CN101413896A - 一种羟基自由基的测定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种羟基自由基的测定方法，特别涉及一种利用萘基二苯甲烷染料―维多利亚艳蓝BO(C.I 42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基。在50ml容量瓶中，依次移入1.0×10－2mol·L－1碘化钾水溶液8.0ml、1.0×10－3mol·L－1 FeSO40.1ml、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸－磷酸二氢盐缓冲溶液8.0ml、含乳化剂OP为0.5g·L－1的2.0×10－4mol·L－1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0ml，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，根据标准曲线获得的回归方程：A＝0.06C(mol·L－1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L－1～0.0082mol·L－1A为：吸光度；C为：羟基自由基摩尔浓度即双氧水摩尔浓度)计算羟基自由基浓度。本方法具有仪器简单、操作简便快捷、灵敏度高、分析结果准确。

Description

一种羟基自由基的测定方法
技术领域
本发明涉及一种羟基自由基的测定方法，特别涉及一种利用萘基二苯甲烷染料—维多利亚艳蓝BO(C.I 42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基的方法。
背景技术
羟基自由基(·OH)对生物体毒性强危害大，但它的反应活性大，寿命短，存在浓度低。目前，国内外报道的测定羟基自由基的方法有：分光光度法、电子自旋共振法、高效液相色谱法、荧光法、共振散射光谱法等。这些方法或仪器昂贵，或灵敏度不够。
目前尚未见利用萘基二苯甲烷染料—维多利亚艳蓝BO(C.I 42595)作为显色剂的分光光度法测定羟基自由基的方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够克服上述现有技术的弊端，具有操作简便，灵敏度高、结果准确等优点的羟基自由基的测定方法。
本方法的测定原理
在水溶液中，羟基自由基氧化碘离子形成I2，I2与过量的I-反应生成I3 -阴离子，I3 -与维多利亚艳蓝BO缔合生成艳蓝色化合物。维多利亚艳蓝在酸性溶液中显黄绿色，缔合物水溶液则呈艳蓝色，对波长571nm处的可见光有选择性吸收，通过测定溶液的吸光度可以得到溶液中羟基自由基的浓度。
本发明的技术方案
本发明所选用的试剂均为分析纯。
标准工作曲线的绘制
移1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL于50mL容量瓶中，取现配制的5.0×10-4mol·L-1的双氧水0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP0.5g·L-1的2.0×10-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线。
根据标准曲线获得回归方程：A＝0.06C(mol·L-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L-1～0.0082mol·L-1)；其中：A为：吸光度；C为：双氧水摩尔浓度，根据反应原理知，羟基自由基的摩尔浓度与双氧水摩尔浓度成1：1的关系，为方便研究，可用双氧水摩尔浓度C代替羟基自由基摩尔浓度。
羟基自由基的测定：50mL容量瓶中，依次移入1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP浓度为0.5g·L-1的2.0×10-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，查标准曲线或根据标准曲线获得的回归方程计算羟基自由基浓度。本方法测试的羟基自由基浓度范围为0.0mg·L-1～0.0082mol·L-1。
测定体系中共存离子对测定结果会产生影响，以下离子允许量为(mg·L-1)：K+(2000)、Ca2+(2000)、Sn2+(2000)、Al3+(2000)、Pb2+(2000)、NO3-(2000)、SO4 2-(2000)、NH4 +(2000)、Br-(2000)、HC2O4 -(2000)、H2BO3 -(2000)、H4P3O10 -(2000)、柠檬酸根(2000)，Ni+(100)、Cu2+(100)、Co2+(100)、Mn2+(100)、Cr3+(100)、Cl-(5000)、Fe3+(400)、F-(30)、硅酸氢根(1000)、Ag+(0.05)、Hg2+(0.03)、Cd2+(0.05)。
本发明的技术效果
运用本发明提供的维多利亚艳蓝BO为显色剂、分光光度法测定羟基自由基的方法，具有结果准确、操作简便、灵敏度高等优点。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进一步阐述。
实施例
所用试剂均为分析纯。
标准工作曲线的绘制
移1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL于50mL容量瓶中，取现配制的5.0×10-4mol·L-1的双氧水0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸—磷酸二氢盐钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP0.5g·L-12.0×10-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线。
根据标准曲线获得回归方程：A＝0.06C(mol·L-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L-1～0.0082mol·L-1)；其中：A为：吸光度；C为：双氧水摩尔浓度即羟基自由基摩尔浓度。
羟基自由基的测定
在50mL容量瓶中，依次移入1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸—磷酸二氢盐缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP浓度为0.5g·L-1的2.0×10-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，查标准曲线或根据标准曲线获得的回归方程计算羟基自由基浓度。

Claims (1)

1.一种测定羟基自由基的测定方法，其特征在于测定步骤如下：
(1)标准曲线的绘制
移1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL于50mL容量瓶中，取现配制的5.0×10-4mol·L-1的双氧水0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL分别注入容量瓶中，再依次加入pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP0.5g·L-1的2.0×10-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO(C.I42595)水溶液10.0mL，用蒸馏水定容，摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处测定溶液的吸光度，以吸光度为纵坐标，以双氧水浓度为横坐标，绘制标准曲线；
(2)根据步骤(1)的标准曲线获得回归方程：A＝0.06C(mol·L-1)+0.002(r＝0.9994，0.0mg·L-1～0.0082mol·L-1)；其中：A为：吸光度；C为：双氧水摩尔浓度；
(3)羟基自由基的测定
在50mL容量瓶中，依次移入1.0×10-2mol·L-1碘化钾水溶液8.0mL、1.0×10-3mol·L-1FeSo40.1mL、可产生羟基自由基的被测物、pH为2.0的磷酸—磷酸二氢钠缓冲溶液8.0mL、含乳化剂OP为0.5g·L-1的2.0×1.0-4mol·L-1维多利亚艳蓝BO水溶液10.0mL，用蒸馏水定容至50mL；摇匀，静置15min后，用1cm比色皿，试剂空白作参比，在571nm处，测定溶液的吸光度，根据步骤(2)中的回归方程计算羟基自由基浓度。
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