CN101396545B - 治疗肝脾不和的中药组合物的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种治疗肝脾不和的药物组合物及其制备方法，同时还涉及该药物组合物的鉴别、含量测定方法。该药物组合物由柴胡、当归、炒白术、薏苡仁、蜜炙甘草、薄荷、赤芍等原料药按照现代制剂工艺制备而成，本发明药物组合物具有疏肝健脾，养血调经作用，用于肝脾不和所致肝气不舒，胸胁胀痛，头晕目眩，食欲减退，月经不调等有显著疗效。
Description
技术领域
本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和质量控制方法，尤其涉及一种舒肝健脾，养血调经的中药组合物及其制备方法和质量控制方法，属于中药技术领域。
背景技术
日常生活中，许多女性不知不觉情绪低落、莫名其妙大发雷霆、无缘无故郁闷消沉。有人会觉得是因为生活中一些事情引起的正常情绪变化。人的情绪受人体的各个器官支配和调节，如果经常出现这些情绪波动，就是身体给你敲响了小小的警钟。
天生个性决定了女性在情绪方面较为丰富，工作、家庭等多重压力，情绪与焦虑便相应而生。长时间情志不舒、多思善虑等情绪变化会引起女性气血不畅、肝气不舒。
中医认为，女以血为本，以肝为先天。肝属木，主疏泄，性喜升发条达；脾属土，主运化，其气主升，以升为健。生理情况下，肝木克脾土，肝的疏泄能够协助脾气的升清和运化，肝木条达则脾土不致壅滞，运化功能健旺；同样，脾土健运，气机通畅，也有助于肝气条达。若情志不遂、抑郁、恼怒伤肝，肝失疏泄，气机不畅，进而肝气乘克脾土，致脾失健运，形成肝脾不和证。素体脾气虚弱，或思虑过度伤脾，或饮食劳倦或湿邪损伤脾胃，脾土运化功能失常，气机壅滞，使肝木因之而失于条达，也可形成肝脾不和证。常见于泄泻、腹痛、胁痛、鼓胀、月经不调等疾病，所以此类疾病使用中药治疗效果好。但现在治疗此类疾病的中药制剂种类并不多，所以提供一种治疗此类疾病的中药组合物是非常必要的。
发明内容
本发明目的在于提供一种治疗肝脾不和的中药组合物；
本发明目的还在于提供一种治疗肝脾不和的中药组合物制备方法；
本发明目的还在于提供一种治疗肝脾不和的中药组合物的质量控制方法。
本发明目的是通过如下技术方案实现的：
本发明所述的治疗肝脾不和的中药组合物是由如下重量比的原料药制成的：
柴胡120～200重量份 当归120～200重量份 炒白术120～200重量份
薏苡仁120～200重量份 蜜炙甘草70～150重量份 薄荷15～40重量份
赤芍120～200重量份 生姜130～150重量份
本发明所述的治疗肝脾不和的中药组合物可由如下重量比的原料药制成的：
柴胡120～200重量份 当归120～200重量份 炒白术120～200重量份
茯苓120～200重量份 蜜炙甘草70～150重量份 薄荷15～40重量份
白芍120～200重量份 生姜130～150重量份
上述原料药优选配比为：
柴胡130～150重量份 当归130～150重量份 炒白术130～150重量份
茯苓130～150重量份 蜜炙甘草100～120重量份 薄荷20～35重量份
白芍130～150重量 生姜130～150重量份
上述原料药优选配比为：
柴胡148重量份 当归132重量份 炒白术135重量份
茯苓140重量份 蜜炙甘草110重量份 薄荷32重量份
白芍132重量 生姜145重量份
上述原料药优选配比为：
柴胡143重量份 当归143重量份 炒白术143重量份
茯苓143重量份 蜜炙甘草114.4重量份 薄荷28.6重量份
白芍143重量 生姜143重量份
本发明所述的组合物可按常规工艺加入辅料制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾剂等临床可接受的剂型；所述辅料包括溶剂、崩解剂、矫味剂、防腐剂、着色剂、粘合剂、润滑剂、基质等。
本发明所述的中药组合物的制备方法为：
原料药分别粉碎成粗粉，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等原料药加水煎煮1～3次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，加入辅料及挥发油，混匀，经常规方法，制成临床接受的制剂。
本发明药物组合物质量控制方法包括如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
(1)取制剂相当于原料药10～12g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取2～5次，每次30～50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材0.7～1.5g，加水100ml，煎煮20～40min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分1～3次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1～2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各 15～25μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(2～5∶3～1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)取制剂相当于原料药8～12g，加正丁醇40～60ml，振摇提取0.5～1.5小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末0.7～1.5g，加水50～70ml煎煮20～50min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1～2ml为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各8～12μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(7～12∶7～12∶5～9∶0.2～0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；
(3)取制剂相当于原料药8～12g，研细，加乙醇40～60ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，加水15～25ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1～3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤1～3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各8～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(30～60∶7～13∶10～30∶1.5～3.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(4)取制剂相当于原料药7～9g，加水20～40ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取2～4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1～2次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2～3ml溶解，作为供试品溶液；取柴胡对照药材1～3g，加水10～30ml，加热回流0.5～1.0h，滤过；滤液用以水饱和的正丁醇提取2～4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1～2次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2～3ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿-甲醇-水(30～50∶8～12∶0.5～1.5)为展开机，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘约5min；供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；再将薄层板置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取制剂相当于原料药7～9g，研细，加乙醚25～35ml，加热回流30～50min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材各0.1～0.3 g，分别加乙醚5～15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各1～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(7～10∶3～1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与对当归照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(6)取制剂相当于原料药5～7g，加氯仿15～25ml振摇提取5～10分钟，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿1～3ml使溶解，作为供试品溶液；取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液3～7ul，对照品溶液1～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯(7～9∶4～2∶3～1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸(15～20∶85～80)为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计不低于2000；
对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取制剂相当于原料药0.5～1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15～25ml，精密称重，超声处理20～50分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明药物组合物质量控制方法优选如下鉴别方法和/或含量测定中的一种或几种：
鉴别：
(1)取制剂相当于原料药10g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术1g，加水100ml，煎煮30min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分2次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)取制剂相当于原料药10g，加正丁醇50ml，振摇提取1小时，过滤，滤液蒸干，残渣加 甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末1g，加水60ml煎煮30min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；
(3)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(50∶10∶20∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(4)取制剂相当于原料药9g，加水30ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；取柴胡对照药材2g，加水20ml，加热回流1h，滤过；滤液用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿-甲醇-水(40∶10∶1)为展开机，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘约5min；供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；再将薄层板置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醚30ml，加热回流40min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材各0.2g，分别加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(6)取制剂相当于原料药7g，加氯仿20ml振摇提取，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解， 作为供试品溶液；取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯(9∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：
照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸(17∶83)为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计不低于2000；
对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，作为对照品溶液；
供试品溶液的制备取制剂相当于原料药1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密称重，超声处理30分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，即得；
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本发明药物组方，以柴胡疏肝解郁为君药；当归、白芍养血和血，柔肝舒肝，以养肝体，助肝阴，又防柴胡劫肝阴，为臣药；白术、茯苓、炙甘草健脾祛湿、益气和中，扶上抑木，以滋化源，为佐药；薄荷辛凉清轻，助柴胡疏肝散热，为佐使药。生姜温中散寒，为使药。本方有顺肝条达之性。诸药合用，肝脾并治，补疏共施，气血兼顾，共奏疏肝健脾，养血调经之功。本发明组合物具有很好的药效，具有很好的疏肝健脾，养血调经作用。
本发明所提供的中药组合物的质量控制方法，是通过大量具体创造性试验筛选后得到，鉴别方法中通过对样品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得鉴别专属性很好，而且方法经济适用、结果快速，并且对不同的薄层板都能应用。含量测定方法中通过对样品、供试品处理方法的筛选，展开剂的选择，使得含量测定方法可以很有效的对产品进行质量控制，并且用该方法测定的产品要相比其他方法测定的产品在药理效果上表现的更为稳定。
下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1药理试验
1材料
1.1动物Wistar大白鼠，雌雄兼用，体质量(180±20)g；昆明种小白鼠，均由安徽省医学研究所动物室提供。
1.2药物本发明药物I(按实施例2制备的制剂)、本发明药物组II(按实施例3制备的制剂)分别配成0.06g/ml浓度的供试液(约相当于临床用量10倍)；解郁安神颗粒(市售)配制成0.03g/ml(约相当于临床用量10倍)；己烯雌酚2mg/ml，上海市第九制药厂生产；四氯化碳(CCl4)，由美国Sigma公司出品；利血平，由上海医科大学制药厂生产。2对CCl4致大鼠肝损伤的保护作用
2.1对血清ALT活力的影响取大鼠40只，随机分为5组，分别为正常对照组、模型对照组、解郁安神颗粒对照组、本发明药物I、II组。正常对照组、模型组给等容量生理盐水，其余3组按表1剂量，均ig给药，连续6d。在实验的第1、4d模型对照及各给药组动物背部sc 0.4ml/100g CCl4，造成肝损伤。第7d各组摘眼球取血，分离血清，测ALT含量，结果见表1。
表1对CCl4致肝损伤大鼠ALT活力的影响(n＝8， 
)
| 组别 | 剂量(g/kg) | ALT (nmol·s-1/L) |
| 正常对照组 | 等容量 | 613.69±67.11 |
| 模型对照组 | 等容量 | 2852.86±560.28△△ |
| 解郁安神对照组 | 9 | 1760.37±399.08** |
| 本发明药物I组 | 18 | 825.36±241.38**# |
| 本发明药物II组 | 18 | 718.81±79.85**## |
与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
本发明药物组及解郁安神组均能明显降低CCl4性肝损伤大鼠ALT活力，对CCl4性肝损伤均有保护作用，本发明药物与阳性对照药物比较有显著性差异，本发明药物对肝损伤的保护作用显著优于阳性对照药物。
2.2对肝细胞糖原的影响大鼠分组及给药同前，于第7d处死大鼠，取出肝脏，Gendre液固定，用Best法染色显示肝糖原，光镜下观察各组动物肝细胞糖原的分布情况，并划定肝糖原等级：肝细胞糖原完全消失为(-)；仅汇管区残留少量肝糖原为(+)；肝小叶中心肝糖原消失，其余部位肝糖原较正常为(++)；肝糖原接近正常为(+++)。根据上述指标，随意观察相同部位6个肝小叶，统计肝糖原等级，结果见表2，表中肝糖原等级平均数为各组“+”之和除以10。
表2对肝糖原的影响(n＝8)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 肝糖原等级 | ||
| - | + | ++ | +++ | 均数 |
| 正常对照组 | 等容量 | - | - | 1 | 7 | 2.3 |
| 模型对照组 | 等容量 | 8 | - | - | - | 0△△ |
| 解郁安神对照组 | 9 | 2 | 3 | 3 | - | 0.9* |
| 本发明药物I组 | 18 | - | 4 | 3 | 1 | 1.3** |
| 本发明药物II组 | 18 | - | 2 | 4 | 2 | 1.6**# |
与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
结果表明，正常组肝糖原分布基本正常，肝损伤对照组则肝小叶内糖原基本消失，解郁安神对照组及本发明药物组仍有肝糖原破坏，但其程度明显减轻，本发明药物组II的效果显著高于解郁安神组。
3、对小鼠胸腺脾脏免疫器官指数的影响
取小鼠50只，雌雄兼用，随机分5组。每鼠皮下注射利血平0.12mg/kg(容积0.15mL/鼠)，每天1次，连续10d，第4天开始，每鼠灌胃NS(0.5mL/鼠)，每天1次，共7d。小鼠表现为饮食明显减少，便稀，腹、体毛不荣，反应迟钝，拱背少动，体凉，体重下降等脾虚症状。解郁安神对照组：利血平用法同上，第4天开始，每脾虚鼠灌胃给解郁安神颗粒剂9g/kg，每天1次，连续7d；本发明药物I、II组：利血平用法同上，第4天开始，每脾虚鼠灌胃给本发明药物18g/kg，每天1次，连续7d；正常对照组：每鼠皮下注射灭菌注射用水0.15mL，每天1次，连续7d。第4天开始，每鼠灌胃给NS(0.5mL/鼠)，每天1次，共7d。小鼠的行为活动，外观皮毛，饮食粪便等均正常。
利血平模型对照组、NS正常对照组和本发明药物I、本发明药物II、解郁安神对照药物各组末次给药后1h，称取各鼠体重，然后取胸腺和脾脏称重，计算胸腺、脾脏免疫器官指数(mg/g体重)，结果见表3。
表3健脾益气颗粒剂对小鼠胸腺和脾脏免疫器官重量的影响
| 组别 | 动物数(n) | 剂量 /g·kg-1 | 胸腺指数 /mg·g-1 | 脾脏指数/mg·g-1 |
| 正常对照组 | 10 | 等容量 | 0.2767±0.0676** | 0.35±0.10* |
| 模型对照组 | 10 | 等容量 | 0.0921±0.0591 | 0.26±0.06 |
| 解郁安神对照组 | 10 | 9 | 0.1501±0.0448* | 0.26±0.05 |
| 本发明药物I组 | 10 | 18 | 0.2118±0.0422* | 0.31±0.05* |
| 本发明药物II组 | 10 | 18 | 0.2304±0.0406**# | 0.33±0.08*# |
与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
结果表明本发明药物与解郁安神颗粒均可显著提高脾虚小鼠胸腺器官指数，本发明药物还可显著提高脾虚小鼠脾脏器官指数，本发明药物对胸腺脾脏指数的提高较解郁安神组有显著提高，说明本发明药物具有较好的健脾作用。
4、对失血小鼠血中Hb、RBC含量的影响
体重取体重18～21g小鼠50只，雌性，随机均匀分为5组，其中4组造失血虚模型。5组动物于实验前尾部取血，先测Hb、RBC水平，造模型4组分别尾部放血0.5ml，使动物失血，于失血后24h再尾部取血测Hb、RBC观察造成血虚的程度，然后分别灌服本发明药物I、II18g/kg，解郁安神颗粒9/kg及同体积生理盐水，正常对照组灌服同体积的生理盐水，每天给药1次，连续给药7天，于最后1次给药2h，再尾部取血测Hb、RBC，结果见下表4：
表4对提高失血小鼠的Hb、RBC作用的比较结果
| 组别 | 动物 数 (只) | 剂量 (g/k g) | 失血前 | 失血24h | 给药7天 | |||
| Hb(g/l) | RBC×(1012/L) | Hb(g/l) | RBC(1012/L) | Hb(g/l) | RBC(1012/L) | |||
| 正常对照组 | 10 | 等容 量 | 98±15 | 7.9±1.1 | 101±13* | 8.3±0.9* * | 100±11** | 7.9±1.0* * |
| 模型对照组 | 10 | 等容 量 | 100±14 | 8.0±1.0 | 61±12 | 5.1±1.0 | 71±20 | 5.8±1.5 |
| 解郁安神对照组 | 10 | 9 | 98±13 | 8.1±1.0 | 60±10 | 5.2±0.6 | 72±7 | 6.1±1.4 |
| 本发明药物I组 | 10 | 18 | 98±14 | 8.0±1.3 | 63±15 | 5.1±0.7 | 92±11 **# | 7.1±0.7* |
| 本发明药物II组 | 10 | 18 | 98±11 | 8.2±1.3 | 59±10 | 5.1±1.1 | 98±9**# | 7.3±0.8*# |
与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
结果表明，本发明药物和解郁安神颗粒均可提高Hb、RBC水平和RBC水平，但本发明药物较解郁安神颗粒组有显著性提高，说明本品具有良好的养血作用。
5对性腺功能的影响
5.1对小鼠子宫质量的影响取未成年的雌性小鼠50只，体重8～10g，随机分为5组：正常对照、解郁安神对照、本发明药物I、本发明药物II和己烯雌酚组，给药方式及剂量见表3，前4组每日给药1次，己烯雌酚组间日给药，于第11d将小鼠脱颈椎处死，迅速分离子宫，用分析天平称取子宫湿质量，求出子宫质量/体质量百分率，结果见表5。
表5对小鼠子宫质量的影响(n＝10， )
| 组别 | 剂量 (g/kg) | 终体质量(g) | 子宫湿质量(mg) | 子宫质量/体质量百分率 (％) |
| 正常对照组 | 等容量 | 14.1±2.51 | 65±18.1 | 4.6 |
| 解郁安神对照 组 | 9 | 14.5±2.10 | 74±23.0△△▲▲ | 5.1 |
| 本发明药物I 组 | 18 | 14.7±1.91 | 95±21.3△△#▲▲ | 6.5 |
| 本发明药物II 组 | 18 | 13.9±2.01 | 100±17.2△△#▲▲ | 7.2 |
| 己烯雌酚 | 0.001 | 14.6±3.26 | 323±85.0△△ | 22.1 |
与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与己烯雌酚组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01。
本发明药物组及解郁安神组均可使小鼠的子宫质量增加，但均较己烯雌酚弱，本发明药物组对小鼠子宫质量增加的作用显著高于解郁安神组。
5.2对小鼠阴道角化上皮细胞的影响取未成熟雌性间情期小鼠40只，同3.1项分组给药(己烯雌酚组剂量为sc 0.0025g/kg)，连续给药7d，于第8d做阴道脱落细胞涂片检查，结果见表6。
表6对小鼠阴道角化上皮细胞的影响(n＝8)
| 组别 | 阴道细胞类型及特征 |
| 正常对照组 | 主要是基底层上皮细胞及多核白细胞I |
| 解郁安神对照组 | 主要是上皮细胞，呈粒状胞浆，有少量角化上皮细胞 |
| 本发明药物I组 | 主要是上皮细胞，多呈粒状胞浆，有少量角化上皮细胞 |
| 本发明药物II组 | 有少量上皮细胞，角化上皮细胞多见，形状大而不规则 |
| 己烯雌酚 | 主要是角化上皮细胞，胞浆减少，细胞间有重叠、界限不清 |
本发明药物、解郁安神组对未成熟雌性小鼠均有一定的诱发动情作用，其中本发明药物II作用明显，说明本发明药物有温和的雌激素样作用。
6对中枢神经系统的影响
6.1对小鼠自发活动的影响取体质量(20±2)g小鼠40只，禁食不禁水12h后，随机如表6分为4组，给药后30min开始，连续观察记录10min内小鼠活动时间，以抬前脚和走动为活动，匍匐不动为安静，结果见表7。
表7对小鼠自发活动的影响(n＝10， )
| 组别 | 剂量(g/kg) | 活动时间 (s) |
| 正常对照组 | 等容量 | 539.38±76.33 |
| 解郁安神对照组 | 9 | 456.40±82.43△ |
| 本发明药物I组 | 18 | 413.64±102.32△ |
| 本发明药物II组 | 18 | 355.25±89.13△△# |
与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。
从上表可见，本发明药物组和解郁安神对照组均可明显抑制小鼠自发活动，本发明药物II的作用显著优于解郁安神对照组。
6.2对戊巴比妥钠阈下剂量镇静催眠的协同作用取小鼠40只，分组及给药同4.1项，给药30min后各小鼠分别ip戊巴比妥钠25mg/kg，以小鼠翻正反射消失1min以上为入睡标准，观察15min内各小鼠入睡个数，计算入睡率，结果见表7。
6.3对阈剂量戊巴比妥钠睡眠时间的协同作用动物分组、给药同4.1项，给药后30min，各鼠ip戊巴比妥钠50mg/kg，记录小鼠睡眠时间(从翻正反射消失到恢复的时间)，结果见表8。
表8对戊巴比妥钠的协同作用(n＝10， 
)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 入睡率(％) | 睡眠时间(min) |
| 正常对照组 | 等容量 | 20 | 43.1±9.78 |
| 解郁安神对照组 | 9 | 50 | 58.6±15.24△ |
| 本发明药物I组 | 18 | 60 | 77.9±13.30△ |
| 本发明药物II组 | 18 | 70 | 87.3±10.85△△# |
与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与解郁安神对照组比较，#P＜0.05，##P＜0.01。本发明药物和解郁安神药物均能协同戊巴比妥钠的镇静催眠作用，提高小鼠入睡率，明显延长睡眠时间。其中本发明药物II较解郁安神药物的作用有显著性提高。
6.4对戊四氮致惊厥作用的影响取小鼠48只，分组给药同4.1项，给药后30min，小鼠sc 10g/L戊四氮100mg/kg，以出现阵发性抽搐为指标，观察每组发生惊厥的动物数，计算惊厥百分率，作x2检验，结果见表9。
表9对戊四氮致惊厥作用的影响(n＝12)
| 组别 | 剂量(g/kg) | 惊厥动物数(只) | 惊厥率(％) |
| 正常对照组 | - | 10 | 83.3 |
| 解郁安神对照组 | 9 | 6 | 50.0 |
| 本发明药物I组 | 18 | 4 | 33.3△ |
| 本发明药物II组 | 18 | 3 | 25.0△ |
与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。
结果表明，本发明药物能对抗戊四氮的致惊厥作用，本发明药物II抑制作用更显著。
实验例2质量控制方法实验研究
1、白术的薄层鉴别试验
供试品溶液的制备：取制剂相当于原料药10g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，即得；
对照品溶液的制备：取白术对照药材1g，加水100ml，煎煮30min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分2次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，即得。
阴性对照溶液的制备：按照实施例3，取缺白术的处方药材制备成阴性对照品，照供试品溶液制备方法制备，即得。
照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液相同体积，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，比较不同展开剂及点样量，供试品溶液和对照品溶液的展开效果和显色效果。
1)展开剂的选择
取点样量为20μl，比较应用不同配比的展开剂，供试品和对照品展开的效果，结果见下表：
| 展开剂配比 | 2∶3 | 3∶2 | 4∶1 | 5∶1 |
| 展开效果 | 展开效果差，各斑点分离极不清楚，有脱尾现象。 | 展开效果差，各斑点分离不清楚，有脱尾现象。 | 展开效果好，各斑点分离清晰，无脱尾现象。 | 展开效果差，各斑点分离不清楚，有脱尾现象。 |
从上表结果可以看出，展开剂正己烷-乙酸乙酯的配比为4∶1时，展开效果好，各斑点分离清晰，无脱尾现象。
2)点样量的选择：
比较点样量不同，对薄层板展开效果的影响，结果见下表：
| 点样量 | 10μl | 15μl | 20μl | 25μl |
| 展开和显色效果 | 各斑点显色很清楚。 | 各斑点显色不清楚。 | 各斑点显色清晰，无脱尾现象。 | 有脱尾现象。 |
从上表可以看出，点样量为20μl时，各斑点显色清晰，且不会出现脱尾现象。3)阴性试验
吸取上述供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加 热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，供试品溶液与对照药材溶液相应位置显相同颜色斑点，阴性无干扰。
2、甘草的薄层鉴别
1)供试品溶液的制备：取制剂相当于原料药10g共3份，分别加正丁醇50ml，振摇提取0.5、1.0、1.5小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml，即得供试品溶液1、供试品溶液2、供试品溶液3；
对照药材溶液的制备：取甘草粉末1g，加水60ml煎煮30min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml，即得。
吸取上述溶液各10μl，点于硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视，比较不同提取时间的供试品溶液及不同配比展开剂，供试品溶液和对照品溶液的展开效果及显色效果，结果见下表：
从上表可以看出，展开剂配比为10∶10∶7∶0.5，供试品溶液2和3均显色清楚，无脱尾等现象发生。
2)阴性试验
按照实施例3，取缺甘草的处方药材制备成阴性对照品，照上述供试品溶液制备方法2制备，即得阴性对照品溶液。
吸取上述供试品溶液2、对照药材溶液、阴性对照品溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视，供试品溶 液与对照药材溶液相应位置显相同颜色斑点，阴性无干扰。
3、白芍的薄层鉴别
1)供试品溶液的制备方法选择：
方法一：取制剂相当于原料药10g，研细，加乙醇50ml，振摇5分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
方法二：取制剂相当于原料药10g，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。
对照品溶液制备：取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。
照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(50∶10∶20∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。
比较不同提取方法制备供试品溶液，供试品与对照品在薄层板上的显色效果，结果见下表：
| 提取方法 | 显色效果 |
| 方法一 | 供试品溶液在与对照品相应位置显色很浅，有干扰。 |
| 方法二 | 供试品溶液在与对照品相应位置显色清楚，无干扰。 |
2)按照上述方法二制备供试品溶液，比较三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水不同配比的展开剂，供试品和对照品在薄层板上的显色效果，结果见下表：
| 展开剂配比 | 30∶30∶10∶1.5 | 40∶20∶30∶2.0 | 50∶10∶20∶2.5 | 50∶10∶30∶3.0 |
| 显色效果 | 供试品溶液各斑点分离不清楚，有脱尾现象。 | 供试品溶液各斑点未分开，干扰大。 | 供试品溶液各斑点分离清楚，显色效果好。 | 供试品溶液各斑点分离不清楚，有脱尾现象。 |
从上表可以看出，三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水配比为(50∶10∶20∶2.5)时，供试品溶液与对照品溶液展开效果好，无脱尾等现象，符合试验要求。
3)阴性试验
按照实施例3，取缺白芍的处方药材制备成阴性对照品，照上述供试品溶液制备方法二制备，即得阴性对照品溶液。
吸取上述供试品溶液二、对照药材溶液、阴性对照品溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(50∶10∶20∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的蓝紫色斑点，阴性无干扰。
4、柴胡的薄层鉴别
供试品溶液制备：取制剂相当于原料药9g，加水30ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。
对照药材溶液制备：取柴胡对照药材2g，加水20ml，加热回流1h，滤过。滤液用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。
1)展开剂的选择
分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘约5min。比较不同配比的展开剂，供试品和对照品在薄层板上的展开效果，结果见下表：
| 展开剂配比 | 20∶30∶1 | 30∶20∶0.5 | 40∶10∶1 | 50∶10∶1 |
| 展开效果 | 供试品与对照品各斑点未分开，干扰大。 | 供试品与对照品各斑点分离不清楚，有脱尾现象。 | 供试品与对照品各斑点分离清楚，显色效果好。 | 供试品与对照品各斑点分离不清楚，有脱尾现象。 |
从上表可以看出，以氯仿-甲醇-水(40∶10∶1)为展开剂，供试品和对照品各斑点分离清楚，显色效果好。
2)点样量的选择
分别吸取上述两种溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿-甲醇-水(40∶∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘约5min。比较不同点样量，供试品和对照品在薄层板上的展开效果，结果见下表：
| 点样量 | 2μl | 6μl | 10μl | 15μl |
| 展开效果 | 供试品与对照品均未出现显色斑点。 | 供试品与对照品各斑点显色很淡，难于辨别。 | 供试品与对照品各斑点显色清晰，圆整。 | 供试品与对照品各斑点显色清晰，但有脱尾现象。 |
从上表可以看出，点样量为10μl时，供试品与对照品各斑点显色清晰，斑点圆整，无脱尾现象。
3)阴性试验
按照实施例3，取缺柴胡的处方药材制备成阴性对照品，照上述供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。经实验证明，阴性无干扰。
5、当归的薄层鉴别
1)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醚30ml，加热回流，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材各0.2g，分别加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液。吸取上述供试品溶液和对照药材溶液，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。比较不同提取时间和点样量下，供试品与对照药材的显色效果。结果见下表：
从上表可以看出，提取时间为40min，点样量为2μl时，供试品与对照药材色谱中，斑点显色清晰，分离效果好，无脱尾。且与提取60min钟显色效果相同，所以选择提取40min。
2)阴性试验
按照实施例3，取缺当归的处方药材制备成阴性对照品，照上述供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。经实验证明，阴性无干扰。
6、薄荷的薄层鉴别
1)取制剂相当于原料药7g，加氯仿20ml振摇提取，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，放入展开剂中，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。比较使用不同展开剂，供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色谱相应的位置上，
各斑点显色及展开的效果。结果见下表：
| 展开剂 | 苯-醋酸乙酯(19；1) | 石油醚-苯-醋酸乙酯(9∶2∶1) |
| 展开效果 | 供试品在与对照品色谱相应位置有相同颜色显色斑点，但与其他斑点分离不清楚，干扰大。 | 供试品色谱在与对照品色谱相应位置显相同颜色斑点，分离效果好。 |
从上表可以看出，选择石油醚-苯-醋酸乙酯(9∶2∶1)为展开剂，供试品色谱在与对照品色谱相应位置显相同颜色斑点，且分离效果好，阴性无干扰，符合试验要求。
2)阴性试验
按照实施例3，取缺薄荷的处方药材制备成阴性对照品，照上述供试品溶液制备方法制备，即得阴性对照品溶液。经实验证明，阴性无干扰。
7、芍药苷的含量测定方法考察
检测仪器：岛津公司SPD-10ATvp型高效液相色谱仪
色谱柱：迪玛公司(Zorbax C18 4.6×150mm，5μm)
流动相：乙腈-0.1％磷酸(17∶83) 流速：1.0ml/min
检测波长： 230nm 柱温：室温
对照品来源：芍药苷购于中国药品生物制品检定所批号：110736-200423
测定方法：取按[含量测定]项下供试品溶液的制备方法制备样品液；并按[制法]项下制备缺白芍的空白样品，制备阴性对照液。用微孔滤膜(0.45μm)，分别精密吸取阴性对照液、对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，且阴性无干扰。
含量测定方法考察：
(1)稳定性试验取对照品溶液(70.08μg/ml)，分别于配制后0、2、4、6、12、24小时，依法测定，结果表明，其在24小时内基本稳定，结果见下表
| 时间(hr) | 0 | 2 | 4 | 6 | 12 | 24 |
| 峰面积 | 458502 | 458580 | 460997 | 465712 | 468129 | 470370 |
| RSD(％) 1.0941 |
(2)线性关系考察 取对照品溶液(70.08μg/ml)摇匀，分别精密吸取1、3、5、7、9μl注入高效液相色谱仪，结果见下表，并绘制标准曲线，表明芍药苷在0.07008μg-0.63072μg间呈线性关系，其回归方程为：
Area＝1345383.134*Amt-10061.5(r＝0.999936)
| 进样量 | 0.07008 | 0.21024 | 0.35040 | 0.49056 | 0.63072 |
| 峰面积 | 87385 | 269201 | 458541 | 653694 | 837983 |
(3)精密度试验精密吸取对照品溶液5μl，重复进样5次，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表
| 次数 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 峰面积470370 | 468127 | 465191 | 461561 | 461591 |
| RSD(％) 0.8420 |
(4)重现性试验取按实施例3制备的同一批样品5份，对每份进行测定，求得相对标准偏差＜2％，结果见下表
| 次数 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
| 含量(mg/克) | 1.3358 | 1.3111 | 1.3001 | 1.3064 | 1.3088 |
| 平均含量(mg/克) 1.3124 | |||||
| RSD(％) 1.0439 |
(5)回收率试验精密称取已知含量的同一批号的样品0.5g再分别精密加入芍药苷对照品(32μg/ml)20ml，按正文供试品溶液的制备方法操作，超声处理30分钟，测定其含量，并计算其回收率，测定结果见下表：
| 取样量 | 样品中芍药苷 量 | 加入芍药苷 量 | 测出芍药苷 量 | 回收率 | 平均回收 率 | RSD |
| 0.5001g0.5006g0.5003g0.5004g0.5007g | 0.6563 0.6570 0.6566 0.6567 0.6571 | 0.64mg 0.64mg 0.64mg 0.64mg 0.64mg | 1.3053 1.2968 1.3080 1.3090 1.3011 | 101.40％99.96％101.79％101.92％100.63％ | 101.14％ | 0.8180％ |
以上鉴别试验方法及含量测定方法，均能有效控制本发明药物的质量，保证药品质量的稳定性。
下述实施例均能够实现上述实验例所述的效果
实施例1
柴胡120～200重量份 当归120～200重量份 炒白术120～200重量份
薏苡仁120～200重量份 蜜炙甘草70～150重量份 薄荷15～40重量份
赤芍120～200重量份 生姜130～150重量份
原料药分别粉碎成粗粉，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等原料药加水煎煮1～3次，每次1～3小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入辅料和挥发油，制成颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液、滴丸剂、软胶囊剂、泡腾剂等临床可接受的剂型。
实施例2：
柴胡148g 当归132g 炒白术135g 茯苓140g
蜜炙甘草110g 薄荷32g 白芍132g 生姜145g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成1500g，即得；或浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，加入甜菊素1.0g，糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成800g，即得。
鉴别：
(1)取制剂相当于原料药10g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术1g，加水100ml，煎煮30min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分2次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)取制剂相当于原料药10g，加正丁醇50ml，振摇提取0.5～1.5小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末1g，加水60ml煎煮20～50min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(7～12∶7～12∶5～9∶0.2～0.7)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；
(3)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醇50ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1～3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用 正丁醇饱和的水洗涤1～3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(50∶10∶20∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点；
(4)取制剂相当于原料药9g，加水30ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液。取柴胡对照药材2g，加水20ml，加热回流1h，滤过。滤液用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿-甲醇-水(40∶10∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘约5 min。供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；再将薄层板置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醚30ml，加热回流40min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。另取当归对照药材各0.2g，分别加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对当归照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(6)取制剂相当于原料药7g，加氯仿20ml振摇提取，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液。取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯(9∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
实施例3：
柴胡143g 当归143g 炒白术143g 茯苓143g
蜜炙甘草114.4g 薄荷28.6g 白芍143重量 生姜143g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成1500g，即得。
【性状】本品为淡棕色的颗粒；气微香，味甜。
【鉴别】(1)取本品适量，研细，称取20g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术1g，加水100ml，煎煮30min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分二次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VI B)试验，吸取上述两种溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品适量，研细，称取20g，加正丁醇50ml，振摇提取1小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末1g，加水60ml煎煮30min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IC)。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸(17∶83)为流动相；检测波长为230nm。理论塔板数按芍药苷峰计不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本品约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密称重，超声处理30分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量， 摇匀，微孔滤膜过滤，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每克含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于0.7mg。
实施例4：
柴胡143g 当归143g 炒白术143g 茯苓143g
蜜炙甘草114.4g 薄荷28.6g 白芍143重量 生姜143g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，与适量糊精混合，真空干燥，粉碎成细粉，喷入挥发油，混匀，装入胶囊，即得。
实施例5：
柴胡143g 当归143g 炒白术143g 茯苓143g
蜜炙甘草114.4g 薄荷28.6g 白芍143g 生姜143g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，加入适量糊精，乙醇制粒，干燥，整粒，喷入挥发油，混匀，压片，包衣，即得。
实施例6：
柴胡130g 当归130g 炒白术130g 茯苓130g 蜜炙甘草100g
薄荷 20g 白芍130重量 生姜130g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，与适量植物油及上述挥发油混合均匀，压制成软胶囊，即得。
实施例7：
柴胡150g 当归150g 炒白术150g 茯苓150g 蜜炙甘草120g
薄荷35g 白芍150g 生姜150g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，按照2∶7的比例加入熔融的聚乙二醇4000中，混匀，再将挥发油迅速加入，混合均匀，70℃保温，等速滴入8℃～10℃的液体石蜡中，将成形的滴丸沥尽并擦除液体石蜡，即得。
实施例8
柴胡200g 当归180g 炒白术180g 薏苡仁180g
蜜炙甘草150g 薄荷40g 赤芍180g
以上七味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成1500g，即得；或浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，加入甜菊素1.0g，糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成800g，即得。
实施例9
柴胡200g 当归200g 炒白术200g 薏苡仁200g 蜜炙甘草150g
薄荷40g 赤芍200g 生姜150g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，加入蔗糖、糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成1500g，即得；或浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，加入甜菊素1.0g，糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成800g，即得。
鉴别方法：
(1)取制剂相当于原料药10g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术1g，加水100ml，煎煮30min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分2次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点.
(2)取制剂相当于原料药10g，加正丁醇50ml，振摇提取1小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末1g，加水60ml煎煮30min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热 10min，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点.
(3)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水(50∶10∶20∶2.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点.
(4)取制剂相当于原料药9g，加水30ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；取柴胡对照药材2g，加水20ml，加热回流1h，滤过；滤液用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用氯仿-甲醇-水(40∶10∶1)为展开机，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘约5min；供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；再将薄层板置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点.
(5)取制剂相当于原料药9g，研细，加乙醚30ml，加热回流40min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材各0.2g，分别加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视；供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点.
(6)取制剂相当于原料药7g，加氯仿20ml振摇提取，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法(中国药典2005年版一部附录VIB)试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)-苯-醋酸乙酯(9∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色 谱相应的位置上，显相同颜色的斑点.
实施例10：
柴胡143g 当归143g 炒白术143g 茯苓143g
蜜炙甘草114.4g 薄荷28.6g 白芍143重量 生姜143g
以上八味，薄荷、当归提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣及其余柴胡等六味加水煎煮二次，第一次2小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.26～1.30(90℃)，真空干燥，粉碎成细粉，加入甜菊素1.0g，糊精及乙醇适量，制成颗粒，干燥，喷入挥发油，混匀，制成800g，即得。
【性状】本品为淡棕色的颗粒；气微香，味甜。
【鉴别】(1)取本品适量，研细，称取10g，加水40ml溶解，加石油醚(60-90℃)振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术1g，加水100ml，煎煮30min(边煎煮边加水)，放凉，过滤，滤液浓缩至约20ml，放凉后用石油醚(60-90℃)40ml分二次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录VIB)试验，吸取上述两种溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷-乙酸乙酯(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点。
(2)取本品适量，研细，称取10g，加正丁醇50ml，振摇提取1小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末1g，加水60ml煎煮30min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇约20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml为对照药材溶液。吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30-60℃)-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸(10∶10∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯(365nm)下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点。
【检查】应符合颗粒剂项下有关的各项规定(中国药典2005年版一部附录IC)。
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005年版附录VID)测定
色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1％磷酸(17∶83)为流动相；检测波长为230nm。理论塔板数按芍药苷峰计不低于2000。
对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取本品约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密称重，超声处理30分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，即得。
测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
本品每克含白芍以芍药苷(C23H28O11)计，不得少于1.0mg。
Claims (4)
1.一种治疗肝脾不和的中药组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别和含量测定方法：
所述组合物的原料药组成为：
柴胡130～150重量份 当归130～150重量份 炒白术130～150重量份
茯苓130～150重量份 蜜炙甘草100～120重量份 薄荷20～35重量份
白芍130～150重量份 生姜130～150重量份；
鉴别：
(1)取相当于原料药10～12g的该组合物制剂，加水40ml溶解，加石油醚振摇提取2～5次，每次30～50ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术对照药材0.7～1.5g，加水100ml，煎煮20～40min，放凉，过滤，滤液浓缩至20ml，放凉后用石油醚40ml分1～3次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1～2ml使溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各15～25μl，点于同一硅胶G薄层板上，以2～5∶3～1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)取相当于原料药8～12g的该组合物制剂，加正丁醇40～60ml，振摇提取0.5～1.5小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末0.7～1.5g，加水50～70ml煎煮20～50min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1～2ml为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各8～12μl，点于同一硅胶G薄层板上，以7～12∶7～12∶5～9∶0.2～0.7的石油醚-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；
(3)取相当于原料药8～12g的该组合物制剂，研细，加乙醇40～60ml，超声处理10～30分钟，滤过，滤液蒸干，加水15～25ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取1～3次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤1～3次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各8～12μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以30～60∶7～13∶10～30∶1.5～3.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(4)取相当于原料药7～9g的该组合物制剂，加水20～40ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取2～4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1～2次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2～3ml溶解，作为供试品溶液；取柴胡对照药材1～3g，加水10～30ml，加热回流0.5～1.0h，滤过；滤液用以水饱和的正丁醇提取2～4次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1～2次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2～3ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用30～50∶8～12∶0.5～1.5的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫酸乙醇溶液，于100℃烘5min；供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；再将薄层板置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取相当于原料药7～9g的该组合物制剂，研细，加乙醚25～35ml，加热回流30～50min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1～2ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材各0.1～0.3g，分别加乙醚5～15ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7～10∶3～1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与对当归照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(6)取相当于原料药5～7g的该组合物制剂，加氯仿15～25ml振摇提取5～10分钟，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿1～3ml使溶解，作为供试品溶液；取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液3～7ul，对照品溶液1～3μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以7～9∶4～2∶3～1的石油醚-苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：照高效液相色谱法：色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以15～20∶85～80的乙腈-0.1％磷酸为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计不低于2000；对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取制剂相当于原料药0.5～1.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇15～25ml，精密称重，超声处理20～50分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，即得；测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
2.如权利要求1所述的药物组合物的检测方法，其特征在于该方法包括如下鉴别方法和含量 测定方法：
鉴别：
(1)取相当于原料药10g的该组合物制剂，加水40ml溶解，加60-90℃的石油醚振摇提取3次，每次40ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为供试品溶液；另取白术1g，加水100ml，煎煮30min，放凉，过滤，滤液浓缩至20ml，放凉后用60-90℃的石油醚40ml分2次萃取，取醚层蒸干，残渣加氯仿1ml使溶解，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各20μl，点于同一硅胶G薄层板上，以4∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min以上，紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与白术对照药材色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点；
(2)取相当于原料药10g的该组合物制剂，加正丁醇50ml，振摇提取1小时，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml为供试品溶液；另取甘草粉末1g，加水60ml煎煮30min，过滤，滤液蒸干，残渣用正丁醇20ml分多次溶解，合并溶解液，蒸干，残渣加甲醇1ml为对照药材溶液；吸取上述两种溶液各10μl，点于同一硅胶G薄层板上，以10∶10∶7∶0.5的石油醚-氯仿-乙酸乙酯-冰醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，105℃下加热10min，紫外灯365nm下检视，供试品色谱中，在与甘草对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；
(3)取相当于原料药9g的该组合物制剂，研细，加乙醇50ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，加水20ml使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇提取液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次20ml，弃去水液，正丁醇液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以50∶10∶20∶2.5的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-氨水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色斑点；
(4)取相当于原料药9g的该组合物制剂，加水30ml搅拌溶解，用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；取柴胡对照药材2g，加水20ml，加热回流1h，滤过；滤液用以水饱和的正丁醇提取3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用5％NaHCO3溶液20ml洗涤1次，取正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml溶解，作为对照药材溶液；照薄层色谱法试验，分别吸取上述两种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，用40∶10∶1的氯仿-甲醇-水为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％对二甲氨基苯甲醛10％硫 酸乙醇溶液，于100℃烘5min；供试品色谱中，在与柴胡对照药材色谱相应位置上显相同颜色的斑点；再将薄层板置365nm紫外光灯下检视，显相同颜色的荧光斑点；
(5)取相当于原料药9g的该组合物制剂，研细，加乙醚30ml，加热回流40min，滤过，滤液挥干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液；另取当归对照药材各0.2g，分别加乙醚10ml，同法制成对照药材溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶1的正己烷-乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视；供试品色谱中，在与当归对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
(6)取相当于原料药7g的该组合物制剂，加氯仿20ml振摇提取，取氯仿液蒸干，残渣加氯仿2ml使溶解，作为供试品溶液；取薄荷脑，加氯仿制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液5ul，对照品溶液2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以9∶2∶1的石油醚-苯-醋酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与薄荷脑对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
含量测定：照高效液相色谱法测定，色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以17∶83的乙腈-0.1％磷酸为流动相；检测波长为230nm；理论塔板数按芍药苷峰计不低于2000；对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含70μg的溶液，作为对照品溶液；供试品溶液的制备：取制剂相当于原料药1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20ml，精密称重，超声处理30分钟，放凉，称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜过滤，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述中药组合物原料药组成为：
柴胡148重量份 当归132重量份 炒白术135重量份
茯苓140重量份 蜜炙甘草110重量份 薄荷32重量份
白芍132重量份 生姜145重量份。
4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于所述中药组合物原料药组成为：
柴胡143重量份 当归143重量份 炒白术143重量份
茯苓143重量份 蜜炙甘草114.4重量份 薄荷28.6重量份
白芍143重量份 生姜143重量份。
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