CN101454026B - 成像剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种适用于纤维化的非侵入性显影的新型成像剂。本发明还提供制备这种成像剂的前体，以及包含该成像剂的药物组合物和制备该药物组合物的试剂盒。在其他方面，还提供了该成像剂在体内成像时的用途和在制备用于诊断包括纤维化的病症的药物中的用途。

Description

成像剂
本发明技术领域
本发明涉及诊断成像，并特别的涉及对纤维化(fibrosis)的诊断成像。所描述的诊断成像剂适用于此目的，特别地适用于对肝、心、肾和肺纤维化的诊断成像。 
相关技术的说明
简而言之，纤维化是疤痕组织，并形成组织的全部“修复”过程的一部分。然而，由于正在进行的炎症、感染和反复创伤，形成纤维化疤痕组织而不被“功能”细胞替换，这样导致非正常的器官功能和最终的器官衰竭。纤维化是医学中主要的、典型的病理过程之一。它是在世界范围内影响上百万人的多种疾病的关键成分，这些疾病包括例如： 
a)肺病，例如特发性肺纤维化(不明起因的肺部纤维化)，气喘以及慢性阻塞性肺疾病。 
b)硬皮病：一种非均质的、威胁生命的疾病，其特征为人体结缔组织(如皮肤和内脏器官)中过度的细胞外基质沉积。 
c)移植伴随术后结疤。 
d)糖尿病视网膜病变和老年黄斑变性(AMD)(眼部的纤维化疾病，失明的首要原因)。 
e)包括动脉硬化和易损斑块的心血管病。 
f)与糖尿病有关的肾纤维化-糖尿病肾病和肾血管球硬化症。 
g)IgA肾病(造成肾衰竭及对透析和移植产生需求)。 
h)胆道硬化和锁闭(肝纤维化和衰竭的主要起因)。 
i)丙型肝炎。 
j)风湿性关节炎。 
k)自身免疫性疾病，例如皮肌炎。 
1)充血性心力衰竭。 
纤维化的临床表现变化很大。以硬化为例，其临床表现从完全无 症状到肝功能衰竭，是由根本的肝脏疾病的本质和严重程度以及肝的纤维化的扩展程度共同决定的。有40％的硬化病人是无症状的，并可能保持这样长达几十年，但是一旦出现包括腹水肿、静脉曲张破裂出血、或脑病的并发症，逐步恶化是不可避免的。因此纤维化和硬化代表对慢性肝伤害的持续的伤口愈合的后果，这种伤害包括病毒的、自体免疫的、药物引发的、淤胆以及代谢疾病。肝纤维化和硬化的通常起因包括免疫介导的损伤、基因异常和非酒精性脂肪肝炎(NASH)，其特别与糖尿病和代谢综合症(MS)有关联。西方人口中具有高的MS发病率。该综合症代表性地发生于肥胖的、有高血脂和血压的个体，并经常导致二型糖尿病的发展。代谢综合症的肝脏表现是非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，据估计占美国人口的24％。脂肪肝代表NAFLD范围内较不严重的一端，其可能发展成NASH，最后导致肝硬化。纤维化的发展论证了这种发展的风险，目前通过肝穿刺活检进行评价。然而肝穿刺活检造成巨大的不适，不是无风险的且是昂贵的。此外，可用的肝纤维化血检对于NAFLD并不可靠。 
纤维化是以细胞外基质组分过度分泌为特征的。这是由于基质蛋白的合成增加及降解减少导致的，最显著的是I和III型胶原蛋白。I和III型胶原蛋白是细胞外基质的主要组成部分，并且是有助于纤维化发展的。在纤维化过程的初期，能观察到高浓度的III型胶原蛋白，而I型胶原蛋白随后成为主导。许多研究组已经公开了结合至胶原蛋白的肽化合物。Chiang和Kang[J.Clin.Invest.1997100(8)2079-84]和Chiang[Amer.J.Med.Sci.2000320(6)362-67and2002J.Biol.Chem.27734896-901]报道了源自发现于血小板的抑制胶原蛋白介导的血小板聚集以及ATP释放的I型和III型胶原蛋白的受体序列的人工肽。Thomas等[2005 J.Biol.Chem.280(24)22596-605]描述了Endo180，一种能与I型胶原蛋白的C端区域结合的受体。Depraetera等[1998 Blood92(11)4207]报道了两种环状八肽其抑制了维尔布兰德因子(vWF)与小牛皮和人的I型胶原蛋白的结合。Tye等[2005 J.Biol.Chem.280(14)13487-492]报道了源自重组骨髓唾液蛋白的合成肽与I型胶原蛋白结合。 
WO2006/054904涉及包含结合到胶原蛋白形成区域的目标载体的显影剂。这些显影剂被提议为对诊断有帮助，以及对处理涉及过度形 成胶原蛋白，包括且尤其是纤维化的疾病处理的监视。 
存在为检测纤维化而发展成像剂的需要。 
发明概述
本发明提供了一种适用于纤维化的非侵入性显形的新型成像剂。在本发明中还提供了用于制备该成像剂的前体，以及包含该成像剂的药物组合物和用于制备该药物组合物的试剂盒。在另一方面，还提供了用于体内成像的成像剂的用途和在制备用于诊断包括纤维化的病症的药物中的用途。 
发明详述
第一方面，本发明提供了一种成像剂，其包含胶原蛋白结合肽(CBP)和成像部分，其中所述CBP选自： 
(i)RRANAALKAGELYKXaaILY 
(ii)GELYKXaaILY 
(iii)DARKSEVQK 
(iv)KELNVLYT 
(v)XaaVWLWEQXaa 
(vi)XaaVWLWENXaa 
(vii)XaaVWTLPDQXaa 
(viii)TGELYKXaaILYTLAWKTTARLKELNLVYTT 
(ix)源自医用水蛭-欧洲医蛭(Hirudo medicinalis)涎液的乳清酸(saratin)重组多肽 
(x)核心蛋白聚糖(decorin)残基176-201 
(xi)肽(i)-(x)的任何肽类似物 
或者所述CPB是这些肽中任意一种的稳定化的、截短的和/或环状形态，或者是这些肽或其截短状态的同型或异型二聚体，而其中Xaa可以是半胱氨酸、2-氨基丁酸(Abu)、蛋氨酸或丙氨酸中的任意一种。 
上面(i)-(xi)的每种肽是或源自具有胶原蛋白结合活性的生理肽的片段。优选地，CBP是8-30肽，而最优选的是8-20肽。 
本发明的成像剂适当地与胶原蛋白以小于1μM的亲和性结合，优 选的亲和性小于100nM，最优选的亲和性小于10nM。 
本发明文中肽(xi)中的术语“肽类似物”意为包含肽(i)-(x)全部或部分，其中一个或多个氨基酸残基被可选的氨基酸残基替代，并保持对胶原蛋白亲和性的天然的或合成的肽。优选的肽类似物是合成的肽。出于最小化对肽的改造的目的，通常只替换几个氨基酸残基并只进行保守替换。下面的表格列出了被认为是保守的替换： 
  
原始氨基酸残基 示例性替换
Ala Ser
Arg Lys
Asn Gln，His
Asp Glu
Cys Ser，Met
Gln Asn
Glu Asp
Gly Ala，Asn
His Asn，Gln
Ile Leu，Val
Leu Ile，Val
Lys Arg，Gln
Met Leu，Ile
Phe Met，Leu，Tyr
Ser Thr
Thr Ser
Trp Tyr
Tyr Trp，Phe
Val Ile，Leu
然而，只要对胶原蛋白的亲和性得到保持，任何氨基酸的替换都是适合的。 
本发明的CBP的“稳定化的”状态是指为了增加其在血浆中对裂解的抗性而修饰过的肽(i)-(xi)中的任意序列。重要的是CBP在 活体中保持完整，从而其与胶原蛋白结合的性质得以保留，而成像部分被可靠地传送到目标上。 
稳定CBP的方法之一是连接Z1基团到CBP的N端，并/或连接Z2基团到CBP的C端。Z1基团替换最后一氨基酸残基的氨基。这样，当Z1是氢时，CBP的氨基端结束于最后一个氨基酸残基的自由氨基(NH2)。Z2基团替换最后一氨基酸残基的羧基。这样，当Z2是OH时，CBP的羧基端结束于最后一氨基酸残基的自由羧基(CO2H)，而当Z2是OBc(其中Bc是生物相容性阳离子)时末端羧基离子化为CO2Bc基。 
适合用于CBPN端的Z1基团对于那些本领域技术人员而言是熟知的，可以适当地选自：氮酰基化基团-NH(C＝O)RG其中酰基-(C＝O)RG的RG选自：1-6碳烷基，3-10碳芳基或包含聚乙二醇(PEG)的构件(building block)。优选的N端基团是酰基、苄氧基或三氟酰基，最优选的是酰基。 
适合用于CBPC端的Z2基团包括：酰胺，叔丁酯，苄酯，环己酯，氨基醇或聚乙二醇(PEG)构件。优选的这种基团是酰胺或PEG，最优选的这种基团是酰胺。 
稳定CBP的策略的其他例子包括：氨基酸残基的氮烷基化，优选的N甲基化；氨基酸残基的乙酰化；与非天然氨基酸或酰胺键等排物组合；加入其他不易被血浆酶辨认的部分，例如用聚乙二醇或聚乙烯二甘醇部分延伸C端；以及将肽结构转化为逆反异构(retroinverso)序列，例如将所有L-氨基酸替换为D-氨基酸来反转氨基酸序列。 
本发明CBP的“截短的”形态是肽(i)-(xi)的任意序列在羧基端和/或氨基端缺失1到5个氨基酸，其限制为所述截短的状态包含至少5个氨基酸残基。 
本发明CBP的“环形”形态是通过使用肽序列中出现的或加入的半胱氨酸残基桥接而环化的CBP。环化同样可以通过首尾环化而形成，例如在N端氨基和C端羧基之间形成酰胺键。当半胱氨酸加入到肽序列时，它们优选地加入到末端以获得首尾环化。形成环形肽的另一种方法是在两个氨基酸之间通过它们的侧链形成键，例如赖氨酸和谷氨酸。 
CPB肽可通过传统的固相合成获得。Albericio提供了近期用于固 相肽合成方法的回顾[Curr.Opinion Cell Biol.20048211-21]。 
对于本发明特定CPB肽的描述可在下列参考文献中获得(使用与上述(i)-(xi)中肽相同的编号安排)： 
(i)Chiang和Kang 1997J.Clin.Invest.100(8)2079-84 
(ii)Chiang等2000Am.J.Med.Sci.320(6)362-7 
(iii)Chiang 2002 J.Biol.Chem.277 34896-901 
(iv)Chiang 2002 J.Biol.Chem.277 34896-901 
(v)Depraetere等1998 Blood 92(11)4207-11 
(vi)Depraetere等1998 Blood 92(11)4207-11 
(vii)Pareti等1987 J.Biol.Chem.262(28)13841 
(viii)Zhu等2007 Thromb.Res.119(1)111-119 
(ix)Cruz等2001 J.Vascular Surgery 34(4)724-29 
(x)Hunter等2001 J.Biomed.Mat.Res.55(4)496-502 
术语“成像剂”是指以哺乳动物的特定生理或病理生理为目标而设计的化合物，且其能通过施用而在哺乳动物体内被检测。 
在本发明的成像剂中，成像部分可以作为CBP的整合部分出现，例如CBP中的一种原子可以是11C而不是12C。可选的，成像部分可以通过适合的化学基团缀合到CBP上，例如能复合为金属离子的成像部分的金属螯合物。也可出现将CBP连接到适当的化学基团或直接到成像部分自身的连接物。本发明中合适的连接物具有-(L)n-这样的结构式，其中： 
每个L独立地是-CO-、-CR′2-、-CR′＝CR′-、-C≡C-、-CR′2CO2-、-CO2CR′2-、-NR′-、-NR′CO-、-CONR′-、-NR′(C＝O)NR′-、-NR′(C＝S)NR′-、-SO2NR′-、-NR′SO2-、-CR′2OCR′2-、-CR′2SCR′2-、-CR′2NR′CR′2-、4-8碳的环杂亚烷基(cycloheteroalkylene)、4-8碳的环亚烷基(cycloalkylene)、5-12碳的亚芳基(arylene group)、3-12碳的杂亚芳基(heteroarylene)、氨基酸、聚亚烷基二醇(polyalkyleneglycol)、聚乳酸(polylactic acid)或聚羟基乙酸(polyglycolic acid)部分； 
n是值为0到15之间的整数； 
每个R’基独立地是氢或1-10碳的烷基、3-10碳的烷基芳基、2-10碳的烷氧基、1-10碳的羟烷基、1-10碳的含氟烷基或2个或更多R’基团，加之它们所连接的原子形成碳环的、杂环的、饱和的或不 饱和的环。 
其限制为所述连接物为不长于30个原子的链。 
分枝连接基团也是可能的，例如连接基团-(L)n-被另一连接基团-(L)n-替换，其以上面定义的R’基团作为结尾。这样的分支连接物在处理本发明成像剂的生物分布和/或排泄的情况下特别有用。 
术语“氨基酸”是指左旋或右旋(L-或D-)氨基酸，氨基酸类似物(例如萘基丙氨酸)或模拟氨基酸，这些可以是自然产生的或完全合成的，也可以是光学纯的，例如单个对映体以及手性的或者对映体混合物。优选的，本发明中的氨基酸是光学纯的。 
这样的连接物也可应用于本发明下述的其他方面。出于将CBP连接到适当的化学基团或直接到成像部分的目的，优选的L基团是-CO-、-CH2-、-NH-、-NHCO-、-CONH-、-CH2OCH2-和氨基酸。 
在一优选的实施例中，本发明的CBP选自前面列出的肽(i)-(vii)，或者其稳定化的、截短的或环形形态，或者这些肽或其截短状态的同型或异型二聚体，而其中Xaa是之前定义的。 
在最优选的实施例中，本发明的CBP选自： 
(a)肽(i)通过以下方法中的一种或多种进行修饰： 
●去除两个N端精氨酸进行截短 
●Xaa＝2-氨基丁酸或半胱氨酸 
●甲基化丙氨酸残基 
●甲基化赖氨酸残基 
●用赖氨酸替换酪氨酸 
●加入聚乙二醇链和/或二羟乙酰基(diglycolyl)到C端； 
(b)如(a)中修饰的肽(i)，转化为其逆反异构序列； 
(c)肽(ii)，其中Xaa＝半胱氨酸； 
(d)肽(iii)，未经修饰或通过2个分别加到N端和C端的半胱氨酸残基环化； 
(e)肽(iv)，未经修饰或通过以下方法之一或两者进行修饰： 
●倒转缬氨酸5和亮氨酸6 
●通过2个分别加到N端和C端的半胱氨酸残基环化； 
(f)(v)-(vii)中的肽，其中Xaa＝半胱氨酸； 
其中每种情况下可选择性地N端用乙酰基保护，C端用酰胺保护。
本发明最优选的CPBs的例子为(除非另作说明，所有氨基酸为左旋氨基酸)： 
a)ANAALKAGELYKCILY-NH2
b)ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY-NH2
c)Ac-ANAALKAGELFK-[Abu]-ILY-NH2
d)Ac-ANAALKAGELYK-[Abu]-ILF-NH2
e)Ac-ANAALKAGELY-[NMeLys]-[Abu]-ILF-NH2
f)Ac-AN-[NMeAla]-ALKAGELYK-[Abu]-ILF-NH2
g)Ac-AN-[NMeAla]-ALKAGELY-[NMeLys]-[Abu]-ILF-NH2
h)ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY-[PEG(4)]-[二羟乙酰基]-NH2
i)ANAALKAGELY-[NMeLys]-[Abu]-ILY-[PEG(4)]-[二羟乙酰基]-NH2
j)ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY-[PEG(4)]-[二羟乙酰基]-COOH 
k)D-YLI-[Abu]-KYLEGAKLAANA-NH2
1)GELYKCILY-NH2
m)DARKSEVQK-NH2
n)通过两个加到端部的半胱氨酸残基环化的CDARKSEVQKC-NH2
o)KELNVLYT-NH2
p)KELNLVYT-NH2
q)Ac-KELNLVYT-NH2
r)通过两个加到端部的半胱氨酸残基连接而环化的Ac-CKELNLVYTC-NH2
s)通过连接半胱氨酸残基环化的CVWLWEQC-NH2 
t)通过连接半胱氨酸残基环化的CVWLWENC-NH2 
u)通过连接半胱氨酸残基环化的CVWTLPDQC-NH2 
在上述列表中，“Ac”是乙酰基，“Abu”是2-氨基丁酸，“NMeLys”是N甲基化赖氨酸，“NMeAla”是N甲基化丙氨酸，以及“PEG(X)”是具有X个单位的聚乙二醇。 
在最优选实施例中，本发明的CBP是选自上面列出的肽(i)-(iv)，或者其稳定化的、截短的或环形形态，或者这些肽或其截短状态的同型或异型二聚体，而其中Xaa是之前定义的。
“成像部分(moiety)”可以在人体外或通过使用为体内使用设计的探测器，例如像内窥镜这样的血管内辐射或光学探测器或设计为手术中使用的辐射探测器被探测。 
成像部分优选地选自： 
(i)放射性金属离子； 
(ii)顺磁性金属离子； 
(iii)放射伽马射线的放射性卤素； 
(iv)释放正电子的放射性非金属； 
(v)超极化的核磁共振活性核子；以及 
(vi)适于体内光学成像的指示剂(reporter)。 
当成像部分为放射性金属离子，例如放射性金属时，合适的放射性金属可以是发射正电子的如64Cu、48V、52Fe、55Co、94mTc或68Ga；或者是发射伽马射线的如99mTc、111In、113mIn或67Ga。优选的放射性金属为99mTc、64Cu、68Ga和111In。最优选的放射性金属是发射伽马射线，特别地是99mTc。 
当成像部分为顺磁性的金属离子时，这样的适合的金属例子包括：Gd(III)、Mn(II)、Cu(II)、Cr(III)、Fe(III)、Co(II)、Er(II)、Ni(II)、Eu(III)或Dy(III)。优选的顺磁性金属离子是Gd(III)、Mn(II)和Fe(III)，Gd(III)是特别优选的。 
当成像部分为发射伽马射线的放射性卤素时，该放射性卤素是适当地选自123I、131I或77Br。125I特别地被排除在外，因为它不适合在体内诊断成像中作为成像部分使用。优选的发射伽马射线的放射性卤素为123I。 
当成像部分为释放正电子的放射性非金属时，这样的合适的发射体包括：11C、13N、15O、17F、18F、75Br、76Br或124I。优选的释放正电子的放射性非金属为11C、13N、18F和124I，特别是11C和18F，最特别的是18F。 
当成像部分为超极化的核磁共振活性核子时，这样的核磁共振活性核具有非零的核自旋，包括13C、15N、19F、29Si和31P。这些中，优选13C。术语“超极化”是指核磁共振活性核子在其平衡极化上极化程度的加强。13C在自然界中的丰度(相对于12C)约为1％，而在超极化之前，适当的13C标记化合物可适当地富集到至少5％的丰度，优选的 至少50％，最优选的至少90％。本发明的成像剂中至少一种碳原子适当地富集13C，其随后被超极化。 
当成像部分为适于体内光学成像的指示剂时，该指示剂为能够通过光学成像方法直接或间接地检测到的任何部分。指示剂可以是光散射体(例如着色或未着色颗粒)，光吸收体或光发射体。更优选地，该指示剂是染料，例如生色团或荧光化合物。该染料可以是与处于电磁频谱中波长从紫外线到近红外线的光线相互作用的任何染料。最优选地该指示剂具有荧光属性。 
优选的有机生色团的或荧光的指示剂包括具有大量移位电子系统的基团，例如：菁，部菁，吲哚菁，酞菁，萘菁，三苯甲烷，卟啉，吡喃鎓染料，噻喃鎓染料，方酸染料(squarylium dyes)，克酮酸染料，甘菊蓝染料(azulenium dyes)，吲哚苯胺，苯甲酮嗪染料(benzophenoxazinium dyes)，benzothiaphenothiazinium染料，蒽醌，萘醌，indathrenes，乙苯二甲酰吖啶酮(phthaloylacridones)，三苯酚醌(trisphenoquinones)，偶氮染料，分子内和分子外电荷转移染料和染料混合物，环庚三烯酮，四嗪，双(苯-硫代双烯)复合物，双(苯-硫醇盐)复合物，吲哚苯胺染料，双(S，O-硫代双烯)复合物。荧光蛋白质，例如绿色荧光蛋白(GFP)和对GFP的修饰，其具有不同的同样有用的吸收/发射属性。几种稀有元素的混合(例如：铕，钐，铽或镝)可在某些情况下象荧光纳米晶体(量子点(quantum dots))一样使用。 
可以使用的生色团的特定的例子包括：荧光素、硫氰酸(得克萨斯红)、罗丹明B、罗丹明6G、罗丹明19、吲哚菁绿、Cy2、Cy3、Cy3B、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7、Cy7.5、玛丽娜蓝、太平洋蓝、俄勒冈绿88、俄勒冈绿514、四甲基罗丹明和Alexa Fluor 350、Alexa Fluor430、Alexa Fluor 532、Alexa Fluor 546、Alexa Fluor 555、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 647、Alexa Fluor 660、Alexa Fluor 680、Alexa Fluor 700和Alexa Fluor 750。 
特别优选的是具有在可见区或近红外(NIR)区达到吸收峰值，在400nm到3μm之间，尤其在600到1300nm之间。光学成像的特征和测量技术包括但不限于：荧光成像；内窥镜检查；荧光内窥镜检查；光学相干断层成像；透射成像；时间分解透射成像；共焦成像；非线 性显微方法；光声成像；声光成像；光谱成像；反射光谱法；干涉测量法；相干干涉法；扩散光学层析成像和荧光介导的扩散光学层析成像法(连续波、时域和频率域系统)，以及光扩散，吸收，偏振，发光，荧光寿命，量子产率和淬灭的测量。 
优选的成像部分是通过其体内的施用以非侵入性方法可以在外部被探测的，例如依靠SPECT、PET和MR。最优选的成像部分是放射性的，尤其是放射性金属离子，发射伽马射线的放射性卤素和发射阳离子的放射性非金属，特别是适合使用SPECT或PET成像的。然而，对于某些应用，其他成像是优选的，例如，对于AMD成像而言光学成像部分是优选的。 
本发明优选的成像剂在体内不耐受温和的代谢作用，因此最优选地在人体内表现出60到240分钟的半衰期。成像剂优选地通过肾排泄(例如表现为尿排泄)。成像剂优选地在病源处表现出的信号背景比至少为1.5，最优选的至少为5，特别优选的至少为10。当成像剂含有放射性同位素时，清除在体内非特异性结合或自由的成像剂的峰值水平的一半，优选地在少于或等于成像部分放射性同位素放射性衰减的半衰期的时间段发生。 
另外，适合的成像剂的分子量高达5000道尔顿。优选的，分子量在150到3000道尔顿的范围内，更优选的，200到1500道尔顿，特别优选的为300到800道尔顿。 
合适地，成像部分通过CBP的N或C端，或者通过任何一氨基酸侧链与CBP缀合。优选的，成像部分通过CBP的N或C端与CBX缀合，可选的通过前面说明过的化学式为-(L)n-的连接物以及优选的通过PEG连接物与CBP缀合。 
本发明优选的成像剂的示例举例说明如下： 
  
# 成像剂
1 [99mTc-螯合物II]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
2 [99mTc-螯合物II]-[PEG(12)]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
3 [99mTc-螯合物II]-DARKSEVQK-NH2
4 [99mTc-螯合物II]-GELYKCILY
[0134]   
5 [99mTc-螯合物II]-[PEG(12)]-GELYKCILY
6 [99mTc-螯合物II]-RRANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
7 [99mTc-螯合物II]-CDARKSEVQKC[通过末端半胱氨酸残基环化]                                                
8 [99mTc-螯合物II]-KELNLVYT
9 [99mTc-螯合物II]-CVWLWENC[通过末端半胱氨酸残基环化]
10 [99mTc-螯合物II]-CVWLWEQC-NH2[通过末端半胱氨酸残基环化]                                                 
11 [99mTc-螯合物II]-CVWTLPDQC[通过末端半胱氨酸残基环化]
12 [99mTc-螯合物II]-NGVFKYRPRYFLYKHAYFYPPLKRFPVQ
13 [99mTc-螯合物I]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
14 [99mTc-螯合物I]-[PEG(12)]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
15 [99mTc-螯合物I]-DARKSEVQK-NH2
16 [99mTc-螯合物I]-GELYKCILY
17 [99mTc-螯合物I]-[PEG(12)]-GELYKCILY
18 [99mTc-螯合物I]-RRANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
19 [99mTc-螯合物I]-CDARKSEVQKC[通过末端半胱氨酸残基环化]
20 [99mTc-螯合物I]-KELNLVYT
21 [99mTc-螯合物I]-CVWLWENC[通过末端半胱氨酸残基环化]
22 [99mTc-螯合物I]-CVWLWEQC[通过末端半胱氨酸残基环化]
23 [99mTc-螯合物I]-CVWTLPDQC[通过末端半胱氨酸残基环化]
24 [99mTc-螯合物I]-NGVFKYRPRYFLYKHAYFYPPLKRFPVQ
25 123I标记的RRANAALKAGELYKCILY
26 123I标记的ALKAGELYK
27 123I标记的GELYKCILY
[0135]   
28 123I标记的ANAALKAGELYKCILY-NH2
29 123I标记的Ac-KELNLVYT-NH2
30 18F标记的RRANAALKAGELYKCILY
31 18F标记的ALKAGELYK
32 18F标记的GELYKCILY
33 18F标记的ANAALKAGELYKCILY-NH2
34 18F标记的KELNLVYT-NH2
35 123I标记的KELNVLYT-NH2
36 123I标记的Ac-CKELNVLYTC-NH2[通过末端半胱氨酸残基环化]                                               
37 123I标记的Ac-Y-[PEG(4)]-DARKSEVQK
38 99mTc(CO)3-[α-His]-[Ac]-ANAALKAGELYK[Abu]ILY
39 99mTc-HYNIC-ANAALKAGELYK[Abu]ILY
40 99mTc-螯合物I-ANAALKAGELYK[Abu]ILY
41 99mTc-螯合物II-MIVVELTNPLKSSGIENGAFQGMKK
42 99mTc-螯合物I-ANAALKAGELYK[Abu]ILY-[PEG(4)]-[二乙醇酰基(diglycoloyl)]-NH2                                
43   99mTc-螯合物 I-ANAALKAGELY-[NMeLys]-[Abu]-ILY-[PEG(4)]-[二乙醇酰基]-NH2
其中Ac、Abu、NMeLys和PEG(X)已在前面作过定义，而α-His是α-组氨酸。 
通过使用体外分析(在实施例18中进行说明)，这些优选的成像剂中的一些表明与胶原蛋白的亲和性为纳摩尔级，在有些情况下小于50nM。 
螯合物I和螯合物II在关于本发明第二方面的说明中进行更详细的说明。对于上述1-12的成像剂，与螯合物II的结合点在桥头基团 (见下面的分子式Ib)。对于上述13-24的成像剂，与螯合物I的结合点在桥头基团(见下面的分子式IIa)。 
对于上述25到28的成像剂，123I连接到靠近N端的酪氨酸残基的苯酚侧链上。成像剂25a和28a可以设想为123I连接到其他的酪氨酸残基的苯酚侧链上。对于化合物26，27和29，123I连接到其酪氨酸的苯酚侧链上。 
对于上述30-34成像剂，18F通过巯基偶联连接到CBP的N端，例如： 
Figure G2007800192052D00141
其中CBP代表正讨论的特定的肽。这种18F标记的成像剂更多的详情，见下面关于分子式III、IIIa和IIIb的说明。 
通过前体进行成像剂的合成涉及本发明的第二方面将在下面更详细地说明。 
对成像剂1、29、35和36的分析表明它们与胶原蛋白在体内具有高亲和性。成像剂1已经被证实作为肝纤维化成像剂具有有利的生物分布特性(见实施例19)。在肝纤维化的小鼠模型中(胆管连接；BDL-在实施例20中说明)，可以看到成像剂1所给予的活性快速地从血池中被移除，而在注射1到2小时后在BDL动物的肝脏中可观察到与对照动物相比有显著的积累。 
第二方面，本发明提供了为制备本发明的包含前述CBP以及能与成像部分源(source of an imaging moiety)反应的化学基团的成像剂的前体，其中所述化学基团包括： 
(i)能络合(complexing)金属性成像部分的合成的配位体； 
(ii)有机金属衍生物，例如三烷基锡烷(trialkylstannane)或三烷基硅烷(trialkylsilane)； 
(iii)含有用于亲核替换的卤代烷、甲苯磺酸烷基酯(alkyl tosylate)或甲磺酸烷基酯(alkyl mesylate)的衍生物； 
(iv)烷基化含硫醇化合物(thiol-containing compound)而得到含硫醚产物的衍生物， 
其中所述化学基团是所述CBP的整合部分(integral part)或与所述CBP缀合(conjugate)。
“前体”包含本发明的CBP的衍生物，被设计为其与成像部分通常的化学形态发生位点特异性的化学反应；能以最小数目的步骤(理想地是一步)实施；并且不需要重大的提纯(理想地是不需要进一步提纯)，来获得期望的成像剂。这样的前体是合成的并且能方便地获得具有好的化学纯度的前体。“前体”可选地包含用于CBP的某些官能团的一个或多个保护基团。 
术语“保护基团”是指一个基团其阻止或抑制不期望的化学反应，但其被设计为具有足够的活性使其能在足够温和不致于更改其他分子的条件下从被怀疑的官能团上裂解下来。解保护后，就获得了所期望的产物。保护基团对于那些本领域技术人员而言是熟知的，并可适当地选自：对于氨基：Boc(Boc是叔丁氧羰基)，Fmoc(Fmoc是芴基甲氧羰基)，三氟乙酰基，丙烯基酯基，Dde(即1-(4，4-二甲基-2，6-二氧代亚环已基)乙基)或Npys(即3-硝基-2-嘧啶氧硫基)；对于羧基：甲酯，叔丁基酯或苯甲酯。对于羟基，适合的保护基团为：甲基、乙基或叔丁基；烷氧基甲基或烷氧基乙基；苯甲基；乙酰基；苯甲酰；三苯甲游基(Trt)或三甲硅烷基例如四丁基二甲基甲硅烷。对于含硫基团，适合的保护基团为：三苯甲游基和4-甲氧苯甲基。更多保护基团的使用在“有机合成中的保护基团”，Theorodora W.Greene和PeterG.M.Wuts，(第3版，John Wiley & Sons，1999)中有描述。 
优选的，所述能与成像部分源反应的化学基团包括： 
(i)能络合金属性成像部分的合成的配位体；或 
(ii)有机金属衍生物，例如三烷基锡烷或三烷基硅烷。 
当放射性同位素是放射性金属离子时，该放射性药物优选地包含放射性金属离子与合成的配位体的金属复合物。术语“金属复合物”是指金属离子和一种或多种配位体的配位化合物。强烈优选的，该金属复合物是“耐配体交换”的，例如不轻易地在金属配位位置与其他潜在竞争配位体进行配位体互换。潜在竞争配位体包含其他在体外制备中的赋形剂(例如辐射防护剂或制备中使用的抗菌防腐剂)，或体内内生的化合物(例如谷胱甘肽，铁传递蛋白或血浆蛋白质)。术语“合成的”具有其惯常的意思，例如人造的与从例如哺乳动物体的自然资源中提取的相对。这样的化合物具有这样的优势即它们的制造和纯化的概括可以完全地控制。用于本发明的适合的配位体其形成耐配 体交换的金属复合物包括：螯合剂，其中安排有2-6个，优选的2-4个金属供电子原子，从而形成5或6元螯合环(通过具有碳原子或连接到金属供电子原子的非配位杂原子的非配位骨架)；或包含供电子原子的单原子螯合配体，其强力地与金属离子结合，例如异腈，膦或二氮亚烯(diazenide)。作为螯合剂一部分与金属结合地很好的供电子原子类型的例子是：胺，硫醇，氨基，肟和膦。膦形成如此强的金属复合物以致于单原子螯合配位体或双原子螯合配位体膦形成适合的金属复合物。异腈和二氮亚烯的线性几何形态使其并不轻易地与螯合剂结合，因此典型地用作单原子螯合配位体。适当的异腈的例子包括简单烷基异腈如叔丁基异腈，和如MIBI这样的醚代异腈(即1-异腈-2-甲氧基-2-甲基丙烷)。适当的膦的例子包括替曲膦(Tetrofosmin)，和单原子配位体膦如三(3-甲氧基丙基)膦。适当的二氮亚烯包括HYNIC系列配位体，例如联氨取代的吡啶或烟碱。 
适当的与锝形成金属复合物的耐配体交换的螯合剂的例子包括，但不限于： 
(i)二氨基二肟； 
(ii)具有三酰胺硫醇(thioltriamide)供电子组的N3S配位体，如MAG3(巯基乙酰三甘肽)和相关配位体；或者具有二氨基吡啶硫醇供电子组例如Pica； 
(iii)具有二酰胺二硫醇(diaminedithiol)供电子组的N2S2配位体，如BAT或ECD(例如乙基半胱氨酸二聚体)，或者氨胺硫醇供电子组例如MAMA； 
(iv)N4配位体，其是具有四胺，氨基三胺(amidetriamine)或联氨二胺(diamidediamine)供电子组的开链的或大环配位体，例如环拉胺，单氧代环拉胺双氧代环拉胺； 
(v)具有二胺二酚(diaminediphenol)供电子组的N2O2配位体； 
(vi)α-组氨酸+Tc(CO)3
本发明优选的锝的螯合剂是二胺二肟和四胺，以及α-组氨酸+Tc(CO)3。在可选的优选实施例中，HYNIC配位体被用来形成锝复合物。优选的方案将更详细地说明。 
优选的二胺二肟具有化学式(I)： 
Figure G2007800192052D00171
其中E1-E6是每个独立的R*基团； 
每个R*是氢或1-10碳的烷基，3-10碳的烷基芳基，2-10碳的烷氧基烷基，1-10碳的羟烷基，1-10碳的氟代烷基，2-10碳的羧基烷基或1-10碳的氨基烷基，或者两个或更多R*基团与它们连接到的原子一起形成碳环的、杂环的、饱和的或不饱和的环，并且其中一个或多个R*基团与CBP结合； 
Q’是具有化学式-(J′)e-的桥接基团； 
其中e是3、4或5，而每个J’独立地是-O-、-NR*-或-C(R*)2-，假设-(J′)e-包含最多的是-O-或-NR*-的J’基团。 
优选的Q’基团是如下这些： 
Q′＝-(CH2)(CHR*)(CH2)-即丙烯胺肟或PnAO衍生物； 
Q′＝-(CH2)2(CHR*)(CH2)2-即戊二烯胺肟或PentAO衍生物； 
Q′＝-(CH2)2NR*(CH2)2-。 
E1到E6优选地选自：1-3碳的烷基，烷基芳基，烷氧基，羟烷基，氟代烷基，羧基烷基或氨基烷基。最优选的，每个E1到E6基团是CH3。 
CBP与化学式I的结合形成前体化合物。该CBP优选地与E1或E6R*基团结合，或者与Q’部分的R*基团结合。最优选的，其与Q’部分的R*基团结合。当其结合到Q’部分的R*基团时，R*基团优选地处于桥头位置。在那种情况下，Q’优选地是(CH2)(CHR*)(CH2)-、-(CH2)2(CHR*)(CH2)2-或-(CH2)2NR*(CH2)2-，最优选的是-(CH2)2(CHR*)(CH2)2-。特别优选的二胺二肟前体化合物具有化学式(Ia)：
Figure G2007800192052D00181
其中E7到E20是每个独立的R*基团； 
G是氮或CR*； 
Y’是-(L)n-CBP，其中-(L)n-是前面定义的连接基团，而CBP如前面定义。 
优选的化学式(Ia)螯合剂具有化学式(Ib)： 
Figure G2007800192052D00182
其中G如上面定义，优选的是CH(螯合物I；其合成在实施例1中说明)； 
如此该CBP通过桥头-CH2CH2NH2基团进行结合而形成前体化合物。 
与四胺螯合剂形成的优选的前体化合物具有化学式II： 
Figure G2007800192052D00183
其中： 
Y”是-(L)n-CBP，其中-(L)n-是前面定义的连接基团，而CBP如前 面定义。优选地对于Y”，-(L)n-不含芳环，有助于最小化复合物的亲脂性。 
E21到E26是前面定义的R*基团。 
与四胺螯合剂形成的最优选的前体化合物具有化学式IIa： 
其中Y”如前述定义的。 
与四胺螯合剂形成的特别优选的前体化合物具有化学式IIa，其中Y”是-CO-CBP(螯合物II-CBP)，其中CBP如前面所定义的。 
在另一优选实施例中，本发明的CPB可以通过制备前体而用99mTc标记，该前体是CPB与肼基烟酰胺(HYNIC)的缀合物具有化学式III： 
Figure G2007800192052D00192
Y”’是-(L)n-CBP，其中-(L)n-是前面定义的连接基团，而CBP如前面定义。 
由于HYNIC只能占据两个配位位置，所以需要共配位体以完成 99mTc的配位层。适合的共配位体包括三甲基甘氨酸，或三甲基甘氨酸加第二共配位体膦或嘧啶共配位体。膦共配位体的例子包括三苯基膦-3，3’，3”-三磺酸三钠(TPPTS)，三苯基膦-3，3’，3”-二磺酸二钠(TPPDS)和三苯基膦-3，3’，3”-磺酸钠(TPPMS)。嘧啶共配位体的例子包括尼克酸(NIC)，异尼克酸(ISONIC)，2-(4-吡啶)乙磺酸(PES)和嘧啶-3-磺酸。优选地，对化学式III前体的99mTc标记在共配位体为三甲基甘氨酸或是三甲基甘氨酸加TPPTS组合的情况下进行。 
关于HYNIC的放射性标记技术的详细回顾在Liu[Top Curr.Chem.2005 252 pp117-153]中给出。 
在另外的优选实施例中，本发明的CPB可额外地通过优选地通过 乙基连接物将组氨酸残基添加到CPBN端的前体用99mTc进行标记。还存在通过其可连接到CPB的可选途径来形成适合99mTc标记的前体： 
Figure G2007800192052D00201
其中CPB为之前定义的本发明的CPB。 
根据其如何配对，组氨酸在其表面结构上提供两个或三个能与[99mTc(OH2)3 -(CO)3]+反应的配位位置来形成本发明的成像剂。优选的配对提供三个配位位置，例如上述化学式IVa-c。 
制备这样的前体和成像剂化合物的方法通过Banerjee等[Nuc.Med.Biol.2005 32 pp1-20]和Pak等[Chem.Eur.J.2003 9 pp2053-2061]详细化。 
上面描述的配位体特别适合于络合锝，例如94mTc或99mTc，并由Jurisson等[Chem.Rev.，99，2205-2218(1999)]进行了更完整的描述。该配位体对于其他金属，例如铜(64Cu或67Cu)，钒(例如48V)，铁(例如52Fe)或钴(例如55Co)同样有用。 
其他合适的配位体在Sandoz Wo91/01144中进行了描述，其包括特别适合于铟、钇和钆的配位体，特别的大环氨基羧化物和氨基膦酸配位体。与钆形成非离子的(例如中性的)金属复合物是已知的，并在 US 4885363中说明。特别优选的对于钆的螯合剂包括DTPA，二乙胺四乙酸(EDTA)，三乙基四胺六乙酸(TTHA)，1，4，7，10-四氮杂环十二烷基-1，4，7，10-四乙酸(DOTA)，10-(2-羟基丙烷)-1，4，7，10-四氮杂环十二烷基-1，4，7-四乙酸(DO3A)以及它们的衍生物。 
设想连接基团-(L)n-的作用是为了从CBP的活性位点隔开相对大体积的锝复合物，其导致了金属的配位，从而例如基底结合没有被削弱。这可以通过弹性的组合(例如简单烷基链)，从而大体积基团有自身定位的自由从而远离活性位点和/或刚性，例如环烷基或芳基间隔团其调整金属复合物远离活性位点。连接物基团的本质也能用于修饰作为结果的缀合锝复合物的生物分布。这样，例如在连接物中引进乙醚基团将有助于最小化血浆蛋白结合，或者聚合的连接基团例如聚烯化乙二醇，特别的聚乙二醇的使用能有助于延长试剂在体内血液中的寿命。 
优选的连接基团-(L)n-在这些螯合剂的背景下具有一主链(例如组成-(L)n-部分的被连接原子)其包含2到10个原子，最优选的2到5个原子，特别优选的为2到3个原子。最小的2个原子的连接基团主链授予这样的优势即螯合剂从生物定位部分很好地分离，从而任何相互作用都被最小化。另外，CBP不一定与螯合剂和金属离子的配位有效地竞争。这样，CBP的生物定位特性和螯合剂的金属螯合能力都得以维持。强烈优选CBP以这样的方式连接到螯合剂，即连接不遭受血液中温和的代谢。这是因为这样的代谢可能导致成像金属复合物在被标记的CBP到达期望的体内目标位置之前就被切除。这样CBP优选地共价地通过不易被代谢的-(L)n-连接基团结合到本发明金属复合物上。适合的这样的连接是碳-碳键，氨基键，脲或硫脲连接，或醚键。 
非肽连接基团，例如亚烃基团或亚芳基团具有这样的优势，即不存在显著的氢键结合与缀合的CBP相互作用，从而连接物不会包裹到CBP上。 
优选的亚烃基间隔物基团是-(CH2)q-，其中q是值为2到5的整数。优选的q是2或3。优选的亚芳基间隔物具有这样的化学式： 
Figure G2007800192052D00211
其中：a和b各自独立地是0，1或2。
优选的Y’或Y”是这样的-CH2CH2-(L)p-CBP-，其中p是值为0到3的整数。最优选的，-(L)p-是-CO-或-NR-。对于化学式I，当G是氮，而-(L)p-是-NH-时，该组合物具有这样的优势，即它起源于能购得的对称中间体N(CH2CH2NH2)3。 
当成像金属是锝时，通常锝的原材料是高锝酸盐，例如TcO4 -，其中锝处于7价的氧化状态Tc(VII)。高锝酸盐自身不易形成金属复合物，因此制备锝复合物通常需要加入适合的还原剂，例如亚锡离子，通过还原氧化状态的锝至通常为Tc(I)或Tc(V)d的较低的氧化状态来促进复合。溶剂可以是有机的或水的，或其混合物。当溶剂中包含有机溶剂，有机溶剂优选的是一种生物相容性溶剂，例如乙醇或DMSO。优选的溶剂是水的，最优选的是生理盐水。 
当成像部分是放射性碘，优选的前体是那些包含经过亲电子的或亲核的碘化作用或经过与标记的醛或酮浓缩的衍生物的。第一类的例子有： 
(a)有机金属衍生物，例如：三烷基锡烷(如三甲基锡烷或三丁基锡烷)或三烷基硅烷(如三甲基硅烷)或有机硼化合物(硼化酯或有机三氟硼酸)； 
(b)用于卤素置换的非放射性烷基溴或用于亲核化碘化作用的对甲苯磺酸烷基酯，甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯(triflate)； 
(c)向亲核碘化方向活化的芳香环(例如芳基碘盐芳基重氮，芳基三烷基氨盐或硝基芳基衍生物)。 
该前体优选地包含：非放射性卤素原子，例如芳基碘或溴(以允许放射性碘置换)；有机金属前体化合物(例如三烷基锡，三烷基甲硅烷或有机硼化合物)；或有机前体，例如三氮烯或好的用于亲核替换的离去基团，如碘盐。优选的对于放射性碘，该前体包含有机金属前体化合物，最优选的是三烷基锡。 
将放射性碘引入有机分子的程序和方法在Bolton[J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)]中进行了描述。适合的硼酸酯有机硼化合物及其制备在Kabalka等[Nucl.Med.Biol.，29，841-843(2002)and 30，369-373(2003)]中进行了描述。合适的有机三氟硼酸及其制备在Kabalka等[Nucl.Med.Biol.，31，935-938(2004)]中进行了描述。 
可以连接放射性碘的芳基基团的例子在下面给出：
Figure G2007800192052D00231
两者均包含允许温和的放射性碘置换到芳香环上的取代基。若在CBP肽序列中已存在酪氨酸残基，放射性碘化作用能使用内在的苯酚基团进行。在另一种策略中，酪氨酸残基可以添加到肽序列上来进行放射性碘化作用，只要不损害其胶原蛋白结合特性。 
可选的取代基包含可通过放射卤素置换直接碘化合成的放射性碘，例如： 
Figure G2007800192052D00232
由于结合到饱和脂族系统的碘原子在体内易于被代谢从而损失放射性碘是已知的，放射性碘原子优选的通过直接共价键结合到例如苯环这样的芳香环，或乙烯基团上。 
放射性氟化作用可以通过使用18F氟化物与具有良好离去基团的前体中适合的化学基团作用直接标记而实现，例如烷基溴，甲磺酸酯或对甲苯磺酸烷基酯。18F还可通过用反应物18F(CH2)3OH烷化氮-卤代醋酸基团而引入来获得衍生物-NH(CO)CH2O(CH2)3 18F。对于芳基系统，18F氟化物亲核置换从芳基重氮盐，芳基硝基化合物或芳基季胺盐到芳基18F衍生物是适合的途径。 
本发明18F标记的化合物可以从18F氟代二烷基胺组成以及当18F氟代二烷基胺与包含如氯、P(O)Ph3或活性酯的前体反应产生的氨基化合物获得。 
另一种特别适合肽的放射氟化作用的放射氟化作用方法在WO03/080544中进行了描述并使用了硫醇偶联。CBP前体化合物具有以下化学式之一： 
Figure G2007800192052D00233
与具有化学式V的化合物： 
18F-XV-SH  (V)
其中Yv是具有化学式-(L)o-的连接物，其中L是前面所描述的，o是1-10，并可选的包含1-6个杂原子； 
XV是具有化学式-(L)p-的连接物，其中L是前面所描述的，p是1-30，并可选的包含1-10个杂原子；以及 
CBP是如前面定义的胶原蛋白结合肽； 
对于化学式(Va)或(Vb)分别给出放射性氟化的成像剂： 
其中XV和YV如前面所定义，而CBP是前面定义的胶原蛋白结合肽。 
另外的特别适合于肽的放射性氟化作用的方法在WO 04/080492中描述，并使用氨基偶联。氟化作用通过具有化学式(VI)的CBP前体化合物与具有化学式(VIa)的化合物作用而实现： 
Figure G2007800192052D00242
18F-(L)m-R2    (VIa) 
或者， 
通过具有化学式(VII)的CBP前体化合物与具有化学式(VIIa)的化合物作用 
18F-(L)m-R4    (VIIa) 
其中： 
R1是醛部分，酮部分，例如乙缩醛的被保护的醛，例如缩酮的被保护的酮，或者例如二醇或N端丝氨酸残基这样的能用氧化剂迅速有效地氧化成乙缩醛或缩酮的官能团； 
R2是官能团，其在温和的例如水缓冲液的条件下位点特异性地与R1作用，产生稳定的缀合。R2可以是氨衍生物，例如伯胺，仲胺，羟 胺，联氨，酰肼，氨基氧化物，苯联氨，氨基脲，或氨基硫脲，优选的是联氨，酰肼或氨基氧化基团； 
R3是能与R4发生位点特异性作用的官能团。R3可以是氨衍生物，例如伯胺，仲胺，羟胺，联氨，酰肼，氨基氧化物，苯联氨，氨基脲，或氨基硫脲，优选的是联氨，酰肼或氨基氧化基团； 
R4是醛部分，酮部分，例如乙缩醛的被保护的醛，例如缩酮的被保护的酮，或者例如二醇或N端丝氨酸残基这样的能用氧化剂迅速有效地氧化成乙缩醛或缩酮的官能团； 
来分别给出化学式(VIII)或(IX)的结合物： 
Figure G2007800192052D00251
其中X是-CO-NH-、-NH-、-O-、-NHCONH-或-NHCSNH-，优选的是-CO-NH-、-NH-或-O-；Y是氢，烷基或芳基取代物，并且其中L如前面定义的，而m是0-10。 
关于18F标记的衍生物的合成路径的更多细节在Bolton，J.Lab.Comp.Radiopharm.，45，485-528(2002)中进行描述。 
前体通过首先组装相关CPB而合成。肽可以在0.1mmol规模上在MBHA-Rink氨基树脂(0.58mmol/g)上通过ABI433A合成器组装。Fmoc氨基酸衍生物在体外以过剩的10倍摩尔在NMP中使用HBTU-HOBt-DIEA活化，而Fmoc在20％哌啶/NMP溶液中解保护。组装后，树脂被转移到氮气起泡装置，来偶联能与如前面定义的成像部分作用的化学基团。进行凯撒测试以保证100％转化到前体化合物。从载体上切除和任何侧链保护基团的移除同时实现。过剩的TFA在此之后在真空下移除，而前体化合物通过添加二乙醚而沉淀。粗前体化合物以白色固体释放，接着和二乙醚粉碎。残余物被溶解到0.1％TFA/乙腈:水(1:1)中，冻干，用HPLC纯化并用LC-MS分析。 
以下是本发明优选的前体化合物的例子(保持相应成像剂的编号)：
#  前体 
  
1 [螯合物II]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
2 [螯合物II]-PEG12-ANAALKAGELYKCILY-NH2
3 [螯合物II]-DARKSEVQK-NH2
4 [螯合物II]-GELYKCILY
5 [螯合物II]-[PEG(12)]-GELYKCILY
6 [螯合物II]-RRANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
7 [螯合物II]-CDARKSEVQKC[通过端部半胱氨酸残基环化]
8 [螯合物II]-KELNLVYT
9 [螯合物II]-CVWLWENC[通过端部半胱氨酸残基环化]
10 [螯合物II]-CVWLWEQC-NH2[通过端部半胱氨酸残基环化]
11 [螯合物II]-CVWTLPDQC[通过端部半胱氨酸残基环化]
12 [螯合物II]-NGVFKYRPRYFLYKHAYFYPPLKRFPVQ
13 [螯合物I]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
14 [螯合物I]-[PEG(12)]-ANAALKAGELYKCILY-NH2
15 [螯合物I]-DARKSEVQK-NH2
16 [螯合物I]-GELYKCILY
17 [螯合物I]-[PEG(12)]-GELYKCILY
18 [螯合物I]-RRANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
19 [螯合物I]-CDARKSEVQKC[通过端部半胱氨酸残基环化]
20 [螯合物I]-KELNLVYT
21 [螯合物I]-CVWLWENC[通过端部半胱氨酸残基环化]
22 [螯合物I]-CVWLWEQC[通过端部半胱氨酸残基环化]
23 [螯合物I]-CVWTLPDQC[通过端部半胱氨酸残基环化]
24 [螯合物I]-NGVFKYRPRYFLYKHAYFYPPLKRFPVQ
38 α-His-[Ac]-ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
39 HYNIC-ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
40 螯合物I-ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY
41 螯合物II-MIVVELTNPLKSSGIENGAFQGMKK
42 螯合物I-ANAALKAGELYK-[Abu]-ILY-[PEG(4)]-[二乙醇酰基]-NH2                                          
[0258]   
43 螯合物I-ANAALKAGELY-[NMe-Lys]-[Abu]-ILY-[PEG(4)]-[二乙醇酰基]-NH2                                       
在第三方面，本发明提供一种药物组合物，包含上述成像剂，以及生物相容性的载体，并以适于哺乳动物施用的形式。在一优选实施例中，该药物组合物是放射性药物组合物。 
“生物相容性载体”是流体，特别是液体，成像剂悬浮或溶解其中，从而该组合物是生理可容性的，例如能无毒或无不适地施用到哺乳动物体。生物相容性载体媒介是适于注射的载液，例如用于注射的消毒的、无热原水；像生理盐水这样的水溶液(其可方便地平衡从而最终用于注射的产物是等渗的或非低渗的)；一种或多种渗透压调节物质的水溶液(例如血浆阳离子盐与生物相容性补偿离子)、糖(例如葡萄糖或蔗糖)、糖醇(例如山梨糖醇或甘露醇)、二醇(glycol)(例如甘油)，或其他非离子性多羟基原料(例如聚乙二醇，丙二醇以及类似物)。生物相容性载体媒介还可包含生物相容性有机溶剂，例如乙醇。这样的有机溶剂对增溶更亲脂性化合物或配方是有用的。优选的该生物相容性载体媒介是用于注射的无热原水，生理盐水或乙醇水溶液。用于静脉注射的生物相容性载体媒介的pH处于4.0-10.5的范围内。 
这样的药物组合物可以适合地用能够密封的适于用注射针头进行单个或多个穿孔的容器提供(例如波纹状隔膜密封容器)同时保持无菌状态。这样的容器包含单个或多个病人的剂量。优选的多剂量容器可包含单个散装小瓶(例如体积10-30cm3)其容纳多个病人剂量，而这样单个病人剂量就能在可行的适应临床状态的准备时间内在各种时间间隔被移入到临床级注射器中。预填装的注射器被设计为包含单个人体剂量，或“单位剂量”，因此优选地是适于临床应用的一次性或其它注射器。当药物组合物是一种放射性药物组合物，预填装的注射器可选的提供注射器护套来保护操作者免于放射性药剂。适合的这样的放射性药物注射器护套对于本领域技术人员是已知的，优选的包含铅或钨。 
本发明的药物可以用试剂盒来制备，正如下面第四方面将要说明的。可选地，它们可以在无菌操作环境下制备获得期望的无菌产物。该药物还可以在未消毒状态下制备，之后在末期利用如伽马照射，灭 菌锅，干热或化学处理(例如用环氧乙烷(ethylene oxide))进行消毒。优选的，本发明的该药物通过试剂盒制备。 
如上面描述的关于第一实施方案的，对于放射性药物组合物，本发明最优选的放射性成像部分为99mTc、123I、11C和18F。 
第四方面，本发明提供用于制备第三实施方案中的药物组合物的试剂盒。这样的试剂盒包含合适的第二实施方案的前体，优选的是无菌无热原的形式，从而与无菌的成像部分源反应能以最少数量的操作而得到期望的药物。这样的考虑在放射性药物的情况下，特别对于放射性药物放射性同位素的半衰期相对较短，对于操作方便以及从而减少了放射性药剂师的辐射剂量特别重要。因此，用于重建这样的试剂盒的反应媒介优选地是如前面定义的“生物相容性载体”，最优选的是水性的。 
适合的试剂盒容器包含密封的容器，其允许维持无菌的完整性和/或放射性安全，加上可选的顶部惰性气体(例如氮气或氩气)同时允许使用注射器添加或收回溶液。优选的这样的容器是隔膜密封瓶，其中气密封闭是卷曲加封的(crimped on with an overseal)(典型的是铝)。这样的容器具有额外的优势，即这样的密封如果需要可以承受真空，例如更换顶部气体或从溶液中去除气体。 
当用于试剂盒时前体的优选方面已在前面第二实施方案中进行了描述。在试剂盒中使用的前体可以在无菌操作条件下使用从而获得期望的无菌的无热原的材料。该前体还可以在未消毒条件下使用，之后在末期进行利用如伽马照射，灭菌锅，干热或化学处理(例如用环氧乙烷)进行消毒。优选的，该前体以无菌的无热原的形式使用。最优选的，该无菌无热原的前体在前述密封的容器中使用。 
试剂盒中的前体优选地以之前在第二实施方案中的描述的共价结合于载体基质上的形式供应。 
对于99mTc，试剂盒优选地被冷冻并被设计为通过来自99mTc放射性同位素产生器的无菌99mTc高锝酸盐重组而获得适于人体施用的溶液而不需要进一步的操作。适合的试剂盒包含容器(例如隔膜密封瓶)，其中装有未复合的螯合剂，以及药物学可接受的还原剂，例如连二亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、抗坏血酸、甲脒硫氢酸、锡离子、Fe(II)或Cu(I)；以及至少一种具有生物相容性阳离子的弱有机酸盐。术语“生 物相容性阳离子”是指带正电荷的补偿离子，其与离子化的，带负电荷的基团形成盐，其中所述带正电荷的补偿离子也是无毒的因此是适于哺乳动物体，尤其是人体施用的。适合的生物相容性阳离子的例子包括：碱金属钠或钾；碱土金属钙和锰；以及铵离子。优选的生物相容性阳离子是钠和钾，最优选的是钠。 
制备放射性金属金属复合物成像剂的试剂盒可选的还第二种弱有机酸或盐其带有生物相容性阳离子，其用作转换螯合剂。该转换螯合剂是一种化合物其快速与放射性金属反应形成弱复合物，之后被试剂盒的螯合剂置换。对于锝，这最小化了由于高锝酸盐与锝复合物竞争的快速还原而形成还原的水解锝(RHT)的风险。适合的这样的转换螯合剂是前述的弱有机酸和盐，优选的是酒石酸盐，葡糖酸盐，葡庚糖盐，安息香酸盐，或膦酸盐，优选的是膦酸盐，最优选的是二膦酸盐。一种优选的这样的转换螯合剂是MDP，例如亚甲基二膦酸或其带有生物相容性阳离子的盐。 
同时关于涉及为制备放射性金属复合物的试剂盒，可选的使用自由形态的螯合剂，该试剂盒可选的包含该螯合剂的非放射性金属复合物，其在添加放射性金属后进行金属交换反应(例如配位体交换)来得到期望的产物。用于金属交换反应的适合的这样的复合物是铜或锌复合物。 
在99mTc成像剂试剂盒中使用的药物学可接受的还原剂优选的是亚锡盐，例如氯化亚锡，氟代亚锡或酒石酸亚锡，可以是无水的或水合的形式。亚锡盐优选的是氯化亚锡或氟代亚锡。 
试剂盒可选的进一步包含其他化合物例如辐射防护剂，抗菌防腐剂，pH调节剂或填装物。 
术语“辐射防护剂”是指一种化合物通过诱捕高度反应活性的自由基，例如源自水的辐解作用的含氧自由基阻止降解反应，例如氧化还原过程。本发明的辐解防护剂适合地选自：抗坏血酸，对氨基苯酸(例如4-氨基苯酸)，龙胆酸(例如2，5-二羟基苯甲酸)和其带有生物相容性阳离子的盐。“生物相容性阳离子”和其优选实施例如前面描述的。 
术语“抗菌防腐剂”是指一种试剂其阻止潜在有害的微生物，例如细菌，酵母或霉菌的生长。取决于剂量抗菌防腐剂也会表现出一些 杀菌的特性。抗菌防腐剂的主要作用是抑制任何在重组后的放射性药物组合物中这样的微生物的生长，例如在放射性诊断产物自身中。然而抗菌防腐剂也可选地被用于抑制一个或多个本发明的在重组之前的非放射性试剂盒中潜在有害的微生物的生长。适合的防腐抗菌剂包括：对羟基苯甲酸，例如甲基、乙基、丙基或丁基苯甲酸或其混合物；苯甲醇；苯酚；甲酚；溴棕三甲铵和邻乙汞硫基苯酸钠。优选的防腐抗菌剂是对羟基苯甲酸。 
术语“pH调节剂”是指化合物或化合物的混合物可用来保证重组后的试剂盒的pH处于对于人或哺乳动物施用可接收的范围内(大约的pH为4.0到10.5)。适合的这样的pH调节剂包括药物学可接受的缓冲液，例如三甲基甘氨酸，磷酸盐或TRIS[例如三羟甲基氨基甲烷]，以及药物学可接受的碱基，例如碳酸钠，重碳酸钠或其混合物。当前体以酸性盐形态使用时，pH调节剂可选地在一单独瓶或容器中提供，从而试剂盒的使用者可以作为多步程序的一部分来调节pH。 
术语“填料(filler)”是指药物学可接受的填充剂，其能在生产和冷冻过程中帮助材料处理。适合的填料包括无机盐，例如氯化钠，和水溶性糖或糖醇，例如蔗糖，麦芽糖，甘露糖醇或海藻糖。 
本发明的成像剂在体内成像中是有用的。相应的，在第五方面本发明提供本发明的在体内诊断或成像方法中的成像剂，例如SPECT或PET。优选的所述方法涉及体内成像的条件，其中胶原蛋白形成被上调，从而在对关于纤维化的状况的诊断有实用性，例如特发性肺纤维化、气喘、慢性阻碍性肺病、硬皮病、糖尿病视网膜病变、老年黄斑变性(AMD)、动脉硬化症、易损斑块、糖尿病肾病、肾小球硬化、IgA肾病、肝纤维化、风湿性关节炎、充血性心力衰竭。最优选的，所述体内诊断或成像方法是对于慢性阻碍性肺病、糖尿病视网膜病变、老年黄斑变性(AMD)、动脉硬化症、易损斑块、糖尿病肾病、肾小球硬化、肝纤维化和充血性心力衰竭，特别优选的是肝纤维化。 
本发明的这个方面还提供用于对在胶原蛋白形成被上调情况下的受试者的体内诊断或成像的方法，包含本发明第三方面的药物组合物的在先施用。所述受试者优选的是哺乳动物，而最优选的是人。在可选的实施例中，本发明的这个方面进一步提供，为了在胶原蛋白形成被上调的情况下对一受试者的体内成像的本发明成像剂的使用，其中 所述受试者是在先施用本发明第三方面药物组合物的。 
术语“在先施用的”是指临床的步骤，其中药物例如通过静脉注射给予到病人已经完成。本发明的这方面还包括施用第一实施方案中的成像剂用于在胶原蛋白形成被上调的状态下进行体内诊断性成像药物的生产。 
本发明的第六方面提供了一种监视人体或动物体内使用的与胶原蛋白形成的上调状态对抗的药物的治疗效果的方法，所述方法包含对所述体内施用本发明的成像剂，并检测所述成像剂的吸收，所述施用和检测可选的，但是优选的可以有效地重复，例如所述药物处理之前，之间和之后的处理。 
实施例的简要说明
实施例1描述了螯合物I的合成。 
实施例2描述了螯合物I的戊二酰胺(glutarylamide)衍生物的合成。 
实施例3描述了螯合物II的合成。 
实施例4-17描述了1、3、8、10、29和35到43成像剂的合成。 
实施例18描述了评估体外本发明成像剂胶原蛋白结合亲和性的方法。 
实施例19描述了本发明的成像剂1在肝纤维化动物模型中体内的生物分布性。 
实施例20描述了适于评价用于肝纤维化(胆管连接模型)成像的潜在化合物的体内模型。 
实施例
实施例中缩略语列表
Acm     乙酰氨甲基 
ACN     乙腈 
AcOH    乙酸 
BDL     胆管连接 
Boc     叔丁氧羰基 
DCM     二氯甲烷 
DIEA    二异丙基乙胺 
DMF     二甲替甲酰胺 
ESI-MS  电喷离子质谱
HBTU    O-苯并三唑-N，N，N’，N’-四甲基-脲(uronium)-六氟-磷酸盐 
HOBt    N-羟基苯并三唑 
HPLC    高效液相色谱 
IR      红外 
LC-MS   液相色谱-质谱 
MS      质谱 
NMM     N-甲基吗啉 
NMP     N-甲基吡咯烷酮 
NMR     核磁共振 
OtBu    β-叔丁基酯 
PyAOP   (7-氮杂苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷鏻六氟磷酸酯 
RF      保留级分 
s.c     皮下的 
TFA     三氟乙酸 
THF     四氢呋喃 
TLC     薄层色谱 
Trt     三苯甲基 
实施例1：螯合物1[二[氮-(1，1-二甲基-2-氮-羟亚胺丙基)2-氨乙基]-(2-氨乙基)甲烷]的合成
(步骤1)：制备三(甲氧基羰基甲基)甲烷
3-(甲氧基羰基亚甲基)戊二酸二甲酯(89g，267mmol)在甲醇(200ml)中与(10％钯碳：50％水)(9g)在氢气(3.5巴)环境下摇晃(30小时)。该溶液过滤过硅藻土并真空浓缩得到油状3-(甲氧基羰基甲基)戊二酸二甲酯，产量(84.9g，94％)。 
NMR1H(CDCl3)，2.48(6H，d，J＝8Hz，3xCH2)，2.78(1H，hextet，J＝8Hz CH，)3.7(9H，s，3xCH3). 
NMR13C(CDCl3)，28.6，CH；37.50，3xCH3；51.6，3xCH2；172.28，3xCOO. 
(步骤b)：通过p-甲氧基-苄胺的三甲基酯的酰胺化
3-(甲氧基羰基甲基)甲烷[2g，8.4mmol]溶解于p-甲氧基-苄胺中(25g，178.6mmol)。设置装置在氮气流中蒸馏并加热到120℃24小时。 反应的发展通过收集到甲醇的量进行监测。反应混合物被冷却到环境温度，并加入30ml乙酸乙酯，接着搅拌沉淀的三胺产物30分钟。三胺通过过滤分离，滤饼可以用足够量的乙酸乙酯冲洗几次以移除过剩的p-甲氧基-苄胺。干燥即获得后4.6g，100％的白色粉末。该高度不溶的产物被直接用于下一步骤而不需要其他纯化或塑造。 
(步骤c)：1，1，1-三[2-(p-甲氧基苄氨基)乙基]甲烷的制备
冰浴降温的1000ml三颈圆底烧瓶中，步骤2(a)(10g，17.89mmol)的三胺被小心地加入250ml1M硼烷溶液(3.5g，244.3mmol)硼烷中。完成加入后移除冰浴，反应混合物缓慢加热到60℃。反应混合物在60℃下搅拌20小时。取出反应混合物的样本(1ml)，与0.5ml5N盐酸混合并静置30分钟。加入0.5ml的50氢氧化钠到样本中，接着加入2ml水，搅拌溶液直至所有的白色沉淀均溶解。溶液用醚(5ml)进行萃取并蒸发。残留物以1mg/ml的浓度溶解到乙腈中，并用MS进行分析。如果单-和双胺(M+H/z＝520和534)在MS谱上可见，则反应未完成。为了完成反应，再加入100ml1M的硼烷THF溶液，反应混合物在60℃下搅拌6小时以上，之后按照前面取样的程序取出新的样品。必要的话继续加入1M硼烷THF溶液，直到完全转化为三胺。 
反应混合物冷却至环境温度，再缓慢地加入5N盐酸[注意：会产生大量气泡！]。一直加入盐酸直至观察不到更多的气体产生。该混合物被搅拌30分钟再进行蒸发。块状物悬浮于氢氧化钠水溶液中(20-40％；1:2w/v)，并搅拌30分钟。该混合物接着用水(3倍体积)稀释。混合物用二乙醚萃取(2x150ml)[注意：不能使用卤化溶剂]。该结合的有机相接着用水(1x200ml)，盐水(150ml)冲洗，并且在硫酸镁上干燥。蒸发后的产量：油状7.6g，84％。 
NMR1H(CDCl3)，δ：1.45，(6H，m，3xCH2；1.54，(1H，septet，CH)；2.60(6H，t，3xCH2N)；3.68(6H，s，ArCH2)；3.78(9H，s，3xCH3O)；6.94(6H，d，6xAr).7.20(6H，d，6xAr). 
NMR13C(CDCl3)，δ：32.17，CH，34.44，CH2；47.00，CH2；53.56，ArCH2；55.25，CH3O；113.78，Ar；129.29，Ar；132.61；Ar；158.60，Ar。 
(步骤d)：1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷的制备
1，1，1-三[2-(p-甲氧基苄氨基)乙基]甲烷(20.0g，0.036mol)溶解于甲醇中(100ml)并加入Pd(OH)2(5.0g)。该混合物进行氢化处理(3巴， 100℃，在高温灭菌锅内)并搅拌5小时。再在10小时和15小时后分别加入Pd(OH)2(2 x 5g)。 
反应混合物被过滤，该滤出液用甲醇冲洗。该混合有机相被蒸发，残余物在真空中蒸馏得到。 
(1x10-2，110℃)得到2.60g(50％)的1，1，1-三(2-氨基乙基)甲烷。 
NMR1H(CDCl3)，δ 2.72(6H，t，3xCH2N)，1.41(H，septet，CH)，1.39(6H，q，3xCH2)。 
NMR13C(CDCl3)，δ 39.8(CH2NH2)，38.2(CH2.)，31.0(CH)。 
(步骤e)：螯合物I的制备
三(2-氨基乙基)甲烷(4.047g，27.9mmol)溶于干乙醇(30ml)中的溶液在室温下，边在氮气环境中剧烈搅拌边加入无水碳酸钾(7.7g，55.8mmol，2eq)。3-氯-3-甲基-2-亚硝基丁烷溶液(7.56g，55.8mol，2eq)被溶解到干乙醇(100ml)中，75ml该溶液被缓慢滴入反应混合物。该反应跟随着硅上的TLC[板在二氯甲烷，甲醇，浓缩氨(0.88sg)中工作；100/30/5和TLC板通过茚三酮喷雾和加热形成]。单-，双-和三-烷基化产物可随着RF的增加按那个顺序被看见。分析型HPLC工作时使用3％氨水中7.5-75％的乙腈梯度下的RPR反相柱。反应通过在真空下移除乙醇并重新悬浮于水(110ml)中后变强烈。水基悬浮体使用乙醚(100ml)进行萃取以在水层中去除一些三烷基化的化合物以及亲脂性杂质剩下单和期望的双烷基化产物。水溶液使用醋酸铵(2eq，4.3g，55.8mmol)进行缓冲以保证好的色谱。该水溶液在使用自动制备型HPLC纯化前在4℃下存储过夜。 
产量(2.2g，6.4mmol，23％)。 
质谱；阳离子10V锥孔电压。发现：344；计算出M+H＝344。 
NMR1H(CDCl3)，δ 1.24(6H，s，2xCH3)，1.3(6H，s，2xCH3)，1.25-1.75(7H，m，3xCH2，CH)，(3H，s，2xCH2)，2.58(4H，m，CH2N)，2.88(2H，t CH2N2)，5.0(6H，s，NH2，2xNH，2xOH). 
NMR1H((CD3)2SO)δ 1.14xCH；1.29，3xCH2；2.1(4H，t，2xCH2)； 
NMR13C((CD3)2SO)，δ 9.0(4xCH3)，25.8(2xCH3)，31.02xCH2，34.6CH2，56.82xCH2N；160.3，C＝N. 
HPLC条件：流速8ml/min，使用25mmPRP柱 
A＝3％氨溶液(sp.gr＝0.88)/水；B＝乙腈
时间     ％B 
0        7.5 
15       75.0 
20       75.0 
22       7.5 
30       7.5 
每循环一次加入3ml水溶液，并在时间窗口为12.5-13.5分钟时收集。 
实施例2：螯合物I的戊二酰胺衍生物[二[(1，1-二甲基-2-氮-羟亚胺丙基)2-氨乙基]-(2-(戊二酰胺)乙基甲烷)
螯合物I(0.5g，1.45mmol)在干乙腈(50ml)和三乙胺(150mg，1.45mmol)中在氮气下用冰浴冷却至0℃。戊二酸酐(165mg，1.45mmol)被加入到搅拌着的反应物中，并允许加热至室温，搅拌过夜。通过过滤和真空干燥收集过夜形成的沉淀物，得到不纯的标题中化合物的样品(267mg，0.583mmol，40％)。滤出液在真空中浓缩至无色玻璃状，其与已经收集的沉淀物一起重新溶解于5％0.880sg氨水，水(50ml)中并用自动制备型HPLC纯化。 
HPLC条件：流速8ml/min，使用150mm×25mmPRP柱 
每次循环加入2ml样品溶液。 
A＝3％氨溶液(sp.gr＝0.88)/水。 
B＝乙腈 
时间   ％B 
0      7.5 
15     75.0 
20     75.0 
22     7.5 
31     7.5 
所需产物在15.25-16.5分钟时洗提。该产物溶液真空蒸发，得到(304mg，0.68mmol，47％)无色玻璃状泡沫，熔点54.8℃。该产物作为一点在TLC和分析型HPLC中分析。 
NMR1H(DMSO)，0.7(12H，s，4xCH3)，0.85(4H，m，2xCH2)，1.0(1H， m，CH)，1.3(6H，s，2xCH3)，1.3(4H，m，2xCH2)，1.6(2H，m，CH2)，1.75(6，m，3xCH2)，2.6(2，m，，2xOH)3.2(2H，t，NH)7.3(1H，t，NH). 
NMR13C(CD3SO)8.97，20.51，20.91，25.09，25.60，31.06，33.41，33.86，56.89，66.99 160.07，1712.34，174.35 174.56 
M/S C22H43N5O5 M+H＝457发现457.6 
实施例3：(8-氨基-2-{[叔丁氧羰基--(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基]-甲基}-辛基)-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(叔丁氧羰基保护的螯合物II)的合成。
步骤(a)：2-(6-氯-己氧基)四氢吡喃。
6-氯己醇(6.85g，10mmol)和甲苯磺酸(500mg)，被溶解至干醚(75ml)中，并用冰浴冷却至0-5℃。在干醚(25ml)中逐滴地随着恒定搅拌在30分钟时间内加入二氢吡喃(4.3g，10mmol)。完成加入后，移除冷却浴并继续搅拌16小时。溶液使用水(50ml x 2)，干燥(硫酸镁)，萃取，过滤，并在减压下蒸发溶液，得到浅黄色的油。该油通过碳13NMR光谱显示不进行后继反应纯化便具有足够的纯度以供使用。产量10.1g(91％)。 
13C NMR(CDCl3)：δ 19.7(CH2)，25.5(CH2)，25.6(CH2)，26.7(CH2)，29.6(CH2)，30.8(CH2)，32.6(CH2)，45.0(CH2Cl)，62.3(OCH2)，67.4(OCH2)，98.8(OCHO). 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.30-1.71(14H，m，CH2 x 7)，3.24-3.32(1H3.41-3.48(3H，m CH and CH2)，3.60-3.67(1H，m，CH)，3.72-3.82(1H，bm，CH)，4.44-4.49(1H，bm，OCHO). 
步骤(b)：2-[6-(四氧-吡喃-2-基氧基)-己基]-丙二酸二乙酯。
少量钠(1.13g，49mmol)在干氮的覆盖下随着持续搅拌而溶解于干乙醇(100ml)中。二乙基丙二酸(8.0g，50mmol)被加入到一部分中，溶液加热至60℃1小时。2-(6-氯-己氧基)四氢吡喃(9.3g，42.2mmol)加入到一部分中，并将温度提高至75-80℃，并保持在这一水平24小时。冷却后，无机固体通过过滤被去除，溶剂从滤液中蒸发。残余物被溶解于二氯甲烷(50ml)中，用水(30ml×2)萃取，过滤，硫酸镁干燥并去除挥发物，留下浅黄色的油。该油在硅胶上进行色谱分析，使用石油醚40:60/醚(200:40)作为洗提液。所需产物在rf＝0.15时洗提， 并以无色油状分离。产量8.7g，(60％)。 
13C NMR(CDCl3)：δ 14.0(CH3 x 2)，19.6(CH2)，25.5(CH2)，27.2(CH2)，28.6(CH2)，29.0(CH2)，29.6((CH2)，30.0(CH2)，30.8(CH2)，52.0(CH)，61.2(OCH2x2)，62.2(OCH2)，67.4(OCH2)，98.8(OCHO)，169.4(C＝O x 2)。 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.10-1.25(14H，m，CH3 x 2，CH2 x 4)，1.36-1.50(6H，bm，CH2 x 3)，1.70-1.81(2H，bm，CH2)，3.17-3.28(2H，m，CH2)，3，56-3.66(1H，m，CH)，3.70-3.80(1H，m，OCH)，4.04-4.16(4H，m，OCH2 x 2)，4.03-4.08(1H，m，OCHO)。 
步骤(c)：N，N′-二-(2-氨基-乙基)-2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基)-己基]-丙二酰胺。
2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基)-己基]-丙二酸二乙酯(5.1g，14.8mmol)被溶解于1，2-氨基乙烷(10g，167mmol)，并在室温下搅拌16小时。挥发物在真空(40-50℃，在0.01mm Hg下)中被去除留下浅绿色粘性残留物，对其进行柱色谱分析，并用二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵(50:50:5)洗提。标题中的化合物在rf 0.2处洗提，并以浅绿色粘性油收集，其在静置时凝固。(产量3.9g，71％)。 
13C NMR(CDCl3)：δ 19.8(CH2)，25.5(CH2)，26.0(CH2)，27.5(CH2)，29.2(CH2)，29.7(CH2)，30.8(CH2)，31.9(CH2)，41.0(NCH2 x 2)，41.9(NCH2 x 2)，54.6(CH)，62.5(OCH2)，67.5(OCH2)，98.9(OCHO)，171.6(C＝O x 2)。 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.15-1.28(6H，bs，CH2 x 3)，1.39-1.44(6H，bm，CH2 x 3)，1.69-1.74(4H，bm，CH2 x 2)，2.64(4H，bs，NH2 x 2)，2.734H，t，J＝6Hz，CH2 x 2)，3.08-3.29(6H，m，CH2 x 3)，3.35-3.41(1H，m CH)，3.55-3.63(1H，m，CH)，3.70-3.78(1H，m，CH)，4.43(1H，bt，J＝4Hz，OCHO)，7.78(2H，bt，J＝5Hz，OCNH x 2) 
IR(薄膜)cm-1：-3417，3082，2936，2862，1663，1558，1439，1354，1323，1261，1200，1189，1076，1026，956，907，867，810。 
步骤(d)：N，N′-二-(2-氨基乙基)-2-(6-羟基-已基)丙二酰胺。
N，N′-二-(2-氨基乙基)-2-[6-(四氢-吡喃-2-基氧基)-己基]-丙二酰胺(3.9g，10.6mmol)，p-甲苯磺酸一水化合物(8.5g，3mmol)，乙醇(50ml)在回流中被加热至70-75℃持续16小时。冷却后，浓缩的氢氧化铵 (.880)被逐滴加入直到pH达到不变的9。白色沉淀固体通过滤过硅藻土而移除，滤饼用乙醇(30ml)冲洗。该乙醇在减压(15mm Hg，40℃)下去除，得到半固体蜡状物。该残留物在硅胶上进行光谱分析，并用二氯甲烷/甲醇/氢氧化铵(100:50:10)洗提，标题化合物被发现具有rf＝0.2。该产物被收集以及与乙醇(100ml×3)共蒸发来去除任何的残留水分。浅绿色粘性残留物被获得，其静置时凝固。(产量2.1g，69％)。 
13C NMR(CD3OD)：δ 25.4(CH2)，27.3(CH2)，28.9(CH2)，30.4(CH2)，32.2(CH2)，40.6(NCH2 x 2)，41.7(NCH2 x 2)，54.1(CH)，61.6(CH2OH)，171.7(C＝O x 2). 
1H NMR(CD3OD)：δ 1.28-1.38(6H，bs，CH2 x 3)，1.46-1.55(2H，bm，CH2)，1.79-1.87(2H，bm，CH2)，2.73(4H，t，J＝6Hz，H2NCH2 x 2)，3.13(1H t，J＝7Hz，CH)，3.27(4H，dt，J＝6 and 2Hz，HNCH2 x 2)，3.53(2H t，J＝7Hz OCH2)。 
IR(thin film)cm-1：-3364，2932，2862，2527，1663，1558，1462，1327，1223，1192，1034。 
质谱(Fabs)m/e：-计算出C13H29N4O3(M+H)289发现289。 
步骤(e)：(2-叔丁氧羰基氨基-乙基-2-{[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-氨基]-甲基}-8-羟基-辛基)-碳酸叔丁酯
在干氮覆盖下，纯硼烷-二甲基硫醚加合物(15ml，150mmol)通过注射器被逐滴加入到搅拌着的N，N′-二-(2-氨基乙基)-2-(6-羟己基)-己基]丙二酰胺(2.1g，7.3mmol)二噁烷(50ml)混合物中。完成加入后，该混合物在回流中被缓慢加热到110℃持续5天。这期间一些白色固体余留。在冷却后，挥发物在减压下被去除，留下白色固体，甲醇(50ml)被逐滴加入其中，得到无色溶液。该溶液在回流中被加热3小时，冷却，浓缩。加入盐酸(5ml)，并继续在回流中加热70-75℃48小时。溶剂被去除而留下粘性绿色残留物，其与甲醇(100ml×3)共蒸发而得到浅绿色固体。该固体被重新溶解到干甲醇中，而加入无水碳酸钾(4.0g，30mmol)之后再加入二碳酸二叔丁酯(7.0g，32mmol)。混合物在室温下搅拌48小时。无机固体通过滤过硅藻土去除，溶剂从滤出液中蒸发，留下粘性残留物。该残留物与水(50ml)混合并用二氯甲烷(50ml×3)萃取。有机部分被组合，干燥(硫酸镁)，过滤，蒸发溶剂，从而得到浅黄色残留物。
注意：在这里用碳13NMR来监测反应是便利的。 
该残留物在硅胶上进行光谱分析，使用二氯甲烷/甲醇(95:5)作为洗提液。标题中的化合物在rf＝0.41时洗提，并分离成无色粘性油(产量2.5g，52％)。 
13C NMR(CDCl3)：δ 25.6(CH2)，26.4(CH2)，28.4(CH3 x 12)，29.8(CH2 x 2)，32.6(CH2)，36.5(非常宽，CH)，39.2(NCH2 x 2，邻近CH)，46.9(宽单线，HNCH2 x 2)，50.0(宽单线，NCH2 x 2)，62.4(HOCH2)，79.0(OC x 2)，79.9(OC x 2)，156.4(宽单线C＝O x 4) 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.05-1.18(8H，bs，CH2 x 4)，1.27(18h，s，CH3 x 6，叔丁基)，1.31(18H，s，CH3 x 6，叔丁基)，1.41(2H，m，CH2)，1.81(1H bs，CH)，2.63(1H，bs，OH)，2.98(4H，bs，NCH2 x 2)，3.11(8H，bs，NCH2 x 4)，3.44(2H，t，J＝8Hz，CH2O)，5.2(2H，bs，NH x 2) 
IR(薄膜)cm-1：-3350，2976，2931，2859，1674，1516，1455，1418，1393，1260，1250，1165，1069，965，871，775. 
质谱(Fabs)m/e：-计算出C33H65N4O9(M+H)661发现661. 
步骤(f)：甲苯-4-磺酸8-[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基-氨基]-7-{[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-氨基]-甲基}-辛基酯
(2-叔丁氧羰基氨基-乙基-2-{[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基乙基)-氨基]-甲基}-8-羟基-辛基)-碳酸叔丁酯(2.52g，3.82mmol)，p-甲苯磺酰氯(1.0g，5.2mmol)，三乙胺(1.3g，12.8mmol)和二氯甲烷(30ml)在室温下搅拌并伴随溶剂的缓慢蒸发。反应用碳NMR监视，3天后几乎没有初始原料剩余。反应液的体积用二氯甲烷添加到30ml，用水(50ml x 3)萃取，干燥(硫酸镁)，过滤，蒸发溶剂，从而留下褐色残留物。该残留物在硅胶上进行光谱分析，二氯甲烷/甲醇(100:5)作为洗提液。在rf＝0.95处洗提的第一种化合物是未反应的对甲苯磺酰氯。标题中的化合物在rf＝0.2处洗提，并被分离为浅黄色粘性油。产量(1.20g，39％)。 
13C NMR(CDCl3)：δ 21.7(CH3 tosyl)，25.3(CH2)，26.3(CH2)，28.5(CH3 x 12)，28.8(CH2)，29.5(CH2)，29.9(CH2)，36.5(CH非常宽)，39.4(NCH2 x 2)，47.0(宽NCH2 x 2)，50.5(宽，NCH2 x 2)，70.6(TsOCH2)，79.1(OC x 2)，80.0(OC x 2)，127.9(CH x 2)，129.9(CH x 2)，133.2(C)，144.7(C-S Ts)，156.1(宽，C＝O x 4). 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.16(8H，bs，CH2 x 4)，1.35(18H，s，CH3 x 6)， 1.39(18H，s，CH3 x 6)，1.88(1H，bs，CH)，2.38(3H，s，CH3 Tosyl)，3.10-3.12(4H，bs，NCH2 x 2)，3.19(8H，bs，NCH2 x 4)，3.93(2H，t，J＝7Hz，CH2OTs)，5.0(1H，bs，NH)，5.08(1H，bs，NH)，7.29(2H，d，J＝8Hz，CH x 2，Ar)，7.72(2H，d，J＝8Hz CH x 2，Ar) 
IR(薄膜)cm-1：-3360，2974，2932，2862，1693，1516，1479，1418，1391，1366，1250，1177，1069，959，816，775. 
质谱(Fabs)m/e：计算出C40H71N4O11S(M+H)815发现815 
步骤(g)：(8-叠氮基-2-{[叔丁氧羰基-(2-叔甲酰胺基-乙基)-氨基]-甲基}-辛基)-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)氨基甲酸叔丁酯
甲苯-4-磺酸8-[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基乙基-氨基]-7-{[叔丁氧羰基-(2-叔丁氧羰基氨基乙基)氨基]甲基}-辛基酯(1.105g，1.36mmol)，叠氮化钠(350mg，5.4mmol)和甲醇(10ml)在回流中加热至70-75℃16个小时。冷却后，甲醇在室温减压下被去除，直到剩余约1-2ml。该残留物用水(25ml)稀释并用二氯甲烷(25ml x 4)萃取。有机萃取物被化合，干燥(硫酸镁)，过滤，在室温下蒸发掉挥发物(注意：叠氮化合物是潜在的爆炸物，这一步骤应在安全罩后进行操作)从而得到浅黄色粘性残留物，那就是纯的状态的期望化合物。(产量820mg，88％)。 
13C NMR(CDCl3)：δ 26.3(CH2)，26.5(CH2)，28.3(CH3 x 12)，28.7(CH2)，29.6(CH2)，29.8(CH2)，36.8(宽，CH)，39.3(NCH2 x 2)，46.9(宽，NCH2 x 2)，50.0(宽，NCH2 x 2)，51.3(CH2N3)，79.0(OC x 2)，79.8(OC x2)，156.0(C＝O x 4). 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.16(8H，bs，CH2 x 4)，1.29(18H，s CH3 x 6)，1.33(18H，s，CH3 x 6)，1.47(2H，bt，J＝6.5Hz CH2邻近CH)，1.86(1H，bs，CH)，2.95-3.05(4H，bs，NCH2 x 2)，3.05-3.20(10H，bs，NCH2 x 4和CH2N3)，5.09(2H，bs，NH x 2) 
IR(薄膜)cm-1：-3350，2974，2932，2860，2097(强带N3)，1694，1520，1470，1418，1391，1366，1250，1167，1069，870，777。 
步骤(h)：(8-氨基-2-{[叔丁氧羰基--(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基]-甲基}-辛基)-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)-氨基甲酸叔丁酯(螯合物II)。
(8-叠氮基-2-{[叔丁氧羰基-(2-叔羰基氨基-乙基)-氨基]-甲基}-辛基)-(2-叔丁氧羰基氨基-乙基)氨基甲酸叔丁酯(820mg，1.20mmol)，10 ％钯碳(100mg)和甲醇(10ml)在30个大气压下用氢气在室温下处理16小时。固体通过硅藻土过滤被去除，滤饼用甲醇(50ml)冲洗。挥发物从滤出液中去除，留下粘性油，这是所期望的纯的状态的材料。(产量700mg，89％) 
13C NMR(CDCl3)：δ 26.4(CH2)，26.6(CH2)，28.4(CH3 x 12)，32.9(CH2 x 2)，36.8(宽，CH).39.2(NCH2 x 2)，41.8(H2NCH2)，46.9(宽NCH2 x 2)，49.8(宽，NCH2 x 2)，78.9(OC x 2)，79.7(OC x 2)，156.0(C＝O x 4). 
1H NMR(CDCl3)：δ 1.08(8H，bs，CH2 x 4)，1.23(18H，s，CH3 x 6)，1.27(20H，bs，CH3 x 6 and CH2)，1.77(1H，bs，CH)，2.40(2H，bs，NH2)，2.50(2H，t，J＝7Hz，CH2NH2)，2.97(4H，bm，NCH2 x 2)，3.00-3.16(8H，bm，NCH2 x 4)，5.21(1H，bs，NH)，5.30(1H，bs，NH). 
IR(薄膜)cm-1：-3360，1693，1520，1459，1418，1392，1367，1250，1170，1068，964，922，871，775，733. 
质谱(Fabs)m/e：计算出C33H66N5O8(M+H)660发现660。 
实施例4：成像剂I的合成
(a)前体1的合成
该肽使用Nova Biochem Rink MBHA树脂(0.58mmole/g or 0.72mmole/g)用ABI433A自动合成器组装的。该肽在0.1mmol规模或在0.25mmol规模上被合成。使用标准方案。 
偶合试剂HBTU/HOBt，碱基：DIEA，溶剂：NMP。 
HPLC移动相A)0.1％TFA/水B)0.1％TFA/乙腈。 
HPLC柱：分析型：Phenomenex，Gemini，250x4.6mm，5μm 
        制备型：Phenomenex，Gemini，250x21mm，10μm。 
肽树脂(130mg，0.05mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。TetraBoc-螯合物II NHS酯(148mg，0.2mmole；在实施例3中描述的Boc-保护的螯合物II)与PyAOP(104mg，0.2mmole)和NMM(40μl， 0.4mmole)在DMF(5ml)中混合3分钟。NMM(20μl，0.2mmol)被加入到树脂中，此后加入螯合物II/PyAOP/NMM溶液。树脂溶液混合物起泡过夜，阴性凯撒测试证实100％转换到缀合肽。分裂和冻干之后，粗肽用LC-MS(20-40％B20分钟)进行分析。分析结果证实表现出正确的分子量，但是仍有大比例的缺失肽(大概是亮氨酸)被观察到。RT：13.7分钟。 
粗肽混合物用20-35％B在40分钟梯度内纯化。几个部分被收集，分析和冻干。产量：白色绒毛状固体5.8mg。HPLC纯度：98％。ESI-MS：理论分子量：1940.40。获得的(M+H)2+/2：971.2 
(b)前体1的放射性标记
成像剂通过将20μl甲醇中的20μg前体加入瓶中形成，该瓶允许与下列试剂加热到室温： 
试剂           量(mg) 
SnCl2.2H2O     0.016 
MDP(H4)        0.025 
NaHCO3         4.5 
Na2CO3         0.6 
NaOAc.3H2O     0 
NaPABA         0.200 
1ml的DrytecTM的99mTc洗出液(0.7-1.6GBq)被加入到瓶中，该溶液允许在室温下放置20分钟，在用HPLC和ITLC进行分析。 
HPLC分析使用Phenomenex Gemini柱(C18150 x 4.6mm，5μm)，溶剂A＝0.06％氨水而溶剂B＝乙腈进行。在225和254nm处测量双重紫外线。 
HPLC梯度： 
流速 1.00ml/分钟 
0min          20％B 
20min         40％B 
22min         95％B 
26min         95％B 
27min         20％B
30min         20％B 
ITLC-ITLC SG带-移动相＝生理盐水或2-丁酮(MEK) 
实施例5：成像剂3的合成
(a)前体3的合成
该肽是按上述实施例4中成像剂1的方法组装。 
肽树脂(110mg，0.05mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。TetraBoc-螯合物II NHS酯(148mg，0.2mmole；在实施例3中描述的Boc-保护的螯合物II)与PyAOP(104mg，0.2mmole)和NMM(40μl，0.4mmole)在DMF(5ml)中混合3分钟。NMM(20μl，0.2mmol)被加入到树脂，此后螯合物II/PyAOP/NMM溶液被加入。树脂溶液混合物起泡过夜，阴性的凯撒测试证实100％转换到缀合肽。分裂和冻干之后，粗肽用LC-MS(2-12％B20分钟)进行分析。分析结果证实主峰表现出正确的分子量。RT：12分钟。 
粗肽混合物用2-10％B在40分钟梯度内纯化。三个部分被收集，分析和冻干而产生3mg纯肽。当肽溶解到纯水中初始HPLC分析证实由于出现不同负荷物质而产生两个基线分离峰。肽接着被溶解到0.1％TFA/水中，获得一个正确质量的峰。HPLC纯度：98％。理论分子量：1259.49。获得的(M+H)2+/2：630.6。 
(b)前体3的放射性标记
放射性标记按照成像剂1中所述方法执行，但是使用50μg前体，而HPLC如下： 
HPLC梯度： 
流速 1.00ml/分钟 
0min      5％B 
10min     40％B 
15min     40％B 
17min     10％B
20min      5％B。 
实施例6：成像剂8的合成
Figure G2007800192052D00441
该肽按照实施例4中成像剂1所述进行组装。 
肽树脂(133mg，0.05mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。TetraBoc-螯合物II-NHS酯(148mg，0.2mmole)与PyAOP(104mg，0.2mmole)溶解于DMF中，混合，NMM(40μl，0.4mmole)被加入到溶液并静置2分钟。NMM(20μl，0.2mmol)被加入到树脂中，此后螯合物II/PyAOP/NMM溶液被加入。树脂混合物用氮气起泡24小时，再由凯撒测试证实反应已完全。DMF/DCM冲洗后树脂在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中分裂2小时，并过滤，在乙二醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发并冻干。粗肽用LC-MS(10-30％ B20分钟)进行分析。分析结果表明出现一个主峰。粗肽混合物用制备型HPLC纯化(10-30％B40分钟)。两个部分被收集，分析和冻干。产量：8.7mg白色毛绒状固体。HPLC纯度：99％。ESI-MS：理论分子量1178.45。获得的(M+H)2+/2：590.0。 
(b)前体8的放射性标记
放射性标记按照实施例4成像剂1所述方法执行，HPLC如下： 
HPLC梯度 
0min      10％B 
20min     30％B 
21min     95％B 
26min     95％B 
27min     10％B 
30min     10％B。 
实施例7：成像剂10的合成
(a)前体10的合成
Figure G2007800192052D00451
该肽按实施例4中成像剂1所述进行组装。 
肽基树脂H-半胱氨酸(Acm)-缬氨酸-色氨酸(Boc)-亮氨酸-色氨酸(Boc)-谷氨酸(OtBu)-谷酰胺(Trt)-半胱氨酸(Acm)-R用2.5％水和2.5％TIS的溶液中在TFA(10ml)中处理2小时。树脂通过过滤去除，滤出液在真空下蒸发。加入二乙醚到残留物。得到的沉淀物用二乙醚冲洗并风干，获得84mg粗H-半胱氨酸(Acm)-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸(Acm)-NH2。 
粗H-半胱氨酸(Acm)-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸(Acm)-NH2(84mg)在氩气的覆盖下溶解于75％的乙酸水溶液(80ml)。1M盐酸(8ml)，苯甲醚(0.4ml)以及乙酸(26.6ml)中0.025M的I2顺序加入。1个半小时后，加入1M抗坏血酸以结束反应。绝大部分的溶剂在真空中蒸发。残余物用水/0.1％TFA稀释，产物用制备型HPLC纯化两次，获得17mg纯的半胱氨酸1-8；H-半胱氨酸-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸-NH2。 
半胱氨酸1-8；H-半胱氨酸-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸-NH2(17mg)，四-Boc-螯合物II NHS酯(17mg)，1-羟基-7-苯并三唑(HOAt)(3mg)以及氮-甲基吗啉(17μl)溶解于DMF(1mL)中，该反应混合物在室温下搅拌过夜。之后混合物用60％甲醇/水/0.1％TFA(7mL)稀释，产物用制备型HPLC纯化，得到16mg纯半胱氨酸1-8；四-Boc-螯合物II-半胱氨酸-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸-NH2。 
半胱氨酸1-8；四-Boc-螯合物II-半胱氨酸-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸-NH2用2.5％水和2.5％TIS溶液在TFA(10ml)中处理2小时。TFA在真空中被蒸发，残留物溶解于DMF(0.5ml)并用20％甲醇/水/0.1％TFA(5mL)稀释，产物通过制备型HPLC纯化(梯度：20-40％B，40分钟，其中A＝水/0.1％TFA而B＝甲醇/0.1％TFA，流速：10ml/分钟，柱：Phenomenex LunaTM5μ C18(2)250x 21.20mm，检测：紫外线214nm，产物保持时间24.7分钟)得到8.7mg 纯半胱氨酸1-8；螯合物II-半胱氨酸-缬氨酸-色氨酸-亮氨酸-色氨酸-谷氨酸-谷酰胺-半胱氨酸-NH2。产物用质谱进行特征描述(MH+计算出:1263.6，MH+发现：1263.8)。 
(b)前体10的放射性标记
放射性标记按照实施例4成像剂1所述方法执行，但是使用50μg前体。 
实施例8：成像剂29的合成
(a)前体29的合成
Figure G2007800192052D00461
该肽按前面实施例4的成像剂1所描述的组装。 
肽树脂(65mg，0.025mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。其后树脂被乙酰化，使用：醋酸酐(450μl)/DIEA(250μl)/HOBt在DMP(10ml)中2小时。阴性凯撒检测证实完全乙酰化。由于伴随而来的(3I)Y-OH的酯化作用，树脂用20％哌啶在DMF中处理2×20分钟。树脂接着用DMF/DCM彻底冲洗，并在RT上干燥。树脂在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，接着过滤，在二乙醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。粗肽通过LC-MS(20-40％B，20分钟)进行分析。该分析证实存在两个主峰。粗肽混合物用制备型HPLC纯化(20-35％B，40分钟)两个部分被收集，分析和冻干。产量：0.5mg白色固体。HPLC纯度：99％。ESI-MS：理论分子量：1146.1。获得的(M+H)2+/2：573.6。 
(b)前体29的放射性标记
10μl的(1mM，10-8moles)127I碘化钠在0.05M氢氧化钠中在最开始加入到200μl 0.2MpH为4的醋酸铵缓冲液中。该溶液接着被加入到127I碘化钠瓶中的约25μl 0.05M氢氧化钠(450MBq)(GE HealthcareCygne)的123I碘化钠溶液中。内容物被转移到硅化过的瓶中，加入10μl过乙酸(5mM，5 x 10-8moles)。加入前体(100μg在70μl甲醇，8.1x10-8moles)，瓶中的内容物用移液管混合。大约5分钟之后，反应混合物用HPLC进行分析。
HPLC分析用Phenomenex LunaTM(C18150 x 4.6mm，5μm)柱。溶剂A＝0.1％TFA/水和溶剂B＝0.1％TFA/水。在225和254nm测定双重紫外线。 
HPLC梯度 
流速 1ml/分钟 
0min      10％B 
20min     50％B 
22.5min   100％B 
27min     100％B 
27.5min   20％B 
31min     20％B 
ITLC-ITLC SG带-移动相＝生理盐水。 
实施例9：成像剂35的合成
(a)前体35的合成
Figure G2007800192052D00471
该肽铵前面实施例4的成像剂1描述的组装。 
在自动组装后肽树脂(150mg)在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，之后过滤，在乙二醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。粗肽用LC-MS(10-30％B　20分钟)进行分析。该分析证实存在两个主峰。粗肽混合物用10-30％B在40分钟梯度中纯化。两个部分被收集，分析和冻干。产量：1.5mg白色毛绒状固体。HPLC纯度：99％。ESI-MS：理论分子量：1104.06。获得的(M+H)2+/2：552.8。 
(b)前体35的放射性标记
放射性标记按照实施例8中成像剂29中描述的方法进行。 
实施例10：成像剂36的合成
(a)前体36的合成
Figure G2007800192052D00481
该肽按前面实施例4成像剂1中所述组装。 
肽树脂(130mg，0.05mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。其后树脂被乙酰化，使用：醋酸酐(450μl)/DIEA(250μl)/HOBt在DMP(10ml)中2小时。阴性凯撒检测证实完全乙酰化。由于伴随而来的(3I)Y-OH的酯化作用，树脂用20％哌啶在DMF中处理2×20分钟。树脂接着用DMF/DCM彻底冲洗，并在RT上干燥。树脂在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，接着过滤，在二乙醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。粗肽用LC-MS(20-40％B20分钟)分析。分析证实存在两个主峰。粗肽(17mg)在以下溶液中被氧化，水(24ml)乙腈(16ml)和DMSO(160μl)。用25％NH3将pH调至约为9。溶液在RT上搅拌过夜。LC-MS分析证实氧化作用已完成，用醋酸将pH调至4。该肽被冻干之后用制备型HPLC纯化(20-35％B 40分钟)。 
两个部分被收集和分析。产量：2.5mg白色毛绒状固体。HPLC纯度：99％。ESI-MS：理论分子量：1350.37。获得的(M+H)2+/2：675.6。 
(b)前体36的放射性标记
放射性标记按照实施例8中成像剂29中所述的方法进行，但是HPLC如下： 
流速 1ml/分钟 
0min      20％B 
20min     35％B 
22.5min   100％B 
27min     100％B 
27.5min   20％B 
31min     20％B。 
实施例11：成像剂37的合成
(a)前体37的合成
Figure G2007800192052D00491
该肽按照实施例4成像剂1中所述的组装。 
肽树脂(65mg，0.025mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。Fmoc-PEG4-COOH(100mg，0.2mmole)溶于DMF中，并加到PyAOP(100mg，0.2mmole)/DMF溶液中。加入NMM(40μl，0.4mmole)，溶液静置2分钟。NMM(20μl，0.2mmole)被加入到树脂中，之后加入偶合溶液。树脂混合物起泡过夜。凯撒测试证实反应未完全，偶合过程被重复两次来获得阴性的凯撒测试结果。Fmoc解保护在DMF中使用20％哌啶(2x7ml)1x10分钟和1x5分钟进行。Fmoc-(3I)Y-COOH(0.5mmole)用在DMF中的PyAOP(211mg，0.4mmole)/NMM(80μl，0.8mmole)3小时来偶合。凯撒测试证实反应已完全。 
在DMF冲洗之后，树脂被乙酰化，使用：醋酸酐(450μl)/DIEA(250μl)/HOBt在DMP(10ml)中2小时。阴性凯撒检测证实完全乙酰化。由于伴随而来的(3I)Y-OH的酯化作用，树脂用20％哌啶在DMF中处理2×20分钟。树脂接着用DMF/DCM彻底冲洗，并在RT干燥。树脂在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，接着过滤，在二乙醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。粗肽在LC-MS(20-40％B20分钟)中分析。，并证实一个大约90％纯度的主峰。由于肽不仅被用做冷标准，该粗肽不再进一步纯化。ESI-MS：理论分子量：1681.6获得的(M+H)2+/2：840.3。 
(b)前体37的放射性标记
放射性标记根据实施例8中的成像剂29中所述的方法进行，但HPLC梯度如下： 
0min      5％B 
20min     25％B 
22.5min   100％B 
27min     100％B 
27.5min   25％B 
31min     5％B
实施例12：成像剂38的合成
(a)前体38的合成
Figure G2007800192052D00501
该肽按前面实施例4成像剂1中所述的组装。 
肽树脂(80mg，0.03mmole)自动组装后在DMF中膨胀10分钟。溴乙酸(250mg，)与DCC(200mg，)混合，并加入DCM(10ml)。混合液在RT上搅拌1小时，之后过滤。DCM溶液用旋转蒸发仪蒸发，而DMF(10ml)被加到残留物中。之后加入DIEA(50μl，0.5mmole)，并加入DMF/DIEA溶液到树脂中。树脂混合物起泡90分钟，阴性的凯撒测试证实反应已经完全。DMF冲洗之后DMF中的His(trt)OtBu(100mg，0.3mmole)和DIEA(50μl，0.5mmole)被加入到树脂中。树脂混合物起泡过夜。树脂用DMF/DCM彻底冲洗，并置于RT过夜。树脂在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，接着过滤，在二乙醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。粗肽用LC-MS(20-40％B 20分钟)分析。分析证实存在两个主峰。粗肽混合物用制备型HPLC纯化(20-35％B 40分钟)一个部分被收集，分析和冻干。产量：2mg的白色固体。HPLC纯度：98％。ESI-MS：理论分子量：1917.3。获得的(M+H)2+/2：958.8。 
(b)前体38的放射性标记
从产生器上洗提下来的1ml99mTcO4 -加入到锝-羰基试剂盒(IsolinkTM，Mallinckrodt，Petten，荷兰)，5ml的顶部空间被去除，瓶被加热到100℃20分钟。该瓶冷却到室温，加入1ml 0.1M的PBS(pH7.4)，溶液的pH被测定，并用TLC分析(Merck硅胶-移动相＝99％甲醇/1％氯化氢)。 
200μl的99mTc(CO)3(H2O)3溶液被加到新硅烷化过的瓶中，以及50μl/50μg甲醇的前体和pH为6.5的200μl1M2-(氮-吗啉代)乙烷硫磺酸缓冲液。该溶液被加热至60℃60分钟，并用HPLC和ITLC(SG带-移动相＝生理盐水)进行分析。 
初始HPLC分析使用Phenomenex Gemini柱(C18 150 x 4.6mm， 5μm)，溶剂A＝0.1％TFA/水，溶剂B＝0.1％TFA/乙腈进行。254nm处测量紫外光。 
HPLC梯度： 
流速 1ml/分钟 
0min      20％B 
20min     40％B 
21min     95％B 
26min     95％B 
27min     20％B 
32min     20％B 
之后的HPLC分析使用Phenomenex Gemini C18柱150 x 2.1mm(5μm)-流速0.2ml/分钟来进行分析或者使用Phenomenex Gemini C18柱150x4.6mm(3μm)-流速1.0ml/分钟来进行纯化。 
溶剂A＝0.06％氨水，而溶剂B＝乙腈。在214nm处测量紫外光。 
HPLC梯度： 
0min      25％B 
20min     95％B 
26min     95％B 
27min     25％B 
30min     25％B。 
实施例13：成像剂39的合成
(a)前体39的合成
Figure G2007800192052D00511
该肽按前面实施例4成像剂1中所述组装。 
自动组装后该肽树脂(13mg，0.01mmole)被转移到微波瓶中，加入DMF(3ml)中的Boc-HYNIC-NHS酯(5mg，0.015mmole)/HOBt(2mg，0.015mmole)/DIEA(8μl，0.0.6mmole)。树脂混合物在RT上静置15分钟，之后再置于微波中60℃2小时。树脂在TFA/TIS/H2O(10:0.25:0.25)中裂解2小时，之后过滤，在乙二醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。 粗肽用LC-MS(20-40％B 20分钟)分析。分析证实存在两个主峰。粗肽混合物通过制备型HPLC进行纯化(20-35％B 40分钟)。一个部分被收集，分析和冻干。产量：1mg白色固体。HPLC纯度98％。ESI-MS：理论分子量：1857.2。获得的(M+H)2+/2：929.5。 
(b)前体39的放射性标记
50μl/50μg的前体(甲醇中)被加入到硅烷化的瓶中。0.3ml的三甲基甘氨酸(0.1％醋酸铵缓冲液中30mg，pH 5)被加入到瓶中，接着加入1ml0.1％醋酸铵缓冲(pH5)。0.5ml99mTcO4 -(活性0.7-4.4GBq)加入到瓶中，接着加入0.1ml氮气净化的SnCl2盐溶液(0.44mM dm-3)。这被维持室温反应30分钟。 
HPLC分析使用Phenomenex Gemini柱(C18 150 x 4.6mm，5μm)溶剂A＝10mM磷酸缓冲液pH6和溶剂B＝乙腈。在254nm处测量紫外光。 
HPLC梯度： 
流动 1ml/分钟 
0min      20％B 
20min     40％B 
21min     95％B 
26min     95％B 
27min     20％B 
32min     20％B 
ITLC SG带-移动相＝生理盐水 
实施例14：成像剂40的合成
(a)前体40的合成
Figure G2007800192052D00521
该肽按前面实施例4成像剂1中组装。 
自动组装后肽树脂(赖氨酸上有ivDde保护)(182mg，0.1mmole)在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，之后过滤，在乙二醚中粉 碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。螯合物I-戊二酸(23mg)，PyAOP(25mg)，NMM(6μl)溶解于DMF(3ml)中并加入到肽残留物中。溶液在RT上摇晃过夜。粗肽用LC-MS(25-70％B 20分钟)分析。分析证实存在两个主峰。粗肽混合物(赖氨酸被保护)用制备型HPLC纯化(30-60％B 40分钟)。三个部分被收集，分析和冻干。产量：4.3mg白色固体。HPLC纯度：98％。ivDde保护基团通过将该肽(4mg)溶解于DMF(8ml)中并加入水合肼(160μl)而去除。解保护通过HPLC监测，20分钟后反应完成。样品用10％乙腈/水稀释，并将pH调至4。之后肽通过HPLC进行纯化(20-40％B 40分钟)并冻干，产出2.5mg的白色绒毛状固体。HPLC纯度：98％。ESI-MS：理论分子量：2161.7。或得的是(M+H)2+/2：1082.2。 
(b)前体40的放射性标记 
放射性标记按照实施例4中成像剂1所述进行，室温下20分钟，HPLC梯度如下： 
流速 1.00ml/分钟 
0min      25％B 
20min     60％B 
21min     95％B 
27min     25％B 
32min     25％B 
实施例15：成像剂41的合成
(a)前体41的合成
该肽按前面实施例4成像剂1中所述组装。 
自动组装后肽树脂(70mg，0.03mmole)在DMF中膨胀。TetraBoc-螯合物II NHS酯(70mg，0.1mmole；实施例3中所述的Boc保护的螯合物II)与PyAOP(50mg，0.1mmole)和NMM(30μl，0.3mmole)在DMF(5ml)中混合3分钟。树脂中加入NMM(20μl，0.2mmol)，之后再加入螯合物II/PyAOP/NMM溶液。树脂溶液混合物起泡过夜，阴性凯撒测 试证实100％地转化为缀合肽。该肽在TFA/TIS/水(10:0.25:0.25)中裂解2小时，接着过滤，在乙二醚中粉碎，旋转蒸发仪蒸发和冻干。LC-MS(20-40％B 20分钟)证实有一主峰，粗肽用制备型HPLC(20-30％B 40分钟)纯化。一个部分被收集，冻干后产出1mg白色固体。HPLC纯度：98％。ESI-MS：理论分子量：2948.6。获得的(M+H)3+/3：983.4。 
(b)前体41的放射性标记
放射性标记按照实施例4成像剂1中所述进行，50μg前体，20分钟，室温，HPLC梯度如下： 
0min      20％B 
20min     40％B 
21min     95％B 
26min     95％B 
27min     20％B 
32min     20％B 
实施例16：成像剂42的合成
(a)前体42的合成
该肽按实施例4成像剂1中所述组装。 
该肽基树脂(0.05mmol)用2.5％水和2.5％三异丙基硅烷(TIS)的TFA(5ml)溶液处理2小时。树脂通过过滤去除，滤出液在真空中蒸发。残留物中加入二乙醚。得到的沉淀用醚冲洗并风干，得到95mg粗H-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2。 
H-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2(24mg)，螯合物I-Glut活化酯(62mg)，1-羟基-7-叠氮苯并三唑(HOAt)(7mg)以及对称三甲 基吡啶(66μL)被溶解到1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(1ml)中，该反应混合物37℃搅拌过夜。该反应混合物用NMP(0.5ml)，水/0.1％TFA(1ml)和乙腈/0.1％TFA(1ml)稀释，用制备型HPLC纯化产物，得到5mg纯螯合物I-Glut-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2。 
螯合物I-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2(5mg)用2％一水合肼/NMP(1ml)处理30分钟。加入10％乙腈/水/0.1％TFA(4ml)到反应混合物中，产物用制备型HPLC纯化(梯度：10-40％ B 40分钟其中A＝水/0.1％TFA而B＝乙腈/0.1％TFA，流速：10mL/分钟，柱：Phenomenex LunaTM 5μ C18(2)250 x 21.20mm，检测：UV 214nm，产物保留时间：35.0分钟)，得到2.3mg纯产物。纯的产物用分析型HPLC进行分析(梯度：10-40％B5分钟其中A＝水/0.1％ TFA而B＝乙腈/0.1％TFA，流速：0.3mL/分钟，柱：Phenomenex LunaTM 3μ C18(2)20 x 2mm，检测：UV 214nm，产物保持时间：4.02分钟)。更多产物特征用质谱进行分析(MH2 2+计算出：1226.3，MH2 2+发现：1226.3)。 
(b)前体42的放射性标记
放射性标记按实施例4成像剂1中所述进行，20分钟，室温，HPLC梯度如下： 
流速1.00ml/分钟 
0min      25％B 
20min     60％B 
21min     95％B 
27min     25％B 
32min     25％B 
实施例17：成像剂43的合成
(a)前体43的合成
Figure G2007800192052D00561
该肽按前面实施例4成像剂1中所述的组装。 
该肽基树脂(0.05mmol)用2.5％水和2.5％TIS的TFA(5ml)溶液处理2小时。树脂通过过滤去除，滤出液在真空中蒸发。残留物中加入二乙醚。得到的沉淀用醚冲洗并风干，得到77mg粗氢-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-氮-甲基-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2。 
氢-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-氮-甲基-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2(24mg)，螯合物I-Glut活化酯(62mg)，1-羟基-7-叠氮苯并三唑(HOAt)(7mg)以及对称三甲基吡啶(66μL)被溶解到1-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)(1ml)中，该反应混合物37℃搅拌过夜。该反应混合物用NMP(0.5ml)，水/0.1％TFA(1ml)和乙腈/0.1％TFA(1ml)稀释，用制备型HPLC纯化产物，得到6.5mg螯合物I-Glut-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-氮-甲基-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2。 
螯合物I-丙氨酸-天冬酰胺-丙氨酸-丙氨酸-亮氨酸-赖氨酸(ivDde)-丙氨酸-甘氨酸-谷氨酸-亮氨酸-酪氨酸-氮-甲基-赖氨酸(ivDde)-2-氨基丁酸-异亮氨酸-亮氨酸-酪氨酸-PEG(4)-二羟乙酰基-NH2(6.5mg)用2％一水合肼/NMP(1ml)处理35分钟。加入10％乙腈/水/0.1％TFA(8ml)到反应混合物中，产物用制备型HPLC纯化(梯度：10-40％B 40分钟其中A＝水/0.1％TFA而B＝乙腈/0.1％TFA，流速：10mL/分钟，柱：Phenomenex LunaTM 5μ C18(2)250x21.20mm，检测：UV 214nm，产物保留时间：31.0分钟)，得到5.3mg纯产物。纯的产物用分析型HPLC进行分析(梯度：10-40％B 5分钟其中A＝水/0.1％TFA而B＝乙腈/0.1％TFA，流速：0.3mL/分钟，柱：Phenomenex LunaTM 3μ C18(2)20x2mm，检测：UV 214nm，产物保持时间：3.52分钟)。更多产物 特征用质谱进行分析(MH2 2+计算出：1233.3，MH2 2+发现：1233.3)。 
(b)前体43的放射性标记
放射性标记按实施例4成像剂1中所述进行，20分钟，室温，HPLC梯度如下： 
流速 1.00ml/分钟 
0min      20％B 
20min     55％B 
21min     95％B 
27min     20％B 
32min     20％B 
实施例18：成像剂1与1型胶原蛋白的体外结合
带有50μL或100μL 0.1mg/ml1型胶原蛋白的Maxisorp板4℃培养过夜。所有的溶液均从孔中用移液管去除。孔用200μL PBS冲洗两次，之后带着150μL含有0.1％BSA的PBS在室温下培养30分钟。孔用200μL PBS冲洗五次，每个孔中再加入90μL PBS。四重复10μL纯(连续用PBS稀释2倍)成像剂1加入孔中。板密封后37℃培养1小时。 
孔用冰冷却的PBS(200μL)冲洗七次；之后孔被转移到玻璃瓶中，并用Wallac计数器对每个样本60秒计数来计算(测量)99mTc活性。 
下面的图1展示了一次实验中成像剂1与I型胶原蛋白涂覆的孔的结合。曲线(黑色线条)以GraphPad PRISM为模型用非线性回归一处结合双曲线拟合，用拟合数据(r2＝0.9992)得出Bmax＝1068 attomoles，以及Kd＝194.2nM。
成像剂1与I型胶原蛋白涂覆的孔的结合 
Figure G2007800192052D00581
成像剂1浓度(nM) 
实施例19：成像剂1在体内的生物分布
对18只雄性SD大鼠(180g-200g)进行手术。每只动物的腹部被剃光并涂上聚乙烯吡咯酮碘(betadine)溶液，接着5mg/kg的卡布洛芬(Carprofen)s.c和5mg/kg的丁丙诺啡s.c。异氟醚麻醉下实施中线刨腹手术，定位胆管。胆管进行双结扎(n＝9)。第一次结扎在肝管接合处之间，第二结扎在胰管入口上方。缝合前，施用约2-3ml盐水于腹膜上。缝合筋膜和皮肤，动物被执行2mg/kg的metaclopromides.c，5mg/kg蒽诺沙星(Baytril)s.c，以及约2ml生理盐水s.c。给予卡布洛芬(5mg/kg)以备后几日之需。对照动物进行假(sham)手术，其胆管被处理，缝合线在胆管下经过(n＝9)。动物被密切监视15天。手术后第16天在异氟醚麻醉下动物通过尾部静脉注射0.1ml成像剂1i.v.(～1MBq)。在注射后5，60和120分钟切开(DBL动物)器官。5，60和120分钟切开(对照动物)器官。 
下面的表格显示在研究的各个时间点上注入剂量的百分数
Figure G2007800192052D00591
实施例20：肝纤维化的胆管连接模型
胆管连接模型根据前面所提及的文献(例如Biecker et al.2005 J.Pharm.Exp.Ther.313(3)952-961；Martinez-Prieto et al.2000 ClinicalScience 98(5)611-617；Ubeda et al.1994 Hepatology 19(6)1431-1436)进行改进。 
1.雄性SD大鼠(180-200g的腹部被剃光并涂上聚乙烯吡咯酮碘溶液，接着5mg/kg的卡布洛芬(Carprofen)s.c和5mg/kg的丁丙诺啡皮下(s.c.)。 
2.异氟醚麻醉下实施中线刨腹手术，定位胆管。 
3.胆管进行双结扎(n＝9)。第一次结扎在肝管接合处之间，第二结扎在胰管入口上方。 
4.缝合前，施用约2-3ml生理盐水于腹膜上。 
5.缝合筋膜和皮肤，动物被执行2mg/kg的metaclopromide s.c，5mg/kg的蒽诺沙星(Baytril)s.c，以及约2ml等渗盐水s.c。
6.给予卡布洛芬(5mg/kg)以备后几日之需。 
7.对照动物进行假手术，其胆管被处理，缝合线在胆管下经过。 
8.在必要时间段内对动物进行密切监视。 
9.在生物分布日，通过异氟醚麻醉的动物通过尾部静脉静脉(i.v.)注射0.3ml放射性标记化合物(～2MBq)。 
10.在注射后5，60和120分钟切开(DBL动物)器官。 
11.5，60和120分钟切开(对照动物)器官。 
12.Wallac计数器确定每个器官每克组织的放射性。

Claims (7)

1.一种成像剂，其包含胶原蛋白结合肽(CBP)和成像部分，其中所述CBP是ANAALKAGELYKCILY-NH2，并且其中所述成像部分是通过螯合剂与CBP的N或C端缀合的99mTc，其中所述螯合剂选自：
(i)二氨基二肟；
(ii)具有三酰胺硫醇供电子组的N3S配位体；
(iii)具有二酰胺二硫醇供电子组的N2S2配位体；
(iv)N4配位体，其是具有四胺、氨基三胺或联氨二胺供电子组的开链的或大环配位体；
(v)具有二胺二酚供电子组的N202配位体；
(vi)α-组氨酸+Tc(CO)3。
2.用于制备权利要求1所述成像剂的前体，其包含权利要求1所述的CBP和权利要求1所述的螯合剂。
3.一种药物组合物，其包含权利要求1所述的成像剂，以及生物相容性载体，为适于给人施用的形式。
4.一种用于制备权利要求3所述的药物组合物的试剂盒，其包含权利要求2所述的前体。
5.权利要求1所述的成像剂在制备用于对患有形成胶原蛋白的病症的受试者进行体内诊断或成像的权利要求3所述的药物组合物中的应用。
6.权利要求1所述的成像剂在制备用于形成胶原蛋白的病症的体内成像的药物中的用途。
7.权利要求1所述的成像剂在制备用于监视在人体或动物体内使用药物对抗形成胶原蛋白的病症的治疗效果的权利要求3所述的药物组合物中的应用。
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