RS61394B1

RS61394B1 - 18f-obeleženi inhibitori specifičnog membranskog antigena prostate (psma) i njihova upotreba kao sredstava za vizuelizaciju kancera prostate

Info

Publication number: RS61394B1
Application number: RS20210120A
Authority: RS
Inventors: Jens Cardinale; Martin Schäfer; Klaus Kopka; Matthias Eder; Ulrike Bauder-Wuest; Michael Eisenhut; Martina Benesova; Uwe Haberkorn; Frederik L Giesel
Original assignee: Deutsches Krebsforsch; Univ Heidelberg Ruprecht Karls
Priority date: 2015-09-30
Filing date: 2016-09-19
Publication date: 2021-02-26
Also published as: NZ739770A; MX390931B; KR20180058822A; EA201890282A1; JP6824971B2; IL258378A; CA2996330A1; IL258378B; ES2844586T3; CU20180030A7; EP3805250A1; LT3356385T; PH12018500701B1; PE20181350A1; CN108026144B; SA518391121B1; EP3356385A1; MY197061A; AU2016333334A1; CY1123790T1

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se generalno odnosi na oblast radiofarmaceutskih sredstava i njihovu upotrebu u nuklearnoj medicini kao markeri i sredstva za vizuelizaciju i za različita stanja bolesti kancera prostate.

OSNOVA PRONALASKA

[0002] Kancer prostate (PCa) je vodeći kancer kod populacije SAD-a i evropske populacije. Najmanje 1-2 miliona muškaraca u zapadnoj hemisferi pati od kancera prostate i procenjeno je da će bolest pogoditi jednog u šest muškaraca starosti između 55 i 85 godina. Svake godine u SAD-u se dijagnostikuje više od 300 000 novih slučajeva kancera prostate. Mortalitet od bolesti je samo posle kancera pluća. Trenutno anatomski postupci, kao što je kompjuterska tomografija (CT), vizuelizacija magnetnom rezonancom (MR) i ultrazvukom, preovlađuju za kliničku vizuelizaciju kancera prostate. Procenjuje se da se trenutno širom sveta troši 2 milijardi dolara na hiruršku, radijacionu, terapiju lekovima i minimalno invazivne tretmane. Međutim, trenutno nema efikasne terapije za relapsirajući, metastatski, androgen-nezavisni kancer prostate.

[0003] Različita eksperimentalna sredstva za vizuelizaciju PCa niske molekulske težine se trenutno koriste klinički, uključujući radioaktivno obeležene analoge holina ([<11>C]holin, [18F]FECh, [18F] FMC, [18F]fluorodihidrotestosteron ([18F]FDHT), anti-1-amino-3-[18F]fluorociklobutil-1-karboksilnu kiselinu (anti[18F]F-FACBC, [11C]acetat i 1-(2-deoksi-2-[18F]flouro-Larabinofuranozil)-5-metiluracil (-[18F]FMAU) (Scher, B.; et al. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2007, 34, 45-53; Rinnab, L.; et al. BJU Int 2007, 100, 786,793; Reske, S.N.; et al. J Nucl Med 2006, 47, 1249-1254; Zophel, K.; Kotzerke, J. Eur J Nucl Med Mol Imaging 2004, 31, 756-759; Vees, H.; et al. BJU Int 2007, 99, 1415-1420; Larson, S. M.; et al. J Nucl Med 2004, 45, 366-373; Schuster, D.M.; et al. J Nucl Med 2007, 48, 56-63; Tehrani, O.S.; et al. J Nucl Med 2007, 48, 1436-1441). Svako od njih funkcioniše preko različitog mehanizma i ima određene prednosti, npr., nisku urinarnu ekskreciju za [11C]holin, i nedostatke, kao što je kratak fizički polu-život pozitron-emitujućih radionuklida.

[0004] Dobro je poznato da tumori mogu da eksprimiraju jedinstvene proteine povezane sa njihovim malignim fenotipom ili mogu prekomerno da eksprimiraju normalne gradivne proteine u većem broju od normalnih ćelija. Ekspresija posebnih proteina na površini tumorskih ćelija nudi mogućnost dijagnostikovanja i karakterizacije bolesti ispitivanjem fenotipske identičnosti i biohemijskog sastava i aktivnosti tumora. Radioaktivni molekuli koji se selektivno vezuju za specifične proteine na površini tumorskih ćelija daju privlačan put za vizuelizaciju i lečenje tumora pod ne-invazivnim uslovima. Obećavajuća nova serija sredstava za vizuelizaciju niske molekulske težine ciljno deluju na specifičan membranski protein prostate (PSMA) (Mease R.C. et al. Clin Cancer Res. 2008, 14, 3036-3043; Foss, C.A.; et al. Clin Cancer Res 2005, 11, 4022-4028; Pomper, M.G.; et al. Mol Imaging 2002, 1, 96-101; Zhou, J.; etr al. Nat Rev Drug Discov 2005, 4, 1015-1026; WO 2013/022797).

[0005] PSMA je trans-membranski, glikoprotein od 750 aminokiselina tipa II koji ima obilnu i ograničenu ekspresiju na površini PCa, naročito kod androgen-nezavisne, uznapredovale i metastatske bolesti (Schulke, N.; et al. Proc Natl Acad Sci U S A 2003, 100, 12590-12595). Poslednje navedeni je važan s obzirom na to da svi PCa postaju androgen-nezavisni tokom vremena. PSMA poseduje kriterijume obećavajućeg ciljnog mesta za terapiju, tj., obilna i ograničena (na prostatu) ekspresija na svim stadijumima bolesti, prikaz na ćelijskoj površini, ali ne ulazi u cirkulaciju i vezu sa enzimatskom ili signalnom aktivnošću (Schulke, N.; et al. Proc. Natl. Acad. Sci. U S A 2003, 100, 12590-12595). PSMA gen je lociran na kratkoj grani hromozoma 11 i funkcioniše kao folat hidrolaza i neuropeptidaza. On ima funkciju neuropeptidaze koja je ekvivalntna glutamat karboksipeptidazi II (GCPII), koja je označena kao "moždani PSMA", i može da modulira glutamatergički prenos cepanjem N-acetilaspartilglutamata (NAAG) u N-acetilaspartat (NAA) i glutamat (Nan, F.; et al. J Med Chem 2000, 43, 772-774). Do 106 PSMA molekula ima po ćeliji kancera, što dalje sugeriše da je to idealno ciljno mesto za vizuelizaciju i terapiju sa tehnikama na bazi radionuklida (Tasch, J.; et al. Crit Rev Immunol 2001, 21, 249-261).

[0006] Radio-imunokonjugat anti-PSMA monoklonskog antitela (mAb) 7E11, poznat kao PROSTASCINT® sken, se trenutno koristi za dijagnostikovanje metastaze i ponovne pojave kancera prostate. Međutim, ovo sredstvo ima tendenciju da proizvodi slike koje se teško tumače (Lange, P.H. PROSTASCINT scan for staging prostate cancer. Urology 2001, 57, 402-406; Haseman, M.K.; et al. Cancer Biother Radiopharm 2000, 15, 131-140; Rosenthal, S.A.; et al. Tech Urol 2001, 7, 27-37). Skorije, razvijena su monoklonska antitela koja se vezuju za ekstracelularni domen PSMA i radioaktivno su obeležena i pokazano je da se akumuliraju u PSMA-pozitivnim modelima tumora prostate kod životinja. Međutim, dijagnoza i detekcija tumora koje koriste monoklonska antitela ograničeni su niskom permeabilnošću monoklonskog antitela u solidnim tumorima.

[0007] Selektivno ciljno delovanje na ćelije kancera sa radiofarmaceutskim sredstvima za vizuelizaciju ili terapeutske svrhe predstavlja izazov. Različiti radionuklidi su poznati kao korisni za radio-vizuelizaciju ili radioterapiju kancera, uključujući<11>C,<18>F,<111>In,<90>Y,<68>Ga,<177>Lu,<99m>Tc, 123I i 131I. Nedavno je pokazano da neka jedinjenja koja sadrže glutamaturea-glutamat (GUG) ili glutamat-urea-lizin (GUL) element prepoznavanja vezan za radionuklid-ligand konjugat ispoljavaju visok afinitet za PSMA.

[0008] Nekoliko 18F-obeleženih jedinjenja koja pokazuju interakciju PSMA i koja su pogodna za detekciju kancera prostate su prikazana u EP 3011976 (EP prijava br. 14 003 570.0). Ova jedinjenja, međutim, pokazuju visoke lipofilne osobine koje ih čine, do određenog stepena, teškim za rukovanje i za primenu.

[0009] Potrebna su nova sredstva koja će omogućiti brzu vizuelizaciju kancera prostate. Na taj načinj, cilj predmetnog pronalaska je razviti ligande koji interaguju sa PSMA i nose odgovarajuće radionuklide koji obezbeđuju obećavajuću i novu opciju ciljnog delovanja za detekciju, lečenje i upravljanje kancerom prostate.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0010] Rešenje navedenog cilja je postignuto obezbeđivanjem primera izvošenja okarakterisanih u patentnim zahtevima.

[0011] Pronalazači su našli nova jedinjenja koja su korisna radiofarmaceutska sredstva i njihovu upotrebu u nuklearnoj medicini kao markera i sredstava za vizuelizaciju i za različita stanja bolesti kancera prostate.

[0012] Nova sredstva za vizuelizaciju sa strukturnim modifikacijama u linker regionu su poboljšala osobine ciljnog delovanja na tumor i farmakokinetiku. Farmakofor predstavlja tri karboksilne grupe sposobne da interaguju sa odgovarajućim bočnim lancima PSMA i kiseonikom kao delom kompleksa cinka u aktivnom centru. Pored ovih obaveznih interakcija, pronalazači su bili sposobni da optimizuju lipofilne interakcije u linker regionu u poređenju sa jedinjenjima opisanim u EP 30119763. Pored toga, pronalazači su dodali linkeru neke hidrofilne gradivne blokove za pojačanje farmakokinetike.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0013]

Sl. 1: 18F-Obeležavanje makromolekula

Sl. 2: 18F-Fluorinacija preko prostetičkih grupa

Sl. 3: 18F-Prostetičke grupe za peptide

Sl. 4: 18F-Obeležavanje prostetičkih grupa upotrebom "klik hemije"

Sl. 5: Formiranje [18F]ariltrifluoroboronata i fluorid senzora

Sl. 6: Kompleksi 18F-fluorida

Sl. 7: 18F-Obeležavanje RGD peptida

Sl. 8: Organska raspodela [18F]PSMA-1007 u PSMA-pozitivnim LNCaP miševima (normalni i blokirani) i u PSMA negativnim miševima naspram [<18>F]PSMA-1009 ([<18>F]DCFPyL) u PSMA pozitivnim LNCaP miševima

Sl. 9: Organska raspodela [18F]PSMA-1007 u PSMA-pozitivnim LNCaP miševima (neblokirani i blokirani) naspram [18F]PSMA1003 u PSMA pozitivnim LNCaP miševima (neblokirani) Sl. 10: MIP [18F]PSMA-1007 u PSMA-pozitivnom LNCaP mišu 120-140 min p.i.

Sl. 11: Kriva vremena-aktivnosti [18F]PSMA-1007 u PSMA-pozitivnom LNCaP mišu, uključujući SUV vrednosti 120-140 min p.i.

Sl. 12: Struktura PSMA-1003

Sl. 13: Struktura PSMA-1009

Sl.14: MIPs [18F]PSMA-1007 kod zdravog dobrovoljca

Sl.15: Krive vremena-aktivnosti u krvi (crno) i serumu (sivo) eksprimirane kao procenat injektirane doze kod zdravog dobrovoljca

Sl.16: Krive vremena-aktivnosti normalnih organa sa PET-ocrtanom zapreminom-od-interesa kod zdravog dobrovoljca

Sl. 17: Organska raspodela [18F]PSMA-1007 kod deset pacijenata koji pate od kancera prostate eksprimirana kao SUVmax

Sl. 18: Odnosi [18F]PSMA-1007 tumora-prema-pozadini kod deset pacijenata koji pate od kancera prostate izračunati iz odgovarajućih SUVmaxvrednosti

Sl. 19: MIP pacijenta sa kancerom prostate, starosti 77 godina (PSA 40 ng/ml) skeniran sa [18F]PSMA-1007 1 i 3 h p.i. koji pokazuje veliku tumorsku masu u srednjoj i vršnoj oblasti prostate i nekoliko metastaza na limfnim čvorovima. Izvan karličnog regiona nisu nađene metastaze

Sl. 20: MIP pacijenta starosti 72 godine (PSA 15 ng/ml) kome je postavljena dijagnoza Gleason 9 (5+4) kancera prostate skeniranog sa [18F]PSMA-10071 i 3 h p.i.. Pacijent prezentuje veliku tumorsku masu u celoj prostatičnoj žlezdi sa infiltracijom u levim seminalnim vezikulama i nekoliko limfnih čvorova u karličnom regionu. Dva metastatska limfna čvora su locirana izvan karličnog regiona, oba paraaortalna na nivou L3/4 i L5.

Sl. 21: Transaksijalni PET/CT-sken pacijenta (a,b) i odgovarajuća histopatalogija kasnijeg uzorka prostatektomije; H&E bojenje (c); PSMA-imunološko bojenje sa istaknutim konturama tumora ograničenim isprekidanom linijom (d).

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0014] Predmetni pronalazak se odnosi na radiofarmaceutska sredstva i njihovu upotrebu u nuklearnoj medicini kao markera i sredstava za vizuelizaciju za različita stanja bolesti kancera prostate.

[0015] Na taj način, predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja koja su predstavljena opštom formulom I

sa:

[0016] Ako nije navedeno drugačije, u predmetnom pronalasku termin "alkil" sam po sebi ili kao deo drugog molekula, označava pravi ili granati lanac, ili ciklični ugljovodonični radikal, ili njihovu kombinaciju, koji mogu biti potpuno zasićeni, mono ili polinezasićeni i mogu da obuhvataju di- i multivalentne radikale. "Alkil" ostatak je poželjno C1do C10i može biti nesupstituisan ili supstituisan (npr. sa halogenom). Poželjni alkil ostaci su metil, etil, n-propil, izo-propil, n-butil, terc-butil, n-pentil, n-heksil, n-heptil ili n-oktil ili slično. Isto važi za odgovarajuća cikloalkil jedinjenja koja imaju poželjno 3 do 10 atoma ugljenika, npr. ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, itd. Nezasićena alkil grupa je ona koja ima jednu ili više dvogubih ili trogubih veza. Primeri nezasićenih alkil grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, vinil, 2-propenil, krotil, 2-izopentenil, 2-(butadienil), 2,4- pentadienil, 3-(1,4-pentadienil), etinil, 1- i 3-propinil, 3-butinil i viši homolozi i izomeri. Termin "alkil," osim ukoliko nije drugačije naznačeno, je takođe određen tako da obuhvata one derivate alkila, kao što su "heteroalkil", "haloalkil" i "homoalkil".

[0017] Termin "aril", kao što je ovde korišćen, označava zatvorenu strukturu prstena koja ima najmanje jedan prsten koji ima konjugovan pi sistem elektrona i obuhvata karbociklični aril i heterociklični aril (ili "heteroaril" ili "heteroaromatične") grupe. Karbociklična ili heterociklična aromatična grupa može da sadrži od 5 do 20 atoma u prstenu. Ovaj termin obuhvata monociklične prstenove vezane kovalentno ili sa fuzionisanim prstenom policiklične (tj., prstenove koji dele susedne parove atoma ugljenika) grupe. Aromatična grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana. Neograničavajući primeri "aromatičnih" ili "aril", grupa obuhvataju fenil, 1-naftil, 2-naftil, 2-bifenil, 3-bifenil, 4-bifenil, antracenil i fenantracenil. Supstituenti za svaki od gore navedenih aril i heteroaril sistema prstenova su izabrani iz grupe prihvatljivih supstituenata (npr. alkil, karbonil, karboksil ili halogen) koji su opisani ovde. Termin "aril" kada se koristi u kombinaciji sa drugim terminima (uključujući, ali bez ograničenja na, ariloksi, ariltioksi, aralkil) obuhvata aril i heteroaril prstenove. Na taj način, termin "aralkil" ili "alkaril" označava da obuhvata one radikale u kojima je aril grupa vezana za alkil grupu (uključujući, ali bez ograničenja na, benzil, fenetil, piridilmetil i slično) uključujući one alkil grupe u kojima je atom ugljenika (uključujući, ali bez ograničenja na, metilen grupu) zamenjen heteroatomom, samo radi primera, atomom kiseonika. Primeri takvih aril grupa obuhvataju, ali bez ograničenja na, fenoksimetil, 2-piridiloksimetil, 3-(1-naftiloksi)propil i slično.

[0018] "Heteroaril" označava aril grupe koje sadrže najmanje jedan heteroatom izabran od N, O i S; gde atomi azota i sumpora mogu biti izborno oksidovani, i atom(i) azota mogu biti izborno kvaternizovani. Heteroaril grupe mogu biti supstituisane ili nesupstituisane. Heteroaril grupa može biti vezana za ostatak molekula preko heteroatoma. Neograničavajući primeri pogodnih grupa obuhvataju 1-pirolil, 2-pirolil, 3-pirolil, 3-pirazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, pirazinil, 2-oksazolil, 4-oksazolil, 2-fenil-4-oksazolil, 5-oksazolil, 3-izoksazolil, 4-izoksazolil, 5-izoksazolil, 2-tiazolil, 4-tiazolil, 5-tiazolil, 2-furil, 3-furil, 2-tienil, 3-tienil, 2-piridil, 3-piridil, 4-piridil, 2-pirimidil, 4-pirimidil, 4-benzotiazolil, 5-benzotiazolil, 6-benzotiazolil, 7-benzotiazolil, purinil, 2benzimidazolil, 4-indolil, 5-indolil, 6-indolil, 7-indolil, 1-izohinolil, 5-izohinolil, 2-hinoksalinil, 5-hinoksalinil, 2-hinolil, 3-hinolil, 4- hinolil, 5- hinolil, 6-hinolil, 7- hinolil ili 8-hinolil.

[0019] Termin "aminokiselina" označava prirodne aminokiseline i aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi, kao i aminokiselinske analoge i aminokiselinske mimetike koji funkcionišu na način sličan prirodnim aminokiselinama. Prirodne aminokiseline su 20 uobičajenih aminokiselina u njihovom D- ili L-obliku (alanin, arginin, asparagin, asparaginska kiselina, cistein, glutamin, glutaminska kiselina, glicin, histidin, izoleucin, leucin, lizin, metionin, fenilalanin, prolin, serin, treonin, triptofan, tirozin i valin) i pirolizin i selenocistein. Aminokiselinski analozi označavaju jedinjenja koja imaju istu osnovnu hemijsku strukturu kao prirodna aminokiselina, samo radi primera, ugljenik koji je vezan za vodonik, karboksil grupu, amino grupu i R grupu. Takvi analozi mogu imati modifikovane R grupe (radi primera, norleucin) ili mogu imati modifikovane peptidne osnovne lance, uz istovremeno zadržavanje iste osnovne hemijske strukture kao prirodna aminokiselina. Neograničavajući primeri aminokiselinskih analoga obuhvataju homoserin, norleucin, metionin sulfoksid, metionin metil sulfonijum. Aminokiseline mogu biti označene ovde njihovim nazivom, njihovim opštepoznatim simbolima od tri slova ili simbolima od jednog slova preporučenim od strane IUPAC-IUB Biochemical Nomenclature Commission. „Aminokiselina koja se ne nalazi u prirodi" označava aminokiselinu koja nije jedna od 20 uobičajenih aminokiselina ili pirolizin ili selenocistein. Ostali termini koji mogu biti korišćeni kao sinonimi termina „aminokiselina koja se ne nalazi uprirodi" su „neprirodno kodirana aminokiselina," „neprirodna aminokiselina," „aminokiselina koja se ne nalazi u prirodi" ili „veštačka aminokiselina“. Termin „aminokiselina koja se ne nalazi u prirodi" obuhvata, ali bez ograničenja na, aminokiseline koje se javljaju modifikacijom prirodno kodirane aminokiseline u njihovom osnovnom lancu ili bočnim lancima. U nekim primerima izvođenja aminokiselina koja se ne nalazi u prirodi sadrži karbonil grupu, acetil grupu, aminooksi grupu, hidrazin grupu, hidrazid grupu, semikarbazid grupu, azid grupu ili alkin grupu. U poželjnom primeru izvođenja aminokiselina koja se ne nalazi u prirodi ima formulu

i R’= H, CO2H, CH2CO2H, C2H4CO2H, CH(CO2H)2, CH(CH2CO2H)2, CH(CO2H)(CH2CO2H), CH2CH(CO2H)2, SO3H;

o=1-3; R = H, CH3

[0020] Poželjne su one aminokiseline koje donose hidrofilni element u jedinjenje formule I.

[0021] Neki od ostataka koji su ovde navedeni (uključujući, ali bez ograničenja na aminokiseline koje se ne nalaze u prirodi), mogu da postoje u nekoliko tautomernih oblika. Svi takvi tautomerni oblici smatraju se delom jedinjenja koja su ovde opisana. Takođe, na primer svi enol-keto oblici bilo kojih jedinjenja koja su ovde navedena smatraju se delom kompozicija koje su ovde opisane.

[0022] Linker B, tj. prirodne aminokiseline i/ili aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi, mogu biti vezane unutar molekula preko peptidne ili amidne veze. U slučaju kiselih aminokiselina (npr. glutaminska kiselina, asparaginska kiselina) međutim, vezivanje može alternativo biti preko α-, β ili γ-položaja.

[0023] Iako je poželjno da je Z-grupa jednaka -CO2H, ona može biti lako zamenjena biosternim zamenama kao što su -SO2H, -SO3H, -SO4H, -PO2H, -PO3H, -PO4H2, videti npr. "The Practice of Medicinal Chemistry" (Academic Press New York, 1996), page 203.

[0024] Unutar značenja pronalaska, svi ostaci se smatraju takvim da se mogu kombinovati osim ukoliko nije navedeno drugačije u definiciji ostataka. Sve njihove podgrupe koje se mogu zamisliti smatraju se otkrivenim.

[0025] 18F-markeri gore navedene Tabele koji sadrže triazole postoje u dva izomerna oblika koji pripadaju pronalasku i ilustrovani su dati formulama.

[0026] Na taj način, poželjni molekuli predmetnog pronalaska se sastoje od tri glavne komponente (Šema 1): hidrofilnog PSMA vezujućeg motiva (Glu-Urea-Lys = Glu-NH-CO-NH-Lys), dva varijabilna linkera (Linker A i Linker B) i 18F-markera.

Šema 1: Struktura poželjnih jedinjenja predmetnog pronalaska

[0027] Neki poželjni lipofilni linkeri (linker A) su prikazani u daljem tekstu, gde R = Glu-urea-Lys (PSMA vezujući motiv) i R’= (Linker B)m- C8F-marker] sa m=1-5,

(u obliku bilo koje farmaceutski prihvatljive soli)

(2NaI)-(AcAMP)

Različiti poželjni gradivni blokovi za hidrofilne linkere (linker B) su prikazani u daljem tekstu sa njihovom poželjnom povezanošću ilustrovanom na osnovu odgovarajućih pojedinačnih aminokiselina (m = 1 u generičkoj strukturi)

[0028] Poželjni hidrofilni linkeri takođe mogu biti formirani od dva ili više gradivnih blokova (m= 2 - 5 u generičkoj formuli), poželjno izabrani od kiselih gradivnih blokova navedenih u prethodnom tekstu. Poželjna su 1-3 gradivna bloka.

[0029] Određeni broj poželjnih struktura je naveden u donjoj tabeli:

[0030] Strukture poželjnih jedinjenja 1-18 kao što su ilustrovane u gornjoj tabeli prikazane su u daljem tekstu:

[0031] Kao što može razumeti stručnjak iz date oblasti tehnike, gore navedena poželjna jedinjenja 1-18 nisu ograničena na<18>F-markere kao što je pokazano, već se<18>F-markeri lako mogu međusobno menjati standardnim tehnikama i bilo koji od<18>F-markera ilustrovanih u vezi sa formulom I mogu biti korišćeni umesto toga.

[0032] Pronalazak se takođe odnosi na prekursore ili farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja opšte formule I. Pronalazak se takođe odnosi na solvate jedinjenja, uključujući soli kao i njihove aktivne metabolite i, gde je odgovarajuće, njihove tautomere prema opštoj formuli I uključujući formulacije proleka.

[0033] "Farmaceutski prihvatljiva so" je farmaceutski prihvatljiva, organska ili neorganska kisela ili bazna so jedinjenja prema pronalasku. Reprezentativne farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju, npr., soli alkalnih metala, soli zemnoalkalnih metala, amonijum soli, soli koje su rastvorljive u vodi i soli koje su nerastvorljive u vodi, kao što su acetat, karbonat, hlorid, glukonat, glutamat, laktat, laurat, malat ili tartrat.

[0034] Termin "prolek" označava prekursor leka koji je jedinjenje koje posle primene na pacijenta, mora da prođe kroz konverziju putem metaboličkih procesa pre nego što postane aktivno farmakološko sredstvo. Prolekovi su generalno prekursori leka koji, posle primene na subjekta i kasnije apsorpcije, su prevedeni u aktivne, ili aktivnije vrste preko nekih postupaka, kao što je konverzija preko metaboličkog puta. Neki prolekovi imaju hemijsku grupu prisutnu na proleku koja ih čini manje aktivnim i/ili pruža rastvorljivost ili neku drugu osobinu leku. Pošto je hemijska grupa odcepljena i/ili modifikovana iz proleka generisan je aktivni lek. Prolekovi su prevedeni u aktivni lek unutar tela preko enzimatskih ili ne-enzimatskih reakcija. Prolekovi mogu da obezbede poboljšane fizičkohemijske osobine kao što su bolja rastvorljivost, pojačane karakteristike isporuke, kao što je specifično ciljno delovanje na određenu ćeliju, tkivo, organ ili ligand, i poboljšana terapeutska vrednost leka. Ilustrativni prolekovi jedinjenja u skladu sa opštom formulom I su estri i amidi, poželjno alkil estri estara masnih kiselina. Formulacije proleka ovde sadrže sve supstance koje su formirane jednostavnom formulacijom uključujući hidrolizu, oksidaciju ili redukciju enzimatski, metaboličk iili na bilo koji drugi način. Pogodan prolek sadrži npr. supstancu opšte formule I vezanu preko linkera koji se može enzimatski odcepiti (npr. karbamat, fosfat, N-glikozid ili disulfid grupa) do supstance koja poboljšava rastvaranje (npr. tetraetilen glikol, saharidi, mravlje kiseline ili glukuronska kiselina, itd.). Takav prolek jedinjenja prema pronalasku može biti primenjen na pacijenta, i ovaj prolek može biti transformisan u supstancu opšte formule I tako da sadrži željeni farmakološki efekat.

[0035] Neka jedinjenja opšte formule I su obuhvaćena u obliku racemata, njihovih enenatiomera i izborno u obliku njihovih diastereomera i svih mogućih njihovih smeša.

[0036] Prema pronalasku svi hralni C-atomi će imati D- i/ili L-konfiguraciju; takođe kombinacije unutar jednog jedinjenja će biti moguće, tj. neki od hiralnih C-atoma mogu biti D- i drugi mogu biti L-konfiguracije.

[0037] Dobijena jedinjenja mogu biti izborno odvojena pomoću poznatih postupaka (npr. Allinger, N.L. und Elliel E.L. u "Topics in Stereochemistry" Vol.6, Wiley Interscience, 1971) u njihovim enantiomerima i/ili diastereomerima. Jedan mogući postupak enantiomernog odvajanja je upotreba hromatografije.

[0038] Pronalazak obuhvata takođe prekursore jedinjenja opšte formule I. Termin "prekursor" označava bilo koje jedinjenje koje može biti korišćeno za proizvodnju jedinjenja formule I. Primer prekursora može biti jedinjenje koje nema<18>F-marker koji je dodat u kasnijem stadijumu da bi se obezbedilo kompletno jedinjenje.

[0039] Pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske preparate koji sadrže dijagnostički ili terapeutski efikasnu količinu aktivnih sastojaka (jedinjenje prema pronalasku formule I) zajedno sa organskim ili neorganskim čvrstim ili tečnim, farmaceutski prihvatljivim nosačima koji su pogodni za nameravanu primenu i koji interaguju sa aktivnim sastojcima bez nedostataka.

[0040] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" je ovde korišćen za označavanje onih jedinjenja, materijala, kompozicija i/ili oblika doze koji su, unutar obima racionalnog medicinskog mišljenja, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima pacijenta bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugog problema ili komplikacije, u skladu sa razumnim odnosom koristi/rizika.

[0041] "Pacijent" obuhvata životinju, kao što je čovek, majmun, krava, konj, mačka ili pas. Životinja može biti sisar kao što je ne-primat i primat (npr., majmun i čovek). U jednom primeru izvođenja, pacijent je čovek.

[0042] Uopšteno, jedinjenje formule I ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, mogu se primenjivati oralno ili preko parenteralnog puta, obično injekcijom ili infuzijom.

[0043] "Parenteralni put primene" označava režime primene osim enteralne i topikalne primene, obično preko injekcije, i obuhvata, bez ograničenja, intravensku, intramuskularnu, intraarterijsku, intratekalnu, intrakapsularnu, intraorbitalnu, intrakardijačnu, intradermalnu, intraperitonealnu, transtrahealnu, subkutanu, subkutikularnu, intraartikularnu, subkapsularnu, subarahnoidnu, intraspinalnu i intrasternalnu injekciju i infuziju.

[0044] Doza jedinjenja prema pronalasku je određena od strane lekara na osnovu specifičnih parametara pacijenta, kao što su starost, telesna težina, pol, težina bolesti, itd. U skladu sa vrstom primene, lek je pogodno formulisan, npr. u obliku rastvora ili suspenzija, jednostavnih tableta ili dražeja, tvrdih ili mekanih želatinskih kapsula, supozitorija, ovula, preparata za injekciju, koji su pripremljeni prema uobičajenim galenskim postupcima.

[0045] Jedinjenja prema pronalasku mogu biti formulisana, gde je odgovarajuće, zajedno sa dodatnim aktivnim supstancama i sa ekscipijensima i nosačima uobičajenim u farmaceutskim kompozicijama, npr. – u zavisnosti od preparata koji se proizvodi - talk, guma arabika, laktoza, skrob, magnezijum stearat, kakao puter, vodeni i nevodeni nosači, masna tela životinjskog ili biljnog porekla, derivati parafina, glikoli (naročito polietilen glikol), različiti plastifikatori, disperzanti ili emulgatori, farmaceutski kompatibilni gasovi (npr. vazduh, kiseonik, ugljen dioksid, itd.), konzervansi.

[0046] U cilju proizvodnje tečnih preparata, mogu se koristiti aditivi, kao što su rastvor natrijum hlorida, etanol, sorbitol, glicerin, maslinovo ulje, bademovo ulje, propilen glikol ili etilen glikol.

[0047] Kada su korišćeni rastvori za infuziju ili injekciju, oni su poželjno vodeni rastvori ili suspenzije, pri čemu je moguće da se oni proizvode pre upotrebe, npr. iz liofilizovanih preparata koji sadrže aktivnu supstancu kao takvu ili zajedno sa nosačem, kao što su manitol, laktoza, glukoza, albumin i slično. Gotovi rastvori su sterilizovani i, gde je odgovarajuće, mešani sa ekscipijensima, npr. sa konzervansima, stabilizatorima, emulgatorima, solubilizatorima, puferima i/ili solima za regulaciju osmotskog pritiska. Sterilizacija se može dobiti sterilnom filtracijom upotrebom filtera koji imaju malu veličinu pora prema kojoj kompozicija može biti liofilizovana, gde je to odgovarajuće. Male količine antibiotika takođe mogu biti dodate da bi se osiguralo održavanje steriliteta.

[0048] Izrazi "efikasna količina" ili "terapeutski-efikasna količina" kao što su ovde korišćeni označava onu količinu jedinjenja, materijala ili kompozicije koja sadrži jedinjenje prema pronalasku, ili drugog aktivnog sastojka koja je efikasna za proizvodnju izvesnog željenog terapeutskog efekta u najmanje pod-populaciji ćelija u životinji na razumnom odnosu koristi/rizika primenljivom na bilo koji medicinski tretman. Terapeutski efikasna količina u odnosu na jedinjenje prema pronalasku označava onu količinu samog terapeutskog sredstva, ili u kombinaciji sa drugim terapijama, koji obezbeđuje terapeutsku korist u lečenju ili prevenciji bolesti. Ovaj termin korišćen zajedno sa jedinjenjem prema pronalasku, može da obuhvata količinu koja poboljšava celokupnu terapiju, smanjuje ili izbegava simptome ili uzroke bolesti, ili pojačava terapeutsku efikasnost ili sinergije sa drugim terapeutskim sredstvom.

[0049] Kao što su ovde korišćeni, termini "lečenje" ili "tretman" određeni su tako da obuhvataju takođe dijagnozu, profilaksu, prevenciju, terapiju i lečenje.

[0050] Termini "sprečiti", "sprečavanje," i "prevencija" označavaju prevenciju početka, ponovne pojave ili širenja bolesti kod pacijenta koja je rezultat primene profilaktičkog ili terapeutskog sredstva.

[0051] Kao što je navedeno u prethodnom tekstu, jedinjenja prema opštoj formuli I su pogodna za upotrebu kao radio-vizuelizujuća sredstva ili terapeutici za tretman brzo proliferišućih ćelija, na primer, ćelija kancera prostate koje eksprimiraju PSMA. Prema predmetnom pronalasku ona su označena kao "radio-farmaceutska sredstva".

[0052] Poželjni postupci vizuelizacije su pozitron emisiona tomografija (PET) ili emisiona kompjuterska tomografija jednog fotona (SPECT).

[0053] Prema tome, u jednom primeru izvođenja, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja uključuje jedinjenje formule I, njegovu so, solvat, stereoizomer ili tautomer, i farmaceutski prihvatljiv nosač. Prema tome, obezbeđena je farmaceutska kompozicija, koja je pogodna za in vivo vizuelizaciju i radioterapiju. Pogodne farmaceutske kompozicije mogu da sadrže jedinjenje formule I u količini koja je dovoljna za vizuelizaciju, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim radiološkim vehikulumom. Radiološki vehikulum bi trebalo da je pogodan za injekciju ili aspiraciju, kao što je humani serum albumin; vodeni puferski rastvori, npr., tris(hidrometil) aminometan (i njegove soli), fosfat, citrat, bikarbonat, itd.; sterilni fiziološki rastvor; i ravnotežni jonski rastvori koji sadrže hloridne i/ili dikarbonatne soli ili katjone normalne krvne plazme kao što su kalcijum, kalijum, natrijum i magnezijum.

[0054] Koncentracija sredstva za vizuelizaciju ili terapeutskog sredstva u radiološkom vehikulumu trebalo bi da je dovoljna da obezbedi zadovoljavajuću vizuelizaciju. Na primer, kada se koristi vodeni rastvor, doza je oko 1.0 do 100 milikirija. Stvarna doza primenjena na pacijenta za vizuelizaciju ili terapeutske svrhe, međutim, je određena od strane lekara koji primenjuje tretman. Sredstvo za vizuelizaciju ili terapeutsko sredstvo bi trebalo da se primenjuje tako da se održava u pacijentu oko 1 časa do 10 dana, iako su prihvatljivi kako duži tako i kraći vremenski periodi. Prema tome, mogu biti pripremljene pogodne ampule/bočice koje sadrže 1 do 10 mL vodenog rastvora.

[0055] Vizuelizacija se može izvesti na normalan način, na primer injektiranjem dovoljne količine kompozicije za vizuelizaciju da bi se obezbedila adekvatna vizuelizacija i zatim skeniranje sa pogodnom mašinom za vizuelizaciju ili skeniranje, kao što je tomograf ili gama kamera. U određenim primerima izvođenja, postupak za vizualizaciju regiona u pacijentu obuhvata korake: (i) primene na pacijenta dijagnostički efikasne količine jedinjenja obeleženog radionuklidom; izlaganje regiona pacijenta uređaju za skeniranje; i (ii) dobijanja slike regiona pacijenta.

[0056] Količina jedinjenja prema predmetnom pronalasku, ili njegove soli, solvata, stereoizomera ili tautomera koja je primenjena na pacijenta zavisi od nekoliko fizioloških faktora koje rutinski koriste lekari, uključujući prirodu vizuelizacije koja se izvodi, tkivo na koje se ciljno deluje za vizualizaciju ili terapiju i telesnu težinu i medicinsku istoriju pacijenta čija se vizuelizacija vrši ili koji se leči upotrebom radiofarmaceutskog sredstva.

[0057] Specifično, ćelijska proliferativna bolest ili poremećaj koji se leči ili koji se vizualizuje upotrebom jedinjenja, farmaceutske kompozicije ili radiofarmaceutskog sredstva u skladu sa ovim pronalaskom je kancer, na primer, kancer prostate i/ili metastaza kancera prostate u npr. plućima, jetri, bubregu, kostima, mozgu, kičmenoj moždini, bešiki, itd.

[0058] Sinteza jedinjenja predmetnog pronalaska je izvedena prema postupcima koji su dobro poznati u stanju tehnike (npr. Hugenberg et al., J. Med. Chem. 2013, 56, pp. 6858-6870). Opšti postupci za 18F-obeležavanje različitih makromolekula su prikazani na Sl. 1-7. Pored toga, pozivamo se na Schubiger et al., PET Chemistry: The Driving Force in Molecular Imaging, Ernst Schering Research Foundation, Workshop 62, Springer Verlag, ISSN 0947-6075; Ross et al., Current Radiopharmaceuticals, 2010, 3, 202-223; Kühnast et al., Current Radiopharm 3, 2010, 174; Bernard-Gauthier et al., BioMed Research International, 2014, 1; Maschauer and Prante, BioMed Research International, 2014, 1; Olberg et al., J. Med. Chem., 2010, 53, 1732; Rostovtsev et al., Angew. Chem., 2002, 114, 2708; Smith and Greaney, Org. Lett., 2013, 15, 4826. Na taj način, stručnjak iz date oblasti tehnike bi bio sposoban da izabere ispravno<18>F-obeležavanje u zavisnosti od početnog molekula. Sinteza specifičnih linker molekula je prikazana u EP 13004991 na koji se pozivamo.

[0059] Sintetisana jedinjenja su hemijski okarakterisana pomoću RP-HPLC, MS i/ili NMR.

[0060] Nova 18F-obeležena sredstva za vizuelizaciju sa strukturnim modifikacijama u linker regionu poboljšala su osobine ciljnog delovanja i farmakokinetiku. Farmakofora prikazuje tri karbociklične grupe sposobne da interaguju sa odgovarajućim bočnim lancima PSMA i kiseonikom kao delom kompleksa cinka u aktivnom centru. Pored ovih obaveznih interakcija, pronalazači su bili sposobni da optimizuju lipofilne interakcije u linker regionu u poređenju sa jedinjenjima kao što su opisana u EP 3011976. Dodatni hidrofilni gradivni blokovi su dodati linkeru jedinjenja prema predmetnom pronalasku (linker B), što dovodi do sledećeg pojačanja farmakokinetike. Ta jedinjenja su procenjivana u in vitro analizama (afinitet, internalizacija) i in vivo eksperimenti (mPET skrining i organska raspodela).

[0061] Četiri poželjna jedinjenja sa naročito obećavajućim rezultatima su<18>F-PSMA1007,<18>F-PSMA1011, 18F-PSMA 1012 i 18F-PSMA 1015:

[0062] Sva jedinjenja su obeležena sa fluorom-18 preko TFP estra 2-[<18>F]fluoronikotinske kiseline u dobrim radiohemijskim prinosima. Tabela A prikazuje da je afinitet vezivanja inhibitora PSMA koji su do sada pripremljeni esencijalno isti i u tipičnom opsegu. Pored toga, sva jedinjenja su specifično internalizovana na 37°C sa visokim ćelijskim unosom i vrednostima internalizacije (Tabela B). Na taj način, ispitivana jedinjenja ispoljavaju optimalne in vitro karakteristike za PET vizuelizaciju sa visokim kontrastom.

[0063] Jedinjenja predmetnog pronalaska su ispitivana u studijama organske raspodele kod miševa koji nose LNCaP tumor (PSMA pozitivni) sa i bez blokade PMPA. Rezultati koji su dobijeni ilustrativno sa PSMA1007 (ovo ne znači da je pronalazak ograničen ni na koji način samo na ovo specifično jedinjenje) su rezimirani na slikama 8 i 9. Tumorski unos je oko 8.0±2.4 % ID/g. S obzirom na to da kvantitativno blokiranje vezivanja nije zabeleženo u eksperimentu blokiranja, eksperiment organske raspodele je ponovljen sa miševima koji nose PC3-tumor (PSMA negativni; Rezultati prikazani na Slici 8). Ovde, praktično da nije zabeležen tumorski unos. Na taj način, tumorski unos se smatra specifičnim. Pored toga, u poređenju sa organskom raspodelom zabeleženom sa kontrolnim jedinjenjem PSMA-1003 koje je opisano u EP 14003 570.0 i prikazano je na Sl. 12, novo jedinjenje PSMA-1007 je pokazalo značajno smanjen unos u neciljnom tkivu kao što je jetra i tanko crevo. Na taj način, PSMA-1007 je dalje procenjivan u microPET eksperimentu. Rezultati su prikazani na slikama 10 i 11. LNCaP tumor je jasno vizuelizovan u ovom eksperimentu (SUVmax= 3.1 na 120-140 min p.i.). Neželjeni unos u žučnu kesu može biti indikator za metabolite. Ukupno, nova klasa fluorom-18 obeleženih inhibitora PSMA pokazala je veliki potencijal kao mogući trejser za detekciju kancera prostate i njegove metastaze.

[0064] Primenom [18F]PSMA-1007 na zdravog dobrovoljca dobijeno je nekoliko važnih uvida. Prvo, efikasna doza PET/CT skena sa 200-250 MBq je sa 4.3 - 5.4 mSv (2.15 mSv/MBq; sl.14). više od 95 % aktivnosti pula krvi je nađeno u serumu (bez ili sa zanemarljivom infiltracijom crvenih krvih zrnaca) i više od 90 % klirensa iz pula krvi unutar prvih 3 h posle injekcije. Do sada, ti rezultati se mogu uporediti sa drugim važnim PSMA-trejserima. Međutim, u poređenju sa drugim poznatim PSMA-trejserima, jedinjenja prema predmetnom pronalasku, naročito [18F]PSMA-1007, obezbeđuju veoma jedinstveni hepatobilijarni klirens sa veoma malim klirensom preko renalnog puta. Ovaj izvanredan nizak urinarni klirens omogućava odličnu procenu dna prostate. Na taj način, trejseri prema predmetnom pronalasku su perfektno pogodni za primarni dijagnozu kancera prostate i lokalne ponovne pojave.

[0065] Ovo je dalje pokazano rezultatima prve studije na čoveku. Ovde su zabeleženi odlični odnosi tumora-prema-pozadini do 10 u primarnom tumoru bez bilo kakve interferencije od nagomilavanja trejsera u bešici. Pored toga, mogle bi se detektovati metastaze na limfnim čvorovima sa prečnikom do 1 mm, što je u opsegu rezolucije PET-skenova sa F-18. Korelacija sa uzorcima dobijenim pomoću analize karlične limfadenektomije otkrila je specifičnost od 95 %. Pored toga, uzorci dobijeni iz prostatektomije su analizirani pomoću histopatologije koja otkriva skoro perfektnu korelaciju sa slikama dobijenim pomoću PET. Ti rezultati jasno pokazuju izvodljivost vizuelizacije kancera prostate sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, naročito sa [18F]PSMA-1007.

[0066] Donji Primer objašnjava pronalazak detaljnije, ali se ne tumači tako da ograničava pronalazak ni na koji način samo na ilustrovane primere izvođenja.

Primeri

Primer 1: Sinteza prekursora i hladnih referentnih jedinjenja 18F-konjugovanih inhibitora

[0067] Izocijanat glutamil grupe je generisan in situ dodavanjem smeše od 3 mmol bis(terc-butil) L-glutamat hidrohlorida i 1.5 mL N-etildiizopropilamina (DIPEA) u 200 mL suvog CH2Cl2u rastvor 1 mmol trifozgena u 10 mL suvog CH2Cl2na 0°C tokom 4 h. Posle mešanja reakcione smeše od 1 h na 25°C, dodato je 0.5 mmol smolom-imobilizovanog (2-hloro-tritilsmola) εaliloksikarbonil zaštićenog lizina u 4 mL DCM i reagovalo je 16 h uz nežno mešanje. Smola je otfiltrirana i aliloksi-zaštitna grupa je uklonjena upotrebom 30 mg tetrakis(trifenil)paladijuma(0) i 400 µL morfolina u 4 mL CH2Cl2u trajanju od 3 časa.

[0068] Sledeće kuplovanje "linker aminokiselina" (kao što je definisano u Formuli I i šemi 1 kao što je prikazano u prethodnom tekstu) je izvedeno postepeno upotrebom 2 mmol Fmoc-zaštićene kiseline, 1.96 mmol HBTU i 2 mmol N-etildiizopropilamina u finalnoj zapremini od 4 mL DMF.

[0069] Proizvod je odcepljen od smole u 2 mL smeše koja se sastoji od trifluorosirćetne kiseline, triizopropilsilana i vode (95:2.5:2.5). Prečišćavanje je izvedeno upotrebom RP-HPLC i prečišćeni proizvod je analiziran pomoću analitičke RP-HPLC i MALDI-MS.

[0070] Za pripremu neradioaktivnih referentnih jedinjenja 50 mg HBTU/DIPEA (0.98 i 1 ekv.) aktivirane 6-Fluoronikotinske-3-kiseline je kuplovano u finalnoj zapremini od 4 ml DMF i mešano 1 h na sobnoj temperaturi i proizvod je odcepljen od smole kao što je opisano u prethodnom tekstu.

[0071] U nekim pripremama grupe reaktivne za 18F-obeleživač (npr. pent-4-inska kiselina ili (Boc-aminooksi)sirćetna kiselina) su vezane za terminalnu amino-grupu za kasnije<18>F obeležavanje.

Primer 2: Proizvodnja i aktivacija [18F]fluorida

Priprema i aktivacija [18F]fluorida

[0072] Fluor-18 je proizveden zračenjem vode obogaćene sa<18>O sa 16.5 MeV protonima upotrebom 18O(p,n)18F nuklearne reakcije. Zračenja su izvedena sa Scanditronix MC32NI ciklotronom na odseku Radiofarmaceutske hemije (E030) na nemačkom centru za istraživanje kancera u Heidelberg-u.

[0073] Posle transfera zračene vode u automatizovani sistem (Trasis All In One 32) [<18>F]F- je odvojen od [18O]H2O propuštanjem kroz prethodno kondicionirani (5 ml 1M K2CO3i 10 ml vode) anjonsko-izmenjivački kertridž (Waters Accel™ Plus QMA Cartridge light) i zatim je eluiran sa smešom od 800 µl acetonitrila i 150 µl rastvora tetrabutilamonijum bikarbonata (320 mM u vodi). Smeša je isparavana do sušenja na temperaturi od 100°C pod atrujom azota. Ova destilacija je zatim ponovljena dva puta dodavanjem 1.8 ml acetonitrila za svaki korak. Posle primene maksimalnog postignutog vakuuma na ostatak u trajanju od 5 minuta na 100°C i kasnijeg hlađenja do 50°C suvi ostatak je rastvoren u 2 ml terc-butanola/acetonitrila (8:2) i korišćen za reakcije obeležavanja.

[0074] Alternativno, sistem je takođe korišćen sa klasičnim Kryptofix® 2.2.2 / K2CO3aktivacionim sistemom (20 mg 2.2.2 28 µl 1 M K2CO3) u acetonitrilu. Pored toga, rastvarač za rastvaranje aktiviranog [18F]F- je promenjen u suvi DMF, DMSO ili acetonitril za neke eksperimente.

Primer 3: Radiosinteza tetrafluorofenil estra 6-[18F]fluoronikotinske kiseline ([18F]FN-TFP)

[0075] U 10 mg N,N,N-Trimetil-5-((2,3,5,6-tetrafluorofenoksi)-karbonil)piridin-2-aminijum trifluorometansulfonata (pripremljen kao što je opisano od strane Olberg et al. J. Med. Chem., 2010, 53, 1732) dodat je 1 ml terc-butanola/acetonitrila (8:2) koji sadrži osušeni [<18>F]KF-Kryptofix 2.2.2 kompleks (0,1-10 GBq 18F) i smeša je zagrevana na 40° C. Posle 10 minuta smeša je razblažena sa 3 ml vode i proizvod je sipan na prekondicionirani Oasis MCX Plus Sep-Pak (Waters). Kertridž je ispran sa 10 mL vode i prečišćeni tetrafluorofenil estar 6-[18F]fluoronikotinske kiseline je eluiran nazad u reakcionu posudu upotrebom 2 mL vode/acetonitrila (7:13). Za postizanje više koncentracije aktivnosti u nekim slučajevima je izvedeno frakcionisano eluiranje. Prema tome napunjeni kertridž je ispran sa 500 µl rastvarača, koji je odbačen, i zatim je eluiran sa 400-800 µl rastvarača za dalje reakcije. Obično, više od 50 % početne aktivnosti je eluirano sa drugom frakcijom.

Primer 4: PSMA-1007

[0076] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1.

Radiosinteza [18F]PSMA-1007

[0077] 200 µl ([18F]FN-TFP) je dodato u 50 µl 2 mg / ml rastvora PSMA-1007-VL u DMSO. Zatim je dodato 50 µl pufera (0.2 M fosfatni pufer, pH 8.0) i smeša je zagrevana na 60°C u trajanju od 20 minuta. Proizvodi su odvojeni pomoću polu-preparativne radio-HPLC i identifikovani pomoću analitičke radio-HPLC i poređenja vremena zadržavanja sa oddgovarajućim neradioaktivnim referentnim jedinjenjima.

[0078] PSMA1007-VL (Prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu); (C43H53N7O15; 907,93g/mol) naročito (Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(L-Glu)-(L-Glu)

MS (MALDI): m/z = 908,7 [M H+]+

[0079] PSMA-1007

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu)-FN; C49H55FN8O16; (1031 g/mol) naročito (Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(L-Glu)-(L-Glu)-FN;

MS (MALDI): m/z = 1032,1 [M H+]+

[18F]PSMA-1007

[0080]

RCA: oko 6 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 12.5 min; Protok: 3 ml / min; kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 4.56 min (tdead: 0.56 min)

Primer 5: PSMA-1011

[0081] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1011 je izvedena kao što je opisano u primeru 4.

[0082] PSMA-1011-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanin)-(Glu)-(Glu); C35H46N8O14(774,78 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 775,3 [M H+]+

[0083] PSMA-1011:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanin)-(Glu)-(Glu)-FN; C41H48FN7O15(897,86 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 898.3 [M H+]+

[18F]PSMA-1011:

[0084]

RCA: oko 7 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 50 % A / 50 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 5.72 min (tdead: 0.56 min)

Primer 6: PSMA-1012

[0085] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1012 je izvedena kao što je opisano u primeru 4.

[0086] PSMA-1012-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanin)-(γGlu)-(Glu); C35H46N8O14(774,78 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 775,0 [M H+]+

[0087] PSMA-1012:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Naftilalanin)-(γGlu)-(Glu)-FN; C41H48FN7O15(897,86 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 897.9 [M H+]+

[0088] [18F]PSMA-1012:

RCA: oko 4 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 50 % A / 50 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 5.61 min (tdead: 0.56 min)

Primer 7: PSMA-1015

[0089] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1015 je izvedena kao što je opisano u primeru 4.

[0090] PSMA-1015-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu); C38H46N6O12(778.80 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 779.4 [M H+]+

[0091] PSMA-1015:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-FN; C44H48FN7O13 (901,89 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 902.5 [M H+]+

[0092] [18F]PSMA-1015:

RCA: oko 7 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 50 % A / 50 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 6.48 min (tdead: 0.56 min)

Primer 8: Sinteza suvog [18F]FN-TFP

[0093] Radiosinteza je izvedena kao što je opisano u primeru 3 do eluiranja [<18>F]FN-TFP iz kertridža. Posle ispiranja kertridža sa 10 ml vode (Primer 3) kertridž je osušen duvanjem 20 - 40 ml vazduha. Zatim je MCX kertridž povezan sa SepPak SodSulf kertridžom za sušenje i proizvod je eluiran sa 2 ml suvog acetonitrila. Za postizanje više koncentracije aktivnosti u nekim slučajevima je izvedeno frakcionisano eluiranje. Prema tome napunjeni MCX kertridž je ispran sa 500 µl rastvarača (posle sušenja kertridža duvanjem), koji je odbačen, i zatim je kertridž koji se suši povezan sa MCX kertridžom i proizvod je eluiran sa 0.8-1.2 ml acetonitrila za dalje reakcije. Obično više od 50 % početne aktivnosti je eluirano sa drugom frakcijom.

Primer 9: PSMA-1018

[0094] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1.

Radiosinteza [18F]PSMA-1018

[0095] 200 µl suvog [18F]FN-TFP (Primer 8) dodato je u 50 µl 4 mg / ml rastvora PSMA-1018-VL u DMSO. Zatim je dodato 10 µl DIPEA i smeša je zagrevana na 60 °C 20 minuta. Zatim je reakciona smeša zakišeljena dodavanjem 10 µl TFA, proizvodi su odvojeni pomoću polupreparativne radio-HPLC i identifikovani pomoću analitičke radio-HPLC i poređenja vremena zadržavanja sa odgovarajućim neradioaktivnim referentnim jedinjenjima.

[0096] PSMA-1018-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu)-(Glu); C48H60N8O18(1037.03 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 1037.6 [M H+]+

[0097] PSMA-1018:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Glu)-(Glu)-(Glu)-FN; C54H62FN9O19(1160.12 g/mol) MS (MALDI): m/z = 1160.8 [M H+]+

[0098] [18F]PSMA-1018:

RCA: oko 20 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 3.87 min (tdead: 0.56 min)

Primer 10: PSMA-1019

[0099] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1019 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0100] PSMA-1019-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Chx)-(Glu)-(Glu); C43H59N7O15(913.97 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 914.4 [M H+]+

[0101] PSMA-1019:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Chx)-(Glu)-(Glu)-FN; C49H61FN8O16(1037.05 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 1037.7 [M H+]+

[0102] [18F]PSMA-1019:

RCA: oko 47 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 12.5 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 4.43 min (tdead: 0.56 min)

Primer 11: PSMA-1020

[0103] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1020 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0104] PSMA-1020-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(γGlu)-(Glu)-(Glu); C40H53N7O17(903.89 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 904.9 [M H+]+

[0105] PSMA-1020:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(yGlu)-(Glu)-(Glu)-FN; C46H55FN8O18(1026.97 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 1027.9 [M H+]+

[0106] [18F]PSMA-1020:

RCA: oko 60 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 12.5 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 6.48 min (tdead: 0.56 min)

Primer 12: PSMA-1022

[0107] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1022 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0108] PSMA-1022-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(γGlu)-(γGlu); C35H46N8O14(774.78 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 775.4 [M H+]+

[0109] PSMA-1022:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(γGlu)-(γGlu)-FN; C41H48FN7O15(897.86 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 898.8 [M H+]+

[0110] [18F]PSMA-1022:

RCA: oko 29 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 3.92 min (tdead: 0.56 min)

Primer 13: PSMA-1023

[0111] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1023 je izvedena kao što je opisano u primeru 9

[0112] PSMA-1023-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(D-Glu); C43H53N7O15(907.93 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 907.8 [M H+]+

[0113] PSMA-1023:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(D-Glu)-FN; C49H55FN8O16(1031.00 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 1031.8 [M H+]+

[0114] [18F]PSMA-1023:

RCA: oko 24 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 50 % A / 50 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 3.87 min (tdead: 0.56 min)

Primer 14: PSMA-1024

[0115] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1024 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0116] PSMA-1024-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(Glu); C43H53N7O15(907.93 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 908.6 [M H+]+

[0117] PSMA-1024:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(D-Glu)-(Glu)-FN; C49H55FN8O16(1031.00 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 1031.5 [M H+]+

[0118] [18F]PSMA-1024:

RCA: oko 27 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 3.85 min (tdead: 0.56 min)

Primer 15: PSMA-1025

[0119] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1025 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0120] PSMA-1025-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Gla); C39H46N6O14(822.21 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 822.8 [M H+]+

[0121] PSMA-1025:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Gla)-FN; C49H55FN8O16(945.32 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 946.0 [M H+]+

[0122] [18F]PSMA-1025:

RCA: oko 24 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B in 12.5 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 4.51 min (tdead: 0.56 min)

Primer 16: PSMA-1026

[0123] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteya [18F]PSMA-1026 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0124] PSMA-1026-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala); C36H44N6O13S (800.83 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 801.8 [M H+]+

[0125] PSMA-1026:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala)-FN; C42H46FN7O14S (923.92 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 924.7 [M H+]+

[0126] [18F]PSMA-1026:

RCA: oko 57 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 12.5 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 4.03 min (tdead: 0.56 min)

Primer 17: PSMA-1027

[0127] Sinteza prekursora i hladnog standarda izvedena je kao što je opisano u primeru 1. Sinteza [18F]PSMA-1027 je izvedena kao što je opisano u primeru 9.

[0128] PSMA-1027-VL (prekursor):

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala)-(Sala); C39H49N7O17S2(951.97 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 952.7 [M H+]+

[0129] PSMA-1027:

(Glu)-(Urea)-(Lys)-(2-Nal)-(Bn)-(Sala)-(Sala)-FN; C45H51FN8O18S2(1075.06 g/mol)

MS (MALDI): m/z = 1075.8 [M H+]+

[0130] [18F]PSMA-1027:

RCA: oko 62 %

HPLC (Gradijent: 5% A / 95 % B - 95 % A / 5 % B u 10.0 min; Protok: 3 ml / min; Kolona: Merck Chromolith® Performance RP-18e 100-4.6 mm; Rastvarač A: Acetonitril, Rastvarač B: 0.1 % vodeni rastvor TFA): tret: 3.10 min (tdead: 0.56 min)

Primer 18: ćelijska kultura

[0131] Za studije vezivanja i in vivo eksperimente, LNCaP ćelije (metastatska lezija humanog adenokarcinoma prostate, ATCC CRL-1740) kultivisane su u RPMI medijumu dopunjenom sa 10% fetusnog telećeg seruma i Glutamax (PAA, Austria). U toku ćelijske kulture, ćelije su gajene na 37°C u inkubatoru sa humidifikovanim vazduhom, ekvilibrisanim sa 5 % CO2. Ćelije su sakupljene upotrebom tripsin-etilendiamintetrasirćetne kiseline (tripsin-EDTA; 0.25% tripsin, 0.02% EDTA, svi iz PAA, Austrija) i isprane sa PBS.

Primer 19: Ćelijsko vezivanje i internalizacija

[0132] Analiza kompetitivnog ćelijskog vezivanja i eksperimenti internalizacije su izvedeni kao što je prethodno opisano (Eder et al. Bioconjugate Chem. 2012, 23 (4), 688-697). Ukratko, odgovarajuće ćelije (10<5>po komorici) su inkubirane sa radioligandom (<68>Ga-obeleženi [Gluurea-Lys(Ahx)]2-HBED-CC (Schafer et al. EJNMMI Research 2012, 2:23 doi:10.1186/2191-219X-2-23))) u prisustvu 12 različitih koncentracija analita (0-5000 nM, 100 µL/komorici). Posle inkubacije, ispiranje je izvedeno upotrebom „multiscreen vacuum manifold“ (Millipore, Billerica, MA). Radioaktivnost vezana za ćeliju je merena upotrebom gama brojača (Packard Cobra II, GMI, Minnesota, USA). 50 % inhibitorna koncentracija (IC50) je zračunata aproksimacijom podataka upotrebom nelinearnog regresionog algoritma (GraphPad softver). Eksperimenti su izvedeni tri puta. Pozivamo se na Tabelu A u daljem tekstu.

[0133] Da bi se odredili specifični ćelijski unos i internalizacija, 10<5>ćelija je zasejano u 24-komorne ploče za kulturu tkiva obložene poli-L-lizinom 24 h pre inkubacije. Posle ispiranja, ćelije su inkubirane sa 30 nM radioaktivno obeleženih jedinjenja u trajanju od 45 min na 37°C. Specifični ćelijski unos je određen kompetitivnim blokiranjem sa 2-(fosfonometil)pentandioinske kiseline (500 µM finalna koncentracija, PMPA, Axxora, Loerrach, Germany). Ćelijski unos je završen ispiranjem 3 puta sa 1 mL ledeno-hladnog PBS. Ćelije su zatim inkubirane dva puta sa 0.5 mL glicina-HCI u PBS (50 mM, pH = 2.8) u trajanju od 5 min da bi se uklonila frakcija vezana za površinu. Ćelije su isprane sa 1 mL ledeno-hladnog PBS i lizirane upotrebom 0.3 N NaOH (0.5 mL). Frakcije vezane za površinu i internalizovane su merene u gama brojaču. Ćelijski unos je izračunat kao procenat početno dodate radioaktivnosti vezane za 10<5>ćelija [%ID/105 ćelija]. Glavni rezultati su dati u Tabeli B.

Tabela A: Analiza afiniteta vezivanja

PSMA-1027 7

Tabela B: Specifična internalizacija

Primer 20: MicroPET

[0134] Za studije microPET, 10 - 25 MBq radioaktivno obeleženih jedinjenja u zapremini od 0.10 ml (60 pmol) je injektirano preko lateralne repne vene u miševe koji nose LNCaP tumorske ksenografte. Anestezirane životinje (2% sevofluran, Abbott, Wiesbaden, Germany) su postavljene u ležeći položaj u Inveon PET skener za male životinje (Siemens, Knoxville, Tenn, USA) da bi se izvelo dinamičko microPET skeniranje. Rezultati su prikazani na Slikama 10 i 11.

Primer 21: Vezivanje za plazmu i stabilnost

[0135] Za određivanje vezivanja za plazmu 3 µl od oko 6 µmolar [<18>F]PSMA rastvora dodato je u 300 µl humanog seruma AB i inkubirano na 37°C u trajanju od 1 h. Zatim je smeša proizvoda analizirana pomoću ekskluzione hromatografije.

[0136] Nije zabeleženo vezivanje za plazmu sa bilo kojim od jedinjenja.

[0137] Za određivanje stabilnosti plazme 50 µl od oko 6 µmolar [<18>F]PSMA rastvora dodato je u 450 µl humanog seruma AB i inkubirano na 37°C. Posle 1,2 i 4 h pripremljeni su uzorci. Prema tome 100 µl smeše trejsera/plazme dodato je u 100 µl acetonitrila. Zatim je smeša centrifugirana na 13000 rpm u trajanju od 3 minuta. 100 µl supernatanta je dodato u 100 ml acetonitrila, centrifugirano na 13000 rpm u trajanju od 5 minuta, tečnost je odvojena od svih rezidualnih čvrstih supstanci i analizirana pomoću HPLC.

[0138] Sva jedinjenja su stabilna u humanoj plazmi na 37°C najmanje 4 časa.

Primer 22: In vivo eksperimenti

[0139] Za in vivo eksperimente, 8 nedelja stari BALB/c nu/nu miševi su subkutano inokulisani u desni bok sa 5 x 106 LNCaP- ili PC3-ćelija u 50% Matrigel. Kada je veličina tumora bila približno 1 cm<3>, radioaktivno obeleženo jedinjenje je injektirano preko repne vene (oko 30 MBq, 60 pmol za µPET vizuelizaciju; oko 1 MBq, 60 pmol za organsku raspodelu).

Organska raspodela

[0140] Jedinjenja obeležena sa F-18 su injektirana preko repne vene (1-2 MBq po mišu; 60 pmol). 1 h posle injekcije, životinje su žrtvovane. Organi od interesa su disekovani, osušeni upijanjem i izmereni. Radioaktivnost je merena gama brojačem (Packard Cobra II, GMI, Minnesota, USA) i izračunata kao % ID/g. Glavni rezultati su dati na Slici 8 i 9.

[0141] Jedinjenja PSMA 1003 i PSMA 1009 su za poređenje i prikazana su na Sl.12 i 13.

Primer 23: [18F]PSMA-1007 za humanu primenu

[0142] [18F]PSMA-1007 je proizveden konjugovanjem suvog [18F]FN-TFP (Primer 8) sa PSMA1007-VL (Primer 4) pod suvim uslovima (analogno Primeru 9) na automatskom sintetičkom modulu (Trasis AlllnOne) i prečišćen pomoću polu-preparativne HPLC. Radio-HPLC je izvedena da bi se odredio hemijski identitet i hemijska i radiohemijska čistoća [18F]PSMA-1007. Rezidualni rastvarači su određeni pomoću gasne hromatografije. Čistoća radionuklida je kontrolisana pomoću merenja polu-života. Rastvor proizvoda je testiran za sterilnost, bakterijske endotoksine (LAL-test), pH, bezbojnost i čestice. Celovitost sterilnog filtera posle filtracije je ispitivana upotrebom testa sa mehurićima.

Primer 24: Primena [18F]PSMA-1007 na zdravog dobrovoljca

[0143] Zdravom subjektu je injektirana ukupna aktivnost od 300 MBq i zatim je izvedeno PET skeniranje na Biograph mCT Flow skeneru (Siemens, Erlangen, Germany) u tri bloka. Blok 1 je sadržao PET-1 (početak 5 min p.i.) do PET-7 (završetak 140 min p.i.), blok 2 je sadržao PET-8 (početak 180 min p.i.) i PET-9 (240-270 min p.i.), blok 3 je sadržao PET-10 (440-480 min p.i.). Nepojačani CT niske doze (procena 1.43 mSv, respektivno) za ispravku slabljenja je izveden na početku svakog bloka, nakon čega slede serijski emisioni skenovi bez pokretanja dobrovoljca između.

[0144] Bubrezi, jetra, slezina, celo srce, gornji i donji deo debelog creva, parotidne žlezde, submandibularne žlezde i mokraćna bešika su segmentirani u zapremine od inetersa (VOIs) upotrebom procenta maksimalnog praga između 20% i 30% upotrebom odgovarajućeg CT kao vodiča i zatim su krive aktivnosti u vremenu (TACs) izračunate za sve organe. TAC za crvenu koštanu srž je izvedena iz uzoraka vebnske krvi i zatim je izračunata doza za crvenu koštanu srž (S. Shen et al., JNM 2002, 43, 1245-1253; G. Sgouros et al., JNM 1993, 34, 689-694.). TAC za sadržaj mokraćne bešike je kombinacija procenjene aktivnosti u VOI mokraćne bešike u PET i aktivnosti merene u ispražnjenom urinu. Aproksimacija krive je primenjena na sve TAC. Bubrezi, pljuvačne žlezde, gornji i donji deo debelog creva i srca su aproksimirani sa bieksponencijalnom funkcijom. Za sadržaj jetre, slezine i mokraćne bešike izvedena je monoeksponencijalna aproksimacija sa poslednje tri vremenske tačke.

[0145] Izračunavanja apsorbovane i efikasne doze izvedena su upotrebom ICRP odobrenog IDAC 1.0 paketa koji je integrisan u QDOSE. Pored toga, vremena boravka svih uključenih izvornih organa i ostatka tela su eksportovana kao OLINDA dokument za izračunavanje doze (OLINDA 1.1). Apsorobovane doze u pljuvačne žlezde (parotidne i submandibularne žlezde) su određene upotrebom sferičnog modela. Mase organa za pljuvačne žlezde su procenjene sa 25 g za parotidnu i 12.5 g za submandibularnu žlezdu (ICRP publication 89). Rezultati su rezimirani na Slikama 14 - 16.

Primer 25: Primena [18F]PSMA-1007 na pacijente koji pate od kancera prostate

[0146] Deset pacijenata (starosti 60 - 80 godina) koji pate od novo-dijagnostikovanog kancera prostate visokog rizika sa Gleason skorom od 7 - 9 i početnim nivoima PSA od 5 - 90 ng/ml injektirani su sa 100 - 360 MBq [18F]-PSMA-1007 i zatim je izvršeno PET skeniranje na Biograph mCT Flow skeneru (Siemens, Erlangen, Germany) na 1 i 3 h p.i.. Rezultati su prikazani na Slikama 17 i 18 kao srednje vrednosti SUVmeani SUVmax, respektivno. Slike dobijene sa PET skenovima su ilustrovane na Slikama 19 i 20 kao projekcije maksimalnog intentziteta.

[0147] Osam pacijenata je podvrgnuto radikalnoj prostatektomiji sa proširenom karličnom limfadenektomijom. Analize uzoraka prostatektomije su izvedene kao slepe za PET-podatke pod nadzorom nadležnih uropataloga, prema Međunarodnom udruženju uroloških patloloških standarda (T.H. van der Kwast et al. Mod. Phathol. 2011, 24, 16-25). Reprezentativni isečci su obojeni imunohistohemijski. Isečci su deparafinizirani u ksilenu i rehidratisani u gradiranoj seriji etanola. Izolacija antitela je izvedena sa parnim kuvalom upotrebom pufera za izolaciju (Target Retrieval Solution, Dako). Mišje monoklonsko antitelo protiv PSMA (klon 3E6, Dako) je korišćeno u razblaženju od 1:100 i inkubirano preko noći na 4°C i zatim je izvršena imunodetekcija upotrebom Histostain-Plus kompleta za detekciju (Invitrogen). Obojeni isečci su skenirani upotrebom Nanozoomer 2.0-HT Scansystem (Hamamatsu Photonics) da bi se generisale digitalne cele slike. Bojenje je otkrilo skoro savršenu korelaciju sa PET skenom, kao što je ilustrovano na Slici 21.

Claims

Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule I:

sa:

R1:Bilo koji alkil, aril ili arilalkil linker naročito metil, 2-etil, 3-propil, 2-,3-,4-fenil, 2-,3-,4-fenilmetil, 2-,3-,4-fenilpropil R2: Bilo koja alkil ili aril grupa naročito metil izopropil, terc-butil, fenil ili 1-naftil

R1: Bilo koji alkil, aril ili arilalkil linker naročito metil, 2-etil, 3-propil, 2-,3-,4-fenil, 2-,3-,4-fenilmetil, 2-,3-,4-fenilpropil R2: Bilo koja alkil ili aril grupa naročito metil izopropil, terc-butil, fenil ili 1-naftil
2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 koje ima strukturu

naznačeno time što je linker A izabran iz grupe (sa R = (Glu)-(Urea)-(Lys) i R’= (Linker B)m-18F marker; m = 1-5)

(u obliku bilo koje farmaceutski prihvatljive soli) (2-NaI)-(AcAMP)
3. Jedinjenje izabrano od sledećih
4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, naznačeno time što aminokiselina koja se ne nalazi u prirodi ima formulu

i R’= H, CO2H, CH2CO2H, C2H4CO2H, CH(CO2H)2, CH(CH2CO2H)2, CH(CO2H)(CH2CO2H), CH2CH(CO2H)2, SO3H; o = 1-3; R = H, CH3.
5. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili estar, i farmaceutski prihvatljiv nosač.
6. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 za upotrebu u postupku vizuelizacije kod pacijenta.
7. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4 za upotrebu u postupku dijagnostikovanja kancera prostate i/ili njegove metastaze.
8. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 5 za upotrebu u postupku za vizuelizaciju kod pacijenta.
9. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 5 za upotrebu u postupku za dijagnostikovanje kancera prostate i/ili njegove metastaze.