CN101439042A - 一类异戊烯基黄酮苷化合物的抗肿瘤用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一类异戊烯基黄酮苷类化合物或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药的抗肿瘤用途。研究表明，对于各种肿瘤疾病，特别是结肠癌、乳腺癌、白血病、肺癌、肝癌等，本发明的化合物具有明显的抑制作用。

Description

一类异戊烯基黄酮苷化合物的抗肿瘤用途

技术领域

本发明涉及一类异戊烯基黄酮苷类化合物在医药方面的新用途，特别是在制备抗肿瘤药物中的应用。

背景技术

癌症是引起人类死亡的主要原因之一。据世界卫生组织统计，全球每年约有500万人死于癌症。药物治疗是癌症的主要治疗手段之一，但存在毒副作用明显和耐药性等问题。因此，寻找低毒、有效的新型肿瘤治疗药物是近年来的研发热点。

香加皮为萝摩科植物杠柳Periploca sepium Bge.的干燥根皮，始载于《神农本草经》中，列为下品，具有祛风湿，强筋骨的功效，用于风寒湿痹，腰膝酸软，心悸气短，下肢浮肿。香加皮含有甾苷、杠柳毒苷、β-谷甾醇、4-甲氧基水杨醛等。发明人另外发现，香加皮中还含有多甲氧基黄酮和异戊烯基黄酮等成份。已有报道，多甲氧基黄酮具有一定的抗肿瘤作用(CN1436528)；异戊烯基黄酮，例如淫羊藿苷具有增加脑血流，扩张脑血管的作用(王敏等，沈阳药学院学报，1991)。

发明内容

发明人在香加皮活性成分的筛选研究中发现，异戊烯基黄酮苷类化合物显示了非常显著的体内外抗肿瘤活性，而且未发现明显的毒副作用，从而完成本发明。

本发明提供了下式(I)或(II)的异戊烯基黄酮苷类化合物或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药在抗肿瘤方面的用途。

其中，R₁为Xyl(D-木糖)或Glc(D-葡萄糖)，Rha代表L-鼠李糖。

其中，Rha代表L-鼠李糖。

具体地，本发明涉及如下三个化合物的抗肿瘤用途：

化合物1：

化合物2：

化合物3：

上述化合物1—3曾被相关文献揭示过[Phytochemistry，1988，27(11)：3641；药学学报，1992，27(5)：397]，但至今来未见其具有抗肿瘤活性的报道。

本发明利用上述化合物1—3及其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药作为活性成分，单独或组合使用或与其他药物配合制备成在临床上可以使用的各种不同剂型的用于肿瘤治疗的药物。

上述的化合物不仅是化合物本身，适当时也可以是其立体异构体(包括光学异构体，例如对映体和外消旋体)。下文中为简便起见，本发明限定的任何化合物及其溶剂化物、立体异构体、互变异构体都简称为本发明化合物。

在治疗肿瘤中，用本发明的化合物，以常规的制剂工艺，单独使用或与其他药物配合制备成在临床上可以使用的各种不同剂型的药物。如：注射剂、散剂、丸剂、胶囊剂、片剂、微囊剂、软胶囊剂、膜剂、栓剂、膏剂、酊剂、冲剂、气雾剂等各种制剂。

药理实验结果表明，本发明的化合物具有显著抑制人结肠癌细胞Hct-15，人结肠癌细胞Sw-620，人乳腺癌细胞MDA-MB-231，人白血病细胞K562，人肺癌细胞A549，人肝癌细胞SMMC-7721等肿瘤细胞生长的活性，可以促进肿瘤细胞凋亡，提示可以用于肿瘤治疗。体内实验研究结果进一步证实了本发明化合物的抗肿瘤活性。

附图说明

图1为化合物1的¹H-NMR图谱

图2为化合物1的¹³C-NMR图谱

图3为化合物1的ESI-MS图谱

图4为化合物2的¹H-NMR图谱

图5为化合物2的¹³C-NMR图谱

图6为化合物2的ESI-MS图谱

图7为化合物3的¹H-NMR图谱

图8为化合物3的¹³C-NMR图谱

图9为化合物3的ESI-MS图谱

具体实施方式

下述实施例及实验例用于证实本发明化合物的用途，不构成对本发明的限制。除非特别说明，本发明中所有百分比均为体积百分比。

中药香加皮(中国药典)：石家庄乐仁堂有限公司

AB-8大孔树脂：南开大学化工厂

柱层析硅胶：青岛海洋化工厂

Sephadex LH-20：安玛西亚公司

薄层层析用硅胶板及色谱纯乙腈：默克公司

INVOA500型核磁共振波谱仪：Volian公司，TMS为内标

ZMD Micromass型质谱仪：英国Micromass公司

CO₂恒温细胞培养箱：美国SHELLAN公司

PMI1640培养液：GIBCO公司

MTT：Sigma公司

实施例1  本发明化合物的制备

干燥的香加皮药材20Kg粉碎后，用80％乙醇(乙醇/水，以下同)回流提取2次，每次3小时，合并提取液，减压回收溶剂得乙醇提取浸膏2450g。将其悬浮于90L水中，以等量的石油醚、乙醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，分别回收各部分溶剂后得石油醚萃取物、乙醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物。正丁醇萃取物经AB-8大孔树脂柱，依次用水、10％乙醇、30％乙醇、50％乙醇、70％乙醇、95％乙醇梯度洗脱，50％和70％乙醇洗脱液减压回收乙醇后干燥得干膏，再经硅胶柱层析，乙酯-甲醇-氨水(8：2：1体积比)洗脱，薄层层析检测合并成5份，其中第2份经Sephadex LH-20柱层析(甲醇-水梯度洗脱)依次得到化合物1(80mg)，化合物2(92mg)，化合物3(50mg)。

实施例2MTT法体外抑瘤实验

实验材料：人结肠癌细胞Hct-15，人结肠癌细胞Sw-620，人乳腺癌细胞MDA-MB-231，人白血病细胞K562，人肺癌细胞A549，人肝癌细胞SMMC-7721(美国菌种保藏中心)。

采用常规MTT法。收集处于对数生长期的上述各肿瘤细胞，用0.25％的胰蛋白酶消化细胞，然后用10％的RPMI1640培养液调整细胞浓度为1.0×10⁵/ml，接种于96孔细胞培养板，每孔100ul，分别加入不同浓度的化合物1，阴性对照药为磷酸盐缓冲液，阳性对照药为顺铂。每组均设3个复孔。置于37℃，5％CO2培养箱中培养72h，于培养结束前4h，各培养孔加入10ul MTT(5mg/ml)，培养结束后，吸去培养上清，每孔加入10％的SDS 100ul，震荡10min，使结晶物充分溶解，放置过夜，最后用酶标仪于490nm波长处测定各孔OD值，进行细胞增殖分析，统计数据并进行t检验。

实验结果显示，化合物1在极小剂量下对Hct-15，Sw-620，MDA-MB-231，K562，A549，SMMC-7721细胞生长即有明显的抑制作用。

在相同的实验条件下，化合物2和3也取得了类似的结果。化合物1-3对多种肿瘤细胞的IC50值见表1。

表1 本发明化合物对多种肿瘤细胞的抑制作用(IC50：ug/ml)

实施例3 S180肉瘤小鼠体内抑瘤实验

实验材料

小鼠S180，河北医科大学。清洁级昆明种小鼠，雄性，体重18-20g，购自河北省实验动物中心。顺铂，山东省德州制药厂生产。

实验方法

采用昆明种小鼠皮下接种S-180肉瘤模型。瘤种体外培养至对数生长期，记数，调节细胞数为6×10⁶个/ml，接种于小鼠右前肢腋下，每只0.2ml，随机分成5组，每组动物10只，同时记录每组小鼠体重。设生理盐水组和顺铂阳性对照组，三个化合物设5.0mg/Kg剂量组，于接种后次日连续腹腔注射给药8天，第9天脱颈椎处死动物，记录小鼠体重，解剖取出瘤块，称重，根据下式计算抑瘤率。

实验结果

本发明化合物对S180小鼠肉瘤的生长具有明显的抑制作用，抑瘤率分别为36.7％，28.1％，32.8％，而对小鼠体重无明显影响(见表2)。

表2 本发明化合物对昆明种S180肉瘤小鼠的抑瘤率

实施例4 肝癌小鼠体内抑瘤实验

实验材料

BALb/c纯系小鼠，雄性，8-12周龄，体重20-22g，购自河北医科大学实验动物中心。H-22肝癌小鼠，购自河北医科大学实验动物中心。顺铂，山东省德州制药厂生产。

实验方法

无菌抽取荷H-22肝癌小鼠第7天腹水，用生理盐水稀释10倍，于受试小鼠右前肢腋窝皮下注射0.2ml。随机分成5组，每组动物10只，同时记录每组小鼠体重。设生理盐水组和顺铂阳性对照组，化合物1、2、3给药剂量均为5.0mg/Kg，于接种后次日连续腹腔注射给药8天，第9天脱颈椎处死动物，记录小鼠体重，解剖取出瘤块，称重，根据下式计算抑瘤率。

实验结果

化合物1、2、3对H-22肝癌小鼠的肿瘤生长具有一定的抑制作用，在5.0mg/kg的剂量时抑瘤率分别达到54.2％、45.6％和56.7％，而对小鼠的体重无明显影响，见表3。

表3 本发明化合物对H-22肝癌小鼠(BALb/c小鼠)的抑瘤率

发明人按照实施例3的大致相同的实验方法，进行了多种类型荷瘤小鼠的体内抑瘤实验，进一步证实了本发明化合物对各种肿瘤均有明显的抑制作用，具体实验结果见表4—6。

表4 本发明化合物对S180荷瘤BALb/c小鼠的抑瘤率

表5 本发明化合物对H-22荷瘤KM小鼠的抑瘤率

表6 本发明化合物对B16黑色素瘤荷瘤c57小鼠的抑瘤率

Claims (3)

1.式(I)化合物或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药在制备抗肿瘤药物中的用途，

其中，R₁为Xyl或Glc。

2.式(II)化合物或其溶剂化物、立体异构体、互变异构体及前药在制备抗肿瘤药物中的用途。

3.根据权利要求1—2任一所述的用途，其中所述的肿瘤为结肠癌、乳腺癌、白血病、肺癌或肝癌。

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