CN101411733B - 一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法 - Google Patents

一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：按1g:2～20ml的比例，将新鲜石榴皮浸泡在混合溶剂中，浸泡提取0.1～2小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为30～50:10～30:5～15:20～40的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。本发明的方法提取的石榴皮抗氧化物产率可达31.5％，经测定，含多酚类24.4mg/g、类黄酮17.2mg/g、原花色素5.3mg/g、抗坏血酸0.9mg/g，其体外对超氧阴离子、羟自由基、脂质自由基的清除能力和对低密度脂蛋白氧化的保护作用均强于石榴果肉提取物。石榴皮抗氧化物LD50大于12g/kg，其毒性水平为实际无毒。

Description

一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法
技术领域
本发明涉及植物石榴皮有效成份的提取方法，特别是涉及一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法。
背景技术
氧化应激损伤在许多疾病(如动脉粥样硬化、糖尿病、肿瘤)发生、发展过程中扮演着一个十分重要的角色。因此，如何防治氧化应激损伤是当前医学研究领域内的热点问题之一。许多学者从天然植物中提取抗氧化物质，应用于氧化应激损伤的防治，取得了一定的效果。我们前期的研究发现，在28种常见水果果肉、果皮、果仁中，石榴皮的抗氧化活性最强，并含有大量多酚类等天然抗氧化物质，因此，研究其有效的提取方法以及应用将具有十分重要的医学价值和潜在的市场前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法。
本发明的技术方案概述如下：
一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按1g:2～20ml的比例，将新鲜石榴皮浸泡在混合溶剂中，浸泡提取0.1～2小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为30～50:10～30:5～15:20～40的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
浸泡提取的温度可以选20～100℃，最好是80℃。
在浸泡提取时，可以将溶液的pH调节为3～8，最好是pH为6。
所述新鲜石榴皮和混合溶剂较好地选1g:5～10ml。
所述浸泡提取时间最好是1小时。
所述混合溶剂最好由体积比为40:20:10:30的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
本发明的一种石榴皮抗氧化物的提取方法，提取的石榴皮抗氧化物产率可达31.5％，所提取的石榴皮抗氧化物经测定，含多酚类24.4mg/g、类黄酮17.2mg/g、原花色素5.3mg/g、抗坏血酸0.9mg/g，其体外对超氧阴离子、羟自由基、脂质自由基的清除能力和对低密度脂蛋白氧化的保护作用均强于石榴果肉提取物。
采用健康昆明小鼠进行的急性毒性实验，结果表明采用上述方法提取的石榴皮抗氧化物LD50大于12g/kg，因此，其毒性水平为实际无毒。
附图说明
图1为甲醇、乙醇、丙酮和混合溶剂对石榴皮抗氧化物质提取效果的比较。
图2为提取温度对石榴皮抗氧化物质提取效果的影响。
图3为提取pH对石榴皮抗氧化物提取效果的影响。
图4为提取时间对石榴皮抗氧化物提取效果的影响。
图5为液料比对石榴皮抗氧化物提取效果的影响。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
一种石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按质量比为1g:10ml的比例，将石榴皮浸泡在混合溶剂中，常温浸泡提取1小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为40:20:10:30的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
实施例2
一种石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按质量比为1g:10ml的比例，将石榴皮浸泡在混合溶剂中，将溶液的pH调节为6，80℃浸泡提取1小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为40:20:10:30的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
实施例3
一种石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按质量比为1g:5的比例，将石榴皮浸泡在混合溶剂中，将溶液的pH调节为8，20℃浸泡提取2小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为30:20:15:20的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
实施例4
一种石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按质量比为1g:2ml的比例，将石榴皮浸泡在混合溶剂中，将溶液的pH调节为3，50℃浸泡提取2小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为40:30:5:30的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
实施例5
一种石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按质量比为1g:20ml的比例，将石榴皮浸泡在混合溶剂中，将溶液的pH调节为6，100℃浸泡提取0.1小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为50:10:12:40的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
实施例6
一种石榴皮抗氧化物的提取方法，包括如下步骤：
按质量比为1g:8ml的比例，将石榴皮浸泡在混合溶剂中，将溶液的pH调节为7，80℃浸泡提取0.5小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为35:22:15:22的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
实施例7
混合溶剂对石榴皮抗氧化物质的提取效果
采用FRAP法测定抗氧化活性，根据甲醇、乙醇、丙酮在混合溶剂中的含量水平(40％、30％、20％、10％、0)进行正交实验，选择其中有较好提取效果(通过测定提取物的抗氧化活性进行评价)的体积比进行进一步比较，结果如表1所示，2、3、4、5号混合溶剂组间无显著性差异，但都与1号溶剂存在显著性差异(P<0.05)，其中4号溶剂最好。
表1  不同混合比例溶剂提取石榴皮抗氧化物效果比较
Figure G2008101535554D00031
*P<0.05，1 vs 2，3，4 or 5.n＝4.
实施例8
甲醇、乙醇、丙酮和混合溶剂对石榴皮抗氧化物提取效果的比较
采用FRAP法测定抗氧化活性，比较甲醇、乙醇、丙酮和混合溶剂对石榴皮抗氧化物提取效果。测定结果如图1所示，其中溶剂代号1、2、3、4分别代表甲醇、乙醇、丙酮溶液和混合溶剂。结果表明混合溶剂所提取的抗氧化物抗氧化活性最强，与其它溶剂提取物比较差异具有非常显著性(P<0.01)，
实施例9
提取温度对石榴皮抗氧化物提取效果的影响
采用FRAP法测定抗氧化活性，以上述混合溶剂在不同温度下提取石榴皮中抗氧化物质。结果(图2)表明，80℃时提取效果最好。
实施例10
提取pH对石榴皮抗氧化物提取效果的影响
采用FRAP法测定抗氧化活性，以上述混合溶剂在不同pH下提取石榴皮中抗氧化物质。结果(图3)表明，pH6时提取效果最好。
实施例11
提取时间对石榴皮抗氧化物提取效果的影响
采用FRAP法测定抗氧化活性，以上述混合溶剂提取石榴皮中抗氧化物质，观察提取时间的影响。结果(图4)表明，提取1小时效果最好。
实施例12
液料比对石榴皮抗氧化物提取效果的影响
采用FRAP法测定抗氧化活性，以上述混合溶剂提取石榴皮中抗氧化物质，观察液料比的影响。结果(图5)表明，液料比10/1～20/1时提取效果较好，从节约溶剂的角度考虑，应选择液料比10/1。
实施例13
石榴皮提取物中抗氧化物质含量测定
采用Folin-酚法、分光光度法或荧光法分别测定提取物中多酚类、总类黄酮、原花色素、维生素C含量，结果表明提取物中抗氧化物质含量十分丰富，多酚类、类黄酮、原花色素、抗坏血酸含量分别为24.4mg/g、17.2mg/g、5.3mg/g、0.9mg/g(实施例2)。
实施例14
石榴皮提取物对超氧阴离子、羟自由基、脂质自由基的清除作用
采用黄嘌呤氧化酶法、HORAC法、ORAC法测定石榴皮提取物对超氧阴离子自由基(O2 -。)、羟自由基(·OH)、脂质自由基(ROO·)的清除能力，并与石榴果肉提取物相比较。结果(表2)表明，石榴皮提取物(实施例2)对上述自由基均有良好的清除作用，并强于果肉提取物。
表2  石榴皮提取物对O2 -、·OH、ROO·清除作用(x±s，n＝5)
Figure G2008101535554D00041
*P<0.05，**P<0.01
实施例15
石榴皮提取物急性毒性实验
雄性昆明小鼠30只，体重20.1±1.1g，适应喂养5天，按体重随机分为a、b、c三组，每组10只进行灌胃；a组样品灌胃浓度200g/L，每次灌胃0.4mL，连续3次，每次间隔2~3h，b组灌胃浓度200g/L，灌胃一次；c组灌胃浓度50g/L，灌胃一次。a组累积剂量为12g/kg，b组4g/kg，c组1g/kg，观察7天。
观察结果表明，灌喂石榴皮提取物b、c两组一切正常，a组小鼠24h内无死亡，但精神稍差，可能为多次灌胃所致；24h后各组小鼠一切活动均正常。观察一周，无异常情况出现。计算LD50大于12g/kg，根据国标法急性毒性试验评价标准，可认为石榴皮提取物实际无毒。
实施例16 提取率实验：
采用本发明的提取方法，提取新鲜石榴皮中的抗氧化物，重复四次，采用FRAP法，测定提取液抗氧化活性为(4.6±0.6)mmol/L。提取液经减压浓缩，得干燥褐色提取物，计算平均收率为(31.5±3.0)％，水分含量为(8.9±0.8)％。

Claims (8)

1.一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是包括如下步骤：按1g∶2～20ml的比例，将新鲜石榴皮浸泡在混合溶剂中，浸泡提取0.1～2小时，减压浓缩干燥，得到石榴皮抗氧化物，所述混合溶剂由体积比为30～40∶10～20∶10～15∶30～40的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
2.根据权利要求1所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述浸泡提取的温度为20～100℃。
3.根据权利要求1或2所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是在所述浸泡提取时，将溶液的pH调节为3～8。
4.根据权利要求1或2所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述石榴皮和混合溶剂比为1g∶5～10ml。
5.根据权利要求1或2所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述浸泡提取时间为1小时。
6.根据权利要求1或2所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述混合溶剂由体积比为40∶20∶10∶30的丙酮、甲醇、乙醇和水组成。
7.根据权利要求2所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是所述浸泡提取温度为80℃。
8.根据权利要求3所述的一种新鲜石榴皮抗氧化物的提取方法，其特征是在所述浸泡提取时，将溶液的pH调节为6。
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