQ ID NO：174)、DOM4-129-3(SEQ IDNO：175)、DOM4-129-4(SEQ ID NO：176)、DOM4-129-5(SEQ IDNO：177)、DOM4-129-6(SEQ ID NO：178)、DOM4-129-7(SEQ IDNO：179)、DOM4-129-8(SEQ ID NO：180)、DOM4-129-9(SEQ IDNO：181)、DOM4-129-10(SEQ ID NO：182)、DOM4-129-11(SEQID NO：183)、DOM4-129-12(SEQ ID NO：184)、DOM4-129-13(SEQ ID NO：185)、DOM4-129-14(SEQ ID NO：186)、DOM4-129-15(SEQ ID NO：187)、DOM4-129-16(SEQ ID NO：188)、DOM4-129-17(SEQ ID NO：189)、DOM4-129-18(SEQ ID NO：190)、DOM4-129-19(SEQ ID NO：191)、DOM4-129-20(SEQ IDNO：192)、DOM4-129-21(SEQ ID NO：193)、DOM4-129-22(SEQID NO：194)、DOM4-129-23(SEQ ID NO：195)、DOM4-129-24(SEQ ID NO：196)、DOM4-129-25(SEQ ID NO：197)、DOM4-129-26(SEQ ID NO：198)、DOM4-129-27(SEQ ID NO：199)、DOM4-129-28(SEQ ID NO：200)、DOM4-129-29(SEQ ID NO：201)、DOM4-129-31(SEQ ID NO：202)、DOM4-129-32(SEQ IDNO：203)、DOM4-129-33(SEQ ID NO：204)、DOM4-129-34(SEQID NO：205)、DOM4-129-35(SEQ ID NO：206)、DOM4-129-37(SEQ ID NO：207)、DOM4-129-38(SEQ ID NO：208)、DOM4-129-39(SEQ ID NO：209)、DOM4-129-40(SEQ ID NO：210)、DOM4-129-41(SEQ ID NO：211)、DOM4-129-42(SEQ ID NO：212)、DOM4-129-43(SEQ ID NO：213)、DOM4-129-44(SEQ IDNO：214)、DOM4-131(SEQ ID NO：347)、DOM4-132(SEQ IDNO：348)和DOM4-133(SEQ ID NO：349)。
优选地，所述dAb单体包含氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下列的氨基酸序列具有至少约90％氨基酸序列一致性：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ ID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ ID NO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ ID NO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ ID NO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ ID NO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQ ID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ IDNO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ ID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ IDNO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ ID NO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQ ID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ IDNO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ ID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ IDNO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ ID NO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQ ID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ IDNO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ ID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)和DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)。
优选地，所述dAb单体与人IL-1R1结合的亲和力常数(KD)为约300nM至约5pM，由表面等离子体共振测定。
另一方面，本发明涉及包括dAb单体和半衰期延长部分的配体，该dAb单体特异性结合白细胞介素-1受体1型(IL-1R1)，抑制白细胞介素-1(IL-1，例如白细胞介素-1α(IL-1α)和/或白细胞介素-1β(IL-1β))与受体的结合，但不抑制白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)与IL-1R1的结合。该半衰期延长部分可以是聚烷撑二醇部分、血清白蛋白或其片段、转铁蛋白或其转铁蛋白结合部分、或包含与延长体内半衰期的多肽结合的位点的抗体或抗体片段。在一些实施方案中，该半衰期延长部分是包含与血清白蛋白或新生儿Fc受体结合的位点的抗体或抗体片段。在具体实施方案中，所述半衰期延长部分是一个免疫球蛋白单可变域，其与本文公开的抗血清白蛋白dAb竞争与人血清白蛋白的结合。在其他具体实施方案中，半衰期延长部分是包含一氨基酸序列的免疫球蛋白单可变域，所述氨基酸序列有至少90％的氨基酸序列与本文公开的抗血清白蛋白dAb的氨基酸序列相同。
在进一步具体实施方案中，本发明是包括与IL-1R1特异性结合，并抑制IL-1和受体结合，但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的dAb单体的配体，其中所述dAb单体选自DOM4-122-23和DOM4-122-24。该配体可以是例如dAb单体或所述dAb单体的同源二聚体、同源三聚体或同源寡聚体。该配体可以进一步包括与血清白蛋白如DOM7h-8结合的dAb单体。例如在一些实施方案中，该配体包括DOM4-122-23和DOM7h-8，或包括DOM-122-24和DOM7h-8。
在其他具体实施方案中，本发明是一种配体，其包括与IL-1R1特异性结合，并抑制IL-1和受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的dAb单体，以及和肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)特异性结合的dAb单体。如果需要，所述配体可以进一步包括半衰期延长部分。
优选地，所述对TNFR1具有结合特异性的dAb单体与本文公开的抗TNFR1 dAb竞争与TNFR1的结合。在一些实施方案中，所述对TNFR1具有结合特异性的dAb单体包含氨基酸序列，该氨基酸序列与本文公开的抗TNFR1 dAb的氨基酸序列具有至少90％的氨基酸序列一致性。
本发明还涉及编码dAb单体或配体的分离的或重组核酸，以及包括所述重组核酸的载体(如表达载体)。本发明还涉及包括重组核酸或载体的宿主细胞，以及一种制备配体或dAb单体的方法，该方法包括在适合编码本发明的配体或dAb单体的核酸表达的条件下使本发明的宿主细胞保持稳定。
本发明还涉及包括dAb单体或配体，以及生理学上可接受载体的药物组合物。例如一种静脉注射、肌肉注射、腹腔内、动脉内、鞘内注射、关节内、皮下、肺部、鼻腔内、阴道或直肠给药的药物组合物。
本发明还涉及一种包括本发明药物组合物的给药装置。例如所述给药装置可以是非肠道给药装置、静脉注射给药装置、肌肉注射给药装置、腹腔内给药给药装置、透皮给药装置、肺部给药装置、动脉内给药装置、鞘内注射给药装置、关节内给药装置、皮下给药装置、鼻腔内给药装置、阴道给药装置或直肠给药装置。这种给药装置的例子包括注射器、透皮给药装置(如贴片)、胶囊、片剂、喷雾器、吸入器、雾化器、气雾器、起雾器、干粉吸入器、定量吸入器、定量喷雾器、定量起雾器、定量雾化器和导管。
本发明还涉及一种治疗炎症疾病的方法，其包括将治疗有效量的本发明的dAb单体或配体施用于对其有需要的受试者。
本发明还涉及用于治疗、诊断和/或预防的本发明的dAb单体或配体，以及本发明的dAb单体或配体在制备治疗本文所述疾病(如炎症疾病、关节炎、呼吸疾病)的药物中的应用。
本发明还涉及治疗疾病(如炎症疾病、关节炎、呼吸疾病)的方法，其包括将治疗有效量的耐蛋白酶降解的dAb单体施用于对其有需要的受试者。
本发明还涉及耐蛋白酶降解，用于治疗、诊断或预防的dAb单体，以及本发明的此种dAb单体在制备治疗本文所述疾病(如炎症疾病、关节炎、呼吸疾病)的药物中的应用。
附图简述
图1是体外检测结果图，其中检测dAbs抑制IL-1诱导的经培养MRC-5细胞(ATCC目录号CCL-171)释放IL-8的能力。图1显示在此种细胞检测中被称为DOM4-122和DOM-129的抗IL-1R1 dAb的剂量反应曲线。这两种dAb的ND50值为约1μM。
图2是体外检测结果图，其中检测了经历亲和力成熟的dAbs抑制IL-1诱导的经培养MRC-5细胞(ATCC目录号CCL-171)释放IL-8的能力。图2是DOM4-122-6、DOM4-129-1、DOM4-122-23和IL-1ra的剂量反应曲线。DOM4-122-6和DOM4-122-23是DOM4-122的亲和力成熟变体，DOM4-129-1是DOM4-129的亲和力成熟变体。检测中DOM4-122-6和DOM4-129-1的ND50都是约10nM。检测中DOM4-122-23的ND50为约1nM。
图3A和3B是传感图，显示DOM4-122-23(图3A)而非IL-1α(图3B)与已经和IL-1ra结合的IL-1R1结合。IL-1ra被注入并流经固定化的IL-1R1的表面，与固定化的受体结合(注射1，在图3A和3B中从0至60秒)。然后注入或DOM4-122-23或IL-1a(注射2，在图3A和3B中从60至120秒)。在传感图中可以看出，是DOM4-122-23，而非IL-1α与已经和IL-1ra结合的IL-1R1结合。
图4显示在竞争性结合ELISA中，浓度增加的DOM4-122-23不抑制IL-1ra和IL-1R1结合，但检测中IL-1α抑制IL-1ra与IL-1R1结合。浓度增加的DOM4-122-23或IL-1α与500pM IL-1ra混合，混合物被加到IL-1R1包被的ELISA板上。
图5A-5Z图解了与人IL-1R1结合的几种人dAbs的氨基酸序列。在一些所述序列中，CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸加了下划线。
图6A-6Z、6AA-6ZZ、6AAA和6BBB图解了编码图5A-5Z所示人dAbs的核酸的核苷酸序列。在一些所述序列中，编码CDR1、CDR2和CDR3的核苷酸加了下划线。
图7A是通过与小鼠血清白蛋白(MSA)结合而选得的三种Vκs的氨基酸序列的比对。所述经比对的氨基酸序列来自被称为MSA16、MSA 12和MSA 26的Vκs，MSA16也被称作DOM7m-16(SEQ ID NO：723)、MSA 12也被称作DOM7m-12(SEQ IDNO：724)，MSA 26也被称作DOM7m-26(SEQ ID NO：725)。
图7B是通过与大鼠血清白蛋白(RSA)结合选得的六种Vκs的氨基酸序列的比对。所述经比对的氨基酸序列来自被称为DOM7r-1(SEQ ID NO：726)、DOM7r-3(SEQ ID NO：727)、DOM7r-4(SEQ ID NO：728)、DOM7r-5(SEQ ID NO：729)、DOM7r-7(SEQID NO：730)和DOM7r-8(SEQ ID NO：731)的Vκs。
图7C是通过与人血清白蛋白(HSA)结合选得的六种Vκs的氨基酸序列的比对。所述经比对的氨基酸序列来自称为DOM7h-2(SEQ ID NO：732)、DOM7h-3(SEQ ID NO：733)、DOM7h-4(SEQ ID NO：734)、DOM7h-6(SEQ ID NO：735)、DOM7h-1(SEQ ID NO：736)和DOM7h-7(SEQ ID NO：737)的Vκs。
图7D是通过与人血清白蛋白的结合选得的七种VHs的氨基酸序列的比对以及共有序列(SEQ ID NO：738)。所述经比对的氨基酸序列来自被称为DOM7h-22(SEQ ID NO：739)、DOM7h-23(SEQ ID NO：740)、DOM7h-24(SEQ ID NO：741)、DOM7h-25(SEQ ID NO：742)、DOM7h-26(SEQ ID NO：743)、DOM7h-21(SEQ ID NO：744)和DOM7h-27(SEQ ID NO：745)的VHs。
图7E是通过与人血清白蛋白(HSA)以及大鼠血清白蛋白结合选得的三种Vκs的氨基酸序列的比对。所述经比对的氨基酸序列来自被称为DOM7h-8(SEQ ID NO：746)、DOM7r-13(SEQ IDNO：747)和DOM7r-14(SEQ ID NO：748)的Vκs。
图8图解了通过与大鼠血清白蛋白(RSA)结合选得的Vκs的氨基酸序列。该图解序列来自被称为DOM7r-15(SEQ IDNO：749)、DOM7r-16(SEQ ID NO：750)、DOM7r-17(SEQ IDNO：751)、DOM7r-18(SEQ ID NO：752)和DOM7r-19(SEQ IDNO：753)的Vκs。
图9A-9B图解了与大鼠血清白蛋白(RSA)结合的VHs的氨基酸序列。该图解序列来自被称为DOM7r-20(SEQ ID NO：754)、DOM7r-21(SEQ ID NO：755)、DOM7r-22(SEQ ID NO：756)、DOM7r-23(SEQ ID NO：757)、DOM7r-24(SEQ ID NO：758)、DOM7r-25(SEQ ID NO：759)、DOM7r-26(SEQ ID NO：760)、DOM7r-27(SEQ ID NO：761)、DOM7r-28(SEQ ID NO：762)、DOM7r-29(SEQ ID NO：763)、DOM7r-30(SEQ ID NO：764)、DOM7r-31(SEQ ID NO：765)、DOM7r-32(SEQ ID NO：766)和DOM7r-33(SEQ ID NO：767)的VHs。
图10图解了与WO 2004/041862中公开的小鼠血清白蛋白结合的几种驼类(Camelid)VHHs的氨基酸序列。序列A(SEQ IDNO：768)、序列B(SEQ ID NO：769)、序列C(SEQ ID NO：770)、序列D(SEQ ID NO：771)、序列E(SEQ ID NO：772)、序列F(SEQ ID NO：773)、序列G(SEQ ID NO：774)、序列H(SEQ IDNO：775)、序列I(SEQ ID NO：776)、序列J(SEQ ID NO：777)、序列K(SEQ ID NO：778)、序列L(SEQ ID NO：779)、序列M(SEQID NO：780)、序列  N(SEQ ID NO：781)、序列O(SEQ IDNO：782)、序列P(SEQ ID NO：783)、序列Q(SEQ ID NO：784)。
图11A-11V图解了能与人TNFR1特异性结合的几种人免疫球蛋白可变域的氨基酸序列。所述氨基酸序列是连续的没有空位；符号～已被插入所述序列中，表示互补决定区(CDRs)的位置。CDR1两侧是～，CDR2两侧是～～，以及CDR3两侧是～～～。
图12A-12B图解了能与小鼠TNFR1特异性结合的几种人免疫球蛋白可变域的氨基酸序列。所述氨基酸序列是连续的没有空位；符号～已被插入一些序列中，表示互补决定区(CDRs)的位置。CDR1两侧是～，CDR2两侧是～～，以及CDR3两侧是～～～。
发明详述
本说明书结合供参考的实施方案以清楚和简洁的方式描述了本发明。实施方案可有不同组合或拆分，并不偏离本发明，这是本文的意图所在并应被理解。
本文所用的术语“配体”指包括与所需靶标特异性结合的域的多肽。优选地，所述结合域是与所需靶抗原(如受体蛋白)特异性结合的免疫球蛋白单可变域(如VH、VL、VHH)。所述结合域还可以包括与合适形式的所需靶抗原特异性结合的免疫球蛋白单可变域的一种或多种互补决定区(CDRs)，使得所述结合域与所述靶抗原特异性结合。例如，所述CDRs可移植到合适的蛋白质支架或骨架上，如亲和体、SpA支架、LDL受体A类域或EGF域。此外，配体可以如本文所述是单价的(如dAb单体)、二价的(同型二价、异型二价)或多价的(同型多价、异型多价)。因此如本文所述“配体”包括由dAb组成的多肽，包括实质上由此种dAb组成的多肽，包括合适形式的dAb(或dAb的CDRs)、双特异性配体和多特异性配体的多肽，其中所述合适形式的dAb(或dAb的CDRs)如抗体形式(例如IgG样形式、scFv、Fab、Fab’、F(ab’)2)或适合的蛋白支架或骨架，如亲和体、SpA支架、LDL受体A类域或EGF域，所述双特异性配体包括与第一靶蛋白、抗原或表位(如IL-1R1或TNFR1)结合的dAb，以及与另一靶蛋白、抗原或表位(如血清白蛋白)结合的第二dAb。结合域还可以是包括所需靶标结合位点的蛋白域，如选自亲和体、SpA域、LDL受体A类域、EGF域和Avimer的蛋白域(参见例如美国专利申请公开号2005/0053973、2005/0089932、2005/0164301)。
“免疫球蛋白单可变域”指独立于其他V区或V域而特异性结合抗原或表位的抗体可变域(VH，VHH，VL)；但是本文所用的免疫球蛋白单可变域可以以与其他可变区或可变域一起的形式(如同源或异源多聚体)出现，其他可变区或可变域对单免疫球蛋白可变域结合的抗原来说不是必须的(即免疫球蛋白单可变域结合抗原无需另外的可变域)。“免疫球蛋白单可变域”不仅包括分离的抗体单可变域多肽，还包括含有一种或多种抗体单可变域多肽序列的一种或多种单体。“域抗体”或“dAb”与本文所用的“免疫球蛋白单可变域”多肽是相同的。本文所用的免疫蛋白单可变域多肽指哺乳类免疫球蛋白单可变域多肽，优选人，但还包括啮齿类(如WO 00/29004中公开的，其全部内容在此引作参考)或驼类(Camelid)VHH dAbs。驼类(Camelid)  dAbs是来源于包括骆驼、大羊驼、羊驼、单峰驼和原驼的种的免疫球蛋白单可变域多肽，包括轻链天然缺失的重链抗体：VHH。VHH分子比IgG分子约小10倍，作为单(域)多肽，它们非常稳定，可抗极端pH和温度条件。
本文所用的术语“剂量”指一次(单位剂量)，或确定时间间隔的两次或多次施用于受试者的药物(如抗IL-1R1 dAb、TNFR1拮抗剂)的量。例如，剂量指一天(24小时)(每日剂量)、两天、一周、两周、三周或一个或多个月(例如通过一次给药，或通过两次或更多次给药)的过程中施用于受试者的药物(如抗IL-1R1 dAb、TNFR1拮抗剂)的量。剂量间的时间间隔可以是任何所需的时间量。
当两种免疫球蛋白域属于形成同源对或组的结构家族或是来源于此种家族并保留此特征时，它们是“互补的”。例如，抗体的VH域和VL域是互补的；两个VH域不是互补的，两种VL不是互补的。可在免疫球蛋白超家族分子的其他成员中发现互补域，比如T细胞受体的Vα和Vβ(或γ和δ)域。人工的域，例如除非设计成与表位结合，否则不和表位结合的基于蛋白支架的域，是非互补的。同样地，基于(例如)免疫球蛋白域和纤维连接蛋白域的两个域不是互补的。
“免疫球蛋白”指保留了抗体分子的免疫球蛋白折叠特征的多肽家族，抗体分子包含两个β折叠片，并通常含有保守二硫键。免疫球蛋白超家族成员涉及体内细胞和非细胞间相互作用的许多方面，包括在免疫系统中的普遍作用(例如抗体、T细胞受体分子等)，涉及细胞粘附(例如ICAM分子)和细胞内信号转导(例如受体分子，如PDGF受体)。本发明适用于所有具有结合区的免疫球蛋白超家族分子。优选地，本发明涉及抗体。
“域(domain)”指保留其三级结构的折叠蛋白结构，该三级结构独立于蛋白的其他部分。通常域是造成蛋白不连续的功能性质的原因，在许多情况下域可能会增加，去除，或转移到其他蛋白而不丧失蛋白剩余部分和/或域的功能。“单抗体可变域”是包括抗体可变域序列特征的折叠多肽域。因此它包括完整的抗体可变域和经修饰的可变域，例如其中一种或多种已被抗体可变域非特征序列所取代的环，或已被截断的或包括N或C端延伸的抗体可变域，以及至少部分保留全长域的结合活性和特异性的可变域折叠片段。
术语“库”指不同变体的集合，例如多肽的变体，其一级结构有差异。本发明所用的文库涵盖了包括至少1000种成员的多肽库。
术语“文库”指异质多肽或核酸的混合物。库由成员组成，每个成员都有单独的多肽或核酸序列。在这层意义上，“文库“与“库”意思是相同的。文库成员间序列差异是造成库多样性的原因。文库可以采用多肽或核酸的简单混合物的形式，也可以是用核酸库进行转化的机体或细胞的形式，例如细菌、病毒、动物或植物细胞等。优选地，每种个体有机体或细胞包含仅一种或有限数量的文库成员。有利的是所述核酸包含在表达载体中，以允许该核酸编码的多肽的表达。因此优选地文库可采用宿主有机体种群的形式，每种有机体包含表达载体的一个或多个拷贝，该表达载体含有核酸形式的文库单个成员，所述核酸能表达生成其相应的多肽成员。因此宿主有机体的种群有可能编码基因多样性多肽变体的大库。
“抗体”(例如IgG、IgM、IgA、IgD或IgE)或片段(如Fab、F(ab’)2、Fv、二硫键连接的Fv、scFv、闭合式构象多特异性抗体、二硫键连接的scFv、双价抗体)不管从任何物种自然产生，由重组DNA技术创造而来，还是从血清、B细胞、杂交瘤、转染瘤、酵母或细菌分离得到都是可以的。
“双特异性配体”是包括本文定义的第一免疫球蛋白单可变域和第二免疫球蛋白单可变域的配体，其中可变域能与通常不被单特异性免疫球蛋白结合的两种不同的抗原或相同抗原上的两种表位结合。例如，所述两种表位可以在相同的半抗原上，但不是相同的表位，或没有接近到能被单特异性配体结合。根据本发明的双特异性配体是由具有不同特异性的可变域组成的，并且不包含相互补的具有相同特异性的可变域对。双特异性配体和制备双特异性配体的合适方法在WO 2004/058821、WO 2004/003019和WO 03/002609中公开，这些已出版的国际申请的全部教导都在此引作参考。
“抗原”是与根据本发明的配体结合的分子。典型地，抗原与抗体配体结合，能提高抗体的体内应答。抗原可以是多肽、蛋白、核酸或其他分子。一般来说，对根据本发明的双特异性配体进行选择以得到特异性针对特定抗原的靶标。至于常规抗体和其片段，由可变的环(L1、L2、L3和H1、H2、H3)定义的抗体结合位点能与抗原结合。
“表位”是与免疫球蛋白VH/VL对常规结合的结构单元。表位指抗体的最小结合位置，因此表现为抗体的特异性靶标。至于单域抗体，表位指与分离的可变域结合的结构单元。
“通用框架”是单抗体框架序列，与Kabat定义的抗体保守序列区(“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，美国卫生和福利部)相对应，或与Chothia and Lesk，(1987)J.Mol.Biol.196：910-917.定义的人种系免疫球蛋白库或结构相对应。本发明提供了单个框架或一套这种框架的用途，已经发现虽然变化仅发生在高可变域，但所述框架允许衍生出几乎所有结合特异性。
“半衰期”指体内配体的血清浓度降低50％所需的时间，例如由于自然机制的配体降解和/或配体清除或多价螯合。本发明的配体通过与抗降解和/或清除或多价螯合的分子结合，在体内稳定，半衰期延长。典型地，此种分子是自然生成的蛋白，其本身在体内半衰期长。与对半衰期增加的分子无特异性的类似配体相比，如果一种配体的功能活性持续更长的一段时间，则其半衰期增加。因此，把对HSA和靶标分子有特异性的配体，和对HSA无特异性，不与HSA结合而与另一分子结合的相同配体，进行比较。例如配体可以与靶标分子上的第二个表位结合。典型地，半衰期增加10％、20％、30％、40％、50％或更多。增加范围为2x、3x、4x、5x、10x、20x、30x、40x、50x或更多倍的半衰期是可能的。或者或此外，增加范围为高达30x、40x、50x、60x、70x、80x、90x、100x、150x或更多倍的半衰期是可能的。
本文提及的术语“竞争”是指当第二表位与其同源表位结合域结合时，第一表位与其同源表位结合域的结合受到抑制。例如结合可受到立体抑制，比如通过结合域的物理阻断，或通过改变结合域的结构或环境，这样结合域对表位的亲和力降低。
氨基酸和核苷酸序列的比对、同源性、相似性或一致性，如本文所定义优选采用BLAST 2序列算法和预设参数(Tatusova，T.A.et al.，FEMS Microbiol Lett，174：187-188(1999))来处理及确认。或者采用BLAST算法(版本2.0)进行序列比对，参数设为预设值。BLAST(Basic Local Alignment Search Tool，基本的局部比对搜索工具)是程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx采用的渐进搜索算法；这些程序的有效性归因于使用Karlin andAltschul，1990，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87(6)：2264-8的统计学方法得到的结果。
本发明涉及与IL-1R1结合，并抑制IL-1(如  IL-1α和/或IL-1β)与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-IR1结合的dAb单体，以及包含此种dAb单体的配体。这种配体和dAb单体可用作治疗剂，治疗炎症、疾病或其他全部或部分由IL-1与IL-1R1结合诱导的生物学功能所介导的疾病(如局部或全身性炎症，炎症介质的产生(如IL-6、I1-8、TNF)，发烧，免疫细胞的激活(如淋巴细胞、中性粒细胞)，厌食症，低血压，白细胞减少，血小板减少)。本发明的配体或dAb单体可与IL-1R1结合，并抑制IL-1R1功能。本发明的配体或dAb单体可与IL-1R1结合，并抑制IL-1R1的功能而不影响内源性IL-1R1抑制途径，如内源性IL-1ra和内源性IL-1R1的结合。因此，这种配体或dAb单体可施用于受试者，以补充抑制体内IL-1R1或IL-1活性的内源性调节途径。此外，与IL-1R1结合，不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的配体或dAb单体作为诊断试剂是有利的，因为它们可用于结合、检测、定量或测量样本中的IL-1R1，并且不会与样本中的IL-1ra竞争与IL-1R1的结合。因此，可以准确测定样本中是否有以及有多少IL-1R1。
与IL-1R1结合，抑制IL-1  (如IL-1α和/或IL-1β)与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的dAb单体，还可以用作研究工具。例如，这样的dAb单体可用于鉴别与IL-1R1结合，但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的物质(如其他dAb、小的有机分子)。在一个说明性的实施例中，在竞争性IL-1R1受体结合检测，例如本文所述的受体结合检测中，检测了一物质或物质集合抑制IL-1和IL-1R1结合的能力。随后在类似的竞争性IL-1R1受体结合检测中，研究了抑制IL-1与IL-1R1结合的物质，以明了其是否会和与IL-1R1结合但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的dAb单体竞争。这样一种检测中的竞争性结合表明，该物质与IL-1R1结合，抑制IL-1与受体结合，但不抑制IL-1ra与受体结合。
与IL-1R1结合的配体和dAb单体
本发明提供包含与IL-1R1结合的dAb的配体(例如包括这种dAb，dAb单体的双特异性配体)，dAb与IL-1R1结合的的Kd为300nM至5pM(即3 x 10-7至5 x 10-12M)，优选50nM至20pM，更优选5nM至200pM，最优选1nM至100pM，例如1 x10-7M或更少，优选1 x 10-8M或更少，更优选1 x 10-9M或更少，有利的是1 x 10-10M或更少，最优选1 x 10-11M或更少；和/或Koff速率常数为5 x 10-1s-1至1 x 10-7s-1，优选1 x 10-2s-1至1 x10-6s-1，更优选5 x 10-3s-1至1 x 10-5s-1，例如5 x 10-1s-1或更少，优选1 x 10-2s-1或更少，有利的是1 x 10-3s-1或更少，更优选1 x 10-4s-1或更少，还更优选1 x 10-5s-1或更少，最优选1 x 10-6s-1或更少，以上由表面等离子体共振测定。
优选地，配体或dAb单体抑制IL-1(即IL-1α和/或IL-1β)与IL-1R1结合，例如在受体结合检测中，半数抑制浓度(IC50)等于或小于约1μM，例如IC50为约500nM至约50pM，优选约100nM至约50pM，更优选约10nM至约100pM，有利的是约1nM至约100pM；例如约50nM或更少，优选约5nM或更少，更优选约500pM或更少，有利的是约200pM或更少，最优选100pM或更少。
优选地，配体或dAb与人IL-1R1结合，抑制人IL-1(即IL-1α和/或IL-1β)与人IL-1R1结合，并抑制与IL-1结合后通过人IL-1R1的信号传导应答。
优选地，配体或dAb单体在标准检测中(如IL-1诱导的MRC-5细胞释放白细胞介素-8，IL-1诱导的全血细胞释放白细胞介素-6)中和(抑制其活性)IL-1或IL-1R1，半数中和量(ND50)少于或等于约1μM，例如ND50约500nM至约50pM，优选约100nM至约50pM，更优选约10nM至约100pM，有利的是约1nM至约100pM；例如约50nM或更少，优选约5nM或更少，更优选约500pM或更少，有利的是约200pM或更少，最优选约100pM或更少。例如，在体内检测中配体或dAb单体可抑制IL-1诱导的(如IL-1α或IL-1β诱导的)MRC-5细胞(ATCC检索号No.CCL-171)释放白细胞介素-8，ND50≤10μM、≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤500pM、≤300pM、≤100pM或≤10pM。在另一实施例中，在体外全血检测中配体或dAb单体可抑制IL-1诱导的(如IL-1α或IL-1β诱导的)白细胞介素-6的释放，ND50≤10μM、≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤1nM、≤500pM、≤300pM、≤100pM或≤10pM。
如本文所述，配体可以是单价的(例如dAb单体)或多价的(例如双特异性的、多特异性的)。在具体实施方案中，配体是与人IL-1R1结合dAb单体，并包含如聚烷撑二醇部分的半衰期延长部分(如本文所述)。
在其他实施方案中，配体是多价的并包含两种或多种与IL-1R1结合的dAb单体。多价的配体可以包含两个或多个与IL-1R1结合的特定dAb拷贝，或包含两种或多种与IL-1R1结合的dAb。例如，如本文所述，配体可以是包括两个或多个与IL-1R1结合的特定dAb拷贝的二聚体、三聚体或多聚体，或可以包括两种或多种与IL-1R1结合的不同dAb。在一些实施例中，配体分别是包括两种或三种与IL-1R1结合的特定dAb拷贝的同型二聚体或同型三聚体。优选地，在标准细胞检测中多价配体基本上不激动IL-1R1(用作IL-1R1激动剂)(即配体浓度为1nM、10nM、100nM、1μM、10μM、100μM、1000μM或5,000μM时，在检测中产生不超过约5％的由IL-1(100pg/ml)诱导，IL-1R1介导的活性)。
在某些实施方案中，多价配体包含两种或多种与IL-1R1所需表位或域结合的dAb。例如多价配体可包括两个或多个和IL-1ra竞争与IL-1R1结合的dAb拷贝。在另一实施例中，多价配体可包括两个或多个不和IL-1ra竞争与IL-1R1结合的dAb拷贝。
在其他实施方案中，多价配体包含两种或多种与IL-1R1的不同表位或域结合的dAb。在一个实施例中，多价配体包括与IL-1R1第一表位结合的第一dAb，和与IL-1R1第二不同表位结合的第二dAb。这种类型的配体可以以高亲和力与IL-1R1结合，并且与其他配体形式如dAb单体相比，对与在其表面高浓度过度表达IL-1R1或表达IL-1R1的细胞结合的选择性更高。
在某些实施方案中，当施用有效量时，本发明的配体或dAb单体在模型疾病(如炎症疾病)中是有效的。一般炎症疾病模型中的有效量为约1mg/kg至约10mg/kg(如约1mg/kg、约2mg/kg、约3mg/kg、约4mg/kg、约5mg/kg、约6mg/kg、约7mg/kg、约8mg/kg、约9mg/kg或约10mg/kg)。本领域技术人员认为本文所述的慢性炎症疾病模型是用于预测对人的疗效的。如本文所述，现有技术没有暗示在这些模型中使用配体或dAb单体，或它们会是有效的。
几种合适的呼吸疾病动物模型为本领域所知，并被本领域技术人员认为是用于预测对人的疗效的。例如合适的呼吸疾病动物模型包括慢性阻塞性肺疾病模型(参见Groneberg，DA et al.，Respiratory Research 5：18(2004))，以及哮喘模型(参见Coffmanet al.，J.Exp.Med.201(12)：1875-1879(2001))。例如配体或dAb单体在香烟烟雾诱导的慢性阻塞性肺部疾病(COPD)小鼠模型中是有效的(参见如Wright JL and Churg A.，Chest 122：301S-306S(2002))。例如与合适的对照相比，使用有效量的配体或dAb单体可减少或延缓COPD症状的出现。
在具体实施方案中，在标准关节炎模型(如炎性关节炎或骨关节炎)中，配体或dAb单体是有效的。几种有效的模型是本领域所知的，例如小鼠胶原诱导的关节炎模型(参见如Juarranz，etal.，Arthritis Research and Therapy，7：R1034-R1045(2005))，  大鼠佐剂诱导的关节炎(参见如Halloran，M.et al.，J.Immunol.，65：7492(1999)，Halloran，M.et al.，Arthritis Rheum.，39：810(1996))，兔实验性骨关节炎(参见如Spriet，et al.Osteoarthritis and Cartilage，13：171-179(2005)，以及几种小鼠骨关节炎模型(参见如Helminen，et al.，Rheumatology，41：848-856(2002))。
例如可通过把Arthrogen-CIA佐剂和Arthrogen-CIA胶原(MD-biosciences公司)的乳剂注射动物，从而在DBA/1小鼠中诱导关节炎。注射约21天后，可施用(如通过腹腔注射)待检测的配体或dAb单体。临床关节炎的分值等级从0到4，可用于测量动物四肢的每个肢体，正常肢体的值设为零，涉及多关节的发炎最严重的肢体设为4。施用有效量的配体或dAb单体可降低小鼠胶原诱导的关节炎模型中四肢关节炎分值总和的平均值，例如与合适的对照相比，四肢关节炎分值总和的平均值可降低约1至约16，约3至约16，约6至约16，约9至约16，或约12至约16，或与合适的对照组相比，可延迟关节炎症状的产生，例如约1天，约2天，约3天，约4天，约5天，约6天，约7天，约10天，约14天，约21天或约28天。在另一实施例中，使用治疗有效量的配体可使标准的小鼠胶原诱导的关节炎模型中四肢关节炎分值总和的平均值为0至约3，约3至约5，约5至约7，约7至约15，约9至约15，约10至约15，约12至约15，或约14至约15。
在其他实施方案中，配体或dAb单体在小鼠  ARE关节炎模型中是有效的(Kontoyiannis et al.，J Exp Med 196：1563-74(2002))。例如与合适的对照相比，施用有效量的配体可降低小鼠ARE关节炎模型中关节炎分值的平均值，例如降低约0.1至约2.5，约0.5至约2.5，约1至约2.5，约1.5至约2.5，或约2至约2.5。在另一实施例中，与合适的对照相比，施用治疗有效量的配体可延迟小鼠  ARE关节炎模型中症状的出现，例如约1天，约2天，约3天，约4天，约5天，约6天，约7天，约10天，约14天，约21天或约28天。在另一实施例中，施用治疗有效量的配体可使小鼠  ARE关节炎模型中关节炎分值的平均值为0至约0.5，约0.5至约1，约1至约1.5，约1.5至约2，或约2至约2.5。
在其他实施方案中，配体或dAb单体在小鼠  ARE炎症性肠病(IBD)模型中是有效的(Kontoyiannis et al.，J Exp Med196：1563-74(2002))。例如与合适的对照相比，施用治疗有效量的配体可降低在小鼠ARE IBD模型中急性和/或慢性炎症分值的平均值，例如降低约0.1至约2.5，约0.5至约2.5，约1至约2.5，约1.5至约2.5，或约2至约2.5。在另一实施例中，与合适的对照相比，施用治疗有效量的配体可延迟小鼠ARE IBD模型中IBD症状的出现，例如延迟约1天，约2天，约3天，约4天，约5天，约6天，约7天，约10天，约14天，约21天或约28天。在另一实施例中，施用治疗有效量的配体可使小鼠  AREIBD模型中急性和/或慢性炎症分值的平均值为1至约0.5，0.5至约1，约1至约1.5，约1.5至约2，或约2至约2.5。
在其他实施方案中，配体或dAb单体在葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠IBD模型中是有效的(参见Okayasu I.et al.，Gastroenterology98：694-702(1990)；  Podolsky K.，J Gasteroenterol.38 suppl XV：63-66(2003))。例如与合适的对照相比，施用治疗有效量的配体可降低小鼠DSS IBD模型中严重程度分值的平均值，例如降低约0.1至约2.5，约0.5至约2.5，约1至约2.5，约1.5至约2.5，或约2至约2.5。在另一实施例中，与合适的对照相比，施用治疗有效量的配体可延迟小鼠DSS IBD模型中IBD症状的出现，例如延迟约1天，约2天，约3天，约4天，约5天，约6天，约7天，约10天，约14天，约21天或约28天。在另一实施例中，施用治疗有效量的配体可使小鼠DSS IBD模型中严重程度分值的平均值为0至约0.5，约0.5至约1，约1至约1.5，约1.5至约2，或约2至约2.5。
在一些实施方案中，所述配体包括一种dAb，其对IL-1R1具有结合特异性，抑制IL-1(如IL-1α和/或IL-1β)和受体的结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合，并与选自下述的dAb竞争与IL-1R1的结合：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ IDNO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ IDNO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ ID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ IDNO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ ID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ ID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ IDNO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ ID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)和DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)。
在一些实施方案中，配体包括一种dAb，其能与IL-1R特异性结合，抑制IL-1(即IL-1α和/或IL-1β)和受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合，并包含氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述的氨基酸序列或dAb具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％的氨基酸序列一致性：DOM4-122-23(SEQ IDNO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ IDNO：95)、DOM4-122-1(SEQ ID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ IDNO：97)、DOM4-122-3(SEQ ID NO：98)、DOM4-122-4(SEQ IDNO：99)、DOM4-122-5(SEQ ID NO：100)、DOM4-122-6(SEQ IDNO：101)、DOM4-122-7(SEQ ID NO：102)、DOM4-122-8(SEQ IDNO：103)、DOM4-122-9(SEQ ID NO：104)、DOM4-122-10(SEQ IDNO：105)、DOM4-122-11(SEQ ID NO：106)、DOM4-122-12(SEQID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ IDNO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ ID NO：126)、DOM4-122-34(SEQ IDNO：127)、DOM4-122-35(SEQ ID NO：128)、DOM4-122-36(SEQID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ IDNO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ ID NO：148)、DOM4-122-57(SEQ IDNO：149)、DOM4-122-58(SEQ ID NO：150)、DOM4-122-59(SEQID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ ID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ IDNO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)和DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)。
在一些实施方案中，配体包括一种dAb，其与IL-1R1结合，并与本文所述的任何dAb竞争与IL-1R1(如人IL-1R1)的结合。
在优选的实施方案中，配体包括选自下述的dAb单体：DOM4-122-23和DOM4-122-24。例如配体可以是任何这些dAb的单体，或异型或同型二聚体，三聚体或寡聚物。如果需要，配体可进一步包括半衰期延长的部分，如聚乙二醇部分。在一些实施例中，所述配体包括选自下述的dAb单体：DOM4-122-23和DOM4-122-24，以及与血清白蛋白结合的dAb单体。例如，配体可以是包括DOM4-122-23和DOM7h-8，或DOM4-122-24和DOM7h-8的双特异性配体。
dAb单体可以包括任何合适的免疫球蛋白可变域，优选包括人可变域或包括人框架区的可变域。在某些实施方案中，dAb单体包括如本文所述的通用框架。
所述通用框架可以是VL框架(Vλ或Vκ)，例如包括由人种系DPK1、DPK2、DPK3、DPK4、DPK5、DPK6、DPK7、DPK8、DPK9、DPK10、DPK12、DPK13、DPK15、DPK16、DPK18、DPK19、DPK20、DPK21、DPK22、DPK23、DPK24、DPK25、DPK26或DPK 28免疫球蛋白基因片段编码的框架氨基酸序列的框架。如果需要，所述VL框架可进一步包括由人种系Jκ1、Jκ2、Jκ3、Jκ4或Jκ5免疫球蛋白基因片段编码的框架氨基酸序列。
在其他实施方案中，所述通用框架可以是VL框架(Vλ或Vκ)，例如包括由人种系DP4、DP7、DP8、DP9、DP10、DP31、DP33、DP38、DP45、DP46、DP47、DP49、DP50、DP51、DP53、DP54、DP65、DP66、DP67、DP68或DP69免疫球蛋白基因片段编码的框架氨基酸序列的框架。如果需要，所述VL框架可进一步包括由人种系JH1、JH2、JH3、JH4、JH4b、JH5和JH6免疫球蛋白基因片段编码的框架氨基酸序列。
在某些实施方案中，所述dAb单体包括一种或多种框架区，其包含与由人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同的氨基酸序列，或相对于由人种系抗体基因片段编码的所述相应框架区氨基酸序列，一种或多种所述框架区的氨基酸序列总共包含最高达5个氨基酸的差异。
在其他实施方案中，所述dAb单体的FW1、FW2、FW3和FW4的氨基酸序列与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同，或相对于由所述人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列，FW1、FW2、FW3和FW4的氨基酸序列总共包含最高达10个氨基酸的差异。
在其他实施方案中，所述dAb单体包括FW1、FW2和FW3区，所述FW1、FW2和FW3区的氨基酸序列与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同。
在具体实施方案中，所述dAb单体配体包括DPK9 VL框架，或选自DP47、DP45和DP38的VH框架。所述dAb单体可包括如蛋白A、蛋白L和蛋白G的通用性配体的结合位点。
在某些实施方案中，所述配体或dAb单体实质上是抗聚集的。例如在一些实施方案中，当在常规用于药物制剂的溶剂如盐水、缓冲液、柠檬酸缓冲液、水、乳液，以及任何这些溶剂与如FDA批准的赋形剂中的1-5mg/ml、5-10mg/ml、10-20mg/ml、20-50mg/ml、50-100mg/ml、100-200mg/ml或200-500mg/ml的配体或dAb溶液，在约22℃，22-25℃，25-30℃，30-37℃，37-40℃，40-50℃，50-60℃，60-70℃，70-80℃，15-20℃，10-15℃，5-10℃，2-5℃，0-2℃，-10℃至0℃，-20℃至-10℃，-40℃至-20℃，-60℃至-40℃，或-80℃至-60℃下，维持约一段时间如10分钟、1小时、8小时、24小时、2天、3天、4天、1周、2周、3周、1个月、2个月、3个月、4个月、6个月、1年或2年时，少于约10％，少于约9％，少于约8％，少于约7％，少于约6％，少于约5％，少于约4％，少于约3％，少于约2％或少于约1％的所述配体或dAb单体聚集。
可以使用任何合适的方法评定聚集，如通过显微镜检查，肉眼观察或光谱法或任何其他合适的方法评估浊度。优选地，通过动态光散射评定聚集。抗聚集的配体或dAb单体有几处优点。例如，作为通过使用合适的如大肠杆菌的生物制备体系表达的可溶性蛋白，这种配体或dAb单体可以容易地大量制得，与常规的多肽相比还可以在更高浓度下制成制剂和/或存储，聚集现象和活性损失都更少。此外，抗聚集的配体或dAb单体比其他的抗原或表位结合的多肽(如常规抗体)制备更经济。例如，一般来说打算用于体内的抗原或表位结合多肽的制备包括去除聚集多肽的方法(如凝胶过滤法)。无法去除此种聚集体可导致出现不适合体内应用的制品，因为例如打算用作拮抗剂的抗原结合多肽的聚集体可通过诱导靶抗原的交联或聚集成簇而表现出激动剂的作用。蛋白聚集体还可以通过诱导受试者对其被施用物质的免疫应答，降低治疗多肽的疗效。
相比之下，可以制备本发明的抗聚集配体或dAb单体进行体内应用，无需包括去除聚集体的方法步骤，还可体外使用，而没有多肽聚集体造成的上述不利之处。
在一些实施方案中，当温度加热到Ts并冷却Tc时，所述配体或dAb单体可逆地解折叠，其中Ts高于dAb的熔点，Tc低于dAb的熔点。例如当温度加热到80℃并冷却到约室温时，所述dAb单体可逆地解折叠。可逆地解折叠的多肽，解折叠时丧失功能，但重折叠后重获功能。这种多肽与解折叠时聚集的多肽或非正确重折叠的多肽(错误折叠的多肽)不同，即解折叠时聚集的多肽或非正确重折叠的多肽无法重获功能。
可对多肽解折叠或重折叠进行评定，例如采用任何合适的方法直接或间接地检测多肽结构。例如，检测多肽结构可通过圆二色性(CD)(即远紫外CD，近紫外CD)，荧光(如色氨酸侧链的荧光)，对蛋白水解的易感性，核磁共振(NMR)，或通过检测或测量依赖于正确折叠的多肽的功能(例如与靶配体结合，与通用性配体结合)。在一个实施例中，多肽解折叠是采用功能分析来评定的，在所述功能分析中结合功能的丧失(即结合通用型和/或靶配体，结合底物)表明多肽是解折叠的。
配体或dAb单体解折叠和重折叠的程度可采用解折叠或热变性曲线来确定。以温度为纵坐标，折叠多肽的相对浓度为横坐标作图可得解折叠曲线。折叠配体或dAb单体的相对浓度可使用任何合适的方法(例如CD、荧光、结合分析)直接或间接地确定。例如可制备配体或dAb单体溶液，用CD确定溶液的椭圆度。得到的椭圆度值代表折叠配体或dAb单体的百分比相对浓度。溶液中的配体或dAb单体随后通过逐渐升高溶液温度而解折叠，在合适的增量处可确定椭圆度(例如每次升高一度后)。然后溶液中配体或dAb单体通过逐渐降低溶液温度而重折叠，在合适的增量处确定椭圆度。用数据可绘制出解折叠曲线和重折叠曲线。解折叠和重折叠曲线是典型的S型，包括其中配体或dAb单体分子折叠的部分，其中配体或dAb单体分子不同程度解折叠的解折叠/重折叠转变，以及其中配体或单体分子解折叠的部分。重折叠曲线在Y轴的截距是复性的重折叠配体或dAb单体的相对量。复性率至少约50％，或至少约60％，或至少约70％，或至少约75％，或至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％，表明该配体或dAb单体可逆地解折叠。
在优选实施例中，所述配体或dAb单体解折叠的可逆性通过制备配体或dAb单体溶液并绘制热解折叠和重折叠曲线来确定。所述配体或dAb单体溶液可在任何合适的溶剂中制备，如其pH适合配体或dAb溶解的水溶液缓冲液(如高于或低于等电点(pI)三个单位的pH值)。所述配体或dAb单体溶液要浓到足以检测解折叠/折叠。例如，所述配体或dAb溶液可以是约0.1μM至约100μM，或优选约1μM至约10μM。
如果所述配体或dAb单体的熔点(Tm)已知，则溶液可加热至约低于Tm 10度(Tm-10)，通过椭圆度或荧光评定折叠(如200nm-250nm远紫外CD扫描，CD波长固定在235nm或225nm；色氨酸的荧光发射光谱在300至450nm，激发波长298nm)，以提供折叠的配体或dAb单体的相对百分比。溶液随后以预定增量被加热到至少高出Tm10度(Tm+10)(如增加约0.1至约1度)，在每个增量处测定椭圆度或荧光。然后所述配体或dAb单体按预定增量冷却到至少Tm-10进行重折叠，在每个增量处测定椭圆度或荧光。如果所述配体或dAb单体的熔点未知，溶液可通过从约25℃逐渐加热至约100℃而解折叠，然后逐渐冷却至至少约25℃而重折叠，在每次加热或冷却的增量处测定椭圆度或荧光。获得的数据可绘制解折叠曲线和重折叠曲线，其中重折叠曲线在Y轴上的截距是复性的重折叠蛋白的相对量。在一些实施方案中，所述dAb单体不包括驼类(Camelid)免疫球蛋白可变域，或一种或多种驼类(Camelid)种系抗体基因片段编码的免疫球蛋白可变域独有的框架氨基酸。
优选地，当在大肠杆菌(E.coli)或毕赤酵母菌种(如巴斯德毕赤酵母(P.pastoris))中表达时，所述配体或  dAb单体分泌量至少约0.5mg/L。在其他优选实施方案中，当在大肠杆菌或毕赤酵母菌种(如巴斯德毕赤酵母)中表达时，所述dAb单体分泌量为至少约0.75mg/L，至少约1mg/L，至少约4mg/L，至少约5mg/L，至少约10mg/L，至少约15mg/L，至少约20mg/L，至少约25mg/L，至少约30mg/L，至少约35mg/L，至少约40mg/L，至少约45mg/L，或至少约50mg/L，或至少约100mg/L，或至少约200mg/L，或至少约300mg/L，或至少约400mg/L，或至少约500mg/L，或至少约600mg/L，或至少约700mg/L，或至少约800mg/L，至少约900mg/L，或至少约1g/L。在其他优选实施方案中，当在大肠杆菌或毕赤酵母菌种(如巴斯德毕赤酵母)中表达时，所述dAb单体的分泌量至少约1mg/L到至少约1g/L，至少约1mg/L到至少约750mg/L，至少约100mg/L到至少约1g/L，至少约200mg/L到至少约1g/L，至少约300mg/L到至少约1g/L，至少约400mg/L到至少约1g/L，至少约500mg/L到至少约1g/L，至少约600mg/L到至少约1g/L，至少约700mg/L到至少约1g/L，至少约800mg/L到至少约1g/L，或至少约900mg/L到至少约1g/L。虽然当在大肠杆菌或毕赤酵母菌种(如巴斯德毕赤酵母)中表达时，本文所述的配体或dAb单体是可被分泌的，但它们还可使用任何合适的方法制备，如化学合成方法或不采用大肠杆菌或毕赤酵母菌种的生物制备方法。
与血清白蛋白结合的dAb单体
本发明的配体包括与血清白蛋白(SA)结合的dAb单体，Kd为1nM至500μM(即 x 10-9至5 x 10-4)，优选100nM至10μM。优选地，对于包括第一抗SA的dAb和抗另一靶标的第二dAb的双特异性配体，第二dAb对其靶标的亲和力(例如用BiaCore的表面等离子共振测量的Kd和/或Koff)是第一dAb对SA亲和力的1至100000倍(优选100至100000，更优选1000至100000，或10000至100000倍)。例如，第一dAb与SA结合的亲和力约为10μM，而第二dAb与其靶标结合的亲和力为100pM。优选地，血清白蛋白是人血清白蛋白(HSA)。在一个实施方案中，所述第一dAb(或dAb单体)与SA(即HSA)结合的Kd约为50，优选70，更优选100、150或200nM。
在某些实施方案中，与SA结合的所述dAb单体抗聚集，可逆解折叠和/或包括与IL-1R1结合的dAb单体的上述框架区。
在特定实施方案中，与血清白蛋白结合的抗体的抗原结合片段是与血清白蛋白结合的dAb。在某些实施方案中，该dAb与人血清白蛋白结合，并与选自下述的dAb竞争与白蛋白结合：DOM7m-16(SEQ ID NO：723)、DOM7m-12(SEQ ID NO：724)、DOM7m-26(SEQ ID NO：725)、DOM7r-1(SEQ ID NO：726)、DOM7r-3(SEQ ID NO：727)、DOM7r-4(SEQ ID NO：728)、DOM7r-5(SEQ ID NO：729)、DOM7r-7(SEQ ID NO：730)、DOM7r-8(SEQID NO：731)、DOM7h-2(SEQ ID NO：732)、DOM7h-3(SEQ IDNO：733)、DOM7h-4(SEQ ID NO：734)、DOM7h-6(SEQ IDNO：735)、DOM7h-1(SEQ ID NO：736)、DOM7h-7(SEQ IDNO：737)、DOM7h-8(SEQ ID NO：746)、DOM7r-13(SEQ IDNO：747)、DOM7r-14(SEQ ID NO：748)、DOM7h-22(SEQ IDNO：739)、DOM7h-23(SEQ ID NO：740)、DOM7h-24(SEQ IDNO：741)、DOM7h-25(SEQ ID NO：742)、DOM7h-26(SEQ IDNO：743)、DOM7h-21(SEQ ID NO：744)、DOM7h-27(SEQ IDNO：745)、DOM7r-15(SEQ ID NO：749)、DOM7r-16(SEQ IDNO：750)、DOM7r-17(SEQ ID NO：751)、DOM7r-18(SEQ IDNO：752)、DOM7r-19(SEQ ID NO：753)、DOM7r-20(SEQ IDNO：754)、DOM7r-21(SEQ ID NO：755)、DOM7r-22(SEQ IDNO：756)、DOM7r-23(SEQ ID NO：757)、DOM7r-24(SEQ IDNO：758)、DOM7r-25(SEQ ID NO：759)、DOM7r-26(SEQ IDNO：760)、DOM7r-27(SEQ ID NO：761)、DOM7r-28(SEQ IDNO：762)、DOM7r-29(SEQ ID NO：763)、DOM7r-30(SEQ IDNO：764)、DOM7r-31(SEQ ID NO：765)、DOM7r-32(SEQ IDNO：766)和DOM7r-33(SEQ ID NO：767)。
在某些实施方案中，dAb与人血清白蛋白结合，并包含氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述dAb的氨基酸序列具有至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％的氨基酸序列一致性：DOM7m-16(SEQ ID NO：723)、DOM7m-12(SEQ IDNO：724)、DOM7m-26(SEQ ID NO：725)、DOM7r-1(SEQ IDNO：726)、DOM7r-3(SEQ ID NO：727)、DOM7r-4(SEQ IDNO：728)、DOM7r-5(SEQ ID NO：729)、DOM7r-7(SEQ IDNO：730)、DOM7r-8(SEQ ID NO：731)、DOM7h-2(SEQ IDNO：732)、DOM7h-3(SEQ ID NO：733)、DOM7h-4(SEQ IDNO：734)、DOM7h-6(SEQ ID NO：735)、DOM7h-1(SEQ IDNO：736)、DOM7h-7(SEQ ID NO：737)、DOM7h-8(SEQ IDNO：746)、DOM7r-13(SEQ ID NO：747)、DOM7r-14(SEQ IDNO：748)、DOM7h-22(SEQ ID NO：739)、DOM7h-23(SEQ IDNO：740)、DOM7h-24(SEQ ID NO：741)、DOM7h-25(SEQ IDNO：742)、DOM7h-26(SEQ ID NO：743)、DOM7h-21(SEQ IDNO：744)、DOM7h-27(SEQ ID NO：745)、DOM7r-15(SEQ IDNO：749)、DOM7r-16(SEQ ID NO：750)、DOM7r-17(SEQ IDNO：751)、DOM7r-18(SEQ ID NO：752)、DOM7r-19(SEQ IDNO：753)、DOM7r-20(SEQ ID NO：754)、DOM7r-21(SEQ IDNO：755)、DOM7r-22(SEQ ID NO：756)、DOM7r-23(SEQ IDNO：757)、DOM7r-24(SEQ ID NO：758)、DOM7r-25(SEQ IDNO：759)、DOM7r-26(SEQ ID NO：760)、DOM7r-27(SEQ IDNO：761)、DOM7r-28(SEQ ID NO：762)、DOM7r-29(SEQ IDNO：763)、DOM7r-30(SEQ ID NO：764)、DOM7r-31(SEQ IDNO：765)、DOM7r-32(SEQ ID NO：766)和DOM7r-33(SEQ IDNO：767)。
例如，与人血清白蛋白结合的所述dAb可包含氨基酸序列，该氨基酸序列与下述序列具有至少约90％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％的氨基酸序列一致性：DOM7h-2(SEQ ID NO：732)、DOM7h-3(SEQ IDNO：733)、DOM7h-4(SEQ ID NO：734)、DOM7h-6(SEQ IDNO：735)、DOM7h-1(SEQ ID NO：736)、DOM7h-7(SEQ IDNO：737)、DOM7h-8(SEQ ID NO：746)、DOM7r-13(SEQ IDNO：747)、DOM7r-14(SEQ ID NO：748)、DOM7h-22(SEQ IDNO：739)、DOM7h-23(SEQ ID NO：740)、DOM7h-24(SEQ IDNO：741)、DOM7h-25(SEQ ID NO：742)、DOM7h-26(SEQ IDNO：743)、DOM7h-21(SEQ ID NO：744)和DOM7h-27(SEQ IDNO：745)。
氨基酸序列的一致性优选采用合适的序列比对算法和预设参数进行测定，例如BLAST P(Karlin and Altschul，Proc.Natl.Acad.i.USA 87(6)：2264-2268(1990))。
在进一步具体实施方案中，所述dAb是与人血清白蛋白结合，并具有选自下述的氨基酸序列的Vκ dAb：DOM7h-2(SEQ IDNO：732)、DOM7h-3(SEQ ID NO：733)、DOM7h-4(SEQ IDNO：734)、DOM7h-6(SEQ ID NO：735)、DOM7h-1(SEQ IDNO：736)、DOM7h-7(SEQ ID NO：737)、DOM7h-8(SEQ IDNO：746)、DOM7r-13(SEQ ID NO：747)和DOM7r-14(SEQ IDNO：748)，或是具有选自下述氨基酸序列的VH dAb：DOM7h-22(SEQ ID NO：739)、DOM7h-23(SEQ ID NO：740)、DOM7h-24(SEQ ID NO：741)、DOM7h-25(SEQ ID NO：742)、DOM7h-26(SEQ ID NO：743)、DOM7h-21(SEQ ID NO：744)和DOM7h-27(SEQ ID NO：745)。在其他实施方案中，与血清白蛋白结合的抗体的抗原结合片段是与人血清白蛋白结合，并包括任何前述氨基酸序列的CDRs的dAb。
合适的与血清白蛋白结合的驼类(Camelid)VHH包括在WO 2004/041862(Ablynx N.V.)和本文(SEQ ID NOS：768-784)公开的那些。在某些实施方案中，驼类(Camelid)VHH与人血清白蛋白结合，并包含氨基酸序列，该氨基酸序列与下述序列具有至少约80％，或至少约85％，或至少约90％，或至少约95％，或至少约96％，或至少约97％，或至少约98％，或至少约99％的氨基酸序列一致性：SEQ ID NO：768、SEQ ID NO：769、SEQ IDNO：770、SEQ ID NO：771、SEQ ID NO：772、SEQ ID NO：773、SEQ ID NO：774、SEQ ID NO：775、SEQ ID NO：776、SEQ IDNO：777、SEQ ID NO：778、SEQ ID NO：779、SEQ ID NO：780、SEQ ID NO：781、SEQ ID NO：782、SEQ ID NO：783或SEQ IDNO：784。氨基酸序列的一致性优选采用合适的序列比对算法和预设参数进行测定，例如BLAST P(Karlin and Altschul，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87(6)：2264-2268(1990))。
在一些实施方案中，所述配体包括抗血清白蛋白的dAb，该dAb与本文公开的任何抗血清白蛋白dAb竞争与血清白蛋白(例如人血清白蛋白)的结合。
与肿瘤坏死因子受体1(TNFR1)结合的dAb单体
本发明的配体可以包括与TNFR1结合的dAb单体。TNFR1是跨膜受体，其含有与配体结合的胞外区，以及缺乏内在信号转导活性但可与信号转导分子结合的胞内区。TNFR1与相结合的TNF的复合体含有三条TNFR1链和三条TNF链(Banner et al.，Cell，73(3)431-445(1993).)。该TNF配体是与三种TNFR1链连接的三聚体。(Id.)在所述受体-配体复合体中所述三条INFR1链紧密簇生在一起，此聚集成簇是TNFR1介导的信号传导的前提条件。实际上，与TNFR1结合的多价物质如抗TNFR1抗体，在没有TNF时可诱导TNFR1聚集成簇和信号传导，并作为TNFR1激动剂广泛使用(参见如Belka et al.，EMBO，14(6)：1156-1165(1995)；Mandik-Nayak et al.，J.Immunol，167：1920-1928(2001).)。因此，与TNFR1结合的多价物质一般不是TNFR1的有效拮抗剂，即便其阻断TNFα和TNFR1的结合。
TNFR1的胞外区包括一种十三个氨基酸的氨基末端片段(SEQ ID NO：996(人)的1-13个氨基酸；SEQ ID NO：997(小鼠)的氨基酸1-13)，域1(SEQ ID NO：996(人)的氨基酸14-53；SEQ ID NO：997(小鼠)的氨基酸14-53)，域2(SEQ IDNO：996(人)的氨基酸54-97；SEQ ID NO：997(小鼠)的氨基酸54-97)，域3(SEQ ID NO：996(人)的氨基酸98-138；SEQID NO：997(小鼠)的氨基酸98-138)，以及域4(SEQ IDNO：996(人)的氨基酸139-167；SEQ ID NO：997(小鼠)的氨基酸139-167)，域4后面是近膜区(SEQ ID NO：996(人)的氨基酸168-182；SEQ ID NO：997(小鼠)的氨基酸168-183)的(参见Banner et al.，Cell 73(3)431-445(1993)和Loetscher et al.，Cell 61(2)351-359(1990).)。域2和3与连接的配体(TNFβ、TNFα)接触(Banner et al.，Cell，73(3)431-445(1993).)。TNFR1的细胞外区域还包含一种域，其被称为配体组装前结构域或PLAD域(SEQ ID NO：996(人)的氨基酸1-53；SEQ IDNO：997(小鼠)的氨基酸1-53)(美国政府，WO 01/58953；Deng et al.，Nature Medicine，doi：10.1038/nm1304(2005))。
通过包括域4内或近膜区内TNFR1(分别为SEQ ID NO：213的氨基酸168-182，SEQ ID NO：215的氨基酸168-183)水解的方法，TNFR1从体内细胞表面脱落，生成可溶形式的TNFR1。可溶的TNFR1保留了与TNFα结合的能力，并因此也保留了作为TNFα活性内源性抑制剂的功能。
人TNFR1的胞外区有以下氨基酸序列：LVPHLGDREKRDSVCPQGKYIHPQNNSICCTKCHKGTYLYNDCPGPGQDTDCRECESGSFTASENHLRHCLSCSKCRKEMGQVEISSCTVDRDTVCGCRKNQYRHYWSENLFQCFNCSLCLNGTVHLSCQEKQNTVCTCHAGFFLRENECVSCSNCKKSLECTKLCLPQIENVKGTEDSGTT(SEQ ID NO：996)。
鼠(小鼠)TNFR1的胞外区有以下氨基酸序列：LVPSLGDREKRDSLCPQGKYVHSKNNSICCTKCHKGTYLVSDCPSPGRDTVCRECEKGTFTASQNYLRQCLSCKTCRKEMSQVEISPCQADKDTVCGCKENQFQRYLSETHFQCVDCSPCFNGTVTIPCKETQNTVCNCHAGFFLRESECVPCSHCKKNEECMKLCLPPPLANVTNPQDSGTA(SEQ ID NO：997)。
适合在本发明中使用的抗TNFR1 dAb(例如本文所述的配体)可特异性结合肿瘤坏死因子受体1(TNFR1；p55；CD120a)。优选地，TNFR1的拮抗剂对肿瘤坏死因子2(TNFR2)没有结合特异性，或基本上不拮抗TNER2。在标准细胞检测中当拮抗剂(1nM、10nM、100nM、1μM、10μM或100μM)对TNFα(100pg/ml)诱导的TNFR2介导的活性的抑制不超过5％时，TNFR1的拮抗剂基本上不拮抗TNFR2。在某些实施方案中，与TNFR1结合的所述dAb单体抗聚集，可逆地解折叠和/或包括与IL-1R1结合的dAb单体的上述框架区。
合适的抗TNFR1 dAb和包括这样的dAb的配体不诱导可导致受体激活和信号转导的TNFR1在细胞表面的交联或聚集成簇。在具体实施方案中，所述配体包括与TNFR1的域1结合的抗TNFR1的dAb。在进一步具体实施方案中，所述配体包括与TNFR1的域1结合的抗TNFR1的dAb，并与TAR2m-21-23竞争与小鼠TNFR1的结合或与TAR2h-205竞争与人TNFR1的结合。
在某些实施方案中，抗TNFR1的dAb与TNFR1的域2和/或域3结合。在具体实施方案中，抗TNFR1的dAb与TAR2h-10-27、TAR2h-131-8、TAR2h-15-8、TAR2h-35-4、TAR2h-154-7、TAR2h-154-10或TAR2h-185-25竞争和TNFR1(如人和/或小鼠TNFR1)的结合。
优选地，适于在本发明所述配体中使用的抗TNFR1的dAb单体与TNFR1结合，Kd为300nM至5pM(即3 x 10-7至5 x 10-12M)，优选50nM至20pM，更优选5nM至200pM，最优选1nM至100pM，例如1 x 10-7M或更少，优选1 x 10-8M或更少，更优选1 x 10-9M或更少，有利的是1 x 10-10M或更少，最优选1x 10-11M或更少；和/或Koff速率常数为5 x 10-1s-1至1 x 10-7s-1，优选1 x 10-2s-1至1 x 10-6s-1，更优选5 x 10-3s-1至1 x 10-5s-1，例如5 x 10-1s-1或更少，优选1 x 10-2s-1或更少，有利的是1 x 10-3s-1或更少，更优选1 x 10-4s-1或更少，还更优选1 x 10-5s-1或更少，最优选1 x 10-6s-1或更少，以上由表面等离子共振测定。(Kd＝Koff/Kon)。适于在本发明中使用的某些抗TNFR1的dAb单体与人TNFR1特异性地结合，表面等离子共振测定Kd为50nM至20pM，Koff速率常数为5 x 10-1s-1至1 x 10-7s-1。
一些抗TNFR1的dAb单体抑制TNFα和TNFR1的结合。例如一些抗TNFR1的dAb单体抑制TNFα和TNFR1的结合，半数抑制浓度(IC50)为500nM至50pM，优选100nM至50pM，更优选10nM至100pM，有利的是1nM至100pM；例如50nM或更少，优选5nM或更少，更优选500pM或更少，有利的是200pM或更少，最优选100pM或更少。优选地，TNFR1是人TNFR1。
其他抗TNFR1的dAb单体不抑制TNFα和TNFR1的结合，但抑制TNFR1介导的信号传导。例如抗TNFR1的dAb单体可以抑制TNFα诱导的TNFR1聚集成簇，TNFR1聚集成簇可引发TNFR1介导的信号传导。例如某些抗TNFR1的dAb单体可结合TNFR1，并抑制TNFR1介导的信号传导，但基本上不抑制TNFα和TNFR1的结合。例如，抗TNFR1的dAb单体抑制TNFα诱导的TNFR1在细胞表面的交联或聚集成簇。这样的dAb(例如本文所述的TAR2m-21-23)是有利的，因为它们可以拮抗细胞表面的TNFR1，但基本上不减少内源性可溶TNFR1的抑制活性。例如抗TNFR1的dAb可以结合TNFR1，但在受体结合检测中抑制TNFα和TNFR1的结合不超过约10％，不超过约5％，不超过约4％，不超过约3％，不超过约2％，或不超过约1％。而且在这些实施方案中，在标准细胞检测中抗TNFR1的dAb抑制TNFα诱导的TNFR1的交联和/或TNFR1介导的信号传导至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％，至少约95％，或至少约99％。因此，将包括这种dAb单体的配体施用于对其有需要的哺乳动物，能补充抑制TNFα和TNFR1体内活性的内源性调节途径。
优选地，在标准检测(如本文所述的标准L929或标准HeLaIL-8检测)中，所述配体或dAb单体中和(抑制其活性)TNFR1，半数中和量(ND50)为500nM至50pM，优选100nM至50pM，更优选10nM至100pM，有利的是1nM至100pM；例如50nM或更少，优选5nM或更少，更优选500pM或更少，有利的是200pM或更少，最有利的是100pM或更少。在其他实施方案中，在标准细胞检测中(如本文所述的标准L929或标准HeLa IL-8检测)所述抗TNFR1的dAb单体与TNFRI结合并拮抗TNFR1的活性，ND50≤100nM，在检测中浓度≤10μM时，dAb激发TNFR1的活性≤5％。
在其他实施方案中，所述抗TNFR1的dAb单体对TNFR1具有结合特异性，Kd如本文所述，并抑制标准小鼠LPS/D-半乳糖胺诱导的感染性休克模型中的致死率(即与合适的对照相比，防止或减低致死率至少约10％)。优选地，当给药量为约5mg/kg或更优选约1mg/kg时，在标准小鼠LPS/D-半乳糖胺诱导的感染性休克模型中，与合适的对照相比，抗TNFR1的dAb单体抑制致死率至少约25％，或至少约50％)。
在具体实施方案中，在标准细胞检测，如本文所述的标准L929或标准HeLa IL-8检测中，本发明的抗TNFR1的dAb单体和包括此种dAb单体的配体基本上不激动TNFR1(用作TNFR1激动剂)(即在检测中当浓度为1nM、10nM、100nM、1μM、10μM、100μM、1000μM或5,000μM时，TNFα(100pg/ml)诱导的TNFR1介导的活性不超过5％)。
在其他实施方案中，所述配体包括与肿瘤坏死因子受体1(TNFR1、p55、CD120a)特异性结合的域抗体(dAb)单体，Kd为300nM至5pM，并包含氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与选自下列的氨基酸序列或dAb同源：TAR2h-12(SEQ ID NO：785)、TAR2h-13(SEQ ID NO：786)、TAR2h-14(SEQ ID NO：787)、TAR2h-16(SEQ ID NO：788)、TAR2h-17(SEQ ID NO：789)、TAR2h-18(SEQ ID NO：790)、TAR2h-19(SEQ ID NO：791)、TAR2h-20(SEQ ID NO：792)、TAR2h-21(SEQ ID NO：793)、TAR2h-22(SEQ ID NO：794)、TAR2h-23(SEQ ID NO：795)、TAR2h-24(SEQ ID NO：796)、TAR2h-25(SEQ ID NO：797)、TAR2h-26(SEQ ID NO：798)、TAR2h-27(SEQ ID NO：799)、TAR2h-29(SEQ ID NO：800)、TAR2h-30(SEQ ID NO：801)、TAR2h-32(SEQ ID NO：802)、TAR2h-33(SEQ ID NO：803)、TAR2h-10-1(SEQ ID NO：804)、TAR2h-10-2(SEQ ID NO：805)、TAR2h-10-3(SEQ ID NO：806)、TAR2h-10-4(SEQ ID NO：807)、TAR2h-10-5(SEQ ID NO：808)、TAR2h-10-6(SEQ ID NO：809)、TAR2h-10-7(SEQ ID NO：810)、TAR2h-10-8(SEQ ID NO：811)、TAR2h-10-9(SEQ ID NO：812)、TAR2h-10-10(SEQ ID NO：813)、TAR2h-10-11(SEQ ID NO：814)、TAR2h-10-12(SEQ ID NO：815)、TAR2h-10-13(SEQ ID NO：816)、TAR2h-10-14(SEQ ID NO：817)、TAR2h-10-15(SEQ ID NO：818)、TAR2h-10-16(SEQ ID NO：819)、TAR2h-10-17(SEQ ID NO：820)、TAR2h-10-18(SEQ ID NO：821)、TAR2h-10-19(SEQ ID NO：822)、TAR2h-10-20(SEQ ID NO：823)、TAR2h-10-21(SEQ ID NO：824)、TAR2h-10-22(SEQ ID NO：825)、TAR2h-10-27(SEQ ID NO：826)、TAR2h-10-29(SEQ ID NO：827)、TAR2h-10-31(SEQ ID NO：828)、TAR2h-10-35(SEQ ID NO：829)、TAR2h-10-36(SEQ ID NO：830)、TAR2h-10-37(SEQ ID NO：831)、TAR2h-10-38(SEQ ID NO：832)、TAR2h-10-45(SEQ ID NO：833)、TAR2h-10-47(SEQ ID NO：834)、TAR2h-10-48(SEQ ID NO：835)、TAR2h-10-57(SEQ ID NO：836)、TAR2h-10-56SEQ ID NO：837)、TAR2h-10-58(SEQ ID NO：838)、TAR2h-10-66(SEQ ID NO：839)、TAR2h-10-64(SEQ ID NO：840)、TAR2h-10-65(SEQ ID NO：841)、TAR2h-10-68(SEQ ID NO：842)、TAR2h-10-69(SEQ ID NO：843)、TAR2h-10-67(SEQ ID NO：844)、TAR2h-10-61(SEQ ID NO：845)、TAR2h-10-62(SEQ ID NO：846)、TAR2h-10-63(SEQ ID NO：847)、TAR2h-10-60(SEQ ID NO：848)、TAR2h-10-55(SEQ ID NO：849)、TAR2h-10-59(SEQ ID NO：850)、TAR2h-10-70(SEQ ID NO：851)、TAR2h-34(SEQ ID NO：852)、TAR2h-35(SEQ ID NO：853)、TAR2h-36(SEQ ID NO：854)、TAR2h-37(SEQ ID NO：855)、TAR2h-38(SEQ ID NO：856)、TAR2h-39(SEQ ID NO：857)、TAR2h-40(SEQ ID NO：858)、TAR2h-41(SEQ ID NO：859)、TAR2h-42(SEQ ID NO：860)、TAR2h-43(SEQ ID NO：861)、TAR2h-44(SEQ ID NO：862)、TAR2h-45(SEQ ID NO：863)、TAR2h-47(SEQ ID NO：864)、TAR2h-48(SEQ ID NO：865)、TAR2h-50(SEQ ID NO：866)、TAR2h-51(SEQ ID NO：867)、TAR2h-66(SEQ ID NO：868)、TAR2h-67(SEQ ID NO：869)、TAR2h-68(SEQ ID NO：870)、TAR2h-70(SEQ ID NO：871)、TAR2h-71(SEQ ID NO：872)、TAR2h-72(SEQ ID NO：873)、TAR2h-73(SEQ ID NO：874)、TAR2h-74(SEQ ID NO：875)、TAR2h-75(SEQ ID NO：876)、TAR2h-76(SEQ ID NO：877)、TAR2h-77(SEQ ID NO：878)、TAR2h-78(SEQ ID NO：879)、TAR2h-79(SEQ ID NO：880)、TAR2h-15(SEQ ID NO：881)、TAR2h-131-8(SEQ ID NO：882)、TAR2h-131-24(SEQ ID NO：883)、TAR2h-15-8(SEQ ID NO：884)、TAR2h-15-8-1(SEQ ID NO：885)、TAR2h-15-8-2(SEQ IDNO：886)、TAR2h-185-23(SEQ ID NO：887)、TAR2h-154-10-5(SEQID NO：888)、TAR2h-14-2(SEQ ID NO：889)、TAR2h-151-8(SEQID NO：890)、TAR2h-152-7(SEQ ID NO：891)、TAR2h-35-4(SEQID NO：892)、TAR2h-154-7(SEQ ID NO：893)、TAR2h-80(SEQ IDNO：894)、TAR2h-81(SEQ ID NO：895)、TAR2h-82(SEQ IDNO：896)、TAR2h-83(SEQ ID NO：897)、TAR2h-84(SEQ IDNO：898)、TAR2h-85(SEQ ID NO：899)、TAR2h-86(SEQ IDNO：900)、TAR2h-87(SEQ ID NO：901)、TAR2h-88(SEQ IDNO：902)、TAR2h-89(SEQ ID NO：903)、TAR2h-90(SEQ IDNO：904)、TAR2h-91(SEQ ID NO：905)、TAR2h-92(SEQ IDNO：906)、TAR2h-93(SEQ ID NO：907)、TAR2h-94(SEQ IDNO：908)、TAR2h-95(SEQ ID NO：909)、TAR2h-96(SEQ IDNO：910)、TAR2h-97(SEQ ID NO：911)、TAR2h-99(SEQ IDNO：912)、TAR2h-100(SEQ ID NO：913)、TAR2h-101(SEQ IDNO：914)、TAR2h-102(SEQ ID NO：915)、TAR2h-103(SEQ IDNO：916)、TAR2h-104(SEQ ID NO：917)、TAR2h-105(SEQ IDNO：918)、TAR2h-106(SEQ ID NO：919)、TAR2h-107(SEQ IDNO：920)、TAR2h-108(SEQ ID NO：921)、TAR2h-109(SEQ IDNO：922)、TAR2h-110(SEQ ID NO：923)、TAR2h-111(SEQ IDNO：924)、TAR2h-112(SEQ ID NO：925)、TAR2h-113(SEQ IDNO：926)、TAR2h-114(SEQ ID NO：927)、TAR2h-115(SEQ IDNO：928)、TAR2h-116(SEQ ID NO：929)、TAR2h-117(SEQ IDNO：930)、TAR2h-118(SEQ ID NO：931)、TAR2h-119(SEQ IDNO：932)、TAR2h-120(SEQ ID NO：933)、TAR2h-121(SEQ IDNO：934)、TAR2h-122(SEQ ID NO：935)、TAR2h-123(SEQ IDNO：936)、TAR2h-124(SEQ ID NO：937)、TAR2h-125(SEQ IDNO：938)、TAR2h-126(SEQ ID NO：939)、TAR2h-127(SEQ IDNO：940)、TAR2h-128(SEQ ID NO：941)、TAR2h-129(SEQ IDNO：942)、TAR2h-130(SEQ ID NO：943)、TAR2h-131(SEQ IDNO：944)、TAR2h-132(SEQ ID NO：945)、TAR2h-133(SEQ IDNO：946)、TAR2h-151(SEQ ID NO：947)、TAR2h-152(SEQ IDNO：948)、TAR2h-153(SEQ ID NO：949)、TAR2h-154(SEQ IDNO：950)、TAR2h-159(SEQ ID NO：951)、TAR2h-165(SEQ IDNO：952)、TAR2h-166(SEQ ID NO：953)、TAR2h-168(SEQ IDNO：954)、TAR2h-171(SEQ ID NO：955)、TAR2h-172(SEQ IDNO：956)、TAR2h-173(SEQ ID NO：957)、TAR2h-174(SEQ IDNO：958)、TAR2h-176(SEQ ID NO：959)、TAR2h-178(SEQ IDNO：960)、TAR2h-201(SEQ ID NO：961)、TAR2h-202(SEQ IDNO：962)、TAR2h-203(SEQ ID NO：963)、TAR2h-204(SEQ IDNO：964)、TAR2h-185-25(SEQ ID NO：965)、TAR2h-154-10 SEQIDNO：966)、TAR2h-205(SEQ ID NO：967)、TAR2h-10(SEQ IDNO：968)、TAR2h-5(SEQ ID NO：969)、TAR2h-5d1(SEQ IDNO：970)、TAR2h-5d2(SEQ ID NO：971)、TAR2h-5d3(SEQ IDNO：972)、TAR2h-5d4(SEQ ID NO：973)、TAR2h-5d5(SEQ IDNO：974)、TAR2h-5d6(SEQ ID NO：975)、TAR2h-5d7(SEQ IDNO：976)、TAR2h-5d8(SEQ ID NO：977)、TAR2h-5d9(SEQ IDNO：978)、TAR2h-5d10(SEQ IDNO：979)、TAR2h-5d11(SEQ IDNO：980)、TAR2h-5d12(SEQ ID NO：981)和TAR2h-5d13(SEQ IDNO：982)。
在其他实施方案中，所述配体包括和肿瘤坏死因子受体1(TNFR1、p55、CD120a)特异性结合的域抗体(dAb)单体，Kd为300nM至5pM，并与选自下列的dAb竞争与人TNFR1的结合：TAR2h-12(SEQ ID NO：785)、TAR2h-13(SEQ ID NO：786)、TAR2h-14(SEQ ID NO：787)、TAR2h-16(SEQ ID NO：788)、TAR2h-17(SEQ ID NO：789)、TAR2h-18(SEQ ID NO：790)、TAR2h-19(SEQ ID NO：791)、TAR2h-20(SEQ ID NO：792)、TAR2h-21(SEQ ID NO：793)、TAR2h-22(SEQ ID NO：794)、TAR2h-23(SEQ ID NO：795)、TAR2h-24(SEQ ID NO：796)、TAR2h-25(SEQ ID NO：797)、TAR2h-26(SEQ ID NO：798)、TAR2h-27(SEQ ID NO：799)、TAR2h-29(SEQ ID NO：800)、TAR2h-30(SEQ ID NO：801)、TAR2h-32(SEQ ID NO：802)、TAR2h-33(SEQ ID NO：803)、TAR2h-10-1(SEQ ID NO：804)、TAR2h-10-2(SEQ ID NO：805)、TAR2h-10-3(SEQ ID NO：806)、TAR2h-10-4(SEQ ID NO：807)、TAR2h-10-5(SEQ ID NO：808)、TAR2h-10-6(SEQ ID NO：809)、TAR2h-10-7(SEQ ID NO：810)、TAR2h-10-8(SEQ ID NO：811)、TAR2h-10-9(SEQ ID NO：812)、TAR2h-10-10(SEQ ID NO：813)、TAR2h-10-11(SEQ ID NO：814)、TAR2h-10-12(SEQ ID NO：815)、TAR2h-10-13(SEQ ID NO：816)、TAR2h-10-14(SEQ ID NO：817)、TAR2h-10-15(SEQ ID NO：818)、TAR2h-10-16(SEQ ID NO：819)、TAR2h-10-17(SEQ ID NO：820)、TAR2h-10-18(SEQ ID NO：821)、TAR2h-10-19(SEQ ID NO：822)、TAR2h-10-20(SEQ ID NO：823)、TAR2h-10-21(SEQ ID NO：824)、TAR2h-10-22(SEQ ID NO：825)、TAR2h-10-27(SEQ ID NO：826)、TAR2h-10-29(SEQ ID NO：827)、TAR2h-10-31(SEQ ID NO：828)、TAR2h-10-35(SEQ ID NO：829)、TAR2h-10-36(SEQ ID NO：830)、TAR2h-10-37(SEQ ID NO：831)、TAR2h-10-38(SEQ ID NO：832)、TAR2h-10-45(SEQ ID NO：833)、TAR2h-10-47(SEQ ID NO：834)、TAR2h-10-48(SEQ ID NO：835)、TAR2h-10-57(SEQ ID NO：836)、TAR2h-10-56 SEQ ID NO：837)、TAR2h-10-58(SEQ ID NO：838)、TAR2h-10-66(SEQ ID NO：839)、TAR2h-10-64(SEQ ID NO：840)、TAR2h-10-65(SEQ ID NO：841)、TAR2h-10-68(SEQ ID NO：842)、TAR2h-10-69(SEQ ID NO：843)、TAR2h-10-67(SEQ ID NO：844)、TAR2h-10-61(SEQ ID NO：845)、TAR2h-10-62(SEQ ID NO：846)、TAR2h-10-63(SEQ ID NO：847)、TAR2h-10-60(SEQ ID NO：848)、TAR2h-10-55(SEQ ID NO：849)、TAR2h-10-59(SEQ ID NO：850)、TAR2h-10-70(SEQ ID NO：851)、TAR2h-34(SEQ ID NO：852)、TAR2h-35(SEQ ID NO：853)、TAR2h-36(SEQ ID NO：854)、TAR2h-37(SEQ ID NO：855)、TAR2h-38(SEQ ID NO：856)、TAR2h-39(SEQ ID NO：857)、TAR2h-40(SEQ ID NO：858)、TAR2h-41(SEQ ID NO：859)、TAR2h-42(SEQ ID NO：860)、TAR2h-43(SEQ ID NO：861)、TAR2h-44(SEQ ID NO：862)、TAR2h-45(SEQ ID NO：863)、TAR2h-47(SEQ ID NO：864)、TAR2h-48(SEQ ID NO：865)、TAR2h-50(SEQ ID NO：866)、TAR2h-51(SEQ ID NO：867)、TAR2h-66(SEQ ID NO：868)、TAR2h-67(SEQ ID NO：869)、TAR2h-68(SEQ ID NO：870)、TAR2h-70(SEQ ID NO：871)、TAR2h-71(SEQ ID NO：872)、TAR2h-72(SEQ ID NO：873)、TAR2h-73(SEQ ID NO：874)、TAR2h-74(SEQ ID NO：875)、TAR2h-75(SEQ ID NO：876)、TAR2h-76(SEQ ID NO：877)、TAR2h-77(SEQ ID NO：878)、TAR2h-78(SEQ ID NO：879)、TAR2h-79(SEQ ID NO：880)、TAR2h-15(SEQ ID NO：881)、TAR2h-131-8(SEQ ID NO：882)、TAR2h-131-24(SEQ ID NO：883)、TAR2h-15-8(SEQ ID NO：884)、TAR2h-15-8-1(SEQ ID NO：885)、TAR2h-15-8-2(SEQ IDNO：886)、TAR2h-185-23(SEQ ID NO：887)、TAR2h-154-10-5(SEQID NO：888)、TAR2h-14-2(SEQ ID NO：889)、TAR2h-151-8(SEQID NO：890)、TAR2h-152-7(SEQ ID NO：891)、TAR2h-35-4(SEQID NO：892)、TAR2h-154-7(SEQ ID NO：893)、TAR2h-80(SEQ IDNO：894)、TAR2h-81(SEQ ID NO：895)、TAR2h-82(SEQ IDNO：896)、TAR2h-83(SEQ ID NO：897)、TAR2h-84(SEQ IDNO：898)、TAR2h-85(SEQ ID NO：899)、TAR2h-86(SEQ IDNO：900)、TAR2h-87(SEQ ID NO：901)、TAR2h-88(SEQ IDNO：902)、TAR2h-89(SEQ ID NO：903)、TAR2h-90(SEQ IDNO：904)、TAR2h-91(SEQ ID NO：905)、TAR2h-92(SEQ IDNO：906)、TAR2h-93(SEQ ID NO：907)、TAR2h-94(SEQ IDNO：908)、TAR2h-95(SEQ ID NO：909)、TAR2h-96(SEQ IDNO：910)、TAR2h-97(SEQ ID NO：911)、TAR2h-99(SEQ IDNO：912)、TAR2h-100(SEQ ID NO：913)、TAR2h-101(SEQ IDNO：914)、TAR2h-102(SEQ ID NO：915)、TAR2h-103(SEQ IDNO：916)、TAR2h-104(SEQ ID NO：917)、TAR2h-105(SEQ IDNO：918)、TAR2h-106(SEQ ID NO：919)、TAR2h-107(SEQ IDNO：920)、TAR2h-108(SEQ ID NO：921)、TAR2h-109(SEQ IDNO：922)、TAR2h-110(SEQ ID NO：923)、TAR2h-111(SEQ IDNO：924)、TAR2h-112(SEQ ID NO：925)、TAR2h-113(SEQ IDNO：926)、TAR2h-114(SEQ ID NO：927)、TAR2h-115(SEQ IDNO：928)、TAR2h-116(SEQ ID NO：929)、TAR2h-117(SEQ IDNO：930)、TAR2h-118(SEQ ID NO：931)、TAR2h-119(SEQ IDNO：932)、TAR2h-120(SEQ ID NO：933)、TAR2h-121(SEQ IDNO：934)、TAR2h-122(SEQ ID NO：935)、TAR2h-123(SEQ IDNO：936)、TAR2h-124(SEQ ID NO：937)、TAR2h-125(SEQ IDNO：938)、TAR2h-126(SEQ ID NO：939)、TAR2h-127(SEQ IDNO：940)、TAR2h-128(SEQ ID NO：941)、TAR2h-129(SEQ IDNO：942)、TAR2h-130(SEQ ID NO：943)、TAR2h-131(SEQ IDNO：944)、TAR2h-132(SEQ ID NO：945)、TAR2h-133(SEQ IDNO：946)、TAR2h-151(SEQ ID NO：947)、TAR2h-152(SEQ IDNO：948)、TAR2h-153(SEQ ID NO：949)、TAR2h-154(SEQ IDNO：950)、TAR2h-159(SEQ ID NO：951)、TAR2h-165(SEQ IDNO：952)、TAR2h-166(SEQ ID NO：953)、TAR2h-168(SEQ IDNO：954)、TAR2h-171(SEQ ID NO：955)、TAR2h-172(SEQ IDNO：956)、TAR2h-173(SEQ ID NO：957)、TAR2h-174(SEQ IDNO：958)、TAR2h-176(SEQ ID NO：959)、TAR2h-178(SEQ IDNO：960)、TAR2h-201(SEQ ID NO：961)、TAR2h-202(SEQ IDNO：962)、TAR2h-203(SEQ ID NO：963)、TAR2h-204(SEQ IDNO：964)、TAR2h-185-25(SEQ ID NO：965)、TAR2h-154-10 SEQID NO：966)、TAR2h-205(SEQ ID NO：967)、TAR2h-10(SEQ IDNO：968)、TAR2h-5(SEQ ID NO：969)、TAR2h-5d1(SEQ IDNO：970)、TAR2h-5d2(SEQ ID NO：971)、TAR2h-5d3(SEQ IDNO：972)、TAR2h-5d4(SEQ ID NO：973)、TAR2h-5d5(SEQ IDNO：974)、TAR2h-5d6(SEQ ID NO：975)、TAR2h-5d7(SEQ IDNO：976)、TAR2h-5d8(SEQ ID NO：977)、TAR2h-5d9(SEQ IDNO：978)、TAR2h-5d10(SEQ ID NO：979)、TAR2h-5d11(SEQ IDNO：980)、TAR2h-5d12(SEQ ID NO：981)和TAR2h-5d13(SEQ IDNO：982)。
在其他实施方案中，所述配体包括与肿瘤坏死因子受体1(TNFR1、p55、CD120a)的特异性结合的域抗体((dAb)单体，Kd为300nM至5pM，并包含氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与选自下列的氨基酸序列或dAb同源：TAR2m-14(SEQ ID NO：983)、TAR2m-15(SEQ ID NO：984)、TAR2m-19(SEQ ID NO：985)、TAR2m-20(SEQ ID NO：986)、TAR2m-21(SEQ ID NO：987)、TAR2m-24(SEQ ID NO：988)、TAR2m-21-23(SEQ ID NO：989)、TAR2m-21-07(SEQ IDNO：990)、TAR2m-21-43(SEQ ID NO：991)、TAR2m-21-48(SEQ IDNO：992)、TAR2m-21-10(SEQ ID NO：993)、TAR2m-21-06(SEQ IDNO：994)和TAR2m-21-17(SEQ ID NO：995)。
在一些实施方案中，所述配体包括与TNFR1结合，并与本文所述任何dAb竞争与TNFR1(例如小鼠和/或人TNFR1)的结合的dAb单体。
耐蛋白酶的dAb
本发明还涉及耐蛋白酶降解的dAb单体(例如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、组织蛋白酶(例如组织蛋白酶G)、蛋白酶3)，还涉及包括耐蛋白酶dAb的配体。蛋白酶(如丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、基质金属蛋白酶)在蛋白的正常更新和代谢中发挥作用。但是在某些生理状态下，如炎症状态(如COPD)和癌症，出现在组织、器官或动物中(如肺中，在肿瘤中或靠近肿瘤)的蛋白酶量可增加。蛋白酶的这种增加可导致内源性蛋白和施用的治疗肽、多肽和蛋白的加速降解和失活。事实上，一些可体内使用(如用于治疗、诊断或预防疾病)的物质因为被蛋白酶快速降解和失活，所以仅有有限的疗效。
本发明涉及耐蛋白酶降解的dAb或包括dAb配体。本发明所述耐蛋白酶的dAb有几种优点。例如耐蛋白酶的dAb可施用于受试者，与对蛋白酶敏感的物质相比能保持更长的体内活性。因此，耐蛋白酶dAb的功能会保持一段时间，足以产生生物效应。
耐蛋白酶降解的dAb与蛋白酶在适于蛋白酶活性的条件下孵育至少约2小时，至少约3小时，至少约4小时，至少约5小时，至少约6小时，至少约7小时，至少约8小时，至少约9小时，至少约10小时，至少约11小时，至少约12小时，至少约24小时，至少约36小时，或至少约48小时时，大体上没有被蛋白酶降解。与所述蛋白酶共同孵育至少约2小时后，当不超过约25％，不超过约20％，不超过约15％，不超过约14％，不超过约13％，不超过约12％，不超过约11％，不超过约10％，不超过约9％，不超过约8％，不超过约7％，不超过约6％，不超过约5％，不超过约4％，不超过约3％，不超过约2％，不超过约1％，或大体上没有所述蛋白被蛋白酶降解时，dAb大体上没有被降解。可用任何合适的方法如采用本文所述的SDS-PAGE，评估蛋白降解。
耐蛋白酶能力可使用任何合适的的方法评估。例如可将蛋白酶加入合适缓冲(例如PBS)中的dAb溶液里，得到dAb/蛋白酶溶液，例如至少约0.01％(w/w)蛋白酶，约0.01％至约5％(w/w)蛋白酶，约0.05％至约5％(w/w)蛋白酶，约0.1％至约5％(w/w)蛋白酶，约0.5％至约5％(w/w)蛋白酶，约1％至约5％(w/w)蛋白酶，至少约0.01％(w/w)蛋白酶，至少约0.02％(w/w)蛋白酶，至少约0.03％(w/w)蛋白酶，至少约0.04％(w/w)蛋白酶，至少约0.05％(w/w)蛋白酶，至少约0.06％(w/w)蛋白酶，至少约0.07％(w/w)蛋白酶，至少约0.08％(w/w)蛋白酶，至少约0.09％(w/w)蛋白酶，至少约0.1％(w/w)蛋白酶，至少约0.2％(w/w)蛋白酶，至少约0.3％(w/w)蛋白酶，至少约0.4％(w/w)蛋白酶，至少约0.5％(w/w)蛋白酶，至少约0.6％(w/w)蛋白酶，至少约0.7％(w/w)蛋白酶，至少约0.8％(w/w)蛋白酶，至少约0.9％(w/w)蛋白酶，至少约1％(w/w)蛋白酶，至少约2％(w/w)蛋白酶，至少约3％(w/w)蛋白酶，至少约4％(w/w)蛋白酶，或约5％(w/w)蛋白酶的溶液。所述dAb/蛋白酶混合物可在适合蛋白酶活性的温度下(例如37℃)孵育，在时间间隔处(例如在1小时、2小时、3小时等)取样，终止蛋白酶反应。可使用任何合适的方法分析样品的蛋白降解，例如SDS-PAGE分析。结果可用于建立降解的时间进程。
在具体实施方案中，耐蛋白酶的dAb耐弹性蛋白酶降解。例如，所述耐弹性蛋白的dAb于37℃在0.04％(w/w)的弹性蛋白溶液中孵育至少约2小时时大体上没有降解。优选地，所述耐弹性蛋白的dAb于37℃在0.04％(w/w)的弹性蛋白溶液中孵育至少约12小时时大体上没有降解。更优选地，耐弹性蛋白的dAb于37℃在0.04％(w/w)的弹性蛋白溶液中孵育至少约24小时，至少约36小时，或至少约48小时时大体上没有降解。
在具体实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb耐胰蛋白酶降解。例如所述耐胰蛋白酶的dAb于37℃在0.04％(w/w)的胰蛋白酶溶液中孵育至少约2小时时大体上没有降解。优选地，所述耐胰蛋白酶的dAb于37℃在0.04％(w/w)的胰蛋白酶溶液中孵育至少约3小时时大体上没有降解。更优选地，所述耐胰蛋白酶的dAb于37℃在0.04％(w/w)的胰蛋白酶溶液中孵育至少约4小时，至少约5小时，至少约6小时，至少约7小时，至少约8小时，至少约9小时，至少约10小时，至少约11小时，或至少约12小时时大体上没有降解。
在某些实施方案中，本发明不包括WO 2004/081026中公开的TAR1-5-19。
优选地，所述耐蛋白酶的dAb是轻链可变域。例如所述耐蛋白酶的dAb可以是Vκ或Vλ。
dAb耐蛋白酶可能与其熔点(Tm)有关。一般来说，更高的熔点与耐蛋白酶有关。在一些实施方案中，所述耐蛋白酶dAb的Tm在约40℃至约95℃，约40℃至约85℃，约40℃至约80℃，约45℃至约95℃，约45℃  至约85℃，45℃至约80℃，至少约40℃，至少约45℃，至少约50℃，至少约55℃，至少约60℃，至少约65℃，至少约70℃，至少约75℃，至少约80℃，至少约85℃，至少约90℃，或至少约95℃。
所述耐蛋白酶的dAb可以特异性结合任何所需靶标，如人或动物蛋白，包括细胞因子、生长因子、细胞因子受体、生长因子受体、酶(如蛋白酶)、酶和DNA结合蛋白的辅助因子、脂类和碳水化合物。合适的靶标包括但不限于细胞因子、生长因子、细胞因子受体、生长因子受体以及其它包括但不限于下述的蛋白：ApoE、Apo-SAA、BDNF、心肌营养素-1、CEA、CD40、CD40配体、CD56、CD38、CD138、EGF、EGF受体、ENA-78、嗜酸粒细胞趋化因子、嗜酸粒细胞趋化因子-2、Exodus-2、FAPα、酸性FGF、碱性FGF、成纤维生长因子-10、FLT3配体、神经趋化蛋白(CX3C)、GDNF、G-CSF、GM-CSF、GF-β1、人血清白蛋白、胰岛素、IFN-γ、IGF-I、IGF-II、IL-1α、IL-1β、IL-1受体、IL-1受体1型、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8(72a.a.)、IL-8(77 a.a.)、IL-9、IL-10、IL-11、IL-12、IL-13、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18(IGIF)、抑制素α、抑制素β、IP-10、角质细胞生长因子-2(KGF-2)、KGF、瘦素、LIF、淋巴趋化因子、苗勒管抑制物质、单核细胞克隆抑制因子、单核细胞趋化蛋白、M-CSF、MDC(67 a.a.)、MDC(69 a.a.)、MCP-1(MCAF)、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MDC(67 a.a.)、MDC(69 a.a.)、MIG、MIP-1α、MIP-1β、MIP-3α、MIP-3β、MIP-4、髓系祖细胞抑制因子-1(MPIF-1)、NAP-2、神经营养因子、神经生长因子、β-NGF、NT-3、NT-4、制瘤素M、PDGF-AA、PDGF-AB、PDGF-BB、PF-4、RANTES、SDF1α、SDF1β、SCF、SCGF、干细胞因子(SCF)、TARC、TGF-α、TGF-β、TGF-β2、TGF-β3、肿中瘤坏死因子(TNF)、TNF-α、TNF-β、TNF受体I、TNF受体II、TNIL-1、TPO、VEGF、VEGF A、VEGF B、VEGF C、VEGF D、VEGF受体1、VEGF受体2、VEGF受体3、GCP-2、GRO/MGSA、GRO-β、GRO-γ、HCC1、1-309、HER 1、HER 2、HER 3、HER 4、血清白蛋白、vWF、淀粉样蛋白(如α-淀粉样蛋白)、MMP12、PDK1、IgE以及其他本文所公开的靶标。应该理解该列举绝非穷举。
在一些实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb与肺部组织的靶标结合，如选自下述的靶标：TNFR1、IL-1、IL-1R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-8R、IL-9、IL-9R、IL-10、IL-12、IL-12R、IL-13、IL-13Rα1、IL-13Ra2、IL-15、IL-15R、IL-16、IL-17R、IL-17、IL-18、IL-18R、IL-23、IL-23R、IL-25、CD2、CD4、CD11a、CD23、CD25、CD27、CD28、CD30、CD40、CD40L、CD56、CD138、ALK5、EGFR、FcER1、TGFb、CCL2、CCL18、CEA、CR8、CTGF、CXCL12(SDF-1)、糜酶、FGF、弗林蛋白酶、内皮素-1、嗜酸性粒细胞趋化因子  (如嗜酸性粒细胞趋化因子、嗜酸性粒细胞趋化因子-2、嗜酸性粒细胞趋化因子-3)、GM-CSF、ICAM-1、ICOS、IgE、IFNa、I-309、整合素、L-选择素、MIF、MIP4、MDC、MCP-1、MMPs、中性粒细胞弹性蛋白酶、骨桥蛋白、OX-40、PARC、PD-1、RANTES、SCF、SDF-1、siglec8、TARC、TGFb、凝血酶、Tim-1、TNF、TRANCE、类胰蛋白酶、VEGF、VLA-4、VCAM、α4β7、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR7、CCR8、αvβ6、αvβ8、cMET、CD8、vWF、淀粉样蛋白(α-淀粉样蛋白)、MMP12、PDK1和IgE。
本发明所述耐蛋白酶的dAb可体内施用，与不能类似地抗蛋白酶降解的化合物相比，其保持功能更久。本发明耐蛋白酶降解的dAb可用于治疗炎症疾病(如通过肺部给药方式对肺部局部给药，如鼻腔给药，如吸入给药)。例如通过给予对其有需要的受试者治疗有效量的耐蛋白酶降解的dAb单体。本发明还涉及用于治疗、诊断和/或预防的耐蛋白酶降解的dAb单体，以及本发明的此种dAb在制备治疗本发明所述疾病的药物中的用途(例如炎症疾病、关节炎、呼吸系统疾病)。
在具体实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb单体可通过肺部给药用于治疗炎症疾病、关节炎，或呼吸系统疾病。该耐蛋白酶的dAb还可用于制备治疗炎症疾病、关节炎、或呼吸系统疾病的药物，其中所述dAb单体经肺部给药。弹性蛋白酶和胰蛋白酶是肺部最常见的蛋白酶。优选地，肺部给药的耐蛋白酶的dAb耐弹性蛋白酶，耐胰酶，或耐弹性蛋白酶和胰酶。
在具体实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb单体(如耐弹性蛋白酶的dAb单体)和IL-1R1结合，并抑制IL-1(如IL-1α和/或IL-1β)和受体结合，但不抑制IL-1ra和IL-1R1的结合，也不抑制IL-1ra和包括此种dAb单体的配体结合。此种dAb单体可用作治疗药物以治疗炎症疾病，或其他全部或部分地由IL-1和IL-1R1结合诱导的生物功能所介导的疾病(例如局部或系统性炎症，炎症调节介质(如IL-6、I1-8、TNF)的产生，发烧，免疫细胞(如淋巴细胞、中性粒细胞)的激活、厌食症、低血压、白细胞减少、血细胞减少)。所述耐蛋白酶的dAb单体可以结合IL-1R1，并抑制IL-1R1功能而不干扰内源性IL-1R1抑制途径，例如内源性IL-1ra和内源性IL-1R1的结合。因此这种dAb单体可施用于受试者以补充体内抑制IL-1R1或IL-1活性的内源性调节途径。此外，与IL-1R1结合但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的耐蛋白酶dAb单体作为诊断物质使用是有利的，因为其可用于结合、检测、定量或测量样本中的IL-1R1，并且不会与样本中的IL-1ra竞争与IL-1R1的结合。因此样本中是否有以及有多少IL-1R1是可以准确测定的。
与IL-1R1结合，并抑制IL-1(如IL-1α和/或IL-1β)与受体结合，但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的耐蛋白酶dAb单体(如耐弹性蛋白酶的dAb单体)还是有用的研究工具。例如这种dAb单体可用于识别与IL-1R1结合，但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的物质(如其他dAb，小的有机分子)。在一个说明性的实施例中，在如本文所述受体结合检测的竞争性IL-1R1受体结合检测中，检测了待检测的一种物质或物质的集合抑制IL-1与IL-1R1结合的能力。在这种检测中抑制IL-1和IL-1R1结合的物质，可随后在类似的竞争性IL-1R1受体结合检测中研究其是否与和IL-1R1结合但不抑制IL-1ra和IL-1R1结合的dAb单体竞争。在这种检测中的竞争性结合表明该物质与IL-1R1结合，并抑制IL-1与受体的结合，但不抑制IL-1ra与受体结合。
在一些实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb与IL-1R1结合，并与本文公开的任何dAb竞争与IL-1R1的结合(例如人IL-1R1)。在一些实施方案中，所述dAb至少耐弹性蛋白酶和/或胰蛋白酶。
在其他实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb与抗IL-1R1的dAb竞争与IL-1R1的结合，其中所述抗IL-1R1的dAb包含氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与选自SEQ IDNO：1至SEQ ID NO：349的氨基酸序列或dAb同源。
在其他实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb与抗IL-1R1的dAb竞争与IL-1R1的结合，其中所述抗IL-1R1的dAb包含氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与选自SEQ IDNO：1或SEQ ID NO：2的氨基酸序列或dAb同源。
在其他实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb与抗IL-1R1的dAb竞争与IL-1R1的结合，其中所述抗IL-1R1的dAb包含氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与选自SEQ IDNO：3至或SEQ ID NO：7的氨基酸序列或dAb同源。
在其他实施方案中，所述耐蛋白酶的dAb与抗IL-1R1的dAb竞争与IL-1R1的结合，其中所述抗IL-1R1的dAb包含氨基酸序列DOM4-130-54(SEQ ID NO：7)或氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与DOM4-130-54(SEQ ID NO：7)同源。
配体形式
配体或dAb单体可形成单或多特异性抗体或抗体片段，或形成单或多非抗体结构。合适的形式包括任何合适的多肽结构，其中为了具有对结构上抗原的结合特异性可包括抗体可变域或其一种或多种的CDR。各种合适的抗体形式为本领域所公知，例如IgG样形式、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、单链抗体、双特异性抗体、抗体重链、抗体轻链、抗体重链和/或轻链的同型二聚体和异型二聚体、任何上述的抗原结合片段(如Fv片段(单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段)、单可变域(如VH、VL、VHH)、dAb和任何上述经修饰的形式(如经聚烷撑二醇(如聚乙二醇、聚丙二醇、聚丁二醇)或其他合适的聚合物共价连接修饰)。参见2003年6月30日提交的指定美国的  PCT/GB03/002804(WO 2004/081026)，是关于PEG化的单可变域和dAb，制备相同的体内半衰期增加的PEG化单可变域、dAb单体和多聚物的合适方法，合适的PEG，优选流体大小的PEG，优选流体大小的PEG化的单可变域和dAb单体以及多聚物。PCT/GB03/002804(WO 2004/081026)的全部教导，包括上述所指的部分，都在此引作参考。
配体可以形成所需dAb单体的二聚体、三聚体或多聚体形式，例如使用合适的接头如(Gly4Ser)n，n＝从1至8，例如2、3、4、5、6或7。如果需要，配体，包括dAb单体、二聚体和三聚体，可连接至抗体Fc区，包括CH2和CH3区的其中之一或两者，以及任选的铰链区。例如编码作为单核苷酸序列连接到Fc区的配体的载体可用于制备这样的多肽。
配体和dAb单体还可结合和/或形成非抗体多配体结构，从而形成与靶分子结合的多价复合体，因而有很好的亲和力。例如天然的细菌受体如SpA可用作CDRs移植的支架以生成特异性结合一种或多种表位的配体。该方法的细节在US 5,831,012中有描述。其他合适的支架包括基于纤维连接蛋白和亲和体的那些。合适方法的细节在WO 98/58965中有描述。其他合适的支架包括在van den Beuken et al.，J.Mol.Biol.310：591-601(2001)中描述的脂笼蛋白和CTLA4，以及如在WO 00/69907(Medical ResearchCouncil)中所描述的那些支架，其是基于例如细菌GroEL的环结构或其他分子伴侣多肽。蛋白支架可以相结合；例如CDRs可移植到CTLA4支架上，与免疫球蛋白VH或VL区合用以形成配体。同样地，纤维连接蛋白、脂笼蛋白和其他支架可以相结合。
制备任何所需形式的各种合适方法为本领域所知。例如抗体链和形式(例如IgG样形式、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、单链抗体、双特异性抗体、抗体重链、抗体轻链、抗体重链和/或轻链的同型二聚体和异型二聚体)可通过合适的表达构建体的表达和/或合适细胞的培养(例如杂交瘤、异种杂交瘤、含有编码所述形式的重组构建物的重组宿主细胞)而制备。进一步地，如抗体或抗体链的抗原结合片段的形式(如Fv片段(如单链Fv(scFv)、二硫键连接的Fv)、Fab片段、Fab’片段、F(ab’)2片段)可通过合适的表达构建物的表达，或抗体的例如使用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶的酶消化而进行制备。
所述配体可以形成如WO 03/002609中所述的双特异性配体或多特异性配体，其所有的教导都在此引作参考。双特异性抗体包括具有不同结合特异性的免疫球蛋白单可变域。这种双特异性抗体可包括重链和轻链区的结合。例如该双特异性配体可包括VH区和VL区，其可连接在一起形成scFv(例如使用合适的如Gly4Ser的接头)，或形成其双特异性抗体或抗原结合片段(如F(ab’)2片段)。所述双特异性抗体不包括互补的VH/VL对，其形成与抗原或表位都结合的常规双链抗体抗原结合位点。而所述双形式的配体包括VH/VL互补对，其中所述V区具有不同的结合特异性。
此外，如果需要则所述双特异性配体可包括一种或多种CH或CL域。如果需要还可包括铰链区。域的这种组合可以例如模拟天然抗体，如IgG、IgM或其片段，如Fv、scFv、Fab或F(ab’)2分子。也可设想其他结构如包括VH，VL，CH1和CL域的IgG分子的单臂。优选地，虽然几种这样的配体可一起包含在同样的蛋白中，但本发明的所述双特异性配体仅包括两种可变域，例如两种这样的配体可包含在IgG或多体免疫球蛋白，如IgM中。或者在另一实施方案中，多数双特异性配体组合形成多聚体。例如，两种不同的双特异性配体组合形成四特异性分子。本领域技术人员会理解，依照本发明的方法制备的双特异性配体的轻或重可变域可以在相同的多肽链上，或者在不同的多肽链上。至于可变域在不同的多肽链上，它们可随后可通过接头，一般是弹性接头(如多肽链)、化学连接基团，或通过任何本领域所知的其他方法连接起来。
所述多特异性配体具有超过一个表位的结合特异性。一般来说，所述多特异性配体包括两个或多个表位结合域，如dAb或包括表位结合位点的非抗体蛋白域，如亲和体、SpA域、LDL受体A类域、EGF域、Avimer。多特异性配体可如本文所述进一步形成。
在一些实施方案中，所述配体是IgG样的形式。这样的形式具有IgG分子的常规四条链结构(两条重链和两条轻链)，其中一个或多个单可变域已被具有所需特异性的dAb或单可变域取代。优选地每个可变域(两个VH区和两个VL区)被dAb或单可变域取代。包括在IgG样形式中的所述dAb或单可变域可以具有相同的或不同的特异性。在一些实施方案中，所述IgG样形式是四价的，可以有一种、两种、三种或四种特异性。例如，所述IgG样形式可以是单特异性的，包括具有相同特异性的四种dAb；双特异性的，包括具有相同特异性的三种dAb和另一种具有不同特异性的dAb；双特异性的，包括具有相同特异性的两种dAb和两种具有一般但不同特异性的dAb；三特异性的，包括具有相同特异性的第一和第二dAb，具有不同特异性的第三dAb和具有不同于第一、第二和第三dAb特异性的第四dAb；或四特异性的，包括四种dAb，每种都有不同的特异性。可以制备IgG样形式的抗原结合片段(如Fab、F(ab’)2、Fab’、Fv、scFv)。优选地该IgG样形式或其抗原结合片段与TNFR1不交联。
半衰期延长的形式
所述配体如dAb单体，可形成其体内血清半衰期延长的形式。体内半衰期增加对于免疫球蛋白的体内应用是有用的，尤其是抗体，最尤其的是如dAb小抗体片段。这样的片段(Fvs、二硫键连接的Fvs、Fabs、scFvs、dAbs)从体内被迅速清除，会限制其临床应用。
如dAb单体的小的配体可以形成抗体的更大的抗原结合片段或抗体(如形成Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、IgG、scFv)。配体(如dAb单体)可形成抗体的更大的抗原结合片段或更大的流体大小的抗体(如形成Fab、Fab’、F(ab)2、F(ab’)2、IgG、scFv)。还可形成更大的流体大小的配体，例如通过连接聚烷撑二醇基团(如聚乙二醇(PEG)基团、聚丙二醇、聚丁二醇)、血清白蛋白、转铁蛋白、转铁蛋白受体或至少其转铁蛋白结合部分、抗体Fc区，或通过与抗体域共轭。在一些实施方案中，所述配体(如dAb单体)是PEG化的。优选地，所述PEG化的配体(如dAb单体)与IL-1R1结合，其亲和力与非PEG化的相同配体大体相同。例如所述配体可以是与IL-1R1结合的PEG化的dAb单体，其中PEG化的dAb单体结合IL-1R1的亲和力，与非PEG化形式的dAb亲和力的差异不超过约1000的系数，优选不超过约100的系数，更优选不超过约10的系数，或相对于非PEG形式其亲和力大体没有改变。参见2003年6月30日提交的指定美国的PCT/GB03/002804(WO 2004/081026)，关于PEG化的单可变域和dAb，制备相同的体内半衰期增加的PEG化单可变域、dAb单体和多聚物的合适方法，合适的PEG，优选流体大小的PEG，优选流体大小的PEG化单可变域、dAb单体和多聚物。PCT/GB03/002804(WO 2004/081026)的全部教导，包括上述所指的部分，在此引作参考。
本发明所述流体大小的配体(如dAb单体和多聚体)可使用本领域公知的方法测定。例如凝胶过滤层析法可用于测定流体大小的配体。测定流体大小的配体的合适凝胶过滤基质如交联琼脂糖基质，是公知的并且容易得到。
配体形式的大小(如连接在dAb单体的PEG部分的大小)可随所需的应用而变化。例如如果希望配体离开循环系统进入外周组织，理想的是保持流体大小的配体小到利于从血流外渗。或者如果需要配体在体循环中保留更长的时间，则可增加配体的大小，例如通过形成Ig样蛋白或通过加上30至60kDa的PEG部分(如线性或支链的PEG 30至40kDa PEG，比如加上两个20kDa的PEG部分)。
如本文所述，配体(如dAb单体)的流体大小及其血清半衰期还可通过使所述配体与结合域(如抗体或抗体片段)共轭或相连接而增加，所述结合域指与增加体内半衰期的抗原或表位相结合的结合域。例如所述配体(如  dAb单体)可以与抗血清白蛋白或抗新生儿Fc受体抗体或抗体片段，如抗SA或抗新生儿Fc受体dAb、Fab、Fab’或scFv，或抗SA亲和体或抗新生儿Fc受体亲和体共轭或连接。
用于根据本发明的配体的合适白蛋白、白蛋白片段或白蛋白变体的例子在WO 2005/077042A2中有描述，其全部在此引作参考。尤其地，下述白蛋白、白蛋白片段或白蛋白变体可用于本发明：
·SEQ ID NO：1(如在WO 2005/077042A2所描述的，该序列明确地在本公开中引作参考)；
·包括或由WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸1-387组成的白蛋白片段或变体；
·白蛋白，或其片段或变体，包括选自下述氨基酸序列：(a)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸54至61；(b)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸76至89；(c)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸92至100；(d)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸170至176；(e)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸247至252；(f)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸266至277；(g)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸280至288；(h))WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸362至368；(i)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸439至447；(j)WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸462至475；(k))WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸478至486；和(l))WO 2005/077042A2中SEQ ID NO：1的氨基酸560至566。
用于根据本发明的配体的合适白蛋白、片段或类似物的进一步的例子在WO 2005/077042A2中有描述，其全部在此引作参考。尤其地，下述白蛋白、片段或变体可用于本发明：
·如在WO 03/076567A2中描述的人血清白蛋白，如图3(该序列信息明确地在本公开中引作参考)；
·人血清白蛋白(HA)由585个氨基酸的单非糖基化的多肽链组成，分子量为66,500(参见Meloun，et al.，FEBS Letters58：136(1975)；Behrens，et al.，Fed.Proc.34：591(1975)；Lawn，et al.，Nucleic Acids Research 9：6102-6114(1981)；Minghetti，et al.，J.Biol.Chem.261：6747(1986))；
·如Weitkamp，et al.，Ann.Hum.Genet.37：219(1973)中所描述的白蛋白的多态性变体或类似物或片段；
·如EP 322094中描述的白蛋白片段或变体，如HA(1-373)、HA(1-388)、HA(1-389)、HA(1-369)和HA(1-419)以及1-369和1-419之间的片段。
·如EP 399666中描述的白蛋白片段或变体，如HA(1-177)和HA(1-200)以及HA(1-X)之间的片段，其中X是178至199的任何数。
如果一种或多种半衰期延长的部分(如白蛋白、转铁蛋白以及其片段以及类似物)被用于本发明的配体，则可以使用任何合适的方法使其共轭，如通过与IL-1R1结合部分(如抗IL-1R1的dAb或抗体片段)直接融合，例如通过使用编码融合蛋白的单核苷酸构建物，其中所述融合蛋白被编码为带有位于所述IL-1R1结合部分N端或C端的半衰期延长部分的单多肽链。或者可通过在各部分间使用肽接头以实现共轭，如WO 03/076567A2或WO2004/003019中描述的肽接头(这些接头的公开在本公开中引作参考，提供用于本发明的例子)。
典型地，增加体内血清半衰期的多肽是体内自然生成并抗降解或抗内源性机制的去除的多肽，所述内源性机制是从有机体(如人)去除不需要的物质。例如增加体内血清半衰期的多肽可选自：细胞外基质蛋白，血液中的蛋白，血脑屏障或神经组织中的蛋白，集中在肾、肝、肺、心脏、皮肤或骨骼的蛋白、应激蛋白、疾病特异性蛋白，或涉及Fc转运的蛋白。
增加血清体内半衰期的合适多肽，例如转铁蛋白受体特异性配体-神经药物融合蛋白(参见美国专利No.5,977,307，其教导在此引作参考)，脑毛细血管内皮细胞受体、转铁蛋白、转铁蛋白受体(如可溶转铁蛋白受体)、胰岛素、胰岛素样生长因子1(IGF 1)受体、胰岛素样生长因子2(IGF 2)受体、胰岛素受体、凝血因子X、α1-抗胰蛋白酶和HNF 1α。增加血清半衰期的合适多肽还包括α-1糖蛋白(血清类粘蛋白；AAG)、α-1抗糜蛋白酶(ACT)、α-1微球蛋白(蛋白HC；AIM)、抗凝血酶III(AT III)、载脂蛋白A-1(Apo A-1)、载脂蛋白B  (Apo B)、铜蓝蛋白(Cp)、补体成分C3(C3)、补体成分C4(C4)、C1酯酶抑制剂(C1 INH)、C-反应蛋白(CRP)、铁蛋白(FER)、血色素结合蛋白(HPX)、脂蛋白(a)  (Lp(a))、甘露糖结合蛋白(MBP)、肌红蛋白(Myo)、前白蛋白(甲状腺素运载蛋白；PAL)、视黄醇结合蛋白(RBP)和类风湿因子(RF)。
合适的细胞外基质蛋白包括，例如胶原、层粘连蛋白、整合素和纤维连接蛋白。胶原是细胞外基质的主要蛋白。最近已知约有15种胶原分子在身体的不同部分被发现，如I型胶原(占身体胶原的90％)在骨骼、皮肤、腱、韧带、角膜、内脏器官中被发现，或II型胶原在软骨、椎间盘、脊索和眼玻璃体液中被发现。
来自血液的合适蛋白包括，例如血浆蛋白(如纤维蛋白、α-2巨球蛋白、血清白蛋白、纤维蛋白原(如纤维蛋白原A、纤维蛋白原B)、血清淀粉样蛋白A、结合珠蛋白、抑制蛋白、泛素、子宫球蛋白和β-2-巨球蛋白)、酶和酶抑制剂(如  纤溶酶原、溶菌酶、胱抑素C、α-1-抗胰蛋白酶和胰蛋白酶抑制剂)、免疫系统蛋白、如免疫球蛋白(如IgA、IgD、IgE、IgG、IgM、免疫球蛋白轻链(κ/λ))、转运蛋白(如视黄醇结合蛋白、α-1巨球蛋白)、防御素(如  β-防御素1、中性粒细胞防御素1、中性粒细胞防御素2和中性粒细胞防御素3)等等。
血脑屏障或神经组织中发现的合适蛋白包括，例如黑素皮质素受体、髓鞘、抗坏血酸转运体等等。
增加血清体内半衰期的合适多肽还包括集中在肾的蛋白(如多囊蛋白、IV型胶原、有机阴离子转运体K1、Heymann抗原)集中在肝脏的蛋白(如乙醇脱氢酶、G250)、集中在肺的蛋白(如与IgA结合的分泌片)、集中在心脏的蛋白(如与扩张性心肌病相关的HSP 27)、集中在皮肤的蛋白(如角蛋白)、骨特异性蛋白，如形态发生蛋白(BMPs)，其为表现出成骨活性的转化生长因子β超家族蛋白的亚群(例如BMP-2、BMP-4、BMP-5、BMP-6、BMP-7、BMP-8)，肿瘤特异性蛋白(如滋养层抗原、herceptin受体、雌激素受体、组织蛋白酶(如组织蛋白酶B，其可在肝脏及脾脏中发现))。
合适的疾病特异性蛋白包括，例如仅在活化的T细胞上表达的抗原，包括LAG-3(淋巴细胞活化基因)、骨保护素配体(OPGL；参见Nature 402，304-309(1999))；OX40(TNF受体家族成员，在活化的T细胞上表达，并在嗜人T细胞白血病病毒I型(HTLV-I)生成细胞中被特异性上调；参见Immunol.165(1)：263-70(2000))。合适的疾病特异性蛋白还包括，例如金属蛋白酶(与关节炎/癌症相关)，包括果蝇CG6512、人paraplegin、人FtsH、人AFG3L2、小鼠ftsH；以及血管生长因子，包括酸性成纤维细胞生长因子(FGF-1)、碱性成纤维细胞生长因子(FGF-2)、血管内皮生长因子/血管渗透因子(VEGF/VPF)、转化生长因子-α(TGFα)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管生成素、白细胞介素-3(IL-3)、白细胞介素-8(IL-8)、血小板源性内皮生长因子(PD-ECGF)、胎盘生长因子(P1GF)、中期因子血小板源性生长因子-BB(PDGF)，以及趋化因子。
增加血清体内半衰期的合适多肽还包括如热休克蛋白(HSPs)的应激蛋白。HSPs正常是在细胞内发现的。当其在细胞间被发现时则表明细胞已经死亡，细胞内容物溢出。这种非程序性细胞死亡(坏死)作为创伤、疾病或损伤的结果而发生，细胞外HSPs引发免疫系统的反应。与细胞外HSP结合可导致本发明的组合物集中在疾病部位。
涉及Fc转运的合适蛋白包括，例如Brambell受体(还被称为FcRB)。该Fc受体有两种功能，都对传递有潜在用处。所述功能是(1)通过胎盘从母亲向孩子转运IgG(2)保护IgG免受讲解从而延长其血清半衰期。人们认为受体循环利用来自核内体的IgG。(参见Holliger et al，Nat Biotechnol 15(7)：632-6(1997).)。
配体半衰期的药代动力学分析和测定方法是本领域技术人员来熟悉的。详情在Kenneth，A et al：Chemical Stability ofPharmaceuticals：A Handbook for Pharmacists和Peters et al，Pharmacokinetc analysis：A Practical Approach(1996)中可找到。供参考的还有“Pharmacokinetics”，M Gibaldi & D Perron，MarcelDekker出版，2nd Rev.ex edition(1982)，其描述了药代动力学参数如tα和tβ半衰期和曲线下面积(AUC)。
核酸分子、载体和宿主细胞
本发明还提供编码本文所述抗IL-1R1和dAb单体的分离的和/或重组核酸分子，包括双特异性配体(如与IL-1R1和血清白蛋白结合的配体；与IL-1R1和TNFR1结合的配体)和多特异性配体(如与IL-1R1、血清白蛋白和TNFR1结合的配体)。本发明还提供分离的和/或重组核酸分子，其编码抗dAb单体或配体的蛋白酶(如胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、组织蛋白酶(如组织蛋白酶G)和蛋白酶3)，所述配体包括本文所述的抗蛋白酶的dAb单体。
在特定实施方案中，所述分离的和/或重组核酸包括编码域抗体(dAb)的核苷酸序列，该域抗体与IL-1R特异性结合，抑制IL-1(如IL-1α和/或IL-1β)和IL-1ra与IL-1R1的结合，还包含氨基酸序列，其至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％与选自下列的氨基酸序列或dAb同源：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ ID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ ID NO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ ID NO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ ID NO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ ID NO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQ ID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ IDNO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ IDNO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ ID NO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQ ID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ IDNO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ IDNO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ ID NO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQ ID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ IDNO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ ID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ IDNO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQID NO：164)和DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)。
在特定实施方案中，所述分离的和/或重组核酸包括编码域抗体(dAb)单体的核苷酸序列，该域抗体单体对IL-1R1具有结合特异性，抑制IL-1与受体的结合，其中所述核苷酸序列与选自下列的核苷酸序列具有至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约91％，至少约92％，至少约93％，至少约94％，至少约95％，至少约96％，至少约97％，至少约98％，或至少约99％的核苷酸序列一致性：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ IDNO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQID NO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ ID NO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ ID NO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ ID NO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ ID NO：114)、DOM4-122-20(SEQ IDNO：115)、DOM4-122-21(SEQ ID NO：116)、DOM4-122-22(SEQID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ ID NO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ ID NO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ ID NO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ ID NO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQID NO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ ID NO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ ID NO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ ID NO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ ID NO：136)、DOM4-122-44(SEQ IDNO：137)、DOM4-122-45(SEQ ID NO：138)、DOM4-122-46(SEQID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ ID NO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ ID NO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ ID NO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ ID NO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQID NO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ ID NO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ ID NO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ ID NO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ ID NO：158)、DOM4-122-67(SEQ IDNO：159)、DOM4-122-68(SEQ ID NO：160)、DOM4-122-69(SEQID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ ID NO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ ID NO：164)和DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)。
在其他实施方案中，所述分离的和/或重组核酸包括编码抗本文所述耐蛋白酶(如胃蛋白酶、胰蛋白酶、弹性蛋白酶、糜蛋白酶、羧肽酶、组织蛋白酶(如组织蛋白酶G)和蛋白酶3)的dAb的核苷酸序列。
本发明还提供包括本发明的重组核酸分子的载体。在特定实施方案中，该载体是包括一种或多种可操作地连接到本发明重组核酸的表达调控元件或序列的表达载体。本发明还提供包括本发明的重组核酸分子或载体的重组宿主细胞。合适的载体(例如质粒、噬菌体展示载体)、表达调控元件、宿主细胞和制备本发明重组宿主细胞的方法在本领域是公知的，本文的实施例会进一步说明。
合适的表达载体可含有若干构件，例如复制起点、选择标记基因、一种或多种表达调控元件如转录调控元件(如启动子、增强子、终止子)和/或一种或多种翻译信号、信号序列或前导序列等等。表达调控元件和信号序列如果存在，则由载体或其他来源提供。例如编码抗体链的克隆核酸的转录和/或翻译调控序列可用于直接表达。
可提供启动子用于所需宿主细胞内的表达。启动子可以是组成型的或诱导型的。例如，启动子可以是可操作地连接到编码抗体、抗体链或其部分的核酸上，从而引导核酸转录。可获得各种原核细胞(如大肠杆菌的1ac、tac、T3、T7启动子)和真核细胞(如猴病毒40早期或晚期启动子，劳氏肉瘤病毒长末端重复序列、巨细胞病毒启动子、腺病毒晚期启动子)宿主的合适启动子。
此外，表达载体通常包括筛选携带所述载体的宿主细胞的选择性标记，对于复制表达载体来说，还包括复制起点。编码具有抗菌或耐药性的产物的基因是常用选择性标记，可用于原核细胞(如内酰胺酶基因(耐氨苄西林)、四环素抗性的Tet基因)和真核细胞(如新霉素(G418或遗传霉素)、谷丙转氨酶(霉酚酸)、氨苄西林或潮霉素抗性基因)。二氢叶酸还原酶标记基因在多种宿主细胞中允许用甲氨蝶呤进行筛选。编码宿主基因缺陷型标记的基因产物的基因(LEU2、URA3、HIS3)常用于酵母中的选择性标记。使用病毒(例如杆状病毒)或噬菌体载体，以及能整合到宿主细胞基因组的载体如逆转录病毒载体，也在考虑范围中。在哺乳动物细胞和原核细胞(大肠杆菌)、昆虫细胞(果蝇Schnieder S2细胞、Sf9)和酵母(甲醇毕赤酵母、巴斯德毕赤酵母、酿酒酵母)中表达的合适的表达载体为本领域所公知。
合适的宿主细胞可以是原核的，包括细菌细胞如大肠杆菌、枯草杆菌和/或其他合适的细菌；真核细胞，如真菌或酵母细胞(如毕赤酵母、曲霉、酿酒酵母、粟酒裂殖酵母、粗糙脉胞菌)或其他更低等的真核细胞，以及更高等的真核细胞如昆虫细胞(果蝇Schnieder S2细胞、Sf9昆虫细胞(WO 94/26087(O’Connor))，哺乳动物细胞(例如COS细胞，如COS-1(ATCC检索号No.CRL-1650)和COS-7(ATCC检索号No.CRL-1651)、CHO(如ATCC检索号No.CRL-9096、CHO DG44(Urlaub，G.and Chasin，LA.，Proc.Natl.Acac.Sci.USA，77(7)：4216-4220(1980)))、293(ATCC检索号No.CRL-1573)、HeLa(ATCC检索号No.CCL-2)、CV1(ATCC检索号No.CCL-70)、WOP(Dailey，L.，et al.，J.Virol.，54：739-749(1985)、3T3、293T(Pear，W.S.，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，90：8392-8396(1993))NS0细胞、SP2/0、HuT 78细胞等等，或植物细胞(如烟草)。(参见例如Ausubel，F.M.et al.，eds.Current Protocols in MolecularBiology，Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons Inc.(1993).)在一些实施方案中，所述宿主细胞是分离的宿主细胞，不是多细胞有机体(如植物或动物)的一部分。在优选的实施方案中，宿主细胞是非人的宿主细胞。
本发明还提供制备本发明的配体(如dAb单体、双特异性配体、多特异性配体)的方法，包括将包括本发明的重组核酸的重组宿主细胞保持在适合重组核酸表达的条件下，从而使重组核酸得以表达并且生成配体。在一些实施方案中，所述方法进一步包括分离所述配体。
基于免疫球蛋白的配体的制备
根据本发明的配体(如双特异性配体、dAb单体)可根据以往确立的用于抗体工程领域的技术制备，用于scFv、“噬菌体”抗体和其他基因工程抗体分子的制备。用于制备所述抗体的技术如下列综述和其引用文献中所描述的：Winter & Milstein，(1991)Nature 349：293-299；Pluckthun(1992)Immunological Reviews130：151-188；Wright et al.，(1992)Crti.Rev.Immunol.12：125-168；Holliger，P.& Winter，G.(1993)Curr.Op.Biotechn.4，446-449；Carter，et al.(1995)J.Hematother.4，463-470；Chester，K.A.&Hawkins，R.E.(1995)Trends Biotechn.13，294-300；Hoogenboom，H.R.(1997)Nature Biotechnol.15，125-126；Fearon，D.(1997)NatureBiotechnol.15，618-619；Plückthun，A.& Pack，P.(1997)Immunotechnology 3，83-105；Carter，P.& Merchant，A.M.(1997)Curr.Opin.Biotechnol.8，449-454；Holliger，P.& Winter，G.(1997)Cancer Immunol.Immunother.45，128-130。
筛选具有所需特异性的抗体可变域所采用的合适技术使用的是本领域已知的库和筛选方法。使用从人B细胞采集到的重排V基因的天然库(Marks et al.(1991)J.Mol.Biol.，222：581；Vaughanet al.(1996)Nature Biotech.，14：309)为本领域技术人员所公知。合成库((Hoogenboom & Winter(1992)J.Mol.Biol.，227：381；Barbas et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4457；Nissim etal.(1994)EMBO J.，13：692；Griffiths et al.(1994)EMBO J.，13：3245；De Kruif et al.(1995)J.Mol.Biol.，248：97)通常采用PCR技术由克隆免疫球蛋白V基因制备。PCR方法中的错误可导致高度随机性。VH和/或VL可针对靶抗原或表位分别进行筛选，在这种情况下直接选择单域结合，或者可一起进行筛选。
库载体系统
本领域已知的各种筛选系统都适用于本发明。这种系统的例子描述如下。
可直接检测噬菌体λ表达系统的噬菌体噬菌斑或溶源性细菌菌落，此二者如前所述(Huse et al.(1989)Science，246：1275；Catonand Koprowski(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，87；Mullinax et al.(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，87：8095；Persson et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，88：2432)，并在本发明中使用。虽然此种表达系统可用于筛选库的多达106种不同成员，但真得不适合筛选更大的数量(大于106种成员)。库构建中特别使用的是能使核酸连接到其表达的多肽上的筛选展示系统。正如本文所使用的，筛选展示系统是借由合适的展示手段，通过与通用的和/或靶配体结合从而对库的各个成员进行筛选的系统。
分离所需大库成员的筛选方法为本领域所知，代表的如噬菌体展示技术。这种各种肽序列展示在丝状噬菌体表面的系统(Scottand Smith(1990)Science，249：386)，已被证实可用于建立抗体片段(以及编码它们的核苷酸序列)库，这种库用于体外筛选和扩增与靶抗原结合的特异性抗体片段(McCafferty et al.，WO 92/01047)。编码可变域的核苷酸序列被连接到编码引导其进入大肠杆菌周质空间的前导信号的基因片段上，结果得到的抗体片段展示在噬菌体表面，典型的是与噬菌体外壳蛋白(如pIII或pVIII)相融合。或者抗体片段展示在λ噬菌体衣壳外表面(phagebody)。基于噬菌体的展示系统的优点是，由于其为生物系统，所以选定的库成员可仅通过使含有选定库成员的噬菌体在细菌细胞中生长而得以扩增。此外由于编码多肽库成员的所述核苷酸序列包含在噬菌体或噬菌粒载体中，因而序列测定、表达和后续遗传操作相对简单。
噬菌体抗体展示文库和λ噬菌体表达文库的构建方法为本领域所公知(McCafferty et al.(1990)Nature，348：552；Kang et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，88：4363；Clackson et al.(1991)Nature，352：624；Lowman et al.(1991)Biochemistry，30：10832；Burton et al.(1991)Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.，88：10134；Hoogenboom et al.(1991)Nucleic Acids Res.，19：4133；Chang et al.(1991)J.Immunol.，147：3610；Breitling et al.(1991)Gene，104：147；Marks et al.(1991)supra；Barbas et al.(1992)supra；Hawkinsand Winter(1992)J. Immunol.，22：867；Marks et al.，1992，J.Biol.Chem.，267：16007；Lerner et al.(1992)Science，258：1313在此引作参考。
一种特别有利的方法是使用scFv噬菌体文库(Huston et al.，1988，Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.，85：5879-5883；Chaudhary et al.(1990)Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.，87：1066-1070；McCafferty et al.(1990)supra；Clackson et al.(1991)Nature，352：624；Marks et al.(1991)J.Mol.Biol.，222：581；Chiswell et al.(1992)Trends Biotech.，10：80；Marks et al.(1992)J.Biol.Chem.，267)。已描述了展示在噬菌体外壳蛋白的scFv文库的各种实施方案。噬菌体展示方法的改进已为公众所知，例如在WO96/06213和WO92/01047(Medical Research Council et al.)以及WO97/08320(Morphosys)中所述，其在此都引作参考。
其他产生多肽文库的系统涉及为体内合成库成员使用无细胞酶促装置。在一种方法中，通过多轮针对靶配体的筛选和PCR扩增的交替操作，筛选RNA分子(Tuerk and Gold(1990)Science，249：505；Ellington and Szostak(1990)Nature，346：818)。类似的技术可用于鉴别与预先确定的人转录因子结合的DNA序列(Thiesenand Bach(1990)Nucleic Acids Res.，18：3203；Beaudry and Joyce(1992)Science，257：635；WO92/05258 and WO92/14843)。类似地，体外翻译可作为生成大库的方法用于合成多肽。这些一般包括稳定的多核糖体复合物的方法在WO88/08453、WO90/05785、WO90/07003、WO91/02076、WO91/05058和WO92/02536中有进一步描述。如在WO95/22625和WO95/11922(Affymax公司)中公开的非基于噬菌体的可供选择的展示系统，使用多核糖体展示用于筛选的多肽。
进一步的技术分类涉及人工小室里库的筛选，该人工小室允许基因与其基因产品相连接。例如在WO99/02671、WO00/40712和Tawfik & Griffiths(1998)Nature Biotechnol 16(7)，652-6中描述的油包水乳剂形成的微囊中，可筛选其中核酸编码所需基因产品的筛选系统。编码具有所需活性基因产品的遗传因子被分隔进入微囊中，而后在微囊内转录和/或翻译生成其相应的基因产品(RNA或蛋白)。随后对生成具有所需活性基因产品的遗传因子进行分类。该方法通过各种方法检测所需活性以筛选感兴趣的基因产品。
文库构建
用于筛选的文库可使用本领域已知的技术构建，例如如上所述或可商业渠道购买。用于本发明的文库在如WO99/20749中有描述。一旦选定载体系统，并且一种或多种编码感兴趣的多肽的核酸序列被克隆到所述文库载体，则可通过表达前的突变在被克隆的分子内产生多样性；或者如上所述，在突变和额外的几轮筛选前，可表达并筛选被编码的蛋白。通过标准分子方法对编码结构经优化的多肽的核酸序列进行突变。特别使用的是聚合酶链反应，或PCR(Mullis and Faloona(1987)Methods Enzymol.，155：335，本文在此引作参考)。PCR采用由热稳定的，依赖DNA的DNA聚合酶催化若干次循环的DNA复制，扩增感兴趣的靶序列，这在本领域是公知的。各种抗体库的构建已在Winter et al.(1994)Ann.Rev.Immunology 12，433-55及其中引用的文献里进行了讨论。
使用模板DNA(至少1fg，更多地使用1-1000ng)以及至少25pmol的寡核苷酸引物进行PCR；由于每个序列只需库分子的一小部分即可表示，并且在之后的扩增循环中数量受到限制，所以当引物库大部分是异质的时，使用更大量的引物是有利的。典型的反应混合物包括：2μl DNA、25pmol寡聚核苷酸引物、2.5μl10X PCR缓冲液1(Perkin-Elmer，Foster City，CA)、0.4μl 1.25μM dNTP、0.15μl  (或2.5单位)Taq DNA聚合酶(Perkin Elmer，Foster City，CA)，去离子水加至总体积25μl。以矿物油覆盖，使用程序热循环仪进行PCR反应。PCR循环每一步的长度和温度以及循环次数，依据效果的严格要求进行调整。退火温度和时间都是由引物预期与模板结合的效率以及可接受的错配程度来决定的；显然地，当核酸分子同时被扩增和突变时，至少在第一轮合成中的错配是需要的。本领域一般技术人员都具备很好的对严格的引物退火条件进行优化的能力。采用的退火温度为30℃至72℃。模板分子最初变性正常发生在92℃至99℃之间，4分钟，随后是20-40个循环，由变性(94至99℃，15秒至1分钟)，退火(温度如上述讨论确定；1至2分钟)，和延伸(72℃，1-5分钟，取决于所述扩增产物的长度)组成。最后的延伸一般是72℃，4分钟，可能后续还有4℃下不确定(0至24小时)的步骤。
单可变域结合
本发明中有用的免疫球蛋白可变域一旦选定，即可由本领域所知的各种方法结合，包括共价和非共价的方法。优选的方法包括使用多肽接头，如所述的例如与scFv分子连接(Bird et al.，(1988)Science 242：423-426)。接头优选柔性的，允许所述的两个单域相互作用。一种接头的例子是(Gly4 Ser)n接头，其中n＝1至8，例如1、2、3、4、5、6、7或8。还可采用双价抗体中使用的柔性较低的接头(Holliger et al.，(1993)Proc Nat Acad Sci(USA)90：6444-6448)。在一个实施方案中，所采用的接头不是免疫球蛋白铰链区。
可变域可使用非接头的方法结合。例如通过自然生成或人为设计的半胱氨酸残基得到的二硫桥可用于稳定VH-VH、VL-VL或VH-VL二聚体(Reiter et al.，(1994)Protein Eng.7：697-704)，或通过重塑可变域间的界面以改善适配性从而改善相互作用的稳定性(Ridgeway et al.，(1996)Protein Eng.7：617-621；Zhu et al.，(1997)Protein Science 6：781-788)。可采用其他连接或稳定免疫球蛋白可变域的技术，特别是抗体VH域，是适宜的。
配体的表征
配体(例如dAb单体，双特异性配体)结合到其特异性抗原或表位，可通过本领域技术人员熟知的方法包括ELISA，进行检测。在本发明优选实施方案中，使用单克隆噬菌体ELISA对结合进行检测。噬菌体ELISA可依据任何合适的方法进行：典型的方法如下所述。
每轮筛选制得的噬菌体族群可通过ELISA筛选其与选定抗原或表位的结合，从而鉴定多克隆噬菌体抗体。来自这些族群的单个被感染的细菌克隆可随后通过ELISA筛选以鉴定“单克隆”噬菌体抗体。筛选与抗原或表位结合的可溶抗体片段也是理想的，这也可以通过ELISA，使用例如针对C端或N端标签的试剂进行(参见如Winter et al.(1994)Ann.Rev Immunology 12，433-55及其中引用的文献)。
选定的噬菌体单克隆抗体的多样化还可以通过PCR产物的凝胶电泳(Marks et al.1991，supra；Nissim et al.1994 supra)、探针(Tomlinson et al.，1992)J.Mol.Biol.227，776)或通过载体DNA的序列分析来评定。
配体的结构
如果所述免疫球蛋白可变域是从V基因库筛选的，例如使用本文所述的噬菌体展示技术，则这些可变域包含通用框架区(universal framework region)，这样就可以通过本文所述的特异性通用型配体对其进行识别。通用框架区、通用性配体等等的用途在WO99/20749有描述。
如果使用V区基因库，则多肽序列的变化优选位于可变域的环结构。所述可变域多肽序列可以或者用DNA改组技术或者突变来改变，以增强各可变域与其互补对间的相互作用。DNA改组技术是本领域所知的，并且在例如本文所引用的Stemmer，1994，Nature 370：389-391以及美国专利6,297,053中有教导。突变的其他方法为本领域技术人员所熟知。
一般来说，筛选、制备以及形成配体所需的核酸分子和载体构建物可以用如Sambrook et al.(1989)Molecular Cloning：ALaboratory Manual，Cold Spring Harbor，USA.之类的标准实验手册中所述的方法来构建和操作。
典型地用于本发明的核酸的操作是在重组载体上进行的。本文所用的载体指用于将外源DNA引入细胞进行其表达或复制的非连续的元件。这样的载体的筛选、构建，及随后的使用方法已为本领域普通技术人员所熟知。大量载体可以公开获得，包括细菌质粒，噬菌体，人工染色体以及附着体载体。此类载体可用于简单克隆及突变；或者还可以用基因表达型载体。可筛选根据本发明所使用的载体，使其与编码所希望大小的多肽序列多肽相适应，典型的长度是0.25kb至40kb或更长。体外克隆操作后，用载体转化合适的宿主细胞。每个载体含有多种功能构件，一般包括克隆(或多聚接头)位点、复制起点，以及至少一个选择标记基因。如果给定的载体为表达载体，其额外有一个或多个下述构件：增强子元件、启动子、转录终止及信号序列，各自定位于克隆位点的毗连区域，从而可操作地连接到编码根据本发明的配体基因上。
通常情况下，克隆与表达载体都含有使所述载体在一个或多个经筛选的宿主细胞内复制的核酸序列。典型地在克隆载体中，该序列使载体不依赖于宿主染色体DNA而自主复制，并含有复制起点或自主复制序列。各种细菌，真菌以及病毒的此类序列已众所周知。所述质粒pBR322的复制起点适合大多数革兰氏-阴性菌，该2微米的质粒起点适用于酵母，多种病毒起点(如SV40，腺病毒)对哺乳动物细胞中的克隆载体是有用的。总的来说，哺乳动物表达载体不需要复制起点，除非这些用于哺乳动物细胞的复制起点能复制高水平的DNA，比如COS细胞。
有利的是，克隆或表达载体可包含筛选基因，也称为选择性标记物。该基因编码转化的宿主细胞在选择性培养介质中存活或生长所必需的蛋白。没有被含有筛选基因的载体转化的宿主细胞将因此无法在培养介质中存活。典型的筛选基因编码赋予宿主细胞抗抗生素和其它毒素如氨苄西林、新霉素、甲氨蝶呤或四环素性质的蛋白，生长介质中不补充缺少的营养或提供关键的营养成分。
因为编码根据本发明的配体的载体在大肠杆菌中复制最便利，所以大肠杆菌-选择性标记如赋予抗抗生素氨苄西林性质的β-内酰胺酶基因，是有用的。这些可从大肠杆菌质粒获得，如pBR322或如pUC18或pUC19的pUC质粒。
表达载体通常含有启动子，其被宿主机体识别并可操作地连接到感兴趣的编码序列上。这样的启动子可以是是诱导型的或组成型的。术语“可操作地连接”指并列连接，其中所述各构件间的关系使其以预期方式发挥功能。调控序列“可操作地连接”到编码序列，该连接方式是指在适宜于调控序列的条件下实现所述编码序列的表达。
适用于原核宿主的启动子包括如β-内酰胺酶和乳糖启动子系统、碱性磷酸酯酶、色氨酸(trp)启动子系统，以及如tac启动子的杂合启动子。在细菌系统中应用的启动子通常还含有可操作地连接到所述编码序列的Shine-Delgarno序列。
优选的载体为表达载体，其使得对应于多肽库成员的核酸序列的表达成为可能。因此用第一和/或第二抗原或表位的筛选可通过分离增殖，表达多肽库成员的单克隆的表达，或利用任何筛选展示系统进行。如前所述，优选的筛选展示系统为噬菌体展示系统。因此可利用噬菌体或噬菌粒载体，如pIT1或pIT2。本发明中有用的前导序列包括pelB、stII、ompA、phoA、bla和pelA.。一个例子是噬菌粒载体，其具有大肠杆菌.复制起点(用于双链复制)，还有噬菌体复制起点(用于单链DNA的生成)。此类载体的操作及表达在本领域众所周知(Hoogenboom and Winter(1992)supra；Nissim et al.(1994)supra)。简而言之，所述载体含有β-内酰胺酶基因，使噬菌粒具有选择性，以及表达盒上游的lac启动子，该表达盒(N端至C端)由pelB前导序列(其引导表达的多肽进入周质空间)，多克隆位点(用于克隆所述文库成员的核酸序列)，任选的一个或多个肽标签(检测用)，任选的一个或多个TAG终止密码子以及噬菌体蛋白pIII组成。因此，使用多种抑制型和非抑制型大肠杆菌株，加入葡萄糖，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)或辅助噬菌体如VCS M13，所述载体能象质粒那样无表达地复制，仅产生大量的多肽库成员或产生噬菌体，其中有些含有至少一个拷贝的融合在其表面的多肽-pIII。
采用常规连接技术构建编码根据本发明配体的载体。被分离的载体或DNA片段被切割、剪裁，以所需形式再连接，从而生成所需载体。如果需要，可用已知的方法进行分析，以确认正确的序列出现在所构建的载体中。构建表达载体，体外制备转录产物，将DNA导入到宿主细胞，进行分析以评价表达和功能的合适方法为本领域技术人员所知。用如Southern或Northern分析法，Western印迹，DNA、RNA或蛋白的斑点杂交技术，原位杂交技术，免疫细胞化学，或核酸或蛋白分子的序列分析的常规方法来检测样品中基因序列的出现，或对其扩增和/或表达进行定量分析。本领域技术人员容易想象，如果需要则可如何调整这些方法。
骨架
如上所述，骨架起源可基于免疫球蛋白分子或非免疫球蛋白。优选的免疫球蛋白骨架，如本文所定义，包括任意一种或多种选自下述的骨架：免疫球蛋白分子，其包含至少(i)抗体的CL区(κ或λ亚类)；或(ii)抗体重链的CH1区；包含抗体重链CH1与CH2区的免疫球蛋白分子；包含抗体重链CH1、CH2和CH3区的免疫球蛋白分子；或任意与抗体CL(κ或λ亚类)区相关联的亚类(ii)。域的这样的组合可如模拟天然抗体，比如IgG或IgM，或其片段，如Fv、scFv、Fab或F(ab’)2分子。本领域所属的技术人员应知道，该列举并非穷举。
蛋白支架
每个表位结合域都含有蛋白支架以及一个或多个CDRs，其涉及该域与一个或多个表位间的特异性相互作用。有利的是根据本发明的表位结合域含有三个CDRs。合适的蛋白支架包括任意选自下列的蛋白支架：基于免疫球蛋白域的，基于纤连蛋白的，基于亲和体的，基于CTLA4的，基于如GroEL的分子伴侣的，基于脂笼蛋白，以及基于细菌Fc受体SpA与SpD的蛋白支架。本领域所述的技术人员应该明白，该列举并非穷举。
构建配体中使用的支架
主链构象的选择
免疫球蛋白超家族成员的多肽链都具有相似的折叠。例如尽管就其一级序列而言抗体是高度多样的，序列比较和晶体结构已揭示，与预期相反，抗体的6个抗原结合环区中的5个(H1、H2、L1、L2、L3)采取了有限数量的主链构象，或典型结构(Chothia and Lesk(1987)J.Mol.Biol.，196：901；Chothia et al.(1989)Nature，342：877)。因此对环长度与关键残基的分析已能预测在大部分人抗体中发现的H1、H2、L1、L2与L3的主链构象(Chothia et al.(1992)J.Mol.Biol.，227：799；Tomlinson et al.(1995)EMBO J.，14：4628；Williams et al.(1996)J.Mol.Biol.，264：220)。尽管就序列，长度和结构而言，H3区更多样化(因为D片段的使用)，但对于短的环，它还是形成了有限数量的主链构象，这取决于所述环和抗体框架中关键位置特定残基的长度、出现或残基类型(Martin et al.(1996)J.Mol.Biol.，263：800；Shirai et al.(1996)FEBS Letters，399：1)。
可以设计配体和/或域的库，其中某些环的长度和关键残基已经过筛选，以确保成员的主链构象是已知的。有利的是，如前所述这些是自然界中发现的免疫球蛋白超家族分子的真正构象，以使其处于非功能状态的机会最小化。种系V基因片段用作构建抗体或T-细胞受体库的合适的基本框架；其它序列也有用处。低频率的变化可能会发生，这样少量功能性成员可能具有不影响其功能的改变了的主链构象。
经典结构理论也可用于估计配体编码的不同主链构象的数量，以预测基于配体序列的主链构象，并选择不影响典型结构的多样化的残基。众所周知，在人的Vκ区中，所述L1环可采用四个典型结构之一，所述L2环具有单一的典型结构，对L3环而言，有90％人的Vκ区采用了四个或五个典型结构之一(Tomlinson et al.(1995)supra)；因此，仅在Vκ区，不同的典型结构能结合产生一系列不同的主链构象。鉴于Vλ区编码不同系列的L1，L2和L3环典型结构，Vκ与Vλ区能与编码H1和H2环几种典型结构的任何VH区配对，观察到的这五个环的典型结构组合的数量是非常巨大的。这意味着，主链构象中多样性的产生对广泛的结合特异性的产生可能是必须的。然而，通过构建基于单一已知主链构象的抗体库已发现，与预期相反，对于产生实质上以所有抗原为靶向的足够多的多样性而言，主链构象的多样性并不是必需的。更让人惊讶的是，所述的单一主链构象不必是共有结构--单一的自然出现的构象可用作为整个库的基础。因此，在优选方面，本发明的所述双特异性配体具有单一已知的主链构象。
选定的所述单一主链构象优选所讨论的所述免疫球蛋白超家族类型分子中的普通构象。观测到的大量自然产生的分子所采取的构象是普通构象。因此，在本发明优选的方面中，对于免疫球蛋白的每个结合环区而言，所述自然产生的不同主链构象可分别考虑，然后选定具有不同环主链构象的所需组合的自然产生的可变域。如果没有自然产生的可变域，则可选择最接近的等价物。优选的是，不同环主链构象的所需组合是通过选择编码所需主链构象的种系基因片段创建的。更优选的是，所述选定的种系基因片段在自然界上被频繁表达。最优选的是，它们是所有天然种系基因片段的被最频繁表达的那些。
在设计的配体(如dAbs)或其库中，对于所述六个抗原结合环区的每个而言，可分别考虑不同主链构象的发生率。对H1、H2、L1、L2和L3而言，选择20％到40％的自然产生分子的抗原结合环区所采用的特定构象。典型地，选定构象的观测到的发生率大于35％(即35％到100％)，理想的是50％以上或甚至65％以上。因为绝大部分的H3环区不具有典型结构，所以优选显示出典型结构的那些环中常见的主链构象。所以对于各个所述的环而言，选择天然库中最常观测到的构象。在人的抗体中，每个环最常见的典型结构(CS)如下：H1-CS 1(表达库的79％)，H2-CS 3(46％)，Vκ的L1-CS 2(39％)，L2-CS 1(100％)，Vκ的L3-CS 1(36％)(计算时假定κ:λ比为70:30，Hood et al.(1967)Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.，48：133)。对于有典型结构的H3环，从残基94至101有一盐桥的7个残基的CDR3长度(Kabat et al.(1991)Sequences of proteins ofimmunological interest，美国卫生福利部)看来是最常见的。EMBL数据库中有至少16个人抗体序列有所需H3长度和关键残基，以形成该构象，蛋白质数据库中有至少两种晶体结构可用作抗体模建的基础(2cgr与1tet)。具有这种经典结构组合的最频繁表达的种系基因片段为VH片段3-23(DP-47)、JH片段JH4b、Vκ片段O2/O12(DPK9)和Jκ片段Jκ1。VH片段DP45与DP38也是合适的。这些片段因此可在组合中使用，作为构建具有所需单一主链构象的库的基础。
或者对于每个所述结合环而言，不是以自然产生的不同主链构象为基础分别选择所述单一主链构象，而是以自然产生的主链构象的组合作为选择单一主链构象的基础。就抗体而言，例如可以确定任意两个、三个、四个、五个或全部六个抗原结合环的天然产生的典型结构组合。此处优选的是所述选定的构象在自然产生的抗体中是常见的，最优选的是所述选定的构象是天然库中最频繁观察到的。因此，在人抗体中，例如当考虑到五个抗体结合环，H1、H2、L1、L2与L3的自然结合时，可确定典型结构的最经常的组合，然后与H3环的最常见构象相组合，作为选择所述单一主链构象的基础。
典型序列的多样化
已选定几种已知的主链构象，或优选单一已知的主链构象，为了生成具有结构和/或功能多样性的库，本发明的配体(如dAbs)或库可通过变化所述分子的结合位点进行构建。这意味着生成了具有足够的结构和/或功能多样性的变体，这样所述变体能提供一系列活性。
所述的所需多样性典型地通过在一个或多个位置改变所选定的分子而产生。将要变化的位置可以以随机或优选的方式选择。所述改变可随后或者通过随机化过程，其中所述特定位置的氨基酸被任意氨基酸或其天然的或合成的类似物取代，从而产生非常大量的突变，或者被限定的一小组氨基酸中的一个或多个取代，从而产生数量上更为有限的变体。
经报导了多种方法引入此种多样性。易错PCR法(Hawkinset al.(1992)J.Mol.Biol.，226：889)，化学诱变(Deng et al.(1994)J.Biol.Chem.，269：9533)或细菌突变株(Low et al.(1996)J.Mol.Biol.，260：359)可用于将随机突变引入编码所述分子的基因中。选定位置突变的方法已经为本领域所公知，包括错配寡核苷酸或简并寡核苷酸的应用，使用或是不使用PCR。例如通过针对所述抗原环进行靶突变已建立了几个合成的抗体库。人破伤风类毒素-结合Fab的H3区已经随机突变，形成一系列新结合特异性(Barbas et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4457)。随机或半随机突变H3与L3区已连接到种系V基因片段以制备具有未突变框架区的大库(Hoogenboom & Winter(1992)J.Mol.Biol.，227：381；Barbas et al.(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89：4457；Nissim et al.(1994)EMBO J.，13：692；Griffiths et al.(1994)EMBO J.，13：3245；De Kruif et al.(1995)J.Mol.Biol.，248：97)。此种多样化已扩展到包括一些或所有的其它抗原结合环(Crameri et al.(1996)NatureMed，2：100；Riechmann et al.(1995)Bio/Technology，13：475；Morphosys，WO97/08320，supra)。
因为环随机突变可能仅对H3就创建大约超过1015个结构，对其它五个环创建类似的大量突变体，所以用当前的转化技术或甚至用无细胞系统以产生代表所有可能组合的库是不可行的。例如在迄今为止构建的最大的库之一中，生成了6 x 1010个不同的抗体，对该设计得到的库而言，这只是可能的多样性的一部分(Griffiths et al.(1994)supra)。
优选地，仅直接涉及创建或修饰所述分子的所需功能的所述残基被多样化。对许多分子而言，该功能是与靶结合，因此多样性应集中于该靶结合位点，同时避免改变对所述分子整体装配或维持选定的主链构象关键的残基。
用于抗体域时典型序列的多样化
就基于抗体的配体(如dAbs)而言，所述靶标结合位点最经常是抗原结合位点。因此优选只有抗原结合位点中的那些残基发生变化。这些残基在所述人抗体库中是非常多样化的，并且已知与高溶解性的抗体/抗原复合体相接触。例如在L2中，已知位置50和53在自然产生的抗体中是多样化的，观测到其与抗原相接触。相比之下，常规方法已使Kabat et al.定义的相应互补决定区(CDR1)中所有残基多样化，与所述的两个相比，根据本发明使用的所述库中大约7个残基多样化。这表明就为产生一系列抗原结合特异性所需的功能多样性而言，有显著的进步。
自然界中抗体多样性是两个过程的结果：种系V，D，J基因片段的体细胞重组，以创建初始的原始文库(所谓的种系与连接多样性)，以及所述得到的重排V基因的体细胞超变异。人抗体序列的分析已表明，原始文库的多样性集中于抗原结合位点的中心，而体细胞的超变异将多样性扩展至原代库中高度保守的抗原结合位点的外围(参见Tomlinson et al.(1996)J.Mol.Biol.，256：813)。该互补性或许已经发展成有效的序列空间搜索策略，虽然显然为抗体独有，但其可容易地应用于其它多肽库。所述经变化的残基是那些形成与靶的结合位点的子集。如果需要，靶结合位点中残基的不同(包括重叠部分)子集是在筛选过程的不同阶段被多样化的。
关于抗体库，可以建立最初的“初始”库，其中抗原结合位点中的一些而非全部的残基被多样化。此处上下文使用的术语“初始”指没有预先确定的靶的抗体分子。这些分子类似于没有经历免疫多样化的个体的免疫球蛋白基因编码的分子，就如同胎儿或新生个体一样，其体内免疫系统尚未被各种各样的抗原刺激物刺激过。该库可随后针对一系列抗原或表位进行筛选。如果需要，则所述初始库中经多样化的区域的外围可引入进一步的多样性。可对该成熟的库筛选修饰过的功能，特异性或亲和力。
用于配体构建的结合域的初始库，其中所述抗原结合位点中的一些或所有残基发生变化，该初始库为本领域所知。(参见WO2004/058821、WO2004/003019和WO03/002609)。该“原始”文库模拟天然的原始库，具有的多样性局限于抗原结合位点中心的残基，所述抗原结合位点在所述种系V基因片段中多样化(种系多样性)，或在所述重组过程中被多样化(连接多样性)。被多样化的那些残基包括但不限于：H50、H52、H52a、H53、H55、H56、H58、H95、H96、H97、H98、L50、L53、L91、L92、L93、L94和L96。在所述“体细胞”库中，多样性局限于重组过程中被多样化的(连接多样性)或高度体细胞突变的残基。那些被多样化的残基包括但不限于：H31、H33、H35、H95、H96、H97、H98、L30、L31、L32、L34和L96。以上所列的适于在这些库中多样化的所有残基已知与一个或多个抗体抗原复合物相接触。因为在这两个库中，并非所有的抗原结合位点中的残基被改变，所以如果需要，可在筛选过程中通过改变其余的残基得到额外的多样性。任何这些残基的任何子集(或包括所述抗原结合位点的额外的残基)可用于所述抗原结合位点的初始的和/或随后的多样化，这对本领域技术人员应该是显而易见的。
在本发明所用的库的构建中，选定位置的多样化典型地在核酸水平实现，通过改变详细说明多肽序列的编码序列，从而在该位置包含大量的可能氨基酸(全部20个或其子集)。用IUPAC命名法，用途最多的密码子为NNK，其编码所有的氨基酸残基以及TAG终止密码子。该NNK密码子优选地为引入所需多样性而使用。能获得同样目的的其它密码子也是有用的，包括所述NNN密码子，其导致额外的终止密码子TGA与TAA的产生。
人抗体的抗原结合位点中侧链多样性的特点，是偏好某些氨基酸残基的明显倾向性。如果对在各个所述VH、Vκ和Vλ区中十个最多样化位置的氨基酸组成进行总计，则超过76％的侧链多样性来自仅7个不同的氨基酸残基，这些是：丝氨酸(24％)，酪氨酸(14％)，天冬酰胺(11％)，甘氨酸(9％)，丙氨酸(7％)，天冬氨酸(6％)和苏氨酸(6％)。对亲水残基和可提供主链柔性的小体积残基的这种偏好可能反应了倾向于和广泛的抗原或表位结合的表面的演变，并可有助于解释在初始库中抗体的所需多样性。
因为优选的是模拟氨基酸的这种分布，所以待改变位置的氨基酸分布优选模拟在抗体的抗原结合位点中看到的氨基酸。氨基酸取代中的此种偏好使得针对一系列靶抗原的对某些多肽的筛选更加容易应用到任何多肽库。形成待改变位置的氨基酸分布倾向性有多种方法(包括使用三核苷酸突变，参见WO97/08320)，由于易于合成，所以优选的方法是使用常规的简并密码子。通过将由简并密码子(每个位置单重、双重、三重和四重简并的比率相同)的所有组合编码的氨基酸特征与所用的天然氨基酸比较，可能计算出最具代表性的密码子。密码子(AGT)(AGC)T、(AGT)(AGC)C与(AGT)(AGC)(CT)——分别用IUPAC命名法即DVT、DVC与DVY——是最接近于所需氨基酸特征的密码子：它们编码22％丝氨酸与11％的酪氨酸、天冬酰胺、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、苏氨酸和半胱氨酸。因此优选地，用DVT、DVC或DVY密码子之一在每个多样化的位置构建库。
治疗和诊断组合物及用途
本发明提供包括本发明的配体(如双特异性配体、多特异性配体、dAb单体)和药学上可接受的载体、稀释剂或辅料的组合物，以及采用本发明的所述配体或组合物进行治疗与诊断的方法。根据本发明的方法的配体(如双特异性配体、多特异性配体、dAb单体)可用于体内治疗或预防应用、体内诊断应用等等。
本发明的配体(如多特异性配体、双特异性配体、dAb单体)的治疗和预防用途包括将根据本发明的配体施用于接受的哺乳动物，如人类。双特异性和多特异性配体(如双特异性抗体形式)以很强的亲和力与多聚抗原结合。双特异性或多特异性配体可使两个抗原交联，如在募集细胞毒T细胞以介导肿瘤细胞系的杀伤中。
优选至少90％-95％均质性的大体上纯的如dAb单体的配体施用于哺乳动物，最优选均质性98％-99％或更高的作为药用，尤其所述哺乳动物为人时。一旦如所需地部分纯化或纯化至均质性，则该配体可用于诊断或治疗(包括体外应用)或用于开发和进行检验方法，免疫荧光染色法等等(Lefkovite and Pernis，(1979 and1981)Immunological Methods，Volumes I and II，Academic Press，NY)。
例如发现本发明的配体(如dAb单体)典型地在预防、抑制或治疗炎症或炎症状态，包括急性炎症性疾病和/或慢性炎症性疾病中的用途。还可施用本发明的配体(如dAb单体)以抑制IL-1(如IL-1α和/或IL-1β)与IL-1R1结合而诱导的生物过程。
在本申请中，术语“预防”涉及在疾病诱发前施用所述保护性的组合物。“抑制”指在诱导事件后，但疾病临床出现前施用该组合物。“治疗”涉及疾病症状变得明显后施用该该保护性组合物。
可施用本发明的配体包括dAb单体，以预防、抑制或治疗慢性炎症性疾病，过敏性疾病，癌症，细菌或病毒感染，自身免疫性疾病(其包括但不仅限于I型糖尿病，哮喘，多发性硬化症，系统性红斑狼疮，炎症性肠病(如Crohn病、溃疡性结肠炎)，重症肌无力和Behcet综合征)，银屑病，子宫内膜异位症和腹腔粘连(如腹部手术后)。
可以施用本发明配体包括dAb单体，以预防、抑制或治疗肺炎，慢性阻塞性呼吸系统疾病(如慢性支气管炎、慢性阻塞性支气管炎、肺气肿)，哮喘(如类固醇抗药性哮喘)，肺炎(例如细菌性肺炎，如金黄色葡萄球菌肺炎)，过敏性肺炎，迁延性肺嗜酸性粒细胞浸润症，环境性肺部疾病，支气管扩张症，囊性纤维化，间质性肺疾病，原发性肺动脉高压，肺血栓栓塞症，胸膜异常，纵隔异常，对膈肌异常，通气不足，过度通气，睡眠呼吸暂停，急性呼吸窘迫症候群，间皮瘤，肉瘤，移植排斥反应，移植物抗宿主病，肺癌，过敏性鼻炎，过敏症，石棉肺，曲菌球，曲霉菌病，慢性支气管炎，肺气肿，嗜酸性粒细胞性肺炎，特发性肺纤维化，侵润性肺炎球菌病(IPD)，流行性感冒，非结核性分枝杆菌，胸腔积液，肺尘埃沉着病，肺孢子虫病，肺放线菌病，肺泡蛋白沉积症，肺炭疽，肺水肿，肺栓塞，肺部发炎，肺组织细胞增多症X(嗜酸性肉芽肿)，肺动脉高血压，肺诺卡菌病，肺结核，肺静脉闭塞病，类风湿性肺病，结节病，Wegener肉芽肿病，和非小细胞肺癌。
可以施用本发明配体包括dAb单体，以预防、抑制或治疗流感，呼吸道合胞病毒相关的呼吸系统疾病和病毒性肺(呼吸系统)疾病。
可以施用本发明配体包括dAb单体，以预防、抑制或治疗骨关节炎或炎性关节炎。“炎性关节炎”指在免疫系统引起或加剧关节炎症的那些关节疾病，包括类风湿关节炎、幼年类风湿关节炎、脊柱关节病，如强直性脊柱炎、反应性关节炎、Reiter综合征、银屑病关节炎、银屑病性脊椎炎、肠病性关节炎、肠病性脊柱炎、幼年型脊柱关节病和未分化脊柱关节病。炎性关节炎普遍的特点是滑膜组织浸润和/或关节液被白细胞浸润。
根据本发明的与涉及内吞作用的细胞外靶标(如网格蛋白)结合的配体(双特异性配体、多特异性配体、dAb单体)，可被内吞使其达到细胞内靶标。此外，双或多特异性配体提供了一种方式，通过该方式，能够与细胞内靶标结合的结合域(如dAb单体)可以被传送入细胞内环境。这种战略要求例如具有能使其保持细胞内功能的物理性质的双特异性配体。或者如果最终目的地细胞内功能区隔是氧化性的，则折叠很好的配体可有二硫键。
有利的是，双或多特异性配体可用于靶向至细胞因子受体以及其它的在有机体中的治疗条件下起协同作用的分子。本发明因此提供了使与细胞因子受体或其它分子结合的两个或多个结合域(如dAbs)活性起协同作用的方法，包括施用能与所述两个或多个分子(如细胞因子受体)结合的双或多特异性配体。在本发明的这个方面，该双或多特异性配体可以是任何双或多特异性配体，例如本发明的这个方面涉及VH区和VL区的组合，仅VH区和仅VL区。
在治疗方面的协同作用可以以许多方式实现。例如只有当配体靶向两个靶标时，靶标组合才可能是治疗上有活性的，而单独靶向一个靶标时是没有治疗效果的。在另一实施方案中，单独靶向一个靶标可有一些治疗效果，但与第二个靶一起，则该组合治疗效果协同增加(不仅是加和的效果)。
可获得用于筛选本发明配体在预防或治疗疾病有效性的动物模型系统。易感小鼠中系统性红斑狼疮(SLE)的试验方法已为本领域所知(Knight et al.(1978)J.Exp.Med.，147：1653；Reinerstenet al.(1978)New Eng.J.Med.，299：515)。重症肌无力(MG)是通过用来自另一物种的可溶性AchR蛋白诱发疾病，在SJL/J雌性小鼠上试验的(Lindstrom et al.(1988)Adv.Immunol.，42：233)。通过注射II型胶原，在敏感品系的小鼠上诱发关节炎(Stuart et al.(1984)Ann.Rev.Immunol.，42：233)。对通过注射分枝杆菌热休克蛋白在易感大鼠上诱发的佐剂性关节炎模型已有描述(Van Edenet al.(1988)Nature，331：171)。如同所述的，通过施用甲状腺球蛋白诱发小鼠甲状腺炎(Maron et al.(1980)J.Exp.Med.，152：1115)。胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)自然发生或如Kanasawa等(1984，Diabetologia，27：113)所述的可在某些品系的小鼠上被诱发。小鼠与大鼠的EAE作为人MS的模型。在此模型中，脱髓鞘疾病是通过施用髓鞘碱性蛋白诱发的(参见Paterson(1986)Textbook of Immunopathology，Mischer et al.，eds.，Grune and Stratton，New York，pp.179-213；McFarlin et al.(1973)Science，179：478；  以及Satoh et al.(1987)J.Immunol.，138：179)。其它合适的模型在本文中有描述。
总的来说，所述配体以纯化的形式与药理学上合适的载体一起使用。典型地，这些载体包括：水性或醇性/水性溶液，乳液或混悬液，包括盐水和/或缓冲介质。肠道外赋形剂包括：氯化钠溶液，林格氏液葡萄糖，葡萄糖与氯化钠以及乳酸林格氏液。如果需要保持多肽复合物处于混悬态，合适的生理上可接受的赋型剂可以选用如羧甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、明胶和海藻酸盐的增稠剂。
静脉注射赋型剂包括如那些基于林格氏液葡萄糖的流体和营养补充剂以及电解质补充剂。还可以有如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂和惰性气体的防腐剂和其他添加剂。处方取决于给药途径，各种合适的处方均可使用，包括缓释处方(参见如Mack(1982)Remington′s Pharmaceutical Sciences，16th Edition.)。
所述配体(如dAb单体)可以与一个或多个额外治疗剂或活性物质一起施用和/或配制。当配体与其它治疗剂施用时，该配体可以在其它治疗剂施用之前、同时或之后施用。总的来说，该配体(如dAb单体)和其它物质以提供治疗效果重合的方式施用。可与本发明配体一起施用或配制的其它成分包括，例如免疫治疗药，如环孢菌素、甲氨蝶呤、阿霉素或顺铂，抗生素，抗真菌药，抗病毒药和免疫毒素。
例如，当施用拮抗剂以预防、抑制或治疗肺部炎症或呼吸系统疾病的时候，可以与磷酸二酯酶抑制剂(如磷酸二酯酶4抑制剂)，支气管扩张剂(如β2-受体激动剂、抗胆碱能药物、茶碱)，短效β-受体激动剂(如沙丁胺醇、沙丁胺醇、班布特罗、非诺特罗、乙基异丙肾上腺素(isoetherine)、异丙肾上腺素、左旋沙丁胺醇、间羟异丙基肾上腺素、吡布特罗、特布他林和比托特罗)，长效β-受体激动剂(如福莫特罗和沙美特罗)，短效抗胆碱能药物(如异丙托溴铵和氧托溴铵)，长效抗胆碱能药物(如噻托溴铵)，茶碱(如短效制剂、长效制剂)，吸入性类固醇(如倍氯米松、布地奈德、氟尼缩松、氟替卡松丙酸酯和曲安奈德)，口服类固醇(如甲基强的松龙，强的松龙，氢化泼尼松和泼尼松)，短效β-受体激动剂与抗胆碱能药物(如沙丁胺醇/舒喘宁/异丙阿托品，和非诺特罗/异丙阿托品)联合，长效β-受体激动剂与吸入性类固醇(如沙美特罗/氟替卡松，和福莫特罗/布地奈德)和溶黏液剂(如厄多司坦、乙酰半胱氨酸、溴己新(bromheksin)、羧甲司坦、愈创木酚甘油醚(guiafenesin)和碘化甘油)。
当施用所述拮抗剂以预防、抑制或治疗关节炎(如炎性关节炎(如类风湿性关节炎))时，其可以与病症缓解性抗风湿药(如甲氨蝶呤、羟氯喹、柳氮磺胺吡啶、来氟米特、硫唑嘌呤、D-青霉胺、金制剂(口服或肌肉注射)、米诺环素、环孢菌素、葡萄球菌蛋白A)，非甾体抗炎药(如COX-2选择性非甾体抗炎药，如罗非昔布)，水杨酸类药物，糖皮质激素(如强的松)和镇痛药合用。
药物组合物可包括各种细胞毒或其它物质与本发明配体合用的混合物，或甚至是根据本发明的具有不同特异性的配体的合用，如用不同的靶抗原或表位筛得的配体，无论它们在施用前是否混合。
依据本发明的药物组合物的给药途径可以是本领域所属普通技术人员通常所知的任何给药途径。出于治疗目的，包括但不限于免疫治疗，本发明选定的配体可以根据标准技术施用于任何患者。可以以任何合适的方式给药，包括肠道外(如静脉注射、肌肉注射、腹腔内、关节内、鞘内注射)，透皮吸收，经肺给药，或者还可以，恰当地通过导管直接灌注。给药剂量与频率取决于年龄，性别和患者状态，其它药物的共同给药情况，禁忌症和临床医生需考虑的其他参数。按指导给药可以是局部的(如通过肺部给药局部传送到肺，如鼻腔内给药)或全身给药。
本发明的配体可以冻干存储，使用前在合适的载体中重建。该技术已证明对常规免疫球蛋白是有效的，可以用本领域已知的冻干与重建技术。本领域技术人员应该理解，冻干和重建可导致不同程度的抗体活性损失(例如用常规免疫球蛋白，IgM抗体的易于产生比IgG更大的活性损失)，并且可能要上调使用水平以补偿该损失。
可以施用含有本发明拮抗剂(如配体)或其混合物的组合物，以进行预防性和/或治疗性治疗。在某些治疗应用中，实现选定细胞群落被至少部分抑制、抑制、调节、杀伤的足够量，或一些其它可测量参数，被定义为“治疗有效量”。例如为治疗肺部炎症和/或呼吸道疾病，抑制痰的量，抑制支气管活检炎症的量，抑制呼吸困难的量，增加第1秒钟用力呼吸容积的量，提高健康状况改善的量，如St.George呼吸疾病问卷的合适问卷中量化的量(如4分的改善分值)可施用于病患。在另一实施例中，为治疗关节炎(如炎性关节炎(如类风湿性关节炎))，可以施用足以使美国风湿病学会核心设置指标中至少三项实现20％或更大改善的量(Felson et al.，Arthritis and Rheumatism，38：727-735(1995))。
达到该剂量所需的量取决于疾病的严重程度和患者的一般状态，包括患者的年龄、性别、体重、一般健康状况(如患者免疫系统状态)。基于这些和其它合适的标准，熟练的医师可以确定要施用的配体的合适量。通常情况下，所述数量范围为，每公斤体重0.005至5.0mg配体，更常用的剂量为0.05至2.0mg/kg/剂量。就预防应用而言，含有本发明配体或其混合物的组合物还可以以相似略低的剂量施用，以预防、抑制或延迟疾病的发生(如持续缓解或保持稳定，或预防急性期)。熟练的医师能确定合适的剂量间隔以治疗、抑制或预防疾病。施用本发明配体可多达每天4次，每周2次，每周1次，每隔两个星期1次，每月1次，或每隔两个月1次，给药剂量如大约10μg/kg至大约80mg/kg、大约100μg/kg至大约80mg/kg、大约1mg/kg至大约80mg/kg、大约1mg/kg至大约70mg/kg、大约1mg/kg至大约60mg/kg、大约1mg/kg至大约50mg/kg、大约1mg/kg至大约40mg/kg、大约1mg/kg至大约30mg/kg、大约1mg/kg至大约20mg/kg、大约1mg/kg至大约10mg/kg、大约10μg/kg至大约10mg/kg、大约10μg/kg至大约5mg/kg、大约10μg/kg至大约2.5mg/kg、大约1mg/kg、大约2mg/kg、大约3mg/kg、大约4mg/kg、大约5mg/kg、大约6mg/kg、大约7mg/kg、大约8mg/kg、大约9mg/kg或大约10mg/kg。在具体实施方案中，施用配体以治疗、抑制或预防慢性炎症疾病，每隔两周一次每月一次，剂量大约10μg/kg至大约10mg/kg(如大约10μg/kg，大约100μg/kg，大约1mg/kg，大约2mg/kg，大约3mg/kg，大约4mg/kg，大约5mg/kg，大约6mg/kg，大约7mg/kg，大约8mg/kg，大约9mg/kg或大约10mg/kg)。
如果相对于治疗前出现的此类症状，或相对于没有用该组合物治疗的个体(人或模型动物)或其它合适对照中的此类症状，减少了一个或多个症状(如减少至少10％或临床评价表上至少一个点)，则用本文描述的组合物进行治疗被视为“有效”。虽然针对的疾病不同症状会明显不同，但普通熟练的临床医师或技术人员能判断出来。对此类症状的判断可以例如通过监测疾病的一个或多个生化指标水平(如与所述疾病相关的酶或代谢物水平，受影响的细胞数等)，通过监测身体表现(如炎症、肿瘤大小等)，或者通过被接受的临床评分，例如扩展病残状态评分(用于多发性硬化)，Irvine炎症性肠病问卷(以32分评价对关于肠功能，全身症状，社会功能和情绪状况的生活质量进行评估--分值范围从32到224，分值越高表明生活质量越好)，类风湿性关节炎生活质量量表，美国风湿病学会核心设置指标，或其它本领域已知的可接受的临床评估。疾病症状的持续(如一天或多天，优选更长时间)减少至少10％或给定的临床量表上减少一分或多分意味着“有效”治疗。类似地，如果相对于没有用所述化合物治疗的类似个体(人或动物)中的此种症状而言，一个或多个症状的出现或严重程度被延迟、减少或消除，则用本发明所述的组合物进行预防是有效的。
含有根据本发明的配体或其混合物的组合物，可用在预防以及治疗设置上，以辅助改变、灭活、杀伤或移除哺乳动物中选定的靶细胞群落。此外，本文所述选定的多肽库可在体外使用或体外有选择的杀伤、消耗或从异源细胞集合中有效除去靶细胞群落。按照标准技术，哺乳动物的血液可在体外与配体，如抗体、细胞表面受体或其结合蛋白结合，从而杀死不需要的细胞或将其从血液中移除，再使血液回到哺乳动物。
含有根据本发明的拮抗剂(如配体)的组合物可用于预防及治疗设置上，以辅助改变、灭活、杀伤或移除哺乳动物中选定的靶细胞群落。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗、抑制或预防慢性炎症疾病的方法，包含将治疗有效剂量或数量的本发明配体施用于对其有需求的哺乳动物。
在一个实施方案中，本发明提供了治疗、抑制或预防关节炎(如炎性关节炎(如类风湿性关节炎，幼年类风湿性关节炎，脊柱关节病，如强直性脊柱炎、反应性关节炎、Reiter综合征、银屑病关节炎、银屑病性脊椎炎、肠病性关节炎、肠病性脊柱炎、幼年型脊柱关节病和未分化脊柱关节病))的方法，包括将治疗有效剂量或数量的本发明的配体施用于对其有需要的哺乳动物。
在另一实施方案中，本发明提供了治疗、抑制或预防炎症性肠病(如Crohn病、溃疡性结肠炎)的方法，包括将治疗有效剂量或数量的本发明的配体施用于对其有需求的哺乳动物。
实施例
实施例1
方法
选择与筛选
对于初筛，Vκ域抗体单体4G-K2库用IL-1R1-Fc融合蛋白进行淘选(Axxora，Nottingham，UK)。初筛得到的域抗体进行三轮进一步的筛选。第1轮用蛋白G包被的磁珠(Dynal公司，Norway)和100nM IL-1R1-Fc筛选；第2轮用抗人IgG磁珠(Novagen，Merck Biosciences，Nottingham，UK)和10nM IL-1R1-Fc筛选；第3轮用蛋白G磁珠和1nM IL-1R1-Fc筛选。(Henderikx et al.，Selection of antibodies against biotinylated antigens.Antibody Phage Display：Methods and protocols，Ed.O′Brien andAtkin，Humana Press(2002).)。各阶段的洗脱用1mg/ml胰蛋白酶-磷酸盐缓冲液(PBS)进行。对于亲和力成熟筛选，使用了上述方法，但是做了如下改动：使用蛋白G磁珠进行了两轮筛选，第1轮用了1nM IL-1R1-Fc，第2轮用了100pM IL-1R1-Fc。通过质粒提取(Qiagen)分离筛选得到(第2、3轮)的噬菌体载体，用Sal I与Not I进行限制性内切，释放dAb插入片段。该插入片段连接到噬菌体表达载体(Sal I/Not I酶切pDOM5)，转化大肠杆菌菌株HB2151，用于dAb的可溶性表达和筛选。
上清液受体结合分析(RBA)
挑取单个转化的大肠杆菌菌落于含添加100μg/ml羧苄青霉素和0.1％(w/v)葡萄糖的2xTY的96孔板中，37℃生长至约OD600＝0.9，用1mM IPTG诱导。在受体结合分析中检测30℃诱导过夜后的上清液抑制IL-1β与ELISA板捕获的IL-1R1结合的能力。简而言之，MaxiSorpTM免疫分析板(Nunc公司，Denmark)与抗IL-1RI小鼠单克隆抗体(R&D Systems，Minneapolis，USA)共同孵育过夜。各孔用含0.1％(v/v)Tween-20的磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤，用含1％(w/v)BSA的PBS封闭，而后与重组IL-1RI(500ng/ml，R&D Systems)孵育。含待筛选dAbs的大肠杆菌培养上清液置于洗过的检测板孔中，该板室温孵育30min，然后将IL-1β(4ng/ml，R&D Systems)加入各孔并混合。用生物素酰化的抗IL-1β抗体(R&D Systems)检测IL-1β结合，接着加入过氧化酶标记的抗生物素抗体(Stratech，Soham，UK)，然后与3，3′，5，5′-四甲基对二氨基联苯(TMB)底物(KPL公司，Gaithersburg，USA)孵育。加入HCl终止反应并在450nm处读取吸收值。抗L-1RI dAb的活性引起IL-1β结合的减弱，因此与仅有IL-1β的对照相比吸收减弱。
细胞分析
检测经分离的dAbs抑制IL-1诱导的经培养MRC-5细胞(ATCC目录号：CCL-171)释放IL-8的能力。简而言之，RPMI介质中5000个胰蛋白酶消化的MRC-5细胞置于组织培养微孔板，用IL-1α或IL-1β(R&D Systems，终浓度200pg/ml)和待检测的dAb稀释液混合。混合物37℃孵育过夜，细胞释放到培养介质中的IL-8用ELISA(
Figure A200680051883D01381
R&D Systems)定量。抗IL-1RI dAb的活性引起与IL-1结合减弱，以及相应的IL-8释放减少。
人全血分析
人的全血与待检测dAB的系列稀释液一起孵育，混合物在37℃/5％ CO2孵育30分钟。接着加入270或900pM(终浓度)的IL-1α或IL-1β并混合，然后混合物在37℃/5％ CO2继续孵育20小时。随后将血离心(500 x g，5min)，ELISA(
Figure A200680051883D0138164503QIETU
，R&D Systems)法定量释放到上清液中的IL-6。抗IL-1RI dAb的活性引起IL-1结合减弱，以及相应的IL-6释放减少。
解离速率筛选
这些实验是使用偶联有～600RU的IL-1RI(R&D Systems)的CM5芯片(Biacore)在BIACORE 3000表面等离子共振仪上进行的。分析物流经IL-1RI包被的流动池，以空白流动池为线内参比，在HBS-EP运行缓冲液(Biacore)中的流速为30μl/min。含有可溶性dAb的10微升上清液用运行缓冲液以1:1稀释，以10μl/min流速注入(Kinject)，并允许其在缓冲液中解离。相比母本克隆，解离速率改善的克隆用肉眼鉴别或用BIAevaluation软件v4.1测定。
用表面等离子共振分析IL-1a竞争
这些实验是使用偶联有～600RU的IL-1RI(R&D Systems)的CM5芯片(Biacore)在BIACORE 3000表面等离子共振仪上进行的。分析物流经IL-1RI包被的流动池，以空白流动池为线内参比，在HBS-EP运行缓冲液(Biacore)中流速为30μl/min。IL-1ra(100nM，R&D Systems)在60秒内注入，接着立即在60秒内用共注射装置注入200nM DOM4-130-3dAb或100nM IL-1α。
IL-1ra竞争ELISA
MaxiSorpTM免疫分析板(Nunc，Denmark)用1μg/ml IL-1R1-Fc包被过夜，然后用PBS洗涤3次，再用1％(v/v)Tween 20的PBS封闭。再次洗涤免疫分析板，加入与DOM4-130-3或IL-1α系列稀释液混合的500pM IL-1ra。用生物素酰化的抗IL-1ra抗体
Figure A200680051883D01391
R&D Systems)检测IL-1ra与受体的结合，随后如前所述加入链霉亲和素-HRP，用3，3′，5，5′-四甲基对二氨基联苯(TMB)底物(KPL，Gaithersburg，USA)显色。与不含IL-1ra的对照孔相比，A450的减少表明与IL-1ra竞争和IL-1R1的结合。
亲和力成熟噬菌体库的构建
构建了两种类型的库：CDR重新多样化库和错配库。对于前者，用含NNK或NNS密码子的简并寡核苷酸进行PCR反应，使亲和力待成熟的dAb中所需位置多样化，然后通过组装PCR生成全长多样化插入片段。对于错配库，用
Figure A200680051883D01401
 II随机诱变试剂盒(Stratagene)对编码待亲和力成熟的质粒DNA进行PCR扩增。这两种方法生成的插入片段用Sal I与Not I酶切，与经切割的噬菌体载体连接。该连接物通过电穿孔转化大肠杆菌菌株TB1，被转化的细胞置于含15μg/ml四环素的2xTY琼脂平板上，生成>1×108克隆规模的库。
结果
初筛与筛选
初步噬菌体筛选用4G-K2库进行，将筛得物亚克隆到可溶性表达载体(pDOM5)中。用上清液RBA鉴定抑制IL-1与IL-1R1结合的dAb克隆，随后表达，用蛋白L纯化，在MRC-5细胞分析中测试其抑制IL-1诱导的IL-8释放的能力。图1是这样的细胞分析中抗-IL-1R1 dAbDOM4-122和DOM4-129量效曲线。本分析中每种dAb的半数中和量(ND50)为约1μM。DOM4-122和DOM4-129就其CDRs 1和2而言有相同的氨基酸序列，就其CDR3而言5个氨基酸残基中有两个相同，因此预期DOM4-122和DOM4-129能与受体上相同的表位结合。
亲和力成熟
成熟阶段I
以DOM4-122为模板，构建成熟库，该库具有在位置28、30、31、92和93处编码全部20个氨基酸的多样性。同时DOM4-129通过错配PCR诱变实现亲和力成熟。得到的噬菌体库用于针对IL-1R1-Fc的可溶性筛选。第2和第3轮筛得物克隆到噬菌体表达载体(pDOM5)中，dAbs在大肠杆菌中表达，以母本dAb为对照，筛选解离速率提高的表达上清液中的dAb。解离速率改善的克隆被表达，纯化并在MRC-5/IL-8分析中检测。图2展示了改进的变体DOM4-122-3和DOM4-129-1的量效曲线，两者的ND50值都为～10nM。
成熟阶段II
通过CDRs1和3重新多样化实现的抗IL-1R1 dAb DOM4-122(ND50～1μM)亲和力成熟阶段I生成了DOM4-122-6(～10nM)。通过错配PCR的DOM4-129(～1μM)的突变生成DOM4-129-1(～10nM)。DOM4-129-1获得额外突变S56R的过程中，DOM4-129-1和DOM4-122-6共同获得了突变L46F。从突变筛选分离的克隆中经常发现这两种变化，因此所述S56R被引入DOM4-122-6，生成DOM4-122-23。该组合变体dAb的ND50为约1nM(图2)。DOM4-122和DOM4-129获得额外点突变K45M经证实在回复到DOM4-122-23时不是必需的，生成DOM4-122-24。
dAbs的表位特异性
为了确定抗-IL-1R1 dAbs的表位特异性，进行了竞争性结合分析。用BIOCORE表面等离子共振仪进行的研究中，注入IL-1ra流经偶联有IL-1R1的芯片，然后立即注入DOM4-122-23或IL-1a。结果见图3A与3B。图3A表明DOM4-122-23与已和IL-1ra结合的IL-1R1结合。注入IL-1ra，接着注入IL-1α，这两种分子已知会竞争与受体的结合，则IL-1α也不能与受体结合(图3B)。本结果用竞争ELISA法得以证实，其中在DOM4-122-23或IL-1a(系列浓度)存在下IL-1ra与IL-1R1结合得到了确认。该ELISA结果表明，DOM4-122-23即便浓度高达1μM时，仍不抑制IL-1ra(500pM)和IL-1R1结合，其中  IL-1a不抑制IL-1ra和IL-1R1结合(图4)。该结果证实DOM4-122-23抑制IL-1和IL-1R1结合，但不会和IL-1ra竞争与IL-1R1的结合。
实施例2蛋白酶稳定性
蛋白酶稳定性
dAbs和含有dAbs的配体可用于治疗多种疾病，如炎症疾病。此外，如本文所述，dAbs以及配体的半衰期可以如通过聚乙二醇化而改变。因而dAbs以及配体可以用于如全身给药(如聚乙二醇化的dAb治疗关节炎)或局部给药(如dAb单体治疗COPD)。
研究了与IL-1R1结合的两种dAb对弹性蛋白酶或胰蛋白酶作用的稳定性。发现这两种蛋白酶自然状态时在肺中处于低水平，但是在如COPD的疾病状态时，弹性蛋白酶等蛋白酶水平升高。本研究中使用了dAB单体DOM4-130-54，和含有一个点突变的DOM4-130-54变体，所述点突变提供了特异性连接PEG的半胱氨酸残基。
将1mg/ml DOM4-130-54的PBS溶液与0.04％胰蛋白酶或弹性蛋白酶(人唾液白细胞弹性蛋白酶购自Elastin ProductsCompany Inc)一起孵育。该dAb/蛋白酶混合物随后在30℃孵育，在规定时间间隔取样(0、1、3和24小时)用于SDS-PAGE分析。在给定的时间点，加入SDS-PAGE上样缓冲液(×10浓储存液)以终止反应，接着在液氮里将样品速冻。样品用SDS-PAGS分析，使蛋白带显色，以揭示dAb的蛋白酶降解的时间过程。
结果
测试了两种形式的DOM4-130-54：大肠杆菌表达的单体以及巴斯德毕赤酵母表达的半胱氨酸基因工程变体P80C，对弹性蛋白酶作用的稳定性。DOM4-130-54的所述P80C点突变提供了特异性连接PEG的半胱氨酸残基。
弹性蛋白酶降解的时间过程揭示了即便是24小时后DOM4-130-54也没有降解的迹象。该结果还表明了与DOM4-130-54相比，引入所述P80C突变对该蛋白的稳定性没有影响。这些结果意味着所述P80C变体的三级结构与DOM4-130-54的三级结构没有实质性差别。
还检测了胰蛋白酶存在下单体dAb DOM4-130-54的稳定性。胰蛋白酶降解的时间过程显示DOM4-130-54可以稳定至少3小时，仅在第24小时这个时间点观察到降解。
本研究的结果表明dAbs是稳定的，耐弹性蛋白酶或胰蛋白酶介导的降解。dAbs对蛋白酶降解作用所显示的稳定性说明dAb可以在体内给药，在足够长的时间内都有功能，从而产生显著的生物效应。例如本结果表明当dAb施用于肺时，可耐蛋白酶降解，并因此保持足够长时间的功能，从而产生显著的生物效应(如结合并抑制如IL-1R1的靶蛋白的活性)。
虽然本发明已详细说明，并以参考其优选实施方案的方式进行描述，但本领域所属的技术人员应该明白，其中可做出的形式及细节的各种变化不偏离所附权利要求包括的本发明的范围。
序列表
<110>Domantis Limited
Drew，Philip D.
de Wildt，Rudolf M.T.
Tomlinson，Ian M.
Basran，Amrik
<120>NONCOMPETITIVE DOMAIN ANTIBODY FORMATS
THAT BIND INTERLEUKIN 1 RECEPTOR TYPE 1
<130>3440.1004002
<150>60/742，062
<151>2005-01-12
<160>997
<170>FastSEQ for Windows Version 4.0
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<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>58
<210>59
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>59
<210>60
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>60
<210>61
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>61
Figure A200680051883D01661
<210>62
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>62
Figure A200680051883D01662
<210>63
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>63
Figure A200680051883D01663
<210>64
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>64
<210>65
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>65
Figure A200680051883D01672
<210>66
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>66
Figure A200680051883D01673
Figure A200680051883D01681
<210>67
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>67
<210>68
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>68
<210>69
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>69
Figure A200680051883D01684
<210>70
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>70
<210>71
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>71
Figure A200680051883D01693
<210>72
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>72
Figure A200680051883D01701
<210>73
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>73
Figure A200680051883D01702
<210>74
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>74
Figure A200680051883D01711
<210>75
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>75
<210>76
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>76
Figure A200680051883D01713
<210>77
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>77
Figure A200680051883D01714
Figure A200680051883D01721
<210>78
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>78
<210>79
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>79
Figure A200680051883D01723
<210>80
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>80
<210>81
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>81
Figure A200680051883D01732
<210>82
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>82
Figure A200680051883D01733
<210>83
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>83
Figure A200680051883D01741
<210>84
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>84
Figure A200680051883D01742
<210>85
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>85
Figure A200680051883D01743
Figure A200680051883D01751
<210>86
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>86
Figure A200680051883D01752
<210>87
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>87
<210>88
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>88
Figure A200680051883D01754
Figure A200680051883D01761
<210>89
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>89
<210>90
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>90
Figure A200680051883D01763
<210>91
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>91
Figure A200680051883D01764
Figure A200680051883D01771
<210>92
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>92
Figure A200680051883D01772
<210>93
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>93
Figure A200680051883D01773
<210>94
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>94
Figure A200680051883D01781
<210>95
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>95
Figure A200680051883D01782
<210>96
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>96
<210>97
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>97
<210>98
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>98
Figure A200680051883D01792
<210>99
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>99
Figure A200680051883D01793
<210>100
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>100
Figure A200680051883D01801
<210>101
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>101
Figure A200680051883D01802
<210>102
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>102
Figure A200680051883D01803
Figure A200680051883D01811
<210>103
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>103
<210>104
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>104
Figure A200680051883D01813
<210>105
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>105
Figure A200680051883D01814
Figure A200680051883D01821
<210>106
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>106
Figure A200680051883D01822
<210>107
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>107
Figure A200680051883D01823
<210>108
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>108
Figure A200680051883D01824
Figure A200680051883D01831
<210>109
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>109
<210>110
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>110
Figure A200680051883D01833
<210>111
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>111
Figure A200680051883D01841
<210>112
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>112
Figure A200680051883D01842
<210>113
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>113
Figure A200680051883D01843
<210>114
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>114
Figure A200680051883D01851
<210>115
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>  115
Figure A200680051883D01852
<210>116
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>116
Figure A200680051883D01853
Figure A200680051883D01861
<210>117
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>117
Figure A200680051883D01862
<210>118
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>118
Figure A200680051883D01863
<210>119
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>119
Figure A200680051883D01864
Figure A200680051883D01871
<210>120
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>120
Figure A200680051883D01872
<210>121
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>121
<210>122
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>122
Figure A200680051883D01874
Figure A200680051883D01881
<210>123
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>123
Figure A200680051883D01882
<210>124
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>124
Figure A200680051883D01883
<210>125
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>125
Figure A200680051883D01891
<210>126
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>126
Figure A200680051883D01892
<210>127
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>127
Figure A200680051883D01893
<210>128
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>128
Figure A200680051883D01901
<210>129
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>129
Figure A200680051883D01902
<210>130
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>130
Figure A200680051883D01903
<210>131
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>131
Figure A200680051883D01911
<210>132
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>132
Figure A200680051883D01912
<210>133
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>133
Figure A200680051883D01913
Figure A200680051883D01921
<210>134
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>134
<210>135
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>135
Figure A200680051883D01923
<210>136
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>136
Figure A200680051883D01924
Figure A200680051883D01931
<210>137
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>137
Figure A200680051883D01932
<210>138
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>138
Figure A200680051883D01933
<210>139
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>139
Figure A200680051883D01934
Figure A200680051883D01941
<210>140
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>140
Figure A200680051883D01942
<210>141
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>141
Figure A200680051883D01943
<210>142
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>142
Figure A200680051883D01951
<210>143
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>143
Figure A200680051883D01952
<210>144
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>144
Figure A200680051883D01953
<210>145
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>145
Figure A200680051883D01961
<210>146
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>146
Figure A200680051883D01962
<210>147
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>147
Figure A200680051883D01963
Figure A200680051883D01971
<210>148
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>148
Figure A200680051883D01972
<210>149
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>149
Figure A200680051883D01973
<210>150
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>150
Figure A200680051883D01974
Figure A200680051883D01981
<210>151
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>151
Figure A200680051883D01982
<210>152
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>152
Figure A200680051883D01983
<210>153
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>153
Figure A200680051883D01984
Figure A200680051883D01991
<210>154
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>154
Figure A200680051883D01992
<210>155
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>155
Figure A200680051883D01993
<210>156
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>156
Figure A200680051883D02001
<210>157
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>157
Figure A200680051883D02002
<210>158
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>158
Figure A200680051883D02003
<210>159
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>159
<210>160
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>160
Figure A200680051883D02012
<210>161
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>161
Figure A200680051883D02013
<210>162
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>162
Figure A200680051883D02021
<210>163
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>163
Figure A200680051883D02022
<210>164
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>164
Figure A200680051883D02023
Figure A200680051883D02031
<210>165
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>165
Figure A200680051883D02032
<210>166
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>166
Figure A200680051883D02033
<210>167
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>167
Figure A200680051883D02034
<210>168
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>168
Figure A200680051883D02042
<210>169
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>169
Figure A200680051883D02043
<210>170
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>170
Figure A200680051883D02044
Figure A200680051883D02051
<210>171
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>171
Figure A200680051883D02052
<210>172
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>172
Figure A200680051883D02053
<210>173
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>173
Figure A200680051883D02061
<210>174
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>174
Figure A200680051883D02062
<210>175
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>175
Figure A200680051883D02063
<210>176
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>176
Figure A200680051883D02071
<210>177
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>177
Figure A200680051883D02072
<210>178
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>178
Figure A200680051883D02073
Figure A200680051883D02081
<210>179
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>179
<210>180
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>180
<210>181
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>181
Figure A200680051883D02084
Figure A200680051883D02091
<210>182
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>182
Figure A200680051883D02092
<210>183
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>183
Figure A200680051883D02093
<210>184
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>184
Figure A200680051883D02094
Figure A200680051883D02101
<210>185
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>185
Figure A200680051883D02102
<210>186
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>186
Figure A200680051883D02103
<210>187
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>187
Figure A200680051883D02111
<210>188
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>188
<210>189
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>189
Figure A200680051883D02113
<210>190
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>190
Figure A200680051883D02121
<210>191
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>191
Figure A200680051883D02122
<210>192
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>192
Figure A200680051883D02123
<210>193
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>193
Figure A200680051883D02131
<210>194
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>194
Figure A200680051883D02132
<210>195
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>195
Figure A200680051883D02133
Figure A200680051883D02141
<210>196
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>196
Figure A200680051883D02142
<210>197
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>197
Figure A200680051883D02143
<210>198
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>198
Figure A200680051883D02151
<210>199
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>199
<210>200
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>200
Figure A200680051883D02153
<210>201
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>201
Figure A200680051883D02154
Figure A200680051883D02161
<210>202
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>202
Figure A200680051883D02162
<210>203
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>203
Figure A200680051883D02163
<210>204
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>204
Figure A200680051883D02171
<210>205
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>205
Figure A200680051883D02172
<210>206
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>206
Figure A200680051883D02173
<210>207
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>207
Figure A200680051883D02181
<210>208
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>208
Figure A200680051883D02182
<210>209
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>209
Figure A200680051883D02183
Figure A200680051883D02191
<210>210
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>210
<210>211
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>211
<210>212
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>212
Figure A200680051883D02194
Figure A200680051883D02201
<210>213
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>213
Figure A200680051883D02202
<210>214
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>214
Figure A200680051883D02203
<210>215
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>215
Figure A200680051883D02204
Figure A200680051883D02211
<210>216
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>216
<210>217
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>217
Figure A200680051883D02213
<210>218
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>218
Figure A200680051883D02221
<210>219
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>219
Figure A200680051883D02222
<210>220
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>220
Figure A200680051883D02223
<210>221
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>221
Figure A200680051883D02231
<210>222
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>222
Figure A200680051883D02232
<210>223
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>223
Figure A200680051883D02233
<210>224
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>224
Figure A200680051883D02241
<210>225
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>225
Figure A200680051883D02242
<210>226
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>226
Figure A200680051883D02243
Figure A200680051883D02251
<210>227
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>227
Figure A200680051883D02252
<210>228
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>228
Figure A200680051883D02253
<210>229
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>229
Figure A200680051883D02254
Figure A200680051883D02261
<210>230
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>230
Figure A200680051883D02262
<210>231
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>231
Figure A200680051883D02263
<210>232
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>232
Figure A200680051883D02271
<210>233
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>233
Figure A200680051883D02272
<210>234
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>234
<210>235
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>235
Figure A200680051883D02281
<210>236
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>236
Figure A200680051883D02282
<210>237
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>237
Figure A200680051883D02283
<210>238
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>238
<210>239
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>239
Figure A200680051883D02292
<210>240
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>240
Figure A200680051883D02293
Figure A200680051883D02301
<210>241
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>241
Figure A200680051883D02302
<210>242
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>242
Figure A200680051883D02303
<210>243
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>243
Figure A200680051883D02304
Figure A200680051883D02311
<210>244
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>244
Figure A200680051883D02312
<210>245
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>245
Figure A200680051883D02313
<210>246
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>246
Figure A200680051883D02314
Figure A200680051883D02321
<210>247
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>247
Figure A200680051883D02322
<210>248
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>248
Figure A200680051883D02323
<210>249
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>249
Figure A200680051883D02331
<210>250
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>250
Figure A200680051883D02332
<210>251
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>251
<210>252
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>252
Figure A200680051883D02341
<210>253
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>253
<210>254
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>254
Figure A200680051883D02343
<210>255
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>255
<210>256
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>256
Figure A200680051883D02352
<210>257
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>257
Figure A200680051883D02353
<210>258
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>258
Figure A200680051883D02362
<210>259
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>259
Figure A200680051883D02363
<210>260
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>260
Figure A200680051883D02364
Figure A200680051883D02371
<210>261
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>261
Figure A200680051883D02372
<210>262
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>262
Figure A200680051883D02373
<210>263
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>263
Figure A200680051883D02374
Figure A200680051883D02381
<210>264
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>264
Figure A200680051883D02382
<210>265
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>265
Figure A200680051883D02383
<210>266
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>266
Figure A200680051883D02391
<210>267
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>267
Figure A200680051883D02392
<210>268
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>268
Figure A200680051883D02393
<210>269
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>269
Figure A200680051883D02401
<210>270
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>270
Figure A200680051883D02402
<210>271
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>271
Figure A200680051883D02403
<210>272
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>272
Figure A200680051883D02412
<210>273
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>273
Figure A200680051883D02413
<210>274
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>274
Figure A200680051883D02414
Figure A200680051883D02421
<210>275
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>275
Figure A200680051883D02422
<210>276
<211>108
<212>PRT
<213)人(Homo sapiens)
<400>276
Figure A200680051883D02423
<210>277
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>277
Figure A200680051883D02424
Figure A200680051883D02431
<210>278
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>278
Figure A200680051883D02432
<210>279
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>279
<210>280
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>280
<210>281
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>281
Figure A200680051883D02442
<210>282
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>282
Figure A200680051883D02443
<210>283
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>283
Figure A200680051883D02451
<210>284
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>284
Figure A200680051883D02452
<210>285
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>285
Figure A200680051883D02453
<210>286
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>286
Figure A200680051883D02461
<210>287
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>287
Figure A200680051883D02462
<210>288
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>288
Figure A200680051883D02463
<210>289
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>289
<210>290
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>290
Figure A200680051883D02473
<210>291
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>291
Figure A200680051883D02474
Figure A200680051883D02481
<210>292
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>292
Figure A200680051883D02482
<210>293
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>293
Figure A200680051883D02483
<210>294
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>294
Figure A200680051883D02491
<210>295
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>295
Figure A200680051883D02492
<210>296
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>296
<210>297
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>297
Figure A200680051883D02501
<210>298
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>298
Figure A200680051883D02502
<210>299
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>299
Figure A200680051883D02503
<210>300
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>300
Figure A200680051883D02511
<210>301
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>301
Figure A200680051883D02512
<210>302
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>302
Figure A200680051883D02521
<210>303
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>303
Figure A200680051883D02522
<210>304
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>304
Figure A200680051883D02523
<210>305
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>305
Figure A200680051883D02524
Figure A200680051883D02531
<210>306
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>306
<210>307
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>307
Figure A200680051883D02533
<210>308
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>308
Figure A200680051883D02534
Figure A200680051883D02541
<210>309
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>309
Figure A200680051883D02542
<210>310
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>310
<210>311
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>311
Figure A200680051883D02551
<210>312
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>312
Figure A200680051883D02552
<210>313
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>313
<210>314
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>314
Figure A200680051883D02561
<210>315
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>315
Figure A200680051883D02562
<210>316
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>316
<210>317
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>317
<210>318
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>318
Figure A200680051883D02572
<210>319
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>319
Figure A200680051883D02573
Figure A200680051883D02581
<210>320
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>320
Figure A200680051883D02582
<210>321
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>321
Figure A200680051883D02583
<210>322
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>322
Figure A200680051883D02584
Figure A200680051883D02591
<210>323
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>323
Figure A200680051883D02592
<210>324
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>324
Figure A200680051883D02593
<210>325
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>325
Figure A200680051883D02594
Figure A200680051883D02601
<210>326
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>326
Figure A200680051883D02602
<210>327
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>327
Figure A200680051883D02603
<210>328
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>328
Figure A200680051883D02611
<210>329
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>329
<210>330
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>330
Figure A200680051883D02613
<210>331
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>331
Figure A200680051883D02621
<210>332
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>332
Figure A200680051883D02622
<210>333
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>333
Figure A200680051883D02623
Figure A200680051883D02631
<210>334
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>334
Figure A200680051883D02632
<210>335
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>335
Figure A200680051883D02633
<210>336
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>336
Figure A200680051883D02641
<210>337
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>337
Figure A200680051883D02642
<210>338
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>338
Figure A200680051883D02643
<210>339
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>339
Figure A200680051883D02644
<210>340
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>340
Figure A200680051883D02652
<210>341
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>341
Figure A200680051883D02653
<210>342
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>342
Figure A200680051883D02661
<210>343
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>343
<210>344
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>344
Figure A200680051883D02663
<210>345
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>345
Figure A200680051883D02671
<210>346
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>346
<210>347
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>347
<210>348
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>348
Figure A200680051883D02681
<210>349
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>349
Figure A200680051883D02682
<210>350
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>350
Figure A200680051883D02683
<210>351
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>351
Figure A200680051883D02691
<210>352
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>352
Figure A200680051883D02692
<210>353
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>353
<210>354
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>354
<210>355
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>355
Figure A200680051883D02695
<210>356
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>356
Figure A200680051883D02701
<210>357
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>357
<210>358
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>358
<210>359
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>359
Figure A200680051883D02704
<210>360
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>360
Figure A200680051883D02705
Figure A200680051883D02711
<210>361
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>361
<210>362
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>362
Figure A200680051883D02713
<210>363
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>363
Figure A200680051883D02714
<210>364
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>364
Figure A200680051883D02715
<210>365
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>365
Figure A200680051883D02716
Figure A200680051883D02721
<210>366
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>366
<210>367
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>367
Figure A200680051883D02723
<210>368
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>368
Figure A200680051883D02724
<210>369
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>369
Figure A200680051883D02725
<210>370
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>370
Figure A200680051883D02731
<210>371
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>371
Figure A200680051883D02732
<210>372
<211>357
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>372
Figure A200680051883D02733
<210>373
<211>357
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>373
Figure A200680051883D02734
<210>374
<211>354
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>374
Figure A200680051883D02735
<210>375
<211>357
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>375
Figure A200680051883D02741
<210>376
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>376
Figure A200680051883D02742
<210>377
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>377
Figure A200680051883D02743
<210>378
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>378
Figure A200680051883D02744
<210>379
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>379
Figure A200680051883D02745
Figure A200680051883D02751
<210>380
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>380
Figure A200680051883D02752
<210>381
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>381
<210>382
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>382
<210>383
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>383
Figure A200680051883D02755
<210>384
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>384
Figure A200680051883D02756
Figure A200680051883D02761
<210>385
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>385
Figure A200680051883D02762
<210>386
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>386
Figure A200680051883D02763
<210>387
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>387
Figure A200680051883D02764
<210>388
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>388
Figure A200680051883D02765
<210>389
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>389
Figure A200680051883D02771
<210>390
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>390
Figure A200680051883D02772
<210>391
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>391
Figure A200680051883D02773
<210>392
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>392
Figure A200680051883D02774
<210>393
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>393
Figure A200680051883D02775
<210>394
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>394
Figure A200680051883D02781
<210>395
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>395
Figure A200680051883D02782
<210>396
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>396
Figure A200680051883D02783
<210>397
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>397
Figure A200680051883D02784
<210>398
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>398
Figure A200680051883D02785
<210>399
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>399
<210>400
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>400
Figure A200680051883D02792
<210>401
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>401
Figure A200680051883D02793
<210>402
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>402
<210>403
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>403
Figure A200680051883D02795
Figure A200680051883D02801
<210>404
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>404
Figure A200680051883D02802
<210>405
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>405
Figure A200680051883D02803
<210>406
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>406
<210>407
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>407
<210>408
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>408
Figure A200680051883D02811
<210>409
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>409
Figure A200680051883D02812
<210>410
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>410
Figure A200680051883D02813
<210>411
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>411
<210>412
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>412
Figure A200680051883D02815
<210>413
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>413
Figure A200680051883D02821
<210>414
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>414
Figure A200680051883D02822
<210>415
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>415
Figure A200680051883D02823
<210>416
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>416
Figure A200680051883D02824
<210>417
<211>354
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>417
Figure A200680051883D02831
<210>418
<211>354
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>418
Figure A200680051883D02832
<210>419
<211>363
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>419
Figure A200680051883D02833
<210>420
<211>372
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>420
Figure A200680051883D02834
<210>421
<211>369
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>421
Figure A200680051883D02835
<210>422
<211>369
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>422
Figure A200680051883D02841
<210>423
<211>369
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>423
Figure A200680051883D02842
<210>424
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>424
Figure A200680051883D02843
<210>425
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>425
<210>426
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>426
Figure A200680051883D02851
<210>427
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>427
Figure A200680051883D02852
<210>428
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>428
Figure A200680051883D02853
<210>429
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>429
Figure A200680051883D02854
<210>430
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>430
Figure A200680051883D02855
<210>431
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>431
Figure A200680051883D02861
<210>432
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>432
Figure A200680051883D02862
<210>433
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>433
Figure A200680051883D02863
<210>434
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>434
Figure A200680051883D02864
<210>435
<211>351
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>435
Figure A200680051883D02865
<210>436
<211>348
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>436
Figure A200680051883D02871
<210>437
<211>372
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>437
Figure A200680051883D02872
<210>438
<211>369
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>438
Figure A200680051883D02873
<210>439
<211>363
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>439
Figure A200680051883D02874
<210>440
<211>366
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>440
Figure A200680051883D02875
<210>441
<211>366
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>441
Figure A200680051883D02882
<210>442
<211>372
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>442
Figure A200680051883D02883
<210>443
<211>366
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>443
Figure A200680051883D02884
<210>444
<211>366
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>444
Figure A200680051883D02885
<210>445
<211>357
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>445
Figure A200680051883D02891
<210>446
<211>357
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>446
Figure A200680051883D02892
<210>447
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>447
Figure A200680051883D02893
<210>448
<211>357
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>448
Figure A200680051883D02894
<210>449
<211>366
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>449
Figure A200680051883D02895
Figure A200680051883D02901
<210>450
<211>360
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>450
Figure A200680051883D02902
<210>451
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>451
Figure A200680051883D02903
<210>452
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>452
Figure A200680051883D02904
<210>453
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>453
<210>454
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>454
<210>455
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>455
Figure A200680051883D02912
<210>456
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>456
Figure A200680051883D02913
<210>457
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>457
Figure A200680051883D02914
<210>458
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>458
Figure A200680051883D02915
<210>459
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>459
Figure A200680051883D02921
<210>460
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>460
Figure A200680051883D02922
<210>461
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>461
Figure A200680051883D02923
<210>462
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>462
Figure A200680051883D02924
<210>463
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>463
Figure A200680051883D02925
<210>464
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>464
Figure A200680051883D02932
<210>465
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>465
<210>466
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>466
Figure A200680051883D02934
<210>467
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>467
Figure A200680051883D02935
<210>468
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>468
Figure A200680051883D02941
<210>469
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>469
Figure A200680051883D02942
<210>470
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>470
Figure A200680051883D02943
<210>471
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>471
<210>472
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>472
<210>473
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>473
Figure A200680051883D02951
<210>474
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>474
Figure A200680051883D02952
<210>475
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>475
Figure A200680051883D02953
<210>476
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>476
Figure A200680051883D02954
<210>477
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>477
Figure A200680051883D02955
<210>478
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>478
Figure A200680051883D02961
<210>479
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>479
Figure A200680051883D02962
<210>480
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>480
<210>481
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>481
Figure A200680051883D02964
<210>482
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>482
Figure A200680051883D02965
<210>483
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>483
Figure A200680051883D02971
<210>484
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>484
Figure A200680051883D02972
<210>485
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>485
Figure A200680051883D02973
<210>486
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>486
Figure A200680051883D02974
<210>487
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>487
Figure A200680051883D02975
Figure A200680051883D02981
<210>488
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>488
Figure A200680051883D02982
<210>489
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>489
Figure A200680051883D02983
<210>490
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>490
Figure A200680051883D02984
<210>491
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>491
<210>492
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>492
Figure A200680051883D02991
<210>493
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>493
Figure A200680051883D02992
<210>494
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>494
Figure A200680051883D02993
<210>495
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>495
Figure A200680051883D02994
<210>496
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>496
Figure A200680051883D02995
<210>497
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>497
Figure A200680051883D03001
<210>498
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>498
Figure A200680051883D03002
<210>499
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>499
Figure A200680051883D03003
<210>500
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>500
Figure A200680051883D03004
<210>501
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>501
Figure A200680051883D03005
<210>502
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>502
Figure A200680051883D03011
<210>503
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>503
Figure A200680051883D03012
<210>504
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>504
Figure A200680051883D03013
<210>505
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>505
Figure A200680051883D03014
<210>506
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>506
Figure A200680051883D03015
Figure A200680051883D03021
<210>507
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>507
<210>508
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>508
Figure A200680051883D03023
<210>509
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>509
Figure A200680051883D03024
<210>510
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>510
Figure A200680051883D03025
<210>511
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>511
Figure A200680051883D03026
Figure A200680051883D03031
<210>512
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>512
Figure A200680051883D03032
<210>513
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>513
Figure A200680051883D03033
<210>514
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>514
Figure A200680051883D03034
<210>515
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>515
Figure A200680051883D03035
<210>516
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>516
Figure A200680051883D03041
<210>517
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>517
<210>518
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>518
Figure A200680051883D03043
<210>519
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>519
<210>520
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>520
Figure A200680051883D03045
<210>521
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>521
Figure A200680051883D03051
<210>522
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>522
Figure A200680051883D03052
<210>523
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>523
Figure A200680051883D03053
<210>524
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>524
Figure A200680051883D03054
<210>525
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>525
Figure A200680051883D03055
<210>526
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>526
Figure A200680051883D03062
<210>527
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>527
Figure A200680051883D03063
<210>528
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>528
Figure A200680051883D03064
<210>529
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>529
Figure A200680051883D03065
<210>530
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>530
Figure A200680051883D03066
Figure A200680051883D03071
<210>531
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>531
<210>532
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>532
Figure A200680051883D03073
<210>533
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>533
<210>534
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>534
<210>535
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>535
Figure A200680051883D03081
<210>536
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>536
Figure A200680051883D03082
<210>537
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>537
Figure A200680051883D03083
<210>538
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>538
Figure A200680051883D03084
<210>539
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>539
Figure A200680051883D03085
<210>540
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>540
Figure A200680051883D03091
<210>541
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>541
Figure A200680051883D03092
<210>542
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>542
Figure A200680051883D03093
<210>543
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>543
Figure A200680051883D03094
<210>544
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>544
Figure A200680051883D03095
<210>545
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>545
<210>546
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>546
Figure A200680051883D03102
<210>547
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>547
Figure A200680051883D03103
<210>548
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>548
Figure A200680051883D03104
<210>549
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>549
Figure A200680051883D03105
Figure A200680051883D03111
<210>550
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>550
Figure A200680051883D03112
<210>551
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>551
Figure A200680051883D03113
<210>552
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>552
Figure A200680051883D03114
<210>553
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>553
Figure A200680051883D03115
<210>554
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>554
Figure A200680051883D03121
<210>555
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>555
Figure A200680051883D03122
<210>556
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>556
Figure A200680051883D03123
<210>557
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>557
Figure A200680051883D03124
<210>558
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>558
Figure A200680051883D03125
<210>559
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>559
Figure A200680051883D03131
<210>560
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>560
Figure A200680051883D03132
<210>561
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>561
Figure A200680051883D03133
<210>562
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>562
Figure A200680051883D03134
<210>563
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>563
Figure A200680051883D03135
<210>564
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>564
Figure A200680051883D03141
<210>565
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>565
Figure A200680051883D03142
<210>566
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>566
Figure A200680051883D03143
<210>567
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>567
Figure A200680051883D03144
<210>568
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>568
Figure A200680051883D03145
Figure A200680051883D03151
<210>569
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>569
Figure A200680051883D03152
<210>570
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>570
Figure A200680051883D03153
<210>571
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>571
Figure A200680051883D03154
<210>572
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>572
Figure A200680051883D03155
<210>573
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>573
Figure A200680051883D03156
<210>574
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>574
Figure A200680051883D03162
<210>575
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>575
Figure A200680051883D03163
<210>576
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>576
Figure A200680051883D03164
<210>577
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>577
Figure A200680051883D03165
<210>578
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>578
Figure A200680051883D03171
<210>579
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>579
Figure A200680051883D03172
<210>580
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>580
Figure A200680051883D03173
<210>581
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>581
Figure A200680051883D03174
<210>582
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>582
<210>583
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>583
Figure A200680051883D03181
<210>584
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>584
Figure A200680051883D03182
<210>585
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>585
Figure A200680051883D03183
<210>586
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>586
Figure A200680051883D03184
<210>587
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>587
Figure A200680051883D03185
<210>588
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>588
Figure A200680051883D03192
<210>589
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>589
Figure A200680051883D03193
<210>590
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>590
Figure A200680051883D03194
<210>591
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>591
Figure A200680051883D03195
<210>592
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>592
Figure A200680051883D03196
Figure A200680051883D03201
<210>593
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>593
Figure A200680051883D03202
<210>594
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>594
Figure A200680051883D03203
<210>595
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>595
Figure A200680051883D03204
<210>596
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>596
Figure A200680051883D03205
<210>597
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>597
<210>598
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>598
Figure A200680051883D03212
<210>599
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>599
Figure A200680051883D03213
<210>600
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>600
Figure A200680051883D03214
<210>601
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>601
Figure A200680051883D03215
<210>602
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>602
Figure A200680051883D03221
<210>603
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>603
Figure A200680051883D03222
<210>604
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>604
Figure A200680051883D03223
<210>605
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>605
Figure A200680051883D03224
<210>606
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>606
<210>607
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>607
<210>608
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>608
Figure A200680051883D03232
<210>609
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>609
Figure A200680051883D03233
<210>610
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>610
Figure A200680051883D03234
<210>611
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>611
Figure A200680051883D03241
<210>612
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>612
Figure A200680051883D03242
<210>613
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>613
Figure A200680051883D03243
<210>614
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>614
Figure A200680051883D03244
<210>615
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>615
Figure A200680051883D03245
<210>616
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>616
Figure A200680051883D03251
<210>617
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>617
Figure A200680051883D03252
<210>618
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>618
Figure A200680051883D03253
<210>619
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>619
<210>620
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>620
Figure A200680051883D03255
<210>621
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>621
Figure A200680051883D03261
<210>622
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>622
Figure A200680051883D03262
<210>623
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>623
Figure A200680051883D03263
<210>624
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>624
Figure A200680051883D03264
<210>625
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>625
Figure A200680051883D03265
<210>626
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>626
Figure A200680051883D03271
<210>627
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>627
<210>628
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>628
Figure A200680051883D03273
<210>629
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>629
<210>630
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>630
Figure A200680051883D03275
Figure A200680051883D03281
<210>631
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>631
Figure A200680051883D03282
<210>632
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>632
Figure A200680051883D03283
<210>633
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>633
Figure A200680051883D03284
<210>634
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>634
Figure A200680051883D03285
<210>635
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>635
Figure A200680051883D03286
Figure A200680051883D03291
<210>636
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>636
Figure A200680051883D03292
<210>637
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>637
Figure A200680051883D03293
<210>638
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>638
Figure A200680051883D03294
<210>639
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>639
Figure A200680051883D03295
<210>640
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>640
Figure A200680051883D03301
<210>641
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>641
Figure A200680051883D03302
<210>642
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>642
Figure A200680051883D03303
<210>643
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>643
Figure A200680051883D03304
<210>644
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>644
Figure A200680051883D03305
<210>645
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>645
Figure A200680051883D03311
<210>646
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>646
Figure A200680051883D03312
<210>647
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>647
Figure A200680051883D03313
<210>648
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>648
Figure A200680051883D03314
<210>649
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>649
Figure A200680051883D03315
Figure A200680051883D03321
<210>650
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>650
Figure A200680051883D03322
<210>651
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>651
Figure A200680051883D03323
<210>652
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homosapiens)
<400>652
Figure A200680051883D03324
<210>653
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>653
<210>654
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>654
Figure A200680051883D03326
Figure A200680051883D03331
<210>655
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>655
Figure A200680051883D03332
<210>656
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>656
Figure A200680051883D03333
<210>657
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>657
Figure A200680051883D03334
<210>658
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>658
Figure A200680051883D03335
<210>659
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>659
<210>660
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>660
Figure A200680051883D03342
<210>661
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>661
Figure A200680051883D03343
<210>662
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>662
<210>663
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>663
<210>664
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>664
Figure A200680051883D03351
<210>665
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>665
Figure A200680051883D03352
<210>666
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>666
Figure A200680051883D03353
<210>667
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>667
Figure A200680051883D03354
<210>668
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>668
Figure A200680051883D03355
<210>669
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>669
Figure A200680051883D03361
<210>670
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>670
Figure A200680051883D03362
<210>671
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>671
Figure A200680051883D03363
<210>672
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>672
Figure A200680051883D03364
<210>673
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>673
Figure A200680051883D03365
Figure A200680051883D03371
<210>674
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>674
Figure A200680051883D03372
<210>675
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>675
Figure A200680051883D03373
<210>676
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>676
<210>677
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>677
Figure A200680051883D03375
<210>678
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>678
Figure A200680051883D03381
<210>679
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>679
<210>680
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>680
<210>681
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>681
Figure A200680051883D03384
<210>682
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>682
Figure A200680051883D03385
<210>683
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>683
Figure A200680051883D03391
<210>684
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>684
<210>685
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>685
Figure A200680051883D03393
<210>686
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>686
<210>687
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>687
Figure A200680051883D03395
<210>688
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>688
Figure A200680051883D03401
<210>689
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>689
Figure A200680051883D03402
<210>690
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>690
Figure A200680051883D03403
<210>691
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>691
Figure A200680051883D03404
<210>692
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>692
Figure A200680051883D03405
Figure A200680051883D03411
<210>693
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>693
Figure A200680051883D03412
<210>694
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>694
Figure A200680051883D03413
<210>695
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>695
Figure A200680051883D03414
<210>696
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>696
Figure A200680051883D03415
<210>697
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>697
Figure A200680051883D03416
Figure A200680051883D03421
<210>698
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>698
Figure A200680051883D03422
<210>699
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>699
Figure A200680051883D03423
<210>700
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>700
Figure A200680051883D03424
<210>701
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>701
Figure A200680051883D03425
<210>702
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>702
Figure A200680051883D03431
<210>703
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>703
<210>704
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>704
<210>705
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>705
Figure A200680051883D03434
<210>706
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>706
Figure A200680051883D03435
<210>707
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>707
Figure A200680051883D03441
<210>708
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>708
Figure A200680051883D03442
<210>709
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>709
Figure A200680051883D03443
<210>710
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>710
Figure A200680051883D03444
<210>711
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>711
Figure A200680051883D03445
Figure A200680051883D03451
<210>712
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>712
Figure A200680051883D03452
<210>713
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>713
Figure A200680051883D03453
<210>714
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>714
Figure A200680051883D03454
<210>715
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>715
Figure A200680051883D03455
<210>716
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>716
Figure A200680051883D03461
<210>717
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>717
Figure A200680051883D03462
<210>718
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>718
Figure A200680051883D03463
<210>719
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>719
Figure A200680051883D03464
<210>720
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>720
Figure A200680051883D03465
<210>721
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>721
Figure A200680051883D03471
<210>722
<211>324
<212>DNA
<213>人(Homo sapiens)
<400>722
Figure A200680051883D03472
<210>723
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>723
Figure A200680051883D03473
<210>724
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>724
Figure A200680051883D03474
<210>725
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>725
Figure A200680051883D03482
<210>726
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>726
<210>727
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>727
Figure A200680051883D03484
Figure A200680051883D03491
<210>728
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>728
Figure A200680051883D03492
<210>729
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>729
Figure A200680051883D03493
<210>730
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>730
Figure A200680051883D03494
Figure A200680051883D03501
<210>731
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>731
Figure A200680051883D03502
<210>732
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>732
Figure A200680051883D03503
<210>733
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>733
Figure A200680051883D03504
Figure A200680051883D03511
<210>734
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>734
Figure A200680051883D03512
<210>735
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>735
Figure A200680051883D03513
<210>736
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>736
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<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>737
Figure A200680051883D03522
<210>738
<211>35
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
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<400>738
Figure A200680051883D03523
<210>739
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>739
Figure A200680051883D03531
<210>740
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>740
Figure A200680051883D03532
<210>741
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>741
Figure A200680051883D03533
Figure A200680051883D03541
<210>742
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>742
Figure A200680051883D03542
<210>743
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>743
Figure A200680051883D03543
<210>744
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>744
Figure A200680051883D03551
<210>745
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>745
Figure A200680051883D03552
<210>746
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>746
Figure A200680051883D03553
<210>747
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>747
Figure A200680051883D03561
<210>748
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>748
Figure A200680051883D03562
<210>749
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>749
Figure A200680051883D03571
<210>750
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>750
Figure A200680051883D03572
<210>751
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>751
Figure A200680051883D03573
<210>752
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>752
Figure A200680051883D03574
Figure A200680051883D03581
<210>753
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>753
<210>754
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<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>754
Figure A200680051883D03583
<210>755
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>755
Figure A200680051883D03591
<210>756
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>756
Figure A200680051883D03592
<210>757
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>757
Figure A200680051883D03593
Figure A200680051883D03601
<210>758
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>758
Figure A200680051883D03602
<210>759
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>759
Figure A200680051883D03603
<210>760
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>760
Figure A200680051883D03604
Figure A200680051883D03611
<210>761
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>761
Figure A200680051883D03612
<210>762
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>762
<210>763
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>763
Figure A200680051883D03621
<210>764
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>764
Figure A200680051883D03622
<210>765
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>765
Figure A200680051883D03623
Figure A200680051883D03631
<210>766
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>766
Figure A200680051883D03632
<210>767
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>767
Figure A200680051883D03633
<210>768
<211>115
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>768
Figure A200680051883D03641
<210>769
<211>115
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>769
Figure A200680051883D03642
<210>770
<211>114
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>770
Figure A200680051883D03651
<210>771
<211>114
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>771
Figure A200680051883D03652
<210>772
<211>128
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>772
Figure A200680051883D03653
Figure A200680051883D03661
<210>773
<211>124
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>773
Figure A200680051883D03662
<210>774
<211>120
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>774
Figure A200680051883D03663
<210>775
<211>123
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>775
Figure A200680051883D03671
<210>776
<211>125
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>776
<210>777
<211>125
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>777
<210>778
<211>124
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>778
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<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>779
Figure A200680051883D03683
<210>780
<211>126
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>780
Figure A200680051883D03692
<210>781
<211>128
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>781
Figure A200680051883D03693
Figure A200680051883D03701
<210>782
<211>120
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>782
Figure A200680051883D03702
<210>783
<211>123
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>783
Figure A200680051883D03703
<210>784
<211>125
<212>PRT
<213>未知
<220>
<223>驼类(Camelid)
<400>784
Figure A200680051883D03711
<210>785
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>785
Figure A200680051883D03712
<210>786
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>786
Figure A200680051883D03721
<210>787
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>787
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<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>788
Figure A200680051883D03723
<210>789
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>789
Figure A200680051883D03731
<210>790
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>790
Figure A200680051883D03732
<210>791
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>791
Figure A200680051883D03741
<210>792
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>792
Figure A200680051883D03742
<210>793
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>793
Figure A200680051883D03743
<210>794
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>794
Figure A200680051883D03744
Figure A200680051883D03751
<210>795
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>795
Figure A200680051883D03752
<210>796
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>796
Figure A200680051883D03753
<210>797
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>797
Figure A200680051883D03761
<210>798
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>798
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<211>121
<212>PRT
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<400>799
Figure A200680051883D03771
<210>800
<211>122
<212>PRT
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<400>800
Figure A200680051883D03772
<210>801
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>801
Figure A200680051883D03773
<210>802
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>802
Figure A200680051883D03781
<210>803
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>803
Figure A200680051883D03782
<210>804
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>804
Figure A200680051883D03791
<210>805
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>805
Figure A200680051883D03792
<210>806
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>806
Figure A200680051883D03793
<210>807
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>807
Figure A200680051883D03794
Figure A200680051883D03801
<210>808
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>808
Figure A200680051883D03802
<210>809
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>809
Figure A200680051883D03803
Figure A200680051883D03811
<210>810
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>810
Figure A200680051883D03812
<210>811
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>811
Figure A200680051883D03813
<210>812
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>812
Figure A200680051883D03814
Figure A200680051883D03821
<210>813
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>813
Figure A200680051883D03822
<210>814
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>814
Figure A200680051883D03823
<210>815
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>815
<210>816
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>816
<210>817
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>20
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>817
Figure A200680051883D03833
Figure A200680051883D03841
<210>818
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>818
Figure A200680051883D03842
<210>819
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>819
Figure A200680051883D03843
<210>820
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>820
Figure A200680051883D03851
<210>821
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>821
Figure A200680051883D03852
<210>822
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>822
Figure A200680051883D03861
<210>823
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>823
<210>824
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>824
<210>825
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>825
Figure A200680051883D03871
<210>826
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>826
Figure A200680051883D03872
<210>827
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>827
Figure A200680051883D03873
Figure A200680051883D03881
<210>828
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>828
Figure A200680051883D03882
<210>829
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>829
Figure A200680051883D03883
<210>830
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>830
Figure A200680051883D03884
Figure A200680051883D03891
<210>831
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>831
<210>832
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>832
Figure A200680051883D03893
<210>833
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>833
Figure A200680051883D03901
<210>834
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>834
Figure A200680051883D03902
<210>835
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>835
Figure A200680051883D03911
<210>836
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>836
Figure A200680051883D03912
<210>837
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>837
Figure A200680051883D03913
<210>838
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>838
Figure A200680051883D03921
<210>839
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>839
Figure A200680051883D03922
<210>840
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>840
Figure A200680051883D03923
Figure A200680051883D03931
<210>841
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>841
Figure A200680051883D03932
<210>842
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>842
Figure A200680051883D03933
<210>843
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>843
Figure A200680051883D03941
<210>844
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>844
Figure A200680051883D03942
<210>845
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>845
Figure A200680051883D03951
<210>846
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>846
Figure A200680051883D03952
<210>847
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>847
Figure A200680051883D03953
<210>848
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>848
Figure A200680051883D03954
Figure A200680051883D03961
<210>849
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>849
<210>850
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>850
Figure A200680051883D03963
<210>851
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>851
Figure A200680051883D03971
<210>852
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>852
Figure A200680051883D03972
<210>853
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>853
Figure A200680051883D03973
<210>854
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>854
Figure A200680051883D03982
<210>855
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>855
Figure A200680051883D03983
<210>856
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>856
Figure A200680051883D03991
<210>857
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>857
Figure A200680051883D03992
<210>858
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>858
Figure A200680051883D03993
Figure A200680051883D04001
<210>859
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>859
<210>860
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>860
Figure A200680051883D04003
<210>861
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>861
Figure A200680051883D04004
<210>862
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>862
Figure A200680051883D04012
<210>863
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>863
<210>864
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>864
<210>865
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>865
Figure A200680051883D04022
<210>866
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>866
Figure A200680051883D04023
Figure A200680051883D04031
<210>867
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>867
<210>868
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>33
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>868
Figure A200680051883D04033
Figure A200680051883D04041
<210>869
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>869
Figure A200680051883D04042
<210>870
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>870
Figure A200680051883D04043
<210>871
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>871
Figure A200680051883D04044
Figure A200680051883D04051
<210>872
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>872
Figure A200680051883D04052
<210>873
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>873
<210>874
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>874
Figure A200680051883D04061
<210>875
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>875
Figure A200680051883D04062
<210>876
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>876
Figure A200680051883D04063
Figure A200680051883D04071
<210>877
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>877
<210>878
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>878
Figure A200680051883D04073
<210>879
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>879
Figure A200680051883D04081
<210>880
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>880
Figure A200680051883D04082
<210>881
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>881
Figure A200680051883D04083
Figure A200680051883D04091
<210>882
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>882
Figure A200680051883D04092
<210>883
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>883
Figure A200680051883D04093
<210>884
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>884
Figure A200680051883D04094
Figure A200680051883D04101
<210>885
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>885
Figure A200680051883D04102
<210>886
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>886
Figure A200680051883D04103
<210>887
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>62
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>887
Figure A200680051883D04111
<210>888
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>888
Figure A200680051883D04112
<210>889
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>889
Figure A200680051883D04113
Figure A200680051883D04121
<210>890
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>890
Figure A200680051883D04122
<210>891
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>891
Figure A200680051883D04123
<210>892
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>892
Figure A200680051883D04131
<210>893
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>893
Figure A200680051883D04132
<210>894
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>894
Figure A200680051883D04133
Figure A200680051883D04141
<210>895
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>895
Figure A200680051883D04142
<210>896
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>896
Figure A200680051883D04143
<210>897
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>897
Figure A200680051883D04151
<210>898
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>898
Figure A200680051883D04152
<210>899
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>899
Figure A200680051883D04153
Figure A200680051883D04161
<210>900
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>900
Figure A200680051883D04162
<210>901
<211>123
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>901
<210>902
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>902
Figure A200680051883D04171
<210>903
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>30
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>903
Figure A200680051883D04172
<210>904
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>904
Figure A200680051883D04181
<210>905
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>905
Figure A200680051883D04182
<210>906
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>906
Figure A200680051883D04183
<210>907
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>907
Figure A200680051883D04191
<210>908
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>908
Figure A200680051883D04192
<210>909
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>909
Figure A200680051883D04193
Figure A200680051883D04201
<210>910
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>910
<210>911
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>911
Figure A200680051883D04203
<210>912
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>912
Figure A200680051883D04204
<210>913
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>913
Figure A200680051883D04212
<210>914
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>914
Figure A200680051883D04213
<210>915
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>915
Figure A200680051883D04221
<210>916
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>916
Figure A200680051883D04222
<210>917
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>62，104
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>917
Figure A200680051883D04223
<210>918
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>918
Figure A200680051883D04232
<210>919
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>62
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>919
Figure A200680051883D04233
<210>920
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>62
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>920
<210>921
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>921
<210>922
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>922
<210>923
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>923
Figure A200680051883D04252
<210>924
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>924
<210>925
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>925
Figure A200680051883D04262
<210>926
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>926
Figure A200680051883D04263
<210>927
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>927
Figure A200680051883D04271
<210>928
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>928
Figure A200680051883D04272
<210>929
<211>117
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>929
Figure A200680051883D04273
Figure A200680051883D04281
<210>930
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>930
Figure A200680051883D04282
<210>931
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>931
Figure A200680051883D04283
<210>932
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>932
Figure A200680051883D04284
Figure A200680051883D04291
<210>933
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>933
Figure A200680051883D04292
<210>934
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>934
<210>935
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>935
Figure A200680051883D04301
<210>936
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>936
<210>937
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>937
Figure A200680051883D04303
Figure A200680051883D04311
<210>938
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>938
Figure A200680051883D04312
<210>939
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>939
Figure A200680051883D04313
<210>940
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>940
Figure A200680051883D04321
<210>941
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>941
<210>942
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>942
Figure A200680051883D04323
Figure A200680051883D04331
<210>943
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>943
Figure A200680051883D04332
<210>944
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>944
Figure A200680051883D04333
<210>945
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>945
Figure A200680051883D04341
<210>946
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>946
Figure A200680051883D04342
<210>947
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>947
Figure A200680051883D04343
<210>948
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>948
Figure A200680051883D04351
<210>949
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>949
Figure A200680051883D04352
<210>950
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>53
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>950
Figure A200680051883D04361
<210>951
<211>124
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>951
Figure A200680051883D04362
<210>952
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>952
Figure A200680051883D04371
<210>953
<211>121
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>953
Figure A200680051883D04372
<210>954
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>954
Figure A200680051883D04373
<210>955
<211>116
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>955
Figure A200680051883D04374
Figure A200680051883D04381
<210>956
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>956
Figure A200680051883D04382
<210>957
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>957
Figure A200680051883D04383
<210>958
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>958
<210>959
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>959
Figure A200680051883D04392
<210>960
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>960
Figure A200680051883D04393
Figure A200680051883D04401
<210>961
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>101
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>961
Figure A200680051883D04402
<210>962
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>962
Figure A200680051883D04403
<210>963
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>96
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>963
Figure A200680051883D04411
<210>964
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>964
Figure A200680051883D04412
<210>965
<211>122
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>965
Figure A200680051883D04413
Figure A200680051883D04421
<210>966
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>966
Figure A200680051883D04422
<210>967
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>967
Figure A200680051883D04423
<210>968
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>968
Figure A200680051883D04431
<210>969
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>969
Figure A200680051883D04432
<210>970
<211>118
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>970
Figure A200680051883D04433
Figure A200680051883D04441
<210>971
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>57
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>971
Figure A200680051883D04442
<210>972
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>30
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>972
Figure A200680051883D04443
Figure A200680051883D04451
<210>973
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>33
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>973
Figure A200680051883D04452
<210>974
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>974
Figure A200680051883D04453
<210>975
<211>115
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>30
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>975
<210>976
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>976
Figure A200680051883D04462
<210>977
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>977
Figure A200680051883D04463
Figure A200680051883D04471
<210>978
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>33
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>978
Figure A200680051883D04472
<210>979
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>979
Figure A200680051883D04473
<210>980
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>30
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>980
Figure A200680051883D04482
<210>981
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>981
Figure A200680051883D04483
<210>982
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<220>
<221>变异体
<222>30
<223>Xaa＝任何氨基酸
<400>982
Figure A200680051883D04491
<210>983
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>983
Figure A200680051883D04492
<210>984
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>984
Figure A200680051883D04501
<210>985
<211>119
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>985
Figure A200680051883D04502
<210>986
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>986
Figure A200680051883D04503
<210>987
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>987
Figure A200680051883D04504
Figure A200680051883D04511
<210>988
<211>108
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>988
<210>989
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>989
Figure A200680051883D04513
<210>990
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>990
Figure A200680051883D04521
<210>991
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>991
Figure A200680051883D04522
<210>992
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>992
Figure A200680051883D04523
Figure A200680051883D04531
<210>993
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>993
Figure A200680051883D04532
<210>994
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>994
Figure A200680051883D04533
<210>995
<211>120
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>995
Figure A200680051883D04541
<210>996
<211>182
<212>PRT
<213>人(Homo sapiens)
<400>996
<210>997
<211>183
<212>PRT
<213>小鼠(Mus musculus)
<400>997
Figure A200680051883D04543
Figure A200680051883D04551

Claims (67)

1、一种域抗体(dAb)单体，其对白细胞介素-1受体1型(IL-1R1)具有结合特异性，并抑制白细胞介素-1(IL-1)与受体结合，但不抑制白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)与IL-1R1结合。
2、权利要求1所述dAb单体，其中所述IL-1选自白细胞介素-1α(IL-1α)和白细胞介素-1β(IL-1β)。
3、权利要求1所述dAb单体，其中所述dAb单体抑制所述IL-1与IL-1R1结合，其IC50不大于约1μM。
4、权利要求1所述dAb单体，其中所述dAb单体在体外检测中抑制IL-1-诱导的MRC-5细胞(ATCC检索号CCL-171)释放白细胞介素-8，其ND50≤1μM。
5、权利要求4所述dAb单体，其中所述dAb单体在体外检测中抑制IL-1-诱导的MRC-5细胞(ATCC检索号CCL-171)释放白细胞介素-8，其ND50≤1nM。
6、权利要求1所述dAb单体，其中所述dAb单体在全血检测中抑制IL-1-诱导的白细胞介素-6的释放，其ND50≤1μM。
7、权利要求1-6中任一项所述的dAb单体，其中所述dAb单体中的一个或多个框架区(FR)包含(a)人框架区的氨基酸序列，(b)人框架区氨基酸序列的至少8个毗连氨基酸，或(c)由人种系抗体基因片段编码的氨基酸序列，其中所述框架区如Kabat所定义。
8、权利要求7所述的dAb单体，其中所述dAb单体中一个或多个框架区的氨基酸序列与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同，或相对于人种系抗体基因片段编码的相应框架区，一个或多个所述框架区的氨基酸序列总共含有最高达5个氨基酸的差异。
9、权利要求7所述的dAb单体，其中所述dAb单体中FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同，或相对于人种系抗体基因片段编码的相应框架区，FR1、FR2、FR3和FR4的氨基酸序列总共含有最高达10个氨基酸的差异。
10、权利要求7所述的dAb单体，其中所述dAb单体包括FR1、FR2和FR3区，所述FR1、FR2和FR3的氨基酸序列与人种系抗体基因片段编码的相应框架区氨基酸序列相同。
11、权利要求7-10中任一项的所述dAb单体，其中所述人种系抗体基因片段是DPK9和JK1。
12、权利要求1所述的dAb单体，其中所述dAb单体与选自下述的dAb竞争与IL-1R1的结合：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ ID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ ID NO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQID NO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQ IDNO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ IDNO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ IDNO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ IDNO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ IDNO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ IDNO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ IDNO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ IDNO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ IDNO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ IDNO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQ IDNO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ IDNO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ IDNO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ IDNO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ IDNO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ IDNO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ IDNO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ IDNO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ IDNO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ IDNO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQ IDNO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ IDNO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ IDNO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ IDNO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ IDNO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ IDNO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ IDNO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ IDNO：164)、DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)、DOM4-1(SEQ IDNO：8)、DOM4-2(SEQ ID NO：9)、DOM4-3(SEQ ID NO：10)、DOM4-4(SEQ ID NO：11)、DOM4-5(SEQ ID NO：12)、DOM4-6(SEQID NO：13)、DOM4-7(SEQ ID NO：14)、DOM4-8(SEQ ID NO：15)、DOM4-9(SEQ ID NO：16)、DOM4-10(SEQ ID NO：17)、DOM4-11(SEQ ID NO：18)、DOM4-12(SEQ ID NO：19)、DOM4-13(SEQ IDNO：20)、DOM4-14(SEQ ID NO：21)、DOM4-15(SEQ ID NO：22)、DOM4-20(SEQ ID NO：23)、DOM4-21(SEQ ID NO：24)、DOM4-22(SEQ ID NO：25)、DOM4-23(SEQ ID NO：26)、DOM4-25(SEQ IDNO：27)、DOM4-26(SEQ ID NO：28)、DOM4-27(SEQ ID NO：29)、DOM4-28(SEQ ID NO：30)、DOM4-29(SEQ ID NO：31)、DOM4-31(SEQ ID NO：32)、DOM4-32(SEQ ID NO：33)、DOM4-33(SEQ IDNO：34)、DOM4-34(SEQ ID NO：35)、DOM4-36(SEQ ID NO：36)、DOM4-37(SEQ ID NO：37)、DOM4-38(SEQ ID NO：38)、DOM4-39(SEQ ID NO：39)、DOM4-40(SEQ ID NO：40)、DOM4-41(SEQ IDNO：41)、DOM4-42(SEQ ID NO：42)、DOM4-44(SEQ ID NO：43)、DOM4-45(SEQ ID NO：44)、DOM4-46(SEQ ID NO：45)、DOM4-49(SEQ ID NO：46)、DOM4-50(SEQ ID NO：47)、DOM4-74(SEQ IDNO：48)、DOM4-75(SEQ ID NO：49)、DOM4-76(SEQ ID NO：50)、DOM4-78(SEQ ID NO：51)、DOM4-79(SEQ ID NO：52)、DOM4-80(SEQ ID NO：53)、DOM4-81(SEQ ID NO：54)、DOM4-82(SEQ IDNO：55)、DOM4-83(SEQ ID NO：56)、DOM4-84(SEQ ID NO：57)、DOM4-85(SEQ ID NO：58)、DOM4-86(SEQ ID NO：59)、DOM4-87(SEQ ID NO：60)、DOM4-88(SEQ ID NO：61)、DOM4-89(SEQ IDNO：62)、DOM4-90(SEQ ID NO：63)、DOM4-91(SEQ ID NO：64)、DOM4-92(SEQ ID NO：65)、DOM4-93(SEQ ID NO：66)、DOM4-94(SEQ ID NO：67)、DOM4-95(SEQ ID NO：68)、DOM4-96(SEQ IDNO：69)、DOM4-97(SEQ ID NO：70)、DOM4-98(SEQ ID NO：71)、DOM4-99(SEQ ID NO：72)、DOM4-100(SEQ ID NO：73)、DOM4-101(SEQ ID NO：74)、DOM4-102(SEQ ID NO：75)、DOM4-103(SEQ IDNO：76)、DOM4-104(SEQ ID NO：77)、DOM4-105(SEQ ID NO：78)、DOM4-106(SEQ ID NO：79)、DOM4-107(SEQ ID NO：80)、DOM4-108(SEQ ID NO：81)、DOM4-109(SEQ ID NO：82)、DOM4-110(SEQID NO：83)、DOM4-111(SEQ ID NO：84)、DOM4-112(SEQ IDNO：85)、DOM4-113(SEQ ID NO：86)、DOM4-114(SEQ ID NO：87)、DOM4-115(SEQ ID NO：88)、DOM4-116(SEQ ID NO：89)、DOM4-117(SEQ ID NO：90)、DOM4-118(SEQ ID NO：91)、DOM4-119(SEQID NO：92)、DOM4-120(SEQ ID NO：93)、DOM4-121(SEQ IDNO：94)、DOM4-123(SEQ ID NO：166)、DOM4-124(SEQ ID NO：167)DOM4-125(SEQ ID NO：168)、DOM4-126(SEQ ID NO：169)、DOM4-127(SEQ ID NO：170)、DOM4-128(SEQ ID NO：171)、DOM4-129(SEQ ID NO：172)、DOM4-129-1(SEQ ID NO：173、)DOM4-129-2(SEQ ID NO：174)、DOM4-129-3(SEQ ID NO：175)、DOM4-129-4(SEQ ID NO：176)、DOM4-129-5(SEQ ID NO：177)、DOM4-129-6(SEQ ID NO：178)、DOM4-129-7(SEQ ID NO：179)、DOM4-129-8(SEQ ID NO：180)、DOM4-129-9(SEQ ID NO：181)、DOM4-129-10(SEQ ID NO：182)、DOM4-129-11(SEQ ID NO：183)、DOM4-129-12(SEQ ID NO：184)、DOM4-129-13(SEQ ID NO：185)、DOM4-129-14(SEQ ID NO：186)、DOM4-129-15(SEQ ID NO：187)、DOM4-129-16(SEQ ID NO：188)、DOM4-129-17(SEQ ID NO：189)、DOM4-129-18(SEQ ID NO：190)、DOM4-129-19(SEQ ID NO：191)、DOM4-129-20(SEQ ID NO：192)、DOM4-129-21(SEQ ID NO：193)、DOM4-129-22(SEQ ID NO：194)、DOM4-129-23(SEQ ID NO：195)、DOM4-129-24(SEQ ID NO：196)、DOM4-129-25(SEQ ID NO：197)、DOM4-129-26(SEQ ID NO：198)、DOM4-129-27(SEQ ID NO：199)、DOM4-129-28(SEQ ID NO：200)、DOM4-129-29(SEQ ID NO：201)、DOM4-129-31(SEQ ID NO：202)、DOM4-129-32(SEQ ID NO：203)、DOM4-129-33(SEQ ID NO：204)、DOM4-129-34(SEQ ID NO：205)、DOM4-129-35(SEQ ID NO：206)、DOM4-129-37(SEQ ID NO：207)、DOM4-129-38(SEQ ID NO：208)、DOM4-129-39(SEQ ID NO：209)、DOM4-129-40(SEQ ID NO：210)、DOM4-129-41(SEQ ID NO：211)、DOM4-129-42(SEQ ID NO：212)、DOM4-129-43(SEQ ID NO：213)、DOM4-129-44(SEQ ID NO：214)、DOM4-131(SEQ ID NO：347)、DOM4-132(SEQID NO：348)和DOM4-133(SEQ ID NO：349)。
13、权利要求12所述的dAb单体，其中所述dAb单体包含氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述的dAb的氨基酸序列具有至少约90％的氨基酸序列一致性：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ ID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ ID NO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQID NO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQ IDNO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ IDNO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ IDNO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ IDNO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ IDNO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ IDNO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ IDNO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ IDNO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ IDNO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ IDNO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQ IDNO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ IDNO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ IDNO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ IDNO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ IDNO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ IDNO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ IDNO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ IDNO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ IDNO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ IDNO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQ IDNO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ IDNO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ IDNO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ IDNO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ IDNO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ IDNO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ IDNO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ IDNO：164)、DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)、DOM4-1(SEQ IDNO：8)、DOM4-2(SEQ ID NO：9)、DOM4-3(SEQ ID NO：10)、DOM4-4(SEQ ID NO：11)、DOM4-5(SEQ ID NO：12)、DOM4-6(SEQID NO：13)、DOM4-7(SEQ ID NO：14)、DOM4-8(SEQ ID NO：15)、DOM4-9(SEQ ID NO：16)、DOM4-10(SEQ ID NO：17)、DOM4-11(SEQ ID NO：18)、DOM4-12(SEQ ID NO：19)、DOM4-13(SEQ IDNO：20)、DOM4-14(SEQ ID NO：21)、DOM4-15(SEQ ID NO：22)、DOM4-20(SEQ ID NO：23)、DOM4-21(SEQ ID NO：24)、DOM4-22(SEQ ID NO：25)、DOM4-23(SEQ ID NO：26)、DOM4-25(SEQ IDNO：27)、DOM4-26(SEQ ID NO：28)、DOM4-27(SEQ ID NO：29)、DOM4-28(SEQ ID NO：30)、DOM4-29(SEQ ID NO：31)、DOM4-31(SEQ ID NO：32)、DOM4-32(SEQ ID NO：33)、DOM4-33(SEQ IDNO：34)、DOM4-34(SEQ ID NO：35)、DOM4-36(SEQ ID NO：36)、DOM4-37(SEQ ID NO：37)、DOM4-38(SEQ ID NO：38)、DOM4-39(SEQ ID NO：39)、DOM4-40(SEQ ID NO：40)、DOM4-41(SEQ IDNO：41)、DOM4-42(SEQ ID NO：42)、DOM4-44(SEQ ID NO：43)、DOM4-45(SEQ ID NO：44)、DOM4-46(SEQ ID NO：45)、DOM4-49(SEQ ID NO：46)、DOM4-50(SEQ ID NO：47)、DOM4-74(SEQ IDNO：48)、DOM4-75(SEQ ID NO：49)、DOM4-76(SEQ ID NO：50)、DOM4-78(SEQ ID NO：51)、DOM4-79(SEQ ID NO：52)、DOM4-80(SEQ ID NO：53)、DOM4-81(SEQ ID NO：54)、DOM4-82(SEQ IDNO：55)、DOM4-83(SEQ ID NO：56)、DOM4-84(SEQ ID NO：57)、DOM4-85(SEQ ID NO：58)、DOM4-86(SEQ ID NO：59)、DOM4-87(SEQ ID NO：60)、DOM4-88(SEQ ID NO：61)、DOM4-89(SEQ IDNO：62)、DOM4-90(SEQ ID NO：63)、DOM4-91(SEQ ID NO：64)、DOM4-92(SEQ ID NO：65)、DOM4-93(SEQ ID NO：66)、DOM4-94(SEQ ID NO：67)、DOM4-95(SEQ ID NO：68)、DOM4-96(SEQ IDNO：69)、DOM4-97(SEQ ID NO：70)、DOM4-98(SEQ ID NO：71)、DOM4-99(SEQ ID NO：72)、DOM4-100(SEQ ID NO：73)、DOM4-101(SEQ ID NO：74)、DOM4-102(SEQ ID NO：75)、DOM4-103(SEQ IDNO：76)、DOM4-104(SEQ ID NO：77)、DOM4-105(SEQ ID NO：78)、DOM4-106(SEQ ID NO：79)、DOM4-107(SEQ ID NO：80)、DOM4-108(SEQ ID NO：81)、DOM4-109(SEQ ID NO：82)、DOM4-110(SEQID NO：83)、DOM4-111(SEQ ID NO：84)、DOM4-112(SEQ IDNO：85)、DOM4-113(SEQ ID NO：86)、DOM4-114(SEQ ID NO：87)、DOM4-115(SEQ ID NO：88)、DOM4-116(SEQ ID NO：89)、DOM4-117(SEQ ID NO：90)、DOM4-118(SEQ ID NO：91)、DOM4-119(SEQID NO：92)、DOM4-120(SEQ ID NO：93)、DOM4-121(SEQ IDNO：94)、DOM4-123(SEQ ID NO：166)、DOM4-124(SEQ ID NO：167)DOM4-125(SEQ ID NO：168)、DOM4-126(SEQ ID NO：169)、DOM4-127(SEQ ID NO：170)、DOM4-128(SEQ ID NO：171)、DOM4-129(SEQ ID NO：172)、DOM4-129-1(SEQ ID NO：173、)DOM4-129-2(SEQ ID NO：174)、DOM4-129-3(SEQ ID NO：175)、DOM4-129-4(SEQ ID NO：176)、DOM4-129-5(SEQ ID NO：177)、DOM4-129-6(SEQ ID NO：178)、DOM4-129-7(SEQ ID NO：179)、DOM4-129-8(SEQ ID NO：180)、DOM4-129-9(SEQ ID NO：181)、DOM4-129-10(SEQ ID NO：182)、DOM4-129-11(SEQ IDNO：183)、DOM4-129-12(SEQ ID NO：184)、DOM4-129-13(SEQ ID NO：185)、DOM4-129-14(SEQ ID NO：186)、DOM4-129-15(SEQ ID NO：187)、DOM4-129-16(SEQ ID NO：188)、DOM4-129-17(SEQ ID NO：189)、DOM4-129-18(SEQ ID NO：190)、DOM4-129-19(SEQ ID NO：191)、DOM4-129-20(SEQ ID NO：192)、DOM4-129-21(SEQ ID NO：193)、DOM4-129-22(SEQ ID NO：194)、DOM4-129-23(SEQ ID NO：195)、DOM4-129-24(SEQ ID NO：196)、DOM4-129-25(SEQ ID NO：197)、DOM4-129-26(SEQ ID NO：198)、DOM4-129-27(SEQ ID NO：199)、DOM4-129-28(SEQ ID NO：200)、DOM4-129-29(SEQ ID NO：201)、DOM4-129-31(SEQ ID NO：202)、DOM4-129-32(SEQ ID NO：203)、DOM4-129-33(SEQ ID NO：204)、DOM4-129-34(SEQ ID NO：205)、DOM4-129-35(SEQ ID NO：206)、DOM4-129-37(SEQ ID NO：207)、DOM4-129-38(SEQ ID NO：208)、DOM4-129-39(SEQ ID NO：209)、DOM4-129-40(SEQ ID NO：210)、DOM4-129-41(SEQ ID NO：211)、DOM4-129-42(SEQ ID NO：212)、DOM4-129-43(SEQ ID NO：213)、DOM4-129-44(SEQ ID NO：214)、DOM4-131(SEQ ID NO：347)、DOM4-132(SEQID NO：348)和DOM4-133(SEQ ID NO：349)。
14、权利要求1所述的dAb单体，其中所述dAb单体用表面等离子共振法测定，其与IL-1R1结合的亲和力常数(KD)为约300nM至约5pM。
15、一配体，其包含根据权利要求1-14中任一项的dAb单体，以及半衰期延长部分。
16、权利要求15所述的配体，其中所述半衰期延长部分为聚烷撑二醇部分、血清白蛋白或其片段、转铁蛋白受体或其转铁蛋白结合部分、或含有与提高体内半衰期的多肽结合的位点的抗体或抗体片段。
17、权利要求16所述的配体，其中所述半衰期延长部分为聚乙二醇部分。
18、权利要求16所述的配体，其中所述半衰期延长部分为含有血清白蛋白或新生儿Fc受体结合位点的抗体或抗体片段。
19、权利要求18所述的配体，其中所述抗体或抗体片段为抗体片段，所述抗体片段为免疫球蛋白单可变域。
20、权利要求19所述的配体，其中所述免疫球蛋白单可变域与选自下列的dAb竞争与人血清白蛋白的结合：DOM7m-16(SEQ IDNO：723)、DOM7m-12(SEQ ID NO：724)、DOM7m-26(SEQ IDNO：725)、DOM7r-1(SEQ ID NO：726)、DOM7r-3(SEQ ID NO：727)、DOM7r-4(SEQ ID NO：728)、DOM7r-5(SEQ ID NO：729)、DOM7r-7(SEQ ID NO：730)、DOM7r-8(SEQ ID NO：731)、DOM7h-2(SEQ IDNO：732)、DOM7h-3(SEQ ID NO：733)、DOM7h-4(SEQ IDNO：734)、DOM7h-6(SEQ ID NO：735)、DOM7h-1(SEQ IDNO：736)、DOM7h-7(SEQ ID NO：737)、DOM7h-8(SEQ IDNO：746)、DOM7r-13(SEQ ID NO：747)、DOM7r-14(SEQ IDNO：748)、DOM7h-22(SEQ ID NO：739)、DOM7h-23(SEQ IDNO：740)、DOM7h-24(SEQ ID NO：741)、DOM7h-25(SEQ IDNO：742)、DOM7h-26(SEQ ID NO：743)、DOM7h-21(SEQ IDNO：744)、DOM7h-27(SEQ ID NO：745)、DOM7r-15(SEQ IDNO：749)、DOM7r-16(SEQ ID NO：750)、DOM7r-17(SEQ IDNO：751)、DOM7r-18(SEQ ID NO：752)、DOM7r-19(SEQ IDNO：753)、DOM7r-20(SEQ ID NO：754)、DOM7r-21(SEQ IDNO：755)、DOM7r-22(SEQ ID NO：756)、DOM7r-23(SEQ IDNO：757)、DOM7r-24(SEQ ID NO：758)、DOM7r-25(SEQ IDNO：759)、DOM7r-26(SEQ ID NO：760)、DOM7r-27(SEQ IDNO：761)、DOM7r-28(SEQ ID NO：762)、DOM7r-29(SEQ IDNO：763)、DOM7r-30(SEQ ID NO：764)、DOM7r-31(SEQ IDNO：765)、DOM7r-32(SEQ ID NO：766)和DOM7r-33(SEQ IDNO：767)。
21、权利要求20所述的配体，其中所述与人血清白蛋白结合的免疫球蛋白单可变域含有氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述的dAb的氨基酸序列具有至少约90％的氨基酸序列一致性：DOM7m-16(SEQ ID NO：723)、DOM7m-12(SEQ ID NO：724)、DOM7m-26(SEQ ID NO：725)、DOM7r-1(SEQ ID NO：726)、DOM7r-3(SEQ IDNO：727)、DOM7r-4(SEQ ID NO：728)、DOM7r-5(SEQ ID NO：729)、DOM7r-7(SEQ ID NO：730)、DOM7r-8(SEQ ID NO：731)、DOM7h-2(SEQ ID NO：732)、DOM7h-3(SEQ ID NO：733)、DOM7h-4(SEQ IDNO：734)、DOM7h-6(SEQ ID NO：735)、DOM7h-1(SEQ IDNO：736)、DOM7h-7(SEQ ID NO：737)、DOM7h-8(SEQ IDNO：746)、DOM7r-13(SEQ ID NO：747)、DOM7r-14(SEQ IDNO：748)、DOM7h-22(SEQ ID NO：739)、DOM7h-23(SEQ IDNO：740)、DOM7h-24(SEQ ID NO：741)、DOM7h-25(SEQ IDNO：742)、DOM7h-26(SEQ ID NO：743)、DOM7h-21(SEQ IDNO：744)、DOM7h-27(SEQ ID NO：745)、DOM7r-15(SEQ IDNO：749)、DOM7r-16(SEQ ID NO：750)、DOM7r-17(SEQ IDNO：751)、DOM7r-18(SEQ ID NO：752)、DOM7r-19(SEQ IDNO：753)、DOM7r-20(SEQ ID NO：754)、DOM7r-21(SEQ IDNO：755)、DOM7r-22(SEQ ID NO：756)、DOM7r-23(SEQ IDNO：757)、DOM7r-24(SEQ ID NO：758)、DOM7r-25(SEQ IDNO：759)、DOM7r-26(SEQ ID NO：760)、DOM7r-27(SEQ IDNO：761)、DOM7r-28(SEQ ID NO：762)、DOM7r-29(SEQ IDNO：763)、DOM7r-30(SEQ ID NO：764)、DOM7r-31(SEQ IDNO：765)、DOM7r-32(SEQ ID NO：766)和DOM7r-33(SEQ IDNO：767)。
22、一配体，含有对IL-1R1具有结合特异性并抑制IL-1与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1的结合的dAb单体，其中所述dAb单体选自DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)和DOM4-122-24(SEQID NO：2)。
23、权利要求22所述的配体，其中所述配体为dAb单体。
24、权利要求22所述的配体，其中所述配体为所述dAb单体的同型二聚体、同型三聚体或同型寡聚体。
25、权利要求22所述的配体，其中所述配体为异型二聚体、异型三聚体或异型寡聚体，并包含DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)和DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)。
26、权利要求22所述的配体，进一步包含与血清白蛋白结合的dAb单体。
27、权利要求26所述的配体，其中所述与血清白蛋白结合的dAb单体为DOM7h-8(SEQ ID NO：746)。
28、权利要求27所述的配体，其中所述配体包含DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)与DOM7h-8(SEQ ID NO：746)，或包含DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)与DOM7h-8(SEQ ID NO：746)。
29、一配体，其包含对IL-1R1具有结合特异性并抑制IL-1与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的dAb单体，以及对TNFR1具有结合特异性的dAb单体。
30、权利要求29所述的配体，其中对IL-1R1具有结合特异性并抑制IL-1和IL-1ra与IL-1R1结合的所述dAb单体与选自下述的dAb竞争与IL-1R1的结合：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ ID NO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQID NO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQ IDNO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ IDNO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ IDNO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ IDNO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ IDNO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ IDNO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ IDNO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ IDNO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ IDNO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ IDNO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQ IDNO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ IDNO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ IDNO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ IDNO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ IDNO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ IDNO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ IDNO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ IDNO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ IDNO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ IDNO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQ IDNO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ IDNO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ IDNO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ IDNO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ IDNO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ IDNO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ IDNO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ IDNO：164)、DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)、DOM4-1(SEQ IDNO：8)、DOM4-2(SEQ ID NO：9)、DOM4-3(SEQ ID NO：10)、DOM4-4(SEQ ID NO：11)、DOM4-5(SEQ ID NO：12)、DOM4-6(SEQID NO：13)、DOM4-7(SEQ ID NO：14)、DOM4-8(SEQ ID NO：15)、DOM4-9(SEQ ID NO：16)、DOM4-10(SEQ ID NO：17)、DOM4-11(SEQ ID NO：18)、DOM4-12(SEQ ID NO：19)、DOM4-13(SEQ IDNO：20)、DOM4-14(SEQ ID NO：21)、DOM4-15(SEQ ID NO：22)、DOM4-20(SEQ ID NO：23)、DOM4-21(SEQ ID NO：24)、DOM4-22(SEQ ID NO：25)、DOM4-23(SEQ ID NO：26)、DOM4-25(SEQ IDNO：27)、DOM4-26(SEQ ID NO：28)、DOM4-27(SEQ ID NO：29)、DOM4-28(SEQ ID NO：30)、DOM4-29(SEQ ID NO：31)、DOM4-31(SEQ ID NO：32)、DOM4-32(SEQ ID NO：33)、DOM4-33(SEQ IDNO：34)、DOM4-34(SEQ ID NO：35)、DOM4-36(SEQ ID NO：36)、DOM4-37(SEQ ID NO：37)、DOM4-38(SEQ ID NO：38)、DOM4-39(SEQ ID NO：39)、DOM4-40(SEQ ID NO：40)、DOM4-41(SEQ IDNO：41)、DOM4-42(SEQ ID NO：42)、DOM4-44(SEQ ID NO：43)、DOM4-45(SEQ ID NO：44)、DOM4-46(SEQ ID NO：45)、DOM4-49(SEQ ID NO：46)、DOM4-50(SEQ ID NO：47)、DOM4-74(SEQ IDNO：48)、DOM4-75(SEQ ID NO：49)、DOM4-76(SEQ ID NO：50)、DOM4-78(SEQ ID NO：51)、DOM4-79(SEQ ID NO：52)、DOM4-80(SEQ ID NO：53)、DOM4-81(SEQ ID NO：54)、DOM4-82(SEQ IDNO：55)、DOM4-83(SEQ ID NO：56)、DOM4-84(SEQ ID NO：57)、DOM4-85(SEQ ID NO：58)、DOM4-86(SEQ ID NO：59)、DOM4-87(SEQ ID NO：60)、DOM4-88(SEQ ID NO：61)、DOM4-89(SEQ IDNO：62)、DOM4-90(SEQ ID NO：63)、DOM4-91(SEQ ID NO：64)、DOM4-92(SEQ ID NO：65)、DOM4-93(SEQ ID NO：66)、DOM4-94(SEQ ID NO：67)、DOM4-95(SEQ ID NO：68)、DOM4-96(SEQ IDNO：69)、DOM4-97(SEQ ID NO：70)、DOM4-98(SEQ ID NO：71)、DOM4-99(SEQ ID NO：72)、DOM4-100(SEQ ID NO：73)、DOM4-101(SEQ ID NO：74)、DOM4-102(SEQ ID NO：75)、DOM4-103(SEQ IDNO：76)、DOM4-104(SEQ ID NO：77)、DOM4-105(SEQ ID NO：78)、DOM4-106(SEQ ID NO：79)、DOM4-107(SEQ ID NO：80)、DOM4-108(SEQ ID NO：81)、DOM4-109(SEQ ID NO：82)、DOM4-110(SEQID NO：83)、DOM4-111(SEQ ID NO：84)、DOM4-112(SEQ IDNO：85)、DOM4-113(SEQ ID NO：86)、DOM4-114(SEQ ID NO：87)、DOM4-115(SEQ ID NO：88)、DOM4-116(SEQ ID NO：89)、DOM4-117(SEQ ID NO：90)、DOM4-118(SEQ ID NO：91)、DOM4-119(SEQID NO：92)、DOM4-120(SEQ ID NO：93)、DOM4-121(SEQ IDNO：94)、DOM4-123(SEQ ID NO：166)、DOM4-124(SEQ ID NO：167)DOM4-125(SEQ ID NO：168)、DOM4-126(SEQ ID NO：169)、DOM4-127(SEQ ID NO：170)、DOM4-128(SEQ ID NO：171)、DOM4-129(SEQ ID NO：172)、DOM4-129-1(SEQ ID NO：173、)DOM4-129-2(SEQ ID NO：174)、DOM4-129-3(SEQ ID NO：175)、DOM4-129-4(SEQ ID NO：176)、DOM4-129-5(SEQ ID NO：177)、DOM4-129-6(SEQ ID NO：178)、DOM4-129-7(SEQ ID NO：179)、DOM4-129-8(SEQ ID NO：180)、DOM4-129-9(SEQ ID NO：181)、DOM4-129-10(SEQ ID NO：182)、DOM4-129-11(SEQ ID NO：183)、DOM4-129-12(SEQ ID NO：184)、DOM4-129-13(SEQ ID NO：185)、DOM4-129-14(SEQ ID NO：186)、DOM4-129-15(SEQ ID NO：187)、DOM4-129-16(SEQ ID NO：188)、DOM4-129-17(SEQ ID NO：189)、DOM4-129-18(SEQ ID NO：190)、DOM4-129-19(SEQ ID NO：191)、DOM4-129-20(SEQ ID NO：192)、DOM4-129-21(SEQ ID NO：193)、DOM4-129-22(SEQ ID NO：194)、DOM4-129-23(SEQ ID NO：195)、DOM4-129-24(SEQ ID NO：196)、DOM4-129-25(SEQ ID NO：197)、DOM4-129-26(SEQ ID NO：198)、DOM4-129-27(SEQ ID NO：199)、DOM4-129-28(SEQ ID NO：200)、DOM4-129-29(SEQ ID NO：201)、DOM4-129-31(SEQ ID NO：202)、DOM4-129-32(SEQ ID NO：203)、DOM4-129-33(SEQ ID NO：204)、DOM4-129-34(SEQ ID NO：205)、DOM4-129-35(SEQ ID NO：206)、DOM4-129-37(SEQ ID NO：207)、DOM4-129-38(SEQ ID NO：208)、DOM4-129-39(SEQ ID NO：209)、DOM4-129-40(SEQ ID NO：210)、DOM4-129-41(SEQ ID NO：211)、DOM4-129-42(SEQ ID NO：212)、DOM4-129-43(SEQ ID NO：213)、DOM4-129-44(SEQ ID NO：214)、DOM4-131(SEQ ID NO：347)、DOM4-132(SEQID NO：348)和DOM4-133(SEQ ID NO：349)。
31、权利要求30所述的配体，其中对IL-1R1具有结合特异性并抑制IL-1和IL-1ra与IL-1R1结合的所述dAb单体含有氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述的dAb的氨基酸序列具有至少约90％的氨基酸序列一致性：DOM4-122-23(SEQ ID NO：1)、DOM4-122-24(SEQ ID NO：2)、DOM4-122(SEQ ID NO：95)、DOM4-122-1(SEQ IDNO：96)、DOM4-122-2(SEQ ID NO：97)、DOM4-122-3(SEQ IDNO：98)、DOM4-122-4(SEQ ID NO：99)、DOM4-122-5(SEQ IDNO：100)、DOM4-122-6(SEQ ID NO：101)、DOM4-122-7(SEQ IDNO：102)、DOM4-122-8(SEQ ID NO：103)、DOM4-122-9(SEQ IDNO：104)、DOM4-122-10(SEQ ID NO：105)、DOM4-122-11(SEQ IDNO：106)、DOM4-122-12(SEQ ID NO：107)、DOM4-122-13(SEQ IDNO：108)、DOM4-122-14(SEQ ID NO：109)、DOM4-122-15(SEQ IDNO：110)、DOM4-122-16(SEQ ID NO：111)、DOM4-122-17(SEQ IDNO：112)、DOM4-122-18(SEQ ID NO：113)、DOM4-122-19(SEQ IDNO：114)、DOM4-122-20(SEQ ID NO：115)、DOM4-122-21(SEQ IDNO：116)、DOM4-122-22(SEQ ID NO：117)、DOM4-122-25(SEQ IDNO：118)、DOM4-122-26(SEQ ID NO：119)、DOM4-122-27(SEQ IDNO：120)、DOM4-122-28(SEQ ID NO：121)、DOM4-122-29(SEQ IDNO：122)、DOM4-122-30(SEQ ID NO：123)、DOM4-122-31(SEQ IDNO：124)、DOM4-122-32(SEQ ID NO：125)、DOM4-122-33(SEQ IDNO：126)、DOM4-122-34(SEQ ID NO：127)、DOM4-122-35(SEQ IDNO：128)、DOM4-122-36(SEQ ID NO：129)、DOM4-122-37(SEQ IDNO：130)、DOM4-122-38(SEQ ID NO：131)、DOM4-122-39(SEQ IDNO：132)、DOM4-122-40(SEQ ID NO：133)、DOM4-122-41(SEQ IDNO：134)、DOM4-122-42(SEQ ID NO：135)、DOM4-122-43(SEQ IDNO：136)、DOM4-122-44(SEQ ID NO：137)、DOM4-122-45(SEQ IDNO：138)、DOM4-122-46(SEQ ID NO：139)、DOM4-122-47(SEQ IDNO：140)、DOM4-122-48(SEQ ID NO：141)、DOM4-122-49(SEQ IDNO：142)、DOM4-122-50(SEQ ID NO：143)、DOM4-122-51(SEQ IDNO：144)、DOM4-122-52(SEQ ID NO：145)、DOM4-122-54(SEQ IDNO：146)、DOM4-122-55(SEQ ID NO：147)、DOM4-122-56(SEQ IDNO：148)、DOM4-122-57(SEQ ID NO：149)、DOM4-122-58(SEQ IDNO：150)、DOM4-122-59(SEQ ID NO：151)、DOM4-122-60(SEQ IDNO：152)、DOM4-122-61(SEQ ID NO：153)、DOM4-122-62(SEQ IDNO：154)、DOM4-122-63(SEQ ID NO：155)、DOM4-122-64(SEQ IDNO：156)、DOM4-122-65(SEQ ID NO：157)、DOM4-122-66(SEQ IDNO：158)、DOM4-122-67(SEQ ID NO：159)、DOM4-122-68(SEQ IDNO：160)、DOM4-122-69(SEQ ID NO：161)、DOM4-122-70(SEQ IDNO：162)、DOM4-122-71(SEQ ID NO：163)、DOM4-122-72(SEQ IDNO：164)、DOM4-122-73(SEQ ID NO：165)、DOM4-1(SEQ IDNO：8)、DOM4-2(SEQ ID NO：9)、DOM4-3(SEQ ID NO：10)、DOM4-4(SEQ ID NO：11)、DOM4-5(SEQ ID NO：12)、DOM4-6(SEQID NO：13)、DOM4-7(SEQ ID NO：14)、DOM4-8(SEQ ID NO：15)、DOM4-9(SEQ ID NO：16)、DOM4-10(SEQ ID NO：17)、DOM4-11(SEQ ID NO：18)、DOM4-12(SEQ ID NO：19)、DOM4-13(SEQ IDNO：20)、DOM4-14(SEQ ID NO：21)、DOM4-15(SEQ ID NO：22)、DOM4-20(SEQ ID NO：23)、DOM4-21(SEQ ID NO：24)、DOM4-22(SEQ ID NO：25)、DOM4-23(SEQ ID NO：26)、DOM4-25(SEQ IDNO：27)、DOM4-26(SEQ ID NO：28)、DOM4-27(SEQ ID NO：29)、DOM4-28(SEQ ID NO：30)、DOM4-29(SEQ ID NO：31)、DOM4-31(SEQ ID NO：32)、DOM4-32(SEQ ID NO：33)、DOM4-33(SEQ IDNO：34)、DOM4-34(SEQ ID NO：35)、DOM4-36(SEQ ID NO：36)、DOM4-37(SEQ ID NO：37)、DOM4-38(SEQ ID NO：38)、DOM4-39(SEQ ID NO：39)、DOM4-40(SEQ ID NO：40)、DOM4-41(SEQ IDNO：41)、DOM4-42(SEQ ID NO：42)、DOM4-44(SEQ ID NO：43)、DOM4-45(SEQ ID NO：44)、DOM4-46(SEQ ID NO：45)、DOM4-49(SEQ ID NO：46)、DOM4-50(SEQ ID NO：47)、DOM4-74(SEQ IDNO：48)、DOM4-75(SEQ ID NO：49)、DOM4-76(SEQ ID NO：50)、DOM4-78(SEQ ID NO：51)、DOM4-79(SEQ ID NO：52)、DOM4-80(SEQ ID NO：53)、DOM4-81(SEQ ID NO：54)、DOM4-82(SEQ IDNO：55)、DOM4-83(SEQ ID NO：56)、DOM4-84(SEQ ID NO：57)、DOM4-85(SEQ ID NO：58)、DOM4-86(SEQ ID NO：59)、DOM4-87(SEQ ID NO：60)、DOM4-88(SEQ ID NO：61)、DOM4-89(SEQ IDNO：62)、DOM4-90(SEQ ID NO：63)、DOM4-91(SEQ ID NO：64)、DOM4-92(SEQ ID NO：65)、DOM4-93(SEQ ID NO：66)、DOM4-94(SEQ ID NO：67)、DOM4-95(SEQ ID NO：68)、DOM4-96(SEQ IDNO：69)、DOM4-97(SEQ ID NO：70)、DOM4-98(SEQ ID NO：71)、DOM4-99(SEQ ID NO：72)、DOM4-100(SEQ ID NO：73)、DOM4-101(SEQ ID NO：74)、DOM4-102(SEQ ID NO：75)、DOM4-103(SEQ IDNO：76)、DOM4-104(SEQ ID NO：77)、DOM4-105(SEQ ID NO：78)、DOM4-106(SEQ ID NO：79)、DOM4-107(SEQ ID NO：80)、DOM4-108(SEQ ID NO：81)、DOM4-109(SEQ ID NO：82)、DOM4-110(SEQID NO：83)、DOM4-111(SEQ ID NO：84)、DOM4-112(SEQ IDNO：85)、DOM4-113(SEQ ID NO：86)、DOM4-114(SEQ ID NO：87)、DOM4-115(SEQ ID NO：88)、DOM4-116(SEQ ID NO：89)、DOM4-117(SEQ ID NO：90)、DOM4-118(SEQ ID NO：91)、DOM4-119(SEQID NO：92)、DOM4-120(SEQ ID NO：93)、DOM4-121(SEQ IDNO：94)、DOM4-123(SEQ ID NO：166)、DOM4-124(SEQ ID NO：167)DOM4-125(SEQ ID NO：168)、DOM4-126(SEQ ID NO：169)、DOM4-127(SEQ ID NO：170)、DOM4-128(SEQ ID NO：171)、DOM4-129(SEQ ID NO：172)、DOM4-129-1(SEQ ID NO：173、)DOM4-129-2(SEQ ID NO：174)、DOM4-129-3(SEQ ID NO：175)、DOM4-129-4(SEQ ID NO：176)、DOM4-129-5(SEQ ID NO：177)、DOM4-129-6(SEQ ID NO：178)、DOM4-129-7(SEQ ID NO：179)、DOM4-129-8(SEQ ID NO：180)、DOM4-129-9(SEQ ID NO：181)、DOM4-129-10(SEQ ID NO：182)、DOM4-129-11(SEQ ID NO：183)、DOM4-129-12(SEQ ID NO：184)、DOM4-129-13(SEQ ID NO：185)、DOM4-129-14(SEQ ID NO：186)、DOM4-129-15(SEQ ID NO：187)、DOM4-129-16(SEQ ID NO：188)、DOM4-129-17(SEQ ID NO：189)、DOM4-129-18(SEQ ID NO：190)、DOM4-129-19(SEQ ID NO：191)、DOM4-129-20(SEQ ID NO：192)、DOM4-129-21(SEQ ID NO：193)、DOM4-129-22(SEQ ID NO：194)、DOM4-129-23(SEQ ID NO：195)、DOM4-129-24(SEQ ID NO：196)、DOM4-129-25(SEQ ID NO：197)、DOM4-129-26(SEQ ID NO：198)、DOM4-129-27(SEQ ID NO：199)、DOM4-129-28(SEQ ID NO：200)、DOM4-129-29(SEQ ID NO：201)、DOM4-129-31(SEQ ID NO：202)、DOM4-129-32(SEQ ID NO：203)、DOM4-129-33(SEQ ID NO：204)、DOM4-129-34(SEQ ID NO：205)、DOM4-129-35(SEQ ID NO：206)、DOM4-129-37(SEQ ID NO：207)、DOM4-129-38(SEQ ID NO：208)、DOM4-129-39(SEQ ID NO：209)、DOM4-129-40(SEQ ID NO：210)、DOM4-129-41(SEQ ID NO：211)、DOM4-129-42(SEQ ID NO：212)、DOM4-129-43(SEQ ID NO：213)、DOM4-129-44(SEQ ID NO：214)、DOM4-131(SEQ ID NO：347)、DOM4-132(SEQID NO：348)和DOM4-133(SEQ ID NO：349)。
32、权利要求29-31中任一项的所述配体，其中对TNFR1具有结合特异性的所述dAb单体与选自下列的dAb竞争与TNFR1的结合：TAR2h-12(SEQ ID NO：785)、TAR2h-13(SEQ ID NO：786)、TAR2h-14(SEQ ID NO：787)、TAR2h-16(SEQ ID NO：788)、TAR2h-17(SEQ ID NO：789)、TAR2h-18(SEQ ID NO：790)、TAR2h-19(SEQID NO：791)、TAR2h-20(SEQ ID NO：792)、TAR2h-21(SEQ IDNO：793)、TAR2h-22(SEQ ID NO：794)、TAR2h-23(SEQ IDNO：795)、TAR2h-24(SEQ ID NO：796)、TAR2h-25(SEQ IDNO：797)、TAR2h-26(SEQ ID NO：798)、TAR2h-27(SEQ IDNO：799)、TAR2h-29(SEQ ID NO：800)、TAR2h-30(SEQ IDNO：801)、TAR2h-32(SEQ ID NO：802)、TAR2h-33(SEQ IDNO：803)、TAR2h-10-1(SEQ ID NO：804)、TAR2h-10-2(SEQ IDNO：805)、TAR2h-10-3(SEQ ID NO：806)、TAR2h-10-4(SEQ IDNO：807)、TAR2h-10-5(SEQ ID NO：808)、TAR2h-10-6(SEQ IDNO：809)、TAR2h-10-7(SEQ ID NO：810)、TAR2h-10-8(SEQ IDNO：811)、TAR2h-10-9(SEQ ID NO：812)、TAR2h-10-10(SEQ IDNO：813)、TAR2h-10-11(SEQ ID NO：814)、TAR2h-10-12(SEQ IDNO：815)、TAR2h-10-13(SEQ ID NO：816)、TAR2h-10-14(SEQ IDNO：817)、TAR2h-10-15(SEQ ID NO：818)、TAR2h-10-16(SEQ IDNO：819)、TAR2h-10-17(SEQ ID NO：820)、TAR2h-10-18(SEQ IDNO：821)、TAR2h-10-19(SEQ ID NO：822)、TAR2h-10-20(SEQ IDNO：823)、TAR2h-10-21(SEQ IDNO：824)、TAR2h-10-22(SEQ IDNO：825)、TAR2h-10-27(SEQ ID NO：826)、TAR2h-10-29(SEQ IDNO：827)、TAR2h-10-31(SEQ ID NO：828)、TAR2h-10-35(SEQ IDNO：829)、TAR2h-10-36(SEQ ID NO：830)、TAR2h-10-37(SEQ IDNO：831)、TAR2h-10-38(SEQ ID NO：832)、TAR2h-10-45(SEQ IDNO：833)、TAR2h-10-47(SEQ ID NO：834)、TAR2h-10-48(SEQ IDNO：835)、TAR2h-10-57(SEQ ID NO：836)、TAR2h-10-56SEQ IDNO：837)、TAR2h-10-58(SEQ ID NO：838)、TAR2h-10-66(SEQ IDNO：839)、TAR2h-10-64(SEQ ID NO：840)、TAR2h-10-65(SEQ IDNO：841)、TAR2h-10-68(SEQ ID NO：842)、TAR2h-10-69(SEQ IDNO：843)、TAR2h-10-67(SEQ ID NO：844)、TAR2h-10-61(SEQ IDNO：845)、TAR2h-10-62(SEQ ID NO：846)、TAR2h-10-63(SEQ IDNO：847)、TAR2h-10-60(SEQ ID NO：848)、TAR2h-10-55(SEQ IDNO：849)、TAR2h-10-59(SEQ ID NO：850)、TAR2h-10-70(SEQ IDNO：851)、TAR2h-34(SEQ ID NO：852)、TAR2h-35(SEQ IDNO：853)、TAR2h-36(SEQ ID NO：854)、TAR2h-37(SEQ IDNO：855)、TAR2h-38(SEQ ID NO：856)、TAR2h-39(SEQ IDNO：857)、TAR2h-40(SEQ ID NO：858)、TAR2h-41(SEQ IDNO：859)、TAR2h-42(SEQ ID NO：860)、TAR2h-43(SEQ IDNO：861)、TAR2h-44(SEQ ID NO：862)、TAR2h-45(SEQ IDNO：863)、TAR2h-47(SEQ ID NO：864)、TAR2h-48(SEQ IDNO：865)、TAR2h-50(SEQ ID NO：866)、TAR2h-51(SEQ IDNO：867)、TAR2h-66(SEQ ID NO：868)、TAR2h-67(SEQ IDNO：869)、TAR2h-68(SEQ ID NO：870)、TAR2h-70(SEQ IDNO：871)、TAR2h-71(SEQ ID NO：872)、TAR2h-72(SEQ IDNO：873)、TAR2h-73(SEQ ID NO：874)、TAR2h-74(SEQ IDNO：875)、TAR2h-75(SEQ ID NO：876)、TAR2h-76(SEQ IDNO：877)、TAR2h-77(SEQ ID NO：878)、TAR2h-78(SEQ IDNO：879)、TAR2h-79(SEQ ID NO：880)、TAR2h-15(SEQ IDNO：881)、TAR2h-131-8(SEQ ID NO：882)、TAR2h-131-24(SEQ IDNO：883)、TAR2h-15-8(SEQ ID NO：884)、TAR2h-15-8-1(SEQ IDNO：885)、TAR2h-15-8-2(SEQ ID NO：886)、TAR2h-185-23(SEQ IDNO：887)、TAR2h-154-10-5(SEQ ID NO：888)、TAR2h-14-2(SEQ IDNO：889)、TAR2h-151-8(SEQ ID NO：890)、TAR2h-152-7(SEQ IDNO：891)、TAR2h-35-4(SEQ ID NO：892)、TAR2h-154-7(SEQ IDNO：893)、TAR2h-80(SEQ ID NO：894)、TAR2h-81(SEQ IDNO：895)、TAR2h-82(SEQ ID NO：896)、TAR2h-83(SEQ IDNO：897)、TAR2h-84(SEQ ID NO：898)、TAR2h-85(SEQ IDNO：899)、TAR2h-86(SEQ ID NO：900)、TAR2h-87(SEQ IDNO：901)、TAR2h-88(SEQ ID NO：902)、TAR2h-89(SEQ IDNO：903)、TAR2h-90(SEQ ID NO：904)、TAR2h-91(SEQ IDNO：905)、TAR2h-92(SEQ ID NO：906)、TAR2h-93(SEQ IDNO：907)、TAR2h-94(SEQ ID NO：908)、TAR2h-95(SEQ IDNO：909)、TAR2h-96(SEQ ID NO：910)、TAR2h-97(SEQ IDNO：911)、TAR2h-99(SEQ ID NO：912)、TAR2h-100(SEQ IDNO：913)、TAR2h-101(SEQ ID NO：914)、TAR2h-102(SEQ IDNO：915)、TAR2h-103(SEQ ID NO：916)、TAR2h-104(SEQ IDNO：917)、TAR2h-105(SEQ ID NO：918)、TAR2h-106(SEQ IDNO：919)、TAR2h-107(SEQ ID NO：920)、TAR2h-108(SEQ IDNO：921)、TAR2h-109(SEQ ID NO：922)、TAR2h-110(SEQ IDNO：923)、TAR2h-111(SEQ ID NO：924)、TAR2h-112(SEQ IDNO：925)、TAR2h-113(SEQ ID NO：926)、TAR2h-114(SEQ IDNO：927)、TAR2h-115(SEQ IDNO：928)、TAR2h-116(SEQ IDNO：929)、TAR2h-117(SEQ ID NO：930)、TAR2h-118(SEQ IDNO：931)、TAR2h-119(SEQ ID NO：932)、TAR2h-120(SEQ IDNO：933)、TAR2h-121(SEQ ID NO：934)、TAR2h-122(SEQ IDNO：935)、TAR2h-123(SEQ ID NO：936)、TAR2h-124(SEQ IDNO：937)、TAR2h-125(SEQ ID NO：938)、TAR2h-126(SEQ IDNO：939)、TAR2h-127(SEQ ID NO：940)、TAR2h-128(SEQ IDNO：941)、TAR2h-129(SEQ ID NO：942)、TAR2h-130(SEQ IDNO：943)、TAR2h-131(SEQ ID NO：944)、TAR2h-132(SEQ IDNO：945)、TAR2h-133(SEQ ID NO：946)、TAR2h-151(SEQ IDNO：947)、TAR2h-152(SEQ ID NO：948)、TAR2h-153(SEQ IDNO：949)、TAR2h-154(SEQ ID NO：950)、TAR2h-159(SEQ IDNO：951)、TAR2h-165(SEQ ID NO：952)、TAR2h-166(SEQ IDNO：953)、TAR2h-168(SEQ ID NO：954)、TAR2h-171(SEQ IDNO：955)、TAR2h-172(SEQ ID NO：956)、TAR2h-173(SEQ IDNO：957)、TAR2h-174(SEQ ID NO：958)、TAR2h-176(SEQ IDNO：959)、TAR2h-178(SEQ ID NO：960)、TAR2h-201(SEQ IDNO：961)、TAR2h-202(SEQ ID NO：962)、TAR2h-203(SEQ IDNO：963)、TAR2h-204(SEQ ID NO：964)、TAR2h-185-25(SEQ IDNO：965)、TAR2h-154-10 SEQ ID NO：966)、TAR2h-205(SEQ IDNO：967)、TAR2h-10(SEQ ID NO：968)、TAR2h-5(SEQ IDNO：969)、TAR2h-5d1(SEQ ID NO：970)、TAR2h-5d2(SEQ IDNO：971)、TAR2h-5d3(SEQ ID NO：972)、TAR2h-5d4(SEQ IDNO：973)、TAR2h-5d5(SEQ ID NO：974)、TAR2h-5d6(SEQ IDNO：975)、TAR2h-5d7(SEQ ID NO：976)、TAR2h-5d8(SEQ IDNO：977)、TAR2h-5d9(SEQ ID NO：978)、TAR2h-5d10(SEQ IDNO：979)、TAR2h-5d11(SEQ ID NO：980)、TAR2h-5d12(SEQ IDNO：981)和TAR2h-5d13(SEQ ID NO：982)。
33、权利要求32所述的配体，其中对TNFR1具有结合特异性的所述dAb单体含有氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述的dAb的氨基酸序列具有至少约90％的氨基酸序列一致性：TAR2h-12(SEQ ID NO：785)、TAR2h-13(SEQ ID NO：786)、TAR2h-14(SEQ IDNO：787)、TAR2h-16(SEQ ID NO：788)、TAR2h-17(SEQ IDNO：789)、TAR2h-18(SEQ ID NO：790)、TAR2h-19(SEQ IDNO：791)、TAR2h-20(SEQ ID NO：792)、TAR2h-21(SEQ IDNO：793)、TAR2h-22(SEQ ID NO：794)、TAR2h-23(SEQ IDNO：795)、TAR2h-24(SEQ ID NO：796)、TAR2h-25(SEQ IDNO：797)、TAR2h-26(SEQ ID NO：798)、TAR2h-27(SEQ IDNO：799)、TAR2h-29(SEQ ID NO：800)、TAR2h-30(SEQ IDNO：801)、TAR2h-32(SEQ ID NO：802)、TAR2h-33(SEQ IDNO：803)、TAR2h-10-1(SEQ ID NO：804)、TAR2h-10-2(SEQ IDNO：805)、TAR2h-10-3(SEQ ID NO：806)、TAR2h-10-4(SEQ IDNO：807)、TAR2h-10-5(SEQ ID NO：808)、TAR2h-10-6(SEQ IDNO：809)、TAR2h-10-7(SEQ ID NO：810)、TAR2h-10-8(SEQ IDNO：811)、TAR2h-10-9(SEQ ID NO：812)、TAR2h-10-10(SEQ IDNO：813)、TAR2h-10-11(SEQ ID NO：814)、TAR2h-10-12(SEQ IDNO：815)、TAR2h-10-13(SEQ ID NO：816)、TAR2h-10-14(SEQ IDNO：817)、TAR2h-10-15(SEQ ID NO：818)、TAR2h-10-16(SEQ IDNO：819)、TAR2h-10-17(SEQ ID NO：820)、TAR2h-10-18(SEQ IDNO：821)、TAR2h-10-19(SEQ ID NO：822)、TAR2h-10-20(SEQ IDNO：823)、TAR2h-10-21(SEQ ID NO：824)、TAR2h-10-22(SEQ IDNO：825)、TAR2h-10-27(SEQ ID NO：826)、TAR2h-10-29(SEQ IDNO：827)、TAR2h-10-31(SEQ ID NO：828)、TAR2h-10-35(SEQ IDNO：829)、TAR2h-10-36(SEQ ID NO：830)、TAR2h-10-37(SEQ IDNO：831)、TAR2h-10-38(SEQ ID NO：832)、TAR2h-10-45(SEQ IDNO：833)、TAR2h-10-47(SEQ ID NO：834)、TAR2h-10-48(SEQ IDNO：835)、TAR2h-10-57(SEQ ID NO：836)、TAR2h-10-56SEQ IDNO：837)、TAR2h-10-58(SEQ ID NO：838)、TAR2h-10-66(SEQ IDNO：839)、TAR2h-10-64(SEQ ID NO：840)、TAR2h-10-65(SEQ IDNO：841)、TAR2h-10-68(SEQ ID NO：842)、TAR2h-10-69(SEQ IDNO：843)、TAR2h-10-67(SEQ ID NO：844)、TAR2h-10-61(SEQ IDNO：845)、TAR2h-10-62(SEQ ID NO：846)、TAR2h-10-63(SEQ IDNO：847)、TAR2h-10-60(SEQ ID NO：848)、TAR2h-10-55(SEQ IDNO：849)、TAR2h-10-59(SEQ ID NO：850)、TAR2h-10-70(SEQ IDNO：851)、TAR2h-34(SEQ ID NO：852)、TAR2h-35(SEQ IDNO：853)、TAR2h-36(SEQ IDNO：854)、TAR2h-37(SEQ IDNO：855)、TAR2h-38(SEQ ID NO：856)、TAR2h-39(SEQ IDNO：857)、TAR2h-40(SEQ ID NO：858)、TAR2h-41(SEQ IDNO：859)、TAR2h-42(SEQ ID NO：860)、TAR2h-43(SEQ IDNO：861)、TAR2h-44(SEQ ID NO：862)、TAR2h-45(SEQ IDNO：863)、TAR2h-47(SEQ ID NO：864)、TAR2h-48(SEQ IDNO：865)、TAR2h-50(SEQ ID NO：866)、TAR2h-51(SEQ IDNO：867)、TAR2h-66(SEQ ID NO：868)、TAR2h-67(SEQ IDNO：869)、TAR2h-68(SEQ ID NO：870)、TAR2h-70(SEQ IDNO：871)、TAR2h-71(SEQ ID NO：872)、TAR2h-72(SEQ IDNO：873)、TAR2h-73(SEQ ID NO：874)、TAR2h-74(SEQ IDNO：875)、TAR2h-75(SEQ ID NO：876)、TAR2h-76(SEQ IDNO：877)、TAR2h-77(SEQ ID NO：878)、TAR2h-78(SEQ IDNO：879)、TAR2h-79(SEQ ID NO：880)、TAR2h-15(SEQ IDNO：881)、TAR2h-131-8(SEQ ID NO：882)、TAR2h-131-24(SEQ IDNO：883)、TAR2h-15-8(SEQ ID NO：884)、TAR2h-15-8-1(SEQ IDNO：885)、TAR2h-15-8-2(SEQ ID NO：886)、TAR2h-185-23(SEQ IDNO：887)、TAR2h-154-10-5(SEQ ID NO：888)、TAR2h-14-2(SEQ IDNO：889)、TAR2h-151-8(SEQ ID NO：890)、TAR2h-152-7(SEQ IDNO：891)、TAR2h-35-4(SEQ ID NO：892)、TAR2h-154-7(SEQ IDNO：893)、TAR2h-80(SEQ ID NO：894)、TAR2h-81(SEQ IDNO：895)、TAR2h-82(SEQ ID NO：896)、TAR2h-83(SEQ IDNO：897)、TAR2h-84(SEQ ID NO：898)、TAR2h-85(SEQ IDNO：899)、TAR2h-86(SEQ ID NO：900)、TAR2h-87(SEQ IDNO：901)、TAR2h-88(SEQ ID NO：902)、TAR2h-89(SEQ IDNO：903)、TAR2h-90(SEQ ID NO：904)、TAR2h-91(SEQ IDNO：905)、TAR2h-92(SEQ ID NO：906)、TAR2h-93(SEQ IDNO：907)、TAR2h-94(SEQ ID NO：908)、TAR2h-95(SEQ IDNO：909)、TAR2h-96(SEQ ID NO：910)、TAR2h-97(SEQ IDNO：911)、TAR2h-99(SEQ ID NO：912)、TAR2h-100(SEQ IDNO：913)、TAR2h-101(SEQ ID NO：914)、TAR2h-102(SEQ IDNO：915)、TAR2h-103(SEQ ID NO：916)、TAR2h-104(SEQ IDNO：917)、TAR2h-105(SEQ ID NO：918)、TAR2h-106(SEQ IDNO：919)、TAR2h-107(SEQ ID NO：920)、TAR2h-108(SEQ IDNO：921)、TAR2h-109(SEQ ID NO：922)、TAR2h-110(SEQ IDNO：923)、TAR2h-111(SEQ ID NO：924)、TAR2h-112(SEQ IDNO：925)、TAR2h-113(SEQ ID NO：926)、TAR2h-114(SEQ IDNO：927)、TAR2h-115(SEQ ID NO：928)、TAR2h-116(SEQ IDNO：929)、TAR2h-117(SEQ ID NO：930)、TAR2h-118(SEQ IDNO：931)、TAR2h-119(SEQ ID NO：932)、TAR2h-120(SEQ IDNO：933)、TAR2h-121(SEQ ID NO：934)、TAR2h-122(SEQ IDNO：935)、TAR2h-123(SEQ ID NO：936)、TAR2h-124(SEQ IDNO：937)、TAR2h-125(SEQ ID NO：938)、TAR2h-126(SEQ IDNO：939)、TAR2h-127(SEQ ID NO：940)、TAR2h-128(SEQ IDNO：941)、TAR2h-129(SEQ ID NO：942)、TAR2h-130(SEQ IDNO：943)、TAR2h-131(SEQ ID NO：944)、TAR2h-132(SEQ IDNO：945)、TAR2h-133(SEQ ID NO：946)、TAR2h-151(SEQ IDNO：947)、TAR2h-152(SEQ ID NO：948)、TAR2h-153(SEQIDNO：949)、TAR2h-154(SEQ ID NO：950)、TAR2h-159(SEQ IDNO：951)、TAR2h-165(SEQ ID NO：952)、TAR2h-166(SEQ IDNO：953)、TAR2h-168(SEQ ID NO：954)、TAR2h-171(SEQ IDNO：955)、TAR2h-172(SEQ ID NO：956)、TAR2h-173(SEQ IDNO：957)、TAR2h-174(SEQ ID NO：958)、TAR2h-176(SEQ IDNO：959)、TAR2h-178(SEQ ID NO：960)、TAR2h-201(SEQ IDNO：961)、TAR2h-202(SEQ ID NO：962)、TAR2h-203(SEQ IDNO：963)、TAR2h-204(SEQ ID NO：964)、TAR2h-185-25(SEQ IDNO：965)、TAR2h-154-10SEQ ID NO：966)、TAR2h-205(SEQ IDNO：967)、TAR2h-10(SEQ ID NO：968)、TAR2h-5(SEQ IDNO：969)、TAR2h-5d1(SEQ ID NO：970)、TAR2h-5d2(SEQ IDNO：971)、TAR2h-5d3(SEQ ID NO：972)、TAR2h-5d4(SEQ IDNO：973)、TAR2h-5d5(SEQ ID NO：974)、TAR2h-5d6(SEQ IDNO：975)、TAR2h-5d7(SEQ ID NO：976)、TAR2h-5d8(SEQ IDNO：977)、TAR2h-5d9(SEQ ID NO：978)、TAR2h-5d10(SEQ IDNO：979)、TAR2h-5d11(SEQ ID NO：980)、TAR2h-5d12(SEQ IDNO：981)和TAR2h-5d13(SEQ ID NO：982)。
34、权利要求29-33中任一项的配体，进一步含有半衰期延长部分。
35、权利要求34所述的配体，其中所述半衰期延长部分为聚烷撑二醇部分、血清白蛋白或其片段、转铁蛋白受体或其转铁蛋白结合部位，或含有提高体内半衰期的多肽的结合位点的抗体或抗体片段。
36、权利要求35所述的配体，其中所述半衰期延长部分为聚乙二醇部分。
37、权利要求35所述的配体，其中所述半衰期延长部分为含有血清白蛋白或新生儿Fc受体结合位点的抗体或抗体片段。
38、权利要求37所述的配体，其中所述抗体或抗体片段为抗体片段，所述抗体片段为免疫球蛋白单可变域。
39、权利要求38所述的配体，其中所述免疫球蛋白单可变域与选自下列的dAb竞争与人血清白蛋白的结合：DOM7m-16(SEQ IDNO：723)、DOM7m-12(SEQ ID NO：724)、DOM7m-26(SEQ IDNO：725)、DOM7r-1(SEQ ID NO：726)、DOM7r-3(SEQ ID NO：727)、DOM7r-4(SEQ ID NO：728)、DOM7r-5(SEQ ID NO：729)、DOM7r-7(SEQ ID NO：730)、DOM7r-8(SEQ ID NO：731)、DOM7h-2(SEQ IDNO：732)、DOM7h-3(SEQ ID NO：733)、DOM7h-4(SEQ IDNO：734)、DOM7h-6(SEQ ID NO：735)、DOM7h-1(SEQ IDNO：736)、DOM7h-7(SEQ ID NO：737)、DOM7h-8(SEQ IDNO：746)、DOM7r-13(SEQ ID NO：747)、DOM7r-14(SEQ IDNO：748)、DOM7h-22(SEQ ID NO：739)、DOM7h-23(SEQ IDNO：740)、DOM7h-24(SEQ ID NO：741)、DOM7h-25(SEQ IDNO：742)、DOM7h-26(SEQ ID NO：743)、DOM7h-21(SEQ IDNO：744)、DOM7h-27(SEQ ID NO：745)、DOM7r-15(SEQ IDNO：749)、DOM7r-16(SEQ ID NO：750)、DOM7r-17(SEQ IDNO：751)、DOM7r-18(SEQ ID NO：752)、DOM7r-19(SEQ IDNO：753)、DOM7r-20(SEQ ID NO：754)、DOM7r-21(SEQ IDNO：755)、DOM7r-22(SEQ ID NO：756)、DOM7r-23(SEQ IDNO：757)、DOM7r-24(SEQ ID NO：758)、DOM7r-25(SEQ IDNO：759)、DOM7r-26(SEQ ID NO：760)、DOM7r-27(SEQ IDNO：761)、DOM7r-28(SEQ ID NO：762)、DOM7r-29(SEQ IDNO：763)、DOM7r-30(SEQ ID NO：764)、DOM7r-31(SEQ IDNO：765)、DOM7r-32(SEQ ID NO：766)和DOM7r-33(SEQ IDNO：767)。
40、权利要求39所述的配体，其中与人血清白蛋白结合的所述免疫球蛋白单可变域包含氨基酸序列，该氨基酸序列与选自下述的dAb的氨基酸序列具有至少约90％的氨基酸序列一致性：DOM7m-16(SEQ ID NO：723)、DOM7m-12(SEQ ID NO：724)、DOM7m-26(SEQ ID NO：725)、DOM7r-1(SEQ ID NO：726)、DOM7r-3(SEQ IDNO：727)、DOM7r-4(SEQ ID NO：728)、DOM7r-5(SEQ IDNO：729)、DOM7r-7(SEQ ID NO：730)、DOM7r-8(SEQ IDNO：731)、DOM7h-2(SEQ ID NO：732)、DOM7h-3(SEQ IDNO：733)、DOM7h-4(SEQ ID NO：734)、DOM7h-6(SEQ IDNO：735)、DOM7h-1(SEQ ID NO：736)、DOM7h-7(SEQ IDNO：737)、DOM7h-8(SEQ ID NO：746)、DOM7r-13(SEQ IDNO：747)、DOM7r-14(SEQ ID NO：748)、DOM7h-22(SEQ IDNO：739)、DOM7h-23(SEQ ID NO：740)、DOM7h-24(SEQ IDNO：741)、DOM7h-25(SEQ ID NO：742)、DOM7h-26(SEQ IDNO：743)、DOM7h-21(SEQ ID NO：744)、DOM7h-27(SEQ IDNO：745)、DOM7r-15(SEQ ID NO：749)、DOM7r-16(SEQ IDNO：750)、DOM7r-17(SEQ ID NO：751)、DOM7r-18(SEQ IDNO：752)、DOM7r-19(SEQ ID NO：753)、DOM7r-20(SEQ IDNO：754)、DOM7r-21(SEQ ID NO：755)、DOM7r-22(SEQ IDNO：756)、DOM7r-23(SEQ ID NO：757)、DOM7r-24(SEQ IDNO：758)、DOM7r-25(SEQ ID NO：759)、DOM7r-26(SEQ IDNO：760)、DOM7r-27(SEQ ID NO：761)、DOM7r-28(SEQ IDNO：762)、DOM7r-29(SEQ ID NO：763)、DOM7r-30(SEQ IDNO：764)、DOM7r-31(SEQ ID NO：765)、DOM7r-32(SEQ ID NO：766)和DOM7r-33(SEQ ID NO：767)。
41、一分离的核酸，其编码权利要求1-40中任一项所述的dAb单体或配体。
42、一重组核酸，其编码权利要求1-40中任一项所述的dAb单体或配体。
43、一载体，其包含编码权利要求1-40中任一项的dAb单体或配体的核酸。
44、权利要求43所述的载体，其中所述载体为表达载体。
45、一宿主细胞，其包含权利要求42的重组核酸。
46、一宿主细胞，其包含权利要求43或44的载体。
47、制备对IL-1R1具有结合特异性并抑制IL-1与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的dAb单体或配体的方法，其包括将权利要求45的宿主细胞维持在适合所述重组核酸表达的条件下。
48、制备对IL-1R1具有结合特异性并抑制IL-1与受体结合，但不抑制IL-1ra与IL-1R1结合的dAb单体或配体的方法，其包括在将权利要求46的宿主细胞维持在适合所述载体表达的条件下。
49、一药物组合物，其含有权利要求1-40中任一项的dAb单体或配体，以及生理上可接受的载体。
50、权利要求49所述的药物组合物，其中所述组合物为静脉注射给药、肌内注射给药、腹腔内给药、动脉内给药、鞘内给药装置给药、关节内给药或皮下给药。
51、权利要求49所述的药物组合物，其中所述组合物为肺部给药、鼻腔内给药装置给药、阴道给药或直肠给药。
52、一给药装置，其含有权利要求49所述的药物组合物。
53、权利要求52所述的给药装置，其中所述给药装置选自肠道外给药装置，静脉给药装置，肌肉内给药装置，腹腔内给药装置，透皮给药装置，肺部给药装置，动脉内给药装置，鞘内给药装置，关节内给药装置，舌下给药装置，鼻腔内给药装置，阴道给药装置，以及直肠给药装置。
54、权利要求52所述的给药装置，其中所述装置选自注射器、透皮给药装置、胶囊、片剂、喷雾器、吸入器、雾化器、烟雾器、起雾器、干粉吸入器、定量吸入器、定量喷雾器、定量起雾器、定量雾化器和导管。
55、一治疗炎症疾病的方法，其包含将治疗有效量的权利要求1-40中任一项的dAb单体或配体施用于对其有需求的受试者。
56、权利要求55所述的方法，其中所述炎症疾病为关节炎。
57、耐蛋白酶降解的域抗体(dAb)单体在疾病治疗、诊断和/或预防中的用途。
58、耐蛋白酶降解的域抗体(dAb)单体在制备治疗炎症疾病、关节炎或呼吸系统疾病的药物中的用途。
59、耐蛋白酶降解的域抗体(dAb)单体在制备肺部给药的药物中的用途。
60、一治疗炎症疾病、关节炎或呼吸系统疾病的方法，其包含将治疗有效量的耐蛋白酶降解的域抗体(dAb)单体施用于对其有需求的受试者。
61、权利要求60所述的方法，其中所述dAb是通过肺部给药的方式施用。
62、权利要求57-61中任一项的所述dAb单体、用途或方法，其中所述dAb单体耐弹性蛋白酶。
63、权利要求57-62中任一项的所述dAb单体、用途或方法，其中所述dAb单体为免疫球蛋白轻链可变域。
64、权利要求63的所述的dAB单体、用途或方法，其中所述dAb单体为Vκ。
65、权利要求57-64中任一项的所述dAB单体、用途或方法，其中所述dAb对白细胞介素-1受体1型(IL-1R1)具有结合特异性。
66、权利要求65所述的dAB单体、用途或方法，其中所述dAB单体与抗-IL-1R1 dAb竞争与IL-1R1的结合，其中所述抗-IL-1R1 dAb由选自SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：349的氨基酸序列组成。
67、权利要求66所述的dAB单体、用途或方法，其中所述dAB单体与抗-IL-1R1 dAb竞争与IL-1R1的结合，其中所述抗IL-1R1 dAb由选自SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2的氨基酸序列组成。
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