CN113559140B - 火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途。
Description
技术领域
本发明涉及火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途。
背景技术
肺纤维化是一种原因不明的慢性炎症间质性肺疾病,如间质性肺炎、结缔组织引发的肺部疾病都会导致肺纤维化。近年来肺纤维化的发病率呈逐渐上升趋势,致死率高,对人类健康危害严重,正引起全世界的广泛关注。肺纤维化患者临床主要表现为进行性呼吸困难,最终发展为低氧血症和呼吸衰竭而死亡,确诊后平均存活时间为3年。肺纤维化发病原因复杂,机制不明,尚缺乏有效的治疗药物。目前临床上治疗肺纤维化以免疫抑制类和糖皮质激素类药物为主,但疗效不明显且毒副作用。
火绒草又名薄雪草(陕西)、老头草、老头艾(东北)、小矛香艾(青海)、火绒蒿(河北)、大头毛香(甘肃)、白艾、棉花团花等,味微苦,性寒。具有疏风解表、清热解毒、凉血止血、益肾利水、消炎利尿之功效,主要用于治疗急慢性肾炎、尿道炎、血尿等多种肾脏疾病。蒙药中名为孟根-阿给。蒙医则用于治疗肺热咳嗽、支气管炎等肺部疾病。同时在《晶珠本草》记载火绒草与多种中药合用可用于高热性传染病、支气管肺炎。
CN104352847A公开了一种治疗虚热型肺痿病的中药,由下列重量配比的药材制成:枇杷叶10份、莳萝苗8份、巴旦杏仁12份、棒棒草10份、珠子参10份、白补药15份、毛蜂子15份、白牛尾七12份、大叶熊巴掌12份、薄雪草15份、葛藟果实15份、金边龙舌兰10份、勒管草12份、阿氏蒿12份、百脉根12份、水苏15份、红菠菜15份、天花粉15份、刺竹茹10份、算盘七12份、炙甘草8份。
CN105687964A公开了治疗小儿肺炎的中药组合物,由如下重量百分比的原料药制成:穿心莲5~9%、荆芥4~7%、小蓟4~8%、芦根4~7%、地骨皮4~8%、板蓝根5~8%、百部6~9%、紫草茸6~9%、胆木7~9%、千层塔6~9%、钩藤2~5%、黄刺皮6~9%、仙鹤草2~5%、葶苈子4~6%、翼核果2~4%、照山白4~6%、火绒草2~4%。
综上可知,未见火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途。火绒草给药后,炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、成纤维细胞增生和胶原沉积的症状均有所改善。本发明的目的是通过如下技术方案实现的。
本发明提供一种火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途。
根据本发明所述的用途,优选地,所述火绒草为火绒草药材粉末或火绒草提取物。
根据本发明所述的用途,优选地,所述火绒草为火绒草提取物。
根据本发明所述的用途,优选地,所述药物形成治疗肺纤维化的药物制剂,所述药物制剂包含火绒草,还包含药学上可接受的辅料。
根据本发明所述的用途,优选地,所述火绒草为所述治疗肺纤维化的药物中的唯一活性成分。
根据本发明所述的用途,优选地,所述药物形成用于提高血清中的超氧化物歧化酶的含量和还原型谷胱甘肽的含量的药物制剂。
根据本发明所述的用途,优选地,所述药物形成用于降低血清中的丙二醛的含量的药物制剂。
根据本发明所述的用途,优选地,所述火绒草提取物由包括以下的步骤制备而得:
将过筛后的火绒草药材粉末用水浸泡,加热回流提取2~4次,合并水提取液,固液分离,浓缩,得火绒草提取物;其中,每次水的用量为过筛后的火绒草药材粉末质量的8~15倍,每次浸泡的时间为2~7h;每次提取的时间为2~7h。
根据本发明所述的用途,优选地,单位剂量的药物制剂中,火绒草提取物的用量为0.8~4.5g。
根据本发明所述的用途,优选地,单位剂量的药物制剂中,火绒草提取物的用量为1.5~4.1g。
火绒草可以对气管滴注博来霉素建立的大鼠肺纤维化模型进行干预。火绒草给药后,炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、成纤维细胞增生和胶原沉积的症状均有所改善。进一步地,火绒草能够显著提高血清中SOD和GSH的含量,显著降低血清中MDA的含量。
附图说明
图1为不同用量的火绒草对肺纤维化大鼠HE染色的影响结果。
图2为不同用量的火绒草对肺纤维化大鼠Masson染色的影响结果。
图3为检测各个组别中大鼠血清中SOD的含量结果。
图4为检测各个组别中大鼠血清中GSH的含量结果。
图5为检测各个组别中大鼠血清中MDA的含量结果。
图1~图5中,CON代表正常对照组,MOD代表模型对照组,FCL代表火绒草低剂量组(100mg火绒草提取物/kg),FCM代表火绒草中剂量组(200mg火绒草提取物/kg),FCH代表火绒草高剂量组(400mg火绒草提取物/kg),PRE代表阳性药物组。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明,但本发明的保护范围并不限于此。
本发明提供一种火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途。
在本发明中,火绒草可以为火绒草药材粉末,火绒草可以为火绒草水提取物。
根据本发明优选的一个实施方式,火绒草为火绒草提取物。
根据本发明的一个实施方式,火绒草提取物由包括以下的步骤制备而得:将过筛后的火绒草药材粉末用水浸泡,加热回流提取2~4次,合并水提取液,固液分离,浓缩,得火绒草提取物;其中,每次水的用量为过筛后的火绒草药材粉末质量的8~15倍,每次浸泡的时间为2~7h;每次提取的时间为2~7h。
在本发明中,可以加热回流提取2~4次,优选为加热回流提取3~4次,如3次。每次提取时,水的用量可以为过筛后的火绒草药材粉末质量的8~15倍,优选为8~12倍,更优选为9~11倍。每次提取的时间可以为2~7h,优选为3~6h,更优选为2~5h。
在本发明中,可以先将所述火绒草药材碾碎后过2号筛。每次提取前,先用水浸泡过筛后的火绒草药材粉末2~7h,优选为3~7h,更优选为3~6h。这样有利于更大程度地提取所需的火绒草提取物。根据本发明的一个具体的实施方式,将火绒草药材碾碎后过2号筛,将过筛后的火绒草药材粉末用水浸泡,加热回流提取2~4次,固液分离;合并水提取液并浓缩,得火绒草提取物;其中,每次水的用量为过筛后的火绒草药材粉末质量的8~15倍,每次浸泡的时间为2~7h;每次提取的时间为2~7h。在本发明中,所得火绒草提取物基本不含水。将所得的火绒草提取物在4~6℃下冷藏,使用时可以加水稀释溶解。本发明所述的药物可以形成治疗肺纤维化的药物制剂,药物制剂包含火绒草,还包含药学上可接受的辅料。
本发明中,所述治疗肺纤维化的药物可以为原料药,也可以为制剂。所述制剂的剂型可以为任意药用剂型,不做特别限制。优选地,所述剂型为口服剂型。所述口服剂型可以为缓释或控释剂型,例如缓释胶囊剂、缓释片剂等。例如,所述剂型为片剂、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂、口服液等。
本发明中,所述治疗肺纤维化的药物可以包含药学上可接受的辅料。所述药学上可接受的辅料的种类不做限制。当所述药物为口服制剂时,所述辅料可以选自稀释剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂中的一种或多种。所述稀释剂包括但不限于甘露醇、微晶纤维素、乳糖、蔗糖、预胶化淀粉或糊精中的一种或多种,优选为微晶纤维素、乳糖或糊精中的一种或多种。所述黏合剂选自甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、明胶、聚维酮或聚乙二醇中的一种或多种,优选为羧甲基纤维素钠、明胶或聚维酮中的一种或多种。所述崩解剂包括但不限于羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮中的一种或多种。所述润滑剂选自聚乙二醇、十二烷基硫酸钠、滑石粉或硬脂酸镁中的一种或多种,优选为交联聚维酮或交联羧甲基纤维素钠。根据本发明一个实施方式,所述药物中的辅料包含微晶纤维素、羧甲基纤维素钠以及交联聚维酮。
在某些实施方案中,火绒草可以为所述治疗肺纤维化的药物中的唯一活性成分。在另一些实施方案中,所述治疗肺纤维化的药物除包含火绒草外,也可以包含其他具有治疗肺纤维化作用的活性成分,或者包含本身不具有治疗肺纤维化作用、但能够辅助火绒草发挥治疗肺纤维化作用的活性成分。
本发明的药物可以形成用于提高血清中的SOD和GSH的含量的药物制剂。而且,本发明的药物形成用于降低血清中的MDA的含量的药物制剂。
SOD是超氧化物歧化酶。SOD是生物体内存在的一种抗氧化金属酶,它能够催化超氧阴离子自由基歧化生成氧和过氧化氢,在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用。
GSH是还原型谷胱甘肽。GSH,化学名称为N-(N-L-γ-谷氨酰基-L-半胱氨酰基)甘氨酸,分子式为C10H17N3O6S,分子量为307.33。
MDA是丙二醛。MDA作为过氧化脂质的降解产物,其含量可体现机体内脂质过氧化的程度,间接反映细胞或机体受损伤的轻重程度。
本发明中,单位剂量的药物制剂中,火绒草提取物的用量为0.8~4.5g,优选为1.5~4.1g,更优选为1.92~3.9g。根据本发明的一个具体的实施方式,单位剂量的药物制剂中,火绒草提取物的用量为0.96~3.9g。所述治疗肺纤维化的药物中,火绒草提取物的用量在上述范围时,便于服用和发挥功效,并减少副作用。
本发明中的治疗肺纤维化的药物的功效可以减少间质内胶原纤维。能够显著提高血清中SOD和GSH的含量,显著降低血清中MDA的含量。
制备例1
将火绒草药材碾碎后过2号筛,将100g过筛后的火绒草药材粉末用水浸泡,加热回流提取3次;每次水的用量为1000mL,每次浸泡5h,每次加热回流提取4h;合并提取液过滤,减压浓缩,得19.8g火绒草提取物。放入4℃冰箱冷藏,使用时可以加水稀释溶解。
实验例1
1、动物造模及实验方法
动物采用健康SD大鼠,体重300~350g,购于长春市亿斯实验动物技术有限责任公司。
将大鼠随机分为正常对照组、博来霉素模型对照组(模型对照组)、火绒草给药组(火绒草低剂量组、火绒草中剂量组、火绒草高剂量组,火绒草给药组所用火绒草提取物为制备例1制得的火绒草提取物)及盐酸泼尼松阳性药物组(5mg/kg),共6组,每组10只。各组均灌胃给药相应受试药,每天1次,直至处死,模型对照组和正常对照组灌胃蒸馏水。除空白组外,其余各组通过向气管内一次性注入博来霉素5mg/kg构建大鼠肺纤维化模型;正常对照组采取向气管内一次性注入同体积生理盐水,每组大鼠分别在建模后第14天处死大鼠,取肺组织和血液进行后续实验。
2、观测指标及其测定方法
肺组织进行HE、Masson染色:将大鼠右肺后叶置于中性福尔马林液中固定,常规石蜡包埋切片进行HE染色和Masson染色以评价肺组织的损伤和肺纤维化程度。
2.1组织石蜡包埋和切片
2.1.1分别取出各组的右肺后叶在4%的多聚甲醛中固定24h;
2.1.2吸走多聚甲醛,加入磷酸盐缓冲液浸泡,每间隔8小时更换一次,连续72h,4℃保存;
2.1.3打开烘箱,将温度设定在62℃,溶解石蜡;
2.1.4将各个肺组织切成0.2~0.3cm的小块,然后用酒精梯度进行脱水(酒精的浓度为30%、50%、70%、80%、90%、95%、100%),每隔30min更换一次;
2.1.5放入50%酒精+50%二甲苯溶液30min后取出,然后放入二甲苯中注意观察肺组织块至透明;
2.1.6放入预融50%酒精+50%二甲苯30min,然后分别放入预融的石蜡两次,每次2h;
2.1.7放入预融100%石蜡纸盒内凝固,4℃存放;
2.1.8用切片机将组织切成5~10μM厚的连续切片,将切片平展放置于平板上,光面朝上;
2.1.9将石蜡薄切片放于水面上(水温40℃),使其伸展,然后贴在预先处理好的玻片上;
2.1.10 40℃烘烤,过夜,以备染色。
2.2HE染色步骤
2.2.1烤片:80℃恒温箱中放置1h;
2.2.2脱蜡:二甲苯I脱蜡10min、二甲苯II脱蜡20min;
2.2.3脱水:100%乙醇5min脱水2次,95%乙醇5min脱水2次,85%乙醇中放置约1min,75%乙醇中放置约1min,以吸水纸吸干液体;
2.2.4冲洗:蒸馏水冲洗2min,冲洗两次;
2.2.5染色:苏木素染色5min;
2.2.6用自来水稍微冲洗;
2.2.7分化:1%盐酸酒精溶液浸润5~10s(观察切片由蓝变红);
2.2.8返蓝:自来水洗25min左右;
2.2.9 0.5%伊红染色2min;
2.2.10 95%乙醇5min脱水2次,用吸水纸吸干液体;
2.2.11 100%乙醇5min脱水2次,用吸水纸吸干液体;
2.2.12二甲苯中透明5min两次,用吸水纸吸干液体;
2.2.13中性树胶封固、镜下观察。
2.3Masson染色步骤
2.3.1肺组织切片常规脱蜡至水;
2.3.2Masson复合染液染色5~10min;
2.3.3置于2%冰醋酸水溶液浸洗片刻;
2.3.4置于1%磷酸水溶液中3~5min后甩干;
2.3.5用苯胺蓝水溶液染色5min;
2.3.6酒精梯度脱水,二甲苯I、II透明,中性树胶封片。
2.4血清中MDA含量检测(硫代巴比妥酸法)
2.4.1测试原理:MDA(丙二醛)可与硫代巴比妥酸(TBA)相结合而形成红色产物。该产物于532nm处有最大吸收峰。由于该反应的底物为TBA,所以该检测方法也称为TBA法。
2.4.2操作步骤:
(1)设定空白管、标准管、测定管,空白管中加入100μl无水乙醇,标准管中加入100μl标准品(四乙氧基丙烷10nmol/ml),测定管中加入100μl待测样品。
(2)加入100μl试剂一,涡旋混匀1min。
(3)分别加入1.5ml试剂二和试剂三涡旋混匀。
(4)95%恒温水浴40min,取出试管以流水冷却,在室温3500rpm离心10min吸取上清液加入96孔板,每孔200μl,每个样本设置3个复孔。532nm处测定OD值,取均值作为测定OD值。以双蒸水调零。
注:因样本不存在溶血、脂血现象,故标准管及空白管每批只做2个样本,同时以空白管来代替对照管。该操作步骤中,采用试剂盒进行检测,该试剂盒购自南京建成生物工程研究所,型号为A003-1-2。
2.5血清中SOD含量检测(WST-1法)
操作步骤:
(1)设定对照空、对照空白孔、测定孔和测定空白孔,对照孔和对照空白孔中加入20μl双蒸水,测定孔和测定空白孔中加入20μl待测样品。
(2)在对照空白孔和测定空白孔中加入20μl酶稀释液,在对照孔和测定空中加入20μl酶工作液。
(3)加入200μl底物应用液,涡旋混匀,37℃孵育20min,450nm处测定OD值。
该操作步骤中,采用试剂盒进行检测,该试剂盒购自南京建成生物工程研究所,型号为A001-3-2。
2.6血清中GSH含量检测(比色法)
操作步骤:
(1)设定空白孔、标准孔和测定孔,空白孔加入100μl试剂一(贮备液),标准孔中加入100μl标准品(20μM GSH标准溶液),测定孔中加入100μl待测样品(上清液)。
(2)分别加入100μl试剂二和25μl的试剂三。
(3)混匀,静置5min,405nm处酶标仪测定各孔吸光度值。
注:该操作步骤中,采用试剂盒进行检测,该试剂盒购自南京建成生物工程研究所,型号为A006-2-1。
3、实验结果
3.1利用肺组织HE染色评价火绒草对肺纤维化大鼠的改善作用
图1为不同用量的火绒草对肺纤维化大鼠HE染色的影响结果。如图1所示,正常对照组大鼠肺泡形态正常,壁纤细,未见肺间质中有炎症细胞浸润。模型对照组中,博来霉素给药后即出现肺泡间隔增厚,可见炎细胞浸润;可见片状实变,实变区有较多炎细胞浸润、成纤维细胞增生和胶原沉积。火绒草给药组(火绒草低剂量组、火绒草中剂量组和火绒草高剂量组)中,可以看出,火绒草给药后,炎症细胞浸润、肺泡间隔增厚、成纤维细胞增生和胶原沉积的现象均有所改善。
3.2利用肺组织Masson染色评价火绒草对肺纤维化大鼠的改善作用
图2为不同用量的火绒草对肺纤维化大鼠Masson染色的影响结果。如图2所示,正常对照组大鼠肺组织肺泡结构基本正常。模型对照组中,博来霉素造模后的各组出现不同程度的肺组织纤维化,其中模型对照组的肺组织肺泡塌陷、融合,肺泡壁增宽,间质内胶原纤维增多明显。火绒草给药组(火绒草低剂量组、火绒草中剂量组和火绒草高剂量组)在肺泡结构部分破坏、肺泡壁增宽增厚、胶原纤维增多方面均有所改善。火绒草给药组与模型对照组相比,间质内胶原纤维增加较少。
3.3检测大鼠血清中SOD、GSH和MDA的含量
图3为检测各个组别中大鼠血清中SOD的含量结果。图4为检测各个组别中大鼠血清中GSH的含量结果。图5为检测各个组别中大鼠血清中MDA的含量结果。各个组别指的是正常对照组、模型对照组、火绒草低剂量组、火绒草中剂量组、火绒草高剂量组和阳性药物组。
图3、图4和图5中,##代表正常组和模型组有显著性差异,P<0.01;#代表正常组和模型组有显著性差异,P<0.05;**给药组与模型组有显著性差异,P<0.01。
当机体受损时,系统会产生大量氧自由基。这些氧自由基进而攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引起脂质过氧化,形成脂质过氧化物及新的氧自由基等,造成组织细胞的损伤。MDA(丙二醛)作为过氧化脂质的降解产物,其含量可体现机体内脂质过氧化的程度,间接反映细胞或机体受损伤的轻重程度。
抗氧化剂也被运用于肺间质纤维化的治疗中。
SOD(超氧化物歧化酶)具有抗自由基损伤的能力,其活力的高低可间接反映机体清除氧自由基的能力及组织氧化反应的严重程度。GSH(还原型谷胱甘肽)是体内存在的一种清除自由基的系统,在一些病理状况下谷胱甘肽过氧化物酶的活力会发生明显变化。
由图3和图4可知,与模型对照组相比,火绒草低剂量组、中剂量组和高剂量组均能够提高血清中SOD和GSH的含量。其中,火绒草中剂量组和火绒草高剂量组的效果可以达到阳性药物组的效果。火绒草高剂量组在提高GSH方面甚至超过阳性药物组。
由图5可知,与模型对照组相比,火绒草给药组可以显著降低血清中MDA的含量。火绒草低剂量组、中剂量组和高剂量组的效果均超过阳性药物组。以上结果说明火绒草能够改善博来霉素诱导的肺纤维化程度,而且我们初步推断其改善肺纤维化的机制可能与抗氧化有关。总体来看,火绒草中剂量、高剂量组的效果较好,达到甚至超过阳性药物组的结果。
本发明并不限于上述实施方式,在不背离本发明的实质内容的情况下,本领域技术人员可以想到的任何变形、改进、替换均落入本发明的范围。
Claims (7)
1.火绒草用于制备治疗肺纤维化的药物的用途,
所述火绒草为火绒草提取物;
所述火绒草提取物由包括以下的步骤制备而得:
将过筛后的火绒草药材粉末用水浸泡,加热回流提取2~4次,合并水提取液,固液分离,浓缩,得火绒草提取物;其中,每次水的用量为过筛后的火绒草药材粉末质量的8~15倍,每次浸泡的时间为2~7h;每次提取的时间为2~7h。
2.根据权利要求1的用途,其特征在于,所述药物形成治疗肺纤维化的药物制剂,所述药物制剂包含火绒草,还包含药学上可接受的辅料。
3.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,所述火绒草为所述治疗肺纤维化的药物中的唯一活性成分。
4.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,所述药物形成用于提高血清中的超氧化物歧化酶的含量和还原型谷胱甘肽的含量的药物制剂。
5.根据权利要求2所述的用途,其特征在于,所述药物形成用于降低血清中的丙二醛的含量的药物制剂。
6.根据权利要求1所述的用途,其特征在于,单位剂量的药物制剂中,火绒草提取物的用量为0.8~4.5g。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,单位剂量的药物制剂中,火绒草提取物的用量为1.5~4.1g。
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