CN101444499B

CN101444499B - 一种化合物及其组合物的新用途

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Publication number: CN101444499B
Application number: CN2007101709814A
Authority: CN
Inventors: 俞强
Original assignee: Xiangbei Welman Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Xiangbei Welman Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 2007-11-26
Filing date: 2007-11-26
Publication date: 2012-12-05
Anticipated expiration: 2027-11-26
Also published as: CN101444499A

Abstract

本发明公开了一种如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯的用途，即被用于制备预防或治疗白细胞减少的组合物。本发明还公开其在预防或治疗免疫抑制方面的用途。

Description

一种化合物及其组合物的新用途

技术领域

本发明属于药物学领域，更具体地，本发明涉及一种具有升高白细胞作用的化合物及其组合物的新用途。

背景技术

人外周血白细胞计数持续低于正常值(4×10⁹/L)时称为白细胞减少，最常见是由中性粒细胞减少所致。病人可无症状或有非特异性症状，如乏力、纳差、体力减退，并有易感染倾向。是否合并感染视粒细胞减少程度。感染部位以肺、尿路、皮肤等多见。白细胞减少可分为遗传性和获得性两种，其中获得性占多数。药物、放射线、感染、毒素等均可使白细胞减少，药物引起者最常见。治疗时应仔细查找引起白细胞减少的原因，根据病因选择相应的治疗措施。目前针对各类白细胞减少症主要采用药物治疗，包括多种中药制剂，如人参、当归、黄芪、阿胶、白术、补骨脂、刺五加、枸杞子等组成的复方制剂；西药制剂，如维生素B4、辅酶A、脱氧核糖核酸、鲨肝醇、利血生、升白安、肌苷、升白欣等，但疗效均欠佳，停药后，白细胞往往会重新跌落。

近年来，新的生物制剂如粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)广泛应用于临床，但价格昂贵，给患者带来巨大的经济负担。

染料木素(genistein，GEN)为大豆异黄酮的一种，其结构与雌二醇非常相似，但活性仅为雌二醇的10^-3-10^-2，是一种天然植物雌激素。已有研究证实，GEN对多种肿瘤细胞如乳腺癌细胞、白血病细胞、前列腺癌细胞、胃癌细胞等的生长具有显著的抑制作用。大量的实验结果表明，染料木素还可防止骨质流失，增加骨密度(孙纪元，谢艳华，王四旺，等.染料木素胶囊对骨质疏松症大鼠骨质代谢影响的比较研究.中国比较医学杂志，2003，13(3)：146-149)。染料木素还对高脂血症、心血管疾病等具有良好的防治作用(FANG Y C，CHENB H，HUANG R F，et al. Effect of genistein supplementation on tissuegenistein and lipid peroxidation of serum，liver and low-densitylipoprotein in hamsters.J Nutr Biochem，2004，15(3)：142-148)，且对人体无明显的毒副作用。但它是否在提高免疫力、提高白细胞等方面具有作用，还不得而知。

芹菜素(Apigenin)属黄酮类化合物，目前的研究表明，它能抑制致癌物质的致癌活性，可作为治疗HIV和其它病毒感染的抗病毒药物，可作为MAP激酶的抑制剂，可作为抗氧化剂，并可治疗各种炎症。但对于它是否具有提高免疫力、提高白细胞等的作用却没有报道。

因此，本领域临床仍然缺乏疗效显著、价格低廉、使用方便的升高白细胞的药物。

发明内容

本发明旨在提供一种如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯的新用途。

本发明的另一个目的，是提供一种含有如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯的组合物，或是含有如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯的植物提取物的组合物，或是含有如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯的原料药材的组合物。

在本发明的第一方面，提供了一种如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯在制备预防或治疗白细胞减少的组合物中的用途，

式中，

W代表如式VII所示的化合物：

其中R⁵，R⁶，R⁷，R⁸，R⁹分别选自氢原子、C_1-2烷基、卤素原子、羟基、C_1-4烷氧基、乙酰氧基、NR″₂、或硝基，其中R″代表C_1-4烷基；

X代表氧原子、硫原子、氨基；

Y代表氢原子、C_1-2烷基、卤素原子、羟基、羧基、C_1-3酯基；

Z代表氧原子、硫原子；

R¹，R²，R³，R⁴分别选自氢原子、C_1-2烷基、卤素原子、羟基、C_1-4烷氧基、乙酰氧基、NR″₂、或硝基，其中R″代表C_1-4烷基；

并且W和Y的位置可互换。

在另一优选例中，所述的白细胞减少选自下组：白细胞减少症、粒细胞减少症；所述的粒细胞减少症选自慢性粒细胞减少症或周期性粒细胞减少症。

在另一优选例中，所述的组合物能预防或治疗骨髓抑制引起的白细胞减少。

在另一优选例中，所述的如式I所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯选自下组：

；或

在另一优选例中，所述的药学上可接受的盐或酯是如式I所示的化合物与选自下组的酸所形成：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富马酸、马来酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羟乙磺酸；所述的药学上可接受的盐是如式I所示的化合物与选自下组的碱或碱土金属所形成：钠、钾、钙或镁。

在本发明的第二方面，提供了一种如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯在制备预防或治疗免疫抑制的组合物中的用途，

式中，

W代表如式VII所示的化合物：

X代表氧原子、硫原子、氨基；

Z代表氧原子、硫原子；

并且W和Y的位置可互换。

在另一优选例中，所述的组合物能预防或治疗白细胞减少引起的免疫抑制。

在另一优选例中，所述的式I化合物或其药学上可接受的盐或酯来源于植物或原料药材，所述的植物物或原料药材选自豆科植物或伞形科植物；所述的豆科植物优选染料木、大豆、槐、黄羽扁豆或尼泊尔黄花木；所述的伞形科植物优选旱芹。

在本发明的第三方面，提供了一种组合物，它含有：

(a)作为主要活性成分的0.05-99wt％的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯，

式中，

W代表如式VII所示的化合物：

X代表氧原子、硫原子、氨基；

Z代表氧原子、硫原子；

并且W和Y的位置可互换；

(b)有效量的选自下组的一种或多种含量为0.0001-20wt％的辅助活性成分：维生素B4、辅酶A、脱氧核糖核酸、鲨肝醇、集落刺激因子、重组人类粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)；和

(c)药学上可接受的载体。

在另一优选例中，所述的组合物是药物组合物、食品组合物或饮食补充剂；所述的组合物选自片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、口服液、醑剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、注射剂、注射用无菌粉末、栓剂。

在本发明的第四方面，提供了一种体外有效升高白细胞的方法，所述方法包括，给予需要的患者有效量的如式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯：

式中，

W代表如式VII所示的化合物：

X代表氧原子、硫原子、氨基；

Z代表氧原子、硫原子；

并且W和Y的位置可互换。

据此，本发明提供了疗效显著、价格低廉、使用方便的升高白细胞的药物。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入的研究，发现如式I所示的化合物，或者含有该类化合物的植物提取物，或者含有该类化合物的原料药材具有明显的升高白细胞的作用，因而可用于治疗各种原因引起的白细胞减少，特别是有效改善放疗、化疗后病人白细胞减少的症状，有效对抗化疗药物引起的免疫抑制，提高机体的免疫反应。在此基础上完成了本发明。

如本文所用，本发明化合物，或称染料木素类化合物，或称芹菜素类化合物，都是指式I化合物：

式中，

W代表如式VII所示的化合物：

X代表氧原子、硫原子、氨基；

Z代表氧原子、硫原子；

并且W和Y的位置可互换。

优选R¹代表羟基、卤素原子、C_1-4烷氧基，更优选羟基、氟、氯、甲氧基，最优选羟基。

优选R³代表羟基、卤素原子、C_1-4烷氧基，更优选羟基、氟、氯、甲氧基，最优选羟基。

优选R⁷代表羟基、卤素原子、C_1-4烷氧基，更优选羟基、氟、氯、甲氧基，最优选羟基。

特别优选R¹代表羟基、氟、氯、甲氧基，R³代表羟基、氟、氯、甲氧基，以及R⁷代表羟基、氟、氯、甲氧基。

式I化合物可由植物中提取或化学合成、半合成、生物转化的方式获得，例如从豆科植物染料木Genista tionctoria Linn.、大豆Glycine max(L.)Merr.的种子、槐Sophora japonica L.的果实、黄羽扁豆Lupinus luteus L.的根、尼泊尔黄花木Piptanthus nepalensis(Hook.)D.Don的茎、伞形科植物旱芹Apium graveolens var.dulce的叶中提取获得的。

可将含有式I化合物的原料药材或原料药材的有效部位直接给药；或者可将式I化合物的植物提取物进行提纯和加工，制成纯净形式的式I化合物、或各种形式的式I化合物的制剂后，用于给药。

本发明的化合物可以以药学或生理学上可接受的盐或酯的形式使用。这些盐或酯包括(但不限于)与如下酸形成的盐或酯：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富马酸、马来酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、羟乙磺酸。卤化物的盐同样适用。其他盐包括：与碱金属或碱土金属(如钠、钾、钙或镁)形成的盐，以及以其他常规的“前体药物”形式存在的盐(当以这种形式给药时，在体内可转化成活性部分)。

含有式I化合物的提取物也可用于本发明。通常，在提取物中式I化合物的纯度按重量计应在0.05％-99.9％，更佳地为20-98％。

用途和组合物

本发明提供的如式I的化合物或其药学上可接受的盐或酯，或者含式I所示化合物或其药学上可接受的盐或酯的植物提取物，或者含式I所示化合物或其药学上可接受的盐或酯的原料药材可用于治疗白细胞减少：

式中，

W代表如式VII所示的化合物：

X代表氧原子、硫原子、氨基；

Z代表氧原子、硫原子；

并且W和Y的位置可互换。

其中优选的如式I所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯选自下组：

；或

。所述的白细胞减少是指由化学毒物、遗传因素、放射线、细胞毒药物、感染等因素引起的外周血白细胞数下降相关的疾病，包括白细胞减少症、粒细胞减少症、慢性粒细胞减少症、周期性粒细胞减少症。

本发明人研究发现染料木素类或芹菜素类化合物能有效改善放、化疗后病人白细胞减少的症状，能有效对抗放疗以及化疗药物如环磷酰胺、卡铂、氟尿嘧啶等引起的骨髓抑制，升高白细胞，提高机体的免疫反应。该发现为本发明人的研究成果，国内外文献均未记载染料木素类化合物或芹菜素类化合物在治疗白细胞减少方面的用途。

所用活性成分的有效剂量可随给药模式和待治疗疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约0.5-500mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以2-4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为1-100mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体混合的约0.5-500mg的活性化合物。可调节此治疗方案以达到最佳治疗效果。例如，可根据治疗状况的需要，每天若干次分开给药，或将剂量按比例减少。通常，成人口服临床剂量的范围为1-1000mg/日，优选为10-200mg/日，成人非口服的剂量为0.1-100mg/日，优选1-100mg/日。

在使用本发明化合物或含有该类化合物的提取物或含有该类化合物的原料药材治疗白细胞减少时，还可与其他治疗剂联用。例如与选自下组的一种或多种辅助活性成分联用：维生素B4、辅酶A、脱氧核糖核酸、鲨肝醇、利可君、升白安、肌苷、升白欣、集落刺激因子、重组人类粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。本发明人研究发现，染料木素类或芹菜素类化合物或其药学上可接受的盐或酯与这些辅助活性成分联用可显著提高疗效。

本发明还包括升高白细胞的方法，它包括给哺乳动物施用药物有效量的本发明化合物。

“药学上可接受的载体”是适用于人和/或动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)即有合理的效益/风险比的物质。“药学上可接受的载体”是用于将本发明的染料木素化合物或其生理上可接受的盐传送给动物或人的药学上或食品上可接受的溶剂、悬浮剂或赋形剂。载体可以是液体或固体。

通常，当本发明化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合制成不同给药途径的药物剂型，如注射剂、注射用无菌粉末、片剂、胶囊、醑剂、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、酊剂、气雾剂、粉雾剂、栓剂等。

上述剂型中可经口服给药的剂型为：片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、糖浆剂、溶液剂、醑剂。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸氢钙、微晶纤维素、蔗糖、白陶土、微粉硅胶、滑石粉、低取代羟丙基纤维素、羧甲基淀粉钠、聚乙烯吡咯烷酮。而液态载体包括：无菌水、乙醇、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)。在制备药物组合物的过程中通常使用的佐剂包括：调味剂、着色剂、防腐剂(如羟苯烷基丁酯、苯甲酸钠、山梨酸)和抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠和二丁基羟基甲苯)。

上述剂型中可用于注射途径给药的剂型包括：注射剂、注射用无菌粉末，它们是将药物与一种或多种药学上可接受的赋形剂混合制成以供注射给药的形式。溶剂包括：无菌水、乙醇、甘油、丙二醇、聚乙二醇。此外，还需加入抑菌剂(如苯甲醇、羟苯丁酯、硫柳汞)、等渗调节剂(如氯化钠、葡萄糖)、助悬剂(如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素)、增溶剂(吐温-80、卵磷酯)、抗氧化剂(如维生素E、维生素C、焦亚硫酸钠)和填充剂(如乳糖、甘露醇)。

上述剂型中可经胃肠道外途径给药的有：气雾剂、粉雾剂、栓剂。粉雾剂中适合的载体实例包括：乳糖、葡聚糖、阿拉伯胶、甘露、葡萄糖和十二烷基硫酸钠。气雾剂中适合的溶剂为无菌水、乙醇、植物油、油酸。适合的抛射剂为三氯一氟甲烷、二氯二氟甲烷、丙烷、异丁烷、二氧化碳、氮气。栓剂的制备可将药物与一种适合的无刺激性赋形剂混合而成，赋形剂包括：可可脂、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羟苯乙酯、甘油。

从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。优选口服给药。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

本发明的主要优点在于：

1、首次揭示染料木素类或芹菜素类化合物具有明显的升高白细胞的作用，因而可用于治疗各种原因引起的白细胞减少，特别是有效改善放疗、化疗后病人白细胞减少的症状，有效对抗化疗药物引起的免疫抑制，提高机体的免疫反应。

2、所述的染料木素类或芹菜素类化合物可以从天然植物中获得，对人体没有毒副作用。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分比和份数按重量计。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

实施例1

三种染料木素类化合物的合成路线

染料木素类似物1(AG-1，式III)

式III化合物的制备方法：

1、无水无氧处理的50ml的圆底三颈烧瓶中，在氮气保护下，加入新蒸馏的三氟化硼乙醚25ml、间苯二酚(5mmol)和对羟基苯乙酸(5mmol)，油浴加热至60-90℃，电磁搅拌，反应8-10小时后，冷却至室温；

2、加入8ml的无水N，N-二甲基甲酰胺，重新加热至50℃，缓慢加入1.2ml甲烷磺酰氯与2mlN，N-二甲基甲酰胺的混合液，继续加热至60-70℃，反应8-10小时，冷却至室温；

3、将反应产物分批倾倒于冷却的100-200ml的10％乙酸钠水溶液中，过滤，收集固体粗产物，柱层析得纯品(式III化合物)，产率为60-75％。

染料木素类似物2(AG-2，式IV)

式IV化合物的制备方法：

1、无水无氧处理的50ml的圆底三颈烧瓶中，在氮气保护下，加入新蒸馏的三氟化硼乙醚25ml、间苯三酚(5mmol)和苯乙酸(5mmol)，油浴加热至60-90℃，电磁搅拌，反应8-10小时后，冷却至室温；

3、将反应产物分批倾倒于冷却的100-200ml的10％乙酸钠水溶液中，过滤，收集固体粗产物，柱层析得纯品(式IV化合物)，产率为60-75％。

染料木素类似物3(AG-3，式V)

式V化合物的制备方法：

1、无水无氧处理的50ml的圆底三颈烧瓶中，在氮气保护下，加入新蒸馏的三氟化硼乙醚25ml、间苯三酚(5mmol)和对氯苯乙酸(5mmol)，油浴加热至60-90℃，电磁搅拌，反应8-10小时后，冷却至室温；

3、将反应产物分批倾倒于冷却的100-200ml的10％乙酸钠水溶液中，过滤，收集固体粗产物，柱层析得纯品(式V化合物)，产率为60-75％。

实施例2

染料木素类化合物对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的治疗作用

实验动物：

雄性SPF级C57 BL/6小鼠80只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为22-24g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。

实验药品：

染料木素(式II化合物)，纯度为98％，购自南京青泽医药科技发展有限公司；AG-1、AG-2、AG-3(实施例1制备得到)；利可君为江苏吉贝尔药业有限公司生产；注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产。

实验方法：

1、造模方法：

动物随机分为8组，除正常对照组外，其余各组小鼠均给予腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，每日1次，连续3天，造成白细胞减少症模型。

2、给药情况：

(1)正常组，

(2)模型组，

(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g的生理盐水；

(3)(4)组分别为利可君高、低剂量组：小鼠分别给予剂量为40mg/kg、10mg/kg的利可君；

(5)(6)(7)(8)组分别为染料木素组、AG-1组、AG-2组、AG-3组：给药剂量均为100mg/kg。

以上各组均为造模前提前3天灌胃给药，每日1次，连续10天。

本实验通过环磷酰胺造模前提前3天给药，从而使药物在血液中的浓度明显升高，达到治疗有效量。

末次给药24小时后，摘眼球取血，检测血中白细胞总数(WBC)，并计算升白率＝[(给药组白细胞数-模型组白细胞数)/模型组白细胞数]×100％，结果见表1。

表1染料木素类化合物对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的影响(X±SD，n＝10)

组别	数量(只)	剂量(mg/kg)	WBC(×10⁹/L)	升白率(％)
					正常组	10	-	7.78±1.26	-
模型组	10	-	2.01±0.53^△	-
					利可君高剂量组	10	40	2.30±0.85	14.43
利可君低剂量组	10	10	4.11±1.24^*	104.48
					染料木素组	10	100	4.89±1.12^*	143.28
AG-1组	10	100	3.81±1.35^*	89.55

AG-2组	10	100	4.07±1.61^*	102.49
					AG-3组	10	100	4.42±1.12^*	119.90

*表示p＜0.05，与模型组相比，有显著性差异；^△表示p＜0.05，与正常组相比，有显著性差异。

结果表明，模型组小鼠的白细胞数(2.01±0.53)与正常组(7.78±1.26)相比具有显著差异(p＜0.05)，表明造模成功。

染料木素组、AG-1组、AG-2组、AG-3组小鼠的白细胞数(4.89±1.12，3.81±1.35，4.07±1.61，4.42±1.12)明显高于模型组(2.01±0.53)，差异有显著性(p＜0.05)。而阳性药-利可君低剂量组的药效反而优于高剂量组，说明其安全性有待进一步考察。

以上实验结果表明，染料木素类化合物对环磷酰胺所致外周血白细胞数减少有明显的保护、治疗作用，且未发现任何毒副作用，安全性好。

实施例3

芹菜素对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的治疗作用

实验动物：雄性SPF级C57 BL/6小鼠60只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为18-22g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。

实验药品：芹菜素(式VI化合物)，纯度为98％，购自南京青泽医药科技发展有限公司；鲨肝醇为江苏鹏鹞药业有限公司生产；注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产。

实验方法：

1、造模方法：动物随机分为6组，除正常对照组外，其余各组小鼠均给予腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，每日1次，连续3天，造成白细胞减少症模型。

2、给药情况：

(1)正常组，

(2)模型组，

(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g的蒸馏水；

(3)鲨肝醇组：小鼠给予剂量为100mg/kg的鲨肝醇；

(4)(5)(6)组分别为芹菜素高、中、低剂量组：小鼠分别给予剂量为100mg/kg、25mg/kg、5mg/kg的芹菜素。以上各组均为造模前提前3天灌胃给药，每日1次，连续10天。

末次给药24小时后，摘眼球取血，并检测血中白细胞总数(WBC)，并计算升白率＝[(给药组白细胞数-模型组白细胞数)/模型组白细胞数]×100％，结果见表2。

表2芹菜素对环磷酰胺致小鼠白细胞减少的影响(X±SD，n＝10)

组别	数量(只)	剂量(mg/kg)	WBC(×10⁹/L)	升白率(％)
					正常组	10	-	7.23±2.31	-
模型组	10	-	2.12±0.58^△	-
					鲨肝醇组	10	100	4.01±1.28^*	89.15
芹菜素高剂量组	10	100	4.88±1.87^*	130.19
					芹菜素中剂量组	10	25	3.98±1.56^*	87.74
芹菜素低剂量组	10	5	2.06±0.86	-2.83

结果表明，模型组小鼠的白细胞数(2.12±0.58)与正常组(7.23±2.31)相比具有显著差异(p＜0.05)，表明造模成功。

芹菜素高、中剂量组小鼠的白细胞数(4.88±1.87，3.98±1.56)明显高于模型组(2.12±0.58)，差异有显著性(p＜0.05)。

以上实验结果表明，芹菜素对环磷酰胺所致外周血白细胞数减少有明显的保护、治疗作用。

实施例4

染料木素类化合物对⁶⁰Co-γ所致小鼠骨髓损伤的保护作用

实验动物：

雄性SPF级ICR小鼠80只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为22-24g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。

实验药品：

染料木素(式II化合物)，纯度为98％，购自南京青泽医药科技发展有限公司；AG-1、AG-2、AG-3(实施例1制备得到)；利可君为江苏吉贝尔药业有限公司生产。

实验方法：

1、造模方法：

将小鼠随机分为8组，除正常对照组动物外，其余小鼠用⁶⁰Co-γ射线照射一次，剂量为7.50Gy(剂量率为450伦/分)。

2、给药情况：

(1)正常对照组，

(2)模型组，

(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g的生理盐水；

(5)(6)(7)(8)组分别为染料木素组、AG-1组、AG-2组、AG-3组：给药剂量均为100mg/kg。以上各组均为照射前7天灌胃给药，每日1次，连续14天。

末次给药24小时后，摘眼球取血，检测血中白细胞数(WBC)，并计算升白率＝[(给药组白细胞数-模型组白细胞数)/模型组白细胞数]×100％，结果见表3。

表3染料木素类化合物对⁶⁰Co-γ照射损伤小鼠血液学的影响(X±SD，n＝10)

组别	数量(只)	剂量(mg/kg)	WBC(×10⁹/L)	升白率(％)
					正常组	10	-	8.72±2.13	-
模型组	10	-	2.87±0.41^△	-
					利可君高剂量组	10	40	2.98±1.26	3.83
利可君低剂量组	10	10	5.51±1.12*	91.99
					染料木素组	10	100	6.23±1.98*	117.07
AG-1组	10	100	6.41±1.83*	123.34
					AG-2组	10	100	5.18±1.59*	80.49
AG-3组	10	100	5.65±1.71*	96.86

*表示p＜0.05，与模型组相比，有显著性差异；^Δ表示p＜0.05，与正常组相比，有显著性差异。

结果显示，染料木素组、AG-1组、AG-2组、AG-3组与模型组相比有极显著性差异，并且疗效明显优于阳性对照药-利可君。

表明染料木素类化合物对⁶⁰Co-γ照射所致外周白细胞减少有明显的保护作用。

实施例5

芹菜素对⁶⁰Co-γ所致小鼠骨髓损伤的保护作用

实验药品：芹菜素(式VI化合物)，纯度为98％，购自南京青泽医药科技发展有限公司；鲨肝醇为江苏鹏鹞药业有限公司生产。

实验方法：

1、造模方法：动物随机分为6组，除正常对照组外，其余各组动物均用⁶⁰Co-γ射线照射一次，剂量为7.50Gy(剂量率为450伦/分)。

2、给药情况：

(1)正常对照组，

(2)模型组，

(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g的蒸馏水；

(3)鲨肝醇组：小鼠给予剂量为100mg/kg的鲨肝醇；

(4)(5)(6)组分别为芹菜素(式VI化合物)高、中、低剂量组：小鼠分别给予剂量为100mg/kg、25mg/kg、5mg/kg的芹菜素。

以上各组均为照射前7天灌胃给药，每日1次，连续14天。末次给药24小时后，摘眼球取血，检测血中白细胞数(WBC)，并计算升白率＝[(给药组白细胞数-模型组白细胞数)/模型组白细胞数]×100％，结果见表4。

表4芹菜素对⁶⁰Co-γ照射损伤小鼠血液学的影响(X±SD，n＝10)

组别

数量(只)

剂量(mg/kg)

WBC(×10⁹/L)

升白率(％)

正常组	10	-	8.12±1.15	-
					模型组	10	-	2.67±0.65^△	-
鲨肝醇组	10	100	4.69±1.32^*	75.66
					芹菜素高剂量组	10	100	5.89±1.52^*	120.60
芹菜素中剂量组	10	25	4.26±1.32^*	59.55
					芹菜素低剂量组	10	5	2.37±0.28	-11.24

结果显示，芹菜素高、中剂量组与模型组相比有极显著性差异，并且疗效明显优于阳性对照药-鲨肝醇组。

芹菜素对⁶⁰Co-γ照射所致外周白细胞减少有明显的治疗作用。

实施例6

染料木素类化合物或芹菜素抵抗环磷酰胺对小鼠胸腺和脾脏的损伤作用

实验动物：

雄性SPF级C57 BL/6小鼠90只，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，体重为22-24g。SPF级动物房饲养，12小时光照/12小时黑暗，自由摄取饲料和水。

实验药品：

染料木素(式II化合物)，纯度为98％，购自南京青泽医药科技发展有限公司；芹菜素(式VI化合物)，纯度为98％，购自南京青泽医药科技发展有限公司；AG-1、AG-2、AG-3(实施例1制备得到)；利可君为江苏吉贝尔药业有限公司生产；注射用环磷酰胺，江苏恒瑞医药股份有限公司生产。

实验方法：

1、造模方法：动物随机分为9组，除正常对照组外，其余各组小鼠均给予腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，每日1次，连续3天，造成胸腺、脾脏萎缩模型；

2、给药情况：

(1)正常对照组，

(2)模型组，

(1)(2)组小鼠分别给予体积为0.1ml/10g的生理盐水；

(5)(6)(7)(8)(9)组分别为染料木素组、AG-1组、AG-2组、AG-3组、芹菜素组：给药剂量均为100mg/kg。

以上各组均为造模前提前3天灌胃给药，每日1次，连续10天。

末次给药24小时后，眼眶放血处死动物，称体重，解剖取胸腺和脾脏，并用电子天平精密称重，计算各组动物的胸腺指数(胸腺指数＝胸腺重量/体重)和脾指数(脾指数＝脾重量/体重)。结果见表5。

表5染料木素类化合物或芹菜素对免疫功能低下小鼠的脾、胸腺指数的影响(X±SD，n＝10)

组别	数量(只)	剂量(mg/kg)	脾指数(mg/g)	胸腺指数(mg/g)
					正常组	10	-	0.37±0.05	0.26±0.06
模型组	10	-	0.16±0.03^△	0.09±0.02^△
					利可君高剂量组	10	40	0.17±0.03	0.06±0.01
利可君低剂量组	10	10	0.22±0.05^*	0.16±0.04^*
					染料木素组	10	100	0.30±0.06^*	0.21±0.04^*
AG-1组	10	100	0.26±0.05^*	0.18±0.01^*
					AG-2组	10	100	0.24±0.06^*	0.17±0.04^*
AG-3组	10	100	0.27±0.05^*	0.19±0.03^*
					芹菜素组	10	100	0.26±0.04^*	0.17±0.02^*

实验结果表明，腹腔注射环磷酰胺后，与正常对照组相比，模型组小鼠的胸腺指数和脾指数显著降低，表明造模成功。

染料木素、AG-1、AG-2、AG-3、芹菜素可显著升高免疫功能低下小鼠的胸腺指数和脾指数，且差异具有显著性(p＜0.05)。因此，染料木素类化合物或芹菜素能够显著对抗免疫抑制剂引起的免疫器官萎缩，对免疫器官具有保护作用，提示染料木素类化合物或芹菜素可改善免疫抑制小鼠的非特异免疫功能。

实施例7

制备片剂

利用常规技术，混合以下组分，然后直接压片，制备片剂形式的药物组合物，其配方如下：

成分	处方量(g/1000片)
		染料木素(式II化合物)	100
乳糖	50
		微晶纤维素	40
玉米淀粉	6
		羧甲基淀粉钠	3
硬脂酸镁	1
		总量	200

成分	处方量(g/1000片)
		芹菜素(式VI化合物)	100
乳糖	50
		微晶纤维素	40
玉米淀粉	6
		羧甲基淀粉钠	3
硬脂酸镁	1
		总量	200

实施例8

制备注射剂

成分	处方量(g/1000ml)
		染料木素(式II化合物)	10
亚硫酸氢钠	0.2
		羧甲基纤维素钠	5
吐温-80	1.5

注射用水

加至1000ml

①将亚硫酸氢钠加于500ml注射用水中，加入羧甲基纤维素钠，混匀，浸泡过夜(24小时)，全溶后，用210目尼龙布过滤；

②将溶液①水浴加热，加入吐温-80，混匀；

③至水浴沸腾，加入染料木素，混匀，继续加热30分钟，取出冷却至室温，G3垂熔玻璃漏斗过滤；

④加注射用水至1000ml，混匀，灌封，用100℃30分钟灭菌，得到注射剂。

实施例9

组合物的制备

成分	处方量(g/1000片)
		染料木素(如式II所示)	100
辅酶A	0.5
		乳糖	50
微晶纤维素	40
		玉米淀粉	适量
羧甲基淀粉钠	3
		硬脂酸镁	1
总量	200

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.一种如式IV所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗白细胞减少的组合物中的用途

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的白细胞减少选自下组：白细胞减少症、粒细胞减少症；所述的粒细胞减少症选自慢性粒细胞减少症或周期性粒细胞减少症。

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的组合物能预防或治疗骨髓抑制引起的白细胞减少。

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的药学上可接受的盐是如式IV所示的化合物与选自下组的酸所形成：氢氯酸、氢溴酸、硫酸、柠檬酸、酒石酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、琥珀酸、草酸、富马酸、马来酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、或羟乙磺酸。

5.一种如式IV所示的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗免疫抑制的组合物中的用途；

所述的组合物能预防或治疗白细胞减少引起的免疫抑制。

6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述的式IV化合物或其药学上可接受的盐来源于植物或原料药材，所述的植物物或原料药材选自豆科植物或伞形科植物。

7.如权利要求6所述的用途，其特征在于，所述的豆科植物选自染料木、大豆、槐、黄羽扁豆或尼泊尔黄花木。

8.如权利要求6所述的用途，其特征在于所述的伞形科植物是旱芹。