CN101389653A - 肽和肽衍生物以及含有它们的药物组合物 - Google Patents

肽和肽衍生物以及含有它们的药物组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN101389653A
CN101389653A CNA2007800063032A CN200780006303A CN101389653A CN 101389653 A CN101389653 A CN 101389653A CN A2007800063032 A CNA2007800063032 A CN A2007800063032A CN 200780006303 A CN200780006303 A CN 200780006303A CN 101389653 A CN101389653 A CN 101389653A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pro
arg
gly
residue
peg
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CNA2007800063032A
Other languages
English (en)
Inventor
P·佩特泽尔鲍尔
R·亨宁
S·赖因格鲁伯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fibrex Medical Research and Development GmbH
Original Assignee
Fibrex Medical Research and Development GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fibrex Medical Research and Development GmbH filed Critical Fibrex Medical Research and Development GmbH
Publication of CN101389653A publication Critical patent/CN101389653A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/75—Fibrinogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

以下通式(I)的肽和肽衍生物：H2N－GHRPX1X2 X3X4X5X6X7X8PX9X10X11PX12PPPX13X14X15X16GYR－X17 (I)，其中：X1－X16代表20个遗传编码的氨基酸之一，X17代表OR1，R1＝氢或(C1－C10)－烷基，或NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并代表氢、(C1－C10)－烷基或残基－PEG5－60K (其中PEG残基经由间隔区与N原子连接)，或残基NH－Y－Z－ PEG5－60K，其中Y代表化学键或选自S、C、K或R的组的遗传编码的氨基酸，以及Z代表间隔区，通过所述间隔区可以连接聚乙二醇(PEG)残基，以及其生理学上可接受的盐，或其中：X15或X16代表选自C或K的氨基酸，其经由侧链中的杂原子与残基Z－PEG5－60K连接，并且其中X17代表OR1，R1＝氢或(C1－C10)－烷基，或NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且代表氢或(C1－C10)－烷基，以及其生理学上可接受的盐。

Description

肽和肽衍生物以及含有它们的药物组合物
本发明涉及肽和肽衍生物，涉及其生产，以及涉及它们用于制备治疗和/或预防活性的药物的用途，并涉及这样的药物。
EP1586586描述了来自具有抗炎症效果的纤维蛋白序列的肽的用途。
所述效果可以基于这一事实：纤维蛋白和在其分解期间产生的纤维蛋白片段经由它的Bβ链的新-N-末端与内皮细胞结合，经由Aα-链的序列与血流中的细胞结合，从而引起这些细胞进入组织的粘附和迁移。纤维蛋白和纤维蛋白片段对内皮细胞的结合配偶体是蛋白质血管内皮(VE)钙粘蛋白(cadherin)，其在邻近的内皮细胞的粘附接点中专门地表达。根据本发明的肽阻断这种相互作用，从而对抗血细胞的迁移。然而，血液中白细胞对感染的天然防御不受到不利的影响。因而，同样的组合，例如粒细胞、淋巴细胞和单核细胞，保持了不受影响，从而维持了天然的防御过程。
纤维蛋白原在肝脏中产生，在这种形式下，是无生物学活性的，通常在血液中以约3g/l的浓度提供。酶原凝血酶原的蛋白水解裂解引起凝血酶的形成，其从纤维蛋白原上裂解出纤维蛋白肽A和B。这样，纤维蛋白原被转化成生物学活性形式。产生了纤维蛋白和纤维蛋白裂解产物。
每当血液凝固被激活就会形成凝血酶，即，炎症性的、外伤性的或退化发生性的组织伤害。由凝血酶介导的纤维蛋白的形成基本上是保护性的过程，目的在于快速地封闭对血管系统产生的任何损伤。然而，纤维蛋白的形成也是病原性的过程。纤维蛋白血栓的出现作为心肌梗塞的触发因素是在人类医学中最突出的难题。
在一方面，纤维蛋白在炎性细胞从血流外渗到组织的过程期间起到的作用对于防御组织中的致病微生物或肿瘤细胞是期望的过程，但是，在另一方面，其本身诱导或延长了对组织的损害，迄今为止还根本没有被检查或检查的程度不够深入。纤维蛋白通过序列Bβ经由它的Bβ的新-N-末端与内皮细胞结合，通过序列Aα与血流中的细胞结合，从而引起细胞粘附和迁移到组织中。
通过以上描述的机制，根据本发明的肽或蛋白质可以防止来自血流的细胞与血管壁的内皮细胞的粘附，和/或它们随后从血液向组织中的迁移。
WO9216221描述了与长链聚合物，例如甲氧基-聚乙二醇(PEG)共价连接的多肽。多肽与这种聚合物的结合通常会延长这些多肽的生物学半衰期并延迟它们的肾排泄。这种性质的概述可以在Davis等，Polymeric MaterialsPharmaceuticals for Biomedical Use，441-451页(1980)中找到。PEG基团的添加以与PEG化肽的分子量成比例的方式发挥了这种效果，直到一定的分子大小，肾小球过滤速度与所述分子量成反比。
WO2004/101600还描述了新的聚(乙二醇)修饰的化合物和它们的用途，特别是强调了能活化促红细胞生成素受体的修饰的肽。
肽和蛋白质PEG残基的共价修饰的进一步的实例是白细胞介素(Knauf et al，J.Biol Chem.1988，263，15064；Tsutumi等，J.Controlled Release 1995，33，447)、干扰素(Kita等，Drug Delivery Res.1990，6157)、过氧化氢酶(Abuchowski等，J.Biol.Chem.1997，252，3582)。现有技术的综述可以在Reddy，Ann.ofPharmacotherapy，2000，34，915中找到。
延长的生物学半衰期对于肽的各种治疗用途是有益的。在慢性疾病的情况下尤其有用，这种情况下需要长期施用活性试剂。根据这种需要，这可以改善患者的顺应性，因为例如一天一次地应用活性试剂将比连续的输注更易于接受。除了通过共价修饰提高分子量之外，多肽的持续性的延长可以通过防止它们被蛋白水解酶(例如，外切或内切蛋白酶或肽酶)降解的方式修饰它们来获得。
使用过的各种实例都表明必需为每种肽定制合适的修饰，以防止与未修饰的肽相比对药学效果的显著影响。在本文中，可以涉及以下的：降血钙素(Lee等，Pharm.Res.1999，16，813)、生长激素释放激素(Esposito等，Advanced DrugDelivery Reviews，2003，55，1279)、胰高血糖素样肽1(Lee等，Bioconjugate Res.2005，16，377)、以及生长激素受体拮抗剂Pegvisomant(Ross等，J.Clin.Endocrin.Metab.2001，86，1716)。Caliceti和Veronese(Adv.Drug Deliv.Rev.2003，551261)以及Harris和Chess(Nature Rev.Drug Discovery2003，2，214)的综述讨论了在涉及肽-或蛋白-PEG轭合物的情况下必需考虑起始物质的结构、肽和聚合物的分子量、轭合的聚合物链的数量以及接头化学作用，以获得有效的肽-PEG共轭物。
令人惊讶地，现在已经发现，来自Bβ(15-42)纤维蛋白片段的链的肽，其中天然纤维蛋白序列的一个或几个氨基酸被其氨基酸替换，以及在肽序列的C-末端修饰的衍生物，也具有强的抗炎症效果。对于为防止蛋白酶或肽酶的破坏而被修饰的肽及肽衍生物，以及对于来自Bβ(15-42)纤维蛋白片段的基础序列的肽-PEG共轭物，也是一样。
因而，本发明涉及修饰的肽，其来源于Bβ(15-42)-纤维蛋白片段的链，并且其中所述序列的一个或几个氨基酸被遗传编码的或非遗传编码的氨基酸或拟肽替换。它们可以作为游离肽，或作为C-末端衍生物存在和/或与聚乙二醇(PEG)-聚合物连接，并具有抗炎症和/或内皮稳定效果。例如，酯或酰胺可以被考虑作为C-末端衍生物。
本发明的化合物在一个或几个位置上与要治疗的温血动物的纤维蛋白的天然序列相比可以具有氨基酸的保守性替换。保守性替换被定义为相应的氨基酸的侧链被相似化学结构和极性的侧链替换，所述侧链来源于遗传编码的或非遗传编码的氨基酸。这种具有相似侧链的氨基酸的家族是本领域已知的。例如，它们包括具有碱性侧链(赖氨酸、精氨酸、组氨酸)、酸性侧链(天冬氨酸、谷氨酸)、不带电的极性侧链(甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)、非极性侧链(丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)、β-分支的侧链(苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳香族侧链(酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)的氨基酸。这种侧链的保守性替换可以优选地在非关键位置进行。在这个方面，序列中的关键位置是这样一种位置：该位置上相关氨基酸的侧链会显著地影响它的生物学效果。
本发明特别涉及以下通式的肽和肽衍生物：
H2N-GHRPX1X2X3X4X5X6X7X8PX9X10X11PX12PPPX13X14X15X16GYR-X17    (I)，
其中：
X1-X16  代表20个遗传编码的氨基酸之一，
X17     代表OR1，R1＝氢或(C1-C10)-烷基，或
NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且代表氢、(C1-C10)-烷基或残基PEG5-60K，其中PEG残基经由间隔区与N原子连接，或
残基NH-Y-Z-PEG5-60K，其中Y代表化学键或来自S、C、K或R的组的遗传编码的氨基酸，Z代表间隔区，通过所述间隔区可以连接聚乙二醇(PEG)残基，以及其生理学上可接受的盐，
或其中
X15或X16     代表来自C或K的组的氨基酸，其经由侧链中的杂原子与残基Z-PEG5-60K连接，并且其中
X17          代表OR1，R1＝氢或(C1-C10)-烷基，或NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且代表氢或(C1-C10)-烷基，
以及其生理学上可接受的盐。
本发明的优选的主题是通式I的肽和肽衍生物，其中：
X1、X9、X10、X14   代表L、I、S、M或A，
X2、X6、X7         代表E或D，
X3、X4、X5、X11    代表R或K
X8、X12            代表A、G、S或L
X13                代表I、L或V，并且其中
X15、X16和X17       具有与以上给出的相同的含义，
以及其生理学上可接受的盐。
本发明的特别优选的主题是通式II的肽和肽衍生物，
H2N-GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPISGGGYR-X17(II)，
其中X17具有与以上针对式I给出的相同的含义，
以及其生理学上可接受的盐。
本发明的最优选的主题是式(II)的化合物，其中
X17         代表NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且是氢或(C1-C10)-烷基或残基C(NR2R3)-(S-琥珀酰亚胺基)-(PEG5-40K)，所述琥珀酰亚胺残基经由C-原子3与半胱氨酸残基的硫原子连接。
以及其生理学上可接受的盐。
本发明的另一最优选的主题是式(III)的肽衍生物，
H2N-GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPIS-X19-X20-X21-YR-X17    (III)
其中残基X19、X20和X21中的两个每个是甘氨酸残基，剩余的一个是残基C-(S-琥珀酰亚胺基)-(PEG5-40K)，所述琥珀酰亚胺残基经由C-原子3与半胱氨酸残基的硫原子连接，
并且其中X17代表NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且是氢或(C1-C10)-烷基，
以及其生理学上可接受的盐。
本发明的另一最优选的主题是式(III)的肽衍生物，
H2N-GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPIS-X19-X20-X21-YR-X17     (III)
其中残基X19、X20、X21中的两个每个是甘氨酸残基，剩余的一个是残基K-(PEG5-40K)，PEG残基经由赖氨酸残基的侧链中的氮原子连接，并且其中
X17代表NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且是氢或(C1-C10)-烷基，以及其生理学上可接受的盐。
在以上的式I和II中，根据关于蛋白质和肽的一般注释，以下的字母代表氨基酸残基：p苯基丙氨酸是F，亮氨酸是L，异亮氨酸是I，甲硫氨酸是M，缬氨酸是V，丝氨酸是S，脯氨酸是P，苏氨酸是T，丙氨酸是A，酪氨酸是Y，组氨酸是H，谷氨酰胺是Q，天冬酰胺是N，赖氨酸是K，天冬氨酸是D，谷氨酸是E，半胱氨酸是C，色氨酸是W，精氨酸是R，甘氨酸是G。
式I的化合物中的氨基酸残基可以以它们的D或它们的L构型存在。
术语肽是指这些氨基酸的聚合物，这些氨基酸经由酰胺键连接。
“生理学上可接受的”是指与酸或碱形成的盐，当用于人类时它的添加没有不希望的效果。优选的是在美国药典或任何其他一般公认的药典中列出的用于在温血动物、特别是人类中使用的酸或碱的盐。
PEG代表具有5,000和60,000道尔顿之间的分子量的聚乙二醇残基，这种分子量是分子量分布的最大值，从而混合物的单独成分可以具有更高或更低的分子量。
本发明进一步涉及生产通式(I)的肽和肽衍生物的方法，其特征在于：
(A)相应序列的C-末端的第一个氨基酸经由适合的可裂解间隔区与聚合树脂连接，随后的氨基酸，任选地含有功能基团的适当保护基团，根据本领域已知的方法被逐步地连接，根据本领域已知的方法将完成的肽从所述聚合树脂上裂解下来，如果存在的话，通过适合的方法将所述保护基团裂解下来，以及根据适合的方法纯化所述肽或肽衍生物，或者
(B)具有期望的分子量的PEG基团经由适合的间隔区连接到聚合树脂，使用适合的方法连接在肽的N-末端的第一个氨基酸，其余的步骤与(A)中描述的相同，或者
(C)在ε-氨基上含有适当保护基团的赖氨酸残基使用适合的方法经由适合的间隔区连接到适合的聚合树脂，如(A)中描述的那样合成肽链，在从所述聚合树脂裂解和纯化之后，如有必要，使用适合的方法将在ε氨基上的所述保护基团裂解下来，使用适合的活化试剂将具有期望的分子量的PEG基团连接到ε-氨基上，任选地将其余的保护基团裂解下来，并使用适合的方法纯化最终的产物，或者
(D)使含有半胱氨酸残基的肽与PEG-马来酰亚胺反应来形成式(III)的化合物。
例如，在文件WO 2004/101600中描述了根据(A)、(B)或(C)的适合的处理步骤以及适合的试剂。
相应的处理步骤的实施方式本身不是新的，对于有机合成领域的有经验专家将是清楚的。
连接PEG-残基到肽链的方法是熟练的技术人员已知的。例如，半胱氨酸(C)-残基可以与PEG-马来酰亚胺反应，产生琥珀酰亚胺残基作为残基Z的间隔区。进一步可能的是使任选地活化的C-末端羧基残基与氨基烷基取代的PEG残基反应。进一步的可能是通过使醛取代的PEG残基与赖氨酸残基的ε氨基官能团反应来导入PEG残基。具有适合的间隔区和反应基团的活化的PEG试剂例如可以从NOF公司(Tokyo，Japan)获得。
根据本发明的物质以及根据本发明的物质用于生产药物的用途，对于药物的生产是特别重要的，所述药物用于治疗由白血球的组织破坏效果引起的、或其中血管内衬的内皮细胞层的完整性和完全的生理学完整性被损害所引起的疾病。
属于这个组的疾病有与自体免疫有关系的那些，例如胶原疾病、风湿性疾病、炎症性肠疾病，如局限性肠病或溃疡性结肠炎，银屑病和银屑病性类风湿性关节炎，和感染后/伴感染疾病，以及由移植抗宿主反应引起的疾病。随着这种医学药物阻断白血球进入组织的迁移，发生了治愈效果。因而，白血球保持在血流中，并且不会引起对组织有害的自发反应性效果。本发明的物质的这种效果对于治疗休克状况、特别是由革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌性病原体的感染以及病毒感染触发的脓毒性休克，以及由于严重损伤或细菌或病毒感染的重度失血引起的出血性休克，是更为重要的。
本发明的物质一般可以用于一些情况，所述情况可以分别用术语“全身性炎症性反应综合征(SIRS)”、“急性呼吸窘迫综合征(ARDS)”和器官或多器官衰竭来描述。
与用于治疗和/或预防器官移植的排斥反应的药物一起，这种药物会阻止白血球从血流迁移入供体器官，因而，供体器官不会被例如自体反应性淋巴细胞破坏，从而起到治愈效果。
与用于治疗和/或预防动脉硬化的药物一起，这种药物会阻断淋巴细胞和单核细胞进入组织的壁的迁移、因而阻断组织壁的细胞的活化，从而起到治愈和/或预防效果。因而，动脉硬化的发展被最小化或终止，由此产生的动脉硬化斑块的发展被抑制，使得动脉硬化降低。
与用于治疗和/或预防外科手术或药物诱导的血液重新供应之后的，例如在经皮冠状动脉介入治疗、中风、血管手术、心脏旁路手术和器官移植之后的重灌注损伤的药物一起，这种药物能抑制淋巴细胞、嗜中性细胞和单核细胞进入血管壁的迁移，从而起到治愈和/或预防效果。重灌注损伤是由在血液的重新供应期间血管细胞的缺氧/酸中毒、导致细胞的活化和/或损坏所引起。因此，淋巴细胞、嗜中性细胞和单核细胞附着于血管壁上并迁移到其中。阻断淋巴细胞、嗜中性细胞和单核细胞在血管壁中的粘附和迁移使得缺氧/酸中毒诱导的损害降低，而没有随后的引起对血管的永久性损伤的炎症性反应。此外，本发明化合物的内皮稳定效果阻止了水肿的形成以及对由相应的血管供给器官的任何进一步损害。
与用于治疗和/或预防作为代谢疾病或老化过程的结果的动脉硬化的药物一起，这种药物抑制淋巴细胞、嗜中性细胞和单核细胞进入血管壁的迁移、因而抑制由其引起的动脉硬化斑块的发展，从而起到痊愈和/或预防效果。
根据本发明的药物也可以用于另一种药物的转运。本发明的药物特异性地结合内皮细胞上的表面分子。因而，与之连接的药物可以以高浓度被递送到内皮细胞而免除了它们在其他位点具有副作用的任何危险。在此可以引用的实例是，使用被特异性地带至内皮细胞的、抑制细胞分裂的物质，可以具有抗血管发生效果。这引起了肿瘤患者中的治愈效果，因为通过防止内皮细胞增殖并因而通过防止新血管发生而阻断了肿瘤生长。本发明的化合物本身也可以发展出抗血管发生效果，因为，由于它们的血管稳定效果，它们阻止了内皮细胞变化成增殖性表型，并因而阻止了新的微血管的形成。所以，它们本身适合于治疗各种类型的肿瘤疾病以及预防和/或治疗肿瘤转移。
本发明的式(I)的化合物与药物佐剂和添加剂一起，可以被配制成药物制剂，其也是本发明的主题。为了制备这种制剂，将治疗有效剂量的肽或肽衍生物与药学上可接受的稀释剂、稳定剂、增溶剂、乳化助剂、佐剂或载体混合，并形成适合的治疗剂型。例如，这种制品含有不同pH值和离子强度的各种缓冲液(例如，Tris-HCl、醋酸盐、磷酸盐)的稀释物、洗涤剂和增溶剂(例如，Tween80、Polysorbat 80)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸)和填料(例如，乳糖、甘露醇)。这些制剂可以影响活性试剂的生物有效性和代谢行为。
根据本发明的药物制品可以口服地、胃肠外地(肌内注射地、腹膜内地、静脉内地或皮下地)、透皮地施用，或在适合的生物可降解的聚合物(例如，聚乳酸或聚乙二醇)的可降解植入物中施用。
例如，所要求权利的本发明的化合物的用途的生物学效果和适用性可以在分析中被测定，在所述分析中，在用“N-末端二硫化物结蛋白II”(NDSK-II)或用凝血酶刺激之后，在显微镜下检查人类脐带内皮细胞的培养物。内皮细胞的刺激引起紧密堆积的细胞层中的细胞之间形成缺口。用本发明的化合物处理可以防止形成这些缺口，并且成功地闭合已经形成的缺口。这种效果是本发明的化合物在整个有机体中所具有的对内皮的保护效果的表现。本发明的化合物在细胞的水浴溶液中在0.01nM到1mM的浓度范围内，优选在1nM到0.1mM的范围内具有效果。
例如，体内有效性可以使用啮齿动物中的急性肺炎模型来确定。为此，如以下实施例7所述进行动物的处理和物质的施用。本发明的化合物在从0.001mg/kg体重到500mg/kg体重的剂量范围内，优选从0.1mg/kg到50mg/kg的剂量范围内显示有效果。
确定体内生物学效果的另一种可能是降低或完全抑制由于溶血性病毒或细菌的感染的死亡率。为此，如实施例8所描述的，例如，将小鼠用一剂登革热病毒感染，其中在感染后5-20天的期间内50％的动物死亡。本发明的化合物在从0.001mg/kg体重到500mg/kg体重的剂量范围内，优选从0.1到50mg/g体重的剂量范围引起了这种死亡率的降低。
以下的实施例用来说明本发明，而不是将本发明限制到所述实施例。
根据本发明的肽的一般制备和纯化
以上肽衍生物的制备和纯化一般通过FMOC策略、在酸不稳定的树脂支持物上、使用商业上可获得的分批肽合成仪来进行，这也在文献中描述了(例如，＂solid phase peptide synthesis-A practical approach＂by E.Atherton，R.C.Sheppard，Oxford University press 1989)。N-α-FMOC保护的衍生物被用作氨基酸组件，它的功能侧链被酸敏感的保护基团保护。除非另有说明，纯化是使用水/乙腈梯度以及0.1％TFA作为离子配对试剂通过RP层析来进行的。
实施例1
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
以0.24mmol/g上样量将100mg Tentagel-S-RAM(Rapp-聚合物)转移到商业上可获得的肽合成设备(PSMM(Shimadzu))上，其中根据碳二亚胺/HOBt方法来分步地构建肽序列。
在转移到反应容器中之后，通过添加5倍等摩尔过量的二-异丙基-碳二亚胺(DIC)、二-异丙基-乙胺(DIPEA)和羟基苯并三唑(HOBt)来预先活化FMOC氨基酸衍生物，并将其与树脂支持物混合30分钟。5次添加900μl DMF并充分混合1分钟，进行洗涤步骤。添加3×900μl DMF中的30％哌啶，并彻底混合4分钟，进行裂解步骤。
通过迫使溶液通过反应容器的底部过滤器来进行单独的反应和洗涤溶液的除去。
采用了氨基酸衍生物FMOC-Ala、FMOC-Arg(Pbf)、FMOC-Asp、FMOC-Gly、FMOC-His(Trt)、FMOC-Ile、FMOC-Leu、FMOC-Lys(BOC)、FMOC-Pro、FMOC-Ser(tBu)和FMOC-Tyr(fBu)(Orpegen)。
当合成完成时，干燥肽树脂。随后，通过用三氟醋酸/TIS/EDT/水(体积95:2:2:1)在室温下处理2小时来裂解肽酰胺。通过过滤、溶液的浓缩以及通过添加冰冷的二乙醚的方式，获得了固体的粗制品(75mg)。
通过RP-HPLC在Kromasil RP-18 250-20，10μm上，在具有5-60％乙腈梯度的0.1％TFA中，在40分钟内，以12ml/分钟流速来纯化肽，在215nm处通过UV检测器评估洗脱物。通过分析性RP-HPLC和质谱法来测定单独级分的纯度。在组合纯化的级分以及冻干之后，获得了48mg纯的产物，Maldi-TOF 3036.6m/z(m.i.)。
实施例2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺-PEG20K)-OH
如实施例1中那样合成单体的肽，在此Tentagel(Rapp Polymere)用作树脂支持物，FMOC-Cys(Trt)作为第一个氨基酸。
在肽的裂解和纯化之后，与2到8倍摩尔过量的琥珀酰亚胺-PEG20K进行反应。在Kromasil RP-18上进行回收纯化之后，通过分析性RP-HPLC和MALDI-MS的方式确认产物。
实施例3
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)-酰胺
以0.24mmol/g的上样量将100mg Tentagel-S-RAM(Rapp-Polymere)转移到商业上可获得的肽合成设备(PSMM(Shimadzu))上，其中根据碳二亚胺/HOBt方法来分步地构建肽序列。
在转移到反应容器中之后，通过添加5倍等摩尔过量的二-异丙基-碳二亚胺(DIC)、二-异丙基-乙胺(DIPEA)和羟基苯并三唑(HOBt)来预先活化FMOC氨基酸衍生物，并与树脂支持物混合30分钟。5次添加900μl DMF并充分混合1分钟，进行洗涤步骤。通过添加3×900μl在DMF中的30％哌啶，并彻底混合4分钟，进行裂解步骤。
通过使溶液通过反应容器的底部过滤器来进行单独的反应和洗涤溶液的除去。
采用了氨基酸衍生物FMOC-Ala、FMOC-Arg(Pbf)、FMOC-Asp、FMOC-Gly、FMOC-His(Trt)、FMOC-Ile、FMOC-Leu、FMOC-Lys(BOC)、FMOC-Pro、FMOC-Ser(tBu)、FMOC-Cys(Trt)和FMOC-Tyr(tBu)(Orpegen)。
在肽的裂解和纯化之后，与2到8倍摩尔过量的琥珀酰亚胺基-PEG20K进行反应。在Kromasil RP-18上进行回收纯化之后，通过分析性RP-HPLC和MALDI-MS的方式确认产物。
实施例4
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)-Gly-Tyr-Arg-酰胺
将具有0.24mmol/g载荷量的100mg Tentagel-S-RAM(Rapp-Polymere)转移到商业上可获得的肽合成设备(PSMM(Shimadzu))上，其中根据碳二亚胺/HOBt方法来分步地构建肽序列。
在转移到反应容器中之后，通过添加5倍等摩尔过量的二-异丙基-碳二亚胺(DIC)、二-异丙基-乙胺(DIPEA)和羟基苯并三唑(HOBt)来预先活化FMOC氨基酸衍生物，并与树脂支持物混合30分钟。5次添加900μl DMF并充分混合1分钟，进行洗涤步骤。通过添加3×900μl在DMF中的30％哌啶，并彻底混合4分钟，进行裂解步骤。
通过使溶液通过反应容器的底部过滤器来进行单独的反应和洗涤溶液的除去。
采用了氨基酸衍生物FMOC-Ala、FMOC-Arg(Pbf)、FMOC-Asp、FMOC-Gly、FMOC-His(Trt)、FMOC-Ile、FMOC-Leu、FMOC-Lys(BOC)、FMOC-Pro、FMOC-Ser(tBu)、FMOC-Cys(Trt)和FMOC-Tyr(tBu)(Orpegen)。
当合成完成时，干燥肽树脂。随后，通过用三氟醋酸/TIS/EDT/水(体积95:2:2:1)在室温下处理2小时来裂解肽酰胺。通过过滤、浓缩溶液以及通过添加冰冷的二乙醚的方式，获得了固体的粗制品(75mg)。
通过在Kromasil RP-18 250-20上的RP-HPLC来纯化肽。使由此获得的肽与琥珀酰基-PEG20K反应。在回收、通过凝胶层析纯化和冻干法之后，获得纯的产物，通过RPH-HPLC和MALDI-MS的方式确认产物。
实施例5
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)-Gly-Gly-Tyr-Arg-酰胺
如实施例4中那样获得，适当地改变被保护氨基酸的序列。
实施例6
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)-Tyr-Arg-酰胺
如实施例4中那样获得，适当地改变被保护氨基酸的序列。
如实施例1中那样制备以下：
Gly-His-Arg-Pro-Ile-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Ala-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Arg-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Arg-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Asp-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Asp-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Lys-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Gly-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Leu-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Lys-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Ala-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
Gly-His-Arg-Pro-Ile-Asp-Lys-Arg-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Ile-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-NH2
如实施例2中那样制备以下：
Gly-His-Arg-Pro-Ile-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Arg-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG10K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Asp-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG10K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Ile-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)OH
如实施例3中那样制备以下：
Gly-His-Arg-Pro-Ile-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Arg-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG10K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Asp-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG10K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Ile-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-琥珀酰亚胺基-PEG20K)酰胺
实施例7
在LPS诱导的肺炎模型中验证实施例1化合物的生物学效果。将C57黑小鼠随机分配到每组6只动物的两个组中，如下处理：
让组1鼻内地接受100ng/kg LPS，在LPS的施用之后立即地，让小鼠静脉内接受4.8mg/kg的实施例1的试剂(溶于100μl NaCl中)，在施用LPS之后60分钟后再次静脉内接受第二剂。
让组2鼻内地接受100ng/kg LPS，在使用LPS之后立即地，让小鼠静脉内接受100μl NaCl，在LPS的施用之后60分钟，让小鼠再次静脉内接受100μlNaCl，在LPS应用之后6小时，对所有的组进行支气管小泡灌洗，并移出肺。从灌洗液体中，测定了许多嗜中性细胞(PMN)。这得到了以下结果：
实施例8
在登革热病毒感染的小鼠模型中验证实施例3化合物的生物学效果。将5周龄的雄性BALB/c小鼠被分成2组。所有的动物用小鼠适应的登革热病毒(DEN-2，菌株P23085以1-2LD50的剂量皮下地感染。让15只小鼠以肌内注射方式接受0.1ml 0.8％盐水(对照)。让处理的动物以肌内注射方式接受4.8mg/kg/天的实施例3试剂(在0.1ml的0.8％盐水中稀释)，每天一次，共5天，从病毒感染之后3天开始。
在处理期(10天)结束时，比较存活率。
获得了以下结果：
 
死亡率 百分比
对照 8/15 47％
实施例3 0/10 0％ p<0.05
实施例9
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG20K)-OH
以与实施例1类似的方式进行单体肽的合成，在此Tentagel of(RappPolymere)用作树脂支持物，FMOC-Cys(Trt)作为第一个氨基酸。
在肽的裂解和纯化之后，与合适的过量Br-CH2-CO-NH-PEG20K进行反应。在Kromasil RP-18上进行回收纯化之后，通过MALDI-MS确认产物。
实施例10
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG20K)-酰胺
以0.24mmol/g的载荷量将100mg Tentagel-S-RAM(Rapp-Polymere)转移到商业上可获得的肽合成设备(PSMM(Shimadzu))上，其中根据碳二亚胺/HOBt方法来分步地构建肽序列。
在转移到反应容器中之后，通过添加5倍等摩尔过量的二-异丙基-碳二亚胺(DIC)、二-异丙基-乙胺(DIPEA)和羟基苯并三唑(HOBt)来预先活化FMOC氨基酸衍生物，并与树脂支持物混合30分钟。5次添加900μl DMF并充分混合1分钟，进行洗涤步骤。添加3×900μl在DMF中的30％哌啶，并彻底混合4分钟，进行裂解步骤。
通过使溶液通过反应容器的底部过滤器来进行单独的反应和洗涤溶液的除去。
采用了氨基酸衍生物FMOC-Ala、FMOC-Arg(Pbf)、FMOC-Asp、FMOC-Gly、FMOC-His(Trt)、FMOC-Ile、FMOC-Leu、FMOC-Lys(BOC)、FMOC-Pro、FMOC-Ser(tBu)、FMOC-Cys(Trt)和FMOC-Tyr(tBu)(Orpegen)。
在肽的裂解和纯化之后，与合适的过量的Br-CH2-CO-NH-PEG20K进行反应。在Kromasil RP-18上进行回收纯化之后，通过MALDI-MS确认产物。
实施例11
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG20K)-Gly-Tyr-Arg-酰胺
以0.24mmol/g的载荷量将100mg Tentagel-S-RAM(Rapp-Polymere)转移到商业上可获得的肽合成设备(PSMM(Shimadzu))上，其中根据碳二亚胺/HOBt方法来分步地构建肽序列。在转移到反应容器中之后，通过添加5倍等摩尔过量的二-异丙基-碳二亚胺(DIC)、二-异丙基-乙胺(DIPEA)和羟基苯并三唑(HOBt)来预先活化FMOC氨基酸衍生物，并与树脂支持物混合30分钟。5次添加900μl DMF并充分混合1分钟，进行洗涤步骤。添加3×900μl 在DMF中的30％哌啶，并彻底混合4分钟，进行裂解步骤。
通过使溶液通过反应容器的底部过滤器来进行单独的反应和洗涤溶液的除去。
采用了氨基酸衍生物FMOC-Ala、FMOC-Arg(Pbf)、FMOC-Asp、FMOC-Gly、FMOC-His(Trt)、FMOC-Ile、FMOC-Leu、FMOC-Lys(BOC)、FMOC-Pro、FMOC-Ser(tBu)、FMOC-Cys(Trt)和MOC-Tyr(tBu)(Orpegen)。
当合成完成时，干燥肽树脂。随后，通过用三氟醋酸/TIS/EDT/水(体积95:2:2:1)在室温下处理2小时，来裂解肽酰胺。通过过滤、浓缩溶液以及通过添加冰冷的二乙醚的方式，获得了固体的粗制品(75mg)。
通过RP-HPLC在Kromasil RP-18 250-20上纯化肽。使由此获得的肽与O-(碘化乙酰基)-N-羟基琥珀酰亚胺反应，随后与氨基-乙基-氧-PEG20K反应。
在回收、通过凝胶层析纯化和冻干之后，获得纯的产物，通过MALDI-MS确认该产物。
实施例12
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG20K)-Gly-Tyr-Arg-酰胺
如实施例11中那样获得，适当地改变被保护氨基酸的序列。
如实施例9中那样产生以下：
Gly-His-Arg-Pro-Ile-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Arg-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG10K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Asp-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG10K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)OH
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Ile-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)OH
如实施例10中那样产生以下：
Gly-His-Arg-Pro-Ile-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Arg-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys-(S-CH2-CO-NH-PEG10K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Asp-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ala-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ala-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG10K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Leu-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)酰胺
Gly-His-Arg-Pro-Leu-Asp-Lys-Lys-Arg-Glu-Glu-Ala-Pro-Ser-Ile-Arg-Pro-Ala-Pro-Pro-Pro-Ile-Ser-Gly-Gly-Gly-Tyr-Arg-Cys--(S-CH2-CO-NH-PEG20K)酰胺

Claims (7)

1.以下通式I的肽和肽衍生物：
H2N-CHRPX1X2X3X4X5X6X7X8PX9X10X11PX12PPPX13X14X15X16GYR-X17(I)，
其中：
X1-X16 代表20个遗传编码的氨基酸之一，
X17 代表OR1，R1＝氢或(C1-C10)-烷基，或
NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且代表氢、(C1-C10)-烷基或残基PEG5-60K，其中PEG残基经由间隔区与N原子连接，或
残基NH-Y-Z-PEG5-60K，其中Y代表化学键或来自S、C、K或R的组的遗传编码的氨基酸，以及Z代表间隔区，通过所述间隔区可以连接聚乙二醇(PEG)残基，
以及其生理学上可接受的盐，
或其中：
X15或X16代表来自C或K的组的氨基酸，其经由侧链中的杂原子与残基Z-PEG5-60K连接，并且其中
X17 代表OR1，R1＝氢或(C1-C10)-烷基，或
NR2R3、R2和R3是相同的或不同的，并且代表氢或(C1-C10)-烷基，
以及其生理学上可接受的盐。
2.通式I的肽和肽衍生物，其中：
X1、X9、X10、X14   代表L、I、S、M或A，
X2、X6、X7        代表E或D，
X3、X4、X5、X11    代表R或K
X8、X12           代表A、G、S或L
X13               代表I、L或V，并且其中
X15、X16和X17      具有与权利要求1中相同的含义，
以及其生理学上可接受的盐。
3.式II的肽和肽衍生物，
H2N-GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPISGGGYR-X17  (II)，
其中X17具有在权利要求1中针对式I给出的含义，
以及其生理学上可接受的盐。
4.式(II)的肽和肽衍生物，
其中：
X17  代表NR2R3，R2a和R3是相同的或不同的，并且是氢或(C1-C10)-烷基，或残基C(NR2R3)-(S-琥珀酰亚胺基)-(PEG5-40K)，所述琥珀酰亚胺残基经由C-原子3与半胱氨酸残基的硫原子连接，
以及其生理学上可接受的盐。
5.式(III)的肽衍生物，
H2N-GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPIS-X19-X20-X21-YR-X17  (III)
其中残基X19、X20和X21中的两个每个是甘氨酸残基，剩余的一个是残基C-(S-琥珀酰亚胺基)-(PEG5-40K)，所述琥珀酰亚胺基经由C-原子3与半胱氨酸残基的硫原子连接，
并且其中X17代表NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且是氢或(C1-C10)-烷基，
以及其生理学上可接受的盐。
6.式(III)的肽衍生物，
H2N-GHRPLDKKREEAPSLRPAPPPIS-X19-X20-X21-YR-X17  (III)
其中残基X19、X20、X21中的两个每个是甘氨酸残基，剩余的一个是残基K-(PEG5-40K)，所述PEG残基经由赖氨酸残基的侧链中的氮原子连接，并且其中
X17代表NR2R3，R2和R3是相同的或不同的，并且是氢或(C1-C10)-烷基，
以及其生理学上可接受的盐。
7.一种药物组合物，含有根据权利要求1到6的任一项的肽或肽衍生物。
CNA2007800063032A 2006-02-23 2007-02-23 肽和肽衍生物以及含有它们的药物组合物 Pending CN101389653A (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
AT3012006 2006-02-23
ATA301/2006 2006-02-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN101389653A true CN101389653A (zh) 2009-03-18

Family

ID=38042580

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA2007800063032A Pending CN101389653A (zh) 2006-02-23 2007-02-23 肽和肽衍生物以及含有它们的药物组合物

Country Status (15)

Country Link
US (3) US20110098442A1 (zh)
EP (2) EP2256131A1 (zh)
JP (1) JP2009527502A (zh)
KR (1) KR20090005300A (zh)
CN (1) CN101389653A (zh)
AT (1) ATE513853T1 (zh)
AU (1) AU2007219031B2 (zh)
CA (1) CA2641908A1 (zh)
ES (1) ES2371038T3 (zh)
IL (1) IL193435A0 (zh)
MX (1) MX2008010930A (zh)
NO (1) NO20084002L (zh)
RU (1) RU2008137796A (zh)
WO (1) WO2007095660A1 (zh)
ZA (1) ZA200807028B (zh)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2331958T3 (es) * 2004-06-25 2010-01-21 FIBREX MEDICAL RESEARCH &amp; DEVELOPMENT GMBH Uso de peptidos derivados de la cadena b beta de fibrinogeno humano para el tratamiento del choque.
US8722623B2 (en) * 2007-09-17 2014-05-13 University Of Maryland, Baltimore Compositions and methods utilizing fibrin beta chain fragments
WO2009096502A1 (ja) * 2008-01-31 2009-08-06 Japan As Represented By President Of National Center Of Neurology And Psychiatry うつ病およびうつ状態のマーカーおよびそれを用いた検出・診断
US20090286725A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Fibrex Medical Research & Development Gmbh Peptides and derivatives thereof, the manufacturing thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition
US7884074B2 (en) 2008-05-15 2011-02-08 Ikaria Development Subsidiary Two, LLC Compounds and methods for prevention and/or treatment of inflammation using the same
US20090286740A1 (en) * 2008-05-15 2009-11-19 Fibrex Medical Research & Development Gmbh Peptides and derivatives thereof, the manufacturing thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition
US8088890B2 (en) * 2008-09-26 2012-01-03 Fibrex Medical Research & Development Gmbh Peptides and peptidomimetic compounds, the manufacturing thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition
WO2010043444A2 (en) * 2008-10-15 2010-04-22 Fibrex Medical Research & Development Gmbh Pharmaceutical preparation for the treatment and/or prevention of ischemia/reperfusion injury and the sequels thereof
US20100152832A1 (en) * 2008-12-12 2010-06-17 Medtronic Vascular, Inc. Apparatus and Methods for Treatment of Aneurysms With Fibrin Derived Peptide B-Beta
US8841257B2 (en) * 2009-04-10 2014-09-23 Board Of Regents, The University Of Texas System Inhibitors of STAT3 and uses thereof
WO2019011879A1 (en) 2017-07-09 2019-01-17 Rainer Henning THERAPEUTIC AGENT FOR THE TREATMENT OF CAPILLARY LEAK SYNDROME
JP7429032B2 (ja) * 2019-12-24 2024-02-07 学校法人順天堂 間質性肺炎モデル非ヒト動物の作製方法
EP3912679A1 (en) 2020-05-19 2021-11-24 Johann Wolfgang Goethe-Universität Frankfurt am Main Bbeta-15-42 for the treatment of viral endothelitis

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4966848A (en) * 1988-02-08 1990-10-30 The General Hospital Corporation Isolation, purification, characterization, cloning and sequencing of N α-acetyltransferase
US5223421A (en) * 1989-10-25 1993-06-29 The General Hospital Corporation Identification of methionine Nα-acetyltransferase
US5965107A (en) * 1992-03-13 1999-10-12 Diatide, Inc. Technetium-99m labeled peptides for imaging
JP3693671B2 (ja) * 1991-03-15 2005-09-07 アムゲン インコーポレーテッド ポリペプチドのｐｅｇ化
US5688489A (en) * 1995-09-15 1997-11-18 Resolution Pharmaceuticals, Inc. Non-receptor mediated imaging agents
US6323311B1 (en) * 1999-09-22 2001-11-27 University Of Utah Research Foundation Synthesis of insulin derivatives
YU53803A (sh) 2000-12-12 2006-03-03 Fibrex Medical Research & Development Gmbh. Peptidi i/ili proteini kao i njihova primena za pripremanje terapeutskih i/ili preventivnih lekova
DE10314329A1 (de) * 2003-03-28 2004-10-21 Zf Friedrichshafen Ag Antriebsstrang zum Antrieb eines Mobil-Fahrzeugs
EP2336162A1 (en) 2003-05-12 2011-06-22 Affymax, Inc. Novel poly (ethylene glycol) modified erythropoietin agonists and uses thereof
ES2331958T3 (es) * 2004-06-25 2010-01-21 FIBREX MEDICAL RESEARCH &amp; DEVELOPMENT GMBH Uso de peptidos derivados de la cadena b beta de fibrinogeno humano para el tratamiento del choque.
AT502987A1 (de) * 2005-12-23 2007-07-15 Fibrex Medical Res & Dev Gmbh Pharmazeutische zusammensetzung zur behandlung von hämorrhagischem schock und seinen folgeerscheinungen

Also Published As

Publication number Publication date
NO20084002L (no) 2008-11-18
US20110098442A1 (en) 2011-04-28
CA2641908A1 (en) 2007-08-30
IL193435A0 (en) 2011-08-01
KR20090005300A (ko) 2009-01-13
US20100279924A1 (en) 2010-11-04
JP2009527502A (ja) 2009-07-30
EP1987062B1 (en) 2011-06-22
US20080039388A1 (en) 2008-02-14
AU2007219031B2 (en) 2011-11-03
RU2008137796A (ru) 2010-03-27
WO2007095660A1 (en) 2007-08-30
ATE513853T1 (de) 2011-07-15
AU2007219031A1 (en) 2007-08-30
ZA200807028B (en) 2009-11-25
EP2256131A1 (en) 2010-12-01
US7799758B2 (en) 2010-09-21
MX2008010930A (es) 2008-10-29
EP1987062A1 (en) 2008-11-05
ES2371038T3 (es) 2011-12-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101389653A (zh) 肽和肽衍生物以及含有它们的药物组合物
EP1987063B1 (en) Peptides and peptide derivatives, the production thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition
US7884074B2 (en) Compounds and methods for prevention and/or treatment of inflammation using the same
CA2737953A1 (en) Peptides and peptidomimetic compounds, the manufacturing thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition
CA2722959A1 (en) Peptides and derivatives thereof, the manufacturing thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition
US20090286740A1 (en) Peptides and derivatives thereof, the manufacturing thereof as well as their use for preparing a therapeutically and/or preventively active pharmaceutical composition

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20090318