CN101381690A - 抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法 - Google Patents

Abstract

抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法属于菌剂制备技术；本方法利用具有高效固氮活性大豆根瘤菌，在蔗糖酵母膏培养基中逐步提高乙草胺浓度，在乙草胺高压选择条件下培育抗性大豆根瘤菌，经纯系分离后形成抗乙草胺大豆根瘤菌原原种，将原原种挑取到斜面试管中形成一级菌种，再将一级菌种扩繁形成二级菌种接种到发酵罐内进行菌剂生产；本方法工艺技术简单，生产成本低廉，其制剂产品性能质量好，使用中解决了乙草胺对大豆根瘤固氮的伤害，提高大豆产量和品质。

Description

抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法

技术领域

本发明属于一种大豆根瘤菌剂的制备技术，主要涉及抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法。

背景技术

农田土壤中大豆根瘤菌侵染大豆根毛表皮细胞后刺激细胞加速分裂而形成根瘤，在根瘤内部根瘤菌可将空气中的氮气转化为大豆可以利用的氨态氮素营养，同时根瘤菌利用大豆提供的营养维持生存。乙草胺是目前大豆田应用最广泛的土壤处理除草剂，由于乙草胺在大豆生产中的长期大量应用和我国北方大豆产区春季气温低下等不良环境条件，常造成对大豆根系及其生存环境的严重破坏，导致大豆根瘤菌侵染大豆根毛形成根瘤能力降低、根瘤数量减少使固氮活性和效率降低而造成大豆产量和品质下降。对乙草胺长期大量应用所造成的大豆根瘤菌侵染大豆根毛形成根瘤能力的降低和固氮活性下降这一降低大豆根瘤固氮效率、导致大豆产量降低的难题，目前生产上尚无解决的有效方法。

发明内容

本发明的目的就是针对上述已有技术存在的问题，研究提供一种抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法，利用本方法培育生产的抗乙草胺大豆根瘤菌剂接种大豆以解决大豆根瘤菌因受乙草胺的影响导致的根瘤数减少、固氮效率降低这一大豆生产中制约产量和品质提高的难题。

本发明的目的是这样实现的：

①、在蔗糖酵母膏培养基中加入乙草胺，使蔗糖酵母膏培养基中的乙草胺浓度为100mg/L；将上述蔗糖酵母膏培养基在每个摇瓶中装入150ml，在120—125℃条件下灭菌30—40分钟，冷却后挑取一环具有高效固氮活性的大豆根瘤菌加入摇瓶中，在28—30℃条件下培养5—7天，得培养基液备用；

②、在蔗糖酵母膏培养基中加入乙草胺，使蔗糖酵母膏培养基中的乙草胺浓度为200mg/L；将此乙草胺浓度的蔗糖酵母膏培养基在每个摇瓶中装入150ml，在120—125℃条件下灭菌30—40分钟，冷却后再将上述①中得到的培养基液挑取一环接种到灭菌后含乙草胺浓度为200mg/L的蔗糖酵母膏培养基中，在28—30℃条件下培养5—7天，得培养基液备用；

③、依此类推，重复②的作业过程，每次在蔗糖酵母膏培养基中增加100mg/L的乙草胺，直至蔗糖酵母膏培养基中乙草胺浓度为1000mg/L；

④、把含乙草胺浓度为1000mg/L的蔗糖酵母膏培养基中具有抗性的大豆根瘤菌进行纯系分离后保存于斜面试管中；

⑤、把纯系分离后的抗乙草胺大豆根瘤菌在蔗糖酵母膏斜面试管基中培养为一级菌种，再将该一级菌种在灭菌的蔗糖酵母膏培养基摇瓶中扩繁培养为二级菌种；对含有8％豆粉、5％麦麸、3％食盐、1％甘露醇、PH值为6.5—6.8的水溶液培养基进行灭菌冷却后接种二级菌种，在28—30℃条件下发酵培养48—72小时，过滤后得到液态抗乙草胺大豆根瘤菌剂，或者选择固定载体添加抗乙草胺大豆根瘤菌剂制成固态抗乙草胺大豆根瘤菌剂产品。

本发明的工艺技术简单，产品生产成本低廉，其制剂产品性能质量好，在长期大量使用乙草胺的大豆产区应用抗乙草胺根瘤菌剂使大豆形成大量的根瘤，并提高根瘤固氮活性和效率，解决了乙草胺对大豆根瘤固氮的伤害，从而提高大豆产量和品质。

具体实施方式

下面详细描述本发明实施方式。

本发明利用目前已经推广应用的具有高效固氮活性大豆根瘤菌，在蔗糖酵母膏培养基中逐步提高乙草胺浓度，在乙草胺高压选择条件下培育抗性大豆根瘤菌，经纯系分离后形成抗乙草胺大豆根瘤菌原原种，将原原种挑取到斜面试管中形成一级菌种，再将一级菌种扩繁形成二级菌种接种到发酵罐进行菌剂生产。详细工艺过程如下：一种抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法：

①、在蔗糖酵母膏培养基中加入乙草胺，使蔗糖酵母膏培养基中的乙草胺浓度为100mg/L；将上述蔗糖酵母膏培养基在每个摇瓶中装入150ml，在120—125℃条件下灭菌30—40分钟，冷却后挑取一环具有高效固氮活性的大豆根瘤菌加入摇瓶中，在28—30℃条件下培养5—7天，得培养基液备用；

②、在蔗糖酵母膏培养基中加入乙草胺，使蔗糖酵母膏培养基中的乙草胺浓度为200mg/L；将此乙草胺浓度的蔗糖酵母膏培养基在每个摇瓶中装入150ml，在120—125℃条件下灭菌30—40分钟，冷却后再将上述①中得到的培养基液挑取一环接种到灭菌后含乙草胺浓度为200mg/L的蔗糖酵母膏培养基中，在28—30℃条件下培养5—7天，得培养基液备用；

③、依此类推，重复②的作业过程，每次在蔗糖酵母膏培养基中增加100mg/L的乙草胺，直至蔗糖酵母膏培养基中乙草胺浓度为1000mg/L；

④、把含乙草胺浓度为1000mg/L的蔗糖酵母膏培养基中具有抗性的大豆根瘤菌进行纯系分离后保存于斜面试管中；

⑤、把纯系分离后的抗乙草胺大豆根瘤菌在蔗糖酵母膏斜面试管基中培养为一级菌种，再将该一级菌种在灭菌的蔗糖酵母膏培养基摇瓶中扩繁培养为二级菌种；对含有8％豆粉、5％麦麸、3％食盐、1％甘露醇、PH值为6.5—6.8的水溶液培养基进行灭菌冷却后接种二级菌种，在28—30℃条件下发酵培养48—72小时，过滤后得到液态抗乙草胺大豆根瘤菌剂，或者选择固定载体添加抗乙草胺大豆根瘤菌剂制成固态抗乙草胺大豆根瘤菌剂产品。

本发明提出了制备抗乙草胺大豆根瘤菌剂的方法，该方法生产的抗乙草胺大豆根瘤菌剂接种大豆后，通过多年、多点较大种植面积的科研实验证明，使用该方法提供的抗乙草胺大豆根瘤菌剂可使大豆根瘤数平均每株增加13个，固氮酶活性提高38.4％，大豆蛋白质含量增加5.8％，大豆平均增产15.6％以上，解决了土壤灭草剂乙草胺施用后导致大豆根瘤数减少、固氮效率降低这一大豆生产中制约大豆产量和品质提高的难题，提高了大豆品质和产量，增产效果显著。

Claims (1)

1、一种抗乙草胺大豆根瘤菌剂的制备方法，其特征是:

①、在蔗糖酵母膏培养基中加入乙草胺，使蔗糖酵母膏培养基中的乙草胺浓度为100mg/L；将上述蔗糖酵母膏培养基在每个摇瓶中装入150ml，在120—125℃条件下灭菌30—40分钟，冷却后挑取一环具有高效固氮活性的大豆根瘤菌加入摇瓶中，在28—30℃条件下培养5—7天，得培养基液备用；

②、在蔗糖酵母膏培养基中加入乙草胺，使蔗糖酵母膏培养基中的乙草胺浓度为200mg/L；将此乙草胺浓度的蔗糖酵母膏培养基在每个摇瓶中装入150ml，在120—125℃条件下灭菌30—40分钟，冷却后再将上述①中得到的培养基液挑取一环接种到灭菌后含乙草胺浓度为200mg/L的蔗糖酵母膏培养基中，在28—30℃条件下培养5—7天，得培养基液备用；

③、依此类推，重复②的作业过程，每次在蔗糖酵母膏培养基中增加100mg/L的乙草胺，直至蔗糖酵母膏培养基中乙草胺浓度为1000mg/L；

④、把含乙草胺浓度为1000mg/L的蔗糖酵母膏培养基中具有抗性的大豆根瘤菌进行纯系分离后保存于斜面试管中；

⑤、把纯系分离后的抗乙草胺大豆根瘤菌在蔗糖酵母膏斜面试管基中培养为一级菌种，再将该一级菌种在灭菌的蔗糖酵母膏培养基摇瓶中扩繁培养为二级菌种；对含有8％豆粉、5％麦麸、3％食盐、1％甘露醇、PH值为6.5—6.8的水溶液培养基进行灭菌冷却后接种二级菌种，在28—30℃条件下发酵培养48—72小时，过滤后得到液态抗乙草胺大豆根瘤菌剂，或者选择固定载体添加抗乙草胺大豆根瘤菌剂制成固态抗乙草胺大豆根瘤菌剂产品。