CN101405015B - 用于预防和治疗普通感冒病的组合物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及岩蔷薇属生产用于预防和/或治疗普通感冒病的组合物的用途。具体地，该组合物能够用于预防和/或治疗头伤风的症状。

Description

用于预防和治疗普通感冒病的组合物

处于考虑中的本发明涉及岩蔷薇属(Cistus)生产用于预防和/或治疗普通感冒病(病毒性感冒)的组合物或制剂的用途。

典型的普通感冒病中包括的是呼吸道感染，诸如头伤风和扁桃腺炎和咽炎，以及咳嗽和支气管炎。通常这些相继发生，但是感冒还能够保持仅限于鼻子、咽喉或支气管。这种类型的普通感冒病也称为“病毒性感冒”。这些不应该与由流感病毒产生的流行性感冒混淆，所述流行性感冒显示出明显更长和更严重的疾病进程，且通常与发烧相关。

提及的普通感冒病也是由病毒引起的。因为，例如，存在着超过一百种不同类型的能够引起头伤风的病毒，所以几乎不可能开发针对它的疫苗。因此，头伤风或感冒的治疗通常以减轻症状为目标。在这些情形中，通常使用试验证明效果良好的家庭治疗法。例如，非常堵塞的鼻子能够通过吸入热蒸汽得到帮助。这容许鼻粘膜中肿胀的减小并促进粘液的流出。例如，通过向热水中添加几滴茶树油或甘菊油能够对其起到辅助作用。还已知用盐溶液日常冲洗鼻子能够降低对头伤风的易感性。

除自助式措施外，药物能够帮助收缩肿胀的鼻粘膜中的脉管，从而引起对鼻粘膜的缓解作用。然而，用于减轻鼻粘膜肿胀的滴鼻剂不应该使用长于2或3天。这段时间后，当停止所述滴剂后，鼻粘膜可能会更加肿胀，并且发展为“回弹肿胀”(药物性鼻炎)。

与化学合成的鼻喷雾不同，植物药物几乎没有副作用。即使在较长时期内使用，它们不损伤鼻粘膜，且不引起药物性鼻炎。越早应用植物药物，它们越有效。已经能够将它们用于支持感冒的第一征兆。它们还抵制感染的传播。

例如，松果菊属(echinacea)制剂常常用于普通感冒病，由此市场上存在大量关于不同植物化学组合物的多种药物。然而，对这些植物治疗剂功效的受控研究仅以有限的程度存在，并具有矛盾的结果。然而，最近，新研究揭示松果菊属不具有假定的功效。本研究使用具有不同植物化学特征的三种松果菊属制剂进行，其中这些制剂是通过用二氧化碳、60％乙醇或20％乙醇提取狭叶松果菊(E.-angustifolia)根获得的。参加该研究的总共437名患有鼻病毒感染的志愿者在暴露于该病毒7天前作为预防或在暴露时为了治疗接受该药物。该研究包括接受安慰剂的对照组。关于感染率、症状的严重性、鼻分泌物的体积、白细胞水平、鼻冲洗水中的白介素-8浓度或定量的病毒滴度，在这三种松果菊属提取物和安慰剂之间不存在显著差别(Deutsches102，来自2005年12月2日第48期，第A-3341/B-2822/C-2640页和新英格兰医学杂志(New England Journal ofMedicine)，2005，353,341-348)。

在植物学基础上的其他药物是来自荷叶铁线天竺葵(Pelargoniumreniforme)或sidoides的根的提取物，它们以名称Umckaloabo出售。Umckaloabo传统上不仅用于呼吸道疾病，还用于胃肠疾病。现认为决定功效的成分是许多抗菌和免疫调节成分，诸如香豆素和鞣质(tannins)。假定该提取物发展抗菌、抗病毒和分泌溶胞效应，由此怀孕或哺乳期女性或患有肝或肾病或增加的出血倾向的患者不应该使用该药物，因为在该领域中还不可能收集到足够的经验。而且，与其他植物药物相比，非常昂贵。

因此，本发明的目的是提供用于预防和/或治疗普通感冒病(病毒性感冒)的抗病毒组合物，由此该组合物能够经济地生产，并且当施用时，完全不引起副作用或仅引起微小的副作用。

该目的是通过岩蔷薇属生产用于预防和/或治疗普通感冒病(病毒性感冒)的组合物的用途解决的。

附图简述

图1显示碘化丙锭(propidium iodide)染色用岩蔷薇属提取物处理过的A549细胞进行的生存能力检测的结果。

图2显示碘化丙锭染色用岩蔷薇属提取物处理过的MDCK细胞进行的生存能力检测的结果。

图3显示岩蔷薇属提取物处理过的A549细胞的程序性细胞死亡检测的结果。

发明详述

关于本发明的目的被理解为普通感冒病的是呼吸道，通常意指，鼻、咽、喉、气管和支气管的炎症。在该情形中，术语“普通感冒病”和“病毒性感冒”同义使用。病毒性感冒区别于流行性感冒，因为后者是仅由流行性感冒病毒引起的。

另一方面，病毒性感冒通常由腺病毒、冠形病毒和/或鼻病毒引起。

腺病毒(腺病毒科(Adenoviridae))属于无包膜立方DNA病毒家族，并具有60-90nm的直径。基因组由大约36kb长的线性双链DNA组成。人们区分了大约50种免疫学上不同的腺病毒类型，在亚类A-F中有大约35种人类致病类型。腺病毒科家族分为能够感染哺乳动物的哺乳动物腺病毒属(Mastadenoviruses)和局限于多种鸟类物种的禽类腺病毒属(Aviadenoviruses)。腺病毒的特征在于面对化学和物理作用时不寻常的稳定性，并耐受最不利的pH水平，这容许它们在宿主体外具有相当长的生存时间。

腺病毒主要引起呼吸道疾病。然而，依据具体的血清型，还能够引起许多其他疾病，例如，肠胃炎、结膜炎、膀胱炎、咽炎或腹泻。由腺病毒引起的呼吸道疾病的症状在普通感冒到支气管炎到肺炎的范围内变化。在具有衰弱的免疫系统患者的情形中，存在着对来自腺病毒感染的严重并发症的特殊易感性，诸如例如，ARDS(急性呼吸困难综合征)。此外，怀疑病毒类型Ad-36和人类肥胖之间存在相关性。

冠状病毒，其属于冠状病毒(Coronaviridae)种，通常引起人类的轻度上呼吸道疾病，罕见引起肠胃炎和由与SARS-相关的冠状病毒SARS-CoV引起的严重急性呼吸综合征(SARS)。

冠状病毒被分类在有包膜多晶RNA病毒家族中，且具有70-160nm的直径。它们具有长度为20-30kb的单链正义RNA。冠状病毒(Coronaviridae)种分为三个属：冠状病毒属(coronaviruses)、动脉炎病毒属(arteriviruses)和环状病毒属(toroviruses)。其中，只有冠状病毒包括人类致病病毒。病毒的传播通过飞沫传染(产气的)发生，以污物或污迹感染(排泄物-口的)或甚至通过与被感染的人的简单接触(机械的)发生。该情形中，较年轻的被感染生物体能够变得比年长的生物体病得更重。冠状病毒引起人类中15-30％的具有轻微发烧、头伤风、咳嗽和喉咙痛的普通感冒病。

具有由传染性、过敏和非过敏机制引起的发痒、打喷嚏、分泌物和堵塞症状的急性或慢性鼻粘膜炎症称为鼻炎、鼻粘膜炎、鼻卡他或俗称头伤风。病原体通常是小RNA病毒种-鼻病毒。鼻病毒的感染通过直接传播而发生，例如，通过污染的手或还通过飞沫传染。

迄今，已经鉴定了该种中超过115种血清型。鼻病毒具有长度为7.2-8.5kb的单链正义RNA(信使RNA)。这些是具有二十面结构且具有24-30nm的直径的裸露病毒。包围着该RNA的10-15nm厚的蛋白质包膜(衣壳)由60个对称性排列的亚单位组成，所述亚单位称为原聚体。每个原聚体由四种衣壳蛋白VP1、VP2、VP3和VP4组成。认为原聚体的多重数量是鼻病毒抗原多功能性的原因。

如已经提及地，普通感冒病通常由腺病毒、冠状病毒和/或鼻病毒引起。依赖于感染病毒的类型，能够发生例如由扁桃腺和咽部炎症引起的感冒病症诸如头伤风、咳嗽、嘶哑、喉咙痛，关节疼痛和头痛，寒战，轻微发烧和疲劳。为了本发明的目的，支气管炎和支气管肺炎也认为是普通感冒病。

这些普通感冒病中，在冬季月份中头伤风发生得最频繁。这是由鼻病毒，或较少见地，腺病毒感染引起的。所述组合物或制剂优选地用于预防和/或治疗头伤风。

此外，细菌感染，其“建立”在已经存在的病毒感染上，能够伴随普通感冒病发生。这种类型的感染称为继发性细菌感染或细菌重复感染。本发明所述的组合物的用途还涉及预防和/或治疗这些继发性细菌感染。

按照本发明，使用岩蔷薇属植物生产用于预防和/或治疗病毒性感冒感染的组合物。已知岩蔷薇属的20种类型：

微白岩蔷薇(C.albidus L.)

C.chinamadensis Banares & P.Romero

C.clusii Dunal

C.crispus L.

C.heterophyllus Desf.

灰白岩蔷薇(C.incanus(也叫作C.creticus))

C.inflatus Pourr.Ex Demoly(也叫作C.hirsutus Lam.或C.psilosepalusSweet)

黑脂岩蔷薇(C.ladanifer L.)

桂叶岩蔷薇(C.laurifolius L.)

C.libanotis L.

蒙山岩蔷薇(C.monspeliensis L).

C.munbyi Pomel

C.ochreatus Chr.Sm.ex Buch

C.osbeckiifolius Webb ex Christ.

C.parviflorus Lam.

杨叶岩蔷薇(C.populifolius L.)

C.pouzolzii Deute

鼠尾草叶岩蔷薇(C.salviifolius L.)

C.sintenisii Litard.(也叫作C.albanicus E.F.Warburg ex Heywood)

合生花叶岩蔷薇(C.symphytifolius Lam.)

优选地，从灰白岩蔷薇(C.incanus)物种生产所述组合物。灰白岩蔷薇包括两个亚种，灰白岩蔷薇亚种tauricus以及灰白岩蔷薇亚种undulatus。在这些当中，亚种灰白岩蔷薇亚种tauricus特别优选地用于该组合物。

岩蔷薇属植物分离的成分尚未完全已知。然而，已经显示出岩蔷薇属具有高含量的多酚。这些多酚中，特别有力地描述了类黄酮。

类黄酮基本由两个芳香的和一个氧化的杂化组成。利用O-杂环上的结构差别，可将类黄酮分为下列六组：黄酮醇、黄烷醇、黄烷酮、黄酮、花青素苷和异类黄酮(isoflavanoid)。岩蔷薇属植物中检测到一些成分是黄酮醇，诸如栎精和杨梅黄酮和它们的配糖，黄烷-3-醇(儿茶精类)，诸如(+)-没食子儿茶精和(+)-没食子儿茶精-3-O-没食子酸，以及儿茶精的二聚物和低聚物，原花色素。

其他成分是α-品恩(α-pinen)，莰烯和类萜，诸如labda-7，13-二亚乙基三胺-15-醇、8α，15-赖百当二醇、赖百当酸、月桂叶酸、乙酰基月桂叶酸、8，13-环氧-15-二甲氧基-内-赖百当、3a-羟基-内-epimanoyl oxide(＝ribenol)、salmanti酸(salmanti acid)、salmanti二醇(salmanti diol)、halimic酸(halimicacid)、二氢halimic酸、2β-羟基-二氢halimic酸、cistodioic acid、cistodiol、内-kauran-16，17-二醇、二氢-松香酸-甲基酯、cabraleone和20，25-环氧-24-羟基dammaran-3-on[R.Hegnauer，Chemotaxonomie der Pflanzen卷VIII S.1989，246-247]。

按照本发明使用的组合物是从植物的地上部分生产的。优选地，使用在同一年中长回到原来状态的植物地上苗。能够使用植物地上部分的所有元件，诸如叶子、茎或花。优选地，使用带有叶子和花的茎。可以在收获后对植物的所述部分进行干燥或直接挤压，意指处于自然状态，当合适时，在打碎后，从而由挤压产生汁。在进一步的实施方案中，用溶剂对处于自然状态的植物部分进行提取，诸如例如浸渍或渗滤。备选地，还可以对植物部分进行干燥和/或随后在提取前，以适当的方式打碎成小块，例如通过研磨或切断它们的方法。

对于按照本发明使用的组合物，使用了干燥的和当合适时，打碎成小块的植物元件，挤压的植物汁或提取物。按照本发明，术语“提取物”代表性地用于指通过利用溶剂的提取方法，诸如用浸渍或渗滤获得的全部产物。

优选地，所述植物处于来自岩蔷薇属植物的提取物形式。

通常，发生利用合适溶剂的提取。合适的溶剂是水，醇诸如甲醇、乙醇或异丙醇，或氯化了的溶剂诸如二氯甲烷，以及丙酮，乙酰丙酮，乙基丙酮，氨水或冰醋酸，还有超临界的二氧化碳。也能够使用所提及的溶剂的混合物。优选地，使用水或水与甲醇或乙醇的混合物。

提取通常在25℃到当合适时，高至所用溶剂的沸点的温度下进行。优选的是在95-100℃下提取。

此外，脂肪诸如猪肉脂肪，蜡诸如蜂蜡，或油诸如橄榄油和杏仁油可以用于提取。优选地，使用杏仁油。

为了获得最高的可能产率，可以对植物材料提取许多次。在该情形中，还可能在不同的提取步骤中使用不同的溶剂，或者在利用溶剂提取后可以进行利用脂肪、蜡或油的提取，或反之亦然。

通过提取，获得液体、半固体或固体初级产物，它们可以该形式用来生产用于预防和/或治疗普通感冒病的组合物。

浸渍过程通常在室温下，利用水和乙醇的混合物进行5-9天，优选地，7天，该过程是通过将所述溶剂混合物倒在植物元件上，并容许其静置所述的一段时间。

按照本发明，植物部分的渗滤通常通过将该部分在95-100℃下，利用水处理4-5小时获得的，该过程是通过引导水流过植物部分实现的。

在使用前，还可以浓缩和/或干燥和/或进一步处理获自利用溶剂提取，诸如浸渍或渗滤的初级产物。进一步的处理可以，例如，包括本领域技术人员已知的清洗步骤，诸如离心、过滤和倾析，从而从提取物中去除悬浮的物质。

随后，可以将以该方法获得的提取物进一步处理为干燥的提取物。为了生产干燥的提取物，能够通过例如喷雾干燥、冷冻干燥或真空干燥，从液体初级提取物、浓缩的提取物或清洗的提取物中去除溶剂。

来自岩蔷薇属植物的组合物能够以上述各种形式用于预防和/或治疗普通感冒病。

所述组合物优选地用于预防和/或治疗由鼻病毒、腺病毒或冠状病毒引起的普通感冒病。

因此本发明所述的组合物能够作为药物施用。除治疗用途外，该组合物还适合于非-治疗性的预防和/或治疗普通感冒病。

对于医学和非-医学的应用，所述组合物可以以本领域技术人员所熟悉的各种应用方式应用，例如，作为片剂、包衣片剂、泡腾片剂、胶囊、粉剂、颗粒剂、糖衣片剂、软膏剂、霜剂、凝胶、溶液剂或喷雾剂。

在植物制剂和其他应用形式中，可以用常规植物制剂辅助物，诸如片剂粘合剂、填充剂防腐剂、片剂打开剂、径流调节剂、软化剂、润湿剂、分散剂、乳化剂、溶剂、阻滞剂、抗-氧化剂、稠度调节剂、渗透性促进剂和/或压缩气体，处理所述组合物。

可以向按照本发明使用的组合物中加入其他成分，诸如维生素和矿物。

还能够，例如将该组合物添加到动物饲料或食料，诸如饮料中。以提取物的形式，该组合物本身还可以作为茶进行沏泡。然而，对于茶制备，将热水直接倒到所述植物部分，例如岩蔷薇属植物的叶子上也是可能的。此外，所述组合物能够是食物添加剂的成分，在冬季月份中对其的摄取能够促进加强身体的防卫系统，并从而防止例如，头伤风感染。

在进一步的实施方案中，所述组合物能够按照本发明作为溶液，特别是漱口溶液使用，从而预防和/或治疗普通感冒病，特别是口和咽中的炎症。

所述组合物还能够与其他植物的成分混合使用，在该情形中，所述成分优选地以植物提取物的形式。优选地，使用具有相似或协同作用的植物或植物提取物的成分。

处于应用形式的所述组合物的浓度依据应用的类型而变化。通常，对于固体应用形式，组合物的量总计0.5-1,000mg/剂量单位。优选地，组合物的量总计1-500mg/单位。在液体应用形式中，组合物可以处于1μg/ml-100mg/ml的浓度，优选地，25μg/ml-50mg/ml。在半固体应用形式中，组合物的含量总计1-90重量％，优选地5-75重量％。

优选地，该组合物以片剂的形式施用。在该情形中，优选地所述组合物是以提取物形式。最特别优选地，所述组合物处于干燥提取物的形式。

此外优选地，为了局部的应用，以乳剂、软膏剂、凝胶或霜剂的形式施用所述组合物。在该情形中，优选地使用以提取物形式的组合物，其中通过利用脂肪、蜡或油的提取方法从植物中抽出活性物质。此外优选地，进一步将该提取物处理为干燥的提取物，随后将其混合于或溶解于脂肪、蜡或油中。

此外，以气雾剂或房间喷雾剂形式的组合物是优选的。优选地，对此使用岩蔷薇属的液体或固体提取物。除提取物外，气雾剂或房间喷雾剂还能包含药物无害物质、载体介质和助剂。气雾剂或房间喷雾剂能够用于消毒感冒病毒接触到的或能够潜在接触到的物体或房间，特别是，在其中运送人、动物和/或食料的所有类型的交通工具。例如，可以在起飞前，用本发明所述的气雾剂或用按照本发明的房间喷雾剂喷洒飞机，从而防止感冒病毒的传播，并且从而最小化人群感染的风险。所述气雾剂或房间喷雾剂还可以在人群面前喷洒，例如在等候室中，因为它无论如何不在人群中引起毒性作用。

此外，所述组合物还能够作为鼻试剂或作为吸入溶液施用。所述鼻试剂能够作为鼻喷雾或作为鼻凝胶使用。为了施药，可以使用多种施药器和分散系统。

按照本发明的岩蔷薇属用途不仅限于人，而是对动物，特别是哺乳动物诸如宠物或家畜也是可能的。

下列实施例解释在考虑中的本发明。

测试了岩蔷薇属提取物的细胞毒性和细胞生存能力，及其针对鼻病毒的抗病毒活性。为了该目的，在加热(1h/100℃)的同时，将提取物溶解在PBS(无菌)中(储液1mg/ml)。体外研究的剂量是100μg/ml系统。

人类鼻病毒14型作为病毒隔离群。

HeLa细胞(人类子宫颈癌细胞系)作为宿主细胞系。

为了确定提取物的特征，使用了下列检查方法。

显微镜检查

在显微镜检查中，用多种浓度的提取物(2，10，25，50μg/ml)对A549肺上皮细胞和MDCK(Madin-Darby犬肾细胞)犬肾上皮细胞处理不同的时间长度(9h，24h，32h，48h)，并随后通过光学显微镜检查。该实验检查了两次。

生存能力检测

在生存能力检测中，用多种浓度的提取物(2，10，25，50μg/ml)对A549肺上皮细胞和MDCK犬肾上皮细胞处理不同的时间长度(24h，48h，56h，72h)，并随后用碘化丙锭染色，从而通过利用流式细胞计数方法确定死细胞和活细胞的关系。该实验总共进行了四次。

凋亡胱天蛋白酶激活的研究

为了研究凋亡胱天蛋白酶的活化，用25和50μg/ml的提取物处理A549细胞48小时。然后溶解该细胞，利用凝胶电泳分离细胞蛋白质，并以利用抗PARP抗体(聚(ADP-核糖)聚合酶，胱天蛋白底物)的蛋白质印迹检验由胱天蛋白酶引起的该蛋白质的凋亡裂解。程序性细胞死亡-诱导剂星形孢菌素作为阳性对照刺激物。该实验在两个平行批次中进行。

实施例

制备来自灰白岩蔷薇新亚种tauricus的提取物

将再生的地上苗(叶、花和茎)用于提取。将植物材料在室温下在室外阴凉处晾干，直到它具有不大于10％的残留水份含量。随后，将植物部分切成≤8mm的大小。

将切割的植物部分在95-100℃用10倍量的纯水欧洲药典(Ph.Eur.)进行渗滤4-5小时。通过平板蒸发器，将得到的溶液在75-80℃的蒸汽温度下浓缩到初始体积的18-19％。干物质的含量为约45％。

使用带有搅动器的蒸发器，通过将所述提取物在减压(0.6bar)下在110-114℃加热4小时的方式，而将干物质含量增加到50-51％。随后，将提取物在100.3℃煮沸1小时，以获得约53％的干物质含量。

最后，在16mbar使用下降的温度梯度(140℃，120℃，90℃，20℃)进行真空传送干燥。干物质的含量是92-93％。然后将提取物碾碎。然后从这一提取物制备上文所述的储液。

显微镜研究

在使用MDCK细胞和A549细胞的研究系列的显微镜照片中，当与未处理的对照样品比较时，关于所用的任何提取物浓度或所研究的时间值，关于细胞数目和细胞形态没有检测到显著的变化。

存活力检测

存活力检测的结果显示在图1和2中，其中为了比较，将来自每个样品的活细胞数目总结显示为进行的四次测定的平均值。在该结果中，在72小时的整个观察期间没有检测到所述提取物对MDCK或A549细胞的存活的不利影响。

凋亡胱天蛋白酶激活的研究

凋亡胱天蛋白酶激活研究的结果显示在图3中，其中显示了用于确定胱天蛋白酶活性的蛋白质印迹分析的结果。尽管对照刺激物星形孢菌素(Stauro)导致胱天蛋白酶底物聚(ADP-核糖)聚合酶的有效裂解(PARP裂解条带)，但是在未处理的(模拟物)或在提取物-处理的细胞(25μg/ml，50μg/ml)中没有显示出这样的活性。针对蛋白ERK2的对照印迹作为均一蛋白上样的对照。结果可以推论出，在所用的浓度和在所观察的期间，使用植物提取物处理没有导致胱天蛋白酶激活和程序性细胞死亡的诱导。

对用岩蔷薇属提取物处理的细胞的形态学、生存能力和胱天蛋白酶激活的研究显示多达50μg/ml浓度的提取物不对此处所用的A549和MDCK宿主细胞表现出任何显著的毒性作用，并且也不诱导增加的坏死或程序性细胞死亡。此外，不能检测到细胞数量上的显著减少，因此细胞生长也不由于提取物作用而受到限制。

抗病毒活性研究

鼻病毒培养

用人类鼻病毒14型(HRV)接种4个具有80％汇合的HeLa细胞的T175培养瓶，并在33℃培养一周。为此，在16ml感染培养基(DMEM(Dulbecco′s Modified Eagle Medium)，2％FCS(胎牛血清)，10-20mMMgCl₂)中混合50μl HRV14(病毒滴度10⁸/ml TCID(组织培养感染剂量))，并将4ml加入到每个T175中。然后向每个T175中填入10ml感染培养基，因此每个T175中有14ml感染培养基。一旦溶解了70％的贴壁细胞，就收获病毒。

鼻病毒的纯化

首先以3,000rpm离心病毒上清液30分钟，从而去除细胞沉淀。在超速离心机中，在蔗糖缓冲(1.5ml处于水中的蔗糖65％，300μl10xPBS(磷酸盐缓冲液)，1.2ml水)上，以35,000rpm(转子类型SW41Ti，在贝克曼异质同晶聚合物管中)，4℃，离心病毒上清液3小时，并将沉淀引入到100μl感染培养基中。用100kDa截留值的过滤器(Centricon YM100)在3,300rpm，4℃，进行进一步的病毒浓缩1小时。保留物含有纯化的病毒浓缩物；丢弃滤出液。

抗病毒活性的研究(组织培养感染剂量(TCID)测定)

在前一天，将5x10⁴个HeLa细胞接种到DMEM培养基/96孔板中，因此第二天，细胞汇合约70％。第二天吸去DMEM培养基，并换成90μl感染培养基(DMEM，2％FCS，10-20mM MgCl₂)。在第一96-孔排中，使用10μl含有病毒的溶液，感染以最高浓度100μl/ml发生。在通过上下抽吸的方式将这100μl混合后，将每种中的10μl放入第二96-孔排中。对其它排重复该步骤(1：10稀释系列)。同时进行了2或3批次，并用于进行评价。

在培养箱中，在33℃，将以该方式处理的平板培养5天。在第5天，用PBS洗涤该平板至少2次，并用100μl结晶紫/96-孔(在纯乙醇中0.07％)染色5小时。随后在水中洗涤该平板，并敲打许多次(大约10次)，并干燥。蓝色着色指示活细胞。死细胞从孔中洗掉了，并留下白色背景。

为了检测岩蔷薇属提取物对HRV14感染性的作用，将100μg/ml岩蔷薇属提取物加入到感染培养基中，或者用100μg/ml岩蔷薇属提取物额外预处理病毒1小时。

结果，能够看到，岩蔷薇属提取物能够防止感染，和由此在感染培养基中和在进行的所有批次中病毒的额外预处理后防止细胞层的破坏。在使用的浓度中，岩蔷薇属提取物无论如何对细胞没有可检测到的损害影响。这证明了岩蔷薇属提取物对鼻病毒传染性的抑制作用。

Claims (12)

1.灰白岩蔷薇(Cistus incanus)的提取物生产用于预防和/或治疗由鼻病毒引起的原发性感染的组合物的用途，其中使用所述植物的地上部分，并且其中所述提取物是使用水、乙醇或水与乙醇的混合物作为溶剂从所述植物的地上部分在25℃至所用溶剂的沸点的温度下提取的水提取物或酒精提取物。

2.按照权利要求1的用途，其中所述由鼻病毒引起的原发性感染是头伤风。

3.按照权利要求1或2的用途，其中所述组合物是以液体、干燥或半固体的形式。

4.按照权利要求1或2的用途，其中所述组合物以口服或局部施用。

5.按照权利要求1或2中至少一项的用途，其中所述组合物作为鼻试剂或吸入混合物存在。

6.按照权利要求1或2中至少一项的用途，其中所述组合物作为气雾剂存在。

7.按照权利要求6的用途，其中所述气雾剂是房间喷雾剂或鼻喷雾剂。

8.按照权利要求1或2的用途，其中所述组合物以片剂、胶囊、粉剂或颗粒剂的形式存在。

9.按照权利要求8的用途，其中所述片剂是包衣片剂或泡腾片剂。

10.按照权利要求9的用途，其中所述包衣片剂是糖衣片剂。

11.按照权利要求1或2的用途，其中所述组合物以软膏剂、凝胶或霜剂的形式存在。

12.按照权利要求1或2的用途，其中所述组合物作为漱口溶液或植物汁存在。