ES2844586T3 - Inhibidores del antígeno prostático específico de membrana (PSMA) etiquetados con 18F y su uso como agentes de obtención de imágenes para el cáncer de próstata - Google Patents

Abstract

Un compuesto de Fórmula I: **(Ver fórmula)** i, j 0, 1 m 1 - 5 n 0-3 R H, CH3 AS Aminoácido natural o artificial, Z: -CO2H, -SO2H, -SO3H, -SO4H, -PO2H, -PO3H, -PO4H2 X: Naftilo, Fenilo, Bifenilo, Indolilo (=2,3-benzopirrolilo), Benzotiazolilo, Quinoilo Y: sal de Arilo, Alquilarilo, Ciclopentilo, Ciclohexilo, Cicloheptilo, N-Piperidilo y piperidilo N-metilada Etiqueta de 18F: **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo **(Ver fórmula)** R1: Cualquier enlazador de alquilo, arilo o arilalquilo especialmente de metilo, 2-etilo, 3-propilo, 2-,3-,4-fenilo, 2-,3-,4-fenilmetilo, 2-,3-,4-fenilpropilo R2: Cualquier grupo alquilo o arilo especialmente metil isopropilo, terc-butilo, fenilo o 1-naftilo.

Description

DESCRIPCIÓN

Inhibidores del antígeno prostético específico de membrana (PSMA) etiquetados con 18F y su uso como agentes de obtención de imágenes para el cáncer de próstata

La presente invención se refiere, en general, al campo de los radiofármacos y a su uso en medicina nuclear como radiomarcadores y agentes de obtención de imágenes y para las diversas patologías del cáncer de próstata.

Antecedentes de la invención

El cáncer de próstata (CaP) es el cáncer principal en la población estadounidense y europea. Al menos 1-2 millones de hombres en el hemisferio occidental padecen cáncer de próstata y se estima que la enfermedad afectará a uno de cada seis hombres con edades comprendidas entre 55 y 85 años. Cada año se diagnostican más de 300.000 nuevos casos de cáncer de próstata en los Estados Unidos. La mortalidad por esta enfermedad es la segunda después del cáncer de pulmón. Actualmente los métodos anatómicos, tales como la tomografía computarizada (TC), las imágenes de resonancia magnética (RM) y el ultrasonido, predominan para la obtención de imágenes clínicas del cáncer de próstata. Se estima que actualmente se gastan 2 mil millones de dólares en todo el mundo en cirugía, radiación, farmacoterapia y tratamientos mínimamente invasivos. Sin embargo, actualmente no existe una terapia eficaz para el cáncer de próstata recurrente, metastásico e independiente de andrógenos.

En la actualidad se están estudiando clínicamente diversos agentes experimentales de obtención de imágenes para el CaP de bajo peso molecular, incluidos análogos de colina radiomarcados ([11C]Colina, [18F]FECh, [18F] FMC, [18F]fluorodihidrotestosterona ([18F]FDHT), ácido anti-1-amino-3-[18F]fluorociclobutil-1-carboxílico (anti[18 F]F-FACBC, [11C]acetato y 1-(2-desoxi-2-[18F]flouro-L-arabinofuranosil)-5-metiluracil (-[18F]FMAU) (Scher, B.; et al. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2007, 34, 45-53; Rinnab, L.; et al. BJU Int 2007, 100, 786,793; Reske, S.N.; et al. J Nucl Med 2006, 47, 1249-1254; Zophel, K.; Kotzerke, J. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2004, 31, 756-759; Vees, H.; et al. BJU Int 2007, 99, 1415-1420; Larson, S. M.; et al. J Nucl Med 2004, 45, 366-373; Schuster, D.M.; et al. J Nucl Med 2007, 48, 56-63; Tehrani, O.S.; et al. J Nucl Med 2007, 48, 1436-1441). Cada uno de ellos interviene mediante un mecanismo diferente y tiene determinadas ventajas, por ejemplo, excreción urinaria baja de [11C]colina, y desventajas, tales como la corta semivida física de los radionúclidos emisores de positrones.

Es bien sabido que los tumores pueden expresar proteínas únicas asociadas con su fenotipo maligno o pueden sobreexpresar proteínas constituyentes normales en mayor número que las células normales. La expresión de distintas proteínas en la superficie de las células tumorales ofrece la oportunidad de diagnosticar y caracterizar la enfermedad explorando la identidad fenotípica y la composición bioquímica y actividad del tumor. Las moléculas radiactivas que se unen selectivamente a proteínas específicas de la superficie de las células tumorales proporcionan una vía atractiva para la obtención de imágenes y el tratamiento de tumores en condiciones no invasivas. Una nueva y prometedora serie de agentes de obtención de imágenes de bajo peso molecular se dirige al antígeno prostático específico de membrana (PSMA, siglas del inglés prostate-specific membrane antigen) (Mease RC et al. Clin Cancer Res. 2008, 14, 3036-3043; Foss, C.A.; et al. Clin Cancer Res 2005, 11, 4022-4028; Pomper, M. G.; et al. Mol Imaging 2002, 1, 96­ 101; Zhou, J.; et. al. Nat Rev Drug Discov 2005, 4, 1015-1026; documento WO 2013/022797).

El PSMA es una glicoproteína transmembrana de tipo II de 750 aminoácidos, que tiene una expresión abundante y restringida en la superficie del CaP, particularmente, en enfermedad metastásica y avanzada independiente de andrógenos (Schulke, N.; et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2003, 100, 12590-12595). Esto último es importante ya que con el paso del tiempo casi todos los CaP se vuelven independientes de andrógenos. El PSMA posee los criterios de una diana prometedora para la terapia, es decir, expresión abundante y restringida (en la próstata) en todos los estadios de la enfermedad, presentación en la superficie celular pero sin diseminarse en la circulación y asociación con actividad enzimática o de señalización (Schulke, N.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 2003, 100, 12590-12595). El gen del PSMA se encuentra en el brazo corto del cromosoma 11 y funciona tanto como una folato hidrolasa como una neuropeptidasa. Tiene una función neuropeptidasa que es equivalente a la glutamato carboxipeptidasa II (GCPII), que se conoce como "PSMA cerebral" y que puede modular la transmisión glutamatérgica escindiendo la N-acetilaspartilglutamato (NAAG) en N-acetilaspartato (NAA) y glutamato (Nan, F.; et al. J Med Chem 2000, 43, 772­ 774). Hay hasta 106 moléculas de PSMA por célula cancerosa, sugiriendo además que es una diana ideal para la obtención de imágenes y la terapia con técnicas basadas en radionúclidos (Tasch, J.; et al. Crit Rev Immunol 2001, 21, 249-261).

El radioinmunoconjugado del anticuerpo monoclonal (Acm) anti-PSMA, 7E11, conocido como exploración PROSTASCINT®, se está usando actualmente para diagnosticar la metástasis y la recidiva del cáncer de próstata. Sin embargo, este agente tiende a producir imágenes que son difíciles de interpretar (Lange, P.H. PROSTASCINT scan for staging prostate cancer. Urology 2001, 57, 402-406; Haseman, M.K.; et al. Cancer Biother Radiopharm 2000, 15, 131-140; Rosenthal, S.A.; et al. Tech Urol 2001, 7, 27-37). Más recientemente, se han desarrollado anticuerpos monoclonales que se unen al dominio extracelular del PSMA y se han radiomarcado y se ha demostrado que se acumulan en modelos de tumores de próstata positivos al PSMA en animales. Sin embargo, el diagnóstico y la detección de tumores usando anticuerpos monoclonales se han visto limitados por la baja permeabilidad del anticuerpo monoclonal en tumores sólidos.

El direccionamiento selectivo de las células cancerosas con radiofármacos con fines terapéuticos o de obtención de imágenes es un reto. Se sabe que diversos radionúclidos son útiles para la obtención de radioimágenes o la radioterapia del cáncer, incluyendo 11C, 18F, 111In, 90Y, 68Ga, 177Lu, 99mTc, 123I y 131I. Recientemente, se ha demostrado que algunos compuestos que contienen un elemento de reconocimiento de glutamato-urea-glutamato (GUG) o glutamato-urea-lisina (GUL) ligado a un conjugado de radionúclido-ligando, presentan alta afinidad por el PSMA. Diversos compuestos etiquetados con 18F, que muestran interacción con el PSMA, y que son adecuados para la detección del cáncer de próstata, se muestran en el documento EP 3011976 (solicitud EP N.° 14 003 570.0). Sin embargo, estos compuestos, muestran altas propiedades lipófilas que los hacen, hasta cierto punto, difíciles de manipular y administrar.

Se necesitan nuevos agentes que permitan una visualización rápida del cáncer de próstata. Por tanto, el objeto de la presente invención es desarrollar ligandos que interaccionen con el PSMA y que lleven radionúclidos apropiados que proporcionen una opción de direccionamiento nueva y prometedora para la detección, el tratamiento y la gestión del cáncer de próstata.

Sumario de la invención

La solución de dicho objeto se consigue proporcionando las realizaciones caracterizadas en las reivindicaciones. Los inventores descubrieron nuevos compuestos que son radiofármacos útiles y su uso en medicina nuclear como radiomarcadores y agentes de obtención de imágenes y para diversas patologías del cáncer de próstata.

Los nuevos agentes de obtención de imágenes con modificaciones estructurales en la región enlazadora, han mejorado la farmacocinética y las propiedades de direccionamiento tumoral. El farmacóforo presenta tres grupos carboxílicos capaces de interactuar con las respectivas cadenas laterales del PSMA y un oxígeno como parte de la complejación del zinc en el centro activo. Además de estas interacciones obligatorias, los inventores pudieron optimizar las interacciones lipófilas en la región enlazadora en comparación con los compuestos descritos en el documento EP 30119763. Asimismo, los inventores añadieron algunos bloques de construcción hidrófilos al enlazador para mejorar la farmacocinética.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: Marcaje de macromoléculas con 18F

Figura 2: 18F-Fluoración mediante grupos prostéticos

Fig. 3: Grupos prostéticos etiquetados con 18F para péptidos

Figura 4: Grupos prostéticos marcados con 18F usando "Química Clic"

Fig. 5: Formación de sensores de [18F]ariltrifluoroboronatos y fluoruro

Fig. 6: Complejos de 18F-Fluoruros

Figura 7: Marcaje de péptidos RGD con 18F

Fig. 8: Distribución orgánica de [18F]PSMA-1007 en ratones LNCaP positivos a PSMA (normales y bloqueados) y en ratones PC3 negativos a Ps Ma frente a [18F]PSMA-1009 ([18F]DCFPyL) en ratones LNCaP positivos a PSMA Fig. 9: Distribución orgánica de [18F]PSMA-1007 en ratones LNCaP positivos a PSMA (no bloqueados y bloqueados) frente a [18F]PSMA1003 en ratones LNCaP positivos a PSMA (no bloqueados)

Fig. 10: PMI (proyecciones de máxima intensidad) de [18F]PSMA-1007 en un ratón LNCaP positivo a PSMA 120­ 140 min p.i.

Fig. 11: Curva de tiempo frente a actividad de [18F]PSMA-1007 en un ratón LNCaP positivo a PSMA, incluidos los valores de SUV (por sus siglas en inglés Standarized Uptake Value, valor de captación estándar) 120-140 min p.i. Fig. 12: Estructura de PSMA-1003

Fig. 13: Estructura de PSMA-1009

Fig.14: PMI de [18F]PSMA-1007 en un voluntario sano

Fig. 15: Curvas de tiempo frente a actividad en sangre (negro) y suero (gris) expresadas como porcentaje de dosis inyectada en un voluntario sano

Fig.16: Curvas de tiempo frente a actividad de órganos normales con volumen de interés delineable por PET en un voluntario sano

Fig. 17: Distribución orgánica de [18F]PSMA-1007 en diez pacientes que padecen cáncer de próstata expresada como SUVmáx

Fig. 18: Proporciones de tumores con respecto al fondo de [18F]PSMA-1007 en diez pacientes que padecen cáncer de próstata calculadas a partir de los valores SUVmáx respectivos

Fig. 19: PMI de un paciente de 77 años con cáncer de próstata (PSA 40 ng/ml) explorado con [18F]PSMA-1007 1 y 3 h p.i. que muestra una gran masa tumoral en la zona media y apical de la próstata y diversas metástasis en los ganglios linfáticos. Fuera de la región pélvica no se encontró metástasis

Fig. 20: PMI de un paciente de 72 años (PSA 15 ng/ml) diagnosticado de cáncer de próstata con una puntuación de Gleason de 9 (5+4) explorado con [18F]PSMA-1007 1 y 3 h p.i.. El paciente presenta una gran masa tumoral en toda la glándula prostática con infiltración en las vesículas seminales del lado izquierdo y diversos ganglios linfáticos en la región pélvica. Se localizan dos ganglios linfáticos metastásicos fuera de la región pélvica, ambos paraaórticos a nivel L3/4 y L5.

Fig. 21: Escáner de TEP (tomografía de emisión positrónica)/TC (tomografía computarizada) transaxial de un paciente (a, b) e histopatología correspondiente de la muestra de prostatectomía posterior; tinción con H&E (c); Inmunotinción de PSMA con contornos tumorales trazados delimitados por la línea discontinua (d).

Descripción detallada de la invención

La presente invención se refiere a radiofármacos y a su uso en medicina nuclear como radiomarcadores y agentes de obtención de imágenes para las diversas patologías del cáncer de próstata.

Por tanto, la presente invención se refiere a compuestos que están representados por la Fórmula general I

Fórmula I

con:

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

Si no se indica de otra manera, en la presente invención el término "alquilo" por sí mismo o como parte de otra molécula, significa un radical hidrocarbonado de cadena lineal o ramificada, o cíclico, o una combinación de los mismos, que puede estar completamente saturado, monoinsaturado o poliinsaturado y que puede incluir radicales divalentes y multivalentes, El resto "alquilo" tiene preferiblemente de 1 a 10 átomos de carbono (C¹ a C¹⁰) y puede estar sustituido o no sustituido (por ejemplo, con halógeno). Los restos alquilo preferidos son metilo, etilo, n-propilo, iso-propilo, n-butilo, terc-butilo, n-pentilo, n-hexilo, n-hexilo o n-octilo o similares. Lo mismo se aplica también a los correspondientes compuestos de cicloalquilo que tienen preferiblemente de 3 a 10 átomos de carbono, por ejemplo, cicloproilo, ciclobutilo, ciclopentilo, ciclohexilo, cicloheptilo, ciclooctilo, etc., Un grupo alquilo insaturado es uno que tiene uno o más dobles enlaces o triples enlaces. Los ejemplos de grupos alquilo insaturados incluyen, pero sin limitación, vinilo, 2-propenilo, crotilo, 2-isopentenilo, 2-(butadienilo), 2,4-pentadienilo, 3-(1,4-pentadienilo), etinilo, 1- y 3- propinilo, 3-butinilo, y los homólogos e isómeros superiores. El término "alquilo", a menos que se indique lo contrario, también pretende incluir aquellos derivados de alquilo, tales como "heteroalquilo", "haloalquilo" y "homoalquilo".

El término "arilo", como se usa en el presente documento, se refiere a una estructura de anillo cerrado que tiene al menos un anillo que tiene un sistema de electrones pi conjugado e incluye grupos tanto arilo carbocíclico como arilo heterocíclico (o "heteroarilo" o "heteroaromático"). El grupo aromático carbocíclico o heterocíclico puede contener de 5 a 20 átomos en el anillo. El término incluye anillos monocíclicos ligados covalentemente o grupos policíclicos de anillos condensados (es decir, anillos que comparten pares adyacentes de átomos de carbono). Un grupo aromático puede estar sustituido o no sustituido. Como ejemplos no limitantes de grupos "aromático" o "arilo", se incluyen fenilo, 1- naftilo, 2-naftilo, 2-bifenilo, 3-bifenilo, 4-bifenilo, antracenilo y fenantracenilo. Los sustituyentes de cada uno de los sistemas de anillo arilo y heteroarilo indicados anteriormente, se seleccionan del grupo de sustituyentes aceptables (por ejemplo, alquilo, carbonilo, carboxilo o halógeno) descritos en este documento. Cuando el término "arilo" se usa en combinación con otros términos (incluyendo, pero sin limitación, ariloxi, ariltioxi, aralquilo), incluye anillos de arilo y heteroarilo. Por tanto, el término "aralquilo" o "alcarilo" pretende incluir aquellos radicales en los que un grupo arilo está conectado a un grupo alquilo (incluyendo, pero sin limitación, bencilo, fenetilo, piridilmetilo y similares), incluidos aquellos grupos alquilo en los que un átomo de carbono (incluyendo, pero sin limitación, un grupo metileno) se ha reemplazado por un heteroátomo, solo como ejemplo, por un átomo de oxígeno. Como ejemplos de dichos grupo arilo incluyen, pero sin limitación, fenoximetilo, 2-piridiloximetilo, 3-(1-naftiloxi)propilo, y similares.

"Heteroarilo" se refiere a grupos arilo que contienen al menos un heteroátomo seleccionado de N, 0 y S; en donde los átomos de nitrógeno y azufre pueden estar opcionalmente oxidados, y el/los átomo(s) de nitrógeno puede(n) estar opcionalmente cuaternizado(s). Los grupos heteroarilo pueden estar sustituidos o no sustituidos. Un grupo heteroarilo puede estar conectado al resto de la molécula a través de un heteroátomo. Como ejemplos no limitantes de grupos adecuados se incluyen 1 -pirrolilo, 2-pirrolilo, 3-pirrolilo, 3-pirazolilo, 2-imidazolilo, 4-imidazolilo, pirazinilo, 2-oxazolilo, 4- oxazolilo, 2-fenil-4-oxazolilo, 5-oxazolilo, 3-isoxazolilo, 4-isoxazolilo, 5-isoxazolilo, 2-tiazolilo, 4-tiazolilo, 5-tiazolilo, 2- furilo, 3-furilo, 2-tienilo, 3-tienilo, 2-piridilo, 3-piridilo, 4-piridilo, 2-pirimidilo, 4-pirimidilo, 4-benzotiazolilo, 5-benzotiazolilo, 6-benzotiazolilo, 7-benzotiazolilo, purinilo, 2-benzoimidazolilo, 4-indolilo, 5-indolilo, 6-indolilo, 7-indolilo, 1-isoquinolilo, 5-isoquinolilo, 2-quinoxalinilo, 5-quinoxalinilo, 2-quinolilo, 3-quinolilo, 4-quinolilo, 5-quinolilo, 6-quinolilo, 7-quinolilo u 8-quinolilo.

El término "aminoácido" se refiere a aminoácidos de origen natural y no natural, así como a análogos de aminoácidos y miméticos de aminoácidos que actúan de manera similar a la de los aminoácidos de origen natural. Los aminoácidos de origen natural son los 20 aminoácidos comunes en su forma D o L (alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina, serina, treonina, triptófano, tirosina y valina) y pirolisina y selenocisteína. Análogos de aminoácidos se refiere a compuestos que tienen la misma estructura química básica que la de un aminoácido de origen natural, solo como ejemplo, un carbono extra que está unido a un hidrógeno, un grupo carboxilo, un grupo amino y un grupo R. Dichos análogos pueden tener grupos R modificados (como ejemplo, norleucina) o pueden tener cadenas principales peptídicas modificadas, pero siguen conservando la misma estructura química básica que la un aminoácido de origen natural. Como ejemplos no limitantes de análogos de aminoácidos se incluyen homoserina, norleucina, sulfóxido de metionina, metil sulfonio de metionina. En el presente documento, los aminoácidos pueden denominarse por su nombre, por sus símbolos de tres letras comúnmente conocidos o por los símbolos de una letra recomendados por la Comisión de Nomenclatura Bioquímica IUPAC-IUB. Un "aminoácido no natural" se refiere a un aminoácido que no es uno de los 20 aminoácidos comunes o pirolisina o selenocisteína. Otros términos que pueden usarse como sinónimo de la expresión "aminoácido no natural" son "aminoácido no codificado naturalmente". "aminoácido no natural", "aminoácido de origen no natural" o "aminoácido artificial". La expresión "aminoácido no natural" incluye, pero sin limitación, aminoácidos que se producen por modificación de un aminoácido codificado naturalmente en su cadena principal o cadenas laterales. En algunas realizaciones, el aminoácido no natural comprende un grupo carbonilo, un grupo acetilo, un grupo aminooxi, un grupo hidrazina, un grupo hidrazida, un grupo semicarbazida, un grupo azida o un grupo alquino. En una realización preferida, el aminoácido no natural tiene la fórmula

y R'= H, CO²H, CH²CO²H, C²H⁴CO²H, CH(CO²H)², CH(CH²CO²H)², CH(CO²H)(CH²CO²H), CH²CH(CO²H)², SO³H; o=1-3; R = H, CH³

Se prefieren aquellos aminoácidos que aportan un elemento hidrófilo al compuesto de Fórmula I.

Algunos de los restos de este documento (incluidos, pero sin limitación, aminoácidos no naturales), puede existir en varias formas tautoméricas. Todas estas formas tautoméricas se consideran como parte de los compuestos descritos en este documento. Además, por ejemplo, todas las formas enol-ceto de cualquiera de los compuestos del presente documento se consideran como parte de las composiciones descritas en este documento.

El enlazador B, es decir, los aminoácidos naturales y/o los aminoácidos no naturales, se puede unir dentro de la molécula mediante un enlace peptídico o amida. Sin embargo, en el caso de aminoácidos ácidos (por ejemplo, ácido glutámico, ácido aspártico), la unión puede ser alternativamente a través de la posición a, p o y.

Aunque se prefiere que el Grupo Z sea -CO²H, este puede reemplazarse fácilmente por reemplazos biostéricos tales como -SO²H, -SO³H, -SO⁴H, -PO²H, -PO³H, -PO⁴H², véase, por ejemplo, "The Practice of Medicinal Chemistry" (Academic Press Nueva York, 1996), página 203.

Dentro del significado de la invención, en la definición de restos, todos los restos se consideran combinables a menos que se indique lo contrario. Todos los subgrupos concebibles de los mismos se consideran divulgados.

Las etiquetas de ¹⁸F de la Tabla anterior que comprenden triazoles, existen en dos formas isoméricas que pertenecen a la invención y que se ilustran mediante las fórmulas dadas.

Por tanto, las moléculas preferidas de la presente invención constan de tres componentes principales (Esquema 1): el motivo de unión al PSMA hidrófilo (Glu-Urea-Lys = Glu-NH-CO-NH-Lys), dos enlazadores variables (enlazador A y enlazador B) y la etiqueta de ¹⁸F.

Esquema 1: Estructura de los compuestos preferidos de la presente invención

A continuación se muestran algunos enlazadores lipófilos preferidos (enlazador A), donde R = Glu-urea-Lys (motivo de unión al PSMA) y R'= (Enlazador B)m - C-Etiqueta 8F] con m=1-5,

(En forma de cualquier sal farmacéuticamente aceptable)

(2-Nal)-(AcAMP)

A continuación se muestran los diferentes bloques de construcción preferidos para enlazadores hidrófilos (enlazador B), ilustrándose su conectividad preferida en función de los respectivos aminoácidos individuales (m = 1 en la estructura genérica)

Los enlazadores hidrófilos preferidos también pueden formarse a partir de dos o más bloques de construcción (m = 2 - 5 en la fórmula genérica), preferiblemente seleccionados de los bloques de construcción ácidos enumerados anteriormente. Se prefieren 1-3 bloques de construcción.

En la siguiente tabla se enumeran diversas estructuras preferidas:

A continuación, se muestran las estructuras de los compuestos 1-18 preferidos ilustrados en la tabla anterior:

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Como puede entender un experto en la materia, los compuestos 1-18 preferidos, mencionados anteriormente, no se limitan a las etiquetas de 18F mostradas, sino que las etiquetas de 18F pueden intercambiarse fácilmente mediante técnicas estándar y en su lugar puede usarse cualquiera de las etiquetas de 18F ilustradas en relación con la Fórmula I.

La invención también se refiere a compuestos precursores o a sales de los compuestos de fórmula general I farmacéuticamente aceptables. La invención también se refiere a solvatos de los compuestos, incluyendo las sales así como sus metabolitos activos y, cuando sea adecuado, sus tautómeros de acuerdo con la fórmula general I, incluidas las formulaciones de profármacos.

Una "sal farmacéuticamente aceptable", es una sal básica o ácida, orgánica o inorgánica, farmacéuticamente aceptable, de un compuesto de la invención. Las sales representativas farmacéuticamente aceptables incluyen, por ejemplo, sales de metales alcalinos, sales alcalinotérreas, sales de amonio, sales solubles en agua e insolubles en agua, tales como las sales acetato, carbonato, cloruro, gluconato, glutamato, lactato, laurato, malato o tartrato. El término "profármaco" se refiere a un precursor de un fármaco que es un compuesto que, después de su administración a un paciente, debe experimentar conversión mediante procesos metabólicos antes de convertirse en un agente farmacológicamente activo. Los profármacos son generalmente precursores de fármacos que, después de la administración a un sujeto y posterior absorción, se convierten en una especie activa, o más activa, a través de algún proceso, tal como una conversión mediante una ruta metabólica. Algunos profármacos tienen un grupo químico presente en el profármaco que hace que sea menos activo y/o que confiere solubilidad o alguna otra propiedad al fármaco. Una vez que el grupo químico se ha escindido y/o modificado del profármaco, se genera el fármaco activo. Los profármacos se convierten en fármacos activos dentro del organismo mediante reacciones enzimáticas o no enzimáticas. Los profármacos pueden proporcionar propiedades fisicoquímicas mejoradas, tales como mejorar las solubilidad, potenciar las características de suministro, tales como dirigirse específicamente a una célula, tejido, órgano o ligando particular, y mejorar el valor terapéutico del fármaco. Los profármacos ilustrativos de compuestos de acuerdo con la fórmula I son ésteres y amidas, preferentemente ésteres alquílicos de ácidos grasos. En este caso, las formulaciones de profármaco comprenden todas las sustancias que se forman mediante transformación simple incluyendo hidrólisis, oxidación o reducción ya sea de manera enzimática, metabólica o de cualquier otro modo. Un profármaco adecuado contiene, por ejemplo, una sustancia de fórmula general I unida a través de un enlazador escindible de manera enzimática (por ejemplo, carbamato, fosfato, N-glicósido o un grupo disulfuro) a una sustancia mejoradora de la disolución (por ejemplo, tetraetilenglicol, sacáridos, ácidos fórmicos o ácido glucurónico, etc.). Dicho profármaco de un compuesto de acuerdo con la invención, puede aplicarse a un paciente, y este profármaco puede transformarse en una sustancia de fórmula general I para obtener el efecto farmacológico deseado.

Algunos compuestos de fórmula general I se incluyen en forma de racematos, sus enantiómeros y opcionalmente en forma de sus diastereoisómeros y todas sus posibles mezclas.

De acuerdo con la invención, todos los átomos de C quirales tendrán configuración D y/o L; también serán posibles combinaciones dentro de un compuesto, es decir, algunos de los átomos de C quirales pueden tener configuración D y otros pueden tener configuración L.

Los compuestos obtenidos se pueden separar opcionalmente mediante métodos conocidos (por ejemplo, Allinger, N.L. und Elliel E.L. en "Topics in Stereochemistry" Vol. 6, Wiley Interscience, 1971^ en sus enantiómeros y/o diastereómeros. Un posible método de separación enantiomérica es el uso de la cromatografía.

La invención también abarca precursores de los compuestos de fórmula general I. El término "precursor" se refiere a cualquier compuesto que pueda usarse para producir los compuestos de Fórmula I. Un precursor ilustrativo puede ser un compuesto que no tenga etiqueta 18F que se añada en una fase posterior para proporcionar el compuesto completo. La invención también se refiere a preparaciones farmacéuticas que contienen una cantidad diagnóstica o terapéuticamente eficaz de los principios activos (compuesto de acuerdo con la invención de fórmula I) junto con transportadores sólidos o líquidos, orgánicos o inorgánicos, farmacéuticamente aceptables, que son adecuados para la administración prevista y que interactúan sin inconvenientes con los principios activos.

En este documento, la expresión "farmacéuticamente aceptable" se emplea para referirse a aquellos compuestos, materiales, composiciones y/o formas farmacéuticas que son, dentro del alcance del buen criterio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de un paciente sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, en proporción a una relación beneficio/riesgo razonable.

Un "paciente" incluye un animal, tal como un ser humano, un mono, una vaca, un caballo, un gato o un perro. El animal puede ser un mamífero, tal como un no primate y un primate (por ejemplo, un mono y un ser humano). En una realización, un paciente es un ser humano.

En general, el compuesto de fórmula I o sus composiciones farmacéuticas, pueden administrarse por vía oral o por vía parenteral, normalmente inyección o perfusión.

Una "vía de administración parenteral" significa modos de administración distintos de la administración enteral y tópica, normalmente, mediante inyección, e incluye, sin limitación, inyección y perfusión intravenosa, intramuscular, intraarterial, intratecal, intracapsular, intraorbital, intracardíaca, intradérmica, intraperitoneal, transtraqueal, subcutánea, subcuticular, intraarticular, subcapsular, subaracnoidea, intraespinal e intraesternal.

La dosificación de los compuestos de acuerdo con la invención la determina el médico en función de parámetros específicos del paciente, tales como la edad, el peso, el sexo, la gravedad de la enfermedad, etc. Correspondiente al tipo de administración, el medicamento está adecuadamente formulado, por ejemplo, en forma de soluciones o suspensiones, grageas o comprimidos sencillos, cápsulas duras o blandas de gelatina, supositorios, óvulos, preparaciones para inyección, que se preparan de acuerdo con métodos galénicos habituales.

Las compuestos de acuerdo con la invención, se pueden formular, cuando sea adecuado, junto con otras sustancias activas y con excipientes y transportadores habituales en las composiciones farmacéuticas, p. ej., dependiendo de la preparación que se vaya a producir, talco, goma arábiga, lactosa, almidón, estearato de magnesio, manteca de cacao, transportadores acuosos y no acuosos, cuerpos grasos de origen animal o vegetal, derivados de parafina, glicoles (en particular, polietilenglicol), diversos plastificantes, dispersantes o emulsionantes, gases farmacéuticamente compatibles (por ejemplo, aire, oxígeno, dióxido de carbono, etc.), conservantes.

Para producir preparaciones líquidas, pueden usarse aditivos, tales como solución de cloruro de sodio, etanol, sorbitol, glicerina, aceite de oliva, aceite de almendra, propilenglicol o etilenglicol.

Cuando se usan soluciones para perfusión o inyección, estas son preferiblemente soluciones o suspensiones acuosas, siendo posible producirlas antes de su uso, por ejemplo, a partir de preparaciones liofilizadas que contienen la sustancia activa como tal o junto con un transportador, tal como manitol, lactosa, glucosa, albúmina y similares. Las soluciones preparadas se esterilizan y, cuando sea adecuado, se mezclan con excipientes, por ejemplo, con conservantes, estabilizantes, emulsionantes, solubilizantes, tampones y/o sales para regular la presión osmótica. Cuando sea apropiado, la esterilización puede obtenerse mediante filtración estéril usando filtros que tengan un tamaño de poro pequeño según el cual la composición se pueda liofilizar. También se pueden añadir pequeñas cantidades de antibióticos para garantizar el mantenimiento de la esterilidad.

Las expresiones "cantidad eficaz" o "cantidad terapéuticamente eficaz", como se utilizan en este documento, significan la cantidad de un compuesto, material o composición que comprende un compuesto de la invención, u otro principio activo, que sea eficaz para producir algún efecto terapéutico deseado en al menos una subpoblación de células de un animal en una relación beneficio/riesgo razonable aplicable a cualquier tratamiento médico. Una cantidad terapéuticamente eficaz con respecto a un compuesto de la invención, significa la cantidad de agente terapéutico en solitario o combinada con otras terapias, que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o la prevención de una enfermedad. Usado en relación con un compuesto de la invención, el término puede abarcar una cantidad que mejore la terapia en general, que reduzca o impida los síntomas o las causas de la enfermedad, o que potencie la eficacia terapéutica o las sinergias con otro agente terapéutico.

Tal como se usa en el presente documento, los términos "tratar" o "tratamiento" pretenden abarcar también el diagnóstico, la profilaxis, la prevención, la terapia y la curación.

Los términos "prevenir", "que previene", y "prevención", se refieren a la prevención de la aparición, recidiva o propagación de la enfermedad en un paciente como resultado de la administración de un agente profiláctico o terapéutico.

Como se ha indicado anteriormente, los compuestos de acuerdo con la fórmula general I son adecuados para su uso como agentes de obtención de radioimágenes o como agentes terapéuticos para el tratamiento de células que proliferan rápidamente, por ejemplo, células de cáncer de próstata que expresan PSMA. De acuerdo con la presente invención, estos compuestos se denominan "radiofármacos".

Los métodos de obtención de imágenes preferidos son la tomografía de emisión positrónica (TEP) o la tomografía computarizada de emisión monofotónica (TCEM).

Por consiguiente, en una realización, se proporciona una composición farmacéutica que incluye un compuesto de fórmula I, una sal, un solvato, un estereoisómero o un tautómero de los mismos, y un transportador farmacéuticamente aceptable. Por consiguiente, se proporciona una composición farmacéutica, que es adecuada para la obtención de imágenes y radioterapia in vivo. Para la obtención de imágenes, las composiciones farmacéuticas adecuadas pueden contener el compuesto de fórmula I en una cantidad suficiente, junto con un vehículo radiológico farmacéuticamente aceptable. El vehículo radiológico debe ser adecuado para inyección o aspiración, tal como seroalbúmina humana; soluciones de tampón acuosas, por ejemplo, tris(hidrometil) aminometano (y sus sales), fosfato, citrato, bicarbonato, etc; solución salina fisiológica de agua estéril; y soluciones iónicas equilibradas que contienen cloruro y o sales de dicarbonato o soluciones de plasma sanguíneo normal, tales como calcio, potasio, sodio y magnesio.

La concentración del agente de obtención de imágenes o del agente terapéutico en el vehículo radiológico debe ser suficiente para proporcionar una obtención de imágenes satisfactoria. Por ejemplo, cuando se usa una solución acuosa, la dosis es de aproximadamente 1,0 a 100 milicurios. Sin embargo, la dosis real administrada a un paciente con fines terapéuticos o de obtención de imágenes, la determina el médico que administra el tratamiento. El agente de obtención de imágenes o el agente terapéutico debe administrarse de modo que permanezca en el paciente durante aproximadamente 1 hora a 10 días, aunque son aceptables períodos de tiempo más largos y más cortos. Por lo tanto, se pueden preparar ampollas/viales convenientes que contengan de 1 a 10 ml de solución acuosa.

La obtención de imágenes puede realizarse de la manera normal, por ejemplo, inyectando una cantidad suficiente de la composición de obtención imágenes para proporcionar imágenes adecuadas y después explorando con un ecógrafo o aparato de obtención de imágenes adecuado, tal como un tomógrafo o una cámara gamma. En determinadas realizaciones, un método de obtención de imágenes de una zona de un paciente incluye las siguientes etapas: (i) administrar a un paciente una cantidad diagnósticamente eficaz de un compuesto marcado con un radionúclido; exponer una zona del paciente al dispositivo de exploración; y (ii) obtener una imagen de la zona del paciente.

La cantidad del compuesto de la presente invención, o su sal, solvato, estereoisómero o tautómero, que se administra a un paciente, depende de diversos factores fisiológicos que el médico utiliza habitualmente, incluida la naturaleza de la obtención de imágenes a realizar, el tejido que se va a utilizar como objetivo para la obtención de imágenes o la terapia y el peso corporal e historial médico del paciente del que se va a obtener la imagen o que se va a tratar con un radiofármaco.

Específicamente, la enfermedad o el trastorno proliferativo celular que se va a tratar o a visualizar mediante obtención de imágenes usando un compuesto, una composición farmacéutica o un radiofármaco de acuerdo con esta invención es un cáncer, por ejemplo, cáncer de próstata y/o metástasis de cáncer de próstata, por ejemplo, en pulmón, hígado, riñón, huesos, cerebro, médula espinal, vejiga, etc.

La síntesis de los compuestos de la presente invención se lleva a cabo de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica anterior (por ejemplo, Hugenberg et al., J. Med. Chem. 2013, 56, págs. 6858-6870). En las Figs. 1-7 se muestran métodos generales de marcaje de diversas macromoléculas con 18F. Además, se hace referencia a Schubiger et al., PET Chemistry: The Driving Force in Molecular Imaging, Ernst Schering Research Foundation, Workshop 62, Springer Verlag, ISSN 0947-6075; Ross et al., Current Radiopharmaceuticals, 2010, 3, 202-223; Kuhnast et al., Current Radiopharm 3, 2010, 174; Bernard-Gauthier et al., BioMed Research International, 2014, 1; Maschauer y Prante, BioMed Research International, 2014, 1; Olberg et al., J. Med. Chem., 2010, 53, 1732; Rostovtsev et al., Angew. Chem., 2002, 114, 2708; Smith y Greaney, Org. Lett., 2013, 15, 4826. Por tanto, un experto en la materia podría elegir el marcaje correcto con 18F dependiendo de la molécula de partida. En el documento EP 13004991, al que se hace referencia, se muestra la síntesis de las moléculas enlazadoras específicas.

Los compuestos sintetizados se caracterizan químicamente por RP-HPLC (cromatografía líquida de fase inversa), EM y/o RMN.

Los nuevos agentes de obtención de imágenes etiquetados con 18F con modificaciones estructurales en la región enlazadora, han mejorado la farmacocinética y las propiedades de direccionamiento tumoral. El farmacóforo presenta tres grupos carboxílicos capaces de interactuar con las respectivas cadenas laterales del PSMA y un oxígeno como parte de la complejación con zinc en el centro activo. Además de estas interacciones obligatorias, los inventores pudieron optimizar las interacciones lipófilas en la región enlazadora en comparación con los compuestos descritos en el documento EP 3011976. Al enlazador de los compuestos de la presente invención (enlazador B) se le han añadido bloques de construcción hidrófilos adicionales, lo que conduce a otra mejora de la farmacocinética. Estos compuestos se evaluaron en ensayos in vitro (afinidad, internalización) y en experimentos in vivo (exploración mediante pTEP y distribución orgánica).

Cuatro compuestos preferidos con resultados particularmente prometedores son 18F-PSMA1007, 18F-PSMA1011, 18F-PSMA 1012 y 18F-PSMA 1015:

o

Todos los compuestos se marcaron con flúor-18 mediante éster TFP (tetrafluorofenílico) del ácido 2-[18F]fluoronicotínico con buenos rendimientos radioquímicos. La Tabla A muestra que la afinidad de unión de los inhibidores del PSMA preparados hasta ahora es esencialmente la misma y que está en el intervalo habitual. Además, todos los compuestos se internalizaron específicamente a 37 °C con valores de captación e internalización celular bastante altos (Tabla B). Por tanto, los compuestos investigados presentan característica óptimas in vitro para la obtención de imágenes con TEP de alto contraste.

Los compuestos de la presente invención se investigaron en estudios de distribución orgánica en ratones portadores de un tumor LNCaP (positivo a PSMA) con y sin bloqueo de PMPA. En las figuras 8 y 9 se resumen los resultados que se han obtenido a modo de ejemplo con PSMA1007 (esto no significa que la invención esté limitada en modo alguno a este compuesto específico únicamente). La captación tumoral fue de aproximadamente 8,0 ± 2,4 % Dl/g. Dado que en el experimento de bloqueo no se observó un bloqueo cuantitativo de la unión, el experimento de distribución orgánica se repitió con ratones portadores de un tumor PC3 (negativo a PSMA; Los resultados se muestran en la Figura 8). En este caso, prácticamente no se observó captación tumoral. Por tanto, la captación tumoral se considera específicamente. Adicionalmente, en comparación con la distribución orgánica observada con el compuesto de control PSMA-1003 que se ha descrito en el documento EP 14003570.0 y que se muestra en la Fig.12, el nuevo compuesto PSMA-1007 mostró una captación significativamente reducida en tejido no diana, tal como el hígado y el intestino delgado. Por tanto, el compuesto PSMA-1007 se evaluó adicionalmente en un experimento de microTEP. En las figuras 10 y 11 se muestran los resultados. El tumor LNCaP se visualizó claramente en este experimento (SUVmáx = 3,1 a 120-140 min p.i.). La captación no deseada en la vesícula biliar puede ser un indicador de metabolitos. En general, la nueva clase de inhibidores de PSMA marcados con flúor 18, mostró un gran potencial como posible radiomarcador para la detección del cáncer de próstata y sus metástasis.

Mediante la aplicación de [18F]PSMA-1007 a un voluntario sano, se obtuvieron varios conocimientos importantes. En primer lugar, la dosis efectiva de una exploración TEP/TC con 200-250 MBq es de 4,3 - 5,4 mSv (2,15 mSv/MBq; Fig. 14). Más del 95 % de la actividad de la reserva de sangre se encuentra en el suero (infiltración nula o insignificante de glóbulos rojos) y más del 90 % de aclaramiento de la reserva de sangre en las 3 primeras horas después de la inyección. Hasta ahora, estos resultados son comparables con los de otros radiomarcadores de PSMA importantes. Sin embargo, en comparación con los otros radiomarcadores de PSMA conocidos, los compuestos de la presente invención, particularmente [18F]PSMA-1007, proporcionan un aclaramiento hepatobiliar único con un aclaramiento muy pequeño a través de la ruta renal. Este excepcional aclaramiento urinario reducido permite una excelente evaluación del lecho prostético. Por tanto, los radiomarcadores de acuerdo con la presente invención son perfectamente adecuados para el diagnóstico primario de cáncer de próstata y recidiva local.

Esto se demostró además con los resultados del estudio realizado por primera vez en el hombre. En este caso, en el tumor primario, se observaron excelentes proporciones, de hasta ^{1 0} , de tumores con respecto al fondo, sin ninguna interferencia de la acumulación del radiomarcador en la vejiga. Además, se pudieron detectar metástasis en los ganglios linfáticos con un diámetro de hasta ¹ mm, que está en el intervalo de la resolución de las exploraciones con TEP con F-18. La correlación con las muestras obtenidas mediante el análisis de linfadenectomía pélvica reveló una especificidad del 95 %. Asimismo, las muestras obtenidas de la prostatectomía se analizaron mediante histopatología revelando una correlación casi perfecta con las imágenes adquiridas con TEP. Estos resultados demuestran claramente la viabilidad de la obtención de imágenes de cáncer de próstata con los compuestos de la presente invención, particularmente con [18F]PSMA-1007.

El siguiente ejemplo explica la invención con más detalle, pero no se considera que limite la invención de ninguna manera solo a las realizaciones ilustradas.

Ejemplos

Ejemplo 1: Síntesis de los compuestos precursores y de referencia en frío, de los inhibidores conjugados con 18F El isocianato de la fracción de glutamilo se generó in situ añadiendo una mezcla de 3 mmol de clorhidrato de bis(tercbutil) L-glutamato y 1,5 ml de N-etildiisopropilamina (DIPEA) en 200 ml de CH²Ch seco a una solución de trifosgeno 1 mmol en 10 ml de CH²Ch seco a 0 °C durante 4 h. Después de agitar la mezcla de reacción durante 1 h a 25 °C, Se añadieron 0,5 mmol de la lisina protegida con (2-cloro-tritilresina) £-aliloxicarbonilo inmovilizada en resina en 4 ml de DCM y se hizo reaccionar durante 16 h con agitación suave. La resina se eliminó mediante filtrado y el grupo protector de aliloxi se eliminó usando 30 mg de tetrakis(trifenil)paladio(0) y 400 pl de morfolina en 4 ml de CH²Ch durante 3 horas.

El siguiente acoplamiento de los "aminoácidos enlazadores" (como se define en la Fórmula I y en el Esquema 1 como se muestra arriba) se realizó paso a paso usando 2 mmol del ácido protegido con Fmoc, 1,96 mmol de HBTU y 2 mmol de N-etildiisopropilamina en un volumen final de 4 ml de DMF.

El producto se escindió de la resina en una mezcla de 2 ml que consistía en ácido trifluoroacético, triisopropilsilano y agua (95:2,5:2,5). La purificación se realizó usando RP-HPLC y el producto purificado se analizó mediante RP-HPLC analítica y EM-MALDI (espectrometría de masas de desorción/ionización láser asistida por matriz, Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization).

Para la preparación de los compuestos de referencia no radiactivos, 50 mg de ácido 6-Fluoronicotínico-3 activado con HBTU/DIPEA (0,98 y 1 Eq.), se acoplaron en un volumen final de 4 ml de DMF y se agitaron durante 1 h a temperatura ambiente y el producto se escindió de la resina como se describió anteriormente.

En algunas preparaciones, fracciones reactivas con etiqueta 18F (por ejemplo, ácido pent-4-inoico o ácido (Bocaminooxi)acético), se anexaron al grupo amino terminal para posterior marcaje con ¹⁸F.

Ejemplo 2: Producción y activación del [¹⁸F]fluoruro

Preparación y activación del [¹⁸F]fluoruro

El flúor-18 se produjo mediante la irradiación de agua enriquecida con 18O con protones de 16,5 MeV usando la reacción nuclear ¹⁸O(p,n)¹⁸F. Las irradiaciones se realizaron con el ciclotrón Scanditronix MC32NI en el departamento de Química Radiofarmacéutica (E030) del Centro Alemán de Investigación del Cáncer de Heidelberg.

Después de transferir el agua irradiada a un sistema automatizado (Trasis All In One 32) el [¹⁸F]F‘ se separó del [¹⁸O]H²O pasando a través de un cartucho de intercambio aniónico (Waters Accel™ Plus Qm A Cartridge light) previamente acondicionado (5 ml de K²CO³1 M y 10 ml de agua) y posteriormente se eluyó con una mezcla de 800 pl de acetonitrilo y 150 pl de solución de bicarbonato de tetrabutilamonio (320 mM en agua). La mezcla se evaporó hasta la sequedad y a una temperatura de 100°°C en una corriente de nitrógeno. Esta destilación se repitió posteriormente dos veces añadiendo en cada etapa 1,8 ml de acetonitrilo. Después de aplicar al residuo, el vacío máximo alcanzable durante 5 minutos a 100°°C y posterior enfriamiento a 50°°C, el residuo seco se disolvió en 2 ml de tercbutanol/acetonitrilo (⁸ :² ) y se usó en las reacciones de marcaje.

Como alternativa, el sistema también se usó con el sistema de activación clásico Kryptofix® 2.2.2 / K²CO³ (20 mg de 2.2.2 28 pl de K²CO³ 1 M) en acetonitrilo. Además, en algunos experimentos, para disolver el [¹⁸F]F‘ activado, el disolvente se cambió a DMF, DMSO o acetonitrilo seco.

Ejemplo 3: Radiosíntesis de éster tetrafluorofenílico del ácido 6-[18F]Fluoronicotínico ([18F]FN-TFP) A 10 mg de A/,W,A/-Trimetil-5-((2,3,5,6-tetrafluorofenoxi)-carbonil)piridin-2-aminio trifluorometanosulfonato (preparado como describen Olberg et al. J. Med. Chem., 2010, 53, 1732) se añadió 1 ml de terc-butanol/Acetonitrilo (8:2) que contenía el complejo [18F]KF-Kryptofix 2.2.2 (0,1-10 GBq 18F) seco y la mezcla se calentó a 40 °C. Después de 10 minutos, la mezcla se diluyó con 3 ml de agua y el producto se cargó en un cartucho Oasis MCX Plus Sep-Pak (Waters) previamente acondicionado. El cartucho se aclaró con 10 ml de agua y usando 2 ml de agua/acetonitrilo (7:13), el éster tetrafluorofenílico del ácido 6-[18F]Fluoronicotínico purificado, se eluyó de nuevo en el recipiente de reacción. En algunos casos, para conseguir una concentración de actividad más alta, se realizó una elución fraccionada. Después de esto, el cartucho cargado se aclaró con 500 pl de disolvente, que se desecharon, y después se eluyeron con 400­ 800 pl de disolvente para reacciones posteriores. Habitualmente, más del 50 % de la actividad inicial se eluyó con la segunda fracción.

Ejemplo 4: PSMA-1007

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. Radiosíntesis de [18F] PSMA-1007

A 50 pl de una solución de 2 mg/ml de PSMA-1007-VL en DMSO, se añadieron 200 pl de ([18F]FN-TFP). Después, se añadieron 50 pl de tampón (tampón fosfato 0,2 M, pH 8,0) y la mezcla se calentó a 60 °C durante 20 minutos. Los productos se separaron mediante radio-HPLC semipreparativa y se identificaron mediante radio-HPLC analítica y comparación de los tiempos de retención con los respectivos compuestos de referencia no radiactivos.

PSMA1007-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu); (C⁴³H⁵³N⁷O¹⁵; 907,93 g/mol) particularmente (Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(L-Glu)-(L-Glu)

EM (MALDI): m/z = 908,7 [M H+]+

PSMA-1007

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu)-FN; C⁴⁹H⁵⁵FN⁸O¹⁶; (1031 g/mol) particularmente (Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(L-Glu)-(L-Glu)-FN;

EM (MALDI): m/z = 1032,1 [M H+]+

[18F]PSMA-1007

RCA: aprox. 6 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 12,5 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 4,56 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 5: PSMA-1011

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1011 se realizó como se describe en el ejemplo 4.

PSMA-1011-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanina)-(Glu)-(Glu); C³⁵H⁴⁶N⁸O¹⁴ (774,78 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 775,3 [M H+]+

PSMA-1011:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanina)-(Glu)-(Glu)-FN; C⁴¹H⁴⁸FN⁷O¹⁵ (897,86 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 898,3 [M H+]+

[18F]PSMA-1011:

RCA: aprox. 7 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 50 % A / 50 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 5,72 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 6: PSMA-1012

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1012 se realizó como se describe en el ejemplo 4.

PSMA-1012-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanina)-(YGlu)-(Glu); C³⁵H⁴⁶N⁸O¹⁴ (774,78 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 775,0 [M H+]+

PSMA-1012:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanina)-(YGlu)-(Glu)-FN; C⁴¹H⁴⁸FN⁷O¹⁵ (897,86 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 897,9 [M H+]+

[18F]PSMA-1012:

RCA: aprox. 4 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 50 % A / 50 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 5,61 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 7: PSMA-1015

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1015 se realizó como se describe en el ejemplo 4.

PSMA-1015-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu); C³⁸H⁴⁶N⁶O¹² (778,80 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 779,4 [M H+]+

PSMA-1015:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-FN; C⁴⁴H⁴⁸FN⁷O¹³ (901,89 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 902,5 [M H+]+

[18F]PSMA-1015:

RCA: aprox. 7 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 50 % A / 50 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 6,48 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 8: Síntesis de [18F]FN-TFP seco

La radiosíntesis se realizó como se describe en el ejemplo 3 hasta la elución del [18F]FN-TFP del cartucho. Después de lavar el cartucho con 10 ml de agua (ejemplo 3), el cartucho se secó mediante soplado con 20 - 40 ml de aire. A continuación, el cartucho MCX se conectó a un cartucho de secado SepPak SodSulf y el producto se eluyó con 2 ml de acetonitrilo seco. En algunos casos, para conseguir una concentración de actividad más alta, se realizó una elución fraccionada. Después de esto, el cartucho MCX cargado, se aclaró con 500 pl de disolvente (después de secar por soplado el cartucho), que se desecharon, y después el cartucho de secado se conectó al cartucho MCX y el producto se eluyó con 0,8-1,2 ml de acetonitrilo para reacciones posteriores. Habitualmente, más del 50 % de la actividad inicial se eluyó con la segunda fracción.

Ejemplo 9: PSMA-1018

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. Radiosíntesis de [18F] PSMA-1018

Se añadieron 200 |jl de [18F]FN-TFP (ejemplo 8) a 50 |jl de una solución de 4 mg/ml de PSMA-1018-VL en DMSO. Después, se añadieron 10 j l de DIPEA y la mezcla se calentó a 60 °C durante 20 minutos. Después, la mezcla de reacción se acidificó mediante la adición de 10 j l de TFA, los productos se separaron mediante radio-HPLC semipreparativa y se identificaron mediante radio-HPLC analítica y comparación de los tiempos de retención con los respectivos compuestos de referencia no radiactivos.

PSMA-1018-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu)-(Glu); C⁴⁸H⁶⁰N⁸O¹⁸ (1037,03 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1037,6 [M H+]+

PSMA-1018:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu)-(Glu)-FN; C⁵⁴H⁶²FN⁹O¹⁹ (1160,12 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1160,8 [M H+]+

[18F]PSMA-1018:

RCA: aprox. 20 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 3,87 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 10: PSMA-1019

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1019 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1019-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Chx)-(Glu)-(Glu); C⁴³H⁵⁹N⁷O¹⁵ (913,97 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 914,4 [M H+]+

PSMA-1019:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Chx)-(Glu)-(Glu)-FN; C⁴⁹H⁶¹FN⁸O¹⁶ (1037,05 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1037,7 [M H+]+

[18F]PSMA-1019:

RCA: aprox. 47 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 12,5 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 4,43 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 11: PSMA-1020

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1020 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1020-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(YGlu)-(Glu)-(Glu); C⁴⁰H⁵³N⁷O¹⁷ (903,89 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 904,9 [M H+]+

PSMA-1020:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(yGlu)-(Glu)-(Glu)-FN; C⁴⁶H⁵⁵FN⁸O¹⁸ (1026,97 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1027,9 [M H+]+

[18F]PSMA-1020:

RCA: aprox. 60 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 12,5 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 6,48 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 12: PSMA-1022

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1022 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1022-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(YGlu)-(YGlu); C³⁵H⁴⁶N⁸O¹⁴ (774,78 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 775,4 [M H+]+

PSMA-1022:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(YGlu)-(YGlu)-FN; C⁴¹H⁴⁸FN⁷O¹⁵ (897,86 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 898,8 [M H+]+

[18F]PSMA-1022:

RCA: aprox. 29 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 3,92 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 13: PSMA-1023

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1023 se realizó como se describe en el ejemplo 9

PSMA-1023-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(D-Glu); C⁴³H⁵³N⁷O¹⁵ (907,93 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 907,8 [M H+]+

PSMA-1023:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(D-Glu)-FN; C⁴⁹H⁵⁵FN⁸O¹⁶ (1031,00 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1031,8 [M H+]+

[18F]PSMA-1023:

RCA: aprox. 24 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 50 % A / 50 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 3,87 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 14: PSMA-1024

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1024 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1024-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(Glu); C⁴³H⁵³N⁷O¹⁵ (907,93 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 908,6 [M H+]+

PSMA-1024:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(Glu)-FN; C⁴⁹H⁵⁵FN⁸O¹⁶ (1031,00 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1031,5 [M H+]+

[18F]PSMA-1024:

RCA: aprox. 27 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 3,85 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 15: PSMA-1025

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1025 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1025-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Gla); C³⁹H⁴⁶N⁶O¹⁴ (822,21 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 822,8 [M H+]+

PSMA-1025:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Gla)-FN; C⁴⁹H⁵⁵FN⁸O¹⁶ (945,32 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 946,0 [M H+]+

[18F]PSMA-1025:

RCA: aprox. 24 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 12,5 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 4,51 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 16: PSMA-1026

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1026 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1026-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala); C³⁶H⁴⁴N⁶O¹³S (800,83 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 801,8 [M H+]+

PSMA-1026:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala)-FN; C⁴²H⁴⁶FN⁷O¹⁴S (923,92 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 924,7 [M H+]+

[18F]PSMA-1026:

RCA: aprox. 57 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 12,5 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 4,03 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 17: PSMA-1027

La síntesis del compuesto precursor y la del de referencia en frío, se realizó como se describe en el ejemplo 1. La síntesis de [18F]PSMA-1027 se realizó como se describe en el ejemplo 9.

PSMA-1027-VL (precursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala)-(Sala); C³⁹H⁴⁹N⁷O¹⁷S² (951,97 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 952,7 [M H+]+

PSMA-1027:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala)-(Sala)-FN; C⁴⁵H⁵¹FN⁸O¹⁸S² (1075,06 g/mol)

EM (MALDI): m/z = 1075,8 [M H+]+

[18F]PSMA-1027:

RCA: aprox. 62 %

HPLC [Gradiente: 5 % A / 95 % B - 95 % A / 5 % B en 10,0 min; Flujo: 3 ml / min; Columna: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4,6 mm; Disolvente A: Acetonitrilo, Disolvente B: TFA acuoso al 0,1%): W 3,10 min (tmuerto: 0,56 min)

Ejemplo 18: Cultivo celular

Para los estudios de unión y experimentos in vivo, células LNCaP (lesión metastásica de adenocarcinoma de próstata humano, ATCC CRL-1740) se cultivaron en medio RPMI complementado con suero bovino fetal al 10 % y Glutamax (PAA, Austria). Durante el cultivo celular, las células crecieron a 37°°C en una incubadora con aire humidificado, equilibrada con CO2 al 5 %. Las células se recogieron usando tripsina-ácido etilendiaminotetraacético (tripsina-EDTA; tripsina al 0,25 %, EDTA al 0,02 %, todos de PAA, Austria) y se lavaron con PBS.

Ejemplo 19: Unión celular e internalización

El ensayo de unión celular competitiva y los experimentos de internalización se realizaron como se ha descrito anteriormente (Eder et al. Bioconjugate Chem. 2012, 23 (4), 688-697). Resumiendo, las respectivas células (105 por pocillo) se incubaron con el radioligando ([Glu-urea-Lys(Ahx)]² marcado con 68Ga-HBED-CC (Schafer et al. EJNMMI Research 2012, 2:23 doi: 10.1186/2191-219X-2-23))) en presencia de 12 concentraciones diferentes de analito (0­ 5000 nM, 100 pl/pocillo). Después de la incubación, el lavado se llevó a cabo usando un colector de vacío multipantalla (Millipore, Billerica, MA). La radioactividad unida a las células se midió usando un contador gamma (Packard Cobra II, GMI, Minnesota, USA). La concentración inhibidora al 50 % (CI⁵⁰) se calculó ajustando los datos usando un algoritmo de regresión no lineal (programa informático GraphPad). Los experimentos se realizaron tres veces. Se hace referencia a la Tabla A a continuación.

Para determinar la captación e internalización celular específicas, 105 las células se sembraron en placas de cultivo celular de 24 pocillos revestidas con poli-L-lisina 24 h antes de la incubación. Después del lavado, las células se incubaron durante 45 min a 37 °C, con 30 nM de los compuestos radiomarcados. La captación celular específica se determinó mediante bloqueo competitivo con ácido 2-(fosfonometil)pentanodioico (concentración final de 500 pM, PMPA, Axxora, Loerrach, Alemania). La captación celular se detuvo lavando 3 veces con 1 ml de PBS enfriado en hielo. Posteriormente, para eliminar la fracción unida a la superficie, las células se incubaron dos veces con 0,5 ml de glicina-HCl en PBS (50 mM, pH = 2,8) durante 5 min. Las células se lavaron con 1 ml de PBS enfriado en hielo y se sometieron a lisis usando NaOH 0,3 N (0,5 ml). Las fracciones unidas a la superficie y las internalizadas se midieron en un contador gamma. La captación celular se calculó como porcentaje de la radioactividad inicialmente añadida unida a 105 células [% DI/105 células]. En la Tabla B se dan los principales resultados.

Tabla A: Ensa o de afinidad de unión

continuación

Tabla B: Internalización es ecífica

Ejemplo 20: MicroTEP

Para los estudios de microTEP, a través de una vena lateral de la cola de ratones portadores de xenoinjertos de tumor LNCaP, se inyectaron 10 - 25 MBq de los compuestos radiomarcados en un volumen de 0,10 ml (60 pmol). Los animales anestesiados (sevoflurano al 2 %, Abbott, Wiesbaden, Alemania), se colocaron en decúbito prono en el escáner TEP para animales pequeños Inveon (Siemens, Knoxville, Tenn, USA) para realizar exploraciones dinámicas de microTEP. En las figuras 10 y 11 se muestran los resultados.

Ejemplo 21: Unión y estabilidad del plasma

Para la determinación de la unión del plasma, 3 pl de solución [18F]PSMA de aprox. 6 pmolar se añadieron a 300 pl de suero humano AB y se incubaron a 37 °C durante 1 hora. Posteriormente, la mezcla de productos se analizó mediante cromatografía de exclusión por tamaño.

No se observó unión al plasma con ninguno de los compuestos.

Para la determinación de la estabilidad del plasma, 50 pl de solución [18F]PSMA de aprox. 6 pmolar se añadieron a 450 pl de suero humano AB y se incubaron a 37 °C. Al cabo de 1,2 y 4 horas, las muestras se prepararon. Después de esto, se añadieron 100 pl de la mezcla de radiomarcador/plasma a 100 pl de acetonitrilo. Posteriormente, la mezcla se centrifugó a 13000 rpm durante 3 minutos. A 100 pl de acetonitrilo se añadieron 100 pl del sobrenadante, se centrifugó a 13000 rpm durante 5 minutos, el líquido se separó de los sólidos residuales y se analizó mediante HPLC. Todos los compuestos fueron estables en plasma humano a 37°°C durante al menos 4 horas.

Ejemplo 22: Experimentos in vivo

Para los experimentos in vivo, ratones BALB/c nu/nu de 8 semanas de vida, recibieron en el tronco derecho una inoculación por vía subcutánea de 5 x 106 células LNCaP o PC3 en Matrigel al 50 %. Cuando el tamaño del tumor fue de aproximadamente 1 cm3, el compuesto radiomarcado se inyectó a través de la vena de la cola (aprox. 30 MBq, 60 pmol para la obtención de imágenes con pTEP; aprox. 1 MBq, 60 pmol para la distribución orgánica).

Distribución orgánica

Los compuestos marcados con F-18 se inyectaron a través de la vena de la cola (1-2 MBq por ratón; 60 pmol). Una hora después de la inyección, los animales se sacrificaron. Los órganos de interés se diseccionaron, se secaron y se pesaron. La radioactividad se midió con un contador gamma (Packard Cobra II, GMI, Minnesota, USA) y se calculó como % de DI/g. En las Figuras 8 y 9 se dan los principales resultados.

Los compuestos PSMA 1003 y PSMA 1009 son para la comparación y se muestran en las Figuras 12 y 13.

Ejemplo 23: [18F]PSMA-1007 para aplicación en seres humanos

El compuesto [18F]PSMA-1007 se produjo mediante conjugación de [18F]FN-TFP seco (Ejemplo 8) con PSMA1007-VL (Ejemplo 4) en condiciones de sequedad (de manera análoga a la del Ejemplo 9) en un módulo de síntesis automatizado (Trasis AlllnOne) y se purificó mediante HPLC semipreparativa. Para determinar la identidad química y la pureza química y radioquímica de [18F]PSMA-1007, se realizó una radio-HPLC. Los disolventes residuales se determinaron mediante cromatografía de gases. La pureza del radionúclido se controló midiendo la semivida. Se analizó la esterilidad de la solución del producto, las endotoxinas bacterianas (prueba de LAL, Limulus Amebocyte Lysate, lisado de amebocitos de Limulus), el pH, la decoloración y las partículas. Después de la filtración, la integridad del filtro estéril se examinó usando la prueba de punto de burbujeo.

Ejemplo 24: Aplicación de [18F]PSMA-1007 a un voluntario sano

Al sujeto sano se le inyectó una actividad total de 300 MBq y posteriormente se realizaron exploraciones TEP en un escáner Biograph mTC Flow (Siemens, Erlangen, Alemania) en tres bloques. El bloque 1 contenía la TEP-1 (comienza 5 min p.i.) a t Ep -7 (finaliza 140 min p.i.), el bloque 2 contenía la TEP-8 (comienza 180 min p.i.) y la TEP-9 (240­ 270 min p.i.), el bloque 3 contenía la TEP-10 (440-480 min p.i.). Al comienzo de cada bloque se realizó una TC de baja dosis no mejorada (estimación de 1,43 mSv, respectivamente) para la corrección de la atenuación, seguida de exploraciones de emisión en serie sin que el voluntario se moviera entre ellas.

Los riñones, el hígado, el bazo, el corazón completo, el intestino grueso superior e inferior, la glándula parótida, la glándula submandibular y la vejiga urinaria, se segmentaron en volúmenes de interés (VOI, volumes of interest) usando un porcentaje de umbral máximo entre 20 % y 30 % usando como orientación la TC correspondiente y después se calcularon las curvas de actividad temporal (CAT) de todos los órganos. La CAT para la médula roja se obtuvo de las muestras de sangre venosa y después se calculó la dosis para la médula roja (S. Shen et al., JNM 2002, 43, 1245­ 1253; G. Sgouros et al., JNM 1993, 34, 689-694.). La CAT para el contenido de la vejiga urinaria fue una combinación de la actividad estimada en el VOI de la vejiga urinaria en la TEP y la actividad medida en la orina evacuada. Se aplicó un ajuste de curva a todas las CAT. Los riñones, las glándulas salivales, el intestino grueso superior e inferior y el corazón, se ajustaron con una función biexponencial. Para el contenido del hígado, bazo y vejiga urinaria se realizó un ajuste monoexponencial en los últimos tres puntos temporales.

Los cálculos de dosis absorbida y efectiva se realizaron usando el paquete IDAC 1.0 aprobado por la CIPR (Comisión Internacional de Protección Radiológica), que está integrado en QDOSE. Adicionalmente, los tiempos de residencia de todos los órganos originales incluidos y del resto del cuerpo se exportaron como un archivo de casos OLINDA para el cálculo de la dosis (OLINDA 1.1). Las dosis absorbidas en las glándulas salivales (glándulas parótidas y submandibulares) se determinaron mediante el modelo esférico. Las masas de órganos para las glándulas salivales se estimaron con 25 g para una parótida y con 12,5 g para una glándula submandibular (publicación 89 de la CIPR). En las figuras 14 - 16 se resumen los resultados.

Ejemplo 25: Aplicación de [18F]PSMA-1007 en pacientes que padecen cáncer de próstata

Diez pacientes (de 60 a 80 años) que padecían un cáncer de próstata de alto riesgo recién diagnosticado con una puntuación de Gleason de 7 a 9 y niveles iniciales de PSA de 5 a 90 ng/ml, recibieron una inyección de [18F]-PSMA-1007 de 100 a 360 MBq y posteriormente se realizaron exploraciones TEP en un escáner Biograph mCT Flow (Siemens, Erlangen, Alemania) a 1 y 3 horas p.i. Los resultados se muestran en las figuras 17 y 18 como valores medios del SUVmedio y SUVmáx, respectivamente. Las imágenes obtenidas con las exploraciones mediante TEP se ilustran en las figuras 19 y 20 como proyecciones de máxima intensidad.

Ocho de los pacientes se sometieron a prostatectomía radical con linfadenectomía pélvica extendida. Los análisis de las muestras de prostatectomía se realizaron con enmascaramiento de los datos de la TEP bajo la supervisión de uropatólogos especializados, de acuerdo con las normas de la Sociedad Internacional de Patología Urológica (T.H. van der Kwast et al. Mod. Phathol. 2011, 24, 16-25). Las secciones representativas se tiñeron mediante inmunohistoquímica. Las secciones se desparafinaron en xileno y se rehidrataron en una serie de etanol graduado. La recuperación de antígenos se realizó con una olla de vapor utilizando tampón de recuperación (Solución Target Retrieval, Dako). Se usó un anticuerpo monoclonal de ratón contra PSMA (clon 3E6, Dako) a una dilución 1:100 y se incubó durante la noche a 4 °C y posteriormente se realizó la inmunodetección usando el kit de detección Histostain-Plus (Invitrogen). Las secciones teñidas se exploraron usando un sistema de exploración Nanozoomer 2.0-HT (Hamamatsu Photonics) para generar imágenes digitales de diapositivas completas. La tinción reveló una correlación casi perfecta con la exploración mediante TEP, como se ilustra en la Figura 21.

Claims (9)

REIVINDICACIONES

1. Un compuesto de Fórmula I:

Fórmula I

con:

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

(continuación)

2. El compuesto de la reivindicación 1, que tiene la estructura

en donde el enlazador A se selecciona del grupo (con R = (Glu) -(Urea) -(Lys) y R '= (enlazador B)m-etiqueta de 18F; m = 1-5)

(En forma de cualquier sal farmacéuticamente aceptable)

(2-Nal)-(AcAMP)

y el enlazador B puede estar presente de 1 a 5 veces y se selecciona del grupo

Ċ

3. Un compuesto seleccionado de lo siguiente

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

Ċ

o

4. El compuesto de la reivindicación 1, en donde el aminoácido no natural tiene la fórmula

y R'= H, CO²H, CH²CO²H, C²H⁴CO²H, CH(CO²H)², CH(CH²CO²H)², CH(CO²H)(CH²CO²H), CH²CH(CO²H)² , SO³H; o = 1-3; R = H, CHa.

5. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, o una sal o un éster del mismo farmacéuticamente aceptable, y un transportador farmacéuticamente aceptable.

6. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en un método de obtención de imágenes en un paciente.

7. El compuesto de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, para su uso en un método de diagnóstico de cáncer de próstata y/o metástasis del mismo.

8. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, para su uso en un método de obtención de imágenes en un paciente.

9. La composición farmacéutica de la reivindicación 5, para su uso en un método de diagnóstico de cáncer de próstata y/o metástasis del mismo.